Immunofluorescent Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers

Murin adipoz türevi kök hücreleri, iki mililitre yıkama tamponu ile altı delikli bir plakada yıkayarak başlayın. Hücreleri üç kez inkübe ettikten ve yıkadıktan sonra bir mililitre bloke edici reaktif ekleyin. Hücreleri 20 dakika boyunca yavaş ajitasyonla inkübe edin.

Her bir kuyucuğa 200 mikrolitre birincil antikor ekleyin ve gece boyunca dört santigrat derecede inkübe edin. Plakaları daha önce gösterildiği gibi üç kez yıkadıktan sonra, 200 mikrolitre ikincil antikor ile inkübe edin. Plakaları üç kez yıkadıktan sonra hücre çekirdeklerini 20 dakika boyunca 100 mikrolitre DRAQ7 ile karşı boyayın.

Yıkamayı tekrarlayın ve slaytları monte edin. Epifloresan konfokal mikroskopi altında monte edilmiş slaytları görselleştirin. Adipoz türevi kök hücreler, test edilen tüm alt geçitlerde CD9 yüzey belirteçleri için% 100 pozitifti.

Tüm hücreler bir, üç ve dokuz alt geçitlerinde CD63 belirteçlerini ifade ederken, hücrelerin% 49.3'ü yedinci pasajda ifade etti. CD34 belirteçleri bir, yedi ve dokuzuncu pasajlarda yoktu, ancak üçüncü pasajda görülebiliyordu.