İlaçla tedavi edilen Hep-3B hücrelerini görüntüledikten sonra, kolokalizasyon eklentisi ile görüntü J'deki konfokal görüntüleri açın. ND dosyasını görüntü J sunucusunda açın ve iletişim kutusundaki kanalları böl seçeneğini belirleyin. Yeşil ve kırmızı görüntülerle çalışın.
Resmin üzerine tıklayıp çoğalt'ı seçerek veya arka planı küçültmek, başka bir görüntü kopyası oluşturmak, arka planı 100'lük bir yuvarlanma yarıçapıyla çıkarmak ve verilen görüntülerin arka planına sahip bir görüntü oluşturmak için arka plan oluştur seçeneğini belirlemek D.To klavye kısayolu shift plus kullanarak orijinal görüntüye dokunulmamasını sağlamak için bu görüntülerin kopyalarını oluşturun. Ardından, işleme gidin. Resim hesaplayıcı'yı tıklayın ve çoğaltılan ilk görüntüyü ikinci çoğaltılan görüntüden çıkarın.
Kolokalizasyon analizi için elde edilen görüntüleri kullanın. Kolokalizasyon eklentisini kullanmak için, yeşil ve kırmızı kanal görüntülerini görüntüye tıklayıp türü ve ardından 8 bit'i seçerek 8 bit'e dönüştürün. Ardından, eklentilere tıklayın ve kolokalizasyonu seçin.
Mitokondri ve lizozom sinyallerinin kolokalizasyonunu ölçmek için, oranı% 75'e, eşik kırmızı kanalı 80.0'a ve eşik yeşil kanalı 50.0'a ayarlayın. Kolokalize puncta içeren ve üç 8 bit görüntüyü bir RGB görüntüsünde birleştiren 8 bitlik bir ikili görüntü oluşturulur. Bu görüntüleri 8 bit görüntülere dönüştürün.
Hücrelerin ilgilendiği bölgeyi elde etmek için, birlikte lokalize edilmiş bir noktanın görüntüsünü seçerek hücrelerin alanını vurgulayan bir görüntü oluşturun. Tüm hücre alanını seçmek için, sonuçta ortaya çıkan birlikte yerelleştirilmiş noktalar görüntüsünü seçin ve tüm hücre alanının vurgulandığından emin olmak için görüntüye tıklayın, eşiği ayarlayın ve eşiği ayarlayın. Hücrenin alanını analiz etmek için analiz et'i seçin, parçacıkları analiz et'i tıklatın ve parçacıkları analiz etmek için varsayılan ayar olan görüntüdeki tüm parçacıkları sıfırdan sonsuza kadar ölçün.
Kolokalize mitokondri ve lizozomların alanını analiz etmek için, kolokalize 8 bit görüntüyü seçin. Ardından analiz et'i seçin. Parçacıkları analiz et'e tıklayın ve 0.1625 mikrometre kare ile dört mikrometre kare arasındaki punktanın toplamını ölçün.
Kolokalize puncta'yı ölçmek için kolokalize mitokondri ve lizozomların alanını toplam hücre alanına bölün. Hep-3B hücrelerinin konfokal görüntüleri, mitokondri ve lizozomların kolokalizasyonunu gösterdi. VL 850 ve FCCP, Hep-3B hücrelerinde önemli mitopajiye neden oldu.
