Canlı Hücrelerde Endoplazmik Retikulum-Mitokondri Temaslarını Ölçmek için Split-Luciferase Yeniden Birleştirme Testi

Laboratuvarımda, bir tür membran teması alan interorganal iletişimi ve hücresel sağlığın korunmasında ve hastalık patogenezindeki rollerini inceliyoruz. Özellikle mitokondri ve endoplazmik retikulum arasındaki zar temaslarıyla ilgileniyoruz ve bunların nasıl düzenlendiğini ve düzensizliklerinin nasıl nörodejenerasyona yol açabileceğini anlamaya çalışıyoruz. ER mitokondri temaslarının hücre sağlığı için önemli olduğunu ve düzensizliklerinin birçok hastalıkla ilişkili olduğunu bilmemize rağmen, seviyelerinin nasıl düzenlendiği hakkında fazla bir şey bilmiyoruz.

Bunu ele almanın ilk adımı, hücrelerdeki ER mitokondri temaslarının seviyesini ölçmek için basit ve güvenilir bir protokol oluşturmaktır. Bölünmüş lusiferaz testimiz, çoğu teste kıyasla canlı hücrelerdeki ER mitokondri temaslarını ölçmek için daha kolay ve daha hızlı bir yol sunar. Renilla lusiferazın iki bölünmüş yarısından yararlanıyoruz, bir yarısı ER'ye ve diğer yarısı mitokondriye yöneliktir.

Sadece ER ve mitokondri zarlarının yakın temasa sahip olduğu yerlerde yeniden birleştirilebilirler, bu da tam bir enzim aktivitesi ile sulandırılmış lusiferaz ile sonuçlanır. Bu yöntem basittir, yüksek verimli taramalar için uygundur ve birçok laboratuvar için kolayca erişilebilirdir. Terapötik ajanlara daha da geliştirilebilecek ER mitokondri temaslarının moleküler ve genetik modülatörlerini tanımlayarak nörodejeneratif hastalık alanını ilerleteceğini umuyoruz.

Sonuçlarımız, farklı ilaçların veya ilaç kombinasyonlarının ER mitokondri temaslarını nasıl etkilediği ve bu temasların arkasındaki önemli moleküler oyuncuların neler olduğu gibi önemli soruların önünü açmıştır. Bu sorulardan, ER mitokondri temaslarının mekanizmasını daha iyi anlayabilir ve ilgili hastalıklarla mücadele etmenin yollarını bulabiliriz.