This work was supported by funding from the March of Dimes FY12-133 (S.K.E.) and the National Institutes of Health R01HD037831 (S.K.E.). We would like to thank Dr. Deborah Frank for critical review of the manuscript.

NOT: Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından belirlenen hayvanların bakımı ve kullanımı için kurallar uyulması Tüm hayvan prosedürleri. Tüm protokoller St. Louis Washington Üniversitesi Hayvan Çalışmaları Komitesi tarafından kabul edildi. NOT: Bu protokol için özel malzemeler ve ekipmanlar Malzemeleri ve Ekipmanları tablo listelenir. Kadın Fareler 1. Zamanlı Yetiştiriciliği <ol><li> Erkeklerde 2 saat zaman penceresinde yaş iki ile altı ay arasında yetişkin kadın Breed. Onlar deney bütünlüğü için tutarlı tutulur gibi belirli üreme saat sürece gerekli değildir. </li><li> Bir çiftleşme fiş varlığı ile gebelik onaylayın. Fiş ilk gün sonrası cinsel birleşme 0 (dpc0) olarak görülen hangi gün ve saat belirleyin. Basınç kayıt başlatırken belirli saat unutmayın. </li><li> Dpc8-13 üzerine ameliyatları gerçekleştirmek. Kesin DPC fare suşu bağlıdır. </li><li> Bir fare cerrahisi, pe önce hamile olup olmadığını belirlemek içinanestezi uygulanmadan önce bir görüntüleme sistemine bağlanmış bir 40 MHz lineer dizi probu ile karın rform ultrason görüntüleme. Bu gebelik kesesi görselleştirme sağlayacaktır. Bir ultrason sistemi mevcut değilse, fare ağırlığını kullanın. NOT: dpc0 ve dpc8 ve karın şişkinlik arasında en az 2 g kilo gebelik iyi bir göstergedir. </li></ol> 2. Telemetri Cerrahi Hazırlık <ol><li> Ameliyat öncesi 24 saat içinde aletleri, gazlı bez, pamuk bezlerden, cerrahi örtüler ve pipet uçları sterilize etmek için bir otoklav kullanın. </li><li> % 70 etanol ile temizleyin cerrahi yüzeyi. </li><li> (Kemirgenler için özel) ısıtma yastığı ve boncuk sterilizatör açın. </li></ol> 3. Telemetri Cerrahi <ol><li> Anestezi için 1-2 litre / dakika arasında bir oksijen akış hızı ile% 4-5 izofluran kullanın. </li><li> Fare anesthetization belirtileri gösterir kadar bekleyin ve ardından buprenorfinle subkutan enjekte (analjezik: 20 g başına 0.1 ml). </li><li> Mesane aşağı kaburgaların altından fare karın Tıraş. </li><li> Önceden ısıtılmış ısıtma yastığı ameliyat masasına fareyi getirin ve kurumasını önlemek için oftalmik merhem ile farenin gözleri kapsayacak. </li><li> Steril teknik başlayın. Steril eldiven giyin ve iyot ve etanol scrubs yerleştirmek için hangi steril bir yüzey olarak sarıcı tutun. </li><li> Paket veya tuzlu gelen telemeter çıkarın ve steril gazlı bez üzerine yerleştirmek için steril forseps kullanabilir. <ol><li> Jel ile kateter ucu doldurmak için (telemetre tedarikçi tarafından sağlanan) şırınga kullanın. Yavaşça kateter içine jel çizmek için yeterli negatif basınç yaratarak kateteri sıkmak. </li></ol></li><li> Pipet üzerinde steril bir ucu yerleştirin. Pipet 2 cerrahi tutkal ul ve steril bir yüzey üzerinde pipet ayarlayın. </li><li> Iyot ve daha sonra% 70 etanol ile bölgeyi çubukla, cerrahi siteyi temizlemek için. </li><li> Sadece yeterince büyük cerrahi drape bir delikfare üzerinde kesi ve yer gerekli alan için. </li><li> Fare tamamen bir kesi yapmadan önce anestezi sağlamak için bir ayak tutam (pedal tepkisi) gerçekleştirin. </li><li> Küçük bir dikey orta hat kesi olun. Sonraki, altta yatan vücut duvarı kas yoluyla benzer bir kesi yapmak. </li><li> Yavaşça vücut boşluğuna dışarı rahim çekin ve yaşayabilir En yavrular içeren uterin boynuz bulun. <ol><li> İsteğe bağlı - miRNA ilave edildiğinde, telemeter yerleştirilmesinden önce uterusun kas tabakası viral vektör enjekte edilir. </li></ol></li><li> 3 mm kenar yaylı makas kesim ile uterin boynuz ucunda küçük bir kesi yapmak. </li><li> Rahim duvarı ve fetal keseler arasında, sıkma yapmadan, kateter geçirin. Kazara kaldırılmasını azaltmak için çeşitli keseler geçmiş kateter yerleştirin. Fetal keseler ekleme rahatsız olmadığından emin olun. </li><li> U kateteri uymak için telemetre ekleme sitesine cerrahi tutkal PipetTerine boynuz uterin boynuz dışına kaymasını önlemek ve kateter. Sert olmak tutkal için birkaç saniye bekleyin ve sonra dikkatlice vücut boşluğunun içine rahim geri yerleştirin. </li><li> Kateter giriş yeri karşı tarafındaki vücut boşluğunda telemeter yerleştirin. </li><li> 6.0 emilebilir dikişlerle kapatılır vücut boşluğuna dikin. İlk olarak, bir çanta dikiş ve daha sonra 3-4 ayrı dikiş yapmak. </li><li> Aynı tekniği kullanarak cilt sütür, ancak 6-0 emilmeyen sütür ile. </li><li> Sürüntü dibukain (topikal analjezik) kesi sitesi üzerinden merhem. </li><li> Hayvan rehydrate yardımcı olmak için steril serum fizyolojik subkutan 0.3-0.4 ml enjekte edilir. </li><li> Tamamen uyanık olduğu kadar ameliyat sonrası hayvan izleyin. Serbestçe gibi yatak belirli türleri ağır anestezi fare boğmak olabilir yukarıdaki tabloya başını tutmak mümkün kadar geri kafes içinde fare koymayın. 30-45 dakika süre ile anestezi edilmiş bir fare, bir inci beklemek gerekirE fare 1 saat ve 15 dakika ile tamamen uyanık olmak. </li><li> Ek cerrahisine ise,% 70 etanol ve boncuk tekrar kullanmadan önce sterilize ile aletleri silin. </li></ol> 4. Post-cerrahi Kurtarma <ol><li> Bir günlüğüne günlük cerrahi sonrası ilerlemeyi izleyin. Kilo alımı ve kaybı Katalog ve uyuşukluk, kanama, veya cerrahi kesi eksik kapatılması izlemek. <ol><li> Fare yumuşatılmış fare yemi (~ elma tutarlılığı) veya özel kurtarma diyet gıda besleyin. </li><li> Sütür inceleyin ve onlar çıkardı olmadığından emin olun, ama aşırı fare işlemek için değil deneyin. </li></ol></li></ol> 5. Telemetri Kayıt <ol><li> (Fare cerrahiden iyileşen en az 2-3 gün sonra), ilgi gününde, telemeter açmak için fare yakın bir mıknatıs yerleştirin. Alıcı fare kafesi koyun. telemetre devreye sokulmuş ise alıcı ışık açılmalıdır. </li><li> Yepyeni Teleme kalibre<html> Üretici özel kalibrasyon ile ters sağladı. Yeniden kullanılan telemetre kalibrasyon özellikleri yazılım tutulacaktır. </li><li> Yazılım içinde, &quot;hayvan&quot; üzerine sağ tıklayarak kayıt başlatmak ve &quot;start örnekleme, sürekli,&quot; 500 Hz hızlarında örnekleme sağlar tıklayın. Yazılım kurtarmak VE izlemek için ayarlanmış olduğundan emin olun. NOT: Örnekleme fare simgesi yeşil yandığı zaman, baskılar kayıt altına alınmaktadır. Doğum sırasında fareyi rahatsız kesmek veya emek değiştirmek, böylece dikkatli gözlemleyebilirsiniz. </li><li> Ilgi teslim veya süre sonra, &quot;hayvan&quot; sağ tıklayarak kayıt ve &quot;tüm kayıtları durdurma&quot; seçerek dur. Telemetre pil genellikle sadece sürekli kayıt 1.5 ay sürecek gibi, pil ömründen tasarruf için telemetre kapatmak için bir mıknatıs kullanın. </li><li> CO 2 doz aşımı ile fare Euthanize ve telemetre kurtarmak. Yavrular dekapitasyon tarafından ötenazi. </li></ol>tle &quot;&gt; 6. Telemeter Sterilizasyon <ol><li> Oda sıcaklığında deiyonize su gece boyunca% 1 enzim deterjan çözeltisi içinde uzaktan ölçüm yerleştirin. </li><li> Deiyonize su içinde telemeter durulayın ve kateter sıkmak için dikkatli olmak, tüm doku ve tutkal çıkarın. </li><li> Sterilize etmek için, oda sıcaklığında 24 saat boyunca% 2 glutaraldehid uzaktan ölçüm inkübe edin. </li><li> Steril serum fizyolojik ile uzaktan ölçüm durulayın ve bir sonraki implantasyonu kadar steril serum fizyolojik içinde saklayın veya yenilenmiş geri üreticiye gönderilecek. Doku sterilizasyon sonrası kateter içinde yer alıyorsa telemeters yenilenmiş olmalıdır. Tipik telemeters yenilenmiş gerek önce 4-5 kez kullanılabilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Slattery, M. M., Morrison, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preterm+delivery.">Preterm delivery.</a> Lancet. 360, 1489-1497 (2002).</li><li>Goldenberg, R. L., Culhane, J. F., Iams, J. D., Romero, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+causes+of+preterm+birth.">Epidemiology and causes of preterm birth.</a> Lancet. 371, 75-84 (2008).</li><li>Keelan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+inhibition+of+inflammatory+pathways+for+the+prevention+of+preterm+birth.">Pharmacological inhibition of inflammatory pathways for the prevention of preterm birth.</a> Journal Of Reproductive Immunology. 88, 176-184 (2011).</li><li>Voltolini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+spontaneous+preterm+birth:+from+underlying+mechanisms+to+predictive+and+preventive+interventions.">Understanding spontaneous preterm birth: from underlying mechanisms to predictive and preventive interventions.</a> Reproductive Sciences. 20, 1274-1292 (2013).</li><li>Ratajczak, C. K., Muglia, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+parturition+biology+from+genetically+altered+mice.">Insights into parturition biology from genetically altered mice.</a> Pediatric research. 64, 581-589 (2008).</li><li>Rajakumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+HIF-1+alpha,+HIF-2+alpha,+membrane+and+soluble+VEGF+receptor-1+proteins+are+not+increased+in+normotensive+pregnancies+complicated+by+late-onset+intrauterine+growth+restriction.">Placental HIF-1 alpha, HIF-2 alpha, membrane and soluble VEGF receptor-1 proteins are not increased in normotensive pregnancies complicated by late-onset intrauterine growth restriction.</a> American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 293, (2007).</li><li>Whitesall, S. E., Hoff, J. B., Vollmer, A. P., D'Alecy, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+simultaneous+measurement+of+mouse+systolic+arterial+blood+pressure+by+radiotelemetry+and+tail-cuff+methods.+American+journal+of+physiology.">Comparison of simultaneous measurement of mouse systolic arterial blood pressure by radiotelemetry and tail-cuff methods. American journal of physiology.</a> Heart And Circulatory Physiology. 286, H2408-H2415 (2004).</li><li>Mackay, L. B., Shi, L. B., Maul, H. .., Maner, W. L., Garfield, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+bilateral+pelvic+neurectomy+on+cervical+ripening+in+pregnant+rats.">The effect of bilateral pelvic neurectomy on cervical ripening in pregnant rats.</a> Journal Of Perinatal Medicine. 37, 263-269 (2009).</li><li>Pierce, S. L., Kutschke, W., Cabeza, R., England, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+intrauterine+pressure+by+telemetry:+a+new+approach+for+studying+parturition+in+mouse+models.">In vivo measurement of intrauterine pressure by telemetry: a new approach for studying parturition in mouse models.</a> Physiol Genomics. 42, 310-316 (2010).</li><li>Imamura, T., Luedke, C. E., Vogt, S. K., Muglia, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+modulates+the+onset+of+murine+parturition+by+competing+ovarian+and+uterine+effects.">Oxytocin modulates the onset of murine parturition by competing ovarian and uterine effects.</a> American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 279, R1061-R1067 (2000).</li><li>McCloskey, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inwardly+rectifying+K++channel+KIR7.1+controls+uterine+excitability+throughout+pregnancy.">The inwardly rectifying K+ channel KIR7.1 controls uterine excitability throughout pregnancy.</a> EMBO Mol Med. 6 (9), 1161-1174 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Myometrial kontraktilitenin araştırmaları kas gerginliği ex vivo ölçümleri yararlanmıştır. Bu yöntem, canlı hayvan için uygulanabilir değildir, yeni geliştirilen uterotonik ilaçların erken evre test edilmesi için yararlı olabilir. Uzunlamasına emek ilerlemesini anlamak Bununla birlikte, in vivo yaklaşımlar gereklidir. in vivo ölçümler çeşitli amaçlara hizmet. Birincisi, gebelik süresi boyunca rahimde kasılma desen değişikliklerin tam bir resim yakalama etkinleş...

Erken doğum, perinatal morbidite ve gelişmiş ülkelerde mortalitenin önde gelen nedenidir; perinatal morbidite% 50 ve perinatal mortalite 1,2% 75 sorumludur. Erken doğum yönlü ve idiyopatik olabilir. Çok araştırma kasılma bir bir sakin dokudan myometrium dönüştüren moleküler ve elektrik yollar üzerinde ortaya çıkmıştır rağmen, erken doğum kesin patofizyolojisi zor kalır. Endokrin, inflamatuar ve gen regülasyonu tüm erken doğum 3,4 bağlantılı olmuştur. Ancak, etik kaygılar insanlarda erken doğum mekanizmaları araştırma yeteneğini sınırlayabilir. Bu sınırlamalar göz önüne alındığında, birçok araştırmacı doğum fizyolojisini incelemek için bir model sistem olarak farelere döndü. Fareler kısa gebelikler yaklaşık üç hafta süren ve kolayca genetik manipüle edilebilir var. Ayrıca, çoklu genetik fare modelleri varemek 5 için gerekli olan sinyal yolları belirlemek için geliştirilmiştir. Fare ve insan doğum arasındaki temel farklılıklara rağmen, fareler ve insanlar intrauterin inflamasyon ve enfeksiyon 6 olmak üzere emek için gerekli olan aynı mekanizmaların, birçok paylaşıyoruz. Böylece, fareler rahim aktivitesini incelemek için paha biçilmez bir araç olarak hizmet vermektedir. Bugüne kadar, altın standart farelerde rahim kasılmasını ölçmek için ex vivo izometrik gerilim kayıtları olmuştur; Bununla birlikte, bu deney için bir gebelik zaman noktası ile sınırlıdır ve fizyolojik ortamından rahim çıkarılması gerekir. Bir diğer önemli faktör için bu araştırmalar için gerekli hayvan büyük bir sayıdır. Son olarak, bu yöntem emek ve erken patofizyoloji indüksiyon inceleyen uzunlamasına çalışmalar için izin vermez. Arter basıncı incelemek için kullanılan radyometrik telemetri cihazları yapılan son gelişmeler farelerde ve int 7 değiştirirsıçanlarda 8 rauterine basınç aynı teknoloji gebelik sırasında farelerde intrauterin basınç değişiklikleri incelemek için kullanılan olabilir olup olmadığı sorusunu yalvardı. İlk sorun giderme sonra, bir yöntemi başarıyla fare işgücü uyarma ve ilerlemesini ölçmek için geliştirilmiştir. Bu in vivo yaklaşımı güçlü çalışma kasılmaları gösterge yüksek basınç durumuna hareketsiz rahim düşük basınçlı durumdan geçiş ölçebilir. Bu yöntem aynı zamanda gen ifadesinin 9 fizyolojik etkisini gösteren, tehlikeye doğum ve vahşi tip fareler ile transgenik fareler arasında önemli basınç farkları tespit etmek mümkün olmuştur. Bu protokol, hamilelik sırasında fare uterus basıncı çalışma in vivo metodunda, bir gerçek zaman sağlar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="702">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:105px;">Company</td>
			<td style="width:147px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:207px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Surgical Glue</td>
			<td style="width:105px;">3M Vetbond</td>
			<td style="width:147px;">1469SB</td>
			<td>Tissue Adhesive--stored in Drierite</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Absorbable 6-0 Sutures</td>
			<td style="width:105px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">J212H</td>
			<td>Vicryl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Non-absorbable 6-0 Sutures</td>
			<td style="width:105px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">8706H</td>
			<td>Prolene</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Water Jacket Blanket + Heating Pad</td>
			<td style="width:105px;">Gaymer</td>
			<td style="width:147px;">T/Pump PN 11184-000 Blanket-66N111CC</td>
			<td>Specialized for rodents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Bead sterilizer</td>
			<td style="width:105px;">Keller</td>
			<td style="width:147px;">Z378577</td>
			<td>Steri 250 Sterilizer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Disecting Microscope</td>
			<td style="width:105px;">Nikon</td>
			<td style="width:147px;">SMZ754</td>
			<td>Fibre optic gooseneck external light source</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:245px;">Sterile Surgical Gloves--Latex&#160;</td>
			<td style="width:105px;">Cardinal Health Triflex</td>
			<td style="width:147px;">2D7253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">PhysioTel PA-C10 Pressure Transmitter</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">270-0135-001</td>
			<td style="width:207px;">TA11PA-C10</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Telemeter Reciever</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">272-6001-001</td>
			<td style="width:207px;">RPC-1</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Dataquest ART 4.3.2 Analysis Platinum</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">271-0147-141</td>
			<td>Analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Diet Recovery Gel</td>
			<td style="width:105px;">Clear H2O</td>
			<td style="width:147px;">72-01-5022</td>
			<td>Purified Soft Diet for Rodents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Tergazyme</td>
			<td style="width:105px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z273287</td>
			<td>Enzyme detergent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intrauterine telemetry to measure mouse contractile pressure in vivo

Moleküler ve elektrik sinyallerinin karmaşık bir entegrasyon gebeliğin sonunda bir kasılma organı içine sakin rahim dönüştürmek için gereklidir. Uterin kontraktilitenin anahtar regülatörleri bulunmuş olmasına rağmen, bu işlem hala tam olarak anlaşılmamıştır. Transgenik farelerin doğumu incelemek için ideal bir model sunmaktadır. Daha önce, fare uterus kasılmalarını incelemek için tek yöntem çeşitli nedenlerden dolayı optimal ex vivo izometrik gerilim kayıtları, oldu. rahim fizyolojik ortamından çıkarılması gerekir, soruşturmanın sınırlı bir zaman ders mümkündür, ve fareler kurban gerekir. radyometrik telemetri son gelişme farelerde in vivo uterus içi basınç uzunlamasına, gerçek zamanlı ölçümleri için izin vermektedir. Teslimat açıklanan kadar burada, intrauterin telemeter implantasyonu orta gebelik fare rahim basınç değişiklikleri ölçmek için. Basında karşılaştırarak farklılıklar tarafındanyabani tipteki ve transjenik fareleri arasındaki ures, ilgi konusu genin bir fizyolojik etki açıklanacaktır edilebilir. Bu teknik erken doğum gibi hamilelik sırasında miyometrial bozuklukların tedavisinde kullanılan tedavilerin gelişimini hızlandırmak gerekir.

In vivo intrauterin basınçları Gerçek zamanlı bir telemetrik kazanım sistemi kullanılarak kaydedilebilir. Fare eş zamanlı video kaydı ile eşleştirilmiş Basınç örnekleme her yavrunun doğum tam zamanı yakalamak ve annenin rahim içi basıncı teslim süresi ilişkilendirmek için kullanıldı. Tüm veri noktaları daha sonra bir basınç zamana karşı komplo (Şekil 1A) oluşturmak için kayıt boyunca çizilebilir. Bu arsa gebelik sırasında puan gösterdiğinde intr...

Watch this Scientific Journal Video about Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo at JoVE.com

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

Rahim içi Telemetri Fare Kontraktil Basıncını Ölçmek<em&gt; İn Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

intrauterine-telemetry-to-measure-mouse-contractile-pressure-in-vivo

Research

JoVE Journal

Medicine

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

9.6K Görüntüleme.  Washington University in St. Louis. This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy. 

Video: Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged mechanical ventilation, contributes to morbidity and mortality of critical illness, and studies on novel genetic or pharmacological targets are areas of intense investigation (1-3, 5, 8, 26, 30, 33-36). ALI is defined by the acute onset of the disease, which leads to non-cardiac pulmonary edema and subsequent impairment of pulmonary gas exchange (36). We have developed a murine model of ALI by using a pressure-controlled ventilation to induce ventilator-induced lung injury (2). For this purpose, C57BL/6 mice are anesthetized and a tracheotomy is performed followed by induction of ALI via mechanical ventilation. Mice are ventilated in a pressure-controlled setting with an inspiratory peak pressure of 45 mbar over 1 - 3 hours. As outcome parameters, pulmonary edema (wet-to-dry ratio), bronchoalveolar fluid albumin content, bronchoalveolar fluid and pulmonary tissue myeloperoxidase content and pulmonary gas exchange are assessed (2). Using this technique we could show that it sufficiently induces acute lung inflammation and can distinguish between different treatment groups or genotypes (1-3, 5). Therefore this technique may be helpful for researchers who pursue molecular mechanisms involved in ALI using a genetic approach in mice with gene-targeted deletion.

A murine model for ventilator induced lung injury is an important tool to study an acute lung injury in vivo. Here, we report an easy applicable in situ model for acute lung injury using high-pressure mechanical ventilation to induce acute failure of the lung.

Farelerde Akut Akciğer Hasarı tetikleyebilecek Basınç Kontrollü Havalandırma

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

Tıp

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly hydrated, forming a substantial endothelial surface layer (ESL) that contributes to the maintenance of endothelial function. As the endothelial glycocalyx is often aberrant in vitro and is lost during standard tissue fixation techniques, study of the ESL requires use of intravital microscopy. To best approximate the complex physiology of the alveolar microvasculature, pulmonary intravital imaging is ideally performed on a freely-moving lung. These preparations, however, typically suffer from extensive motion artifact. We demonstrate how closed-chest intravital microscopy of a freely-moving mouse lung can be used to measure glycocalyx integrity via ESL exclusion of fluorescently-labeled high molecular weight dextrans from the endothelial surface. This non-recovery surgical technique, which requires simultaneous brightfield and fluorescent imaging of the mouse lung, allows for longitudinal observation of the subpleural microvasculature without evidence of inducing confounding lung injury.

In vivo Measurement of the Mouse Pulmonary Endothelial Surface Layer

The endothelial glycocalyx/endothelial surface layer is ideally studied using intravital microscopy. Intravital microscopy is technically challenging in a moving organ such as the lung. We demonstrate how simultaneous brightfield and fluorescent microscopy may be used to estimate endothelial surface layer thickness in a freely-moving in vivo mouse lung.

Fare Pulmoner Endotelyal Yüzey Katman in vivo ölçümü olarak

The endothelial glycocalyx is a layer of proteoglycans and associated glycosaminoglycans lining the vascular lumen. In vivo, the glycocalyx is highly ...

Fetal Echocardiography and Pulsed-wave Doppler Ultrasound in a Rabbit Model of Intrauterine Growth Restriction

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ultrasound and fetal echocardiography. Increasingly, these imaging modalities are being employed clinically to examine cardiac function and assess wellbeing in utero, thereby guiding timing of birth decisions. Here, we used a rabbit model of IUGR that allows analysis of cardiac function in a clinically relevant way. Using isoflurane induced anesthesia, IUGR is surgically created at gestational age day 25 by performing a laparotomy, exposing the bicornuate uterus and then ligating 40-50% of uteroplacental vessels supplying each gestational sac in a single uterine horn. The other horn in the rabbit bicornuate uterus serves as internal control fetuses. Then, after recovery at gestational age day 30 (full term), the same rabbit undergoes examination of fetal cardiac function. Anesthesia is induced with ketamine and xylazine intramuscularly, then maintained by a continuous intravenous infusion of ketamine and xylazine to minimize iatrogenic effects on fetal cardiac function. A repeat laparotomy is performed to expose each gestational sac and a microultrasound examination (VisualSonics VEVO 2100) of fetal cardiac function is performed. Placental insufficiency is evident by a raised pulsatility index or an absent or reversed end diastolic flow of the umbilical artery Doppler waveform. The ductus venosus and middle cerebral artery Doppler is then examined. Fetal echocardiography is performed by recording B mode, M mode and flow velocity waveforms in lateral and apical views. Offline calculations determine standard M-mode cardiac variables, tricuspid and mitral annular plane systolic excursion, speckle tracking and strain analysis, modified myocardial performance index and vascular flow velocity waveforms of interest. This small animal model of IUGR therefore affords examination of in utero cardiac function that is consistent with current clinical practice and is therefore useful in a translational research setting.

We describe examination of fetal cardiac function with contemporary functional fetal echocardiography and fetoplacental Doppler ultrasound using the VisualSonics VEVO 2100 microultrasound in a surgically induced model of intrauterine fetal growth restriction in a rabbit.

Rahim içi Büyüme Kısıtlama bir Tavşan Modelinde Fetal Ekokardiyografi ve Pulsed-wave Doppler Ultrason

Fetal intrauterine growth restriction (IUGR) results in abnormal cardiac function that is apparent antenatally due to advances in fetoplacental Doppler ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. Here, we describe a general protocol for cell labeling, imaging, and image processing. The technique is applicable to various cell types and animal models, although here we focus on a typical mouse model for tracking murine immune cells. The most important issues for cell labeling are described, as these are relevant to all models. Similarly, key imaging parameters are listed, although the details will vary depending on the MRI system and the individual setup. Finally, we include an image processing protocol for quantification. Variations for this, and other parts of the protocol, are assessed in the Discussion section. Based on the detailed procedure described here, the user will need to adapt the protocol for each specific cell type, cell label, animal model, and imaging setup. Note that the protocol can also be adapted for human use, as long as clinical restrictions are met.

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

We describe a general protocol for in vivo cell tracking using MRI in a mouse model with ex vivo labeled cells. A typical protocol for cell labeling, image acquisition processing and quantification is included.

Hücre Takip için vivo 19 F MRG

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Accuracy in Dental Medicine, A New Way to Measure Trueness and Precision

Reference scanners are used in dental medicine to verify a lot of procedures. The main interest is to verify impression methods as they serve as a base for dental restorations. The current limitation of many reference scanners is the lack of accuracy scanning large objects like full dental arches, or the limited possibility to assess detailed tooth surfaces. A new reference scanner, based on focus variation scanning technique, was evaluated with regards to highest local and general accuracy. A specific scanning protocol was tested to scan original tooth surface from dental impressions. Also, different model materials were verified. The results showed a high scanning accuracy of the reference scanner with a mean deviation of 5.3 &#177; 1.1 &#181;m for trueness and 1.6 &#177; 0.6 &#181;m for precision in case of full arch scans. Current dental impression methods showed much higher deviations (trueness: 20.4 &#177; 2.2 &#181;m, precision: 12.5 &#177; 2.5 &#181;m) than the internal scanning accuracy of the reference scanner. Smaller objects like single tooth surface can be scanned with an even higher accuracy, enabling the system to assess erosive and abrasive tooth surface loss. The reference scanner can be used to measure differences for a lot of dental research fields. The different magnification levels combined with a high local and general accuracy can be used to assess changes of single teeth or restorations up to full arch changes.

Accuracy is a major demand in dental medicine. To verify accuracy, reference scanners are needed. This article presents a new reference scanner with an adjusted scanning method to acquire a broad variety of dental morphologies with high trueness and precision.

Gerçeklik ve kesinlik Tedbir Diş Hekimliği, A New Way Doğruluk

Reference scanners are used in dental medicine to verify a lot of procedures. The main interest is to verify impression methods as they serve as a base ...

Measurement of the Pressure-volume Curve in Mouse Lungs

In recent decades the mouse has become the primary animal model of a variety of lung diseases. In models of emphysema or fibrosis, the essential phenotypic changes are best assessed by measurement of the changes in lung elasticity. To best understand specific mechanisms underlying such pathologies in mice, it is essential to make functional measurements that can reflect the developing pathology. Although there are many ways to measure elasticity, the classical method is that of the total lung pressure-volume (PV) curve done over the whole range of lung volumes. This measurement has been made on adult lungs from nearly all mammalian species dating back almost 100 years, and such PV curves also played a major role in the discovery and understanding of the function of pulmonary surfactant in fetal lung development. Unfortunately, such total PV curves have not been widely reported in the mouse, despite the fact that they can provide useful information on the macroscopic effects of structural changes in the lung. Although partial PV curves measuring just the changes in lung volume are sometimes reported, without a measure of absolute volume, the nonlinear nature of the total PV curve makes these partial ones very difficult to interpret. In the present study, we describe a standardized way to measure the total PV curve. We have then tested the ability of these curves to detect changes in mouse lung structure in two common lung pathologies, emphysema and fibrosis. Results showed significant changes in several variables consistent with expected structural changes with these pathologies. This measurement of the lung PV curve in mice thus provides a straightforward means to monitor the progression of the pathophysiologic changes over time and the potential effect of therapeutic procedures.

Here we present a protocol to simply and reliably measure the lung pressure-volume curve in mice, showing that it is sufficiently sensitive to detect phenotypic parenchymal changes in two common lung pathologies, pulmonary fibrosis and emphysema. This metric provides a means to quantify the lung&#8217;s structural changes with developing pathology.

Fare Akciğerler Basınç-hacim Eğrisi Ölçümü

In recent decades the mouse has become the primary animal model of a variety of lung diseases. In models of emphysema or fibrosis, the essential ...

Trabecular Meshwork Response to Pressure Elevation in the Living Human Eye

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale behind this technique is the direct observation of the mechanical response of the TM to acute IOP elevation. Prior to scanning, IOP is measured at baseline and during IOP elevation. The limbus is scanned by spectral-domain optical coherence tomography at baseline and during IOP elevation (ophthalmodynamometer (ODM) applied at 30 g force). Scans are processed to enhance visualization of the aqueous humor outflow pathway using ImageJ. Vascular landmarks are used to identify corresponding locations in baseline and IOP elevation scan volumes. Schlemm canal (SC) cross-sectional area (SC-CSA) and SC length from anterior to posterior along its long axis are measured manually at 10 locations within a 1 mm segment of SC. Mean inner to outer wall distance (short axis length) is calculated as the area of SC divided by its long axis length. To examine the contribution of adjacent tissues to the effect IOP elevations, measurements are repeated without and with smooth muscle relaxation with instillation of tropicamide. TM migration into SC is resisted by TM stiffness, but is enhanced by the support of its attachment to adjacent smooth muscle within the ciliary body. This technique is the first to measure the living human TM response to pressure elevation in situ under physiological conditions within the human eye.

Trabecular meshwork (TM) migration into Schlemm&#8217;s canal space can be induced by acute pressure elevation by ophthalmodynamometer, and observed by spectral domain optical coherence tomography. The goal of this method is to quantify the morphometric response of the living outflow tract to acute pressure elevation in living tissues in situ.

Yaşayan İnsan Eye Basınç Artışı trabeküler Tepki

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale ...

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these strategies is to examine their effects on heart function. There are several techniques to measure in vivo cardiac mechanics (e.g., echocardiography, pressure/volume relations, etc.). Compared to echocardiography, real-time left ventricular (LV) pressure/volume analysis via catheterization is more precise and insightful in assessing LV function. Additionally, LV pressure/volume analysis provides the ability to instantaneously record changes during manipulations of contractility (e.g., &#946;-adrenergic stimulation) and pathological insults (e.g., ischemia/reperfusion injury). In addition to the maximum (+dP/dt) and minimum (-dP/dt) rate of pressure change in the LV, an accurate assessment of LV function via several load-independent indexes (e.g., end systolic pressure volume relationship and preload recruitable stroke work) can be attained. Heart rate has a significant effect on LV contractility such that an increase in the heart rate is the primary mechanism to increase cardiac output (i.e., Bowditch effect). Thus, when comparing hemodynamics between experimental groups, it is necessary to have similar heart rates. Furthermore, a hallmark of many cardiomyopathy models is a decrease in contractile reserve (i.e., decreased Bowditch effect). Consequently, vital information can be obtained by determining the effects of increasing heart rate on contractility. Our and others data has demonstrated that the neuronal nitric oxide synthase (NOS1) knockout mouse has decreased contractility. Here we describe the procedure of measuring LV pressure/volume with increasing heart rates using the NOS1 knockout mouse model.

This article describes the measurement of murine left ventricular function via pressure/volume analysis at different heart rates.

Bowditch Efekt incelenmesi: Basınç Hacim İlişkisi Tedbir Fare Kardiyak Kateterizasyon

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

Long-term Blood Pressure Measurement in Freely Moving Mice Using Telemetry

During the development of new vasoactive agents, arterial blood pressure monitoring is crucial for evaluating the efficacy of the new proposed drugs. Indeed, research focusing on the discovery of new potential therapeutic targets using genetically altered mice requires a reliable, long-term assessment of the systemic arterial pressure variation. Currently, the gold standard for obtaining long-term measurements of blood pressure in ambulatory mice uses implantable radio-transmitters, which require&#160;artery cannulation. This technique eliminates the need for tethering, restraining, or anesthetizing the animals which introduce stress and artifacts during data sampling. However, arterial blood pressure monitoring in mice via catheterization can be rather challenging due to the small size of the arteries. Here we present a step-by-step guide to illustrate the crucial key passages for a successful subcutaneous implantation of radio-transmitters and carotid artery cannulation in mice. We also include examples of long-term blood pressure activity taken from freely moving mice after a period of post-surgery recovery. Following this procedure will allow reliable direct blood pressure recordings from multiple animals simultaneously.

The goal of this protocol is to assess systemic blood pressure in conscious freely moving mice using implantable radio-telemetry devices.

Telemetri kullanarak Serbestçe Hareketli Fare Uzun süreli Tansiyon Ölçümü

During the development of new vasoactive agents, arterial blood pressure monitoring is crucial for evaluating the efficacy of the new proposed drugs. ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

İnsan Tümör ksenogratflarının gelen Fare Hücrelerinin tükenmesi Anlamlı Hedef Hücre Alt Analizi geliştirir

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...