1. Tüm bileşenler Akış Hücre Sistemi Meclisi Monte akış sistemi içerir: otoklavlanabilir borular, kabarcık tuzakları, orta / atık şişe ve Şekil 1&#39;de gösterildiği gibi akış hücreleri. Bütün bu parçalar deneyler arasında yeniden kullanılabilir. <img src="/files/ftp_upload/2383/2383fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 akış hücresi sistemi kurulumu (setup temel bileşenler). Orta şişesi, bir peristaltik pompa, kabarcık tuzakları, akış hücresi, atık şişe, tüp ve çeşitli konektörler birbirine çeşitli bölümleri: akış hücresi sistemi birkaç bileşenden oluşur. Şekil nazik Rune Lyngklip tarafından sağlanmaktadır. 2. Akış Hücre Meclisi <ol><li> Akış hücresi (Şekil 2a) (Şekil 3) bir şırınga kullanılarak ince şerit, silikon yapıştırıcı ile tedavi edilir. </li><li> Silikon hatları (Şekil 3) üstüne bir kapak kayma yerleştirin. Cam kapak slipleri P. için alt tabaka olarak kullanılan aeruginosa, S. PVC kapak fişleri için uygulanır cerevisiae biyofilm </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2383/2383fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2 akış hücresi ve kabarcık tuzak 2 şematik çizimi. A) akış hücresi b) kabarcık tuzak, DTU Sistemleri Biyoloji üretimi için kullanılan boyutları ayrıntılı bir açıklama. John Wiley &amp; Sons, Inc (DTU Sistemleri Biyoloji eskiden figürü tasvir gibi, Biocentrum hak kazandı) izni ile yayımlanmaktadır <img src="/files/ftp_upload/2383/2383fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3 tutturmak için cam alt tabaka silikon tutkal uygulama hatlarının çizimi. Akış hücresi eklemek belirtilen kapak cam silikon tutkal üzerine yerleştirilir. <ol start="3"><li> Akış hücresi ters çevirin ve kapağı aşağı kayma yüzü düz bir yüzey üzerine yerleştirin. Akışını hücrenin tabanına kapak kayma itmek için akış hücresi arka hafifçe basın. Akış hücresi ters çevirin ve silikon mühürlü olmayan alanlarda olup olmadığını kontrol edin. Bir şırınga kolu (piston) kısmını hafifçe cam ve akış hücresi birlikte basın için bir araç olarak kullanılabilir. </li></ol> 3. Orta Şişe <ol><li> Orta bir şişe içinde bir beslenme silikon tüp (2 mm iç çap) ve diğer ucunda düz bir bağlantı eklemek. </li><li> (Orta içerik için &quot;medya&quot; paragrafına bakınız) şişe orta Konnektör ve şişe metal görünümlü folyo ile örtün ve orta otoklavda. Otoklav zaman orta şişe boş tedarik tüp sonuna orta şişe veya bir sifon etkisi sıvı seviyesinden sabit olduğundan emin olun. </li></ol> 4. Bubble Trap, Akış Hücre ve Pompa bağlama Şekil 1&#39;de anahat göre tüm boru birleştirin. Marprene tüp uygulanan peristaltik pompa geçer parçası dışında silikon tüp kullanın. <ol><li> Tüm bireysel akış odalarına orta şişe tüp bağlanmak için gerekli sayıda deneyde uygulanan girişler bir tüp ayrıldı. T-konnektör (bkz. Şekil 1, T-konnektör) pompa Marprene tüplerine besleme tüpü istenilen sayıda bağlantı tüpleri yapmak için kullanın. Genellikle sisteminde arızalar durumunda bileşenlerinin belirlenmesi kolaylaştırmak için, sistem boyunca, boru ve akış hücreleri aynı sırasına tutmak iyi bir fikirdir. </li><li> Düz bağlantılar kullanarak pompa tüpler Marprene her bireyin beslenme tüpü (çapı 2 mm) bağlayın. Bir baloncuk kapanı Marprene boru (Şekil 2b), orta silikon tüp (çapı 1 mm) ile bağlayın. Pompa balonu tuzak en yüksek kısmında girişine bağlı olduğundan emin olun. </li><li> Akış hücresi girişi (çapı 1 mm) balonu tuzakları çıkış borusunun bağlayın, bu borulama uzunluğunun akış hücresi konfokal mikroskop (genellikle 1 m) sahneye taşınacak izin verdiğinden emin olun. </li><li> Balonu tuzakların üstüne yerleştirin 5 ml şırınga. Üstleri uygun kapaklarla kapatın. </li><li> Kısa, yaklaşık 40 mm parça (çapı 1 mm), boru akış hücresi çıkışına bağlamak ve gerekli uzunluğu (2 mm çapında) bir atık tüpü takmak için düz konnektör &quot;indirgeyici&quot; kullanabilirsiniz. Atık kabını atık tüpleri yerleştirin. </li><li> Önemlisi, atık konteyneri her zaman asla akış hücre düzeyinde aşağıda akış hücreleri gibi aynı düzeyde yer olmalıdır. Ayrıca, atık boru sonuna akış hücreleri işlerken gömme bir sifon etkisi nedeniyle geri önlemek için beklenen atık sıvı seviyesinden sabit olduğundan emin olun. </li></ol> 5. AKIŞ SİSTEMİ STERİLİZASYON VE YIKAMA <ol><li> Kabarcık tuzak kapaklarını çıkartın ve onları steril tutmak için% 70 etanol koyun. </li><li> % 0.5 (v / v) suda sodyum hipoklorit ile doldurmak için en yüksek pompa hızında çalıştırın. &lt;/ P&gt; <li> , Kabarcık tuzakları tamamen dolu olduğunda geri kabarcık tuzak kapakları yerleştirin. </li><li> Akış odasında kabarcıkları akış hücreleri dokunun. Kırılgan cam kapak zarar vermemeye özen gösterin. </li><li> 3 ml / h / kanal (0.2 mm / s lineer akış hızı) bir akış hızında 3-4 saat süreyle sterilize etmek için izin verin. </li><li> Sistemi tüm hipoklorit yıkamak için 2-3 kez yıkayın. Sistem steril su ile doldurun ve boş. Kabarcık tuzaklar her yıkama arasında tamamen boşaltılmalıdır. Bu kabarcık tuzakları boşaltılmış kadar hava pompalama tarafından yapılabilir. Boşalttıktan sonra, sistem doldurmadan önce balonu tuzakları kapaklarını çıkarın. Balonu tuzakları tamamen sıvı ile doldurulmuş sonra kapaklarını değiştirin. Gerektiği gibi tekrarlayın. </li><li> Gece boyunca düşük akış hızı (1-3 ml / h / kanal) sistemi aracılığıyla Run steril su ya da bir sonraki adıma geçin. </li><li> Orta şişe girişine bağlayın ve deney yapılacaktır sıcaklığında düşük akış hızı (3 ml / h / kanal) gece boyunca orta ile yıkayın. Not: Sistemin orta dolu önce kabarcık tuzakları su boşaltılmalıdır. </li></ol> 6. AKIŞ HÜCRESİ inokülasyonu <ol><li> Bir gecede kültürden istenen bir optik yoğunluk seyreltme (P. aeruginosa örneğin 0.001 OD 600Nm ve S. cerevisiae 0.1 OD 600Nm). </li><li> 27G iğne ile 0.5 ml şırınga odasına doldurmak için yeterli inokulum yüklemek için kullanın. 250 mcL (Şekil 2 x 4 mm x 1 mm, 40 mm) bu çalışmada belirtilen boyutlar akış odaları için yeterli. </li><li> Peristaltik pompa durdurun. </li><li> Kelepçe sistemine geri akışı önlemek için akış hücresi önde gelen silikon tüp. </li><li> % 70 etanol ile silerek silikon tüp aşılama sitesi sterilize edin. </li><li> Silikon tüp içine iğne takın ve akış hücresi giriş ucu tanıtmak. Yavaş yavaş odasına inokulum enjekte (hava kabarcıkları enjekte etmek için dikkatli olmak). </li><li> İğneyi çıkarın ve enjeksiyon sitesi üzerinden silikon yapıştırıcı kullanarak delik hemen mühürleme suretiyle% 70 etanol ile enjeksiyon yerinde silin. </li><li> Akış hücresi ters çevirin ve mikro-organizmalar altyapısını uygun akış hücresi akışı olmadan 1 saat izin verin. </li><li> Akış hücresi açın, orta pompa başlatmak (3 ml / h / kanal) ve silikon tüp kapalı kelepçe. </li><li> Sistem 37, inkübasyon için konur ° C P. durumda aeruginosa ve 30 ° C S. durumda cerevisiae. </li><li> Akışını odaları Biyofilm CLSM tarafından görüntülenmiştir olabilir. </li></ol> 7. MİKROSKOBİSİ İÇİN biyofilm boyama <ol><li> Uygun boyama bir seyreltme (örneğin 1:1000 Syto 9 leke canlı S. cerevisiae) </li><li> Peristaltik pompa durdurun. </li><li> Kelepçe akış hücresi önde gelen silikon boru. </li><li> % 70 etanol ile silerek silikon tüp aşılama sitesi sterilize edin. </li><li> 27G iğne ile 0.5 ml şırınga odasına doldurmak için yeterli boyama çözüm yüklemek için kullanın. 250 mcL Burada kullanılan akış odaları için yeterli. </li><li> Silikon tüp içine iğne takın ve akış hücresi giriş ucu tanıtmak. Yavaş yavaş odasına boyama solüsyonu (baloncuklar enjekte etmek için değil dikkatli) enjekte edilir. </li><li> İğneyi çıkarın ve enjeksiyon anında mühürleme suretiyle% 70 etanol ile enjeksiyon yerinde silin. </li><li> Akış hücresi, 15 dakika boyunca akışı olmadan bekletin. </li><li> Kelepçe çıkarın ve akışını başlatmak (3 ml / h / kanal) </li><li> CLSM veri elde </li></ol>

<ol>
	<li>Costerton, J. W., Stewart, P. S., Greenberg, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+biofilms:+a+common+cause+of+persistent+infections.">Bacterial biofilms: a common cause of persistent infections.</a> Science. 284, 1318-1322 (1999).</li><li>Sternberg, C., Tolker-Nielsen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growing+and+analyzing+biofilms+in+flow+cells.">Growing and analyzing biofilms in flow cells.</a> Curr Protoc Microbiol. Chapter 1, 2-2 (2006).</li><li>Heydorn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+reproducibility+in+flow-chamber+biofilms.">Experimental reproducibility in flow-chamber biofilms.</a> Microbiology. 146, 2409-2415 (2000).</li><li>Pamp, S. J., Tolker-Nielsen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+roles+of+biosurfactants+in+structural+biofilm+development+by+Pseudomonas+aeruginosa.">Multiple roles of biosurfactants in structural biofilm development by Pseudomonas aeruginosa.</a> J Bacteriol. 189, 2531-2539 (2007).</li><li>Haagensen, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+and+distribution+of+colistin-+and+sodium+dodecyl+sulfate-tolerant+cells+in+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms.">Differentiation and distribution of colistin- and sodium dodecyl sulfate-tolerant cells in Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> J Bacteriol. 189, 28-37 (2007).</li><li>Klausen, M., Aaes-Jorgensen, A., Molin, S., Tolker-Nielsen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+bacterial+migration+in+the+development+of+complex+multicellular+structures+in+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms.">Involvement of bacterial migration in the development of complex multicellular structures in Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> Mol Microbiol. 50, 61-68 (2003).</li><li>Pamp, S. J., Gjermansen, M., Johansen, H. K., Tolker-Nielsen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+to+the+antimicrobial+peptide+colistin+in+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+is+linked+to+metabolically+active+cells,+and+depends+on+the+pmr+and+mexAB-oprM+genes.">Tolerance to the antimicrobial peptide colistin in Pseudomonas aeruginosa biofilms is linked to metabolically active cells, and depends on the pmr and mexAB-oprM genes.</a> Mol Microbiol. 68, 223-240 (2008).</li><li>Pamp, S. J., Sternberg, C., Tolker-Nielsen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insight+into+the+microbial+multicellular+lifestyle+via+flow-cell+technology+and+confocal+microscopy.">Insight into the microbial multicellular lifestyle via flow-cell technology and confocal microscopy.</a> Cytometry Part A. 75A, 90-103 (2009).</li><li>Barken, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+type+IV+pili,+flagellum-mediated+motility+and+extracellular+DNA+in+the+formation+of+mature+multicellular+structures+in+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms.">Roles of type IV pili, flagellum-mediated motility and extracellular DNA in the formation of mature multicellular structures in Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> Environ Microbiol. 10, 2331-2343 (2008).</li><li>Qin, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+autolysin-mediated+DNA+release+in+biofilm+formation+of+Staphylococcus+epidermidis.">Role of autolysin-mediated DNA release in biofilm formation of Staphylococcus epidermidis.</a> Microbiology. 153, 2083-2092 (2007).</li><li>Allesen-Holm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+characterization+of+DNA+release+in+Pseudomonas+aeruginosa+cultures+and+biofilms.">A characterization of DNA release in Pseudomonas aeruginosa cultures and biofilms.</a> Mol Microbiol. 59, 1114-1128 (2006).</li><li>Heydorn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+biofilm+structures+by+the+novel+computer+program+COMSTAT.">Quantification of biofilm structures by the novel computer program COMSTAT.</a> Microbiology. 146, 2395-2407 (2000).</li><li>Palmer, R. J., Haagensen, J. A., Neu, T. R., Sternberg, C., Palmer, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Biological Confocal Microscopy. , 882-900 (2006).</li><li>Haagensen, J. A., Regenberg, B., Sternberg, C., M&#252;ller, S., Bley, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> High Resolution Microbial Single Cell Analytics Advances in Biochemical Engineering and Biotechnology. , (2010).</li></ol>

Biz güçlü bir araç biyofilm soruşturmalarda temsil eden bir akış hücresi sistemi ortaya koymuştur. Konfokal mikroskobu ile 3D görüntüleme ile birlikte, sistem, daha geleneksel mikroskobik teknikler yoluyla mikrobiyal biyofilm analiz diğer yöntemlere göre avantajları bir dizi vardır. Bu sistem, 3 boyutlu görselleştirme mikrobiyal biyofilm toplulukların toplum rahatsız olmadan yaşam sağlar. Işık mikroskobu biyofilm nişler hakkında ayrıntılı bilgi sağlar ve biyofilm elektron mikroskobu nano ölçekli çözünürlüğü sağlarken, canlı hücre görüntüleme izin vermez. , Biz daha önce, birçok antibiyotiğe 5-8 (Şekil 4a) duyarlı bakteriyel hücreler, ekstrasellüler bileşiklerin dağılımı mekansal dağılımının aydınlatmıştır açıklanan akış kanal sistemi kullanarak, örneğin, DNA 9-11, hareketli ve hareketsiz olmayan hücrelerin dağılımı bir bakteri topluluğu 4,6,9 (Şekil 4c) içinde aynı türün. Biz akış hücresi sisteminin maya biyofilmlerin yönlerini incelemek amacıyla kullanılabilir olması öngörülüyor. Bu alansal ve zamansal dağılımı, maya biyofilm gelişimi alan genlerin belirlenmesi yanı sıra, mantar ilaçları gibi çevresel faktörlere yanıt maya biyofilm olabilir. Maya, hareketli ve hareketsiz olmayan hücrelerin içine ayırt bilinen olmasa da, biyofilm çeşitlendirme diğer yönleri gibi, maya pseudohyphal hücreleri morfolojik değişim ve diploid hücrelerinde haploid vardiya olarak çalışmalarına olabilir. Biz bazı mikrop türlerinin uymak ve çeşitli boyama teknikleri ile çalışacak bir sistem ortaya koymuştur. Gibi GFP gibi farklı boyama probları ve floresan proteinleri çeşitli, gelişmekte olan biyofilm belirli niş soruşturma etkinleştirmek ve antimikrobiyal ajanların veya diğer çevresel faktörlerin etkisi analiz etmede etkili bir araçtır. Bilgi elde edilebilir (Şekil 4) çok detaylı ve biyofilm özellikleri COMSTAT 12,13 gibi bilgisayar programları ile sayısal olabilir. Genel olarak, protokolün en kritik yönü, zaman alıcı bir süreç olduğu bir gerçektir. Aynı zamanda hücreler bir floresan olmayan, şeffaf yüzey üzerinde yükselmeye edebilmek için ihtiyaç duyduğu bir sınırlama yoktur. Sistem deneyimli bir araştırmacı olarak, yüksek verim tarama için uygun değildir: oluşturduğu biyofilm, birkaç yüz mikrometre 14 ile sınırlı araştırılmalıdır derinliği bir konfokal mikroskop kullanılarak analiz tasarım doğasında olduğundan daha fazla teknik sınırlamalar vardır buna hazırlanmak için birkaç gün sürebilir deney başına en fazla 15 kanal işleyebilir. Ancak, antibiyotik veya biyofilm çalışmaları ile ilgili olarak kabul edilir mutantlar başlangıçta en ilginç adaylar akış hücresi sistemine aktarılmadan önce kristal viyole boyama gibi diğer yöntemler ile tarandı kitle olabilir. Kapak cam levhalar çok ince ve kolay kırılabilir ve sistemleri işlerken dikkat edilmelidir. Buna ek olarak tüp günlük bir deney çalışması sırasında incelenebilir; giriş tüpler sadece yukarı akış hücrelerinin önemli &quot;back-büyüme&quot; oluşabilir. Böyle bir kirlenme steril tekniği kullanılarak, akış hücreleri giriş tarafında ortadan kaldırarak silikon tüp birkaç santimetre çözülebilir. <img src="/files/ftp_upload/2383/2383fig4.jpg" alt="Şekil 4" /> Şekil 4) 4 gün eski PAO1 ölü boyama (kırmızı leke) b) üç günlük bir 3D sunum eski P. Kolistin ve Propidium iyodür ile 24 saat tedavi GFP biyofilm aeruginosa PAO1 (P. aeruginosa vahşi tip) - GFP biyofilm 6 c) bir PAO1 3D resim sunumu - CFP Pila mutant bir PAO1 vahşi tip YFP (sarı) d (mavi)) 5 gün eski PAO1 - GFP biyofilm 3D olarak sunulan resim e) 26 saat S. cerevisiae (CEN.PK arka planda PTR3 mutant) biyofilm Syto-9 (15) ile boyandı.

<ul><li> Kabarcık tuzakları, polietilen (DTU Sistemleri Biyoloji, Danimarka Teknik Üniversitesi,% 20Center/Resources/Biofilm% 20Setup.aspx http://www.csm.bio.dtu.dk/Instrument) </li><li> Clear polipropilen plastik bağlantıları ve T-konnektör (Cole Parmer, 1 / 8 inç (3.175 mm) ve 1 / 16 inç (1.588 mm)) </li><li> Kelepçe </li><li> Konfokal mikroskobu (Zeiss, Meta LSM510) </li><li> Lameller, cam (Knittel&#39;in Gläser) 50 x 24 mm </li><li> Lameller, PVC lamelleri (Rinzl) 50 x 24 mm </li><li> Akış hücreleri, polietilen (DTU Sistemleri Biyoloji, Danimarka Teknik Üniversitesi,% 20Center/Resources/Biofilm% 20Setup.aspx http://www.csm.bio.dtu.dk/Instrument </li><li> Orta şişe (Schott) </li><li> Peristaltik Pompa (Watson-Marlow, 205S) </li><li> Sepeti Rolling akış sistemleri ve pompalar </li><li> Silikon tutkal (3M Super Silikon sifresiz) </li><li> Şırınga 5 ml (Terumo) </li><li> Syto 9 (Moleküler Problar) </li><li> 0,5 mL Şırınga, iğne ile (27G, Terumo LU-100) </li><li> Çöp konteyneri </li></ul> Boru: <ul><li> Silikon, 3 mm dış çapı 1 mm iç çapı (Ole Dich) </li><li> Silikon, 4 mm, dış çapı 2 mm, iç çapı (Ole Dich) </li><li> Marprene, 3 mm dış çapı 1 mm iç çapı (Watson-Marlow) </li></ul> Medya <table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> P. aeruginosa orta </td></tr><tr><td> A10 </td><td> g / L </td></tr><tr><td> (NH 4) 2 SO4 </td><td> 2,0 </td></tr><tr><td> Na 2 HPO 4 X 2H 2 O </td><td> 6,0 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 </td><td> 3,0 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 3,0 </td></tr><tr><td> Otoklav </td><td></td></tr><tr><td colspan="2"></td></tr><tr><td colspan="2"> FB </td></tr><tr><td> MgCl 2 6H 2 O </td><td> 0,20 </td></tr><tr><td> 1 mL 1 M CaCl 2 </td><td> 0,01 </td></tr><tr><td colspan="2"> 100 mcL / L İz metaller (P. aeruginosa-biyofilm için) 4 </td></tr><tr><td colspan="2"> Otoklav </td></tr><tr><td colspan="2"> 1:10 &#39;lik bir oran A10 ve FB karıştırın. </td></tr><tr><td colspan="2"> Istenen konsantrasyon karbon kaynağı ekleyin. </td></tr></tbody></table> <table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> S. cerevisiae &quot;adlı sentetik tam (SC) orta </td></tr><tr><td></td><td> g / L </td></tr><tr><td> Adenin sülfat </td><td> 0,02 </td></tr><tr><td> L-triptofan </td><td> 0,02 </td></tr><tr><td> L-histidin-HCL </td><td> 0,02 </td></tr><tr><td> L-arjinin-HCL </td><td> 0,04 </td></tr><tr><td> L-metiyonin </td><td> 0,02 </td></tr><tr><td> L-tirozin </td><td> 0,05 </td></tr><tr><td> L-lösin </td><td> 0,06 </td></tr><tr><td> L-izolösin </td><td> 0,06 </td></tr><tr><td> L-lizin-HCL </td><td> 0,05 </td></tr><tr><td> L-fenilalanin </td><td> 0,05 </td></tr><tr><td> L-aspartik asit </td><td> 0,10 </td></tr><tr><td> L-glutamik asit </td><td> 0,10 </td></tr><tr><td> L-valin </td><td> 0,15 </td></tr><tr><td> L-treonin </td><td> 0,20 </td></tr><tr><td> L-serin </td><td> 0,40 </td></tr><tr><td> Maya Nitstresin baz w / o amino asitler ve amonyum (Bacto) </td><td> 1,6 </td></tr><tr><td> Amonyum sülfat </td><td> 5,0 </td></tr><tr><td> NaOH </td><td> 6,0 </td></tr><tr><td> Süksinik asit </td><td> 10,0 </td></tr><tr><td> Otoklav </td><td></td></tr><tr><td> Glikoz (ayrı ayrı otoklava) </td><td> 0,20 </td></tr></tbody></table>

pseudomonas aeruginosa and saccharomyces cerevisiae biofilm in flow cells

Birçok mikrobiyal hücrelerin serbest yaşayan mikroorganizmaların göre fizyolojik ve patolojik özelliklerini değiştirmiştir biyofilm olarak tanımlanan sesil mikrobiyal topluluklar oluşturmak için yeteneği var. Doğada Biyofilmler genellikle kötü tanımlanan koşulları 1 altında incelemek ve ikamet zor. Şeffaf bir alt tabaka kullanarak cihaza basit bir biyofilm tahribatsız bir şekilde gerçek zamanlı olarak kontrol edilebilir bir sistem mümkün: burada, in vitro 3D mikrobiyal biyofilm çalışmalarda, bir akış hücresi modeli sistemi montaj ve işletme göstermek 2,3 iyi tanımlanmış koşulları altında yüksek tekrarlanabilirlik üreten. Biyofilm büyüme odası olarak hizmet veren bir akış hücresi sistemi oluşur. Akış hücresi peristaltik bir pompa yoluyla besin ve oksijen ile orta şişesi verilir ve harcanan orta atık kapta toplanır. Bu inşaat akış sisteminin akış odasında yetiştirilen hücreler minimal rahatsızlık ile örneğin antibiyotik besin ve yönetim sürekli bir kaynağı sağlar. Ayrıca, akış hücresi içinde akış koşulları kesme strese maruz biyofilm çalışmaları izin verir. Bir kabarcık, aksi takdirde, akış hücresi biyofilm yapısını bozabilir boru cihaz sınırları hava kabarcıkları yakalama. Akış hücresi sistemi Konfokal Lazer Tarama Mikroskobu (CLSM) ile uyumludur ve böylece mikrobiyal biyofilm geliştirme hakkında son derece detaylı 3D bilgiler sağlayabilir. Biyofilm hücreler floresan probları veya CLSM analizi ile uyumlu proteinler etiketli olabilir. Bu online görselleştirme sağlar ve gelişmekte olan biyofilm nişler soruşturma sağlar. Mikrobiyal ilişkiler, antimikrobiyal ajanların incelenmesi veya spesifik genlerin ifadesi, birçok deney düzeneklerinin akış hücresi sistemi araştırılmalıdır.

Watch this Scientific Journal Video about Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells at JoVE.com

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Protokolü Konfokal Lazer Tarama Mikroskobu (CLSM) mikrobiyal biyofilm büyüyen ve analiz etmek için bir akış hücresi sistemi uygulama nitelendirdi.

Pseudomonas aeruginosa ve Saccharomyces cerevisiae Biyofilm Akış Hücreler

Many microbial cells have the ability to form sessile microbial communities defined as biofilms that have altered physiological and pathological ...

pseudomonas-aeruginosa-saccharomyces-cerevisiae-biofilm-flow

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

36.5K Görüntüleme.  Danish Technical University. Protokolü Konfokal Lazer Tarama Mikroskobu (CLSM) mikrobiyal biyofilm büyüyen ve analiz etmek için bir akış hücresi sistemi uygulama nitelendirdi.

Video: Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living surfaces. In this paper, we describe protocols for forming Pseudomonas aeruginosa biofilms on human airway epithelial cells (CFBE cells) grown in culture. In the first method (termed the Static Co-culture Biofilm Model), P. aeruginosa is incubated with CFBE cells grown as confluent monolayers on standard tissue culture plates. Although the bacterium is quite toxic to epithelial cells, the addition of arginine delays the destruction of the monolayer long enough for biofilms to form on the CFBE cells. The second method (termed the Flow Cell Co-culture Biofilm Model), involves adaptation of a biofilm flow cell apparatus, which is often used in biofilm research, to accommodate a glass coverslip supporting a confluent monolayer of CFBE cells. This monolayer is inoculated with P. aeruginosa and a peristaltic pump then flows fresh medium across the cells. In both systems, bacterial biofilms form within 6-8 hours after inoculation. Visualization of the biofilm is enhanced by the use of P. aeruginosa strains constitutively expressing green fluorescent protein (GFP). The Static and Flow Cell Co-culture Biofilm assays are model systems for early P. aeruginosa infection of the Cystic Fibrosis (CF) lung, and these techniques allow different aspects of P. aeruginosa biofilm formation and virulence to be studied, including biofilm cytotoxicity, measurement of biofilm CFU, and staining and visualizing the biofilm.

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

This paper describes different methods of growing Pseudomonas aeruginosa biofilms on cultured human airway epithelial cells. These protocols can be adapted to study different aspects of biofilm formation, including visualization of the biofilm, staining of the biofilm, measuring the colony forming units (CFU) of the biofilm, and studying biofilm cytotoxicity.

Co-kültür Modelleri Pseudomonas aeruginosa</emCanlı İnsan Havayolu Hücreler Yetiştirilen> Biyofilmler

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

Pseudomonas aeruginosa (PA) infections result in significant morbidity and mortality in hosts with compromised immune systems, such as patients with leukemia, severe burn wounds, or organ transplants1. In patients at high-risk for developing PA bloodstream infections, the gastrointestinal (GI) tract is the main reservoir for colonization2, but the mechanisms by which PA transitions from an asymptomatic colonizing microbe to an invasive, and often deadly, pathogen are unclear. Previously, we performed in vivo transcription profiling experiments by recovering PA mRNA from bacterial cells residing in the cecums of colonized mice 3 in order to identify changes in bacterial gene expression during alterations to the host&#x2019;s immune status.
As with any transcription profiling experiment, the rate-limiting step is in the isolation of sufficient amounts of high quality mRNA. Given the abundance of enzymes, debris, food residues, and particulate matter in the GI tract, the challenge of RNA isolation is daunting. Here, we present a method for reliable and reproducible isolation of bacterial RNA recovered from the murine GI tract. This method utilizes a well-established murine model of PA GI colonization and neutropenia-induced dissemination4. Once GI colonization with PA is confirmed, mice are euthanized and cecal contents are recovered and flash frozen. RNA is then extracted using a combination of mechanical disruption, boiling, phenol/chloroform extractions, DNase treatment, and affinity chromatography. Quantity and purity are confirmed by spectrophotometry (Nanodrop Technologies) and bioanalyzer (Agilent Technologies) (Fig 1). This method of GI microbial RNA isolation can easily be adapted to other bacteria and fungi as well.

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

A reliable method for the RNA isolation of Pseudomonas aeruginosa recovered from murine cecums is described. The RNA recovered is of sufficient quantity and quality for subsequent qPCR, transcription profiling, and RNA Seq experiments. This technique can be adapted for RNA isolation of other intestinal microbes.

RNA İzolasyonu Pseudomonas aeruginosa Murin Gastrointestinal Yolu koloniler

Pseudomonas aeruginosa (PA) infections result in significant morbidity and mortality in hosts with compromised immune systems, such as patients with ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

There is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from cystic fibrosis (CF) patients. Existing methods rely on single or a few isolates grown aerobically and planktonically. Predetermined cut-offs are used to define whether the bacteria are sensitive or resistant to any given antibiotic1. However, during chronic lung infections in CF, P. aeruginosa populations exist in biofilms and there is evidence that the environment is largely microaerophilic2. The stark difference in conditions between bacteria in the lung and those during diagnostic testing has called into question the reliability and even relevance of these tests3.
 Artificial sputum medium (ASM) is a culture medium containing the components of CF patient sputum, including amino acids, mucin and free DNA. P. aeruginosa growth in ASM mimics growth during CF infections, with the formation of self-aggregating biofilm structures and population divergence4,5,6. The aim of this study was to develop a microtitre-plate assay to study antimicrobial susceptibility of P. aeruginosa based on growth in ASM, which is applicable to both microaerophilic and aerobic conditions.
 An ASM assay was developed in a microtitre plate format. P. aeruginosa biofilms were allowed to develop for 3 days prior to incubation with antimicrobial agents at different concentrations for 24 hours. After biofilm disruption, cell viability was measured by staining with resazurin. This assay was used to ascertain the sessile cell minimum inhibitory concentration (SMIC) of tobramycin for 15 different P. aeruginosa isolates under aerobic and microaerophilic conditions and SMIC values were compared to those obtained with standard broth growth. Whilst there was some evidence for increased MIC values for isolates grown in ASM when compared to their planktonic counterparts, the biggest differences were found with bacteria tested in microaerophilic conditions, which showed a much increased resistance up to a &gt;128 fold, towards tobramycin in the ASM system when compared to assays carried out in aerobic conditions.
 The lack of association between current susceptibility testing methods and clinical outcome has questioned the validity of current methods3. Several in vitro models have been used previously to study P. aeruginosa biofilms7, 8. However, these methods rely on surface attached biofilms, whereas the ASM biofilms resemble those observed in the CF lung9 . In addition, reduced oxygen concentration in the mucus has been shown to alter the behavior of P. aeruginosa2 and affect antibiotic susceptibility10. Therefore using ASM under microaerophilic conditions may provide a more realistic environment in which to study antimicrobial susceptibility.

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Current diagnostic antimicrobial susceptibility testing relies on the planktonic growth of isolates in nutrient rich, aerobic conditions. Here, we employ an alternative artificial sputum medium to study antimicrobial susceptibility of Pseudomonas aeruginosa biofilms under both aerobic and microaerophilic conditions more representative of the cystic fibrosis lung.

Karşı Antibiyotik Etkinlik Test Yapay Balgam Orta Kullanımı<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Kistik Fibrozis Akciğer Daha İlgili Koşullar

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model itself. Early phases of inflammation and infection have been widely studied by using the Pseudomonas aeruginosa agar-beads mouse model, while only few reports have focused on the long-term chronic infection in vivo. The main challenge for long term chronic infection remains the low bacterial burden by P. aeruginosa and the low percentage of infected mice weeks after challenge, indicating that bacterial cells are progressively cleared by the host.
This paper presents a method for obtaining efficient long-term chronic infection in mice. This method is based on the embedding of the P. aeruginosa clinical strains in the agar-beads in vitro, followed by intratracheal instillation in C57Bl/6NCrl mice. Bilateral lung infection is associated with several measurable read-outs including weight loss, mortality, chronic infection, and inflammatory response. The P. aeruginosa RP73 clinical strain was preferred over the PAO1 reference laboratory strain since it resulted in a comparatively lower mortality, more severe lesions, and higher chronic infection. P. aeruginosa colonization may persist in the lung for over three months. Murine lung pathology resembles that of CF patients with advanced chronic pulmonary disease.
This murine model most closely mimics the course of the human disease and can be used both for studies on the pathogenesis and for the evaluation of novel therapies.

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

We describe the agar-beads method to establish persistent long-term chronic Pseudomonas aeruginosa airway infection in the mouse model.

Uzun Vadeli Kronik<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</emFarelerde&gt; Havayolu Enfeksiyon

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Identification of Novel Genes Associated with Alginate Production in Pseudomonas aeruginosa Using Mini-himar1 Mariner Transposon-mediated Mutagenesis

Pseudomonas aeruginosa is a Gram-negative, environmental bacterium with versatile metabolic capabilities. P. aeruginosa is an opportunistic bacterial pathogen which establishes chronic pulmonary infections in patients with cystic fibrosis (CF). The overproduction of a capsular polysaccharide called alginate, also known as mucoidy, promotes the formation of mucoid biofilms which are more resistant than planktonic cells to antibiotic chemotherapy and host defenses. Additionally, the conversion from the nonmucoid to mucoid phenotype is a clinical marker for the onset of chronic infection in CF. Alginate overproduction by P. aeruginosa is an endergonic process which heavily taxes cellular energy. Therefore, alginate production is highly regulated in P. aeruginosa. To better understand alginate regulation, we describe a protocol using the mini-himar1 transposon mutagenesis for the identification of novel alginate regulators in a prototypic strain PAO1. The procedure consists of two basic steps. First, we transferred the mini-himar1 transposon (pFAC) from host E. coli SM10/&#955;pir into recipient P. aeruginosa PAO1 via biparental conjugation to create a high-density insertion mutant library, which were selected on Pseudomonas isolation agar plates supplemented with gentamycin. Secondly, we screened and isolated the mucoid colonies to map the insertion site through inverse PCR using DNA primers pointing outward from the gentamycin cassette and DNA sequencing. Using this protocol, we have identified two novel alginate regulators, mucE (PA4033) and kinB (PA5484), in strain PAO1 with a wild-type mucA encoding the anti-sigma factor MucA for the master alginate regulator AlgU (AlgT, &#963;22). This high-throughput mutagenesis protocol can be modified for the identification of other virulence-related genes causing change in colony morphology.

Identification of Novel Genes Associated with Alginate Production in Pseudomonas aeruginosa Using Mini-himar1 Mariner Transposon-mediated Mutagenesis

Here we describe a protocol using the mini-himar1 mariner transposon-mediated mutagenesis for generating a high-density insertion mutant library to screen, isolate and identify novel alginate regulators in the prototypic Pseudomonas aeruginosa strain PAO1.

Alginat içinde üretimi ile ilişkili yeni genlerin tanımlanması<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</emKullanma&gt; Mini-<em&gt; Himar1</em&gt; Mariner Transposon dolayımlı mutagenez

Pseudomonas aeruginosa is a Gram-negative, environmental bacterium with versatile metabolic capabilities. P. aeruginosa is an opportunistic bacterial ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. Here we have developed a mouse lung injury model by intra-tracheal injection of bacteria Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa or PA). Using this model, we were able to show lung inflammation at the early phase of injury. In addition, alveolar epithelial barrier leakiness was observed by analyzing bronchoalveolar lavage (BAL); and alveolar cell death was observed by Tunel assay using tissue prepared from injured lungs. At a later phase following injury, we observed cell proliferation required for the repair process. The injury was resolved 7 days from the initiation of P. aeruginosa injection. This model mimics the sequential course of lung inflammation, injury and repair during pneumonia. This clinically relevant animal model is suitable for studying pathology, mechanism of repair, following acute lung injury, and also can be used to test potential therapeutic agents for this disease.

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

We have developed a mouse lung injury model by intra-tracheal injection of bacteria Pseudomonas aeruginosa. This model mimics lung injury during pneumonia and is clinically relevant.

Pseudomonas aeruginosa Kaynaklı Akciğer Hasarı Modeli

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. Chronic mouse wounds models have been used to understand the underlying interactions between the microorganisms and the host. The models developed to date rely on the use of haired animals and terminal collection of wound tissue for determination of viable bacteria. While significant insight has been gained with these models, this experimental procedure requires a large number of animals and sampling is time consuming. We have developed a novel murine model that incorporates several optimal innovations to evaluate biofilm progression in chronic wounds: a) it utilizes hairless mice, eliminating the need for hair removal; b) applies pre-formed biofilms to the wounds allowing for the immediate evaluation of persistence and effect of these communities on host; c) monitors biofilm progression by quantifying light production by a genetically engineered bioluminescent strain of Pseudomonas aeruginosa, allowing real-time monitoring of the infection thus reducing the number of animals required per study. In this model, a single full-depth wound is produced on the back of STZ-induced diabetic hairless mice and inoculated with biofilms of the P. aeruginosa bioluminescent strain Xen 41. Light output from the wounds is recorded daily in an in vivo imaging system, allowing for in vivo and in situ rapid biofilm visualization and localization of biofilm bacteria within the wounds. This novel method is flexible as it can be used to study other microorganisms, including genetically engineered species and multi-species biofilms, and may be of special value in testing anti-biofilm strategies including antimicrobial occlusive dressings.

Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model

Here we describe a novel diabetic murine model utilizing hairless mice for real-time, non-invasive, monitoring of biofilm wound infections of bioluminescent Pseudomonas aeruginosa. This method can be adapted to evaluate infection of other bacterial species and genetically modified microorganisms, including multi-species biofilms, and test the efficacy of antibiofilm strategies.

Işık tarafa: In Vivo izleme bir diyabetik tüysüz fare modelinde kronik yaralarda Pseudomonas aeruginosa biyofilm enfeksiyonların

The presence of bacteria as structured biofilms in chronic wounds, especially in diabetic patients, is thought to prevent wound healing and resolution. ...

Replication of the Ordered, Nonredundant Library of Pseudomonas aeruginosa strain PA14 Transposon Insertion Mutants

Pseudomonas aeruginosa is a phenotypically and genotypically diverse and adaptable Gram-negative bacterium ubiquitous in human environments. P. aeruginosa is able to form biofilms, develop antibiotic resistance, produce virulence factors, and rapidly evolve in the course of a chronic infection. Thus P. aeruginosa can cause both acute and chronic, difficult to treat infections, resulting in significant morbidity in certain patient populations. P. aeruginosa strain PA14 is a human clinical isolate with a conserved genome structure that infects a variety of mammalian and nonvertebrate hosts making PA14 an attractive strain for studying this pathogen. In 2006, a nonredundant transposon insertion mutant library containing 5,459 mutants corresponding to 4,596 predicted PA14 genes was generated. Since then, distribution of the PA14 library has allowed the research community to better understand the function of individual genes and complex pathways of P. aeruginosa. Maintenance of library integrity through the replication process requires proper handling and precise techniques. To that end, this manuscript presents protocols that describe in detail the steps involved in library replication, library quality control and proper storage of individual mutants.

Replication of the Ordered, Nonredundant Library of Pseudomonas aeruginosa strain PA14 Transposon Insertion Mutants

Pseudomonas aeruginosa infection causes significant morbidity in vulnerable hosts. The nonredundant transposon insertion mutant library of P. aeruginosa strain PA14, designated as PA14NR Set, facilitates analysis of gene functionality in numerous processes. Presented here is a protocol to generate high-quality copies of the PA14NR Set mutant library.

Sipariş edilmiş, Pseudomonas aeruginosa baskı PA14 Transposon ekleme mutantlar Nonredundant Kütüphane çoğaltılması

Pseudomonas aeruginosa is a phenotypically and genotypically diverse and adaptable Gram-negative bacterium ubiquitous in human environments. P. aeruginosa ...

Methods for Detecting Cytotoxic Amyloids Following Infection of Pulmonary Endothelial Cells by Pseudomonas aeruginosa

Patients who survive pneumonia have elevated death rates in the months following hospital discharge. It has been hypothesized that infection of pulmonary tissue during pneumonia results in the production of long-lived cytotoxins that can lead to subsequent end organ failure. We have developed in vitro assays to test the hypothesis that cytotoxins are produced during pulmonary infection. Isolated rat pulmonary endothelial cells and the bacterium Pseudomonas aeruginosa are used as model systems, and the production of cytoxins following infection of the endothelial cells by the bacteria is demonstrated using cell culture followed by direct quantitation using lactate dehydrogenase assays and a novel microscopic method utilizing ImageJ technology. The amyloid nature of these cytotoxins was demonstrated by thioflavin T binding assays and by immunoblotting and immunodepletion using A11 anti-amyloid antibody. Further analyses using immunoblotting demonstrated that oligomeric tau and A&#946; were produced and released by endothelial cells following infection by P. aeruginosa. These methods should be readily adaptable to analyses of human clinical samples.

Methods for Detecting Cytotoxic Amyloids Following Infection of Pulmonary Endothelial Cells by Pseudomonas aeruginosa

Simple methods are described for demonstrating the production of cytotoxic amyloids following infection of pulmonary endothelium by Pseudomonas aeruginosa.

Yöntemleri için algılama sitotoksik Amyloids aşağıdaki enfeksiyon pulmoner endotel hücre Pseudomonas aeruginosa tarafından

Patients who survive pneumonia have elevated death rates in the months following hospital discharge. It has been hypothesized that infection of pulmonary ...

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Microorganisms are genetically versatile and diverse and have become a major source of many commercial products and biopharmaceuticals. Though some of these products are naturally produced by the organisms, other products require genetic engineering of the organism to increase the yields of production. Avirulent strains of Escherichia coli have traditionally been the preferred bacterial species for producing biopharmaceuticals; however, some products are difficult for E. coli to produce. Thus, avirulent strains of other bacterial species could provide useful alternatives for production of some commercial products. Pseudomonas aeruginosa is a common and well-studied Gram-negative bacterium that could provide a suitable alternative to E. coli. However, P. aeruginosa is an opportunistic human pathogen. Here, we detail a procedure that can be used to generate nonpathogenic strains of P. aeruginosa through sequential genomic deletions using the pEX100T-NotI plasmid. The main advantage of this method is to produce a marker-free strain. This method may be used to generate highly attenuated P. aeruginosa strains for the production of commercial products, or to design strains for other specific uses. We also describe a simple and reproducible mouse model of bacterial systemic infection via intraperitoneal injection of validated test strains to test the attenuation of the genetically engineered strain in comparison to the FDA-approved BL21 strain of E. coli.

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Here, we describe a simple and reproducible protocol of mouse model of infection to evaluate the attenuation of the genetically modified strains of Pseudomonas aeruginosa in comparison to the United States Food and Drug Administration (FDA)-approved Escherichia coli for commercial applications.

Pseudomonas aeruginosa In-Frame Gen Silme Mutantlar Üretimi ve Enfeksiyon Basit Bir Fare Modelinde Virülans Zayıflama sıiçin Test

Microorganisms are genetically versatile and diverse and have become a major source of many commercial products and biopharmaceuticals. Though some of ...