Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu makalede, geleneksel boşluk noktası testine video izlemeyi dahil ederek fare işeme davranışını incelemek için yeni bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım, günün aydınlık ve karanlık evrelerinde işeme olayları ve fare davranışının ayrıntıları hakkında zamansal, uzamsal ve hacimsel bilgiler sağlar.

Özet

Normal işeme davranışı, sinir sisteminin uygun kontrolü altında mesane, üretra ve üretral sfinkterlerin koordineli fonksiyonunun sonucudur. Fare modellerinde gönüllü işeme davranışını incelemek için araştırmacılar, bir hayvanın kafesinin zeminini kaplayan bir filtre kağıdı üzerinde biriken idrar lekelerinin sayısını ve alanını ölçen bir yöntem olan boşluk noktası testini (VSA) geliştirdiler. Teknik olarak basit ve ucuz olmasına rağmen, bu tahlil, işeme olaylarının zamansal çözünürlüğünün olmaması ve örtüşen idrar noktalarının ölçülmesinde zorluklar da dahil olmak üzere bir son nokta testi olarak kullanıldığında sınırlamalara sahiptir. Bu sınırlamaların üstesinden gelmek için, gerçek zamanlı VSA (RT-VSA) olarak adlandırdığımız ve işeme frekansını belirlememize, işeme hacmini ve işeme modellerini değerlendirmemize ve günün hem karanlık hem de aydınlık fazlarında 6 saatlik zaman aralıklarında ölçümler yapmamıza olanak tanıyan video izlemeli bir VSA geliştirdik. Bu raporda açıklanan yöntem, sağlık ve hastalık durumlarında gönüllü işitmenin fizyolojik ve nörodavranışsal yönlerini araştıran çok çeşitli fare tabanlı çalışmalara uygulanabilir.

Giriş

İdrar depolanması ve işlenmesi, pelvik ve hipogastrik sinirler aracılığıyla mesane dolum durumu hakkında bilgi alan merkezi bir devre (merkezi sinir sistemi) tarafından koordine edilir. Ürotel, idrar yolunu renal pelvisten proksimal üretraya kadar kaplayan epitel, idrarda bulunan metabolik atık ürünlere ve patojenlere sıkı bir bariyer oluşturur. Mesanenin doldurma durumunu algılayan ve altta yatan dokulara ve afferent sinirlere ileten duyusal bir ağın ayrılmaz bir bileşenidir 1,2. Ürotelyal bariyerin bozulması veya ürotelyal mekanotransdüksiyon yollarındaki değişiklikler, frekans, aciliyet, noktüri ve inkontin....

Protokol

Urothelial Piezo1/2 çift nakavt fareleri (Pz1/2-KO , genotip: Piezo1 fl/fl; Piezo2fl / fl; Upk2CRE+/-) ve kontrolleri (Pz1/2-C, genotip: Piezo1 fl/fl; Piezo2fl / fl; Upk2CRE-/-), Jax laboratuvarlarından elde edilen ebeveyn suşlarından (Piezo1 fl/ fl suşu # 029213; Piezo2fl / fl suşu # 027720; Upk2CRE+/- suş # 029281). Deneylerde hem dişi (1.5-3 aylık ve 17-20 g ağırlığında) hem de erkek (2-4 aylık ve 23-29 g ağırlığında) fareler kullanıldı. Siklofosfit kaynaklı sistit deneyleri için, vahşi tip C57Bl / 6J dişiler (3 ay....

Sonuçlar

Ürotelyal Piezo1/2 nakavt farelerin işeme davranışı

Miktüritasyon döngüsünün depolama aşamasında, ürotelyumun mesanede biriken idrarın uyguladığı gerginliği algılamak ve bu mekanik uyaranı serozal ATP salınımı 1,3 gibi hücresel yanıtlara dönüştürmek için hipotez vardır. Daha önce mekanik olarak aktive edilen PIEZO1 ve PIEZO2 kanallarının fare urothelium.......

Tartışmalar

Video izlemenin dahil edilmesi, klasik VSA'ya göre çeşitli avantajlar sunan uygun maliyetli bir değişikliktir. Tipik olarak bir son nokta testi olarak kullanılan klasik VSA'da, örtüşen boşluk noktalarını ayırt etmek zordur. Bu önemsiz bir endişe değildir, çünkü fareler, tahlil birkaç saat uzatıldığında, tipik olarak kafeslerinin köşelerinde, aynı bölgede birden çok kez idrara çıkma eğilimindedir. Bu nedenle, RT-VSA'nın ilk avantajı, araştırmacının kısmen veya tamamen birbirinin üze.......

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu çalışma, bir NIH hibe R01DK119183 (G.A. ve MDC'ye), P30DK079307 aracılığıyla bir pilot proje ödülü (M.G.D.'ye), bir Amerikan Üroloji Derneği Kariyer Geliştirme ödülü ve bir Winters Vakfı hibesi (N.M.'ye) ve Pittsburgh Böbrek Araştırmaları Merkezi'nin (P30DK079307) Hücre Fizyolojisi ve Model Organizmalar Böbrek Görüntüleme Çekirdekleri tarafından desteklenmiştir.

....

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots –  cut to 10 inches80/201010Amount: 20
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots –  cut to 12 inches80/201010Amount: 6
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots –  cut to 40 inches80/201010Amount: 4
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots – cut to 14.75 inches80/201010Amount: 12
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots – cut to 32 inches80/201010Amount: 5
1/4-20 Double Slide-in Economy T-Nut80/203280Amount: 16
1/4-20 Triple Slide-in Economy T-Nut80/203287Amount: 18
10 & 25 Series 2 Hole - 18mm Slotted Inside Corner Bracket with Dual Support80/2014061Amount: 6
10 Series 3 Hole - Straight Flat Plate80/204118Amount: 8
10 Series 5 Hole - "L" Flat Plate80/204081Amount: 8
10 Series 5 Hole - "T" Flat Plate80/204080Amount: 8
10 Series 5 Hole - Tee Flat Plate80/204140Amount: 2
10 Series Standard Lift-Off Hinge - Right Hand Assembly80/202064Amount: 2
10 to 15 Series 2 Hole - Lite Transition Inside Corner Bracket80/204509Amount: 6
24”-long UV tube lightsADJ Products LLCT8-F20BLB24Amount: 2
20W bulb – 24” Wavelength: 365nm
Acrylic Mirror SheetProfesional PlasticsAmount: 1
82.5 cm x 26.5 cm
Acrylic Mirror SheetProfesional PlasticsAmount: 2
26.5 cm X 30.5 cm
Acrylic Mirror SheetProfesional PlasticsAmount: 2
82.5 cm x 30.5 cm
AR polycarbonate (UV resistance)80/2065-2641Amount: 2
4.5mm Thick, Clear, 38.5 cm x 26.5 cm
AR polycarbonate (UV resistance)80/2065-2641Amount: 4
4.5mm Thick, Clear, 38.5 cm x 21.5 cm
AR polycarbonate (UV resistance)80/2065-2641Amount: 4
4.5mm Thick, Clear, 26.5 cm x 21.5 cm
AR polycarbonate (UV resistance)80/2065-2641Amount: 4
4.5mm Thick, Clear 37.5 cm x 23.9 cm
AR polycarbonate (UV resistance)80/2065-2641Amount: 4
4.5mm Thick, Clear , 24.4 cm x 23.9 cm
Chromatography paper (thin paper) Thermo Fisher Scientific57144
Cosmos blotting paper (thick paper)Blick Art Materials10422-1005
ExcelMicrosoft Corporation
GraphPad PrismGraphPad SoftwareVersion 9.4.0graphing and statistics software
ImageJ FIJINIH
ParafilmMercktransparent film
Quick Time Player 10.5 software Applemultimedia player
Security spyBen softwarevideo surveillance software system
Standard End Fastener, 1/4-2080/203381Amount: 80
UV transmitting acrylicSpartechPolycast Solacryl SUVTAmount: 2
38.5 cm x 26.5 cm 
Water gel: HydroGelClearH2O  70-01-5022(https://www.clearh2o.com/product/hydrogel/)
WebcamLogitechC930eAmount: 4

Referanslar

  1. Dalghi, M. G., Montalbetti, N., Carattino, M. D., Apodaca, G. The urothelium: life in a liquid environment. Physiological Reviews. 100 (4), 1621 (2020).
  2. de Groat, W. C., Griffiths, D., Yoshimura, N. Neural control of the lower urinary tract.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

RetraksiyonSay 192Bo luk noktas tahlilidrar kesesii eme fonksiyonumikt ritasyonsistometri

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Araştırma

Eğitim

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır