İlaçla tedavi edilen C.elegane'yi görüntüledikten sonra, ND dosyasını görüntü J sunucusunda kolokalizasyon eklentisiyle açın ve iletişim kutusundaki görüntüleri bölme seçeneğini belirleyin. Her ND dosyası üç dalga boyunda ve görünür ışıkta çekilen görüntü düzlemlerini içerir. Parlak alan, yeşil ve kırmızı görüntülerle çalışın.
Orijinal görüntüye dokunulmaması için resmin üzerine tıklayıp çoğalt'ı seçerek veya klavye kısayolu shift artı D.Ardından daha önce gösterildiği gibi başka bir görüntü kopyası oluşturarak arka planı azaltın. Arka planı 100 yuvarlanma yarıçapıyla çıkarın ve verilen görüntünün Arka Planına sahip bir görüntü oluşturmak için arka plan oluştur seçeneğini belirleyin. Şimdi işleme gidin, görüntü hesaplayıcısına tıklayın ve çoğaltılan ilk görüntüyü ikinci çoğaltılan görüntüden çıkarın.
Kolokalizasyon analizi için elde edilen görüntüleri kullanın. Kolocalizasyon eklentisini kullanmak için, yeşil ve kırmızı kanal görüntülerini görüntüye tıklayıp türü ve ardından sekiz bit'i seçerek sekiz bit'e dönüştürün. Ardından, eklentilere tıklayın ve kolokalizasyonu seçin.
Mitokondri ve lizozom sinyallerinin kolokalizasyonunu ölçmek için, oranı% 75'e, eşik kırmızı kanalı 80.0'a ve eşik yeşil kanalı 50.0'a ayarlayın. Kolokalize puncta içeren ve üç sekiz bit görüntüyü bir RGB görüntüsünde birleştiren sekiz bitlik bir ikili görüntü, çıktı olarak oluşturulur. Ardından, alanı manuel olarak seçerek ve ilgilenilen bölgeyi seçmek için düzenle, seç ve maske oluştur'u tıklatarak bir maske oluşturarak solucanların baş vücut duvarı kasındaki punktaya odaklanın.
İlgilenilen bölgedeki parçacıkları seçmek için, birlikte lokalize edilmiş sekiz bit ve maskelenmiş görüntüleri seçmek üzere görüntü hesaplayıcısını kullanın. İşlemi kullanın ve ilgilenilen bölgedeki puncta'yı seçmek için ilgilenilen bölgedeki puncta ile bir görüntü oluşturun. Son olarak, kolokalize mitokondri ve lizozomların alanını analiz etmek için, analizi seçin, ardından parçacıkları analiz edin ve punktanın 0.1625 mikrometre kare ile dört mikrometre arasındaki toplamını ölçün.
Solucanların baş, vücut, duvar kaslarının konfokal görüntüleri, mitokondri ve lizozomların kolokalizasyonunu gösterdi. VL-850, solucanın baş vücut duvarı kaslarında sağlam mitopaji indükledi ve güçlü bir mitopaji indükleyicisini gösterdi. VL-850'nin mitopaji gücü FCCP'ninkine benzerdi.
