Biz GAFP-EGFP ve CX3CR1-EGFP fare suşları sağlamak için Dr Frank Kirchhoff derinden müteşekkiriz. Iş Finlandiya Uluslararası Hareketlilik Merkezi, Tekes, Neuroscience Fin Enstitüsü (FGSN) ve Finlandiya Akademisi hibe tarafından desteklenmiştir.

Burada sunulan tüm prosedürleri hayvan bakımı (Hayvan Deneyleri 62/2006 tarihinde Finlandiya Yasası) için yerel rehberlik göre yapılmıştır. Hayvan lisans (ESAVI/2857/04.10.03/2012) yerel otorite (ELÄINKOELAUTAKUNTA-Ella) elde edilmiştir. 1-3 aylık yaş arasında Yetişkin fareler, ağırlığı 24-38 g, sertifikalı Üniversitesi&#39;nin hayvan tesisinde ayrı kafeslerde tutulur ve yiyecek ve su ad libitum sağlandı. 1.. Bir Kraniyal Pencere sayesinde Beyin Hasarı Görüntüleme <ol><li> Hayvanlara anestezi ve işlem alanı hazırlanması <ol><li> Filtre ile sterilize edilmiş fosfat tamponlu salin (PBS), pH 7.4 içinde çözüldü ketamin (Ketalar, 80 mg / kg) ve ksilazin (Rompun, 10 mg / kg) bir karışımı peritoneal enjeksiyonu ile farelerin anestezisi. Anestezi derinliği doğrulamak için fare refleksleri düzenli (kuyruk ve ayak tutam prob) kontrol edin. Uygun zaman, uygun anestezi korumak için, dozu artırın ama overd önlemekose. </li><li> Anestezi kurtarma sonra cerrahi işlem, görüntüleme oturumu ve ilk bir saat içinde bir ısıtma pedi kullanarak 37.0 ° C&#39;de hayvan koruyun. </li><li> Kurumasını fare gözleri korumak için, göz yağ uygulayın. </li><li> Inflamasyon ve serebral ödemi azaltmak için deri altına enjeksiyon ile deksametazon (Rapidexon veteriner, 2 mg / kg) yönetmek. </li><li> Önce ya da hemen cerrahi sonrası 30 dakika kadar (Ketoprophene periton örneğin) bir analjezik yönetmek. Hayvan gibi, hareket yemek veya içmek, kilo kaybı ya isteksizlik gibi herhangi bir ağrı belirtileri, sergiler, tükürük, piloerection veya anormal solunum ameliyattan sonra, analjezik enjeksiyonu tekrar geliyor. </li><li> Bir tıraş makinesi (Malzeme ve Ekipmanları bakınız) ile mouse &#39;başını tıraş. Bıyıklarını zarar kaçının. </li><li> Traş alanını temizlemek için% 70 etanol çözeltisi ile fare kafasına cilt davranın. </li><li> Cerrahi makas kullanma (Malzeme veEkipman) ve forseps (Malzeme ve Ekipmanları bakınız), alnına kulak arasındaki orta hattan keseceksiniz. </li><li> Yavaşça künt mikrocerrahi bıçak ile kafatasına bağlı bağ dokusu kazınması. </li><li> Yanlara cilt sınırları kaydırın ve hafifçe baş ve deri fiksasyonu için kafatasının işitsel deliklerinin içine kulak çubukları çekin. </li><li> Steril PBS ile kafatası temizleyin ve% 0.5 klorheksidin ile fare kafasına ameliyat siteyi tedavi, daha sonra steril pamuklu ve basınçlı hava bir arada kullanarak kafatası yüzeyi kurulayın. </li></ol></li><li> Hıyar yaralanma eziyeti <ol><li> Bir hayvan sahibinin küçük bir hayvan stereotaksik aleti (Malzeme ve Ekipmanları bakınız) yerleştirin. </li><li> Hayvanın kafatası yüzeyi üzerinde odaklanmak yanında stereotaksik enstrümana binoküler mikroskop konumunu ayarlayın. </li><li> Binoküler mikroskop kullanarak, kafatası üzerinde Bregma noktasını bulun. </li><li> Regio tespitstereotaksik koordinatları kullanarak ilgi n. NOT: Doğrudan yüzeyel kortikal damarları üzerinde bulunan ilgi bu alanlardan kaçının. Bu imha şiddetle travma ilerlemesini etkileyebilir. </li><li> Seçilen bölgenin üstüne 30 G iğne yerleştirin ve kafatası yüzeyi çizilmeye tarafından hedef siteyi işaretleyin. </li><li> Etkilenen kemik yüzey alanının gereksiz derinleşmesini önlemek için mümkün olan tüm önlemleri ile kafatası delin. Mikroskop altında bir yüksek hız cerrahi matkap (Malzeme ve Ekipmanları bakınız) kullanın. Sıvı delinmiş alanında görünür yoksa delme işlemini durdurun. </li><li> Iğne ile delinmiş kuyunun alt dokunun. </li><li> Hıyar uygulama sitenin koordinatlarına göre 0.5-2.0 mm derinliğe kadar, beyin (ekleme hızı 5-10 mm / dk) içine düzgün bir iğne batırın. </li><li> Hemen istenen derinliği (geri çekilme hızı 5-10 mm / dk) ulaştıktan sonra iğneyi çıkarın ve küçük bir tampon ile dikmek sonra ortaya kan silin (see Malzeme ve ekipman). </li><li> Bir mikroenjektör pompa (WPI) ve 10 ul Hamilton şırıngası cam pipet ile monte kullanarak lezyonun siteye 100 uM sülforodamin 101 mikroenjeksiyon veya ilgi duyulan bir başka bileşik yapın. Not: borosilikat cam kılcal cam pipet hazırlanması sırasında, 10-20 um&#39;lik bir çapa ucu netleştirmek. </li><li> 2-5 nl / sn &#39;lik bir oranda enjeksiyon çözeltisi 250-1,500 nl infüze. NOT: Beyin parankiminde en az 5 dakika boyunca infüzyon bitiminden sonra pipet bırakın, ardından çözüm çıkışlarını engellemek için yavaşça ve nazikçe çıkarın. </li></ol></li><li> Kronik kafatası pencere için kraniotomi <ol><li> Yaralanma sitenin etrafında bir daire pencere yapmak için yavaşça ve dikkatle kafatası matkap. 3-3.5 mm pencere çapı kullanın. </li><li> Wi kapsayacak şekilde korteks tampon bir damla (125 mM NaCl, 5 mM KCI, 10 mM glükoz, 10 mM HEPES, damıtık H 2 O 2 mM CaCl2 ve 2 mM MgSO 4) uygulayınndow. </li><li> Kranial pencerede bir yuvarlak cam lamel (# 1.5 kalınlık) yerleştirin. </li><li> Coverslip etrafında korteks tampon aşırı çıkarın. </li><li> Poliakrilik yapıştırıcı ile lamel kenarları mühür (Malzeme ve Ekipmanları bakınız). Not: tutkal lamel üst yüzeyine uygulanmaz emin olun. Cam kapak yapıştırıcı ile kirlenmiş ise, daha sonra dikkatlice bir MicroBlade ile kirlenmesine tutkal kaldırmak, cam stabil kafatasına yapıştırılmış kadar bekleyin ve cam yüzeyi üzerindeki tutkal kuruduktan. </li><li> 5 dk tutkal kadar kuruması için bekleyin. </li><li> Metal tutucu yerleştirilebilir böylece kulak çubuğu yükseklik vidalarını kullanarak, kafa konumunu ayarlayın. </li><li> Çelik tutucu halka (Malzeme ve Ekipmanları bakınız) poliakrilik tutkal küçük bir miktar uygulayın. </li><li> Geriye yönlendirilmiş metal tutucu saplı cam lamel çelik sahibinin halka Tutkal. </li><li> 5 dk tutkal kadar kuruması için bekleyin. </li><li> Mviskoz koşullarına ulaşmak için 3,5 cm Petri (ya da analog) olarak poliakrilik tutkal ile ix diş çimento (Malzeme ve ekipman bakınız). </li><li> Çimento + tutkal karışımı ile kafatası pencerenin sınırları Seal ve cilt sınırına kadar aynı karışımı ile kafatası yüzeyi maruz kapsamaktadır. </li><li> 15 dk çimento + tutkal karışımı kurumaya bırakın ve daha sonra kulak çubuklarını kaldırmak için bekleyin. </li><li> Protokol 3 de tarif edildiği gibi ilgili bölge ve bir kontrol alanı için iki foton uyarma mikroskopik (TPEM) görüntüleme yapın. </li><li> Görüntüleme sonra, hayvan bir ısıtma yastığı anestezi kurtarmak ve tam iyileşme kadar gözlem altında ayrı bir kafes içinde tutmak için izin verir. Islak gıda çiğneme ve hidrasyon kolaylaştırmak için verilebilir. </li></ol></li></ol> 2. Beyin Hasarı Görüntüleme İnceltilen Skull Through <ol><li> Anestezi yapılmasını ve işlem alanı hazırlanması <ol><li> Fare anestezisi ve travma indüksiyon için hazırlamakAdım 1.1 &#39;de tarif edildiği gibi. </li></ol></li><li> Kafatası incelmesi ve prick yaralanma eziyeti <ol><li> Hayvan sahibinin küçük bir hayvan stereotaksik aleti (Malzeme ve ekipman bakınız) yerleştirin. </li><li> Hayvan kafatası yüzeyi üzerinde odaklanmak yanında stereotaksik alet bir binoküler mikroskop konumunu ayarlayın. </li><li> Binoküler mikroskop kullanılarak kafatası Bregma noktasını bulun, stereotaktik koordinatlarına göre yansıması için beyin alanlarını belirlemek ve tırmalama ile işaretleyin. NOT: kafatası istikrar bu alanlarda tehlikeye gibi Kafatası inceltme pozisyon, kraniyal sütür üzerinde veya yakınında yer olmamalıdır. Ayrıca, büyük kortikal veya meningeal gemiler ve kafatası dikişler altında bulunan Meninksler görüntüleme eserler neden muhtemeldir. </li><li> Hayvanın kafatası ilgi alanı üzerinde yapıştırıcı ile kaplanmış metal tutucu yerleştirin, hafif baskı uygulamak ve metal tutucu sıkıca kafatasına yapıştırılmış kadar 5 dakika bekleyin. </li&gt; <li> Viskoz koşullarına ulaşmak için 3,5 cm Petri (ya da analog) olarak poliakrilik tutkal ile diş çimento (Malzeme ve ekipman bakınız) karıştırın. </li><li> Çimento + tutkal karışımı ile metal tutucunun sınırları Seal ve cilt sınırına kadar aynı karışımı ile kafatası yüzeyi maruz kapsamaktadır. </li><li> 15 dk çimento ve tutkal karışımı kuruması için bekleyin. </li><li> Nonpolymerized tutkal kalıntıları, yıkanır, böylece, inceltilmiş kafatası bölge ve PBS ile metal tutucunun parça çevreleyen birkaç kez yıkayın. NOT: Bu sahibine kafatası istikrarlı eki sağlamak için çok önemlidir. Bu görüntüleme sırasında preparat kararlılığı sağlar. </li><li> Binoküler mikroskop yüksek büyütme modunu kullanarak, çapı ~ 0.5-1.5 mm inceltilmiş kafatası alanı oluşturmak için bir yüksek hızlı mikro-matkap ile kafatası kemiğinin üst katmanlarını kaldırmak. Kemik enkaz kaldırmak için sondaj sırasında basınçlı hava kullanın. Sondaj intermittentl gerçekleştirinsürtünme kaynaklı aşırı ısınmasını önlemek için, inceltme işlemi sırasında y. Oda sıcaklığı çözeltisi kullanılarak matkap ucu soğutun ve düzenli ısı emmek için inceltilmiş bölgeye tampon uygulanır. NOT: korteks zarar görmesini önlemek için, ince bir tabaka (&lt;50 mikron) kadar geniş bölgeleri (&gt; 1.5 mm) üzerinde matkap yok. NOT: kemirgen kafatası kemik yapısı süngerimsi kemiğin kalın bir tabaka ile ayrılmış kompakt kemiğin iki ince katmanlardan oluşur. Kan damarlarını içeren süngerimsi kemik formu konsantrik daireler ve kanalcıklan minik boşluklar. Dış yoğun kemik tabakası ve süngerimsi katmanın en ortadan kaldırmak için mikrotur kullanın. Süngersi kemik içinde kan damarlarının bozulması kanamaya neden olabilir. Bu kanamayı durdurmak için hemostaz kollajen sünger kullanın. </li><li> , Süngersi kemiğin çoğunluğu kaldırıldı olup olmadığını incelemek için, ikinci harmonik oluşumu (SHG) görüntüleme kullanın. Kalan kemik inci olduğundan emin olun, aşırı incelmesi önlemek için dikkatli olunBu hazırlama aşamasında 50 um daha icker. </li><li> Inceltilmiş bölgenin üstüne sıcak tampon bir damla (35-37 ° C) koyun. Ayrıca kemik katmanları kaldırmak ve ~ 20 mikron kalınlığında kemik çapı ~ 700 mikron düzgün bir alan oluşturmak için Bur Terbiye mikrocerrahi bıçak veya Micro kullanın. Bu adım sırasında, tekrarlayan SHG görüntüleme gerçekleştirmek ve düzenli kemik kalınlığını ölçmek için yararlıdır. </li><li> Ilgi bölge ve bir kontrol alanı için TPEM görüntüleme gerçekleştirin. </li><li> Bölge kesinlikle yatay konumlandırılmış inceltilmiş şekilde kulak çubuğu yükseklik vidaları kullanarak kafa konumunu ayarlayın. Inceltilmiş bölgenin üstüne iğne yerleştirin ve hedeflenen sitenin altında hiçbir büyük gemiler var olduğundan emin olun. </li><li> Inceltilmiş kafatası yüzeyinden 0.5-2.0 mm derinliğine, beyin içine iğne batırma ve pislik uygulama mevkii koordinatlarına göre bir lezyon yapın. </li><li> İğneyi çıkarın ve t sonra ortaya çıkan kanama bastırmakO hemostatik tampon (Malzeme ve ekipman bakınız) ile beyin hasarı akut. Yaralanma yerinde kan pıhtıları formu ve damar nabız durana kadar bekleyin. </li><li> Bölüm 1.2.10 de yukarıda tarif edildiği gibi, 100 uM sülforodamin 101 veya lezyon siteye ilgi bir bileşiğinin mikroenjeksiyon yapın. </li><li> Protokol 3 de tarif edildiği gibi yaralanma ilerlemesini ve kurtarma izlemek için görüntüleme TPEM yapın. </li><li> Görüntüleme sonra, hayvan bir ısıtma yastığı anestezi bilinç kazanmak için izin verir. Gözetimsiz hayvan bırakın ve sadece tam fiziksel iyileşme sonra evde kafes iade etmeyin. </li></ol></li></ol> 3. Görüntüleme <ol><li> Özel inşa çerçeveye metal tutucu takarak mikroskop altında hayvan yerleştirin. </li><li> Görüntüleme için, Mai Tai DeepSee lazer ve in vivo iki foton için optimize XLPLN 25X 1.05 NA suya daldırma hedefi ile donatılmış, örneğin FV1000MPE iki foton mikroskop kullanımıgörüntüleme. </li><li> Geniş alan floresan modunu kullanarak mikroskop altında lezyon sitesini tanımlamak. Beyin damarlarını görselleştirmek ve kan damarlarının gözlenen desenine göre kontrol alanını seçmek için uzun bir pas filtreleri kullanın. </li><li> Görüntü ikinci harmonik üretimi (SHG) sinyali, 800 nm dalga boyuna ayar femtosaniye lazer ve 380-410 nm bypass filtresi kullanılarak yayılan ışığı toplamak. Flüoresan görüntüleme için, yayılan ışığı toplamak için bant geçiş filtresi (515-560 nm) kullanarak ve aşağıdaki dalga floresan uyarmak için kullanılır: GFP-860 nm, 950 nm-YFP. </li><li> Görüntü alımı için Fluoview yazılımı kullanın. </li><li> Mağaza sonraki tekrarlayan görüntüleme için her ROI koordinatları. Görüntü zamanla aynı İB&#39;leri ve Koordinatları görüntü örtüşme maksimize etmek için her zaman ayarlayın. </li><li> Uygun yazılım (örn.. İmageJ) ile görüntüleri analiz. Burada yer yeniden düzenlemesi Imaris yazılımı kullanılarak yapıldı. </li></ol>

<ol>
	<li>Lighthall, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+cortical+impact:+A+new+experimental+brain+injury+model.">Controlled cortical impact: A new experimental brain injury model.</a> J. Neurotrauma. 5 (1), 1-15 (1988).</li><li>Lindgren, S., Rinder, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+in+head+injury.">Experimental studies in head injury.</a> Biophysik. 2 (5), 320-329 (1965).</li><li>Shreiber, D. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+investigation+of+cerebral+contusion:+histopathological+and+immunohistochemical+evaluation+of+dynamic+cortical+deformation.">Experimental investigation of cerebral contusion: histopathological and immunohistochemical evaluation of dynamic cortical deformation.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 58 (2), 153-164 (1999).</li><li>Feeney, D. M., Boyeson, M. G., Linn, R. T., Murray, H. M., Dail, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+to+cortical+injury:+I.+Methodology+and+local+effects+of+contusions+in+the+rat.">Responses to cortical injury: I. Methodology and local effects of contusions in the rat.</a> Brain Res. 211 (1), 67-77 (1981).</li><li>Bardehle, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+astrocyte+responses+to+acute+injury+reveals+selective+juxtavascular+proliferation.">Live imaging of astrocyte responses to acute injury reveals selective juxtavascular proliferation.</a> Nat. Neurosci. 16 (5), 580-586 (2013).</li><li>Sword, J., Masuda, T., Croom, D., Kirov, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+neuronal+and+astroglial+disruption+in+the+peri-contusional+cortex+of+mice+revealed+by+in+vivo+two-photon+imaging.">Evolution of neuronal and astroglial disruption in the peri-contusional cortex of mice revealed by in vivo two-photon imaging.</a> Brain. 136 (5), 1446-1461 (2013).</li><li>Feng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP.">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28, 41-51 (2000).</li><li>Nolte, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFAP+promoter-controlled+EGFP-expressing+transgenic+mice:+a+tool+to+visualize+astrocytes+and+astrogliosis+in+living+brain+tissue.">GFAP promoter-controlled EGFP-expressing transgenic mice: a tool to visualize astrocytes and astrogliosis in living brain tissue.</a> Glia. 33 (1), 72-86 (2001).</li><li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+fractalkine+receptor+CX(3)CR1+function+by+targeted+deletion+and+green+fluorescent+protein+reporter+gene+insertion.">Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion.</a> Mol. Cell. Biol. 20 (11), 4106-4114 (2000).</li><li>Nimmerjahn, A., Kirchhoff, F., Kerr, J. N. D., Helmchen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sulforhodamine+101+as+a+specific+marker+of+astroglia+in+the+neocortex+in+vivo.">Sulforhodamine 101 as a specific marker of astroglia in the neocortex in vivo.</a> Nat. Methods. 1 (1), 31-37 (2004).</li><li>Carr&#233;, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+aspects+of+an+impact+acceleration+traumatic+brain+injury+rat+model+with+potential+suitability+for+both+microdialysis+and+PtiO2+monitoring.">Technical aspects of an impact acceleration traumatic brain injury rat model with potential suitability for both microdialysis and PtiO2 monitoring.</a> J. Neurosci. Methods. 140, 23-28 (2004).</li><li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term,+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window.">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nat. Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li><li>Yang, G., Pan, F., Parkhurst, C. N., Grutzendler, J., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thinned-skull+cranial+window+technique+for+long-term+imaging+of+the+cortex+in+live+mice.">Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice.</a> Nat. Protoc. 5, 201-208 (2010).</li><li>Cianchetti, F. A., Kim, D. H., Dimiduk, S., Nishimura, N., Schaffer, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulus-evoked+calcium+transients+in+somatosensory+cortex+are+temporarily+inhibited+by+a+nearby+microhemorrhage.">Stimulus-evoked calcium transients in somatosensory cortex are temporarily inhibited by a nearby microhemorrhage.</a> PloS one. 8 (5), (2013).</li><li>Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+polished+and+reinforced+thinned-skull+window+for+long-term+imaging+of+the+mouse+brain.">A polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain.</a> J. Vis. Exp. 61, (2012).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Beyin travması ani, öngörülemeyen bir olay. Burada, örneğin nörodejenerasyon, dendrit eliminasyonu, beyin ödemi, glial yara izi, fokal subaraknoid kanama ile birleştiğinde serebral korteks kanamalar ve artan geçirgenliği gibi beyin hasarı sonrası insan hastalarda gözlenen patolojik değişikliklerin bir spektrumunu üretir hayvan modeli tanımlamak Kan-beyin bariyeri. Birincil ve ikincil patogenezi yanı sıra, travma sonrası iyileşme incelemek için, bu yaralanma modeli iyi nöronal ve glial yapıları...

Akut beyin hasarı, motorlu araç kazalarında yaralanma insidansı yüksek olan önemli bir halk sağlığı sorunudur düşer ya da saldırılar ve müteakip kronik sakatlık yüksek yaygınlık. Beyin hasarının tedavisine terapötik yaklaşımlar, böylece, hastane öncesi cerrahi ve yoğun bakım etkililiğini sınırlayan, tamamen semptomatik kalır. Bu beyin hasarı, sosyal ve ekonomik etkisi özellikle şiddetli hale getirir. Çeşitli nedenlerle için, klinik çalışmaların en yeni tedavi yaklaşımları kullanarak beyin hasarı sonrası iyileşme iyileşme göstermek için başarısız oldu. Hayvan modelleri ilaç etkinliği beyin hasarı olan hastalarda tahmin edilebilir bir aşamaya yönelik yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi için çok önemlidir. Şu anda, kafa travması birkaç iyi kurulmuş hayvan modelleri kontrollü kortikal etkisi 1, sıvı perküsyon yaralanma 2, dinamik kortikal deformasyon 3, ağırlık düşmesi gibi, mevcut4, ve fotoğraf yaralanma 5. Deneysel modellerin bir dizi kafa travması ile ilişkili patoloji bazı morfolojik, moleküler ve davranışsal yönlerini incelemek için kullanılır olmuştur. Ancak, tek bir hayvan modeli, yeni tedavi stratejileri doğrulayarak tamamen başarılıdır. Beyin hasarı, güvenilir, tekrar üretilebilir ve kontrollü hayvan modellerinin geliştirilmesi karmaşık patolojik durumun değerlendirilmesi için gereklidir. Son mikroskopik görüntüleme teknolojileri ve genetik olarak kodlanmış floresan gazetecilere yeni kombinasyonu birincil yaralanma, ikincil yaralanma ve rejenerasyon yayılması, birincil travması beyin hasarı tüm aşamalarını, araştırmak için benzersiz bir fırsat sunuyor. Özel olarak, in vivo iki foton mikroskopi kemirgen beyin derin katmanlarında kortikal hücre ve hatta hücre içi yapıların gerçek zamanlı görselleştirme sağlayan eşsiz bir doğrusal olmayan optik bir teknolojidir. Hücre ve organizasyonu çeşitli türleriNelles farklı floresan belirteçleri birleştirerek aynı anda görüntülü olabilir. Bu güçlü aracını kullanarak, posttravmatik koşullar altında beyin yaşayan dinamik morfolojik ve fonksiyonel değişiklikler oluşturulabiliyor. Beyin hasarı okuyan in vivo iki foton mikroskopi avantajları son zamanlarda Kirov ve meslektaşları 6 tarafından gösterildi. Hafif fokal kortikal kontüzyon modeli kullanılarak, bu yazarlar pericontusional kortekste akut dendritik yaralanma lokal kan akışında düşüş kapılı olduğunu gösterdi. Ayrıca, çürük site çevresinde metabolik tehlikeye korteks daha da yayılmasını depolarizasyon hasar olduğunu gösterdi. Bu ikincil hasar travmatik beyin hasarının sonuçları daha şiddetli hale sinaptik devreyi etkiler. Burada, lokal beyin için gelişmiş bir model olarak eş zamanlı, topikal ilaç uygulamasıyla kombine edilebilir bir şırınga iğnesi ile stereotaksik dikmek bir yöntem önerilmektediryaralanması ve in vivo memeli beyninde akut travma patofizyolojik sonuçlarını incelemek için bir araç olarak.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2A-sa dumb Tweezers, 115mm</td>
			<td style="width:71px;">XYtronic</td>
			<td style="width:119px;">XY-2A-SA</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">30G &#189;&#8217;&#8217; needle</td>
			<td style="width:71px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">REF 304000</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Animal trimmer, shaving machine</td>
			<td style="width:71px;">Aesculap</td>
			<td style="width:119px;">Isis GT420</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Binocular Microscope</td>
			<td style="width:71px;">Zeiss&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Stemi 2000</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Biological Temperature Controller with stainless steel heating pad</td>
			<td style="width:71px;">Supertech</td>
			<td style="width:119px;">TMP-5b</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Blunt microsurgical blade</td>
			<td style="width:71px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">REF 374769</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:216px;">Borosilicate tube with filament</td>
			<td style="width:71px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:119px;">BF120-69-10</td>
			<td style="width:167px;">For glass pipette production</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Carprofene</td>
			<td style="width:71px;">Pfizer</td>
			<td style="width:119px;">Rimadyl vet</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Chlorhexidine digluconate</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">C9394</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Dental cement</td>
			<td style="width:71px;">DrguDent, Dentsply</td>
			<td style="width:119px;">REF 640 200 271</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Dexamethasone</td>
			<td style="width:71px;">FaunaPharma</td>
			<td style="width:119px;">Rapidexon vet</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:216px;">Disposable drills</td>
			<td style="width:71px;">Meisinger</td>
			<td style="width:119px;">HP 310&#160;104&#160;001&#160;001&#160;008</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dulbeco&#8217;s PBS 10X</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D1408</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dumont #5 forceps, 110 mm</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">91150-20</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Ealing microelectrode puller</td>
			<td style="width:71px;">Ealing</td>
			<td style="width:119px;">50-2013</td>
			<td style="width:167px;">Vertical puller for glass pipette production</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Eyes-ointment</td>
			<td style="width:71px;">Novartis</td>
			<td style="width:119px;">Viscotears</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Foredom drill control</td>
			<td style="width:71px;">Foredom&#160;</td>
			<td style="width:119px;">FM3545</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Foredom micro motor handpiece</td>
			<td style="width:71px;">Foredom</td>
			<td style="width:119px;">MH-145</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Gas anesthesia platform for mice</td>
			<td style="width:71px;">Stoelting</td>
			<td align="right" style="width:119px;">50264</td>
			<td style="width:167px;">Assembled on stereotaxic instrument</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:216px;">Hemostasis Collagen Sponge</td>
			<td style="width:71px;">Avitene, Ultrafoam BARD</td>
			<td style="width:119px;">Ref 1050050</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Imaris</td>
			<td style="width:71px;">Bitplane</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketamine</td>
			<td style="width:71px;">Intervet</td>
			<td style="width:119px;">Ketaminol vet</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Mai Tai DeepSee laser</td>
			<td style="width:71px;">Spectra-Physics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Metal holder</td>
			<td style="width:71px;">Neurotar</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro dressing forceps, 105 mm</td>
			<td style="width:71px;">Aesculap</td>
			<td style="width:119px;">BD302R</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Microfil</td>
			<td style="width:71px;">WPI</td>
			<td style="width:119px;">MF34G-5</td>
			<td style="width:167px;">Micro syringe filling capillaries</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M8410</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Multiphoton Laser Scanning Microscope</td>
			<td style="width:71px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">FV1000MPE</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NanoFil Syringe 10 microliter</td>
			<td style="width:71px;">WPI</td>
			<td style="width:119px;">NANOFIL</td>
			<td style="width:167px;">Hamilton syringe</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Nonwoven swabs 5&#215;5</td>
			<td style="width:71px;">Molnlycke Health Care</td>
			<td style="width:119px;">Mesoft</td>
			<td style="width:167px;">Surgical tampons</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">polyacrylic glue</td>
			<td style="width:71px;">Henkel</td>
			<td style="width:119px;">Loctite 401</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Round glass coverslip&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:71px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;"></td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1.5 thickness&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:216px;">Small animal stereotaxic instrument</td>
			<td style="width:71px;">David Kopf Instruments</td>
			<td align="right" style="width:119px;">900</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Stoelting mouse and neonatal rat adaptor</td>
			<td style="width:71px;">Stoelting</td>
			<td align="right" style="width:119px;">51625</td>
			<td style="width:167px;">Assembled on stereotaxic instrument.</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Student iris scissors, straight 11.5 cm</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">91460-11</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Sulforhodamine 101</td>
			<td style="width:71px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:119px;">S-359</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">UMP3 microsyringe pump and Micro 4 microsyringe pump controller</td>
			<td style="width:71px;">WPI</td>
			<td style="width:119px;">UMP3-1</td>
			<td style="width:167px;">Microinjector and controller</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:216px;">Xylazine</td>
			<td style="width:71px;">Bayer Health Care</td>
			<td style="width:119px;">Rompun vet</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

acute brain trauma in mice followed by longitudinal two-photon imaging

Akut beyin travması genellikle farklı kazalarında baş hasar sonuçları ve nüfusun önemli bir kısmını etkiler de, bunun için etkin bir tedavisi henüz yoktur. Şu anda kullanılan hayvan modellerinin Sınırlamalar patoloji mekanizmasının anlaşılmasını engellemektedir. Multiphoton mikroskopi uzunlamasına fizyolojik ve patolojik koşullar altında sağlam hayvan beyin içinde hücreleri ve dokuları inceleyerek sağlar. Burada, biz posttravmatik koşullar altında beyin hücre davranışı iki foton görüntüleme ile incelenmiştir akut beyin hasarı iki model tarif. Seçilen bir beyin bölgesi beyin parankiminde kontrollü bir genişlik ve derinlikte bir travma üretmek için keskin bir iğne ile yaralandı. Önerilen yöntem, aynı anda, ilaç uygulaması ile kombine edilebilir bir şırınga iğnesi ile stereotaksik dikmek kullanır. Bu yöntem, memeli beyin, akut travma patofizyolojik hücresel mekanizmaları incelemek için bir gelişmiş araç olarak kullanılabilir öneriyoruz <em&gt; In vivo. Kafa penceresi ve kafatası inceltme: Bu videoda, biz iki hazırlıkları ile akut beyin hasarı birleştirir. Biz de travma sonrası beyin rejenerasyon çok oturumlu görüntüleme için hem de hazırlıklar avantajları ve sınırlamaları tartışmak.

Transgenik farelerin posttravmatik beyin görüntüleme için 1), kronik kafa penceresi ve 2) kafatası incelme,: Biz iki operasyon prosedürlerini optimize ettik. Deney preparatların şematik görünümü, Şekil 1 &#39;de sunulmuştur. 0.3 mm OD (30 G) çelik iğne ile delme travmatik delinmiş de (Şekil 1A) uygulanır. Kafatası inceltme yaklaşık 300 mikron (Şekil 1C) bir sınırı empoze eğilimi ise başarılı bir kafa penceresi hazırlık Thy1-YFP-3D rekonst...

Watch this Scientific Journal Video about Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging at JoVE.com

Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Akut beyin travması bugüne kadar yeterli bir tedavisi olmayan ciddi bir yaralanma olduğunu. Multiphoton mikroskopi uzunlamasına akut beyin travması gelişim sürecini inceleyerek ve kemirgenlerde terapötik stratejiler sondalama sağlar. Beynin in vivo iki foton görüntüleme ile incelenmiştir akut beyin travması iki model bu protokolde gösterilmiştir.

Boyuna İki foton görüntüleme ile takip Farelerde Akut Beyin Travma

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

acute-brain-trauma-in-mice-followed-by-longitudinal-two-photon-imaging

Research

JoVE Journal

Medicine

12.3K Görüntüleme.  University of Helsinki.  Akut beyin travması bugüne kadar yeterli bir tedavisi olmayan ciddi bir yaralanma olduğunu. Multiphoton mikroskopi uzunlamasına akut beyin travması gelişim sürecini inceleyerek ve kemirgenlerde terapötik stratejiler sondalama sağlar. Beynin in vivo iki foton görüntüleme ile incelenmiştir akut beyin travması iki model bu protokolde gösterilmiştir. 

Video: Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Pseudofracture: An Acute Peripheral Tissue Trauma Model

Following trauma there is an early hyper-reactive inflammatory response that can lead to multiple organ dysfunction and high mortality in trauma patients; this response is often accompanied by a delayed immunosuppression that adds the clinical complications of infection and can also increase mortality.1-9 Many studies have begun to assess these changes in the reactivity of the immune system following trauma.10-15 
Immunologic studies are greatly supported through the wide variety of transgenic and knockout mice available for in vivo modeling; these strains aid in detailed investigations to assess the molecular pathways involved in the immunologic responses.16-21
The challenge in experimental murine trauma modeling is long term investigation, as fracture fixation techniques in mice, can be complex and not easily reproducible.22-30
This pseudofracture model, an easily reproduced trauma model, overcomes these difficulties by immunologically mimicking an extremity fracture environment, while allowing freedom of movement in the animals and long term survival without the continual, prolonged use of anaesthesia. The intent is to recreate the features of long bone fracture; injured muscle and soft tissue are exposed to damaged bone and bone marrow without breaking the native bone.
The pseudofracture model consists of two parts: a bilateral muscle crush injury to the hindlimbs, followed by injection of a bone solution into these injured muscles. The bone solution is prepared by harvesting the long bones from both hindlimbs of an age- and weight-matched syngeneic donor. These bones are then crushed and resuspended in phosphate buffered saline to create the bone solution.
Bilateral femur fracture is a commonly used and well-established model of extremity trauma, and was the comparative model during the development of the pseudofracture model. Among the variety of available fracture models, we chose to use a closed method of fracture with soft tissue injury as our comparison to the pseudofracture, as we wanted a sterile yet proportionally severe peripheral tissue trauma model. 31
Hemorrhagic shock is a common finding in the setting of severe trauma, and the global hypoperfusion adds a very relevant element to a trauma model. 32-36 The pseudofracture model can be easily combined with a hemorrhagic shock model for a multiple trauma model of high severity. 37

Pseudofracture, a reproducible murine model of sterile musculoskeletal trauma, allows for evaluation of late term post-traumatic immune responses. This article describes the procedural execution of the model step by step, including the potential for experimental model combinations to permit study of multiple trauma.

Pseudofracture: Akut Periferik Doku Travma Modeli

Following trauma there is an early hyper-reactive inflammatory response that can lead to multiple organ dysfunction and high mortality in trauma patients; ...

Tıp

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged mechanical ventilation, contributes to morbidity and mortality of critical illness, and studies on novel genetic or pharmacological targets are areas of intense investigation (1-3, 5, 8, 26, 30, 33-36). ALI is defined by the acute onset of the disease, which leads to non-cardiac pulmonary edema and subsequent impairment of pulmonary gas exchange (36). We have developed a murine model of ALI by using a pressure-controlled ventilation to induce ventilator-induced lung injury (2). For this purpose, C57BL/6 mice are anesthetized and a tracheotomy is performed followed by induction of ALI via mechanical ventilation. Mice are ventilated in a pressure-controlled setting with an inspiratory peak pressure of 45 mbar over 1 - 3 hours. As outcome parameters, pulmonary edema (wet-to-dry ratio), bronchoalveolar fluid albumin content, bronchoalveolar fluid and pulmonary tissue myeloperoxidase content and pulmonary gas exchange are assessed (2). Using this technique we could show that it sufficiently induces acute lung inflammation and can distinguish between different treatment groups or genotypes (1-3, 5). Therefore this technique may be helpful for researchers who pursue molecular mechanisms involved in ALI using a genetic approach in mice with gene-targeted deletion.

A murine model for ventilator induced lung injury is an important tool to study an acute lung injury in vivo. Here, we report an easy applicable in situ model for acute lung injury using high-pressure mechanical ventilation to induce acute failure of the lung.

Farelerde Akut Akciğer Hasarı tetikleyebilecek Basınç Kontrollü Havalandırma

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

The Use of Pharmacological-challenge fMRI in Pre-clinical Research: Application to the 5-HT System

Pharmacological MRI (phMRI) is a new and promising method to study the effects of substances on brain function that can ultimately be used to unravel underlying neurobiological mechanisms behind drug action and neurotransmitter-related disorders, such as depression and ADHD. Like most of the imaging methods (PET, SPECT, CT) it represents a progress in the investigation of brain disorders and the related function of neurotransmitter pathways in a non-invasive way with respect of the overall neuronal connectivity. Moreover it also provides the ideal tool for translation to clinical investigations. MRI, while still behind in molecular imaging strategies compared to PET and SPECT, has the great advantage to have a high spatial resolution and no need for the injection of a contrast-agent or radio-labeled molecules, thereby avoiding the repetitive exposure to ionizing radiations. Functional MRI (fMRI) is extensively used in research and clinical setting, where it is generally combined with a psycho-motor task. phMRI is an adaptation of fMRI enabling the investigation of a specific neurotransmitter system, such as serotonin (5-HT), under physiological or pathological conditions following activation via administration of a specific challenging drug.
The aim of the method described here is to assess brain 5-HT function in free-breathing animals. By challenging the 5-HT system while simultaneously acquiring functional MR images over time, the response of the brain to this challenge can be visualized. Several studies in animals have already demonstrated that drug-induced increases in extracellular levels of e.g. 5-HT (releasing agents, selective re-uptake blockers, etc) evoke region-specific changes in blood oxygenation level dependent (BOLD) MRI signals (signal due to a change of the oxygenated/deoxygenated hemoglobin levels occurring during brain activation through an increase of the blood supply to supply the oxygen and glucose to the demanding neurons) providing an index of neurotransmitter function. It has also been shown that these effects can be reversed by treatments that decrease 5-HT availability16,13,18,7. In adult rats, BOLD signal changes following acute SSRI administration have been described in several 5-HT related brain regions, i.e. cortical areas, hippocampus, hypothalamus and thalamus9,16,15. Stimulation of the 5-HT system and its response to this challenge can be thus used as a measure of its function in both animals and humans2,11.

The goal of this technique is to assess serotonin (5-HT) neurotransmitter function in the live and free-breathing animal with pharmacological magnetic resonance imaging (phMRI) and an intravenous challenge with a selective serotonin reuptake inhibitor (SSRI), fluoxetine.

Pre-klinik araştırma Farmakolojik-meydan fMRI Kullanımı: 5-HT Sistemi Uygulaması

Pharmacological MRI (phMRI) is a new and promising method to study the effects of substances on brain function that can ultimately be used to unravel ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology rely on the injection of a suspension of glioma cells into the brain parenchyma following incision of the dura-mater. Whereas the cells have to be injected superficially to be accessible to intravital two-photon microscopy, superficial injections fail to recapitulate the physiopathological conditions. Indeed, escaping through the injection tract most tumor cells reach the extra-dural space where they expand abnormally fast in absence of mechanical constraints from the parenchyma.
Our improvements consist not only in focally implanting a glioma spheroid rather than injecting a suspension of glioma cells in the superficial layers of the cerebral cortex but also in clogging the injection site by a cross-linked dextran gel hemi-bead that is glued to the surrounding parenchyma and sealed to dura-mater with cyanoacrylate. Altogether these measures enforce the physiological expansion and infiltration of the tumor cells inside the brain parenchyma. Craniotomy was finally closed with a glass window cemented to the skull to allow chronic imaging over weeks in absence of scar tissue development.
Taking advantage of fluorescent transgenic animals grafted with fluorescent tumor cells we have shown that the dynamics of interactions occurring between glioma cells, neurons (e.g. Thy1-CFP mice) and vasculature (highlighted by an intravenous injection of a fluorescent dye) can be visualized by intravital two-photon microscopy during the progression of the disease.
The possibility to image a tumor at microscopic resolution in a minimally compromised cerebral environment represents an improvement of current GBM animal models which should benefit the field of neuro-oncology and drug testing.

We have established a cortical orthotopic glioblastoma model in mice for intravital two-photon microscopy that recapitulates the biophysical constraints normally at play during the growth of the tumor. A chronic glass window replacing the skull above the tumor enables the follow-up of the tumor progression over time by two-photon microscopy.

Ortotopik Glioblastoma Fare Modeli Beyin parankim fiziksel kısıtlamaları bakımı ve Intravital İki foton Mikroskopi için uygundur

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

Ultrasound Imaging-guided Intracardiac Injection to Develop a Mouse Model of Breast Cancer Brain Metastases Followed by Longitudinal MRI

Breast cancer brain metastasis, occurring in 30% of breast cancer patients at stage IV, is associated with high mortality. The median survival is only 6 months. It is critical to have suitable animal models to mimic the hemodynamic spread of the metastatic cells in the clinical scenario. Here, we are introducing the use of small animal ultrasound imaging to guide an accurate injection of brain tropical breast cancer cells into the left ventricle of athymic nude mice. Longitudinal MRI is used to assessing intracranial initiation and growth of brain metastases. Ultrasound-guided intracardiac injection ensures not only an accurate injection and hereby a higher successful rate but also significantly decreased mortality rate, as compared to our previous manual procedure. In vivo high resolution MRI allows the visualization of hyperintense multifocal lesions, as small as 310 &#181;m in diameter on T2-weighted images at 3 weeks post injection. Follow-up MRI reveals intracranial tumor growth and increased number of metastases that distribute throughout the whole brain.

A breast cancer brain metastasis mouse model is established with ultrasound imaging-guided intracardiac injection of MDA-MB231/Br-GFP cells. Development of multifocal intracranial metastases has been monitored longitudinally using high-resolution 9.4 T MRI.

Boyuna MRG Ardından Meme Kanseri Beyin Metastaz bir Fare Modeli geliştirmek için ultrason görüntüleme eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon

Breast cancer brain metastasis, occurring in 30% of breast cancer patients at stage IV, is associated with high mortality. The median survival is only 6 ...

Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

Candida albicans biofilm development on biotic and/or abiotic surfaces represents a specific threat for hospitalized patients. So far, C. albicans biofilms have been studied predominantly in vitro but there is a crucial need for better understanding of this dynamic process under in vivo conditions. We developed an in vivo subcutaneous rat model to study C. albicans biofilm formation. In our model, multiple (up to 9) Candida-infected devices are implanted to the back part of the animal. This gives us a major advantage over the central venous catheter model system as it allows us to study several independent biofilms in one animal. Recently, we adapted this model to study C. albicans biofilm development in BALB/c mice. In this model, mature C. albicans biofilms develop within 48 hr and demonstrate the typical three-dimensional biofilm architecture. The quantification of fungal biofilm is traditionally analyzed post mortem and requires host sacrifice. Because this requires the use of many animals to perform kinetic studies, we applied non-invasive bioluminescence imaging (BLI) to longitudinally follow up in vivo mature C. albicans biofilms developing in our subcutaneous model. C. albicans cells were engineered to express the Gaussia princeps luciferase gene (gLuc) attached to the cell wall. The bioluminescence signal is produced by the luciferase that converts the added substrate coelenterazine into light that can be measured. The BLI signal resembled cell counts obtained from explanted catheters. Non-invasive imaging for quantifying in vivo biofilm formation provides immediate applications for the screening and validation of antifungal drugs under in vivo conditions, as well as for studies based on host-pathogen interactions, hereby contributing to a better understanding of the pathogenesis of catheter-associated infections.

Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

We present an experimental procedure of Candida albicans biofilm development in a mouse subcutaneous model. Fungal biofilms were quantified by determining the number of colony forming units and by a non-invasive bioluminescence imaging, where the amount of light that is produced corresponds with the number of viable cells.

Biyoparlaklık Görüntüleme Ardından Fare Subkutan Modeli Tıbben-ilgili yabancı Organları Candida albicans Biyofilm Geliştirme

Candida albicans biofilm development on biotic and/or abiotic surfaces represents a specific threat for hospitalized patients. So far, C. albicans ...

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

Remodeling of the brain vasculature is a common trait of brain pathologies. In vivo imaging techniques are fundamental to detect cerebrovascular plasticity or damage occurring overtime and in relation to neuronal activity or blood flow. In vivo two-photon microscopy allows the study of the structural and functional plasticity of large cellular units in the living brain. In particular, the thinned-skull window preparation allows the visualization of cortical regions of interest (ROI) without inducing significant brain inflammation. Repetitive imaging sessions of cortical ROI are feasible, providing the characterization of disease hallmarks over time during the progression of numerous CNS diseases. This technique accessing the pial structures within 250 &#956;m of the brain relies on the detection of fluorescent probes encoded by genetic cellular markers and/or vital dyes. The latter (e.g., fluorescent dextrans) are used to map the luminal compartment of cerebrovascular structures. Germane to the protocol described herein is the use of an in vivo marker of amyloid deposits, Methoxy-O4, to assess Alzheimer&#39;s disease (AD) progression. We also describe the post-acquisition image processing used to track vascular changes and amyloid depositions. While focusing presently on a model of AD, the described protocol is relevant to other CNS disorders where pathological cerebrovascular changes occur.

Longitudinal In Vivo Imaging of the Cerebrovasculature: Relevance to CNS Diseases

This manuscript describes a procedure to track the remodeling of the cerebrovasculature during amyloid plaque accumulation in vivo using longitudinal two-photon microscopy. A thinned-skull preparation enables the visualization of fluorescent dyes to assess the progression of cerebrovascular damage in a mouse model of Alzheimer&#39;s disease.

uzunlamasına<em&gt; İn Vivo</em&gt; Cerebrovasculature Görüntüleme: MSS Hastalıkları uygunluk

Remodeling of the brain vasculature is a common trait of brain pathologies. In vivo imaging techniques are fundamental to detect cerebrovascular ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. Various approaches have been described, such as the inhalation of aerosolized LPS as well as nasal or intratracheal instillation. The presented protocol describes a detailed step-by-step procedure to induce ALI in mice by direct intratracheal LPS instillation and perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, and lung tissue. After intraperitoneal sedation, the trachea is exposed and LPS is administered via a 22 G venous catheter. A robust and reproducible inflammatory reaction with leukocyte invasion, upregulation of proinflammatory cytokines, and disruption of the alveolo-capillary barrier is induced within hours to days, depending on the LPS dosage used. Collection of blood samples, BAL fluid, and lung harvesting, as well as the processing for FACS analysis, are described in detail in the protocol. Although the use of the sterile LPS is not suitable to study pharmacologic interventions in infectious diseases, the described approach offers minimal invasiveness, simple handling, and good reproducibility to answer mechanistic immunological questions. Furthermore, dose titration as well as the use of alternative LPS preparations or mouse strains allow modulation of the clinical effects, which can exhibit different degrees of ALI severity or early vs. late onset of disease symptoms.

Presented here is a step-by-step procedure to induce acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation and to perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage fluid, and lung tissue. Minimal invasiveness, simple handling, good reproducibility, and titration of disease severity are advantages of this approach.

Doğrudan Intratracheal Lipopolysaccharide Instilasyon ile farelerde akut akciğer hasarının İndükleme

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Orthopedic Robot-Assisted Femoral Neck System in the Treatment of Femoral Neck Fracture

Cannulated screw fixation is the main therapy for femoral neck fractures, especially in young patients. The traditional surgical procedure uses C-arm fluoroscopy to place the screw freehand and requires several guide wire adjustments, which increases the operation time and radiation exposure. Repeated drilling can also cause damage to the blood supply and bone quality of the femoral neck, which can be followed by complications such as screw loosening, nonunion, and femoral head necrosis. In order to make fixation more precise and reduce the incidence of complications, our team applied robot-assisted orthopedic surgery for screw placement using the femoral neck system to modify the traditional procedure. This protocol introduces how to import a patient's X-ray information into the system, how to perform screw path planning in software, and how the robotic arm assists in screw placement. Using this method, the surgeons can place the screw successfully the first time, improve the accuracy of the procedure, and avoid radiation exposure. The whole protocol includes the diagnosis of femoral neck fracture; the collection of intraoperative X-ray images; screw path planning in the software; precise placement of the screw under the assistance of the robotic arm by the surgeon; and verification of the implant placement.

This article introduces a method of robot-assisted orthopedic surgery for screw placement during the treatment of femoral neck fracture using the femoral neck system, which allows for more accurate screw placement, improved surgical efficiency, and fewer complications.

Femur Boyun Kırığı Tedavisinde Ortopedik Robot Yardımlı Femur Boyun Sistemi

Cannulated screw fixation is the main therapy for femoral neck fractures, especially in young patients. The traditional surgical procedure uses C-arm ...

Urethral Stricture Induction Followed by Buccal Mucosa Graft Urethroplasty in a Rat Model

Urethral reconstruction is an important area of expertise for urologists. The buccal mucosa is considered the best option when urethral grafting is necessary, although in some cases, it is inappropriate or needs to be optimized to repair a given stricture. Therefore, developing innovative procedures and evaluating their putative success in experimental models is crucial to fit the clinical need. With this goal, this study describes a protocol in which urethral stricture was induced by electrocautery in Wistar rats. Urethral reconstruction was performed 1 week later with a buccal mucosa graft, harvested from the lower lip, and placed in a ventral onlay fashion. A retrograde urethrogram showed a significant improvement in urethral diameter after urethroplasty compared to the respective value after stricture induction. Additionally, the graft placement was assessed by blood perfusion analysis using laser Doppler. As expected, a dark blue area corresponded to the non-vascularized buccal mucosa graft. This procedure can successfully simulate the normal pathophysiological process of urethral injury and tissue modulation, as well as urethral reconstruction using a buccal mucosa graft in a reproducible manner, and serve as the basis for future research based on tissue engineering or urethral grafts.

In the present protocol, a urethral stricture induction was developed in Wistar rats, followed by urethral reconstruction with a buccal mucosa graft. A retrograde urethrogram and laser Doppler assessment were performed, validating urethral reconstruction (after stricture formation) and graft placement.

Üretra darlığı indüksiyonunu takiben sıçan modelinde bukkal mukoza greft üretroplastisi

Urethral reconstruction is an important area of expertise for urologists. The buccal mucosa is considered the best option when urethral grafting is ...