Başlamak için, DAKIKI hücrelerini oyuk başına 0,4 milyon hücre yoğunluğunda 96 oyuklu plakalarda tohumlayın. Farklı deney gruplarını ayarlayın ve ardından gruplama yöntemine göre ilgili tedavileri oluşturun. Plakaları 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte 24 saat inkübe edin.
Laktat dehidrojenaz sitotoksisite testi için, yüksek kontrol grubundaki her bir oyuğa beş mikrolitre lizat ekleyin. Ve plakayı% 5 karbondioksit ve 37 santigrat derecede 15 dakika inkübe edin. Ardından, her bir kuyucuğa 100 mikrolitre reaksiyon karışımı ekleyin.
Reaksiyonu söndürmek için, oyuk başına 50 mikrolitre durdurma reaksiyonu çözeltisi ekleyin. Hücre Sayma Kiti-8 veya CCK-8 tahlili için, ilk 24 saatlik inkübasyondan sonra, her oyuğa 20 mikrolitre CCK-8 reaktifi ekleyin. Ve plakaları iki saat boyunca% 5 karbondioksit ve 37 santigrat derecede inkübatöre geri koyun.
Laktat dehidrojenaz sitotoksisite testinin sonuçları, mililitre başına 0.25 ila 1.0 mikrogram konsantrasyonlarda diosin tarafından indüklenen önemsiz sitotoksisite gösterdi, bu da laktat dehidrojenaz salım oranları% 10'un altında olan CCK-8 testi, model grubuyla karşılaştırıldığında, diosinin, LPS ile indüklenen DAKIKI hücre proliferasyonunu konsantrasyona bağlı bir şekilde inhibe ettiğini ve mililitre başına 0.5 ve 1.0 mikrogram konsantrasyonların önemli inhibisyon gösterdiğini gösterdi.
