Marmoset Sendromunun Traneksamik Asit ile Zayıflatılmasında Tedavi Yöntemlerinin Modifikasyonu ve Destekleyici Önlemler

Özet

Burada, marmoset sendromunun (WMS, inflamatuar bağırsak hastalığı (IBD) benzeri hastalık olarak da bilinir) traneksamik asit ile israf edilmesi için modifiye tedavi yöntemlerini açıklıyoruz. Ayrıca terapötik ajanların oral, subkutan ve intravenöz olarak nasıl uygulanacağını da sunuyoruz.

Özet

Tutsak adi marmoset (Callithrix jacchus) kolonilerinde ciddi bir hastalık olan marmoset sendromu (WMS), yüksek mortalite oranı ile ilişkilidir. WMS'nin spesifik nedeni hala belirsizdir ve az sayıda etkili tedavi vardır. Daha önce, WMS için yararlı bir tedavi olarak destekleyici önlemler içeren bir traneksamik asit tedavisi bildirmiştik. Bu çalışmada, modifiye edilmiş yöntemi tarif ediyoruz: haftada beş kez deri altından 0.1 mL %5 traneksamik asit, haftada üç kez intravenöz olarak 2.0 mL amino asit formülasyonu, haftada üç kez deri altından 0.1 mL vitamin formülasyonu ile 5.0 mL Ringer laktat kombinasyonu ve haftada beş kez 0.1 mL demir formülasyonunun oral yoldan uygulanması. Ayrıca, çözeltinin, hayvanı kısıtlamanın bir ucu ile safen ven yoluyla intravenöz olarak nasıl uygulanacağını ve ayrıca oral ve deri altı uygulama için ayrıntılı yöntemleri de açıklıyoruz. Modifiye edilmiş yöntemler, orijinal WMS tedavi yöntemiyle karşılaştırılabilir verimliliğe sahiptir.

Giriş

Marmoset israf sendromu (WMS), tutsak yaygın marmoset kolonilerine özgü ciddi bir hastalıktır. Başlıca semptomlar kilo kaybı, azalmış kas kütlesi, anemi, hipoalbüminemi ve kronik enterittir 1,2,3,4. Bazı çalışmalar, ötenazi uygulanan tutsak marmosetlerin %60,5'inde kronik enterit⁵ kanıtı olduğunu ve ölümlerin %31-44'ünün bu hastalığı içerdiğini^{bildirmiştir 6}. Bu hastalığın yüksek prevalansı, etkin tedavisini gerekli kılmıştır.

2016 yılında, destekleyici önlemleri olan traneksamik asidin WMS⁷ için etkili bir tedavi olduğunu bildirmiştik. Ek olarak, WMS'den etkilenen marmosetlerin bağırsak protein kaybı bu tedavi ile önemli ölçüde azalmıştır⁸. Orijinal tedavi protokolü kesinlikle etkili olmasına rağmen, biraz yüksek miktarda intravenöz enjeksiyon, yüksek dozda vitamin formülasyonu ve günlük kısıtlama içeriyordu. Marmosetler elle yakalamaya ve kısıtlamaya duyarlı olduğundan, bu eylemler daha az sıklıkta olmalıdır. Bu nedenle, bazı modifikasyonlarla hayvanlar için ağır yükü azaltmayı hedefledik.

Bu yazıda, modifiye edilmiş yöntemler sunulacaktır: haftada 5 kez seyreltilmemiş traneksamik asidin deri altı enjeksiyonu (haftada 7 kez 5 kat seyreltilmiş traneksamik asit çözeltisinin intraperitoneal enjeksiyonu yerine), intravenöz enjeksiyon için 2.0 mL amino asit formülasyonu (3.0 mL yerine), deri altı enjeksiyon için 0.1 mL vitamin formülasyonu (0.5 mL yerine), ve demir formülasyonunun haftada 5 kez oral yoldan uygulanması (haftada 7 kez yerine).

Protokol

Bu çalışma, RIKEN (Saitama, Japonya) Hayvan Deneyleri Komitesi'nin onayı (W2023-2-041) ile gerçekleştirilmiştir ve Hayvanlar Kullanılarak Yapılan Deneyler için Kurumsal Yönergelere uygun olarak yürütülmüştür. Bu çalışmada altı adet dişi marmoset (2-6 yaş) kullanılmıştır.

1. Tedaviye başlama kriterleri

1. Aşağıdaki kriterlerden herhangi biri gözlendiğinde tedaviye başlayın: i) vücut ağırlığının < 300 g veya ayda vücut ağırlığında >20 g'lık bir azalma; ii) hipoalbüminemi (serum albümin < 3.8 g / dL); iii) anemi (hematokrit <% 35); iv) Clostridium difficile, enteropatojenik Escherichia coli veya bağırsak protozoası olmayan kronik ishal; ve v) kas kütlesinde belirgin bir azalma.
   NOT: WMS'nin eşlik ettiği dehidrasyon ve müteakip hemokonsantrasyon nedeniyle, etkilenen hayvanlarda serum albümin ve hematokrit değerleri yapay olarak yükseltilebilir.

2. Oral uygulama

1. 0.1 mL demir formülasyonunu ( Malzeme Tablosuna bakınız) bir parça pandispanya ile karıştırın.
2. Püreyi işlenmiş marmosete verin.
   NOT: İşlem görmüş marmosetin püreyi tamamen yuttuğundan emin olun.

3. Deri altı uygulama

1. Kuyruğunu nazikçe tutarak WMS'den etkilenen marmoseti ev kafesinde yakalayın.
2. Diğer elinizle hayvanın üst vücudunu arkadan tutun.
3. Hayvanı tedavi odasına getirin.
4. Hayvanın asistanın göğsüne veya koluna yapışmasına izin verin.
5. Hayvanın sırt bölgesini alkollü bir bezle temizleyin.
6. 0.1 mL traneksamik asit (% 5 çözelti, Malzeme Tablosuna bakınız) haftada 5 kez 26 G'lık bir iğne kullanarak deri altından sırta enjekte edin.
7. Haftada 3 kez 26 G'lik bir iğne kullanarak deri altına 0.1 mL vitamin formülasyonu (Malzeme Tablosuna bakınız) ile 5.0 mL Ringer laktatını (Malzeme Tablosuna bakınız) enjekte edin.
   NOT: Her enjeksiyon 1 dakika içinde her farklı noktada yapılmalıdır.

4. Amino asit formülasyonunun intravenöz uygulaması

1. Kuyruğunu nazikçe tutarak WMS'den etkilenen marmoseti ev kafesinde yakalayın.
2. Diğer elinizle hayvanın üst vücudunu arkadan tutun.
3. Hayvanı tedavi odasına getirin.
4. Asistanın her iki kolun tabanını tutarak hayvanın üst vücudunu tutmasını ve diğer eliyle her iki bacağın tabanını tutarak alt vücudunu tutmasını sağlayın. Asistandan, bükülmesini önlemek için hayvanın alt vücudunu kısıtlayan başparmağını hayvanın dizinin ön tarafına yerleştirmesini isteyin.
5. Hayvanın buzağısını alkollü bir bezle temizleyin.
6. Haftada üç kez 27 G'lik bir kelebek iğne kullanarak safen ven yoluyla intravenöz olarak 2.0 mL amino asit formülasyonunu ( Malzeme Tablosuna bakınız) enjekte edin.
   NOT: Enjeksiyon 2 dakikaya kadar mümkün olduğunca yavaş yapılmalıdır.
7. Enjeksiyondan sonra, asistandan kanama durana kadar bölgeye emici pamukla bastırmasını isteyin.

5. Vücut ağırlığı ölçümü

1. Tedaviden sonra (intravenöz ve/veya deri altı enjeksiyon), vücut ağırlığını izlemek için hayvanı haftada bir kez bir taşıma kutusu ile tartın.
   NOT: Vücut ağırlığı yiyeceğin varlığından etkilendiği için marmoseti yaklaşık olarak aynı anda tartın.

6. Tam kan sayımı (CBC) analizi ve serum kimyası testleri

1. Kuyruğunu nazikçe tutarak WMS'den etkilenen marmoseti ev kafesinde yakalayın.
2. Diğer elinizle hayvanın üst vücudunu arkadan tutun.
3. Hayvanı tedavi odasına getirin.
4. Asistanın her iki kolun tabanını tutarak hayvanın üst vücudunu tutmasını ve diğer eliyle her iki bacağın tabanını tutarak alt vücudunu tutmasını sağlayın.
5. Uygulayıcıdan hayvanın kısıtlanmamış bacağını tutmasını isteyin.
6. Hayvanın kasık bölgesini alkollü bir bezle temizleyin.
7. Ayda 26 G'lik bir iğne kullanarak femoral venden 0.4 mL kan toplayın.
8. Hematokrit de dahil olmak üzere CBC analizi için 0.05 mL kan örneği kullanın.
9. Kan örneğinin geri kalanını oda sıcaklığında 1 saat bekletin ve 1.800 × g'da 20 dakika santrifüjleyin.
10. Serumu albümin de dahil olmak üzere kimya testleri için kullanın.
    NOT: Kan örneğinin hacmi, serum kimyası testi için parametre sayısını en aza indirerek azaltılabilir. Kan örneğinin hacmini bireysel marmosetin durumuna göre ayarlayın.

Sonuçlar

Modifiye tedavi yöntemleri, WMS'den etkilenen marmosetlerde hematokrit (Şekil 1A), serum albümini (Şekil 1B) ve vücut ağırlığının (Şekil 1C) artmasına neden oldu. Tedavi öncesi ve sonrası arasında hematokrit (P < 0.05, Wilcoxon eşleştirilmiş çiftler işaretli sıra testi), serum albümini (P < 0.05, Wilcoxon eşleştirilmiş çiftler işaretli sıra testi) ve vücut ağırlığı (P < 0.05, Wilcoxon eşleştirilmiş çiftler işaretli sıra testi) açısından anlamlı farklılıklar görüldü.

Tedavinin görünüm üzerindeki etkileri de gözlendi. Şekil 2, WMS'den etkilenen bir marmosetin görünümünü göstermektedir. Tedavi öncesi tabefaksiyon, kemerli sırt, pürüzlü kürk (Şekil 2A) ve alopesi (Şekil 2B) gözlenirken, tedavi sonrası anormal bir görünüm görülmedi (Şekil 2C,D).

Şekil 1: Modifiye tedaviyi alan bir marmosette hematokrit, serum albümini ve vücut ağırlığındaki değişiklikler (tedavi öncesi ve sonrası). (A) Hematokrit değerleri, (B) serum albümin değerleri ve (C) vücut ağırlığı. Kesikli çizgiler ölçüt değerlerini gösterir. Kısaltmalar: Htc = hematokrit; Alb = serum albümini; BW = vücut ağırlığı. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 2: WMS'den etkilenen marmosetin temsili görünümü. (A) Ön tedavi hayvanının görünümü: tabefaksiyon, kemerli sırt ve kaba kürk gözlenir. (B) Ön tedavi hayvanının kuyruğu: alopesi görülür. (C) Tedavi sonrası hayvanın görünümü. (D) Tedavi sonrası hayvanın kuyruğu. Kısaltma: WMS = israf marmoset sendromu. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Tartışmalar

2016 yılında, destekleyici önlemlerle birlikte traneksamik asidin WMS için etkili bir tedavi olduğunu bildirdik ve bu, glukokortikoidler kullanılmadan WMS tedavisini gösteren ilk rapor oldu. İnsanlarda, glukokortikoidler IBD'nin en etkili tedavisi olarak kabul edilir. Bununla birlikte, en sık kullanılan glukokortikoidlerden biri olan predonizolon, yan etkileri nedeniyle WMS tedavisi için uygun değildir. WMS tedavisi⁹ için bir glukokortikoid olan budesonid bildirilmiş olsa da, tedavi akut WMS formları olan hayvanlarda nispeten etkisizdi. Traneksamik asit, anti-enflamatuar etkileri olan bir plazmin inhibitörüdür ve orijinal yöntemlerimizde kayda değer bir yan etki görülmemiştir. Bununla birlikte, orijinal tedavi protokolü kesinlikle etkili olmasına rağmen, hayvanlar ve bakıcılar için ağır bir yük getirdi.

Bu çalışmada, hem hayvanın fizyolojik yükünü hem de bakıcıların iş yükünü azaltmak için WMS için modifiye tedavi yöntemleri uygulanmıştır. Modifiye yöntemlerde, traneksamik asidin uygulama yolu değiştirildi (intraperitonealden subkutana), bu da abdominal organların yaralanma riskini azaltmaya katkıda bulundu. Traneksamik asit çözeltisi, kontaminasyon riskini ve hazırlama süresini azaltmak için bu protokolde seyreltilmemiştir. Orijinal yöntemlerde, 3.0 mL amino asit formülasyonu intravenöz olarak enjekte edildi. Bununla birlikte, hacim biraz büyüktü çünkü 5.0 mL / kg'ın bolus¹⁰ olarak uygulanması önerilmektedir. Bu nedenle, modifiye edilmiş yöntemlerde hacim azaltıldı.

Bu protokolde kullanılan vitamin formülasyonu B ve C vitaminleri içerir. Orijinal yöntemde, 0.5 mL vitamin formülasyonu 2.5 mg tiamin klorür hidroklorür içerir, bu da laboratuvarda barındırılan sütten kesme sonrası insan olmayan^primatların gereksiniminin 2.5 katıdır. Mevcut yöntemde, 1.0 mg tiamin klorür hidroklorür içeren 0.1 mL vitamin formülasyonu uygulandı. Modifiye edilmiş yöntemlerde demir formülasyonunun ve traneksamik asit çözeltisinin uygulanma sıklığı azaltıldı, bu da hayvanların yanı sıra bakıcılar için yükün azaltılmasına katkıda bulundu.

Temsili Sonuçlar bölümünde yazıldığı gibi, modifiye edilmiş yöntemlerde önemli tedavi etkileri olmuştur. Ortalama tedavi süresi 37.8 ± 25.34 gün idi, bu da orijinal yöntemlerden (56 gün) daha kısaydı. Marmosetler zihinsel strese duyarlı olduğundan, uzun süreli tedaviler hayvan üzerinde iştah azalması gibi tam tersi bir etkiye sahiptir. Bu nedenle, bakıcıların yalnızca her bir parametrenin değerine değil, aynı zamanda hayvanın davranışına da dayanarak tedavinin sonlandırılma zamanına kapsamlı bir şekilde karar vermelerini öneririz.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.0 mL Syringe	Terumo Corporation, Tokyo, Japan	SS-01T	For subcutaneously injection of Tranexamic acid
10 mL Syringe	Terumo Corporation, Tokyo, Japan	SS-10SZ	For Intravenous Administration of Amino acid formulation
26 G Needle	Terumo Corporation, Tokyo, Japan	NN-2613S	For subcutaneously injection
27 G Butterfly Needle Type D	Terumo Corporation, Tokyo, Japan	SV-27DL	For Intravenous Administration of Amino acid formulation
5 mL Syringe	Terumo Corporation, Tokyo, Japan	SS-05SZ	For subcutaneously injection of Ringer's lactate and Vitamin formulation
Aminoleban Injection	Otsuka Pharma Factory Inc., Tokyo, Japan	1942	For subcutaneously injection of Ringer's lactate and Vitamin formulation
C-PARA	Takata Pharma Co., Ltd., Saitama, Japan	120-31960-0	Vitamin formulation
FCV Liquid	Minerva Corporation, Saitama, Japan		Iron formulation
Lactec Injection	Otsuka Pharma Factory Inc., Tokyo, Japan	0714	Ringer’s lactate
Vasolamin Injection	Meiji Seika Pharma Co., Ltd., Tokyo, Japan	DBASOS	Tranexamic acid