Emily A. Kara kafa plaka tasarımı için teşekkür ederim. NIH ödül HAG destek için minnettarız: PO1 MH64570, RO1 MH56838, RO1 MH078989, R21 MH03851 ve bu işi mümkün olmazdı onsuz Geoffrey Waasdorp Pediatrik Nöroloji Fonu cömert desteği. AKM Ulusal Sağlık Enstitüsü, (EY019277), Whitehall Vakfı, Alfred P. Sloan Vakfı ve Kariyer Ödülü Burroughs Wellcome Fonu Biyomedikal Bilimler tarafından finanse edilmektedir. MET Viyana de la recherche tr Sante du Quebec (FRSQ) doktora sonrası eğitim ödülü tarafından finanse edilmektedir. DFM NIH, T32 GM07356 ve T32 AI049815 tarafından finanse Tıp Bilim Adamı Yetiştirme Programı, bir stajyer.

1. Hayvan Görüntüleme için hazırlanması <ol><li> Deneylerde, biz ifade GFP. Mikroglia dahil olmak üzere mononükleer hücre soyları, farelerin 4 Farklı suşlar belirli bir proje ihtiyaçlarını karşılamak için kullanılabilir olması yetişkin CX 3 CR 1 GFP / + fareler kullanın. </li><li> Hayvan artık ağrılı uyaranlara yanıt verir sonra intraperitoneal enjeksiyonu ile 0.05 mg / kg fentanil, 5.0 mg / kg midazolam ve 0.5 mg / kg Medetomidine oluşan üç ilaç kokteyli fare anestezisi. TSCW için 5 Cerrahi hazırlık başlar gibi kuyruk tutam. Cerrahi ve görüntüleme boyunca, anestezi sonrası hipotermi önlemek için ısıtma pedi üzerinde hayvan tutun. Gerekirse, üçte biri bir rapel doz anestezik kokteyl orijinal dozunun orijinal anestezi uçağı geri yüklemek için verilen olabilir. </li><li> Anestezi sırasında gözleri nemli tutmak için koruyucu bir oftalmik merhem Kapak hayvanın gözleri, hayvanın göz kırpma refleksi bastırır. Bir jilet kullanarak hayvanın derisi saç, makaslar, makas, ya da kimyasal yöntemlerle çıkarın. % 10 povidon-iyot çözeltisi ve% 70 etanol ile saçlı deri dezenfekte edin. Tüm cerrahi aletler, cam boncuk sterilizatör, veya% 70 etanol ile dezenfekte ile sterilize otoklava gerekir. </li><li> , Küçük bir makas kullanarak kafa derisi kafatasına kaudal 4-5 mm başlangıç ​​ve ileri gözleri önünde ilerleyen bir orta hat kesi olun. Bu kesi cilt sırasında fare kafası iki foton görüntüleme (Şekil 1) stabilize etmek için kullanılır kafa plaka yapıştırma engel olmaz yeterince uzun olması önemlidir. Diseksiyon kapsamında inceltilerek alan tanımlayın. Kafatası bu alanlarda daha az istikrarlı ve büyük damarların ve meninks altta yatan görüntüleme ile engel olacak şekilde, doğrudan kraniyal sütür üzerinde bulunan ilgi alanları kaçının. </li><li> Kafatasının üst membranlar kuru ve ince cımbız ya da jilet kullanarak ellerinden kazımak için steril bir pamuklu bir bez ile ferrik klorür% 10 çözüm% 100 etanol uygulayın. Kararsız kafası plaka eki zarların sonuçları kaldırmak için başarısız. </li><li> Permabond 910 yapıştırıcı kafa plaka altında izleme penceresinin kenarlarında ince bir tabaka yerleştirin. Yapıştırıcı ile kaplanmış hafif bir basınç (Şekil 1) Hayvanın kafatası ilgi alanı içinde kafa plaka koyun. Kafa plaka sadece kafatasının kemik yapıştırılmış olduğu önemlidir. Kafa plaka ve kafatası arasında sıkışmış herhangi bir deri ya da membranlar bağ istikrar azalacaktır. Akrilat anında bir şırınga bağ tutkal kullanarak görüntüleme penceresi etrafında küçük bir miktar uygulayın. Son olarak, Loctite 454 görüntüleme pencere kenarlarına sızıntılarını önlemek için küçük bir miktar uygulanır. </li><li> (Şekil 1) hayvan sahibinin baş plaka Vida ve forseps bir çift ile hafifçe problama bir diseksiyon kapsamında başkanı plaka stabilite kontrol. Kafa plakasına göre kafatası hiçbir hareket olmamalıdır. Herhangi bir sızıntı olmadığından emin olmak için izleme penceresi üzerine bir damla serum fizyolojik yerleştirin. </li></ol> 2. İnceltilen Kafatası Kortikal Pencere hazırlanması <ol><li> Kafatası inceltme için hazırlık kafatası, steril pamuklu ve basınçlı hava bir arada kullanarak kurutun. 4000 rpm&#39;de Microtorque II matkap steril bir IRF 007 matkap ucu ile kafatası Biz başlangıçta ince. Çok nazik, kafatasının 2-2.5 mm çaplı dairesel alanda incelme başlar. , Kafatasının hemen hemen paralel, sadece hafif süpürme hareketleri kullanın; hiçbir doğrudan aşağı yönlü baskı kullanabilirsiniz. Basınçlı hava kullanarak kemik tozu kaldırmak için her 20-30 saniyede bir delme işlemini durdurun. Bu sondaj tatili, altta yatan bir beyin dokusu ısıya bağlı hasar var kafatası soğumasını bekleyin. <ol class="lalpha"><li> Delme ilerledikçe, nemli süngerimsi kemik tabaka (yani &quot;diploe&quot;) geçiş dikkat edin. Bu katman ulaşıldığında, matkap ekstra dikkatli. </li></ol></li><li> Bazen inceltilmiş alana tuzlu yerleştirerek ve diseksiyon kapsamında izleme kafatası inceliği kontrol edin. Tuzlu daha fazla ısı dağılımı sağlayacaktır. Kafatası inceltilmiş olduğu gibi, küçük damarsal görünür hale gelir. </li><li> MicroBlade kafatası istikrar konusunda daha çok dokunsal geribildirim sağlar, tuzlu su altında final incelme elde etmek için steril bir diş MicroBlade kullanın. Bu sadece matkap ile çok daha ince hazırlıkları için sağlar. Deneyimlerimizi, optimal kafatası kalınlığı 10-30 mikron. <ol class="lalpha"><li> Epifloresans birden çok kez altında ince bir kafatası penceresi ilk birkaç girişimleri sırasında kafatasının inceliği kontrol etmek için önemlidir. Görünür mikroglia ve damarsal netlik ve derinlik pencere görüntüleme için hazır olduğunda iyi bir gösterge verir. </li></ol></li><li> Sonra pencere tutkal # 0 coverglass wi ısmarlama bir dikdörtgen parça hazırdır<html> Pencerenin üzerinde her iki tarafta en az 2 mm boyut th. 1.0 mm çaplı cam pipet kullanarak, siyanoakrilat yapıştırıcı inceltilmiş kafatası alan üzerine küçük bir damla koyun ve küçük bir parça aşağı lamel dikkatlice düşük, daha sonra aşırı miktarda tutkal sıkmak kafatası karşı hafifçe bastırın. Optik opak hale altında hapsolmuş hava alanı yol açacağından cam ve tutkal arasında kabarcık oluşumunu önlemek için önemlidir. Ne zaman kuru saydam kalır ve aynı zamanda kemik ve kafatası ince ve saydam pencerenin altında tutmak membran regrowth engeller çünkü siyanoakrilat yapıştırıcı kullanılır. Kapak cam üstünde herhangi bir yapıştırıcı varsa, kapağı cam ve tutkal kuruduktan sonra dikkatlice kaldırmak için MicroBlade kullanın. </li><li> Bir analjezik (örneğin, Buprenorfin 2 mg / kg alt-kutanöz), kilo kaybı, salivasyon, piloerection, solunum sesleri, hareket yemek veya içmek için isteksizlik dahil olmak üzere, ameliyat sonrası hemen idare ve yeniden uygulandığında ağrı herhangi bir işaret vs. </li></ol> 3. İki foton Görüntüleme <ol><li> Iki foton görüntüleme için hazırlık olarak, tuzlu su ile TSCW kapak ve Epifloresans altında ilgi alanı (Şekil 2) bulun. Sonraki görüntü alanı sağlamak için, fotoğrafik bir kamerayı kullanarak bir resim çekmek. </li><li> Sapphire lazer 920 nm ayarlı iki foton görüntüleme için, bir Ti ile ısmarlama iki foton mikroskop 6 kullanın. Floresans tüm alan algılama modu ve 580/180 emisyon filtresi photomultiplier tüp kullanılarak tespit edilir. A 20X su daldırma lens (0.95 NA) görüntüleme oturum boyunca kullanılır. 50 ve 65 mW arasında maksimum çıkış amacı lazer güç ayarlanır. </li><li> Kortikal tabakalar halinde, ilgi alanı I veya II (pial yüzeyinin altında 150 mikron kadar). Yeniden görüntüleme kolaylaştırmak için 1X, 2X, aynı alanda fotoğraflarını çekmek ve 3X dijital zoom. Kan damarları, aynı alanda kolayca sonraki görüntüleme oturumları sırasında bulmak için nirengi noktaları gibi hizmet edebilir. 80-90 ile bir zoom 3X, çoklu z yığınları altında Z-her yığını ve 0.69 mikron adım adımları (mikrogliyal morfoloji ve davranış zamanla iyi bir örnekleme sağlayan 30 dakika için her 5 dakikada elde edilebilir Şekil 3). Z yığınlarının satın almalar arasında, bir TSCW üzerine tuzlu su seviyesi, yanı sıra hayvan anestezi derinliği doğrulamanız gerekir. </li></ol> 4. HIV-1 nörotoksin, Tat enjeksiyon <ol><li> Birincisi, 35 gauge iğne ve Tat birikmesini önlemek için 10 mcL Microvolume şırınga iç astar silanize. Silanizing solüsyonu (Sigmacote) hem iğne ve şırınga doldurana kadar çekin. Oda sıcaklığında 5 dakika oturup çözüm izin verin. Boş şırınga çözüm, piston kaldırmak ve şırınga ve iğne tamamen kurumasını bekleyin. Son olarak, deiyonize su ile iyice şırınga ve iğne yıkayın. </li><li> Çapı da daha küçük bir matkap ucu kullanarak 3 mm rostral veya iki foton görüntüler elde edilmiştir TSCW lateral yapın ve küçük bir kraniotomi 0,5 mm, keskin uçları ile forseps bir çift dikkatle kadar kafatası inceltme inceltilmiş katman kaldırabilirsiniz. kolayca kemik. Biz, 3-eksenli mikromanipülatör ve kraniotomi iğne ucu kadar astar sonra monte bir Ultramicropump III şırınga pompası tarafından kontrol edilen 35 gauge iğne ile donatılmış 10 mcL Microvolume şırınga kullanımı, altında 900 mm ile 700 derinliğe kadar dikkatli bir şekilde gelişmiş. pial yüzey 3 mcL Tat 1-72 (veya diğer pro-inflamatuar ilaçlar) ya da tuzlu su (veya kontrol aracı) 80 nL / dak teslim edilir. </li></ol> 5. Hayvan Barınakları <ol><li> Hayvan, tek bir gün içinde birden çok kez görüntülenmiş ise, oftalmik merhem ve görüntüleme oturumları arasında rahatsızlık veya kafatası hasar görmesini önlemek için vazelin karışımı ile kafatası açık bir alanı kapsayacak. Küçük baş-plaka (bkz. Şekil 1B) destek köprü bağlantısını kesin ve kolay erişilebilir yiyecek ve su ile ısıtılmış bir kafeste hayvan. Bütün hayvanlar her zaman cerrahi sonrası tek başına ev sahipliği için. Belirli bir günde bir hayvan için görüntüleme oturumlar tamamlandıktan sonra, dikkatle, tüm baş plakalı kaldırmak ve kafatası üzerinde # 6 ya da daha küçük bir dikiş ile cilt sütür. Yine, deneysel gün arasında kolayca erişilebilir yiyecek ve su ile tek tek hayvanların ev. Hayvanlar için günlük herhangi bir stres belirtileri, ağrı, ya da enfeksiyon kontrol edin. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar <img src="/files/ftp_upload/2059/2059fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 cerrahi ve iki foton görüntüleme (A) ve kafa plaka tasarım (B) için hayvan Sabitleme. <img src="/files/ftp_upload/2059/2059fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2 GFP etiketli mikroglia Epifloresans ile görüntülendi. jove_content &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/2059/2059fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3. GFP etiketli mikroglia TSCW implantasyonu sonra iki foton görüntüleme ile görüntülendi pial yüzeyinin altında, yaklaşık 50 mikron TSCW implantasyonu (gün 0) 15-30 dakika sonra alınan tek iki foton bölümler yanı sıra, 7 ve 17 gün sonra, mikroglia inflamatuar hakaret yokluğunda inaktive devam ederken, pencereler açık kalmasını göstermektedir. Z-projeksiyonlar 6 alınmış ve 24 saat aktif mikroglia HIV nörotoksin tat sergi etkileyici morfolojik değişiklikler sonrası enjeksiyon. Ölçek çubuğu: 10 mm.

<ol>
	<li>Mostany, R., &amp;amp, P. o. r. t. e. r. a. -. C. a. i. l. l. i. a. u., C, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+craniotomy+surgery+procedure+for+chronic+brain+imaging.">A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging.</a> J Vis Exp. 12, (2008).</li><li>Holtmaat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window.">high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nat Protoc. 4, (2009).</li><li>Yang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thinned-skull+cranial+window+technique+for+long-term+imaging+of+the+cortex+in+live+mice.">Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice.</a> Nature Protoc. 5, 213-21 (2010).</li><li>Jung, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+fractalkine+receptor+CX(3)CR1+function+by+targeted+deletion+and+green+fluorescent+protein+reporter+gene+insertion.">Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion.</a> Mol Cell Biol. 20, 4106-41 (2000).</li><li>Mrsic-Flogel, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homeostatic+regulation+of+eye-specific+responses+in+visual+cortex+during+ocular+dominance+plasticity.">Homeostatic regulation of eye-specific responses in visual cortex during ocular dominance plasticity.</a> Neuron. 54, 961-96 (2007).</li><li>Majewska, A., Yiu, G., &amp;amp, Y. u. s. t. e., R, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+custom-made+two-photon+microscope+and+deconvolution+system.">A custom-made two-photon microscope and deconvolution system.</a> Pflugers Arch. 441, 2-3 (2000).</li><li>Sharer, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+HIV-1+infection+of+the+central+nervous+system.">Pathology of HIV-1 infection of the central nervous system.</a> A review. J Neuropathol Exp Neurol. 51, (1992).</li><li>Everall, I. P., Aliberti, J., &amp;amp, B. a. l. c. e. r. z. y. k., M, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+density+in+the+superior+frontal+and+temporal+gyri+does+not+correlate+with+the+degree+of+human+immunodeficiency+virus-associated+dementia.">Neuronal density in the superior frontal and temporal gyri does not correlate with the degree of human immunodeficiency virus-associated dementia.</a> Acta Neuropathol (Berl. 88, 538-53 (1994).</li><li>Masliah, E., Banati, R. B., &amp;amp, Q. u. i. n. l. a. n., M, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+injury+is+a+pathological+substrate+for+human+immunodeficiency+virus-related+cognitive+disorders.">Dendritic injury is a pathological substrate for human immunodeficiency virus-related cognitive disorders.</a> Ann Neurol. 42, 963-96 (1997).</li><li>Everall, I. P., Banati, R. B., &amp;amp, U. p. e. n. d. e. r., B, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+synaptic+density+is+reduced+in+mild+to+moderate+human+immunodeficiency+virus+neurocognitive+disorder.">Cortical synaptic density is reduced in mild to moderate human immunodeficiency virus neurocognitive disorder.</a> Brain Pathol. 9, (1999).</li><li>Glass, J. D., Fedor, H., Wesselingh, S. L., &amp;amp, M. c. A. r. t. h. u. r., C, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunocytochemical+quantitation+of+human+immunodeficiency+virus+in+the+brain:+correlations+with+dementia.">Immunocytochemical quantitation of human immunodeficiency virus in the brain: correlations with dementia.</a> Ann Neurol. 38, (1995).</li><li>Feng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP.">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28, (2000).</li></ol>

HIV-1 ile ilişkili bilişsel açıkları (EL) için gerçek bir substrat muhtemelen HIV-1 mononükleer fagositler serbest pro-inflamatuvar mediatörlerin neden olduğu yıkım, sinaptik mimarisi olduğunu artan bir fikir birliği yoktur. Mikroglia aktivasyonu, çok çekirdekli dev hücreler ve astrositik hipertrofisi nedeniyle gliozis 7 CNS HIV-1 enfeksiyon ve enflamasyonun nonspesifik işaretlerinden kabul edilir. Buna karşılık, sinaptik karmaşıklığı kaybı, CNS 8,9,10,11 makrofaj yükünün yanı sıra premortem nörolojik hastalığın şiddeti ile korele edilmiştir. Ancak, mikroglia, periferik infiltre eden makrofaj ve EL ile hasta nöronlar arasındaki dinamik etkileşimler sadece geleneksel immünositokimyasal çalışmalarda elde edilen geleneksel statik işleme kullanarak modellenebilir olamaz. Laboratuarlarımızda Son çalışmalar, periferik ve santral mononükleer hücreleri ve nöronlar arasındaki bu etkileşimlerin en azından bazı HIV-1 proteininin Tat 1-72 stereotaktik beyin parankiminin (Lu, Marker, Tremblay, içine enjeksiyon bölümünde modellenebilir olduğunu ileri sürmüşlerdir Qi ve Gelbard, yayınlanmamış veri). Bu nedenle, neuroAIDS için izlenebilir küçük bir hayvan modeli, in vivo iki foton görüntüleme monosit kökenli makrofajlar, beyin ikamet mikroglia ve nöronlar arasındaki etkileşimi incelemek için uygulamaya karar verdi . Açık-kafatası ya da inceltilmiş-kafatası hazırlıkları zaman bir kısa bir süre (saat) kortikal mimari bir tek muayene, subakut olaylar zaman elbette artifactually, cerrahi manipülasyon nedeniyle mikroglia / makrofaj aktive olmadan bu hazırlıkların kullanmak değil. Ilgilenen Alan İnceleme göze iken kalvarial pencere. Burada basit bir şekilde yapıştırma TSCW yenileyici kalvaryumda önlemenin yanı sıra ≥ 3 hafta translusensi sağlamak cam lamel inceltilmiş kafatası alan üzerinde küçük bir parça bu sınırlama engellemeyi göstermektedir. Biz daha bu tekniği bize (CX 3 CR 1 / GFP için heterozigot farelerin korteks HIV Tat 1-72 stereotaktik enjeksiyon yanıt yanı sıra beyin-yerleşik mikroglia beyin mikrovasküler giren periferik monositler davranışlarını izlemek için izin verdiğini göstermek mononükleer soy hücreleri belirlemek için). Bu teknik, farklı genetik geçmişleri olan fareler üzerinde kullanmak için kolayca adapte olabilir, örneğin, rutin heterozigot CX 3 CR 1 / GFP kullanmak X Thy-1, monosit kökenli makrofajlar, beyin ikamet mikroglia ve nöronlar arasındaki etkileşimi araştırmak için YFP 12 fareler EL ile ilgili nöro in vivo modeller. Bizim TSCW hazırlanması, araştırmacılar, çevre ve hayvan deneysel tedavi öncesi ve sonrasında sürekli görüntülü hangi hafta süreleri, üzerinde oluşabilir MSS arasında hücre-hücre etkileşimleri çalışma sağlar. Böylece, her hayvan, kendi kontrolü olarak hizmet verebilir. Bu TSCW model için bir ihtar soruşturma kapsamında hedef hücreleri ya genetik olarak geliştirilmiş floresan proteinleri (eXFP) ifade veya kalvaryumda mekanik ihlali olmadan bir floresan boya ile etiketlenmiş tasarlanmıştır gerektiğini ve bu eXFP ifade yeterince güçlü olmalıdır haftalık bir süre içinde tekrarlanan görüntüleme seans sonrası hücresel mimarisi görüntülenmiştir izin.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Fentanyl Citrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hospira</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Midazolam hydrochloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Baxter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Medetomidine hydrocholoride (Domitor)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pfizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beyond Bodi Heat</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tobramycin and dexamethasone ophthalmic ointment (TobraDex)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alcon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Povidone-iodine 10% solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Betadine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ferric chloride 10% solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ricca Chemical Company</td>
<td>3120-32</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methyl cyanoacrylate 910</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Permabond</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cyanoacrylate 454</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Loctite</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TEETS denture material crosslinking methyl methacrylate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Co-Oral-lte Dental Mfg CO</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microtorque II handpiece kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pearson</td>
<td>R14-0002</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IRF 007 drill bits</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>19008-07</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Norland bendable microblade full radius</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Salvin Dental</td>
<td>BLAD-NORLAND-69</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cyanoacrylate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>The Original Superglue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>#0 glass coverslip</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>63750-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 &mu;l Microvolume syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>ILS010LT</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>UltraMicroPump III</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>UMP3-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>35 gauge NanoFil needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>NL35BL-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ball Mill, Carbide bits #1/4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>501860</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sigmacote</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>SL2-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Photomultiplier tube </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamamatsu</td>
<td>HC125-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ti:Sapphire laser Mai-Tai</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Spectra-Physics</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

a thin-skull window technique for chronic two-photon in vivo imaging of murine microglia in models of neuroinflammation

Geleneksel nörobilim in vivo fare ve merkezi sinir sisteminin iki foton görüntüleme veya açık kafatası 1,2 veya 3 hazırlıkları inceltilmiş-kafatası yer vardır . Açık kafatası tekniği çok yönlü olmakla birlikte invazif ve mikroglial aktivasyon neden olabileceğinden, mikroglia eğitim için optimal değildir. Inceltilmiş kafatası yaklaşım minimal invaziv olmasına rağmen, kronik görüntüleme için gerekli kafatasının yeniden inceltme tekrarlanan doku hasarı ve mikrogliyal aktivasyon riskleri artırır ve görüntüleme oturumları sınırlı sayıda sağlar. Burada iki foton mikroskopi kullanılarak zaman uzun bir süre boyunca in vivo fare mikroglia izlenmesi için kronik bir kafatası ince pencere yöntemi mevcut. Biz istikrarlı, erişilebilir, inceltilmiş kafatası kortikal pencere (TSCW) aralıklı gözlem üç hafta boyunca yarı saydam kalır bir apposed cam lamel nasıl hazırlanacağını gösteriyor. Bu TSCW hazırlık, çok daha inceltme açık kraniotomi veya tekrarlanan kafatası daha mikroglia aktivasyonu açısından immünolojik asal keyfi bir görüntüleme oturumları sayısı ve haftalık bir süre içinde sağlar. ≤ 150 mm pial yüzeyinin altında gelişmiş yeşil flüoresan protein ile mikroglia görselleştirmek için CX 3 CR 1 GFP / + fareler 4 TSCW hazırlar. Biz de bu hazırlık dayanıklı microgliosis tetikleme kapasitesine sahiptir TSCW bitişik Tat HIV-1 nörotoksik protein, stereotaktik beyin enjeksiyonları ile birlikte kullanılabileceğini göstermektedir. Bu nedenle, bu yöntem, HIV Associated Nörobilişsel Bozukluğu (EL) ve yöntemine işaret bileşeni ile diğer nörodejeneratif hastalıklar modelleri canlı beyin zamanla mikrogliyal morfoloji ve motilite değişiklikleri incelemek için son derece yararlı.

Watch this Scientific Journal Video about A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation at JoVE.com

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

Biz sürekli fare mikroglia görselleştirme ve dolaşımdaki monositler için bir yöntem tarif<em&gt; In vivo</em&gt; Transkraniyal iki foton mikroskopi kullanılarak saat, gün veya hafta içinde. Biz HIV-1 düzenleyici protein Tat komşu stereotaktik enjeksiyonu ile aktif hale getirilebilir latent mikroglia aralıklı gözlem sağlar seyrelmiş bir kafatası pencere nasıl hazırlanacağını gösteriyor.

Kronik İki foton için İnce kafatası Pencere Tekniği In vivo</emNöro-inflamasyon Modelleri murin mikroglia> Görüntüleme

Traditionally in neuroscience, in vivo two photon imaging of the murine central nervous system has either involved the use of open-skull1,2 or ...

a-thin-skull-window-technique-for-chronic-two-photon-vivo-imaging

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

23.4K Görüntüleme.  University of Rochester. Biz sürekli fare mikroglia görselleştirme ve dolaşımdaki monositler için bir yöntem tarif In vivo Transkraniyal iki foton mikroskopi kullanılarak saat, gün veya hafta içinde. Biz HIV-1 düzenleyici protein Tat komşu stereotaktik enjeksiyonu ile aktif hale getirilebilir latent mikroglia aralıklı gözlem sağlar seyrelmiş bir kafatası pencere nasıl hazırlanacağını gösteriyor.

Video: A Thin-skull Window Technique for Chronic Two-photon In vivo Imaging of Murine Microglia in Models of Neuroinflammation

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has significantly broadened our knowledge of physiological and pathological processes in numerous tissues in vivo 4-7. In studies of the central nervous system (CNS), there has been a broad application of in vivo imaging in the brain, which has produced a plethora of novel and often unexpected findings about the behavior of cells such as neurons, astrocytes, microglia, under physiological or pathological conditions 8-17. However, mostly technical complications have limited the implementation of in vivo imaging in studies of the living mouse spinal cord. In particular, the anatomical proximity of the spinal cord to the lungs and heart generates significant movement artifact that makes imaging the living spinal cord a challenging task.
We developed a novel method that overcomes the inherent limitations of spinal cord imaging by stabilizing the spinal column, reducing respiratory-induced movements and thereby facilitating the use of two-photon microscopy to image the mouse spinal cord in vivo. This is achieved by combining a customized spinal stabilization device with a method of deep anesthesia, resulting in a significant reduction of respiratory-induced movements. This video protocol shows how to expose a small area of the living spinal cord that can be maintained under stable physiological conditions over extended periods of time by keeping tissue injury and bleeding to a minimum. Representative raw images acquired in vivo detail in high resolution the close relationship between microglia and the vasculature. A timelapse sequence shows the dynamic behavior of microglial processes in the living mouse spinal cord. Moreover, a continuous scan of the same z-frame demonstrates the outstanding stability that this method can achieve to generate stacks of images and/or timelapse movies that do not require image alignment post-acquisition. Finally, we show how this method can be used to revisit and reimage the same area of the spinal cord at later timepoints, allowing for longitudinal studies of ongoing physiological or pathological processes in vivo.

In vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord Using Two-photon Microscopy

A minimally invasive protocol to stabilize the mouse spinal column and perform repetitive in vivo spinal cord imaging using two-photon microscopy is described. This method combines a spinal stabilization device and an anesthetic regimen to minimize respiratory-induced movements and produce raw imaging data that require no alignment or other post-processing.

Fare Omurilik İki foton Mikroskop kullanarak in vivo Görüntüleme

In vivo imaging using two-photon microscopy 1 in mice that have been genetically engineered to express fluorescent proteins in specific cell types 2-3 has ...

Nörobilim

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT has been used extensively in ophthalmology, dermatology, and gastroenterology1-3. Using a thinned-skull cortical window (TSCW), we employ spectral-domain OCT (SD-OCT) modality as a tool to image the cortex in vivo. Commonly, an opened-skull has been used for neuro-imaging as it provides more versatility, however, a TSCW approach is less invasive and is an effective mean for long term imaging in neuropathology studies. Here, we present a method of creating a TSCW in a mouse model for in vivo OCT imaging of the cerebral cortex.

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

We present a method of creating a thinned-skull cortical window (TSCW) in a mouse model for in vivo OCT imaging of the cerebral cortex.

Için inceltilmiş-kafatası Kortikal Pencere Tekniği<em&gt; In Vivo</em&gt; Optik Koherens Tomografi Görüntüleme

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique  with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT  has ...

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety of brain disorders1,2. To better understand the mechanisms by which brain circuits react to an animal's experience requires the ability to monitor the experience-dependent molecular changes in a given set of neurons, over a prolonged period of time, in the live animal. While experience and associated neural activity is known to trigger gene expression changes in neurons1,2, most of the methods to detect such changes do not allow repeated observation of the same neurons over multiple days or do not have sufficient resolution to observe individual neurons3,4. Here, we describe a method that combines in vivo two-photon microscopy with a genetically encoded fluorescent reporter to track experience-dependent gene expression changes in individual cortical neurons over the course of day-to-day experience. 
One of the well-established experience-dependent genes is Activity-regulated cytoskeletal associated protein (Arc)5,6. The transcription of Arc is rapidly and highly induced by intensified neuronal activity3, and its protein product regulates the endocytosis of glutamate receptors and long-term synaptic plasticity7. The expression of Arc has been widely used as a molecular marker to map neuronal circuits involved in specific behaviors3. In most of those studies, Arc expression was detected by in situ hybridization or immunohistochemistry in fixed brain sections. Although those methods revealed that the expression of Arc was localized to a subset of excitatory neurons after behavioral experience, how the cellular patterns of Arc expression might change with multiple episodes of repeated or distinctive experiences over days was not investigated. 
In vivo two-photon microscopy offers a powerful way to examine experience-dependent cellular changes in the living brain8,9. To enable the examination of Arc expression in live neurons by two-photon microscopy, we previously generated a knock-in mouse line in which a GFP reporter is placed under the control of the endogenous Arc promoter10. This protocol describes the surgical preparations and imaging procedures for tracking experience-dependent Arc-GFP expression patterns in neuronal ensembles in the live animal. In this method, chronic cranial windows were first implanted in Arc-GFP mice over the cortical regions of interest. Those animals were then repeatedly imaged by two-photon microscopy after desired behavioral paradigms over the course of several days. This method may be generally applicable to animals carrying other fluorescent reporters of experience-dependent molecular changes4.

In Vivo Two-photon Imaging Of Experience-dependent Molecular Changes In Cortical Neurons

Experience-dependent molecular changes in neurons are essential for the brain's ability to adapt in response to behavioral challenges. An in vivo two-photon imaging method is described here that allows the tracking of such molecular changes in individual cortical neurons through genetically encoded reporters.

Kortikal Nöronlar In Vivo İki foton Of Görüntüleme Deneyimi bağımlı Moleküler Değişiklikler

The brain's ability to change in response to experience is essential for healthy brain function, and abnormalities in this process contribute to a variety ...

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their close-to-surface positioning facilitates microscopic imaging of skin nerve endings in living intact animal. Using multiphoton microscopy, it is possible to obtain fine images overcoming the problem of strong light scattering of the skin tissue. Reporter transgenic mice that express EYFP under the control of Thy-1 promoter in neurons (including periphery sensory neurons) are well suited for the longitudinal studies of individual nerve endings over extended periods of time up to several months or even life-long. Furthermore, using the same femtosecond laser as for the imaging, it is possible to produce highly selective lesions of nerve fibers for the studies of the nerve fiber restructuring. Here, we present a simple and reliable protocol for longitudinal multiphoton in vivo imaging and laser-based microsurgery on mouse skin nerve endings.

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

The protocol for dynamic longitudinal imaging and selective laser lesion of nerve endings in reporter transgenic mice is presented.&#160;

Cilt Tek Sinir Endings Vivo İki-Foton Mikrokopisi

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

In the mammalian cortex, neurons form extremely complicated networks and exchange information at synapses. Changes in synaptic strength, as well as addition/removal of synapses, occur in an experience-dependent manner, providing the structural foundation of neuronal plasticity. As postsynaptic components of the most excitatory synapses in the cortex, dendritic spines are considered to be a good proxy of synapses. Taking advantages of mouse genetics and fluorescent labeling techniques, individual neurons and their synaptic structures can be labeled in the intact brain. Here we introduce a transcranial imaging protocol using two-photon laser scanning microscopy to follow fluorescently labeled postsynaptic dendritic spines over time in vivo. This protocol utilizes a thinned-skull preparation, which keeps the skull intact and avoids inflammatory effects caused by exposure of the meninges and the cortex. Therefore, images can be acquired immediately after surgery is performed. The experimental procedure can be performed repetitively over various time intervals ranging from hours to years. The application of this preparation can also be expanded to investigate different cortical regions and layers, as well as other cell types, under physiological and pathological conditions.

Two-Photon in vivo Imaging of Dendritic Spines in the Mouse Cortex Using a Thinned-skull Preparation

Time-lapse imaging in the living animal provides valuable information on structural reorganization in the intact brain. Here, we introduce a thinned-skull preparation that allows transcranial imaging of fluorescently labeled synaptic structures in the living mouse cortex by two-photon microscopy.

İki-Foton<em&gt; In vivo</em&gt; Bir inceltilmiş-kafatası Hazırlık kullanarak Fare Cortex dendritik dikenler Görüntüleme

In the mammalian cortex, neurons form extremely complicated networks and exchange information at synapses. Changes in synaptic strength, as well as ...

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

This video shows the craniotomy procedure that allows chronic imaging of neurons in the mouse retrosplenial cortex (RSC) using in vivo two-photon microscopy in Thy1-GFP transgenic mouse line. This approach creates a possibility to investigate the correlation of behavioural manipulations with changes in neuronal morphology in vivo.
The cranial window implantation procedure was considered to be limited only to the easily accessible cortex regions such as the barrel field. Our approach allows visualization of neurons in the highly vascularized RSC. RSC is an important element of the brain circuit responsible for spatial memory, previously deemed to be problematic for in vivo two-photon imaging.
The cranial window implantation over the RSC is combined with an injection of mCherry-expressing recombinant adeno-associated virus (rAAVmCherry) into the dorsal hippocampus. The expressed mCherry spreads out to axonal projections from the hippocampus to RSC, enabling the visualization of changes in both presynaptic axonal boutons and postsynaptic dendritic spines in the cortex. 
This technique allows long-term monitoring of experience-dependent structural plasticity in RSC.

Simultaneous Two-photon In Vivo Imaging of Synaptic Inputs and Postsynaptic Targets in the Mouse Retrosplenial Cortex

This video shows the craniotomy procedure that allows chronic imaging of neurons in mouse retrosplenial cortex using in vivo two photon microscopy in Thy1-GFP transgenic line. This approach is combined with injection of mCherry-expressing adeno-associated virus into dorsal hippocampus. These techniques allow long-term monitoring of experience-dependent structural plasticity in RSC.

Eşzamanlı İki foton<em&gt; İn Vivo</em&gt; Fare Retrosplenial kortekste sinaptik Girişlerin Görüntüleme ve postsinaptik Hedefler

This video shows the craniotomy procedure that allows chronic imaging of neurons in the mouse retrosplenial cortex (RSC) using in vivo two-photon ...

Quantification of Cerebral Vascular Architecture using Two-photon Microscopy in a Mouse Model of HIV-induced Neuroinflammation

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic neuroinflammatory state within the central nervous system (CNS), thought to be driven principally by virally-mediated activation of microglia and brain resident macrophages. HIV-1 infection is also accompanied by changes in cerebrovascular blood flow (CBF), raising the possibility that HIV-associated chronic neuroinflammation may lead to changes in CBF and/or in cerebral vascular architecture. To address this question, we have used a mouse model for HIV-induced neuroinflammation, and we have tested whether long-term exposure to this inflammatory environment may damage brain vasculature and result in rarefaction of capillary networks. In this paper we describe a method to quantify changes in cortical capillary density in a mouse model of neuroinflammatory disease (HIV-1 Tat transgenic mice). This generalizable approach employs in vivo two-photon imaging of cortical capillaries through a thin-skull cortical window, as well as ex vivo two-photon imaging of cortical capillaries in mouse brain sections. These procedures produce images and z-stack files of capillary networks, respectively, which can be then subjected to quantitative analysis in order to assess changes in cerebral vascular architecture.

This paper describes a method by which the vascular architecture in the brain can be quantified using in vivo and ex vivo two-photon microscopy.

HIV kaynaklı Nöroinflamasyondan bir Fare Modeli İki foton Mikroskop kullanarak Serebral Vasküler Mimarlık Niceleme

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ fluctuations can occur through a variety of membrane and intracellular mechanisms and play a crucial role in the induction of synaptic plasticity and regulation of dendritic excitability. Hence, the ability to record different types of Ca2+ signals in dendritic branches is valuable for groups studying how dendrites integrate information. The advent of two-photon microscopy has made such studies significantly easier by solving the problems inherent to imaging in live tissue, such as light scattering and photodamage. Moreover, through combination of conventional electrophysiological techniques with two-photon Ca2+ imaging, it is possible to investigate local Ca2+ fluctuations in neuronal dendrites in parallel with recordings of synaptic activity in soma. Here, we describe how to use this method to study the dynamics of local Ca2+ transients (CaTs) in dendrites of GABAergic inhibitory interneurons. The method can be also applied to studying dendritic Ca2+ signaling in different neuronal types in acute brain slices.

We present a method combining whole-cell patch-clamp recordings and two-photon imaging to record Ca2+ transients in neuronal dendrites in acute brain slices.

Nöronal Dendrites beyin dilimleri içinde iki fotonlu kalsiyum görüntüleme

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging methods exist for examining the brain tissue of live newborn mammals. Herein we summarize a protocol for imaging individual cortical neurons in living neonatal mice. This protocol includes the following two methodologies: (1) the Supernova system for sparse and bright labeling of cortical neurons in the developing brain, and (2) a surgical procedure for the fragile neonatal skull. This protocol allows the observation of temporal changes of individual cortical neurites during neonatal stages with a high signal-to-noise ratio. Labeled cell-specific gene silencing and knockout can also be achieved by combining the Supernova with RNA interference and CRISPR/Cas9 gene editing systems. This protocol can, thus, be used for analyzing the developmental dynamics of cortical neurons, molecular mechanisms that control the neuronal dynamics, and changes in neuronal dynamics in disease models.

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

We present an in vivo two-photon imaging protocol for imaging the cerebral cortex of neonatal mice. This method is suitable for analyzing the developmental dynamics of cortical neurons, the molecular mechanisms that control the neuronal dynamics, and the changes in neuronal dynamics in disease models.

Vivo Yenidoğan farelerde kortikal nöronların iki fotonlu görüntüleme

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent and cause visual impairment and blindness. Understanding how such diseases progress is critical to formulating new treatments. In vivo&#160;microscopy in animal models of disease is a powerful tool for understanding neurodegeneration and has led to important progress towards treatments of conditions ranging from Alzheimer&#39;s disease to stroke. Given that the retina is the only central nervous system structure inherently accessible by optical approaches, it naturally lends itself towards in vivo imaging. However, the native optics of the lens and cornea present some challenges for effective imaging access.
This protocol outlines methods for in vivo two-photon imaging of cellular cohorts and structures in the mouse retina at cellular resolution, applicable for both acute- and chronic-duration imaging experiments. It presents examples of retinal ganglion cell (RGC), amacrine cell, microglial, and vascular imaging using a suite of labeling techniques including adeno-associated virus (AAV) vectors, transgenic mice, and inorganic dyes. Importantly, these techniques extend to all cell types of the retina, and suggested methods for accessing other cellular populations of interest are described. Also detailed are example strategies for manual image postprocessing for display and quantification. These techniques are directly applicable to studies of retinal function in health and disease.

In vivo imaging is a powerful tool for the study of biology in health and disease. This protocol describes transpupillary imaging of the mouse retina with a standard two-photon microscope. It also demonstrates different in vivoimaging methods to fluorescently label multiple cellular cohorts of the retina.

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...

Kronik İki foton için İnce kafatası Pencere Tekniği In vivo Görüntüleme