Güney Arizona Savaş Gazileri İşleri Sağlık Bakım Sistemi VA Merit İnceleme hibe 0142 ve Arizona Biyomedikal Araştırma Komisyonu bursu 0803 tarafından sağlanmaktadır Finansman.

Dokular slaytlar üzerinde görülebilir hazırlanması <ol><li> Kolonoskop rektum aracılığıyla kolon içine aktarılabilir. Kolonoskop başında aydınlatma ve bir video kamera olan uzun bir tüp, yeteneği, kolon daha iyi görselleştirme izin uzun bir balon gibi havaya uçurmak için kolon içine hava geçmesi ve Can biyopsi forseps için bir geçiş bize bir biyopsi örneği vermek için iç yüzeyi &quot;deri&quot; ya da kolon mukoza tabakası 3-5 milimetre alan çimdik video kamera ötesine. Biyopsi forseps, aynı zamanda potansiyel olarak kolonda kanser öncesi polipler kaldırmak için kullanılabilir. </li><li> Bilgilendirilmiş onam, hastanın normal kolonik mukozal dokuların biyopsileri alındı. Bu hastalar gastrointestinal bir klinikte bir tarama kolonoskopi. Biyopsileri formalin kavanoz yerleştirilir. 4 saat sonra% 70 alkol, formalin tarafından değiştirildi. </li><li> 1 cm ve 10 cm uzakta ileri neoplazi ile kolon kanserleri veya adenomlar kolon rezeksiyonu alanları, ameliyat sırasında çıkarılan doku Benzer örnekleri alınmıştır. Bu doku örnekleri, aynı zamanda formalin yerleştirildi ve doku örnekleri büyük olsaydı, bazı formalin% 70 alkol konuyor önce uzun bir süre için tutuldu. </li><li> Doku örnekleri, işlenmiş ve parafin bloklar halinde konuyor histoloji laboratuvara alınır. </li><li> Parafin bloklar, onları daha kolay bir mikrotom tarafından kesilmiş yapmak için buzdolabında soğutulmuş. </li><li> 4 mikron kalınlığında doku kesitlerinde bir mikrotom kullanılarak doku blokları kesilmiş ve su üzerinde yüzen. </li><li> Kadar, her iki slaytlar üç doku bölümleri vardır Örneğin ERCC1 ve Pms2 için, iki proteinin ifade karşılaştırmak için, alternatif doku kesitlerinde, iki Slaytlarınıza kaldırdı olabilir. Örneğin, 1, 3 ve 5 bölümleri etiketli bir slayt ERCC1 ve bölüm 2, 4 ve 6 Pms2 etiketli bir slayt üzerine yerleştirilebilir yerleştirilebilir. Tek bir slaytta bir protein için üç doku kesitlerinde immunohistokimyasal bir crypt alışılmadık bir boyanma paterni, eserler bir slayt üzerinde birden fazla doku bölümünde tekrar olmazdı bu yana bir insan yapımı ya da gerçek olduğunu görmek için izin verebilirsiniz. Kolon kript bir crypt ile yaklaşık 15 doku bölümleri kesilmiş olabilir, ve aynı crypt slayt başına birden fazla doku kesitlerinde görülebilir ki, çapı yaklaşık 60 mikron. </li></ol> Doku bölümleri immün <ol><li> Slaytlar sonra immünohistokimyasal etiketleme prosedürü ile konur. Bu 8 saatlik bir işlemdir ve oldukça standarttır. Kullandığınız prosedürü standart olmayan parçalar, boyama Sequenza kapların kullanılması, ve &quot;Keskin Nişancı&quot; olarak adlandırılan arka plan boyama azaltmak için bir çözüm kullanın. &quot;Sniper&quot; çözüm Biocare Tıp, Concord CA tarafından özel bir formülü olarak satılmaktadır. </li><li> Bazı prosedürler adımları gösterilmiştir. </li><li> Bir örnek olarak, Pms2 immünohistokimya, slaytlar, 3, 2% 95 etanol içinde değişiklikler (2 dakika takip% 100 etanol (her biri 2 dakika) 2 değişiklik takip ksilen (her biri 3 dakika) koyarak ilk deparafinize her biri), 2 (her biri 2 dakika) distile su ile izledi. Bu prosedürler, deneyci buharına maruz kalmayacak şekilde negatif hava basıncı ile kimyasal kaputun altında yürütülmektedir. </li><li> Başlangıçta doku düzeltmek için kullanılan formalin, proteinlerin doku örneği parçaları, çapraz bağlı oldu. Şimdi bir antikor ilgi protein tanıyabilir, böylece çapraz bağlantıları kesmek gerekir. Slaytlar, mikrodalga fırın kaynatın getiren bir tampon çözelti konur. Bu orta ayar 10 dakika, 20 dakika boyunca buz üzerinde soğutma izledi. Bu adım, iyi sonuçlar elde edilir kadar farklı mikrodalga test edilmiş ve ayarlanmış olması gerekiyor. CcOI veya Ku86 immün 9ml sitrik asit + 41mL sodyum sitrat, yaklaşık 6.0 pH ERCC1 için yaptığımız bir sitrat tamponu + 450ml H 2 O (sodyum iyonları da dahil olmak üzere bir tampon) ile yapılan bir sodyum sitrat tampon kullanılan 2.1g sitrik asit + 1 litre H 2 O + ~ 5ml pH 6.1 (asgari katma sodyum iyonları ile bir tampon) getirmek için sodyum hidroksit ve Pms2 için 5ml Antijen açığa çıkarılması bir çözüm (VEKTÖR) + 533mL ile yapılan bir çözüm H 2 O Farklı tamponlar, özel bir protein epitopu antikor etkileşimi artırmak için ihtiyaç vardır. </li><li> Slaytlar, 3 dakika, distile su ile temizleyin, durulayın ve 5 dakika fosfat tamponlu salin (PBS) ile yıkandı takip 20 dakika sonra% 3 hidrojen peroksit (metanol içinde seyreltilmiş) konur. </li><li> Slaytlar sonra Sequenza (Thermo Scientific Shandon Sequenza immün Sistemi) adı verilen düz dar boyama raflara yerleştirilir ve PBS ile durulanır. </li><li> ERCC1 veya Pms2 immunohistokimyasal slaytlar sonra 10 dakika maruzarka plan proteinlerin non-spesifik boyanması azaltmak için hareket eder Biocare elde edilen &quot;Sniper&quot; denilen özel bir çözüm, 3 damla ilave bir tedaviye maruz dakikalık bir iş. </li><li> 1 ml Tween + 100 ml 10x Tris + 900 ml distile su [10x Tris Trizma + 80 gram NaCl + 1.000 ml distile ve deiyonize su + konsantre HCl (24.2 gram olduğu bir tampon &quot;TBST&quot; slaytlar ile durulanır yaklaşık 15 ml), pH 7.6] çözüm getirmek. </li><li> Slaytlar sonra üç kez tamponu ile durulanır, ve DAKO 100 mikrolitre 1:100 dilüsyon (% 2 tampon TBST kadar yapılan sığır serum albumin) orta antikor biotinlenmiş slaytlara eklenir ve oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edilir. </li><li> Bu noktada, Vectastain ABC (Avidin Biotin Kompleksi) (Vektör Laboratories) reaktif, 2.5 ml PBS, 1 damla çözüm A, 1 damla B çözeltisi kullanılarak hazırlanan ve çözümü 30 dakika bekletildikten. </li><li> Slaytlar TBST tampon ile 3 kez durulanır. </li><li> Sonra Vectastain ABC reaktifin 3 damla eklenir ve slaytlar TBST ile 2 kez durulama ardından, 30 dakika oda sıcaklığında inkübe edilir. </li><li> Slaytlar yaklaşık 5 dakika sonra DAB (Diamino-benzamid) (2.9 ml DAB + 400 mikrolitre PBS + 250 mikrolitre hidrojen peroksit) batırılır. </li><li> Slaytlar sonra 2 kez distile, deiyonize su ile durulanır. </li><li> Counterstaining hematoksilen 10 saniye boyunca bir çözelti ile yapılır. Slaytlar, deiyonize su ile takip musluk suyu iyice durulanır. </li><li> Slaytlar sonra susuz 2 kez% 95 etanol içinde 2 dakika, 2 dakika ve 2 kez 2 dakika ksilen% 100 etanol içinde 2 kez. </li><li> Cytoseal XYL (Richard Allan Bilimsel) Birkaç damla, sonra slayt eklenir ve bir lamel uygulanır. </li><li> ERCC1, Ku86 ve CcOI immünohistokimyasal değerlendirme Pms2 için aynı protokolü kullanılarak yapılmaktadır, ancak ERCC1, Ku86 ve CcOI antikorlar ile Pms2 antikor yerine aşağıdaki tabloda açıklandığı. </li></ol> ERCC1, ifade eksikliği kript, Pms2, Ku86 ve CcOI için doku bölümleri değerlendirilmesi <ol><li> Biz kolon mukozasında kript Pms2 ve ERCC1 ifade Motic (DM-BA300) fotomikroskopla altında doku kesitlerinde ilk bakacağız. </li><li> Pms2 ve ERCC1 hem DNA onarım enzimleri ve DNA nerede bu yüzden kript hücrelerinin çekirdekleri, bulunmaktadır. Bu ERCC1 için boyama temsil eden kahverengi kolon, bir crypt hücrelerin çekirdekleri oluşur Şekil 1, belirtilir. Mikroskop ilk gösterisi normal crypt ERCC1 lekeli ve kahverengi leke ERCC1 yerini gösterir. Biz, &quot;goblet hücrelerinin&quot; crypt dış kenarında hücrelerin dibinde küçük bir bölgede çekirdekleri ile, biraz şarap cam gibi şekillenir kript ve balonlaşma bölümünü hücre türleri işaret crypt iç hücre kısmı beyaz musin granülleri ile dolu. Diğer iki tip hücre hem bizim boyanan kesitler görünmesi ve enterositler ve enteroendokrin hücreleri ve çekirdekleri hücrelerin dibinde, crypt dış kenarında da. Kolonik neoplazi hiç hasta, ya da herhangi bir site kadar kolon kanseri biyopsilerinde alınan biyopsiler, burada gösterildiği gibi, hemen hemen tüm kriptlerde çekirdekleri ERCC1 ifade normal yüksek seviyesini gösterir. </li><li> Yönlendirmek için hiçbir kolonik neoplazi olan hastalarda biyopsi alınan gözlemler, doku bölümleri normal kolon mukozasında Pms2 ifade düzeyleri, ERCC1, CcOI veya Ku86 görülmektedir. Biz yavaş yavaş bütün bir doku kript, interstisyel hücreler, slayt üzerinde herhangi bir lenf nodülleri ve muskularis dışarı bölüm ve nokta ile gitmek gibi (40x objektif lens ile, normal bir doku bölümünde tüm kript izleyebilirsiniz varsa biyopsi). </li><li> Ayrıca sadece birkaç hücreleri kök hücreler crypt üssünde olduğuna işaret. Bu kök hücreler tam crypt yaklaşık 2.000 hücreleri üretir. Bir mutasyon ya da bir epimutation ile bir kök hücre, kök hücre tamamını niş devralacak. Sonra bütün crypt CcOI yüksek ifade var kript sonraki CcOI eksik bütün kript gördüğünüz bu yeni bir slayt gösterisi olarak ilgi bir enzim (crypt dönüşüm) boyama değişmiş olabilir. </li><li> Sonra biz, kolon kanseri olan bir hasta ya da ileri neoplazi ile bir adenom bir slayt gösterisi. Bu slaytta, bazı kript ERCC1 normal yüksek düzeyde ifade var ve bazı düşük düzeyde ifade var. Tüm doku bölümü içinde kript 10x objektif lens ile düşük çözünürlükte çekildi, ve tüm doku bölümünde bir görüntü görülür, böylece görüntüler döşenir. Kript sonra numaralandırılmış. </li><li> Çok biyopsilerinde fro kript enzim yüksek bir ifade ile tipik kriptm herhangi bir kanser, seviye &quot;4&quot; boyama denir. Saptanabilir herhangi bir ifade varsa, zar zor algılanabilir ifade açıktır diğer seviyeler, &quot;1&quot; &quot;0&quot;, &quot;2&quot; ifadesi mevcut olup olmadığını, ancak çok daha düşük bir seviye 4 daha düzeyi ve &quot;3&quot; az ifadesi ise 4 daha düşük bir seviyede mevcut, ama oldukça güçlü. Biz, 2 sarı, 3 yeşil turuncu ve kırmızı 0, 1, 4, düşük çözünürlüklü görüntü mavi her slayt nokta. Burada biyopsi 40x objektif lens kullanarak bir bölüm geçiyor göstermektedir. Biz düşük çözünürlüklü görüntü kript nokta. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1931/1931fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 kript hücrelerinin çekirdekleri ERCC1 yüksek ifade gösteren bir kolon crypt. Bu görüntüdeki tüm renkleri eşit Paint Shop Pro 5 kullanarak, kontrast ve doygunluk geliştirilmiştir. Temsilcisi Sonuçlar <ol><li> Ayrı slaytlar üzerinde alternatif doku kesitlerinde bize immünohistokimyasal olarak gösterilen iki farklı proteinin ifade ile, aynı kolon kript bakmak için izin verir. ERCC1 Pms2 için crypt boyanmış ve aynı crypt boyanmış görüntü komşu bilgisayar monitörleri ile bitişik mikroskoplar gösterilir. Bu bizim ortak eksikliği her sık ​​iken, bağımsız olarak ortaya çıkar, iki protein ya da proteinler her eksiklikleri olmadığını olup olmadığını belirlemek için izin verir. Biz bir protein ifadesinde herhangi bir belirgin eksikliği bir artefakt nedeniyle birden fazla bölüm eksik değil, kontrol edilebilir, böylece slayt başına üç doku bölümleri vardır. , Kansere yol açan bir kusur var kolon kanserleri, çevre dokulara ERCC1 ve Pms2 eksik kript yüksek bir frekans var. </li><li> Ayrıca Ku86 ve CcOI eksik kriptler frekansını bulmak için immünhistokimya kullanılır. Bu slaytta, Ku86 için immunohistokimyasal 40x objektif lens kullanarak, bütün bir doku bölüm üzerinden gitmek ve biz birkaç kript bu doku bölümü Ku86 için eksik olduğunu görebilirsiniz. </li><li> Benzer şekilde, bu slaytta, CcOI için immunohistokimyasal 40x objektif lens kullanarak, bütün bir doku bölüm üzerinden gidin ve sadece ılımlı bir kript CcOI için eksik olduğunu görebilirsiniz. </li></ol>

<ol>
	<li>Slaughter, D. P., Southwick, H. W., Smejkal, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+cancerization+in+oral+stratified+squamous+epithelium;+clinical+implications+of+multicentric+origin.">Field cancerization in oral stratified squamous epithelium; clinical implications of multicentric origin.</a> Cancer. 6, 963-968 (1953).</li><li>Vauthey, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+field+cancerisation+in+clinical+oncology.">Importance of field cancerisation in clinical oncology.</a> Lancet Oncol. 1, 15-16 (2000).</li><li>Bernstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+defects+in+progression+to+gastrointestinal+tract+cancers.">Field defects in progression to gastrointestinal tract cancers.</a> Cancer Lett. 260, 1-10 (2008).</li><li>Calabrese, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+pretumor+progression+before+and+after+loss+of+DNA+mismatch+repair.">Colorectal pretumor progression before and after loss of DNA mismatch repair.</a> Am J Pathol. 164, 1447-1453 (2004).</li><li>Bernstein, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+Pms2+expression+in+non-neoplastic+flat+mucosa+from+patients+with+colon+cancer+correlates+with+reduced+apoptosis+competence.">Reduced Pms2 expression in non-neoplastic flat mucosa from patients with colon cancer correlates with reduced apoptosis competence.</a> Appl Immunohistochem Mol Morphol. 14, 166-172 (2006).</li><li>Huang, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aldehyde+dehydrogenase+1+is+a+marker+for+normal+and+malignant+human+colonic+stem+cells+(SC)+and+tracks+SC+overpopulation+during+colon+tumorigenesis.">Aldehyde dehydrogenase 1 is a marker for normal and malignant human colonic stem cells (SC) and tracks SC overpopulation during colon tumorigenesis.</a> Cancer Res. 69, 3382-3389 (2009).</li><li>Kim, K. M., Shibata, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methylation+reveals+a+niche:+stem+cell+succession+in+human+colon+crypts.">Methylation reveals a niche: stem cell succession in human colon crypts.</a> Oncogene. 21, 5441-5449 (2002).</li><li>Greaves, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+DNA+mutations+are+established+in+human+colonic+stem+cells,+and+mutated+clones+expand+by+crypt+fission.">Mitochondrial DNA mutations are established in human colonic stem cells, and mutated clones expand by crypt fission.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 103, 714-719 (2006).</li><li>Nara, K., Nagashima, F., Yasui, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+elevated+ultraviolet-induced+mutation+frequency+in+isolated+Chinese+hamster+cell+lines+defective+in+nucleotide+excision+repair+and+mismatch+repair+proteins.">Highly elevated ultraviolet-induced mutation frequency in isolated Chinese hamster cell lines defective in nucleotide excision repair and mismatch repair proteins.</a> Cancer Res. 61, 50-52 (2001).</li><li>Payne, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deoxycholate+induces+mitochondrial+oxidative+stress+and+activates+NF-kB+through+multiple+mechanisms+in+HCT-116+colon+epithelial+cells.">Deoxycholate induces mitochondrial oxidative stress and activates NF-kB through multiple mechanisms in HCT-116 colon epithelial cells.</a> Carcinogenesis. 28, 215-222 (2007).</li><li>Lim, S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+changes+induced+by+reactive+oxygen+species+in+hepatocellular+carcinoma:+methylation+of+the+E-cadherin+promoter.">Epigenetic changes induced by reactive oxygen species in hepatocellular carcinoma: methylation of the E-cadherin promoter.</a> Gastroenterology. 135, 2128-2140 (2008).</li><li>Bernstein, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+acids+as+carcinogens+in+human+gastrointestinal+cancers.">Bile acids as carcinogens in human gastrointestinal cancers.</a> Mutat Res. 589, 47-65 (2005).</li><li>Payne, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=hydrophobic+bile+acids,+genomic+instability,+Darwinian+selection,+and+colon+carcinogenesis.">hydrophobic bile acids, genomic instability, Darwinian selection, and colon carcinogenesis.</a> Clinical and Experimental Gastroenterology. 1, 19-47 (2008).</li></ol>

<ol><li> Bu, slayt başına 3 doku kesitlerinde sahip olmak çok önemlidir. Antikor taşıyan medya uygularken Bubbles kript bazı kript veya bölümlerini bir kabarcık, doku bölümü ile reaksiyona antikor önledi sırf yeterince lekeli olmayabilir, böylece oluşabilir. Crypts çapı 60 mikron doku kesitlerinde 4 mikron kalınlığında, böylece aynı crypt üzerinden 15 olarak doku bölümleri vardır olabilir. Bir slayt üzerinde birden fazla doku kesitlerinde, bir kılavuz olarak kullanarak, aynı crypt crypt morfolojisi bulmak genellikle mümkün. </li><li> Bizim son çalışmalar, büyük doku örnekleri, bir Sequenza boyama doku iyi antikor kapsama vermek olmayabilir. Bu durumlarda, bir medya antikor içeren bir damla, her doku örneği üzerinden elle yerleştirilen doku el boyama, kullanmayı tercih edebilirsiniz. </li><li> Açıkça ifade ile immunohistokimyasal protein ve bilgisayar monitörü nükleer DNA gösteren mavi boyanma gösteren kahverengi lekelere, Motic fotomikroskopla yazılımı aşağıdaki gibi ayarlanır: Kazanç 0 0 Ofset, Gama 1.00, 0, 0, 255 geliştirin Netlik 1, Renk Düzeltme 7, R, G, B Kazanç 1.00 ve R, G, B Parlaklık 0. 1024 x 768 çözünürlük ve Beyaz Dengesi etkindir. </li><li> Bizim yöntemi proteinler kolon kanseri ilerlemesinde önemli olduğu düşüncesi ile, eksikliği sıklığını değerlendirmek için kullanılan ya da muhtemelen aşırı ekspresyonu, kolon kanserleri veya adenomlar ileri neoplazi çevreleyen alanı defektleri olabilir </li><li> Alan hataları kansere ilerleme bir parçası olan &quot;Alan kanserizasyonu&quot; terimi ilk Slaughter ve ark tarafından kullanılan şekilde kanser gelişimi için doğru zemin hazırlayabilir için büyük ölçüde bilinmeyen işlemler (zaman) tarafından koşullanan olmuştur epitelin bir alanda veya &quot;alan&quot; 1953 1 tanımlamak için. İlk kullanımdan oral kanserlerin bağlamında oldu. O zamandan beri, &quot;saha kanserizasyonu&quot; ve &quot;alanı defekti&quot; yeni kanserlerin ortaya çıkması daha olası olduğu herhangi bir pre-malign doku tanımlamak için daha yaygın olarak kullanılan, ve klinik onkoloji alanında kanserizasyonu kavramı giderek artan bir ilgi 2 aldı . Yakın zamanda 3 gastrointestinal kanser alanı defektleri için kanıt inceledik. Kolon alanı defektleri kanıt sağlayan bir düzine çalışmaların sonuçları bu yorum dahildir. Kolon mukozasında alanı defektleri, muhtemelen tek bir kök hücre niş arkaya 4 hayatta mutant hücreler veya epigenetically değiştirilmiş hücreler kök hücreler arasında böyle bir crypt doğal seleksiyon yoluyla ortaya çıkar. Genetik instabilite veya DNA nükleotid eksizyon onarımı ya da DNA uyuşmazlığı onarım azalma nedeniyle, belki de bir Mutator fenotip, bu süreci hızlandırmak (ve Pms2 sık görülen bir kusur kolon kanserleri 5 çevreleyen bölgelerde daha önce rapor edilmiştir). Kolon mukozasında kök hücrelerin normal bir nüfus, bir hücre veya bir epimutation bir mutasyon yoluyla selektif bir avantaj elde ederse, komşu kök hücreler pahasına klonal genişletmek eğiliminde olacaktır. Kolon mukozasında, kök hücre niş sonra (yaklaşık 2.000) crypt hücreleri doğuran ≤ 5 hücre 6 tarafından işgal edilmiştir. &quot;Crypt dönüşüm&quot; 7 ya da epigenetically değiştirilmiş bir mutant hücre tipi kök hücre nişinin üzerinde . Crypt fisyon 8 kolon epiteli mutasyona uğramış klonlar yayılması (dönüştürülür kript) en sık ortaya çıkabilir. Crypt fisyon bir örnek Şekil 2&#39;de gösterilmiştir. Bu şekilde bir yama anormal doku ortaya çıkar. Böyle bir yama içinde, ikinci bir mutasyonun belirli bir crypt yama içindeki diğer kript göre bir avantaj kazanır ve bu crypt orijinal yama içinde klonal ikincil bir yama oluşturan genişletmek böylece ortaya çıkabilir. Malign bir kök hücre klonal bir kanser genişliyor ortaya çıkana kadar, bu yeni yama içinde, bu süreç, belki de on yıl içinde çok daha fazla zaman tekrar olabilir. Sporadik kolon adenokarsinomların ortaya çıktığı genel süreç ise, daha sonra kolon adenokarsinomların ile ilişkili olmalıdır ve anormallik alanları, öncesinde. Böylece, dönüştürülmüş kript bir yama ileri neoplazi bir adenom çevreleyen veya kolon kanseri çevreleyen bölgede saptanabilir kusurları var beklenebilir. Pre-tümör progresyonu bu model, bir kansere ilerleme olasılığı kolon neoplastik lezyonları çevreleyen alanları non-neoplastik kolon mukozası alınan doku örnekleri arasında okul öncesi tümör progresyonu ile ilgili genetik veya epigenetik değişiklikler bulmak için beklediğiniz . Özellikle, genomik instabilite artırarak, DNA onarım enzimleri veya apoptozis için gerekli proteinlerin kusurları ilerlemesine katkıda olacak ve arızalı bir alanda bulunan beklenebilir. </li><li> Hücreleri d Pms2 eksikliği seçimiERCC1 için eficient ve DNA zararlı madde tabi Nara ve ark. 9 25 Çin hamsteri over hücrelerinin kültürleri 43-3B, DNA tamir geni inaktive ERCC1 mutasyonu ile büyüdü, kültürleri ve DNA zararlı madde ile muamele, MNNG. DNA hasarı tedavi hayatta kalan hücreler arasında, tek bir hücre, her kültürden izole ve bir klon oluşturmak için izin. Izole tüm klonlar ebeveyn gerginlik daha MNNG öldürülmesi için yaklaşık 10 kat daha dayanıklı. Izole edilen klon DNA uyumsuzluğu onarım (MMR), 22 kusurlu olduğu kanıtlandı. Bu 22 klonları Beş sıralama tarafından test edilmiş ve üç beş Pms2 için eksik. Pms2 kusur Bu seçim Pms2 eksikliği apoptozise direnci neden çünkü muhtemelen, ERCC1 yoktu hücreleri kalan eklenen DNA hasarı hayatta nedenle yeteneği. (Normalde, Pms2 duyuları DNA hasar düzeyleri ve DNA hasarı aşırı apoptozis geçmesi hücreleri neden olur.) Böylece, Pms2 bir eksikliği ERCC1 eksikliği hücreleri DNA hasarı maruz kaldıklarında için seçilir. Ebeveyn hücreler daha UV ile ışınlanmış ERCC1 ve Pms2 hem de kusurlu Klonlar 500 ila 1000 kat daha fazla mutasyon oranı ile ilgili olduğu gösterilmiştir. </li><li> Safra asitleri, oksidatif strese neden olan DNA zarar ajanlar ve kolon kanseri ilerlemesinde önemli Deoxycholic asit, safra asidi, mitokondri 10 zarar da dahil olmak üzere çoklu süreçleri, reaktif oksijen türleri (ROS) üretimi ile oksidatif stres artar. ROS epigenetik değişikliklerin neden 11 ve en az 15 çalışma, yüksek yağlı diyet ile birlikte artan konsantrasyonlarda, safra asitleri, DNA hasarı 12 neden olduğunu göstermiştir son kanıt yoktur. Bernstein ve arkadaşları tarafından yorumlanan 12, diyetsel yağ tüketimi ve kolon kanseri insidansı arasında pozitif bir ilişki vardır. Safra asitleri, diyet yağ yanıt bağırsak içine salgılanan ve safra asitleri, deterjan, yağ sindirime yardımcı olarak hareket. Böylece, yüksek yağlı diyet artan safra asit salgılanması ile ilişkilidir. Fekal safra asidi, kolon kanseri insidansının yüksek olduğu popülasyonlarda yüksek, safra asitleri aşırı maruz kalma ve 13 karsinogenez kolon için önemli bir risk faktörü olarak kabul edilir. Safra asitleri kolon alanı defektleri nedeni olabilir. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1931/1931fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2, 3 kript içine kolon crypt fissioning . Sonuç Biz kolon kanserleri çevresindeki geniş alanı defektleri DNA tamir genleri ERCC1 ve Pms2 (Pms2 apoptozis için de gereklidir) eksik kript yüksek frekanslı bulundu. Yetersizlikleri ERCC1 ve Pms2 (epigenetik değişimler veya mutasyonlar, nedeniyle), kolon kanseri ilerleme merkezi genetik bir istikrarsızlık erken adımlar olabilir.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>PMS2 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>556415</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ERCC1 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Fisher</td>
<td>MS-671-P1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ku86 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Santa Cruz Biotech.</td>
<td>SC-9034</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CcO1 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>459600</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotinylated secondary</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO</td>
<td>E0413</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>22% BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Informagen, Inc.</td>
<td>2327</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sniper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biocare Medical</td>
<td>BS966</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectastain ABC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Labs</td>
<td>PK-6100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DAB</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>34001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tween 20</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>USB</td>
<td>20605</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cytoseal XYL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>48212-196</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trizma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>T1503</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

deficient pms2, ercc1, ku86, ccoi in field defects during progression to colon cancer

Karsinogenez, &quot;alanı defekti&quot; kurtulanların Yakın bir yerde sık sık aynı doku tipi, diğer malignitelerin geliştirmek için bazı kanserlerin yüksek eğilimi nedeniyle klinik olarak kabul edilmektedir. Bu alanı defektleri, kolon kanseri belirtilmiştir. Kolonda bir alanı defekti sorumlu moleküler anormallikleri, yüksek frekansta bir kolon adenokarsinomu çevreleyen veya ileri neoplazi (kolon kanseri yolda) ile bir adenom çevreleyen histolojik olarak normal doku algılanabilir, ama düşük frekanslı kolonik neoplazi olmayan hastalarda kolon mukozasında. Immünohistokimya kullanarak, kolon adenokarsinomların veya ileri düzey kolon neoplaziler her tarafında 10 cm içinde tüm kript iki DNA onarım proteinler, Pms2 ve / veya ERCC1 için sık sık azaltılmış veya ifade yok olduğu tespit edildi. Pms2 ikili bir rolü protein, DNA uyumsuzluğu onarım yanı sıra aşırı DNA hasarı ile hücrelerin apoptozis gerektiği gibi aktif. DNA nükleotid eksizyon tamir ERCC1 aktiftir. ERCC1 ve Pms2 hem de düşük ya da hiç bir ifade, hayatta kalmak için yüksek yeteneği (apoptozis direnci) ve değişkenliktir artan düzeyde hem hücreleri yaratacak. ERCC1 ve Pms2 hem de düşük ya da hiç bir ifade, büyük olasılıkla, kolon kanseri ilerleme erken bir adımdır. DNA tamir geni Ku86 (DNA aktif homolog olmayan katılmadan sonu) ve Sitokrom c oksidaz Altbirim (apoptozis dahil) her kolon kanserleri yakın mukozal alanlarda ifade azalma olduğu bildirilmiştir vardı. Ancak, ifade düzeylerinin yetersiz olması, kolon kanseri çevreleyen ya da ileri kolonik neoplazi çevreleyen alanı defekti ifade kript mütevazı frekansları immünohistokimyasal değerlendirme sadece düşük gösterdi. Biz burada, show, ERCC1, Pms2, Ku86 ve CcOI ifade kript değerlendirilmesi yöntem. Sıklığı Ku86 eksikliği kriptler kript% 2 ve frekans medyan değeri vardır, biz Pms2 için tüm eksik kript bu frekans ve ERCC1 genellikle 20 cm kolonik neoplazi çevreleyen uzun alanlarda% 70% 95 gibi büyük CcOI eksikliği, bu alanlarda% 16, medyan değeri vardır. Tüm kolon, 150 cm uzunluğunda (yaklaşık 5 metre) ve mukoza tabakası, yaklaşık 10 milyon kript vardır. Kolon kanseri çevreleyen Pms2 ve ERCC1 kusur böylece 1 milyon kript içerebilir. Kolon kanserinin ortaya çıktığı bir arızalı crypt.

Watch this Scientific Journal Video about Deficient Pms2, ERCC1, Ku86, CcOI in Field Defects During Progression to Colon Cancer at JoVE.com

Deficient Pms2, ERCC1, Ku86, CcOI in Field Defects During Progression to Colon Cancer

Pms2 ve / veya bütün kript olarak ERCC1 Küçültülmüş / eksik ifade kolon adenokarsinomların, muhtemelen yüksek değişkenliktir ve kanser ilerleme alanı defekti temelinde her iki tarafında 10 cm içinde sık rastlanan bir olaydır. Ku86 veya CcOI eksikliği, bu alanı defektleri çok daha az sık.

Eksik Pms2 ERCC1, Ku86 Kolon Kanseri ilerleme sırasında Alan Kusur CcOI

In carcinogenesis, the "field defect" is recognized clinically because of the high propensity of survivors of certain cancers to develop other ...

deficient-pms2-ercc1-ku86-ccoi-field-defects-during-progression-to

Research

JoVE Journal

Biology

12.2K Görüntüleme.  University of Arizona, Tucson. Pms2 ve / veya bütün kript olarak ERCC1 Küçültülmüş / eksik ifade kolon adenokarsinomların, muhtemelen yüksek değişkenliktir ve kanser ilerleme alanı defekti temelinde her iki tarafında 10 cm içinde sık rastlanan bir olaydır. Ku86 veya CcOI eksikliği, bu alanı defektleri çok daha az sık.

Video: Deficient Pms2, ERCC1, Ku86, CcOI in Field Defects During Progression to Colon Cancer

Implantation of Ferumoxides Labeled Human Mesenchymal Stem Cells in Cartilage Defects

The field of tissue engineering integrates the principles of engineering, cell biology and medicine towards the regeneration of specific cells and functional tissue. Matrix associated stem cell implants (MASI) aim to regenerate cartilage defects due to arthritic or traumatic joint injuries. Adult mesenchymal stem cells (MSCs) have the ability to differentiate into cells of the chondrogenic lineage and have shown promising results for cell-based articular cartilage repair technologies. Autologous MSCs can be isolated from a variety of tissues, can be expanded in cell cultures without losing their differentiation potential, and have demonstrated chondrogenic differentiation in vitro and in vivo1, 2.
In order to provide local retention and viability of transplanted MSCs in cartilage defects, a scaffold is needed, which also supports subsequent differentiation and proliferation. The architecture of the scaffold guides tissue formation and permits the extracellular matrix, produced by the stem cells, to expand. Previous investigations have shown that a 2% agarose scaffold may support the development of stable hyaline cartilage and does not induce immune responses3.
Long term retention of transplanted stem cells in MASI is critical for cartilage regeneration. Labeling of MSCs with iron oxide nanoparticles allows for long-term in vivo tracking with non-invasive MR imaging techniques4.
This presentation will demonstrate techniques for labeling MSCs with iron oxide nanoparticles, the generation of cell-agarose constructs and implantation of these constructs into cartilage defects. The labeled constructs can be tracked non-invasively with MR-Imaging.

Goal of the presentation is to demonstrate a highly reproducible method to generate matrix associated stem cell implants in cartilage defects, which can be visualized with MR imaging. Stem cells are labeled with FDA-approved Ferumoxides, mixed with agarose, implanted into cartilage defects and imaged with a 7T MR scanner.

Ferumoxides implantasyonu Kıkırdak Kusur İnsan Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli

The field of tissue engineering integrates the principles of engineering, cell biology and medicine towards the regeneration of specific cells and ...

Biyoloji

Determining the Contribution of the Energy Systems During Exercise

One of the most important aspects of the metabolic demand is the relative contribution of the energy systems to the total energy required for a given physical activity. Although some sports are relatively easy to be reproduced in a laboratory (e.g., running and cycling), a number of sports are much more difficult to be reproduced and studied in controlled situations. This method presents how to assess the differential contribution of the energy systems in sports that are difficult to mimic in controlled laboratory conditions. The concepts shown here can be adapted to virtually any sport.
The following physiologic variables will be needed: rest oxygen consumption, exercise oxygen consumption, post-exercise oxygen consumption, rest plasma lactate concentration and post-exercise plasma peak lactate. To calculate the contribution of the aerobic metabolism, you will need the oxygen consumption at rest and during the exercise. By using the trapezoidal method, calculate the area under the curve of oxygen consumption during exercise, subtracting the area corresponding to the rest oxygen consumption. To calculate the contribution of the alactic anaerobic metabolism, the post-exercise oxygen consumption curve has to be adjusted to a mono or a bi-exponential model (chosen by the one that best fits). Then, use the terms of the fitted equation to calculate anaerobic alactic metabolism, as follows: ATP-CP metabolism = A1 (mL . s-1) x t1 (s). Finally, to calculate the contribution of the lactic anaerobic system, multiply peak plasma lactate by 3 and by the athlete&#x2019;s body mass (the result in mL is then converted to L and into kJ).
The method can be used for both continuous and intermittent exercise. This is a very interesting approach as it can be adapted to exercises and sports that are difficult to be mimicked in controlled environments. Also, this is the only available method capable of distinguishing the contribution of three different energy systems. Thus, the method allows the study of sports with great similarity to real situations, providing desirable ecological validity to the study.

This protocol allows researchers focused on exercise and sports sciences to determine the relative contribution of three different energy systems to the total energy expenditure during a large variety of exercises.

Egzersiz sırasında Enerji Sistemlerinin Katkısı Belirlenmesi

One of the most important aspects of the metabolic demand is the relative contribution of the energy systems to the total energy required for a given ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an attractive model system to study organ development and tissue-specific signaling. Although hair follicle development is genetically tractable, fast and reproducible analysis of factors essential for this process remains a challenge. Here we describe a procedure to generate targeted overexpression or shRNA-mediated knockdown of factors using lentivirus in a tissue-specific manner. Using a modified version of a hair regeneration model 5, 6, 11, we can achieve robust gain- or loss-of-function analysis in primary mouse keratinocytes or dermal cells to facilitate study of epithelial-mesenchymal signaling pathways that lead to hair follicle morphogenesis. We describe how to isolate fresh primary mouse keratinocytes and dermal cells, which contain dermal papilla cells and their precursors, deliver lentivirus containing either shRNA or cDNA to one of the cell populations, and combine the cells to generate fully formed hair follicles on the backs of nude mice. This approach allows analysis of tissue-specific factors required to generate hair follicles within three weeks and provides a fast and convenient companion to existing genetic models.

Tissue-specific analysis of a hair follicle regeneration model using lentivirus to mediate gain- or loss-of-function.

Saç Rejenerasyon sırasında epitelyal-mezenkimal Sinyal Rapid Genetik Analizi

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

The proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal development in all metazoan organisms. Apoptotic cell clearance is a highly dynamic process intimately associated with cell death; unengulfed apoptotic cells are barely seen in vivo under normal conditions. In order to understand the different steps of apoptotic cell clearance and to compare 'professional' phagocytes - macrophages and dendritic cells to 'non-professional' - tissue-resident neighboring cells, in vivo live imaging of the process is extremely valuable. Here we describe a protocol for studying apoptotic cell clearance in live Drosophila embryos. To follow the dynamics of different steps in phagocytosis we use specific markers for apoptotic cells and phagocytes. In addition, we can monitor two phagocyte systems in parallel: 'professional' macrophages and 'semi-professional' glia in the developing central nervous system (CNS). The method described here employs the Drosophila embryo as an excellent model for real time studies of apoptotic cell clearance.

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Here we describe an effective method for studying dynamics of apoptotic cell clearance in vivo. This method employs live Drosophila embryos as a powerful model for monitoring phagocytosis of apoptotic cells using specific labeling of apoptotic cells and phagocytes.

Apoptotik hücresi Temizliği görüntülenmesi sırasında Canlı<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriyo

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Force Measurement During Contraction to Assess Muscle Function in Zebrafish Larvae

Zebrafish larvae provide models of muscle development, muscle disease and muscle-related chemical toxicity, but related studies often lack functional measures of muscle health. In this video article, we demonstrate a method to measure force generation during contraction of zebrafish larval trunk muscle. Force measurements are accomplished by placing an anesthetized larva into a chamber filled with a salt solution. The anterior end of the larva is tied to a force transducer and the posterior end of the larva is tied to a length controller. An isometric twitch contraction is elicited by electric field stimulation and the force response is recorded for analysis. Force generation during contraction provides a measure of overall muscle health and specifically provides a measure of muscle function. Although we describe this technique for use with wild-type larvae, this method can be used with genetically modified larvae or with larvae treated with drugs or toxicants, to characterize muscle disease models and evaluate treatments, or to study muscle development, injury, or chemical toxicity.

Force measurements can be used to demonstrate changes in muscle function due to development, injury, disease, treatment or chemical toxicity. In this video, we demonstrate a method to measure force during a maximal contraction of zebrafish larval trunk muscle.

Zebra balığı Larva kas fonksiyonu değerlendirmek için daralma sırasında Kuvvet Ölçümü

Zebrafish larvae provide models of muscle development, muscle disease and muscle-related chemical toxicity, but related studies often lack functional ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

The myofibroblast is a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining considerable attention for its critical role in many GI functions. While several myofibroblast cell lines are commercially available to study these cells in vitro, research results from a cell line exposed to experimental cell culture conditions have inherent limitations due to the overly reductionist nature of the work. Use of primary myofibroblasts offers a great advantage in terms of confirming experimental findings identified in a cell line. Isolation of primary myofibroblasts from an animal model allows for the study of myofibroblasts under conditions that more closely mimic the disease state being studied. Isolation of primary myofibroblasts from human colon tissue provides arguably the most relevant experimental data, since the cells come directly from patients with the underlying disease. We describe a well-established technique that can be utilized to isolate primary myofibroblasts from both mouse and human colon tissue. These isolated cells have been characterized to be alpha-smooth muscle actin and vimentin-positive, and desmin-negative, consistent with subepithelial intestinal myofibroblasts. Primary myofibroblast cells can be grown in cell culture and used for experimental purposes over a limited number of passages.

The myofibroblast is an influential stromal cell of the gastrointestinal tract that regulates important physiologic processes in both normal and disease states. We describe a technique that allows for the isolation of primary myofibroblasts from both mouse and human colon tissue, which can be utilized for in vitro experimentation.

Fare ve İnsan Kolon Doku Primer miyofibroblastlar İzolasyonu

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Detection of Alternative Splicing During Epithelial-Mesenchymal Transition

Alternative splicing plays a critical role in the epithelial-mesenchymal transition (EMT), an essential cellular program that occurs in various physiological and pathological processes. Here we describe a strategy to detect alternative splicing during EMT using an inducible EMT model by expressing the transcription repressor Twist. EMT is monitored by changes in cell morphology, loss of E-cadherin localization at cell-cell junctions, and the switched expression of EMT markers, such as loss of epithelial markers E-cadherin and &#947;-catenin and gain of mesenchymal markers N-cadherin and vimentin. Using isoform-specific primer sets, the alternative splicing of interested mRNAs are analyzed by quantitative RT-PCR. The production of corresponding protein isoforms is validated by immunoblotting assays. The method of detecting splice isoforms described here is also suitable for the study of alternative splicing in other biological processes.

Alternative splicing regulation has been shown to contribute to the epithelial-mesenchymal transition (EMT), an essential cellular program in various physiological and pathological processes. Here we describe a method utilizing an inducible EMT model for the detection of alternative splicing during EMT.

Epitel-Mezenkimal Geçiş sırasında alternatif birleştirme Algılama

Alternative splicing plays a critical role in the epithelial-mesenchymal transition (EMT), an essential cellular program that occurs in various ...

Temporal Tracking of Cell Cycle Progression Using Flow Cytometry without the Need for Synchronization

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell synchronization can be difficult for many cell systems. Standard practice is to block cell cycle progression at a specific stage and then release the accumulated cells producing a wave of cells progressing through the cycle in unison. However, some cell types find this block toxic resulting in abnormal cell cycling, or even mass death. Bromodeoxyuridine (BrdU) uptake can be used to track the cell cycle stage of individual cells. Cells incorporate this synthetic thymidine analog, while synthesizing new DNA during S phase. By providing BrdU for a brief period it is possible to mark a pool of cells that were in S phase while the BrdU was present. These cells can then be tracked through the remainder of the cell cycle and into the next round of replication, permitting the duration of the cell cycle phases to be determined without the need to induce a potentially toxic cell cycle block. It is also possible to determine and correlate the expression of both internal and external proteins during subsequent stages of the cell cycle. These can be used to further refine the assignment of cell cycle stage or assess effects on other cellular functions such as checkpoint activation or cell death.

This protocol describes the use of bromodeoxyuridine (BrdU) uptake to permit the temporal tracking of cells that were in S phase at a specific point in time. Addition of DNA dyes and antibody labeling facilitates detailed analysis of the fate of the S phase cells at later times.

Senkronizasyon Need for olmadan Akım Sitometri Kullanımı Hücre Döngüsü ilerleme zamansal İzleme

This protocol describes a method to permit the tracking of cells through the cell cycle without requiring the cells to be synchronized. Achieving cell ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual inflammation, progressive destruction and regeneration of the hepatic parenchyma, liver progenitor cell proliferation, and fibrosis. The end-stage of every chronic liver disease is cirrhosis, a major risk factor for the development of hepatocellular carcinoma. To study processes regulating disease initiation, establishment, and progression, several animal models are used in laboratories. Here we describe a six-week time course of the choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) mouse model, which involves feeding six-week old male C57BL/6J mice with choline-deficient chow and 0.15% DL-ethionine-supplemented drinking water. Monitoring of animal health and a typical body weight loss curve are explained. The protocol demonstrates the gross examination of a CDE-treated liver and blood collection by cardiac puncture for subsequent serum analyses. Next, the liver perfusion technique and collection of different hepatic lobes for standard evaluations are shown, including liver histology assessments by hematoxylin and eosin or Sirius Red stainings, immunofluorescent detection of hepatic cell populations as well as transcriptome profiling of the liver microenvironment. This mouse model is suitable for studying inflammatory, fibrogenic, and liver progenitor cell dynamics induced through chronic liver disease and can be used to test potential therapeutic agents that may modulate these processes.

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Here we describe a common method to induce chronic liver injury in mice by feeding of a choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) diet. We demonstrate health monitoring, liver perfusion, isolation, and preservation. A time course of six weeks can inform about liver injury, pathohistology, fibrosis, inflammatory, and liver progenitor cell responses.

Fare Kolin eksikliği, Ethionine desteklenmiştir (özgür) diyet kronik karaciğer yaralanma modeli

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

Urinary tract junction obstruction defects are congenital anomalies inducing hydronephrosis and hydroureter. Murine urinary tract junction obstruction defects can be assessed by tracking methylene blue dye flow within the urinary system. Methylene blue dye is injected into the renal pelvis of perinatal embryonic kidneys and dye flow is monitored from the renal pelvis of the kidney through the ureter and into the bladder lumen after applying hydrostatic pressure. Dye accumulation will be evident in the bladder lumen of the normal perinatal urinary tract, but will be constrained between the renal pelvis and the end point of an abnormal ureter, if urinary tract obstructions occur. This method facilitates the confirmation of urinary tract junction obstructions and visualization of hydronephrosis and hydroureter. This manuscript describes a protocol for methylene blue dye injection into the renal pelvis to confirm urinary tract junction obstructions.

Methylene blue dye injection into the renal pelvis facilitates the assessment of urinary tract junction obstruction defects during mouse embryonic urinary tract development. Here, a protocol for methylene blue dye injection into the renal pelvis is described.

İdrar yolu Junction obstrüksiyonu kusurları Metilen mavisi boya enjeksiyonla değerlendirilmesi

Urinary tract junction obstruction defects are congenital anomalies inducing hydronephrosis and hydroureter. Murine urinary tract junction obstruction ...