Flow Cytometric Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers

%5 fetal sığır serumu ile PBS kullanarak çözülmüş murin adipoz türevi kök hücre süspansiyonunun konsantrasyonunu ayarlayarak başlayın. 100.000 hücre içeren süspansiyonun 100 mikrolitresini 1.5 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aliquot. Üreticinin talimatlarına göre uygun miktarlarda anti-CD105 AF594 ve anti-CD31 AF680 ekleyin.

Karanlıkta dört santigrat derecede 20 dakika inkübe edin. PBS/FBS ile yıkayarak fazla lekeyi çıkarın ve beş dakika boyunca 250 x g'de santrifüj yapın. Hücreleri 300 mikrolitre% 1 formalin içinde yeniden askıya alın.

İlgilenilen alt popülasyonu seçmek için çokgen sembolüne tıklayarak bir nokta çizim grafiği oluşturun ve FSC-A ve SSC-A geçitlerini kullanarak enkaz alanlarını hariç tutun. Ardından, yeni bir nokta grafiği oluşturmak için çokgen sembolüne tıklayın ve SSC-H ile SSC-A'yı ve ardından FSC-H ve FSC-A'yı kullanan dubleksleri ve katları hücreleri hariç tutun. AF594 için sırasıyla Y610-mCHERRY ve AF680 floroforlar için R660 APC-A dedektörleri kullanın.

Kadran sembolüne tıklayın ve her dedektörün otofloresan hücreleri için eşiğini ayarlayın. Q1LR'de gösterilecek CD105 ve pozitif popülasyon ile etiketlenmiş örnekleri seçin. Ardından, Q1LR'de gösterilecek CD31 ve pozitif popülasyon ile etiketlenmiş örnekleri seçin.

İmmünofenotipleme, hücre popülasyonunun% 98.7'sinin CD105 için pozitif olduğunu, sadece% 5.88'inin CD31 belirtecini ifade ettiğini gösterdi.