Murin Oküler ve Non-Oküler Dokularda Diyetle Alınan Vitamin A Metabolitlerinin Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi Kullanılarak Kantitatif Analizi

Laboratuvarımız iki kritik A vitamini taşıyıcısı olan STRA6 ve Rbpr2'yi araştırıyor. Bu zar proteinleri, kandaki A vitamininin göz ve karaciğer gibi dokulara alımını kolaylaştırır. HPLC sayesinde, transgenik farelerde sistemik bir A vitamini profili oluşturarak bu taşıyıcıların fizyolojik fonksiyonlarını araştırabiliriz.

Alanımızda kullanılan bir diğer teknik, bir proteinin kendi beğenisine göre bağlanma afinitelerini ve kinetiğini inceleyen Yüzey Plazmon Rezonansı, SPR'dir ve RBP4 retinol bağlanma kompleksi olan STRA6 veya Rbpr2 arasındaki bağlanmayı araştırmak için SPR uyguladık. Bu yöntemin mevcut zorluklarından biri numune verimidir. Solvent buharlaştırma adımı, bu protokol içinde önemli bir darboğazdır ve gelecekteki araştırmacılar, vakumlu buharlaştırmaya kıyasla çok daha yüksek bir verime sahip olan nitrojen üfleme buharlaştırma gibi kurutma yöntemlerini denemelidir.

Rbpr2'nin karaciğerdeki fonksiyonu ile sistemik A vitamini homeostazının sürdürülmesinde önemli bir kolaylaştırıcı olarak rolünü belirledik. Transgenik farelerde Rbpr2 ekspresyonunun bozulması, HPLC ile ölçülen tüm incelenen sistemik dokularda A vitamini seviyelerinde önemli bir bozulmaya yol açmıştır. HPLC bazlı A vitamini tespitindeki diğer protokollerin çoğu, ters yüz yöntemlerini kullanır ve tipik olarak retinoid izomerlerinin ayrı ayrı çözülmesine izin vermez.

Normal yüz protokolümüz, hem retinaldehit hem de retinal izomerlerin çözünürlüğüne izin vererek, fototransdüksiyon kaskadında A vitamini fotoizomerizasyonunun önemi göz önüne alındığında kritik olan ayrıntılı bir A vitamini profili oluşturmamıza olanak tanır.