Bu çalışma, &quot;Agence Nationale de la Recherche&quot; hibe ANR-09-JCJC-0117-01 ve Romain Chery &quot;Neuropôle de Recherche Francilien-NERF&quot; hibe tarafından desteklenen Biz Françoise Lefebvre, C + + / Qt yazılım geliştirme için teşekkür eder, ve optik görüntüleme kurulumu gelişimine yardım için Laurent Pinot ve Batiste Janvier.

1. (Avrupa laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için öneriler doğrultusunda, 86/609/EEC direktifi) görüntüleme için hayvan hazırlanması <ol><li> 6 ila 8 hafta eski C57BL6 erkek farelere enjekte intraperitoneal ketamin (10mg/kg) ve xylazine (100mg/kg) bir kokteyl ile anestezi. Cerrahi, fare artık tutam hindpaw yanıt başlar. Tüm deney sırasında hayvanın bir ısıtma yastığı yerleştirilir. Vücut ısısı sürekli olarak izlenmekte ve 37 muhafaza ° C Anestezi derinliği ekstremite yokluğunda geri kontrol ederek cerrahi ve görüntüleme oturumu boyunca devam eder. Aksi halde ilk anestezik kokteyl% 20 bir subkutan enjeksiyon uygulanır. </li><li> Kullanarak, kafa derisi, saç kesme makineleri çıkarın. Serum fizyolojik ile ıslatılmış steril gazlı bez kullanarak maruz kalan saç cildi temizleyin. </li><li> Stereotaksik çerçeve içinde fare yerleştirin. Burun, başın arkasında aynı düzlemde olması gerekirkoku ampulün yüzeyi yatay olarak ayarlamak için. Görüntüleme sırasında hareketleri önlemek için kulak ve burun çubukları sıkıca sabitleyin. </li><li> Kurutma ve ağrıyı önlemek için hayvanın gözlerinin oftalmik merhem uygulayın. </li><li> 70 ° betadin ardışık tarama ile etanol ve saçlı deri alanı ile bütün cerrahi aletler dezenfekte edin. </li><li> Kafatası kapsayan cilt kaldırmak için, kulağı arasında başın arka kısmında makas ile deride bir kesi yaparak başlayın. Sonra her iki tarafı kesilmiş, kulak baz doğru ve göz kapaklarının boyunca alnına doğru anteroposterior yönde. Kafa derisi, burun çubuğu yakın burnu üstüne cilt keserek kaldırarak bitirin. </li><li> Binoküler gözlem altında, kafatasının üstündeki periost hafifçe ayırmak için serum fizyolojik ile ıslatılmış pamuklu bir bez kullanın. Kalan doku kaldırmak ve temiz bir hazırlık var, bir neşter ile kafatası yüzey kazımak için forseps bir çift kullanın. </li><li>OB, göz kapaklarının arasında yer alan iki hemibulbs oluşan simetrik bir yapıdır. Bunlar venöz sinüs tarafından rostral ve kaudal yönde sınırlı ve sagital dikiş tarafından ayrılmış. OB üzerinde kemik distile su ile ıslatılmış emilebilir jelatin sünger bir parça yerleştirin. Deney boyunca bu kemik alanı nemli tutmak için önemlidir. </li></ol> 2. Kranial pencere hazırlanması <ol><li> Jelatin sünger kaldırın ve yavaşça n ° 10 neşter bıçak kemiğe kazıma başlayın. Bıçak ve kemik arasındaki 45 ° &#39;lik sabit bir açıda tutun ve göz kapaklarının ampul alanının sagital tarafına bıçak taşımak. Kemik dikey baskı uygulamak ya da venöz sinüs üzerindeki kemik çizmeyin. </li><li> Inceltme işlemi sırasında, her 5min durdurmak ve hazırlık soğumasını kemik sulu bir jelatin sünger yerleştirin. Swab kafatası kemik tozu temizlemek için bir sünger ile. </li><li> Süpürme tutun vetrabeküller, süngerimsi kemik tabakası görselleştirme kadar alternatif soğutma. OB ince damarsal bu aşamada görünür olmalıdır. Kemik çizilmeye durdurun ve OB çevreleyen dikdörtgen bir alan &quot;çizmek&quot; dik bisturi ucu kullanmaya başlayabilirsiniz. Bu aşamada, n ° 11 neşter bıçak kullanılabilir. Sınırları içinde herhangi bir neşter inme güvenli olmalıdır venöz sinüs cerrahisi tutun. </li><li> Neşter ardışık hareketleri ile yavaş yavaş oluşan dikdörtgen bir siper kazmak. Temiz ve keskin tutmak için periyodik olarak neşter ucu silin. Dura yüzeye dokunmaktan kaçının ucu derinliği dikkatli olun. </li><li> Kalan kemik kalınlığı bir anlamda almak için, forseps bir çift ucu ile hafifçe itin. Basınç altında kemik flep çekilirse, bir sonraki adıma geçmek. </li><li> Bir damla tuzlu su altında, kemik flep kaldırmak için yatay, neşter odaklı ucu kullanın. Flap kaldırma c yapılmalıdırarefully kalan kemik yırtılmasını önlemek. </li><li> OB yüzey ortaya çıktığında, herhangi bir kanama ya da kan damarları anastomoz olmaması için kontrol edin. Dura veya doku yüzeyinin yaralandı optik sinyalleri alma şansını azaltacaktır. Alan ampul nemli tutmak için serum fizyolojik ile ıslatılmış bir jelatin sünger ile silin. </li><li> Poliakrilat diş çimento, iyi bir pencere etrafındaki kemik oluşturmak için uygulayın. </li><li> Dura üzerinde düşük erime noktası agaroz (% 1.2) bir damla koyun ve pencerenin boyutlarını steril bir cam kapak koymak. Görüntüleme oturumu sırasında, agaroz küçük bir miktar kuruma telafi etmek amacıyla eklenebilir. Agaroz solunum ile hareket OB önlemek ve optik görüntüleme için düz bir yüzey sağlayacaktır. </li></ol> 3. Koku alma etkinlik haritalama için Optik görüntüleme kurulumu <ol><li> Koku alma uyarımı tam bir olfactometer kullanımı süresi ve yoğunluğu tanımlanmış olmalıdır. Biz temel bir hava kompresörü (basınçlı solunabilir hava gibi uygun olacaktır) ile ilişkili otomatikleştirin Bilimsel multivial perfüzyon sistemi Valvebank 8II özel bir değiştirilmiş bir sürümü kullanın. Bu sistem doğru ve hızlı harici valf kontrolü sağlar. Mineral yağ, saf odorant Çözümleri seçilen konsantrasyonda seyreltilir. Hexanal olarak dorsal OB aldehitler etkinleştirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Seyreltilmiş odorant tam bir hacim (20 50μl) bir filtre kağıdı üzerinde yüklü olan ve bir şırınga rezervuar yerleştirilir. Perfüzyon sistemi sayesinde, basınç kontrollü hava valf açılması sırasında hayvanın burun odorized hava akı teslim sabit bir oranın sağlanması, sistem teslim edilir. Odorant ~ 1000ml/min bir akış hızında hava taşıyan bir Tygon R-3603 Vakum Boru (Saint-Gobain Corporation) ile teslim edilir. Tüp koku ve odorant kalıntı miktarları arasında kirletil. Varsa, odorant uyaran tekrarlanabilirlik contro olabiliralev iyonizasyon dedektörü (microFID 2020 Photovac) aracılığıyla lled. </li><li> Optik kurulum açıktır. Oluşur geçmeli soğutmalı bir 12 bit bir floresan stereomikroskopta (Leica MZ16), bilgisayar kontrollü bir olfactometer ve uygun bandpass girişim filtreleri ile stabilize uyarma lambaları ile ilişkili CCD kamera (ORCA AG Hamamatsu). Bizim kurulum açıklayan bir şema Şekil 2&#39;de verilmiştir. İçsel Optik Sinyalleri için bir fiber halka ışık (Schott) ile birleştiğinde bir 200W tungsten halojen lamba (Oriel QTH) Görüntüleme (IOSI), istikrarlı ve hatta aydınlatma sağlamak için kullanılan mikroskop amaç etrafında takılı. Flavoprotein Otofloresans Sinyalleri Görüntüleme (fasi), 5mm çekirdek sıvı ışık kılavuzu ile 150W metal halide lamba (Leica) stereomikroskopta epi-aydınlatma bağlantı noktası üzerinden floresan bile lokalize uyarma sağlar. Resim toplama ve donanım senkronizasyonu özel yazılım tarafından gerçekleştirilmektedir. Açık source yazılımı micromanager optik kurulum ve satın alma kontrol etmek için kullanılabilir. </li></ol> 4. Optik görüntüleme <ol><li> Stereomikroskopta, görüş alanı (Şekil optik kurulum şematik bir bakın. 2A) merkezli kafatası pencere altında stereotaksik çerçeve yerleştirin. </li><li> Odaklanmak için kılcal damarları mikroskop ayarlayın. (5 açıklamasına bakın) ampul bir görüntü stimülasyon yöntemi öncesinde kan damarlarının görüntülenmesi için iyi bir kontrast sağlar 560nm (yeşil) ışık (elyaf ring) altına alınır. Bu resim, hazırlık durumunu kontrol etmek için anatomik bir kontrol olarak kullanılan ve deney sırasında birkaç kez elde edilir. </li><li> IOS görüntüleme için, ışık yoğunluğu altında 630 + / -10 nm (kırmızı) aydınlatma CCD kamera tarafından kaydedilen yansıtıyordu. Görüntüler tam 150 ms yaklaşık bir pozlama süresi karşılık, saniyede 5 kare kare (hayır binning) elde edilir. Işık kaynağı Güç yeniden ayarlanır.<html> CCD piksel kuyuların doygunluğunu yakın OB alan, en az ~ 3000 ach gri seviyeleri. Bunu yapmak etkinleştirme sırasında soluk yoğunluğu değişiklikleri yakalamak için CCD 12bits dinamikleri yararlanmak mümkün kılar. Maksimum IOS amplitüdleri ulaşmak ~% 1. </li><li> FAS görüntüleme floresans için 480nm eksitasyon + /-20nm (mavi) epiflurorescence ışık altında elde edilir. 515nm A high-pass filtre ışığı yakalamak için kurulur. Görüntüler hassasiyeti en üst düzeye çıkarmak için 4 ile 4 binning ile saniyede 5 kare elde edilir. Tahrik olma ışık gücü OB alan üzerine 3000 gri seviyeleri ile IOS benzer şekilde ayarlanır. Maksimum FAS amplitüdleri ~% 3 ​​ulaşır. Hem görüntüleme yöntemleri için, söz konusu düzlemde alan derinliği aynıdır ve yaklaşık 4 kat büyütme için 0,5 mm ölçüldü. </li><li> Işık, ısıtma ve hazırlık photobleaching önlemek için görüntüleme denemeler arasında kapalı olmalıdır. </li></ol>le &quot;&gt; 5 Görüntüleme çalışmalarda <ol><li> Standart görüntüleme oturumun sadece hava teslim 10s 5 temel, 3 için daha başlangıç ​​kurtarma için sürekli bir hava akımı (Şekil kaydedilen bağlı olarak seçilen koku konsantrasyonu ve 70 82s 10s koku uyarımı takip 2A). Deneme sonunda, ışık kapalı ve temiz hava, artık koku moleküllerini yıkayın ve duyusal alışkanlık önlemek için (1 ila 3 dakika) arası deneme aralığı süresi için teslim edilir. Koku çalışmalarda boş bir çalışma (hava teslimat) ile interleaved. </li><li> Koku ile uyarılan aktif bölgeleri harita üzerinde kabaca küresel alanlar olarak görüntülenebilmekte ve bireysel glomerül (çapı 9 80 200μm) boyutuna karşılık. Görüntü işleme Şekil 2B açıklanmıştır. Olfaktör haritaları Şekil 3&#39;te sunulmuştur. OB başka herhangi bir duyusal sisteme aksine, sinyal-gürültü oranı (tek çalışmalarda koku uyarılmış yanıtlar çözmek için yeterliŞekil IOS ve Şekil 3B. 3D) FAS için. </li><li> Fare, laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için Avrupa tavsiyelerine uygun yöntemler kullanarak görüntüleme oturumun sonunda hemen ötenazi. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar (bkz. şekil 3 koku alma haritalar): <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3336/3336fig1.jpg" /> Şekil 1 yapısal organizasyonu kemirgenler ana koku ampul. Olfaktör duyusal nöronlar, ana olfaktör epitel bulunan primer duyu hücreleri, aynı odorant reseptör ifade etme ve aynı glomerül üzerine OB yakınsama. Olfaktör glomerül, yuvarlak şekilli neuropils (kesikli çevreler), OB yüzey bulunmaktadır. Glomerüler düzeyde çok yoğun ve karmaşık bir damar ağı mevcut olduğunu unutmayın. Kısaltmalar (üst / aşağı): onl: olfaktor sinir tabakası; GL: glomerüler katman, EPL: Dış pleksiform katman; MCL:mitral hücre katmanı; GCL: granül hücre katmanı. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3336/3336fig2.jpg" /> Şekil 2 Yansıtma ve in vivo olarak kayıt floresan sinyalleri. A. Wide-field optik görüntüleme kurulumu. Optik lens ve mikroskop bir epi-aydınlatma portu bağlı ya dairesel lif halka aracılığıyla kırmızı (IOS) veya mavi (FAS) hafif bir anestezi fare beyin maruz kalmaktadır. Kokular kapalı şişeleri yüklenir ve odorized hava hayvan burnu (yeşil ışık: açık kapak) teslim edilir. B. Kayıt protokolü ve veri işleme. IOS ve FAS bireysel çalışmaların serisi (süre 90&#39;ların) olarak kaydedilir. Diyagramı tek bir deneme zaman çizelgesi gösteriyor: Başlangıçta 5, 10s, 10s 3 ila stimülasyon, ve 70 82s başlangıca dönüş değişir. Görüntü işleme stimülasyon dönemlerinde yoğunluk değerleri temel sırasında yoğunluk değerleri pixel-by-pixel çıkarma (FAS) or stimülasyon artı başlangıca dönüş (IOS). Bu fark, daha sonra (Şekil görüntülerini 3)% bir varyasyon elde etmek için başlangıç ​​değerleri ile ayrılmıştır . <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3336/3336fig3.jpg" /> Şekil 3 Koku uyarılmış IOS ve FAS görüntüleme kullanarak OB faaliyet haritaları. Dorsal OB A. damarları yeşil ışık altında görüntülendi. MÖ. % 20 hexanal bir 10s tanıtımı için IOS görüntülü (sırasıyla ortalama üç çalışmalarda karşı tek deneme). Beyaz oklar bu koku ile aktive faiz küresel bölgelerde gösterir. Bu aktivasyon haritalar kare (B A ve -0.52% maksimum yansıma değişimi% -0,63), koku stimülasyon bitiminden sonra birinci, ikinci sırasında ortalama kullanılarak elde edilmiştir. Koku aktivasyon oluştu absorbans siyah bölgeler unutmayın. CD. FAS (üç ortalama çalışmalarda ilgili karşı tek bir dava, aynı odorant sırayla aynı fare satın aldııy). Bu aktivasyon haritalar kare (floresan değişimi, D ve E 0,72% 0,66% maksimum) koku stimülasyon başladıktan sonra birinci, ikinci sırasında ortalama kullanılarak elde edilmiştir. Siyah oklarla gösterilen otofloresans emisyon beyaz bölgeler siyah IOS bölgelerine uygun unutmayın. FAS haritada görülen grenli yönü duyarlılık geliştirilmesi için gerekli olan 4 binning ile 4 kaynaklanmaktadır. FAS görüntüleri otofloresans beyazlatma düzeltilmiş değildi. Görüntülerin gerçek boyutları BE: 0.7 mm genişliğinde x 1.2 mm uzunluğunda.

<ol>
	<li>Grinvald, A., Lieke, E., Frostig, R. D., Gilbert, C. D., Wiesel, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+architecture+of+cortex+revealed+by+optical+imaging+of+intrinsic+signals.">Functional architecture of cortex revealed by optical imaging of intrinsic signals.</a> Nature. 324, 361-364 (1986).</li><li>Rubin, B. D., Katz, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+odorant+representations+in+the+mammalian+olfactory+bulb.">Optical imaging of odorant representations in the mammalian olfactory bulb.</a> Neuron. 23, 499-511 (1999).</li><li>Chance, B., Cohen, P., J&amp;246, b. s. i. s., &amp;amp, F., Schoener, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+oxidation-reduction+states+in+vivo.">Intracellular oxidation-reduction states in vivo.</a> Science. 137, 499-508 (1962).</li><li>Shibuki, K., Hishida, R., Murakami, H., Kudoh, M., Kawaguchi, T., Watanabe, M., Watanabe, S., Kouuchi, T., Tanaka, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+imaging+of+somatosensory+cortical+activity+in+the+rat+visualized+by+flavoprotein+autofluorescence.">Dynamic imaging of somatosensory cortical activity in the rat visualized by flavoprotein autofluorescence.</a> J. Physiol. 549 (Pt. 3, 919-9127 (2003).</li><li>Uchida, N., Takahashi, Y. K., Tanifuji, M., Mori, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor+maps+in+the+mammalian+olfactory+bulb:+domain+organization+and+odorant+structural+features.">Odor maps in the mammalian olfactory bulb: domain organization and odorant structural features.</a> Nat. Neurosci. 3, 1035-1043 (2000).</li><li>Gurden, H., Uchida, N., Mainen, Z. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory-evoked+intrinsic+optical+signals+in+the+olfactory+bulb+are+coupled+to+glutamate+release+and+uptake.">Sensory-evoked intrinsic optical signals in the olfactory bulb are coupled to glutamate release and uptake.</a> Neuron. 52, 335-345 (2006).</li><li>Soucy, E. R., Albeanu, D. F., Fantana, A. L., Murthy, V. N., Meister, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precision+and+diversity+in+an+odor+map+on+the+olfactory+bulb.">Precision and diversity in an odor map on the olfactory bulb.</a> Nat. Neurosci. 12, 210-220 (2009).</li><li>Frostig, R. D., Lieke, E. E., Ts'o, D. Y., Grinvald, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+functional+architecture+and+local+coupling+between+neuronal+activity+and+the+microcirculation+revealed+by+in+vivo+high-resolution+optical+imaging+of+intrinsic+signals.">Cortical functional architecture and local coupling between neuronal activity and the microcirculation revealed by in vivo high-resolution optical imaging of intrinsic signals.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87, 6082-6086 (1990).</li><li>Meister, M., Bonhoeffer, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuning+and+topography+in+an+odor+map+on+the+rat+olfactory+bulb.">Tuning and topography in an odor map on the rat olfactory bulb.</a> J. Neurosci. 21, 1351-1360 (2001).</li><li>Dunn, A. K., Devor, A., Bolay, H., Andermann, M. L., Moskowitz, M. A., Dale, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+imaging+of+total+cerebral+hemoglobin+concentration,+oxygenation,+and+blood+flow+during+functional+activation.">Simultaneous imaging of total cerebral hemoglobin concentration, oxygenation, and blood flow during functional activation.</a> Opt. Lett. 28, 28-30 (2003).</li><li>L'Heureux, B., Gurden, H., Pain, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autofluorescence+imaging+of+NADH+and+flavoproteins+in+the+rat+brain:+insights+from+Monte+Carlo+simulations.">Autofluorescence imaging of NADH and flavoproteins in the rat brain: insights from Monte Carlo simulations.</a> Optics. Express. 17, 9477-9490 (2009).</li><li>Renaud, R., Gurden, H., Chery, R., Bendhamane, M., Martin, C., Pain, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multispectral+imaging+of+the+olfactory+bulb+activation:+influence+of+realistic+differential+pathlength+correction+factors+on+the+derivation+of+oxygenation+and+total+hemoglobin+concentration+maps+(Proceedings+Paper).">Multispectral imaging of the olfactory bulb activation: influence of realistic differential pathlength correction factors on the derivation of oxygenation and total hemoglobin concentration maps (Proceedings Paper).</a> , (2011).</li></ol>

Biz ifşa etmek başka bir şey var.

Bu yazıda, in vivo fare OB koku uyarılmış faaliyetleri kayıtları için IOS ve FAS görüntüleme teknikleri mevcut. Bu hedefe ulaşmak için nispeten basit ve uygun fiyatlı geniş alan optik görüntüleme kurulumu gereklidir. Görüntüleme verileri satın alma, ince cerrahi işlemler gerçekleştirmek ve dura veya beyin dokusu herhangi bir yaralanmayı önlemek için eğitim gerektirir. Özellikle, majör kanama görüntüleme için kaydedilmiş fotonları absorbe ve deneme sonunda. IOS ve FAS görüntüleme bir yararı floresan izleyiciler enjeksiyonu önlemek için hücresel toksisite veya istenmeyen yan etkilere neden olabilir. Onlar mümkün koku alma haritalar uyarımlar dolayısıyla uzamsal kodlama ile ilgili sorunları çözmek için. 2-deoksiglukoz görüntüleme aksine, tek bir hayvan görüntü birkaç kokulara imkanı da sağlar. Ancak, foton doku penetrasyonu sınırlı olduğundan, IOS ve FAS OB dorsal kısmı ile sınırlı.ve ventral bölgelerde kaydedilen olamaz. Endojen optik sinyal görüntüleme in vivo görüntüleme için mükemmel bir uzaysal çözünürlüğü sunuyor. Yansıma vasküler bileşenler Teknik gelişmeler endişe nicel hesaplamaları, duyusal aktivasyon 10 sırasında 8,9 yanı sıra kan oksijenlenme ve hacim dinamikleri sinyalleri . IOS görüntüleme yaklaşımlar Multiwavelength görüntüleme Laboratuvarımızda şu anda tam olarak duyusal aktivasyon sırasında OB toplam hemoglobin konsantrasyonu ve oksijen ölçmek için geliştirilmiştir. FAS görüntüleme eklenen bu optik spektroskopik ölçümler sırasında vasküler ve hücre içi dinamikler arasındaki çözülmemiş bir ilişki duyusal aktivasyon 11,12 cevaplamak için fırsat verecektir .

<table border="1"><tbody><tr><td> The Regent Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Imalgene </td><td> Merial </td><td></td></tr><tr><td> Rompun </td><td> Bayer </td><td></td></tr><tr><td> Agaroz, tip III-A </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A9793-50G </td></tr><tr><td> Hexanal 98% </td><td> Aldrich </td><td> 115.606-100ML </td></tr></tbody></table>

imaging odor-evoked activities in the mouse olfactory bulb using optical reflectance and autofluorescence signals

Beyin, duyusal stimülasyon uyaran kodlama katılmak fonksiyonel modülleri arasında nöron popülasyonları dağıtılır harekete geçirir. İşlevsel optik görüntüleme teknikleri bu modüller yüksek uzaysal çözünürlüğü ile duyusal korteks aktivasyonu görselleştirmek için avantajlıdır. Bu bağlamda, neuroenergetics bağlı moleküler mekanizmaları ortaya çıkan endojen optik sinyalleri geniş alanlarda kemirgen beyin üzerinde duyusal uyaranlar mekansal haritalar kaydetmek için kontrast değerli kaynaklarıdır. Burada, iki endojen optik özellikleri etkinleştirme sırasında beyin dokusunda değişiklikler dayalı teknikler mevcut. Önce içsel optik sinyalleri (IOS), kırmızı ışık yansıtma nedeniyle yerel bir değişiklik tarafından üretilir: (i) emilimini kan oksijenlenme düzeyi ve kan hacmi (ii) foton saçılması değişiklikler. Uzamsal haritalar kaydetmek için, in vivo IOS kullanımı, 1980&#39;lerin ortalarına observati ile başladıgörsel korteks 1 kedi sıçan ve yönünü sütun bıyık varil optik haritalar üzerinde. IOS koku yanıt kemirgen ana koku alma ampul (OB) yüzey görüntüleme sonra Larry Katz grubu 2 ile gösterilmiştir. İkinci yaklaşım, bu mitokondrial metabolik ara redoks değişiklikler nedeniyle flavoprotein otofloresans sinyalleri (FAS) dayanır. Daha doğrusu, tekniği, doku, mavi ışık ile heyecanlı flavoproteins okside devlet nedeniyle yeşil floresan dayanmaktadır. Bu tür sinyallerin muhtemelen Britton Şansı ve arkadaşları 3 öncü çalışmaları ile beyin aktivitesini çalışma için kaydedilen ilk floresan moleküller arasında olmasına rağmen, onlar in vivo beyin aktivasyonu haritalama için kullanılan olduğunu yakın zamana kadar değildi. FAS görüntüleme ilk Katsuei Shibuki grubu 4 hindpaw stimülasyon yanıt kemirgenler somatosensoriyel korteks uygulandı. Ortamda kimyasal maddelerin etkin algılama ve tanımlama (gıda, predatör) verir, çünkü koku alma sistemi, canlı türlerinin büyük bir çoğunluğu hayatta kalmak için merkezi bir öneme sahiptir. OB, beyindeki koku alma, bilgi işlem ilk röle. Bu uçucu odorant molekülleri tespit koku primer duyusal nöron afferent projeksiyonları alır. Her bir duyu nöron, sinir süreçleri aynı 100μm 3 ~ iyi tanımlanmış microregions göndermek aynı tip reseptör taşıyan odorant reseptör ve nöronların sadece bir tür ayrık neuropil, koku alma glomerulus (Şekil 1) oluşturduğu ifade eder. IOS görüntüleme son on yılında, en çok çalışılan duyusal yapıların biri haline gelmiştir OB 5, 6, 7, fonksiyonel arama teşvik vardır. FAS görüntüleme ile OB aktivite haritalama henüz yapılmamıştır. Burada, we fare OB koku uyarılmış faaliyetleri haritası, IOS ve FAS görüntüleme için verimli bir protokol ardışık adımları göstermek.

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Odor-Evoked Activities in the Mouse Olfactory Bulb using Optical Reflectance and Autofluorescence Signals at JoVE.com

Imaging Odor-Evoked Activities in the Mouse Olfactory Bulb using Optical Reflectance and Autofluorescence Signals

Bu makale, fareler koku ampulün yüzeyi harita koku uyarılmış faaliyetleri içsel optik sinyalleri ve flavoproteins otofloresans sinyallerini görüntüleme protokolleri sunar.

Optik Yansıtma ve Otofloresans Sinyalleri kullanarak, Fare Koku Ampul Görüntüleme Koku-Uyarılmış Etkinlikler

In the brain, sensory stimulation activates distributed populations of neurons among functional modules which participate to the coding of the stimulus. ...

imaging-odor-evoked-activities-mouse-olfactory-bulb-using-optical

Research

JoVE Journal

Neuroscience

15.9K Görüntüleme.  UMR8165 Université Paris Sud 11, Paris Diderot 7 – CNRS. Bu makale, fareler koku ampulün yüzeyi harita koku uyarılmış faaliyetleri içsel optik sinyalleri ve flavoproteins otofloresans sinyallerini görüntüleme protokolleri sunar.

Video: Imaging Odor-Evoked Activities in the Mouse Olfactory Bulb using Optical Reflectance and Autofluorescence Signals

Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording

Animals depend on olfaction for many critical behaviors, such as finding food sources, avoiding predators, and identifying conspecifics for mating and other social interactions. The electroolfactogram (EOG) recording is an informative, easy to conduct, and reliable method to assay olfactory function at the level of the olfactory epithelium. Since the 1956 description of the EOG by Ottoson in frogs1, the EOG recording has been applied in many vertebrates including salamanders, rabbits, rats, mice, and humans (reviewed by Scott and Scott-Johnson, 2002, ref. 2). The recent advances in genetic modification in mice have rekindled interest in recording the EOG for physiological characterization of olfactory function in knock-out and knock-in mice. EOG recordings have been successfully applied to demonstrate the central role of olfactory signal transduction components3-8, and more recently to characterize the contribution of certain regulatory mechanisms to OSN responses9-12.
Odorant detection occurs at the surface of the olfactory epithelium on the cilia of OSNs, where a signal transduction cascade leads to opening of ion channels, generating a current that flows into the cilia and depolarizes the membrane13. The EOG is the negative potential recorded extracellularly at the surface of the olfactory epithelium upon odorant stimulation, resulting from a summation of the potential changes caused by individual responsive OSNs in the recording field2. Comparison of the amplitude and kinetics of the EOG thus provide valuable information about how genetic modification and other experimental manipulations influence the molecular signaling underlying the OSN response to odor. 
Here we describe an air-phase EOG recording on a preparation of mouse olfactory turbinates. Briefly, after sacrificing the mouse, the olfactory turbinates are exposed by bisecting the head along the midline and removing the septum. The turbinate preparation is then placed in the recording setup, and a recording electrode is placed at the surface of the olfactory epithelium on one of the medial turbinates. A reference electrode is electrically connected to the tissue through a buffer solution. A continuous stream of humidified air is blown over the surface of the epithelium to keep it moist. The vapor of odorant solutions is puffed into the stream of humidified air to stimulate the epithelium. Responses are recorded and digitized for further analysis.

The electroolfactogram (EOG) recording is an informative, easy-to-conduct, and reliable way of assessing olfactory function at the level of the olfactory epithelium. This protocol describes a recording setup, mouse tissue preparation, data collection, and basic data analysis.

Hava-faz Electroolfactogram Kayıt Fare Koku Duyu Nöronlar analizi Yanıtları

Animals depend on olfaction for many critical behaviors, such as finding food sources, avoiding predators, and identifying conspecifics for mating and ...

Nörobilim

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and evaluating mouse models of human disease. MRI is an excellent modality for investigating genetically altered animals. It is capable of whole brain coverage, can be used in vivo, and provides multiple contrast mechanisms for investigating different aspects of neuranatomy and physiology. The advent of high-field scanners along with the ability to scan multiple mice simultaneously allows for rapid phenotyping of novel mutations.
Effective mouse MRI studies require attention to many aspects of experiment design. In this article, we will describe general methods to acquire quality images for mouse phenotyping using a system that images mice concurrently in shielded transmit/receive radio frequency (RF) coils in a common magnet (Bock et al., 2003). We focus particularly on anatomical phenotyping, an important and accessible application that has shown a high potential for impact in many mouse models at our imaging centre. Before we can provide the detailed steps to acquire such images, there are important practical considerations for both in vivo brain imaging (Dazai et al., 2004) and ex vivo brain imaging (Spring et al., 2007) that should be noted. These are discussed below.

Magnetic resonance imaging (MRI) has become an increasingly popular tool for examining the phenotype of genetically altered mice. This article illustrates the methods necessary to achieve high-throughput phenotyping of genetically altered mice using multiple-mouse MRI.

Çoklu-fare nöroanatomik Manyetik Rezonans Görüntüleme

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

In vivo electroporation is a powerful method for delivering DNA expression plasmids, RNAi reagents, and morpholino anti-sense oligonucleotides to specific regions of developing embryos, including those of C. elegans, chick, Xenopus, zebrafish, and mouse 1. In zebrafish, in vivo electroporation has been shown to have excellent spatial and temporal resolution for the delivery of these reagents 2-7. The temporal resolution of this method is important because it allows for incorporation of these reagents at specific stages in development. Furthermore, because expression from electroporated vectors occurs within 6 hours 7, this method is more timely than transgenic approaches. While the spatial resolution can be extremely precise when targeting a single cell 2, 6, it is often preferable to incorporate reagents into a specific cell population within a tissue or structure. When targeting multiple cells, in vivo electroporation is efficient for delivery to a specific region of the embryo; however, particularly within the developing nervous system, it is difficult to target specific cell types solely through spatially discrete electroporation. Alternatively, enhancer trap transgenic lines offer excellent cell type-specific expression of transgenes 8. Here we describe an approach that combines transgenic Gal4-based enhancer trap lines 8 with spatially discrete in vivo electroporation 7, 9 to specifically target developing neurons of the zebrafish olfactory bulb. The Et(zic4:Gal4TA4,UAS:mCherry)hzm5 (formerly GA80_9) enhancer trap line previously described 8, displays targeted transgenic expression of mCherry mediated by a zebrafish optimized Gal4 (KalTA4) transcriptional activator in multiple regions of the developing brain including hindbrain, cerebellum, forebrain, and the olfactory bulb. To target GFP expression specifically to the olfactory bulb, a plasmid with the coding sequence of GFP under control of multiple Gal4 binding sites (UAS) was electroporated into the anterior end of the forebrain at 24-28 hours post-fertilization (hpf). Although this method incorporates plasmid DNA into multiple regions of the forebrain, GFP expression is only induced in cells transgenically expressing the KalTA4 transcription factor. Thus, by using the GA080_9 transgenic line, this approach led to GFP expression exclusively in the developing olfactory bulb. GFP expressing cells targeted through this approach showed typical axonal projections, as previously described for mitral cells of the olfactory bulb 10. This method could also be used for targeted delivery of other reagents including short-hairpin RNA interference expression plasmids, which would provide a method for spatially and temporally discrete loss-of-function analysis.

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

The temporal and spatial resolution of genetic manipulations determines the spectrum of biological phenomena that they can perturb. Here we use temporally and spatially discrete in vivo electroporation, combined with transgenic lines of zebrafish, to induce expression of a GFP transgene specifically in neurons of the developing olfactory bulb.

Kombine Kullanımı Hedefleme Koku Ampul Nöronlar In Vivo Elektroporasyon ve Gal4 Tabanlı Enhancer Trap Zebra balığı Hatları

In vivo electroporation is a powerful method for delivering DNA expression plasmids, RNAi reagents, and morpholino anti-sense oligonucleotides to specific ...

Calcium Imaging of Odor-evoked Responses in the Drosophila Antennal Lobe

The antennal lobe is the primary olfactory center in the insect brain and represents the anatomical and functional equivalent of the vertebrate olfactory bulb1-5. Olfactory information in the external world is transmitted to the antennal lobe by olfactory sensory neurons (OSNs), which segregate to distinct regions of neuropil called glomeruli according to the specific olfactory receptor they express. Here, OSN axons synapse with both local interneurons (LNs), whose processes can innervate many different glomeruli, and projection neurons (PNs), which convey olfactory information to higher olfactory brain regions.
Optical imaging of the activity of OSNs, LNs and PNs in the antennal lobe - traditionally using synthetic calcium indicators (e.g. calcium green, FURA-2) or voltage-sensitive dyes (e.g. RH414) - has long been an important technique to understand how olfactory stimuli are represented as spatial and temporal patterns of glomerular activity in many species of insects6-10. Development of genetically-encoded neural activity reporters, such as the fluorescent calcium indicators G-CaMP11,12 and Cameleon13, the bioluminescent calcium indicator GFP-aequorin14,15, or a reporter of synaptic transmission, synapto-pHluorin16 has made the olfactory system of the fruitfly, Drosophila melanogaster, particularly accessible to neurophysiological imaging, complementing its comprehensively-described molecular, electrophysiological and neuroanatomical properties2,4,17. These reporters can be selectively expressed via binary transcriptional control systems (e.g. GAL4/UAS18, LexA/LexAop19,20, Q system21) in defined populations of neurons within the olfactory circuitry to dissect with high spatial and temporal resolution how odor-evoked neural activity is represented, modulated and transformed22-24.
Here we describe the preparation and analysis methods to measure odor-evoked responses in the Drosophila antennal lobe using G-CaMP25-27. The animal preparation is minimally invasive and can be adapted to imaging using wide-field fluorescence, confocal and two-photon microscopes.

Calcium Imaging of Odor-evoked Responses in the Drosophila Antennal Lobe

We describe an established technique to measure and analyze odor-evoked calcium responses in the antennal lobe of living Drosophila melanogaster.

Koku-uyarılmış Cevaplarının Kalsiyum Görüntüleme Drosophila Antennal Lob

The antennal lobe is the primary olfactory center in the insect brain and represents the anatomical and functional equivalent of the vertebrate olfactory ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first neural circuit in the AOS pathway, called the accessory olfactory bulb (AOB), plays an important role in establishing sex-typical behaviors such as territorial aggression and mating. This small (&#60;1 mm3) circuit possesses the capacity to distinguish unique behavioral states, such as sex, strain, and stress from chemosensory cues in the secretions and excretions of conspecifics. While the compact organization of this system presents unique opportunities for recording from large portions of the circuit simultaneously, investigation of sensory processing in the AOB remains challenging, largely due to its experimentally disadvantageous location in the brain. Here, we demonstrate a multi-stage dissection that removes the intact AOB inside a single hemisphere of the anterior mouse skull, leaving connections to both the peripheral vomeronasal sensory neurons (VSNs) and local neuronal circuitry intact. The procedure exposes the AOB surface to direct visual inspection, facilitating electrophysiological and optical recordings from AOB circuit elements in the absence of anesthetics. Upon inserting a thin cannula into the vomeronasal organ (VNO), which houses the VSNs, one can directly expose the periphery to social odors and pheromones while recording downstream activity in the AOB. This procedure enables controlled inquiries into AOS information processing, which can shed light on mechanisms linking pheromone exposure to changes in behavior.

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory bulb (AOB) has been difficult to study in the context of sensory coding. Here, we demonstrate a dissection that produces an ex vivo preparation in which AOB neurons remain functionally connected to their peripheral inputs, facilitating research into information processing of mouse pheromones and kairomones.

Bozulmamış Vomeronasal Organ ve Aksesuar Koku Ampul Ex Vivo Hazırlıklar

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

The olfactory system, specialized in the detection, integration and processing of chemical molecules is likely the most thoroughly studied sensory system. However, there is piling evidence that olfaction is not solely limited to chemical sensitivity, but also includes temperature sensitivity. Premetamorphic Xenopus laevis are translucent animals, with protruding nasal cavities deprived of the cribriform plate separating the nose and the olfactory bulb. These characteristics make them well suited for studying olfaction, and particularly thermosensitivity. The present article describes the complete procedure for measuring temperature responses in the olfactory bulb of X. laevis larvae. Firstly, the electroporation of olfactory receptor neurons (ORNs) is performed with spectrally distinct dyes loaded into the nasal cavities in order to stain their axon terminals in the bulbar neuropil. The differential staining between left and right receptor neurons serves to identify the &#947;-glomerulus as the only structure innervated by contralateral presynaptic afferents. Secondly, the electroporation is combined with focal bolus loading in the olfactory bulb in order to stain mitral cells and their dendrites. The 3D brain volume is then scanned under line-illumination microscopy for the acquisition of fast calcium imaging data while small temperature drops are induced at the olfactory epithelium. Lastly, the post-acquisition analysis allows the morphological reconstruction of the thermosensitive network comprising the &#947;-glomerulus and its innervating mitral cells, based on specific temperature-induced Ca2+ traces. Using chemical odorants as stimuli in addition to temperature jumps enables the comparison between thermosensitive and chemosensitive networks in the olfactory bulb.

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

Here we describe a protocol for measuring and analyzing temperature responses in the olfactory bulb of Xenopus laevis. Olfactory receptor neurons and mitral cells are differentially stained, after which calcium changes are recorded, reflecting a sensitivity of some neural networks in the bulb to temperature drops induced at the nose.

koku ampul kalsiyum Değişiklikleri İzleme yoluyla Sıcaklık kaynaklı Nöronal Aktivite Kayıt<em&gt; Xenopus laevis</em

The olfactory system, specialized in the detection, integration and processing of chemical molecules is likely the most thoroughly studied sensory system. ...

Simultaneous Evaluation of Cerebral Hemodynamics and Light Scattering Properties of the In Vivo Rat Brain Using Multispectral Diffuse Reflectance Imaging

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional multispectral diffuse reflectance imaging system. This system is constructed from a broadband white light source, a motorized filter wheel with a set of narrowband interference filters, a light guide, a collecting lens, a video zoom lens, and a monochromatic charged-coupled device (CCD) camera. An ellipsoidal cranial window is made in the skull bone of a rat under isoflurane anesthesia to capture in vivo multispectral diffuse reflectance images of the cortical surface. Regulation of the fraction of inspired oxygen using a gas mixture device enables the induction of different respiratory states such as normoxia, hyperoxia, and anoxia. A Monte Carlo simulation-based multiple regression analysis for the measured multispectral diffuse reflectance images at nine wavelengths (500, 520, 540, 560, 570, 580, 600, 730, and 760 nm) is then performed to visualize the two-dimensional maps of hemodynamics and the light scattering properties of the in vivo rat brain.

Simultaneous Evaluation of Cerebral Hemodynamics and Light Scattering Properties of the In Vivo Rat Brain Using Multispectral Diffuse Reflectance Imaging

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional multispectral diffuse reflectance imaging system.

Serebral Hemodinamiğin ve Işık Saçılımının Eşzamanlı Değerlendirilmesi<em&gt; In Vivo</emÇokspektrumlu yaygın reflektans ımaging&#39;i kullanarak&gt; Sıçan Beyin

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional ...

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in vivo&#8212;rapidly, repetitively, and at a high resolution. This protocol describes OCT imaging in the mouse retina as a powerful tool to study optic neuropathies (OPN). The OCT system is an interferometry-based, non-invasive alternative to common post mortem histological assays. It provides a fast and accurate assessment of retinal thickness, allowing the possibility to track changes, such as retinal thinning or thickening. We present the imaging process and analysis with the example of the Opa1delTTAG mouse line. Three types of scans are proposed, with two quantification methods: standard and homemade calipers. The latter is best for use on the peripapillary retina during radial scans; being more precise, is preferable for analyzing thinner structures. All approaches described here are designed for retinal ganglion cells (RGC) but are easily adaptable to other cell populations. In conclusion, OCT is efficient in mouse model phenotyping and has the potential to be used for the reliable evaluation of therapeutic interventions.

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

This manuscript describes a protocol for the in vivo imaging of the mouse retina with high-resolution spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT). It focuses on retinal ganglion cells (RGC) in the peripapillary region, with several scanning and quantifying approaches described.

Optik Koherens tomografi: Fare retina Ganglion hücreleri Vivo içinde görüntüleme

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in ...

Quadruple Immunostaining of the Olfactory Bulb for Visualization of Olfactory Sensory Axon Molecular Identity Codes

The mouse olfactory system is often used to study mechanisms of neural circuit formation&#12288;because of its simple anatomical structure. An Olfactory Sensory Neuron (OSN) is a bipolar cell with a single dendrite and a single unbranched axon. An OSN expresses only one Olfactory Receptor (OR) gene, OSNs expressing a given type of OR converge their axons to a few sets of invariant glomeruli in the Olfactory Bulb (OB). A remarkable feature of OSN projection is that the expressed ORs play instructive roles in axonal projection. ORs regulate the expression of multiple axon-sorting molecules and generate the combinatorial molecular code of axon-sorting molecules at the OSN axon termini. Thus, to understand the molecular mechanisms of OR-specific axon guidance mechanisms, it is vital to characterize their expression profiles at the OSN axon termini within the same glomerulus. The aim of this article was to introduce methods for collecting as many glomeruli as possible on a single OB section and for performing immunostaining using multiple antibodies. This would allow the comparison and analysis of the expression patterns of axon-sorting molecules without staining variation between OB sections.

Olfactory sensory neurons express a wide variety of axon-sorting molecules to establish proper neural circuitry. This protocol describes an immunohistochemical staining method to visualize combinatorial expressions of axon-sorting molecules at the axon termini of olfactory sensory neurons.

Koku Meşfatının Olfaktör Duyusal Akson Moleküler Kimlik Kodlarının Görselleştirilmesi İçin Dörtlü İmmün Sulanması

The mouse olfactory system is often used to study mechanisms of neural circuit formation&#12288;because of its simple anatomical structure. An Olfactory ...

Stereological Estimation of Dopaminergic Neuron Number in the Mouse Substantia Nigra Using the Optical Fractionator and Standard Microscopy Equipment

In pre-clinical Parkinson&#39;s disease research, analysis of the nigrostriatal tract, including quantification of dopaminergic neuron loss within the substantia nigra, is essential. To estimate the total dopaminergic neuron number, unbiased stereology using the optical fractionator method is currently considered the gold standard. Because the theory behind the optical fractionator method is complex and because stereology is difficult to achieve without specialized equipment, several commercially available complete stereology systems that include the necessary software do exist, purely for cell counting reasons. Since purchasing a specialized stereology setup is not always feasible, for many reasons, this report describes a method for the stereological estimation of dopaminergic neuronal cell counts using standard microscopy equipment, including a light microscope, a motorized object table (x, y, z plane) with imaging software, and a computer for analysis. A step-by-step explanation is given on how to perform stereological quantification using the optical fractionator method, and pre-programmed files for the calculation of estimated cell counts are provided. To assess the accuracy of this method, a comparison to data obtained from a commercially available stereology apparatus was performed. Comparable cell numbers were found using this protocol and the stereology device, thus demonstrating the precision of this protocol for unbiased stereology.

This work presents a step-by-step protocol for the unbiased stereological estimation of dopaminergic neuronal cell numbers in the mouse substantia nigra using standard microscopy equipment (i.e., a light microscope, a motorized object table (x, y, z plane), and public domain software for digital image analysis.

Optik Fractionator ve standart mikroskobu ekipmanlar kullanarak fare gözlemliyorum Nigra dopaminerjik nöron sayısının stereological tahmin

In pre-clinical Parkinson&#39;s disease research, analysis of the nigrostriatal tract, including quantification of dopaminergic neuron loss within the ...