Bu çalışma RO1 DK064938 (TH) tarafından desteklenmektedir.

<ol>
	<li>Shapiro, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).</li><li>Weir, G. C., Bonner-Weir, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+as+a+treatment+for+diabetes.">Islet transplantation as a treatment for diabetes.</a> J Am Optom Assoc. 69, 727-732 (1998).</li><li>Gangemi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+for+brittle+type+1+diabetes:+the+UIC+protocol.">Islet transplantation for brittle type 1 diabetes: the UIC protocol.</a> Am J Transplant. 8, 10-1111 (2008).</li><li>Zmuda, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+of+ATF3,+an+adaptive-response+gene,+protects+islets+and+ameliorates+inflammation+in+a+syngenic+transplantation+model.">Deficiency of ATF3, an adaptive-response gene, protects islets and ameliorates inflammation in a syngenic transplantation model.</a> Diabetologia. , (2010).</li><li>Bottino, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+Human+Islets+to+Isolation+Stress+and+the+Effect+of+Antioxidant+Treatment.">Response of Human Islets to Isolation Stress and the Effect of Antioxidant Treatment.</a> Diabetes. 53, 2559-2568 (2004).</li><li>Markmann, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+islet+cell+culture+in+vitro+at+24+degrees+C+on+graft+survival+and+MHC+antigen+expression.">The effect of islet cell culture in vitro at 24 degrees C on graft survival and MHC antigen expression.</a> Transplantation. 49, 272-277 (1990).</li><li>Terasaka, R., Lacy, P. E., Hauptfeld, V., Bucy, R. P., Davie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cyclosporin-A,+low-temperature+culture,+and+anti-Ia+antibodies+on+prevention+of+rejection+of+rat+islet+allografts.">The effect of cyclosporin-A, low-temperature culture, and anti-Ia antibodies on prevention of rejection of rat islet allografts.</a> Diabetes. 35, 83-88 (1986).</li><li>Ricordi, C., Lacy, P. E., Sterbenz, K., Davie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+culture+of+human+islets+or+in+vivo+treatment+with+L3T4+antibody+produces+a+marked+prolongation+of+islet+human-to-mouse+xenograft+survival.">Low-temperature culture of human islets or in vivo treatment with L3T4 antibody produces a marked prolongation of islet human-to-mouse xenograft survival.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 84, 8080-8084 (1987).</li><li>Schnedl, W. J., Ferber, S., Johnson, J. H., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STZ+transport+and+cytotoxicity.+Specific+enhancement+in+GLUT2-expressing+cells.">STZ transport and cytotoxicity. Specific enhancement in GLUT2-expressing cells.</a> Diabetes. 43, 1326-1333 (1994).</li><li>Eckhard, M., Brandhorst, D., Brandhorst, H., Brendel, M. D., Bretzel, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+in+osmolality+and+range+of+density+of+a+continuous+ficoll-sodium-diatrizoate+gradient+for+isopycnic+purification+of+isolated+human+islets.">Optimization in osmolality and range of density of a continuous ficoll-sodium-diatrizoate gradient for isopycnic purification of isolated human islets.</a> Transplantation Proceedings. 36, 2849-2854 (2004).</li><li>Gores, P. F., Rabe, F., Sutherland, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+survival+of+intraportal+versus+subrenal+capsular+transplanted+islet+allografts.">Prolonged survival of intraportal versus subrenal capsular transplanted islet allografts.</a> Transplantation. 43, 747-749 (1987).</li><li>Nasr, I. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testicular+Immune+Privilege+Promotes+Transplantation+Tolerance+by+Altering+the+Balance+between+Memory+and+Regulatory+T+Cells.">Testicular Immune Privilege Promotes Transplantation Tolerance by Altering the Balance between Memory and Regulatory T Cells.</a> J Immunol. 174, 6161-6168 (2005).</li><li>Merani, S., Toso, C., Emamaullee, J., Shapiro, A. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+implantation+site+for+pancreatic+islet+transplantation.">Optimal implantation site for pancreatic islet transplantation.</a> British Journal of Surgery. 95, 1449-1461 (2008).</li><li>Inoue, M., Maeno, T., Hatchell, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+of+allografted+pancreatic+islets+in+the+subretinal+space+in+rats.">Survival of allografted pancreatic islets in the subretinal space in rats.</a> Ophthalmic Res. 35, 48-53 (2003).</li></ol>

Yukarıdaki bölümlerde, yalıtma ve fare pankreas adacık nakli için ayrıntılı adımlar nitelendirdi. Burada, kısaca prosedürlerinin başarısı için kritik adımları vurgulayın. 1. Islet izolasyon 37 cannulating sonra koledok (2.3), pankreas dinç sallayarak, önemli adımlar koledok (2.2.3) duodenal açılış üzerinden hemostat kelepçe konumlandırma optimal bir enzimatik sindirim süresi (1.4) tespit. ° C sindirmek (3.2) ve ekzokrin hücre kontaminasyon (3.3.7 ve 3.3.16) kaldırılması. Bu adımlar, adacıklar kalite, verim ve saflık üzerinde dramatik bir etkisi var. Belki teknik olarak en zorlu adım koledok kanülasyonu. Birçok farelerde, koledok çevreleyen fasya nedeniyle görselleştirmek için zor olabilir. Bu nedenle, bu girişimleri sadece fasya doku penetrasyonu koledok sonucu cannulate için yaygındır. Bu gibi durumlarda, Liberase çevreleyen bağ dokusu doldurmaya başlar ve pankreas serpmek değildir. Bu görülürse, Liberase akışını durdurmak ve safra kanalı lümen içine nüfuz eder, böylece iğne yeniden konumlandırmak. Uygulama ile, hızlı iğne yerleşimi için en uygun pozisyonu belirlemek ve gevrek kanalı zarar vermeden kanülasyon tamamlamak mümkündür. 2. Adacık nakli Kritik adımlar, diyabet (5.1) STZ indüksiyon ve verimli bir şekilde teslim adacıklar subkapsüler çantası (5.3.14-5.3.16). STZ insülin salgılayan hücreler adacıklar 9 β-hücrelerinde seçici toksik doğal olarak bulunan bir glukoz analoğu. Ancak, bu seçici toksisite nispeten dar bir konsantrasyon aralığında oluşur. Bu STZ yüksek dozlarda hiperglisemi yokluğunda hızlı (2-3 gün) öldürücülüğü neden olabilir gerçeği kanıtladığı. Bu nedenle, herhangi bir büyük ölçekli deneyler başlatılan önce kullanılan farelerin zorlanma ve yaş için optimal doz STZ tanımlamak için dikkat edilmelidir. Subkapsüler kese adacıklar fiziki teslimat da önemli bir adımdır. Tutarlı sonuçlar elde etmek için, kendi doğum sırasında adacık kaybını en aza indirmek için zorunludur. Enjekte edilen hacim çok büyükse keseyi kaplayan böbrek kapsül defektleri veya yırtık ya da bu durum oluşabilir. Kapsül hasar ve subkapsüler çantası hazırlamak için düz cam prob kullanarak nazik ve dikkatli bir manipülasyon ile önlenebilir. Ayrıca, enjeksiyon hacmi adım 5.3.6.3 süpernatant dikkatli kaldırılması ile minimize edilebilir. Süpernatantı tortulaşmış adacıklar seviyeye çıkarılırsa, genellikle subkapsüler poşet 400 ila 500 adacık yerleştirmek için yeterli oda daha vardır. Ancak, enjeksiyon hacmi çok büyükse, adacıklar deney tekrarlanabilirlik ödün nakli işlemi sırasında kese sızıntı olasılığı daha yüksektir. Bu protokol kapsamında, bazı adımlar değiştirebilir ve yine de tatmin edici sonuçlar elde etmek mümkündür. Bunlar şunlardır: (a), pankreas sindirmek için farklı bir enzim kullanımı, (b), pankreas enzim sağlamak için farklı bir yöntem, (c) sürekli bir Ficoll-sodyum-diatrizoate (FSD) gradient kullanımı tek yoğunluğu Histopaque1077 adım, ve (d), böbrek subcapsule daha diğer yerlerde adacık nakli yerine. <ol class="lalpha"><li> Bu protokolde, Liberase pankreas içinde hücre-hücre rehber zayıflatmak için kullanılır. Liberase esas olarak pankreas adacık bırakmadan yararlı kolajenazlar yüksek oranda saflaştırılmış bir karışımıdır. Ancak, az saflaştırılmış kolajenazlar benzer bir sonuç gerçekleştirerek yeteneğine sahiptirler. Bu nedenle, sürece sindirim durumu yüksek adacık kalitesi elde etmek için optimize edilmiştir, verim ve saflık, pankreas sindirerek için farklı piyasada bulunan enzim preparatları kullanmak mümkün. </li><li> Pankreasın duktal perfüzyon olmadan enzim sindirimi de mümkündür. Koledok ile Liberase Teslimat pankreas enzim yüzey alanı maksimum maruz kalma sağlar. Bu sonuçlar, pankreas ve sağlam adacıklar daha serbest, daha eşit sindirim. Ancak, pankreas enzim yüzey alanını artırmak için diğer adımları da kullanılabilir. Örneğin, Liberase kuluçka veya doğrudan pankreas kapsülü ile Liberase enjekte önce kıyma pankreas adacık izole etmek için kullanılabilir. Ancak, Liberase teslim başka hiçbir yöntem koledok ile perfüzyon kadar etkili. Bu nedenle, kıyma ya da direkt enjeksiyon koledok hasar ve perfusable değilse son çare olarak ayrılmış olmalıdır. </li><li> Adacıklar ekzokrin hücreleri ayırmak için alternatif bir yöntem içerir.Histopaque1077 10 yerine FSD degrade kullanın. Bu protokol ekzokrin hücrelerden adacık verimli bir ayırma parçası iki hücre tipleri arasında bir yoğunluk farkı nedeniyle. Histopaque1077 1,0771 g / ml yoğunluğu 25 ° C Bu sıcaklıkta, Histopaque adacıklar ama ekzokrin hücreler daha az yoğun daha yoğundur. Bu nedenle, adacıklar, santrifüj Histopaque1077 pelet ekzokrin hücreler kuvveti altında yüzey kaldırırken. Prensip olarak, bu adımda ekzokrin hücreler adacıklar ayırabilirsiniz bir yoğunluk ile herhangi bir diğer madde kullanılan ve FSD degrade böyle bir maddedir. </li><li> Bu protokolde kullanılan böbrek kapsülü adacık nakli için konumu açısından, birkaç olası sitelerin biridir. Böbrek subcapsule farelerde nakli en sık bildirilen site olmakla birlikte, diğer nakli siteleri etkili olduğu bulundu ve hepatik portal ven, subretinal alan, testis, epididim yağ yastığı, dalak ve pankreas 11-14 bile olmuştur. Bu konumların her biri kendi avantajları ve zorlukları vardır. Bu nedenle, adacık nakli için bir site seçimi ele sorular ve deneyler belirli koşullar tarafından tespit edilmelidir. </li></ol> Adacık nakli sınırlamaları aşmak stratejileri önemli ölçüde terapötik potansiyelini artıracaktır inanıyordu. Bu nedenle, bu protokol bir fare modeli ayrıntılı olarak kullanımı gibi stratejiler belirlenmesi için cazip bir yaklaşım sunmaktadır.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>RPMI 1640</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>31800-022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Liberase TL</td>
<td>Reagent</td>
<td>Roche</td>
<td>05401020001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>10437-028</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Histopaque1077</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>10771</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin Streptomycin </td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Citrate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>S4641</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Streptozotocin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>S-0130</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HCl</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>A144-212</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane</td>
<td>Reagent</td>
<td>Vedco</td>
<td>ISOSOL</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass Capillary Tubes</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>22362574</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Insulin Syringe</td>
<td>Equipment</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>329461</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>27 Gauge Syringe Needle</td>
<td>Equipment</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>305109</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hamilton Syringe #1702</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>14813133</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10cm Petri Plates</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>0875712</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6cm Petri Plates</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>07770212</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-0 Suture</td>
<td>Equipment</td>
<td>Ethicon</td>
<td>8726H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PE 50 Flexible Tubing</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>NC9083963</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5ml Disposable Syringe</td>
<td>Equipment</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>309603</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>50ml Conical Tube</td>
<td>Equipment</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352098</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>15ml Conical Tube</td>
<td>Equipment</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352097</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.1mm Nylon Mesh</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>22363549</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.419mm Wire Mesh</td>
<td>Equipment</td>
<td>Newark Wire Cloth Company</td>
<td>0300241</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water Bath Incubator</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15-462-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>Equipment</td>
<td>Zeiss</td>
<td>Stemi SV6</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Inverted Microscope</td>
<td>Equipment</td>
<td>Nikon</td>
<td>TMS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue Culture Incubator</td>
<td>Equipment</td>
<td>Napco</td>
<td>6300</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Scissors</td>
<td>Equipment</td>
<td>Kent Scientific</td>
<td>INS14393</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>McPherson-Vannas Scissors</td>
<td>Equipment</td>
<td>Kent Scientific</td>
<td>INS500260</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Curved Forceps</td>
<td>Equipment</td>
<td>Kent Scientific</td>
<td>INS15915</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemostatic Forceps</td>
<td>Equipment</td>
<td>Kent Scientific</td>
<td>INS 500451</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane Nebulizer</td>
<td>Equipment</td>
<td>Smiths Medical Surgivet</td>
<td>ISOTech 4 OHMEDA</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Swing Bucket Centrifuge</td>
<td>Equipment</td>
<td>Dupont &#x2013; Sorvall</td>
<td>RT6000D</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Swing Bucket Rotor</td>
<td>Equipment</td>
<td>Dupont &#x2013; Sorvall</td>
<td>H1000B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>pH Meter</td>
<td>Equipment</td>
<td>Mettler Toledo/ Fisher Scientific</td>
<td>09313509</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gel Loading Tips</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>05408151</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>p200 Tips</td>
<td>Equipment</td>
<td>USA Scientific</td>
<td>111-0730</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

a method for murine islet isolation and subcapsular kidney transplantation

Ballinger ve Reckard diyabetik kemirgenler Langerhans adacıkları bu nakli gösteren ilk öncü çalışması, kan şekeri düzeyleri normale beri, adacık nakli, Tip 1 diyabet 1,2 için potansiyel bir tedavi olarak öne sürülmüştür. Daha yakın zamanda, insan adacık nakli gelişmeler, bu görünümü 1,3 daha da güçlendirdi . Ancak, iki önemli sınırlamalar, yaygın klinik bir gerçeklik olmaktan adacık nakli önlemek için: (a) önemli ölçüde etkileyen ciddi potansiyel alıcıların sayısını azaltır hasta başına adacıklar, çok sayıda gereksinimi, ve (b) ağır immunsupresyon ihtiyacı, uzun vadeli immünosupresyon güvenlik açığı nedeniyle hastalar pediatrik popülasyonda. Bu sınırlamaları aşmak Stratejileri adacık nakli tedavi programını geliştirmek için potansiyel var. Adacık nakli fare böbrek kapsülü altında adacık nakli geliştirmek için çeşitli stratejiler araştırmak için yaygın olarak kabul gören bir model. Bu deney, yüksek kaliteli adacıklar ve diyabetik alıcıya adacıklar implantasyonu izolasyon gerektirir. Her iki prosedür video metin ile daha iyi ortaya konabilir cerrahi işlem gerektirmez. Burada, video ve yazılı bir protokol hem de bu işlemler için ayrıntılı adımlar belge. Ayrıca farklı nakli modelleri kısaca tartışın: singeneik, allojenik, singeneik otoimmün ve otoimmün allojenik.

Watch this Scientific Journal Video about A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation at JoVE.com

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Izole adacık transplantasyonu tip 1 şeker hastalığı için potansiyel bir tedavi olarak öne sürülmüştür. Burada, fare pancreata adacıkları izole, ve böbrek subkapsüler alan nakli için bir yöntem açıklanmaktadır.

Murin Islet İzolasyon ve subkapsüler Böbrek Nakli Bir Yöntem

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

a-method-for-murine-islet-isolation-subcapsular-kidney

Research

JoVE Journal

Medicine

62.8K Görüntüleme.  The Ohio State University. Izole adacık transplantasyonu tip 1 şeker hastalığı için potansiyel bir tedavi olarak öne sürülmüştür. Burada, fare pancreata adacıkları izole, ve böbrek subkapsüler alan nakli için bir yöntem açıklanmaktadır.