K. Gill, fare yetiştirme ve bakımı ile ilgili yardım ve laboratuvar yönetimi için teşekkür ederiz. Teknik yardım için Mukoyama laboratuar üyeleri de teşekkür ederiz. Finansman, Sağlık Naitonal Enstitüleri İntramural Araştırma Programı tarafından sağlanmıştır.

1. Toplama Fare Embriyonik Ekstremite Skin (E13.5 ~ E17.5) <ol><li> Euthanize Onaylanan prosedür kadın takılı. Onaylı hayvan protokole göre, kadınlarda CO 2 maruz tarafından ötenazi ve sonra servikal dislokasyon ile güvence altına. Emici kağıt havlu üzerine yatırın ve hayvan sıkmak şişeden% 70 EtOH / H 2 O iyice ıslatın. </li><li> Rahim sağlam inceleyin ve kan yıkamak için buz Hanks &#39;Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS) içeren 100 x 15 mm Petri kabı yerleştirin. </li><li> Embriyo ayrı ve teşrih. Embriyo çok ince amniyon çıkarın. </li><li> Her embriyo genotip gerekiyorsa (Seçenek) 35 x 10 mm Petri kabında tek bir embriyo parçalara ayır. Disseke kuyruk genotipleme için 0,2 ml PCR tüpü aktarılır. </li><li> Embriyonun ön ayakları kesiliyor ve transferi 24 plaka 2 ml Phosphate Buffer Saline (PBS) buz gibi taze% 4 Paraformaldehit (PFA) içeren bir halka forseps ön ayakları. </li><li> 4 ° C gecede Nutator Mikser nazik karıştırma ön ayakları sabitleyin. </li><li> Ertesi gün, PFA çıkartın ve oda sıcaklığında Nutator Mikser nazik karıştırma ile 2 ml PBS 5 dakika boyunca üç kez yıkayın. </li><li> % 100 metanol (MeOH) ön ayakları transferi ve -20 ° C&#39;de enzim dondurucu (kritik sıcaklık kontrolü ve otomatik buz çözme fonksiyonu olmadan dondurucu) saklayabilirsiniz. İlköğretim antikorlar% 100 MeOH tedaviden sonra Tablo 1 iş listelenmiştir. </li><li> Ince cımbız kullanarak ön ayakları kapalı cilt Peel. Ekstremite cilt, kurutulmuş, uzuv kolayca ayrılmalıdır. İlk uzuv yukarı bakacak ventral tarafı (avuç içi tarafında) yerleştirin. Sonra videoda gösterildiği gibi ince cımbız kullanarak, deri kesme. Sonraki herhangi bir zarar vermeden cildi nazikçe sıyrılarak, tüm bacak çevresinde teşrih. </li></ol> 2. Tüm montaj Ekstremite Skins İmmünohistokimyasal Boyama <ol><li> MeOH / PBT (PBS +% 0.2 Triton X-100) (% 75,% 50,% 25) için her biri 5 dakika aşamalı bir dizi kuluçka 5ml polipropilen yuvarlak alt tüp bacak derileri rehidrate. Çözümler alışverişi ekstremite derileri zarar vermemek için dikkatli olunması gerektiğini unutmayın. </li><li> , Oda sıcaklığında Nutator Mikser nazik karıştırma PBT 5 dakika için iki kez yıkayın. </li><li> Nutator Mikser nazik karıştırma ile 2 saat eşek sekonder antikor için% 10 keçi sekonder antikorlar serum / PBS +0.2% TX100 engelleme tampon Keçi veya% 10 Eşek serum / PBS +0.2% TX100 engelleme tampon ya bacak derileri Blok oda sıcaklığında bekletin. </li><li> Engelleme tampon birincil antikor 800μl (Tablolarda listelenen uygun dilüsyon) (2ml mikrosantrifüj tüp içine bir halka forseps ile 35 x 10 mm Petri kabı ve transfer bacak deriler% 10 ya da koyun keçi serum / PBS 0,2 % TX100 veya% 10 Eşek serum / PBS +0.2% TX100). 4 ° C gecede Nutator Mikser nazik karıştırma ile bacak derileri inkübe edin. Farklı türleri (örneğin, sıçan monoklonal antikor + tavşan poliklonal antikor) türetilen multipl primer antikorlar aynı anda kullanılabilir olabileceğini unutmayın. </li><li> Ertesi gün, yıkama tampon 4ml (ya% 2 Keçi serum / PBS +0.2% TX100 veya 2, yuvarlak alt 5ml polipropilen tüp içine bir halka forseps ile 35 x 10 mm Petri kabı ve transfer ekstremite derileri yerde % Eşek serum / PBS +0.2% TX100). </li><li> Nazik oda sıcaklığında Nutator Mikser karıştırma ile 15 dakika süreyle beş kez yıkayın. </li><li> 800μl engelleme tampon sekonder antikor (ya% 10 Keçi serum / PBS +0.2% TX100 veya% 10 Eşek serum / 2ml-mikrosantrifüj tüp içine bir halka forseps ile 35 x 10 mm Petri kabı ve transfer bacak derileri koyun PBS +0.2% TX100). Genelde biz Jackson ImmunoResearch (Cy3, Cy5, 1:300 dilüsyonları) veya Invitrogen (Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 633, 1:250 dilüsyon) ikincil antikorlar kullanır. 0.22μm PVDF membran şırınga filtreleri kullanarak sekonder antikor toplu parçacıkları çıkarmak için ikincil antikor çözüm Filtre. Oda sıcaklığında Nutator Mikser nazik karıştırma ile 1 saat karanlık veya alüminyum folyo ile sarılmış bacak derileri inkübe edin. Farklı türlerden elde edilen farklı floresan konjuge sekonder antikorlar aynı anda kullanılabilir olabileceğini unutmayın. </li><li> Bacak derileri koyun yıkama tampon 4ml (% 2 Keçi serum / PBS 0,2% ya TX100 veya% 2 Eşek serum / PBS ile 5ml polipropilen yuvarlak alt tüpe bir halka forseps ile 35 x 10 mm Petri kabı ve transfer 0,2% TX100). Koyu veya yumuşak oda sıcaklığında Nutator Mikser karıştırma alüminyum folyo ile sarılmış 15 dakika süreyle beş kez yıkayın. </li><li> (Çekirdeği karşı counterstaining için Seçenek) yıkama tampon 4ml (ya% 2 Keçi serum / PBS 0,2% TX100 veya% 2 Eşek serum / PBS +0.2% TX100) için-Pro-3 (Invitrogen T3605 ile bacak derileri inkübe , koyu veya oda sıcaklıklarda Nutator Mikser nazik karıştırma ile 10 dakika süreyle alüminyum folyo ile sarılır 1:3000 dilüsyon)yeniden. Daha sonra, nazik karıştırma ile alüminyum folyo ile karanlık veya sarılmış yıkama tampon 4ml (% 2 Keçi serum / PBS TX100 veya% 2 Eşek serum / PBS +0.2% +0.2% TX100 ya) ile 5 dakika boyunca üç defa yıkamak oda sıcaklığında Nutator Mikser. Çekirdekleri için güçlü ve spesifik boyanması için pro-3 için belirli bir emisyon (HeNe 633 nm eksitasyon) görülmektedir unutmayın. </li></ol> 3. Slayt Ekstremite Skins Montaj <ol><li> 35 x 10 mm Petri kabında bacak derileri yerleştirin. Beyazlatma kapsamlı fotoğraf çekmemek için düşük aydınlatma stereomicroscope altında ince bir cımbız kullanarak derileri iç tabakası toz, kristaller, elyaf çıkarın. </li><li> Bir halka forseps yapışkan mikroskobik slayt bacak derileri aktarın. Slayt (yani lamel doğru) yukarı doğru uzanan iç tabakası ile derileri yerleştirin. Derileri titizlikle cımbız kullanarak Düzleştir&#39;i kaldırmak ve Kimwipe tarafından tampon yıkama-over taşımak. </li><li> Hava kabarcıkları olmadan, anti-solmaya montaj medya monte edin. Biz 25 &quot;x25&quot; lamel kullanın. Karanlıkta düz bir yüzey üzerinde Cure (örneğin, örnekleri görüntülemeden önce oda sıcaklığında karanlık bir gece olarak yerleştirilir Altın reaktif uzatmak kullanılarak monte). Uzun süreli depolama için, 4 slayt lamel ve mağaza mühür ° C </li></ol> 4. Konfokal Mikroskop <ol><li> Fluorophores için uygun lazerler kadar ayarlayın. Biz, Argon 488nm (Alexa Fluor 488 ve GFP), DPSS 561nm (Alexa Fluor 568 ve Cy3) ve HeNe 633nm (Alexa Fluor 633, Cy5 ve To-Pro-3 için) olmak üzere üç lazer kaynakları ile Leica TCS SP5 konfokal mikroskop . </li><li> Tüm boyalar, çift ya da üçlü lekeli örneklerinde aynı zamanda heyecanlı olacağı crosstalk önlemek veya azaltmak için sıralı tarama aracını kullanın. Sıralı tarama modu, sıralı olarak kaydedilir. </li><li> Uyarma için floresan boyalar ve lazer hakkında daha fazla genel bilgi Hibbs (2004) tarafından &quot;Biyologlar için Konfokal Mikroskop&quot; kurulmuş olabilir </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar Pan-endotelyal hücre işaretleyici karşı antikorlar E15.5 fare ön ayakları deride Tüm montaj üç-etiket konfokal immnofluorescence mikroskopi PECAM-1 (Şekil 1A-C, D, mavi), nörofilaman işaretleyici 2H3 (Şekil 1A yeşil) ve ekstremite cilt 2H3 + periferik sinirleri ile uyumlu αSMA + arterlerin bir karakteristik dallanma deseni, düz kas hücre belirteci αSMA (Şekil 1A, B kırmızı) ortaya çıkardı. Dallanma kan damarı yanı sıra, bu uzuv deri vaskülatürü modeli lenfatik endotel hücre işaretleyici LYVE-1 (Şekil 1D, E kırmızı) ve Neuropilin2 (NRP2) (Şekil 1D, F yeşil antikorlar kullanılarak lenfatik damar dallanma desenlendirme incelemek için kullanılır. .) <img src="/files/ftp_upload/2620/2620fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 (AC) Arterler embriyonik ekstremite cilt periferik sinir ile aynı hizaya getirin. Pan-endotelyal hücre belirteci PECAM-1 (AC, mavi), nörofilaman işaretleyici 2H3 (A, yeşil) ve düz kas hücre işaretleyici αSMA (A ve B, kırmızı karşı antikorlar ile tüm montaj üçlü-etiket konfokal immnofluorescence mikroskopi ) gösterilir. E15.5, 2H3 + periferik sinirlerin (açık ok) αSMA tarafından karşılanmaktadır arterler (ok başları) + düz kas hücreleri ile ilişkilendirir. (DF) embriyonik ekstremite cilt Lenfatik damarsal. Pan-endotelyal hücre belirteci antikorlar PECAM-1 (D, mavi), lenfatik endotel hücre işaretleyici LYVE-1 (D ve E, kırmızı) ve Neuropilin2 (NRP2) (D ve F, yeşil Triple-etiket konfokal immnofluorescence mikroskopi ) gösterilir. LYVE-1 de makrofajlar (açık ok başları) bir alt kümesi ile ifade edilir ise, lenf damarları, LYVE-1 ve NRP2 her iki tarafından görüntülenmiştir. Ölçek çubuğu: 100μm.

<ol>
	<li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin.">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li><li>Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+nerve-derived+VEGF+promotes+arterial+differentiation+via+neuropilin+1-mediated+positive+feedback.">Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback.</a> Development. 132, 941-952 (2005).</li><li>Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+distinction+and+angiogenic+interaction+between+embryonic+arteries+and+veins+revealed+by+ephrin-B2+and+its+receptor+Eph-B4.">Molecular distinction and angiogenic interaction between embryonic arteries and veins revealed by ephrin-B2 and its receptor Eph-B4.</a> Cell. 93, 741-753 (1998).</li><li>Gerety, S. S., Wang, H. U., Chen, Z. F., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symmetrical+mutant+phenotypes+of+the+receptor+EphB4+and+its+specific+transmembrane+ligand+ephrin-B2+in+cardiovascular+development.">Symmetrical mutant phenotypes of the receptor EphB4 and its specific transmembrane ligand ephrin-B2 in cardiovascular development.</a> Mol Cell. 4, 403-414 (1999).</li></ol>

Organlara yeterli oksijen ve besin kaynakları nedeniyle vasküler sistem, embriyogenez sırasında yanı sıra yetişkinler organ bakım ve üreme fonksiyonları için organ gelişimi için çok önemlidir. Uygun damar ağı, önceden mevcut olan kapiller ağ çok dallı ve hiyerarşik yapıları ile yeniden düzenlenmiş olan anjiyogenez karmaşık ve çok adımlı işlemler ile kurulmuştur. Birçok eseri çeşitli moleküller bu süreçlere dahil olduğu gösterilmiş olsa da, organ veya bileşenleri vasküler dalla...

Antikorlar Pan-endotelyal hücre belirteci <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> PECAM-1 </td><td> Ermeni, hamster (M) </td><td> Chemicon </td><td> MAB1398Z </td><td> 1:100 dilüsyon # 1 </td></tr><tr><td> PECAM-1 </td><td> Rat (M) </td><td> BD </td><td> 553369 </td><td> 1:300 dilüsyon </td></tr><tr><td> VEGFR2 </td><td> Rat (M) </td><td> eBioscience </td><td> 14-5821-82 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr><tr><td> CD34 </td><td> Rat (M) </td><td> eBioscience </td><td> 13-0341 </td><td> 1:300 dilüsyon </td></tr><tr><td> Kollajen IV. </td><td> Tavşan (P) </td><td> Abd Serotec </td><td> 2150-1470 </td><td> 1:300 dilüsyon # 2 </td></tr></tbody></table> Arter endotel hücre işaretleyici <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> Neuropilin1 </td><td> Tavşan (P) </td><td> Alex Kolodkin laboratuvar # 3 </td><td></td><td> 1:3000 dilüsyon </td></tr><tr><td> Unc5H2 </td><td> Keçi (P) </td><td> Ar-Ge </td><td> AF1006 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr></tbody></table> Venöz endotel hücre işaretleyici <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> EphB4 </td><td> Keçi (P) </td><td> Ar-Ge </td><td> AF446 </td><td> 1:100 dilüsyon </td></tr></tbody></table> Lenfatik endotel hücre işaretleyici <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> LYVE-1 # 4 </td><td> Tavşan (P) </td><td> Abcam </td><td> ab14917 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr><tr><td> LYVE-1 # 4 </td><td> Rat (M) </td><td> MBL </td><td> D225-3 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr><tr><td> Prox-1 </td><td> Tavşan (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB5475 </td><td> 1:1000 dilüsyon </td></tr><tr><td> Prox-1 </td><td> Keçi (P) </td><td> Ar-Ge </td><td> AF2727 </td><td> 01:50 seyreltme </td></tr><tr><td> Neuropilin2 </td><td> Tavşan (P) </td><td> Hücre Sinyalizasyonu </td><td> 3366 </td><td> 1; 100 seyreltme </td></tr><tr><td> Podoplanin </td><td> Suriye hamsteri (M) </td><td> Hibridoma Bankası </td><td> 8.1.1 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr></tbody></table> Düz kas hücre / pericyte işaretleyici <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> αSMA-Cy3 </td><td> Fare (M) # 5 </td><td> Sigma </td><td> C-6198 </td><td> 1:500 dilüsyon # 6 </td></tr><tr><td> NG2 </td><td> Tavşan (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB5320 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr><tr><td> SM22α </td><td> Tavşan (P) </td><td> Abcam </td><td> ab14106 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr></tbody></table> GFP muhabiri için Antikorlar <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> GFP </td><td> Tavşan (P) </td><td> Invitrogen </td><td> A11122 </td><td> 1:300 dilüsyon </td></tr><tr><td> GFP </td><td> Rat (M) </td><td> Nacalai tesque </td><td> 04404-84 </td><td> 1:1000 dilüsyon </td></tr><tr><td> GFP </td><td> Civciv (P) </td><td> Chemicon </td><td> P42212 </td><td> 1:300 dilüsyon </td></tr></tbody></table> LacZ muhabiri için Antikorlar <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> ß-gal </td><td> Tavşan (P) </td><td> MP Biyomedikal </td><td> 55976 </td><td> 1:5000 dilüsyon </td></tr><tr><td> ß-gal </td><td> Keçi (P) </td><td> Abd Serotec </td><td> 4600-1409 </td><td> 1:500 dilüsyon </td></tr><tr><td> ß-gal </td><td> Civciv (P) </td><td> Abcam </td><td> ab9361 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr></tbody></table> Periferik akson için Antikorlar <table border="1"><tbody><tr><td> Antikor </td><td> Tür </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td><td> Çalışma şartları </td></tr><tr><td> 2H3 </td><td> Fare (M) # 7 </td><td> Hibridoma Bankası </td><td> 2H3 </td><td> 1:200 oranında seyreltildiğinde </td></tr><tr><td> Tuj1 </td><td> Fare (M) # 8 </td><td> Covance </td><td> MMS-435P </td><td> 1:500 dilüsyon </td></tr><tr><td> Peripherin </td><td> Tavşan (P) </td><td> Chemicon </td><td> AB1530 </td><td> 1:1000 dilüsyon </td></tr></tbody></table> Schwann hücreleri göç için antikorlar <table border="1"><tbody><tr><td> BFABP </td><td> Tavşan (P) </td><td> Thomas Müller laboratuvar # 9 </td><td></td><td> 1:3000 dilüsyon </td></tr></tbody></table> (P): poliklonal antikor (M): monoklonal antikor # 1: keçi anti-Ermeni hamster Cy3 (Jackson ImmunoResearch 127-165-160) antikor ikincil bir antikor olarak kullanılmalıdır. # 2: Kollajen IV antikor in situ hibridizasyon sonra kan damarlarını tespit etmek için kullanılabilir. # 3: Neuropilin1 antikor nazik Alex Kolodkin Johns Hopkins Üniversitesi laboratuvarı tarafından sağlanmaktadır. Koyun anti-insan Neuropilin1 antikor, henüz test edilmemiş olmasına rağmen Ar-Ge (AF3870) kullanılabilir. # 4: LYVE-1 antikorları da embriyonik deri makrofaj bir alt kümesi algılar. # 5: anti-αSMA antikor fare IgG2a monoklonal antikor. # 6: Cy3 konjuge αSMA antikor sn birlikte oda sıcaklığında 1 saat inkübediğer primer antikorları için ikincil antikorlar. # 7: 2H3 antikor nörofilaman karşı fare IgG1 monoklonal antikor. # 8: Tuj1 antikor Nöron-spesifik sınıf III beta-tubulin karşı fare monoklonal antikor IgG2a. # 9: BFABP (beyin özel yağ asidi bağlayıcı protein) antikoru nazik Thomas Müller Max-Delbrück Merkezi Moleküler Tıp laboratuarı tarafından sağlanmaktadır.

whole-mount immunohistochemical analysis for embryonic limb skin vasculature: a model system to study vascular branching morphogenesis in embryo

Tüm montaj immünohistokimyasal analiz görüntüleme için tüm damarsal morfolojilerinden dallanma hücresel mekanizmaları anlamak için çok önemlidir. Biz önceden varolan ilkel kapiller pleksus hiyerarşik dallı bir damar ağına yeniden organize olduğu damar gelişimini incelemek için ekstremite deri vaskülatürü modeli geliştirdik. Birden fazla etiketleme ile tüm montaj konfokal mikroskopi belirli floresan belirteçleri kullanarak, endotel hücreleri perisitlerden ve düz kas hücreleri de dahil olmak üzere, sağlam kan damarlarının yanı sıra hücresel bileşenleri, güçlü görüntüleme için izin verir. Genetik çalışmalar ile bu uzuv deri vaskülatürü modeli gelişmeler, vasküler gelişimi ve desenlendirme moleküler mekanizmaları anlamak düzeldi. Ekstremite deri vaskülatürü modeli, periferik sinirleri arterlerin farklılaşma ve desenlendirme için mekansal bir şablon nasıl çalışmak için kullanılır olmuştur. Bu video makalede, vasküler gelişim sürecini takip edebilecek vaskülarize embriyonik organları için geçerli olan vasküler spesifik antikorlar ve floresan ikincil antikorlar, sağlam kan damarları leke için basit ve sağlam bir protokol tanımlamaktadır.

Watch this Scientific Journal Video about Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo at JoVE.com

Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

Biz bir bütün montaj immünohistokimya tanıtmak ve lazer fare embriyonik ekstremite cilt karmaşık damar ağı oluşumunu analiz etmek için birden fazla etiketleme ile konfokal mikroskopi tarama.

Embriyonik Ekstremite Cilt damarları Tüm montaj İmmünohistokimyasal Analizi: Embriyo vasküler dallanma Morphogenesis Eğitim Model Sistemi

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

whole-mount-immunohistochemical-analysis-for-embryonic-limb-skin

Research

JoVE Journal

Biology

17.5K Görüntüleme.  National Heart, Lung, and Blood Institute, National Institutes of Health. Biz bir bütün montaj immünohistokimya tanıtmak ve lazer fare embriyonik ekstremite cilt karmaşık damar ağı oluşumunu analiz etmek için birden fazla etiketleme ile konfokal mikroskopi tarama.

Video: Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo