Bu çalışma Deutsche Forschungsgemeinschaft (KA1270/3-1/2) ve BONFOR (O-112,0040) hibe tarafından desteklenmiştir.

1. Hayvanlar 25 g arasında bir ortalama ağırlık Erkek C57Bl6 / J fareler Harlan Winkelmann (Borchen, Almanya) dan elde edilmiştir. Tüm deneyler hayvanların korunmasına ilişkin federal yasa uyarınca yapıldı. Laboratuvar hayvan bakım prensiplerini takip edildi. Hayvanlar 12 saat ışık / karanlık döngüsü üzerinde tutulan ve piyasada mevcut kemirgen diyeti ve musluk suyu ad libitum verilmiştir. Hayvanlar en az 7 gün deneyler önce hayvan tesisi geldikten sonra muhafaza edilmelidir. Tüm deneylerde kolayca sıçan ya da diğer türler için uyarlanmış ve büyük hayvan modelleri içine hafif değişiklikler olabilir unutmayın. 2. Operatif Prosedür <ol><li> Anestezi oksijen (Abbott, Wiesbaden, Almanya) izofluran ile indüklenen ve korunur. Yapışkan bant ile sırtüstü ve düzeltme ekstremitelerde (Leukosilk, Beiersdorf, Hamburg, Almanya) anesteziye yere hayvanların başlangıçlı sonra. </li&gt; <li> Karın duvarının tıraş ve cerrahi dezenfeksiyonu sonra median laparotomi 2 santimetre uzunluğunda yapılır. Linea alba boyunca bir insizyon ile karın boşluğuna girin. Sıra İki steril retraktörler karın açık tutmak için. Dikkatlice sola barsak eventerate ve ıslak pamuk gazlı bez üzerine yerleştirin. </li><li> Eşzamanlı çekum pilor gelen aplikatör yuvarlayarak iki nemli ve steril pamuklu aplikatörler (sakat, Neunkirchen, Almanya) ile tüm ince barsak lümen içeriğini boşaltın. DİKKAT: ince bağırsak duvarı veya bağırsak damarlarının lezyonları kanamalar kaçının. Iskemi veya mekanik tıkanıklığı önlemek ve sürekli bir iki katmanı 5/0 naylon emilmeyen dikişlerle (Ethicon, Norderstedt, Almanya) kullanılarak abdominal insizyon kapatmak için bükmeden periton mağaraya gut geri koy. </li></ol> 3. Postoperatif Bakım <ol><li> Prosedürü bir ısıtma lambası, observi altında hayvan yerleştirdikten sonrang o anestezi kendini toparlayana kadar. Kafesine geri fare koyun ve su ve gıdaya erişim sağlar. Peristaltizm etkileyecek opioidlerin özelliği nedeniyle, içme suyu NSAID (örneğin metamizol için) ile perioperatif analjezi gerçekleştirin. </li></ol> 4. Sohbet sonrasında Fonksiyonel Çalışmalar 24 saat <ol class="lalpha"><li> Gastrointestinal Transit (GYTE) <ol><li> Sohbet sonrası oksijen 22.5 saat izofluran ile biraz fareler Anesteziyoloji. Dikkatle fare kafası hyperextend ve künt forseps ile dilini dışarı çekin. Ile 1 ml şırınga doldurun en az 100 ul floresein etiketli dekstran (FITC-dekstran, 70.000 MW, Sigma Aldrich, Taufkirchen, Almanya), arteryel kateter (VYGON, Ecouen, Fransa) bağlayın ve dikkatli olarak kateter yerleştirin mideye gastrik tüp. </li><li> Kısaca 100 ul FITC-dekstran enjekte ve kateter dışarı çekin. Uyanık hayvan edelim ve 90 dakika bekleyin. Bu süre boyunca fareler yiyecek veya suya erişimi yok. &lt;/ Li&gt; <li> Onbeş 2 ml iplik tüpleri hazırlayın ve ardışık olarak etiketleyin. </li><li> Fareler gavaj sonra 90 dk Euthanize ve mide anüse kadar tüm gastrointestinal sistem kaldırın. Bir polistiren ped üzerine bağırsak yerleştirin ve germe kaçının. MAĞARASI: Bu yakındaki segmenti içine sıvı FITC-dekstran kayması önlemek için yavaşça bağırsak çıkarmak için çok önemlidir. Başlangıçta için bu başlangıcında ve her bir parçanın görüntüleri sonundaki kullanım için yararlı olabilir. </li><li> Ince barsak ve kolonun tam uzunluğunun tam uzunluğunu ölçün. Kanüller ile polistiren pad aşağı iğneleyerek 10 eşit büyüklükte parça halinde ince bağırsak bölün. 3 parça halinde kolon bölün. Sen 15 segment (mide # 1), on eşit büyüklükte ince barsak segmentleri (# 2-11), çekum (# 12) ve üç 3 eşit büyüklükte kolon segmentleri (# 13-15) hazırladık. </li><li> İşaretli pozisyonlarda bağırsak transeksiyonu, bir forseps ile yakala ve önceden hazırlanmış KHB containi içine 1.0 ml KHB ile bir kez yıkayınng 2.0 ml tüpler ve 20 saniye boyunca kuvvetlice karıştırın. Mide ve çekum doğrudan yerleştirilir ve hazırlanan tüpler kesilir. Böylece tüpler içine makas dan luminal içeriği durulama izler, 1.0 ml KHB ile bu tüpler doldurun. </li><li> Bir masa üstü santrifüjü içinde oda sıcaklığında 5 dakika için 12,000 RCF probları santrifüjleyin. Santrifüjleme sırasında başka bir 15 numaralandırılmalıdır 1.5 ml tüpler hazırlamak. </li><li> 4&#39;te yeni 1.5 ml tüp ve karanlıkta mağaza ° analizi kadar C (sonraki adım) içine net süpernatantlar aktarın. Problar FITC sinyal önemli bir kayıp olmaksızın 4, birkaç gün ° C&#39;de saklanabilir. Uzun depolama &lt;-18% 0.09 Sodyum-azit veya deposu eklemek için ° C </li><li> Siyah bir 96-kuyucuklu levha (Greiner Bio biri, Frickenhausen, Almanya) üzerinde yüzer maddelerinin pipetle 100 ul duplets. Boş olarak KHB pipetleyin iki 100 ul örnekleri. </li><li> Bir floresan okuyucu (Safire, Tecan, Crailsheim, Almanya) plaka okuyun ve fluorescenc ölçmek494 nm (soğurma) / 521 nm (emisyon) dalga boyunda e. Örneklerinden boş değerler çıkarın. </li><li> Aşağıdaki formül tarafından fiilen işaretleyici dağıtımı için ağırlık merkezi olan FITC-dekstran dağıtım geometrik merkezi (GC), hesaplayın: GC = Σ (kademeli başına toplam floresan sinyalinin% * bölüm sayısı) / 100 </li></ol> Not: bu bölüm numarası ile her bir parçanın floresans yüzdesi ile çarpılarak bağırsak içinde işaretleyici dağılımının bir ağırlıklı ortalama değerlendirilir. Bu nokta işareti ile seyahat dağıtım ve mesafe hem de etkilenmiştir, ancak belirli yatan dağılımı varsayar hiçbir edilir. 7 hesaplanan GC değeri genellikle gastrointestinal sistem (Şekil 1A) üzerinde FITC dekstran dağılımını gösteren bir grafik ile birlikte sunulmaktadır. </li><li> Kolon Transit <ol><li> Fare isoflur ile zayıf anestezi olmalıdırOksijen ane% 2&#39;dir. DİKKAT: hayvan 40 saniye içinde uyanık olacak ki. </li><li> Dikkatle anüs yoluyla kolon içine bir fistül prob (metal çubuk, 2 mm çapında) takarak kolon açıklığını incelemek. </li><li> Fistül prob kolon içine doğru 2 mm cam topu 3 cm itin ve hemen prob çekin kullanma. Şeffaf bir kafes içinde fare yerleştirin ve fistül prob kolon çıkardı sonra zamanı ölçmeye başlamak. Fare bir göz atın ve cam top atılır olduktan sonra doğrudan zaman durdurabilirsiniz. </li></ol></li></ol> 5. İzole ME Örneklerinin Histokimyasal Analizi <ol><li> Midjejunal segmentleri barsak kesilir ve Sylgard dolu tabak soğuk KHB batırılır. </li><li> Mezenter 0,2 mm böcek iğne (Güzel Bilim Araçları, Heidelberg, Almanya) ile çanak tutturulmuştur. </li><li> Onun mezenterik sınırı boyunca segmentini açmak ve uzunluğu ve genişliği ~% 120 streç kesin. Böcek ile fiksasyon Finalizemezenter ters sitede işaretçilerine. Dolayısıyla tüm lümen içeriğinin kızarma, taze buz KHB dikkatlice Sylgard çanak durulayın. ME şimdi mekanik mezenter başlayarak tunika mukoza ayrılmış olabilir. Hazırlanması sırasında taze, soğutulmuş KHB birkaç kez değiştirin. </li><li> Ayrı tunika mukoza şok daha fazla analiz için sıvı nitrojen içinde dondurulmuş veya iptal edilebilir. </li><li> Oda sıcaklığında 10 dakika için% 100 etanol ile izole ME tüm montaj aparatı. Soğutulmuş KHB kullanarak tüm montaj üç kez yıkayın. Not: Diğer fiksatif (yani,% 4 formaldehit, asetik asit, aseton) aynı zamanda daha sonraki analiz ile uyumluluğunu test edildikten sonra da kullanılabilir. </li><li> ME bütün bağlar daha histokimyasal veya immünohistokimyasal boyama için hazır: </li></ol><ol class="lalpha"><li> Histokimya: miyeloperoksidaz (MPO) boyama Sızma PMN aşağıdaki MPO boyama protokolü tarafından incelenebilir. <ol><li> 10 mg H çözünanker Yates 10 ml KHB reaktif (Polyscience Avrupa, Eppelheim, Almanya) ve% 3 H 2 O 2 100 ul ekleyin. Kullanın ve tekrar kullanmayın taze hemen önce çözelti hazırlayın. </li><li> Oda sıcaklığında 10 dakika için bütün bağlar inkübe edin. </li><li> 10 dakika süreyle soğuk KHB ve inkübe kapsamlı örnekler durulayın. </li><li> Bir ışık mikroskop altında 2 saat analiz slaytlar için Kuruduktan sonra sulu montaj ortamında örnekleri (Aquatek, Merck, Darmstadt, Almanya) monte edin. </li><li> 5 rastgele seçtikleri alanlarda hücre sayıları sayma ve MPO pozitif hücre / mm 2 olarak hesaplamak. </li></ol></li><li> İmmünhistokimyasal Boyama: Buna uygun olarak, histokimyasal MPO boyama için, tüm bağlar immünohistokimyasal boyamalar gerçekleştirilebilir. Prensip olarak, hücre kültürleri veya doku dilim sizin köklü immünohistokimyasal boyama protokolleri tamamına kolaylıkla monte boyama adapte edilebilir. Bununla birlikte, özel anti prosedür optimizeorganları şiddetle tavsiye edilir. <ol><li> 5 x 5 mm parçalar halinde numunelerin kesin ve ~ 150 ul 2.0 ml&#39;lik tabanı yuvarlak santrifüj tüplerine boyama gerçekleştirmek - 200 ul antikor çözüm. </li><li> Sabitleme ve işlem engelleme (oda sıcaklığında 1 saat için PBS içinde yani% 3 BSA) &quot;Sylgard çanak&quot; de gerçekleştirilebilir. </li><li> PBS ya da başka tampon içinde yıkama adımları 12 oyuklu plakalar içinde gerçekleştirilebilir. </li><li> Boyama tüpleri ve çamaşır plakaları arasında keskin bir forseps ile dikkatlice. Örnekleri aktarın. </li><li> Kapağı makbuzları ile anti-fading montaj orta son yıkama prosedürü montaj örnekleri sonra ve bir floresan mikroskop ile analiz. </li></ol></li></ol> 6. ME Organ Kültürü <ol><li> Bütün ince bağırsak İM sonra çıkarıldı ve 24 saat 200 U / ml penisilin G ve 100 ug / ml streptomisin (KHB + P / S) ihtiva eden soğuk KHB yerleştirilir. </li><li> 3 cm uzunlukta bağırsak kesin ve gla içeren bir Sylgard her segmenti aşağı pinss çanak. </li><li> Ince makas ile mezenter çıkarın ve bir örgü iğne bağırsak kayma. </li><li> Hafifçe keskin bir forseps ile ME kesilirken ve nemli bir pamuk aplikatör kullanarak submukozadan kapalı şerit. Tunika mukoza örgü iğne kalır ve daha fazla araştırma için dondurulmuş çırpıda olabilir. ME soğuk KHB toplanır + P / S </li><li> 2 küçük parçalar halinde ME izole şeritler Kes - 4 mm uzunluğunda ve + P / S yarım saat buz KHB onu inkübasyon ve numune birkaç kez durulayın. </li><li> 500 ul Dulbecco s modifiye Eagle (DMEM) içeren steril 24-plaka yaklaşık 50-60 mg ME (bir ince barsak yarısı ME azından) aktarın. </li><li> 37 inkübe ° C ve% 5, ilave 24 saat boyunca CO2. </li><li> Bir mikroskop altında bakteriyel veya mantar açısından hücre kültürleri inceleyin. </li><li> Süpernatant toplayın, sıvı azot içinde 1.000 rcf ve ek dondurma az 5 dakika boyunca aşağı doğru döndürün. Bu arada musc kurulayın leke30 sn ve ağırlık için temiz bir mendil üzerine le doku. </li><li> Süpernatantlar talimatları izlenerek ELISA üreten ya da üstte yüzen madde içindeki diğer metabolitler (örneğin nitrit) tarafından yayımlanan sitokin sonraki analiz (IL-6) için de kullanılabilir. </li><li> ME doku ağırlığı başına ölçülen konsantrasyon Normalize. </li></ol> 7. Temsilcisi Sonuçlar <ol><li> İşlevsel Araştırmalar İÇN şiddetini değerlendirmek için en önemli parametre in vivo GYTE sınavdır. Şekil 1A arıtılmamış kontrollerde gastrointestinal sistem boyunca FITC dekstran tipik bir dağılım gösterir ve intestinally ameliyattan sonra fareler 24 saat manipüle. IM proksimal jejunum GYTE önemli bir gecikme (Şekil 1B) neden olurken hayvanlarda çekum hesaplanan geometrik merkezi (GC) ile normal GYTE gösterdi &quot;Sham Opere&quot; Kolon motilitesi ayrı topu atılım süresi o ölçümü ile odaklanmıştırfa 2 mm cam topu. IM 470 arasında uzamış bir atılım süresi yol ise 200 sn - - Sham farelerde 48 bir atılım süresi göstermek işletilen 775 sn (Şekil 1C). </li><li> Morfolojik Araştırmalar Inflamatuar tanımlamak için lökositlerin ME birkaç fenotipleri içinde uzatmak histokimyası veya immünohistokimyasal kullanılarak analiz edilebilir. Şekilde 2A + B PMNs&#39;nin düşük varlığı hayvanlar (39 ± 7 hücre / mm 2) gözlenmiştir &quot;sham operasyonu&quot;. Ince bağırsak IM sham operasyonu fareler ile karşılaştırıldığında güçlü bir PMN infiltrasyonu (660 ± 86 hücre / mm 2) yol açtı </li><li> ME Organ Culture Hücre kurtuldu Birçok inflamatuar mediatörler doku özütündeki tespit etmek zordur. Organ kültürleri kültür üstte yüzen madde içindeki serbest mediatörlerin tespitine izin verir. POI bir temsilcisi arabulucu gastrointestinal önemli inhibitör nörotransmitter olarak, hangi YOK. 5 NO ME organı cul tespit edilemediOpere kontrol hayvanlarının Ture süpernatantlar (5 ± 6 uM / 24 sa / mg doku). Sham operasyonu (laparatomi) farelerde bazal 53 NO düzeyleri ± 36 uM / 24 saat / mg doku gözlenmiştir. Intestinally (ameliyattan sonra 24 saat hasat) manipüle farelerin ME kültürleri (Şekil 3) 24 saat ME organ kültürü sırasında (2254 ± 853 mM / 24 saat / mg doku) daha fazla NO anlamlı üretirler. </li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4086/4086fig1.jpg" /> Şekil 1. GYTE (A + B) ve kolonik transit IM etkisi (C) GYTE 15 gastrointestinal segmentleri-mide (Sto), ince bağırsak (SI 1-9 emilmeyen floresein etiketli dekstran yüzde olarak ölçüldü ), çekum (CEC) ve kolon (Co) oral alımından sonra -90 dk. Kolon geçiş, bir 2 mm cam boncuk boşaltım kadar fistül sonda dışarı doğru çekilmesini saat olarak ölçüldü. Floresin izotiyosiyanat-Dex (A) Gastrointestinal dağıtımSham veya IM sonra tran. Sham ameliyesi uygulanmış hayvanlarda işaretleyici en çok manipüle edilmiş hayvanlarda proksimal jejunumda konumu ile karşılaştırıldığında, körbağırsak ve proksimal kolon içinde yer almaktadır. Noktalı çizgiler GC hesaplanır göstermektedir. (B) GC hesaplanması IM sonra uzun bir gastrointestinal transit zamanı göstermiştir. (C) Kolon transit süresi Sham ameliyesi uygulanmış hayvanlar ile karşılaştırıldığında, İM farelerde önemli bir gecikme gösterdi. 15 intestinal segmentler için GC (n = 5) ortalama olarak görüntülenir. Kolon transit kez tüm bireysel değerleri (n = 6) ile ifade sergilendi. *** = P &lt;0.001, Student t-testi. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/4086/4086fig2.jpg" /> Şekil 2. Incebarsak ME içinde MPO pozitif hücrelerin saptanması. (A) ME bütün bağlar MPO pozitif laparotomi sonrası PMN 24 saat (plasebo) veya IM prosedürün tespiti için arzulamak Yates reaktifi ile boyandı. Fare başına 5 rastgele seçilmiş alanlarında MPO pozitif hücre (B) Sayısallaştırma. n = 6grup başına nimals. *** = P &lt;0.001, Student t-testi. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/4086/4086fig3.jpg" /> Şekil 3. ME kültür yüzer NO üretimi. Opere kontrollerden kas örnekleri, sham operasyonu ve IM fareler postoperatif 24 saat alınır ve 24 saat boyunca kültüre edildi. Tedavi edilmeyen fareler NO sadece çok düşük bir bazal üretimi göstermiştir. Laparatomi sonrası NO kurtuluş kontrol grubu ve sham operasyonu fareler arasında önemli farklılıklar ölçüm olmadan artar. IM NO üretimi sonrası 24 saat önemli ölçüde arıtılmamış veya sham operasyonu fareler ile karşılaştırıldığında artmaktadır. Grup başına n = 5 hayvan. *** = P &lt;0.001, 1 yönlü ANOVA.

<ol>
	<li>Wehner, S., Behrendt, F. F., Lyutenski, B. N., Lysson, M., Bauer, A. J., Hirner, A., Kalff, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+macrophage+function+prevents+intestinal+inflammation+and+postoperative+ileus+in+rodents.">Inhibition of macrophage function prevents intestinal inflammation and postoperative ileus in rodents.</a> Gut. 56, 176-185 (2007).</li><li>Kalff, J. C., Schwarz, N. T., Walgenbach, K. J., Schraut, W. H., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocytes+of+the+intestinal+muscularis:+their+phenotype+and+isolation.">Leukocytes of the intestinal muscularis: their phenotype and isolation.</a> J. Leukoc. Biol. 63, 683-691 (1998).</li><li>Kehlet, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postoperative+ileus.">Postoperative ileus.</a> Gut. 47, iv85-iv86 (2000).</li><li>Wehner, S., Schwarz, N. T., Hundsdoerfer, R., Hierholzer, C., Tweardy, D. J., Billiar, T. R., Bauer, A. J., Kalff, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+IL-6+within+the+rodent+intestinal+muscularis+after+intestinal+surgical+stress.">Induction of IL-6 within the rodent intestinal muscularis after intestinal surgical stress.</a> Surgery. 137, 436-446 (2005).</li><li>Kalff, J. C., Schraut, W. H., Billiar, T. R., Simmons, R. L., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+inducible+nitric+oxide+synthase+in+postoperative+intestinal+smooth+muscle+dysfunction+in+rodents.">Role of inducible nitric oxide synthase in postoperative intestinal smooth muscle dysfunction in rodents.</a> Gastroenterology. 118, 316-327 (2000).</li><li>Iyer, S., Saunders, W. B., Stemkowski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Economic+burden+of+postoperative+ileus+associated+with+colectomy+in+the+United+States.">Economic burden of postoperative ileus associated with colectomy in the United States.</a> J. Manag. Care Pharm. 15, 485-494 (2009).</li><li>Miller, M. S., Galligan, J. J., Burks, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+measurement+of+intestinal+transit+in+the+rat.">Accurate measurement of intestinal transit in the rat.</a> J. Pharmacol. Methods. 6, 211-217 (1981).</li><li>Kalff, J. C., Schraut, W. H., Simmons, R. L., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+manipulation+of+the+gut+elicits+an+intestinal+muscularis+inflammatory+response+resulting+in+postsurgical+ileus.">Surgical manipulation of the gut elicits an intestinal muscularis inflammatory response resulting in postsurgical ileus.</a> Ann. Surg. 228, 652-663 (1998).</li><li>Wehner, S., Straesser, S., Vilz, T. O., Pantelis, D., Sielecki, T., de lC, V., Hirner, A., Kalff, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+p38+mitogen-activated+protein+kinase+pathway+as+prophylaxis+of+postoperative+ileus+in+mice.">Inhibition of p38 mitogen-activated protein kinase pathway as prophylaxis of postoperative ileus in mice.</a> Gastroenterology. 136, 619-629 (2009).</li><li>Konigsrainer, I., Turck, M. H., Eisner, F., Meile, T., Hoffmann, J., Kuper, M., Zieker, D., Glatzle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Gut+is+not+only+the+Target+but+a+Source+of+Inflammatory+Mediators+Inhibiting+Gastrointestinal+Motility+During+Sepsis.">The Gut is not only the Target but a Source of Inflammatory Mediators Inhibiting Gastrointestinal Motility During Sepsis.</a> Cell Physiol. Biochem. 28, 753-760 (2011).</li><li>Schwarz, N. T., Kalff, J. C., Turler, A., Speidel, N., Grandis, J. R., Billiar, T. R., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+jejunal+manipulation+causes+postoperative+pan-enteric+inflammation+and+dysmotility.">Selective jejunal manipulation causes postoperative pan-enteric inflammation and dysmotility.</a> Gastroenterology. 26, 159-169 (2004).</li><li>Engel, D. R., Koscielny, A., Wehner, S., Maurer, J., Schiwon, M., Franken, L., Schumak, B., Limmer, A., Sparwasser, T., Hirner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+helper+type+1+memory+cells+disseminate+postoperative+ileus+over+the+entire+intestinal+tract.">T helper type 1 memory cells disseminate postoperative ileus over the entire intestinal tract.</a> Nat. Med. , (2010).</li><li>Stoffels, B., Schmidt, J., Nakao, A., Nazir, A., Chanthaphavong, R. S., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+interleukin+10+in+murine+postoperative+ileus.">Role of interleukin 10 in murine postoperative ileus.</a> Gut. 58, 648-660 (2009).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

IM (10 dk karşı yavaşça çekum içine ince bağırsak içeriğinin boşaltılması ile IM karşı iki pamuk aplikatör kullanarak ince barsak muayene için ince barsak evantrasyonu) farklı düzeylerde analiz karşılaştırmalı bir çalışmada cerrahi manipülasyon ve İÇN ölçüde arasında bir korelasyon saptandı. IM uzun süreli ve şiddetli POI sonuçlanan ME (PNMs, makrofajlar ve mast hücreleri) lökositlerin yüksek miktarda gösterdi. 8 diğer gruplar ile karşılaştırıldığında. <p...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Ethilon 5/0 </td><td> Ethicon </td><td> 1666H </td></tr><tr><td> Pamuk aplikatörler </td><td> Sakat </td><td> 71010 </td></tr><tr><td> arteryel kateter </td><td> VYGON </td><td> 115-798 </td></tr><tr><td> 96 oyuklu plaka (siyah) </td><td> Greiner Bio One </td><td> 655096 </td></tr><tr><td> cam topu (2 mm çapında) </td><td> Worf </td><td> istek üzerine </td></tr><tr><td> Böcek işaretçilerine </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 26000-25 </td></tr><tr><td> Arzulamak Yates Reaktif </td><td> Polyscience </td><td> 560694 </td></tr><tr><td> Aquatek </td><td> Merck </td><td> HC109850 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Lonza </td><td> BE12-604 F </td></tr><tr><td> FITC-dekstran (MW 70.000) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 46945-500MG-F </td></tr></tbody></table>

functional assessment of intestinal motility and gut wall inflammation in rodents: analyses in a standardized model of intestinal manipulation

Gastrointestinal sistemin iltihaplanması, insan hastalıklarının bir dizi için yaygın nedenlerinden biridir. Hayvan araştırma modelleri intestinal patoloji hücresel karmaşık ve moleküler soruşturmada kritik önem taşımaktadır. Tunika mukoza muskularis eksterna (ME) ayrıca, yerleşik immunocytes yoğun bir ağ barındırdığı bir çok immün organı olduğunu genellikle birçok inflamatuar hastalıklar, ortaya yeni eserler ilgi organlardan biri olmasına rağmen. 1,2 Bu eserler standardize içinde yapıldı ağırlıklı ME sınırlı, barsak duvarında inflamasyona neden olur bağırsak manipülasyon modeli (IM). Inflamasyon IL-6 4 veya IL-1β veya inhibitör nörotransmitter gibi proinflamatuar mediatörlerin kurtuluşu ile karakterize klinik bu iltihap karın cerrahisi sonrası sık ve kaçınılmaz bir komplikasyondur postoperatif ileus (POI) olarak bilinen uzun süreli bağırsak dismotilite,. 3 yol açar nitri gibic oksit (NO). 5 Akabinde, immunocytes muazzam sayıda polimorfonükleer nötrofiller (PMN) ve monositler tarafından hakim, ME içine extravasate ve nihayet POI korumak. gün süren 2, bu bağırsak felci aspirasyonu riski, bakteriyel translokasyon yol açar ve sepsis ve multi organ yetmezliğine kadar komplikasyonlar enfeksiyon ve yüksek bir ekonomik yük getirmektedir. 6 Bu yazıda IM ve gastrointestinal geçiş (GYTE) ve kolonik transit vivo değerlendirilmesinde standart modelini göstermektedir. Ayrıca biz bu son derece immunoactive barsak duvarında bölümlerinde hem inflamatuvar yanıtları ayırt etmek önemlidir immünolojik analizi takiben tunika mukoza gelen ME ayrılması için bir yöntem gösterilmektedir. Tüm analizler gastrointestinal fonksiyon etkileyen, kolayca herhangi bir diğer araştırma modelleri devredilemez.

Watch this Scientific Journal Video about Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation at JoVE.com

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Postoperatif ileus (POI) artmış morbidite ve uzamış hastanede kalış yol abdominal cerrahi bir komplikasyonudur. Profilaktik veya terapötik stratejiler yoğunlaştırılmış araştırma yokluğu nedeniyle gereklidir. Bu nedenle İÇN patofizyolojisi araştırmak ve olası tedavi seçenekleri incelemek için bir standart ve uygulanabilir fare modeli kurulmuştur.

Bağırsak Manipülasyon bir Standart Model Analizleri: Kemirgenler Barsak Motilite ve Gut Duvar İnflamasyon İşlevsel Değerlendirilmesi

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

functional-assessment-intestinal-motility-gut-wall-inflammation

Research

JoVE Journal

Medicine

22.0K Görüntüleme.  University of Bonn. Postoperatif ileus (POI) artmış morbidite ve uzamış hastanede kalış yol abdominal cerrahi bir komplikasyonudur. Profilaktik veya terapötik stratejiler yoğunlaştırılmış araştırma yokluğu nedeniyle gereklidir. Bu nedenle İÇN patofizyolojisi araştırmak ve olası tedavi seçenekleri incelemek için bir standart ve uygulanabilir fare modeli kurulmuştur.

Video: Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One important prerequisite is a good understanding of all safety and efficacy aspects obtained in a large animal model that validly reflect the human scenario of myocardial infarction (MI). Pigs are widely used in this regard since their cardiac size, hemodynamics, and coronary anatomy are close to that of humans. Here, we present an effective protocol for using the porcine MI model using a closed-chest coronary balloon occlusion of the left anterior descending artery (LAD), followed by reperfusion. This approach is based on 90 min of myocardial ischemia, inducing large left ventricle infarction of the anterior, septal and inferoseptal walls. Furthermore, we present protocols for various measures of outcome that provide a wide range of information on the heart, such as cardiac systolic and diastolic function, hemodynamics, coronary flow velocity, microvascular resistance, and infarct size. This protocol can be easily tailored to meet study specific requirements for the validation of novel cardioregenerative biologics at different stages (i.e. directly after the acute ischemic insult, in the subacute setting or even in the chronic MI once scar formation has been completed). This model therefore provides a useful translational tool to study MI, subsequent adverse remodeling, and the potential of novel cardioregenerative agents.

This protocol describes the porcine myocardial infarction (MI) model using a 90 min closed-chest coronary balloon occlusion of the left anterior descending artery (LAD), followed by reperfusion. Furthermore, the protocol for several outcome parameters, such as cardiac function, hemodynamics, microvascular resistance, and infarct size, are also presented.

Domuzlar miyokard enfarktüsü ve Fonksiyonel Sonuç Değerlendirmesi

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One ...

Tıp

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions preclinically. However, valid assessment of pathological alterations often requires histological analysis, and when performed ex vivo, necessitates death of the animal. Therefore in conventional experimental settings, intra-individual follow-up examinations are rarely possible. Thus, development of murine endoscopy in live mice enables investigators for the first time to both directly visualize the gastrointestinal mucosa and also repeat the procedure to monitor for alterations. Numerous applications for in vivo murine endoscopy exist, including studying intestinal inflammation or wound healing, obtaining mucosal biopsies repeatedly, and to locally administer diagnostic or therapeutic agents using miniature injection catheters. Most recently, molecular imaging has extended diagnostic imaging modalities allowing specific detection of distinct target molecules using specific photoprobes. In conclusion, murine endoscopy has emerged as a novel cutting-edge technology for diagnostic experimental in vivo imaging and may significantly impact on preclinical research in various fields.

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Small animal imaging techniques allow serial diagnostic examinations and therapeutic interventions in vivo. Recently, the scope of applications has significantly widened and currently includes assessment of colonic tumor development, wound healing and monitoring of inflammation. This protocol illustrates these diverse potential applications of murine endoscopy.

Murin için Endoskop<em&gt; In Vivo</em&gt; Karsinojenez ve bağırsak Değerlendirilmesi Multimodaller Görüntüleme Yara İyileşmesi ve İltihap

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Bağırsak İskemi-reperfüzyon Hasarı Murin Modeli

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Fluorescence-mediated Tomography for the Detection and Quantification of Macrophage-related Murine Intestinal Inflammation

Murine models of disease are indispensable to scientific research. However, many diagnostic tools such as endoscopy or tomographic imaging are not routinely employed in animal models. Conventional experimental readouts often rely on post mortem and ex vivo analyses, which prevent intra-individual follow-up examinations and increase the number of study animals needed. Fluorescence-mediated tomography enables the non-invasive, repetitive, quantitative, three-dimensional assessment of fluorescent probes. It is highly sensitive and permits the use of molecular makers, which allows for the specific detection and characterization of distinct molecular targets. In particular, targeted probes represent an innovative tool for analyzing gene activation and protein expression in inflammation, autoimmune disease, infection, vascular disease, cell migration, tumorigenesis, etc. In this article, we provide step-by-step instructions on this sophisticated imaging technology for the in vivo detection and characterization of inflammation (i.e., F4/80-positive macrophage infiltration) in a widely used murine model of intestinal inflammation. This technique might also be used in other research areas, such as immune cell or stem cell tracking.

Target-specific probes represent an innovative tool for analyzing molecular mechanisms, such as protein expression in various types of disease (e.g., inflammation, infection, and tumorigenesis). In this study, we describe a quantitative three-dimensional tomographic assessment of intestinal macrophage infiltration in a murine model of colitis using F4/80-specific fluorescence-mediated tomography.

Floresan-aracılı tomografi algılama ve fare bağırsak iltihabı makrofaj ile ilgili miktar

Murine models of disease are indispensable to scientific research. However, many diagnostic tools such as endoscopy or tomographic imaging are not ...

Intestinal Stem Cell Isolation and Culture in a Porcine Model of Segmental Small Intestinal Ischemia

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ischemia, when the blood supply and therefore oxygen is decreased to the intestine. This leads to intestinal barrier loss and damage to the underlying tissue. Intestinal stem cells reside at the base of the crypts of Lieberk&#252;hn and are responsible for intestinal renewal during homeostasis and following injury. Ex vivo cell culture techniques have allowed for the successful study of epithelial stem cell interactions by establishing culture conditions that support the growth of three-dimensional epithelial organ-like systems (termed "enteroids" and "colonoids" from the small and large intestine, respectively). These enteroids are composed of crypt and villus-like domains and mature to contain all of the cell types found within the epithelium. Historically, murine models have been utilized to study intestinal injury. However, a porcine model offers several advantages including similarity of size as well as gastrointestinal anatomy and physiology to that of humans. By utilizing a porcine model, we establish a protocol in which segmental loops of intestinal ischemia can be created within a single animal, enabling the study of differing time points of ischemic injury and repair in vivo. Additionally, we describe a method to isolate and culture the intestinal stem cells from the ischemic loops of intestine, allowing for the continued study of epithelial repair, modulated by stem cells, ex vivo.

This protocol will enable readers to successfully establish a porcine model of segmental intestinal ischemia and subsequently isolate and culture intestinal stem cells for the study of epithelial repair following injury.

Bağırsak kök hücre izolasyon ve Segmental küçük bağırsak iskemi, domuz bir modeli kültür

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ...

Investigating Intestinal Barrier Breakdown in Living Organoids

Organoids and three-dimensional (3D) cell cultures allow the investigation of complex biological mechanisms and regulations in vitro, which previously was not possible in classical cell culture monolayers. Moreover, monolayer cell cultures are good in vitro model systems but do not represent the complex cellular differentiation processes and functions that rely on 3D structure. This has so far only been possible in animal experiments, which are laborious, time consuming, and hard to assess by optical techniques. Here we describe an assay to quantitatively determine the barrier integrity over time in living small intestinal mouse organoids. To validate our model, we applied interferon gamma (IFN-&#947;) as a positive control for barrier destruction and organoids derived from IFN-&#947; receptor 2 knock out mice as a negative control. The assay allowed us to determine the impact of IFN-&#947; on the intestinal barrier integrity and the IFN-&#947; induced degradation of the tight junction proteins claudin-2, -7, and -15. This assay could also be used to investigate the impact of chemical compounds, proteins, toxins, bacteria, or patient-derived probes on the intestinal barrier integrity.

Here we describe a technique to quantify the barrier integrity of small intestinal organoids. The fact that the method is based on living organoids enables the sequential investigation of different barrier integrity modulating substances or combinations thereof in a time-resolved manner.

Yaşayan Organoidlerde Bağırsak Bariyerinin Bozulmasının Araştırılması

Organoids and three-dimensional (3D) cell cultures allow the investigation of complex biological mechanisms and regulations in vitro, which previously was ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated with an increased survival rate and greater quality of patient&#8217;s life when compared to conventional dialysis. Regrettably, transplantology suffers from a lack of reliable methods for organ quality assessment. Standard diagnostic techniques are limited to macroscopic appearance inspection or invasive tissue biopsy, which do not provide comprehensive information about the graft. The proposed protocol aims to introduce solid phase microextraction (SPME) as an ideal analytical method for comprehensive metabolomics and lipidomic analysis of all low molecular compounds present in kidneys allocated for transplantation. The small size of the SPME probe enables performance of a chemical biopsy, which enables extraction of metabolites directly from the organ without any tissue collection. The minimum invasiveness of the method permits execution of multiple analyses over time: directly after organ harvesting, during its preservation, and immediately after revascularization at the recipient&#8217;s body. It is hypothesized that the combination of this novel sampling method with a high-resolution mass spectrometer will allow for discrimination of a set of characteristic compounds that could serve as biological markers of graft quality and indicators of possible development of organ dysfunction.

The protocol presents utilization of the chemical biopsy approach followed by comprehensive metabolomic and lipidomic analysis for quality assessment of kidney grafts allocated for transplantation.

Greft Kalite Değerlendirmesi için Kimyasal Biyopsi Kullanımı

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...

Standardized Histomorphometric Evaluation of Osteoarthritis in a Surgical Mouse Model

One of the most prevalent joint disorders in the United States, osteoarthritis (OA) is characterized by progressive degeneration of articular cartilage, primarily in the hip and knee joints, which results in significant impacts on patient mobility and quality of life. To date, there are no existing curative therapies for OA able to slow down or inhibit cartilage degeneration. Presently, there is an extensive body of ongoing research to understand OA pathology and discover novel therapeutic approaches or agents that can efficiently slow down, stop, or even reverse OA. Thus, it is crucial to have a quantitative and reproducible approach to accurately evaluate OA-associated pathological changes in the joint cartilage, synovium, and subchondral bone. Currently, OA severity and progression are primarily assessed using the Osteoarthritis Research Society International (OARSI) or Mankin scoring systems. In spite of the importance of these scoring systems, they are semiquantitative and can be influenced by user subjectivity. More importantly, they fail to accurately evaluate subtle, yet important, changes in the cartilage during the early disease states or early treatment phases. The protocol we describe here uses a computerized and semiautomated histomorphometric software system to establish a standardized, rigorous, and reproducible quantitative methodology for the evaluation of joint changes in OA. This protocol presents a powerful addition to the existing systems and allows for more efficient detection of pathological changes in the joint.

The current protocol establishes a rigorous and reproducible method for quantification of morphological joint changes that accompany osteoarthritis. Application of this protocol can be valuable in monitoring disease progression and evaluating therapeutic interventions in osteoarthritis.

Cerrahi Fare Modelinde Osteoartritin Standart Histomorfometrik Değerlendirilmesi

One of the most prevalent joint disorders in the United States, osteoarthritis (OA) is characterized by progressive degeneration of articular cartilage, ...

A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing enterocolitis (NEC). However, a mechanistic link between these two conditions remains yet to be discovered. We have adopted a murine model of chorioamnionitis involving lipopolysaccharide (LPS)-induced fetal exposure to maternal inflammation (FEMI). This model of FEMI induces a sterile maternal, placental, and fetal inflammatory cascade, which is also present in many cases of clinical chorioamnionitis. Although models exist that utilize live bacteria and more accurately mimic the pathophysiology of an ascending infection resulting in chorioamnionitis, these methods may cause indirect effects on development of the immature intestinal tract and the associated developing microbiome. Using this protocol, we have demonstrated that LPS-induced FEMI results in a dose-dependent increase in pregnancy loss and preterm birth, as well as disruption of normal intestinal development in offspring. Further, we have demonstrated that FEMI significantly increases intestinal injury and serum cytokines in offspring, while simultaneously decreasing goblet and Paneth cells, both of which provide a first line of innate immunity against intestinal inflammation. Although a similar model of LPS-induced FEMI has been used to model the association between chorioamnionitis and subsequent abnormalities of the central nervous system, to our knowledge, this protocol is the first to attempt to elucidate a mechanistic link between chorioamnionitis and later perturbations in intestinal development as a potential link between chorioamnionitis and NEC.

We developed a model of chorioamnionitis to simulate fetal exposure to maternal inflammation (FEMI) without complications of live organisms to examine the effects of FEMI on development of the offspring&#8217;s intestinal tract. This allows for study of mechanistic causes for development of intestinal injury following chorioamnionitis.

Akut Chorioamnionitis'in Yenidoğan Bağırsak Gelişimi Üzerindeki Etkilerini İncelemek için Anne İltihaba Fetal MaruzIyetin Bir Murine Modeli

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing ...

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

With the increase of incidence, inflammatory bowel diseases (IBD), which are chronic diseases affecting the gastrointestinal tract, impose a considerable health and financial burden on individuals and society. Therefore, it is critical to investigate the mechanisms underlying the pathogenesis and development of IBD. Here, a gut microbiota antigen-specific T cell transfer colitis model is described. CBir1 flagellin has been recognized as the immunodominant gut bacterial antigen in experimental colitis and patients with Crohn&#39;s disease. CBir1 TCR transgenic na&#970;ve CD4+ T cells, specific to CBir1 flagellin, can induce chronic colitis after adoptive transfer into immune-deficient Rag1-/- mice. The disease severity is assessed by histopathology. The CD4+ T cell phenotypes in colonic lamina propria are also determined. This model closely resembles the development of IBD, which provides an ideal murine model for investigating the mechanisms driving the pathogenesis of IBD and testing the potential drugs for treating IBD.

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

In this protocol, a gut microbiota antigen-specific T cell adoptive transfer colitis model is described. CD4+ T cells are isolated from CBir1 TCR transgenic mice. These are specific for an immunodominant gut microbiota antigen CBir1 flagellin, which is transferred into recipient Rag1-/- mice, leading to intestinal inflammation.

CBir1 TCR Transgenik CD4+ T Hücrelerinin İmmün Yetmezlikçi Farelere Benimsenen Transferi ile Bağırsak İltihabının İndüksiyonu

With the increase of incidence, inflammatory bowel diseases (IBD), which are chronic diseases affecting the gastrointestinal tract, impose a considerable ...

Bağırsak Manipülasyon bir Standart Model Analizleri: Kemirgenler Barsak Motilite ve Gut Duvar İnflamasyon İşlevsel Değerlendirilmesi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler