Gerçek Zamanlı Boşluk Noktası Testi

Özet

Bu makalede, geleneksel boşluk noktası testine video izlemeyi dahil ederek fare işeme davranışını incelemek için yeni bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım, günün aydınlık ve karanlık evrelerinde işeme olayları ve fare davranışının ayrıntıları hakkında zamansal, uzamsal ve hacimsel bilgiler sağlar.

Özet

Normal işeme davranışı, sinir sisteminin uygun kontrolü altında mesane, üretra ve üretral sfinkterlerin koordineli fonksiyonunun sonucudur. Fare modellerinde gönüllü işeme davranışını incelemek için araştırmacılar, bir hayvanın kafesinin zeminini kaplayan bir filtre kağıdı üzerinde biriken idrar lekelerinin sayısını ve alanını ölçen bir yöntem olan boşluk noktası testini (VSA) geliştirdiler. Teknik olarak basit ve ucuz olmasına rağmen, bu tahlil, işeme olaylarının zamansal çözünürlüğünün olmaması ve örtüşen idrar noktalarının ölçülmesinde zorluklar da dahil olmak üzere bir son nokta testi olarak kullanıldığında sınırlamalara sahiptir. Bu sınırlamaların üstesinden gelmek için, gerçek zamanlı VSA (RT-VSA) olarak adlandırdığımız ve işeme frekansını belirlememize, işeme hacmini ve işeme modellerini değerlendirmemize ve günün hem karanlık hem de aydınlık fazlarında 6 saatlik zaman aralıklarında ölçümler yapmamıza olanak tanıyan video izlemeli bir VSA geliştirdik. Bu raporda açıklanan yöntem, sağlık ve hastalık durumlarında gönüllü işitmenin fizyolojik ve nörodavranışsal yönlerini araştıran çok çeşitli fare tabanlı çalışmalara uygulanabilir.

Giriş

İdrar depolanması ve işlenmesi, pelvik ve hipogastrik sinirler aracılığıyla mesane dolum durumu hakkında bilgi alan merkezi bir devre (merkezi sinir sistemi) tarafından koordine edilir. Ürotel, idrar yolunu renal pelvisten proksimal üretraya kadar kaplayan epitel, idrarda bulunan metabolik atık ürünlere ve patojenlere sıkı bir bariyer oluşturur. Mesanenin doldurma durumunu algılayan ve altta yatan dokulara ve afferent sinirlere ileten duyusal bir ağın ayrılmaz bir bileşenidir ^1,2. Ürotelyal bariyerin bozulması veya ürotelyal mekanotransdüksiyon yollarındaki değişiklikler, frekans, aciliyet, noktüri ve inkontin....

Protokol

Urothelial Piezo1/2 çift nakavt fareleri (Pz1/2-KO , genotip: Piezo1 fl^/fl; Piezo2^{fl / fl}; Upk2^CRE+/-) ve kontrolleri (Pz1/2-C, genotip: Piezo1 fl^/fl; Piezo2^{fl / fl}; Upk2^CRE-/-), Jax laboratuvarlarından elde edilen ebeveyn suşlarından (Piezo1 fl^{/ fl} suşu # 029213; Piezo2^{fl / fl} suşu # 027720; Upk2^CRE+/- suş # 029281). Deneylerde hem dişi (1.5-3 aylık ve 17-20 g ağırlığında) hem de erkek (2-4 aylık ve 23-29 g ağırlığında) fareler kullanıldı. Siklofosfit kaynaklı sistit deneyleri için, vahşi tip C57Bl / 6J dişiler (3 ay....

Sonuçlar

Ürotelyal Piezo1/2 nakavt farelerin işeme davranışı

Miktüritasyon döngüsünün depolama aşamasında, ürotelyumun mesanede biriken idrarın uyguladığı gerginliği algılamak ve bu mekanik uyaranı serozal ATP salınımı ^1,3 gibi hücresel yanıtlara dönüştürmek için hipotez vardır. Daha önce mekanik olarak aktive edilen PIEZO1 ve PIEZO2 kanallarının fare urothelium.......

Tartışmalar

Video izlemenin dahil edilmesi, klasik VSA'ya göre çeşitli avantajlar sunan uygun maliyetli bir değişikliktir. Tipik olarak bir son nokta testi olarak kullanılan klasik VSA'da, örtüşen boşluk noktalarını ayırt etmek zordur. Bu önemsiz bir endişe değildir, çünkü fareler, tahlil birkaç saat uzatıldığında, tipik olarak kafeslerinin köşelerinde, aynı bölgede birden çok kez idrara çıkma eğilimindedir. Bu nedenle, RT-VSA'nın ilk avantajı, araştırmacının kısmen veya tamamen birbirinin üze.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots –  cut to 10 inches	80/20	1010	Amount: 20
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots –  cut to 12 inches	80/20	1010	Amount: 6
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots –  cut to 40 inches	80/20	1010	Amount: 4
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots – cut to 14.75 inches	80/20	1010	Amount: 12
1.00” X 1.00” T-Slotted Profile - Four Open T-Slots – cut to 32 inches	80/20	1010	Amount: 5
1/4-20 Double Slide-in Economy T-Nut	80/20	3280	Amount: 16
1/4-20 Triple Slide-in Economy T-Nut	80/20	3287	Amount: 18
10 & 25 Series 2 Hole - 18mm Slotted Inside Corner Bracket with Dual Support	80/20	14061	Amount: 6
10 Series 3 Hole - Straight Flat Plate	80/20	4118	Amount: 8
10 Series 5 Hole - "L" Flat Plate	80/20	4081	Amount: 8
10 Series 5 Hole - "T" Flat Plate	80/20	4080	Amount: 8
10 Series 5 Hole - Tee Flat Plate	80/20	4140	Amount: 2
10 Series Standard Lift-Off Hinge - Right Hand Assembly	80/20	2064	Amount: 2
10 to 15 Series 2 Hole - Lite Transition Inside Corner Bracket	80/20	4509	Amount: 6
24”-long UV tube lights	ADJ Products LLC	T8-F20BLB24	Amount: 2 20W bulb – 24” Wavelength: 365nm
Acrylic Mirror Sheet	Profesional Plastics		Amount: 1 82.5 cm x 26.5 cm
Acrylic Mirror Sheet	Profesional Plastics		Amount: 2 26.5 cm X 30.5 cm
Acrylic Mirror Sheet	Profesional Plastics		Amount: 2 82.5 cm x 30.5 cm
AR polycarbonate (UV resistance)	80/20	65-2641	Amount: 2 4.5mm Thick, Clear, 38.5 cm x 26.5 cm
AR polycarbonate (UV resistance)	80/20	65-2641	Amount: 4 4.5mm Thick, Clear, 38.5 cm x 21.5 cm
AR polycarbonate (UV resistance)	80/20	65-2641	Amount: 4 4.5mm Thick, Clear, 26.5 cm x 21.5 cm
AR polycarbonate (UV resistance)	80/20	65-2641	Amount: 4 4.5mm Thick, Clear 37.5 cm x 23.9 cm
AR polycarbonate (UV resistance)	80/20	65-2641	Amount: 4 4.5mm Thick, Clear , 24.4 cm x 23.9 cm
Chromatography paper (thin paper)	Thermo Fisher Scientific	57144
Cosmos blotting paper (thick paper)	Blick Art Materials	10422-1005
Excel	Microsoft Corporation
GraphPad Prism	GraphPad Software	Version 9.4.0	graphing and statistics software
ImageJ FIJI	NIH
Parafilm	Merck		transparent film
Quick Time Player 10.5 software	Apple		multimedia player
Security spy	Ben software		video surveillance software system
Standard End Fastener, 1/4-20	80/20	3381	Amount: 80
UV transmitting acrylic	Spartech	Polycast Solacryl SUVT	Amount: 2 38.5 cm x 26.5 cm
Water gel: HydroGel	ClearH2O	70-01-5022	(https://www.clearh2o.com/product/hydrogel/)
Webcam	Logitech	C930e	Amount: 4