이 작품은 독일 Forschungsgemeinschaft (KA1270/3-1/2)와 BONFOR (O-112.0040)에서 보조금에 의해 지원되었다.

1. 동물 25g의 평균 무게 남자 C57Bl6 / J 쥐들이 할란 Winkelmann (Borchen, 독일)에서 얻은되었습니다. 모든 실험 동물의 보호에 관한 연방 법에 따라 수행되었다. 실험실 동물 보호의 원칙은 다음 하였다. 동물은 12 시간 조명 / 어두운주기에 유지되고 상업적으로 이용 가능한 쥐 수유와 수돗물 광고 libitum와 함께 제공되었습니다. 동물 최소 7 일 전에 실험 동물 시설에 도착 후 보관해야합니다. 모든 실험은 쉽게 쥐 또는 다른 종에 적응 및 대형 동물 모델에 약간 수정 될 수 있습니다. 2. 수술 절차 <ol><li> 마취는 산소의 (애보트, 비스 바덴 (Wiesbaden), 독일) isoflurane과 유도 및 유지 관리됩니다. 접착제 테이프 위로 향한 위치와 수정 사지 (Leukosilk, 바이어스 도르프, 함부르크, 독일)의 마취 장소 동물의 발병 후. </li&gt; <li> 복부 벽의 면도 및 수술 소독 후 중간 개복술는 2cm의 길이에 수행됩니다. Linea 알바를 따라 절개를 통해 복강을 입력합니다. 장소는 두 살균 견인기 복부가 열려 유지합니다. 조심스럽게 왼쪽에있는 작은 장을 eventerate하고 젖은면 거즈에 배치. </li><li> 동시에이게 맹장에 pylorus에서 작은 주걱을 압연하여 두 촉촉하고 멸균면 applicators (다쳤다는, Neunkirchen, 독일)로 전체 작은 창자 luminal 내용을 대피하십시오. 주의 : 작은 창자 벽이나 내장 혈관의 병변의 출혈을 피하십시오. 국소 빈혈 또는 기계적 폐쇄를 방지하고 지속적인 두 층 5 / 0 polyamid 비 흡수성 봉합을 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용하여 복부 절개를 닫 비틀없이 복막 동굴에 내장 다시 놔. </li></ol> 3. 수술 후 관리 <ol><li> 절차는 가열 램프, observi에서 동물을 배치 한 후NG 그것은이 마취에서 회복 될 때까지. 그 케이지에 다시 마우스를 넣고 물과 음식에 액세스 할 수 있습니다. 연동에 영향을 opioids의 속성으로 인해, 우리는 마시는 물에 엔 사이드에도 그렇구요 (예 metamizol 용)과 perioperative 진통제를 수행합니다. </li></ol> 4. IM 후 기능 연구 24 시간 <ol class="lalpha"><li> 위장 교통 (GIT) <ol><li> IM 후 산소 22.5 시간에서 isoflurane과 약간 쥐를 마취시키다. 조심스럽게 마우스의 머리를 hyperextend하고 무딘 집게로 혀를 빼낸다. 로 1 ML의 주사기를 기입 최소 100 μl fluorescein-라벨 dextran (FITC - dextran, 70,000 MW, 시그마 알드리치, Taufkirchen, 독일), 동맥 카테터 (Vygon, Ecouen, 프랑스)에 연결하고 조심스럽게로 카테터를 삽입 위에 위 관. </li><li> 간단히 100 μl FITC-dextran을 삽입하고 카테터를 꺼내. 깨어있는 동물을하자, 90 분 기다립니다. 이 시간 동안 마우스는 음식이나 물에 액세스 할 수 있습니다. &lt;/ 리&gt; <li> 십오 2 ML 회전 튜브를 준비하고 연속적으로 레이블을 붙입니다. </li><li> 마우스에게 gavage 후 90 분을 안락사시켜야하고 배에서 항문까지 전체 위장관을 제거합니다. 폴리스티렌 패드에 장을 놓고 스트레칭하지 마십시오. 케이브 : 그것은 인근의 세그먼트로 액체 FITC-dextrane의 변화 방지하기 위해 부드럽게 내장을 제거 할 중요합니다. 처음 들어는 처음에 각 세그먼트의 끝 부분에 클립을 사용하여 도움이 될 수 있습니다. </li><li> 작은 창자 및 결장의 전체 길이의 전체 길이를 측정합니다. cannulas과 폴리스티렌 패드에 내려 달아로 10 동일 크기의 세그먼트로 작은 창자를 나눌 수 있습니다. 3 세그먼트에 콜론을 나눈다. 당신은 15 세그먼트 (위 # 1), 열 동일 크기의 작은 창자 세그먼트 (# 2-11),이게 맹장 (# 12) 세 3 균등하게 크기의 colonic 세그먼트 (# 13-15)를 준비했습니다. </li><li> 표시된 위치에 소장을 가로로 쪼개다, 집게로 잡아 이전에 준비 KHB containi에 1.0 ML KHB로 한 번에 플러시NG 2.0 ML 튜브 20 초 동안 힘차게 소용돌이. 위와이게 맹장 직접 배치하고 준비된 튜브에서 절단됩니다. 이에 튜브에 가위에서 luminal 내용의 흔적을 린스, 1.0 ML KHB과 함께 튜브를 입력합니다. </li><li> 테이블 탑 원심 분리기에 상온에서 5 분에 12000 rcf에서 프로브를 원심 분리기. 원심 분리하는 동안 다른 15 연속적으로 번호가 1.5 ML 튜브가 준비합니다. </li><li> 4에 새로운 1.5 ML 튜브와 어둠 속에서 매장 ° 분석까지 C (다음 단계)으로 명확 supernatants을 전송합니다. 프로브는 FITC 신호의 상당한 손실없이 4에 며칠 ° C에 저장할 수 있습니다. 더 이상 스토리지는 &lt;-18에서 0.09 % 나트륨 - azide 또는 저장소를 추가 들어 ° C. </li><li> 블랙 96 - 웰 플레이트 (Greiner 바이오 하나 Frickenhausen, 독일)의 supernatants의 피펫 100 μl duplets. 빈과 같은 KHB의 피펫이 100 μl 샘플. </li><li> 형광 리더 (Safire, Tecan, Crailsheim, 독일)의 판을 읽고 fluorescenc을 수량화494 나노 미터 (흡수) / 521 NM (방출) 파장으로 전자. 샘플에서 빈 값을 뺍니다. </li><li> 다음 수식에 의해 실제로 마커의 배포 중력의 중심입니다 FITC-dextran 분포의 기하학적 센터 (GC)를, 계산 : G​​C는 = Σ (세그먼트 당 총 형광 신호의 % * 세그먼트 번호) / 100 </li></ol> 참고 : 해당 세그먼트 번호와 함께 세그먼트의 형광에 대한 비율을 곱한함으로써 소장에서 마커의 배포 가중 평균이 평가된다. 이 점은 마커에 의해 여행 유통 및 거리 모두에 의해 영향을 없지만, 특정 기본 분포를 가정 더 있습니다. 7 계산 GC 값이 종종 위장관 (그림 1A)를 통해 FITC dextran의 분포를 보여주는 그래프와 함께 제공됩니다. </li><li> Colonic 교통 <ol><li> 마우스 isoflur와 약하게 anaesthetized해야합니다산소의 ane 2%. 주의 : 확인 동물은 40 초 내에 깨어 할 것입니다. </li><li> 조심스럽게 항문을 통해 대장에 누 프로브 (금속 막대, 2 밀리미터 직경)를 삽입하여 colonic 명백을 확인합니다. </li><li> 누 프로브는 콜론으로 앞으로 2mm 유리 볼 3cm을 눌러 즉시 프로브를 뽑아 사용합니다. 투명 새장에 마우스를 놓고 누 프로브는 콜론으로 철수 한 이후의 시간을 측정을 시작합니다. 마우스에 눈을 유지하고 유리 볼이 배출 된 후 바로 시간을 중지합니다. </li></ol></li></ol> 5. 절연 ME의 표본의 Histochemical 분석 <ol><li> Midjejunal 세그먼트는 장에서 잘라 Sylgard이 가득한 요리의 추운 KHB에 몰두하고 있습니다. </li><li> 장간막은 0.2 mm 곤충 바늘 (고급 과학 도구, 하이델베르크, 독일)와 요리에 고정되어 있습니다. </li><li> 그 창 자간 막 경계 세그먼트를 열고 그 길이와 폭 ~ 120 % 스트레칭 자른다. 곤충과 고정을 완료장간막의 반대 사이트에 핀. 따라서 모든 luminal 내용을 플러싱, 신선한 얼음처럼 차가워의 KHB을주의 깊게 sylgard 요리를 씻어. ME는 이제 기계적으로 장간막부터 혈관의 점막에서 분리 할 수​​ 있습니다. 준비하는 동안 신선한 차가운 KHB 여러 번 교체하십시오. </li><li> 분리 된 혈관의 점막이 충격을 더 분석을 위해 액체 질소에 냉동 또는 폐기 할 수 있습니다. </li><li> 실온에서 10 분을위한 100 % 에탄올로 분리 ME 전체 마운트를 해결했습니다. 차가운 KHB를 사용하여 전체 마운트를 세 번 씻으십시오. 참고 : 다른 fixatives가 (즉, 4 %의 포름 알데히드, 아세트산, aceton)도 이후의 분석과의 호환성을 테스트 한 후 사용하실 수 있습니다. </li><li> ME 전체 마운트가 더 histochemical 또는 immunhistochemical 착색을위한 준비 : </li></ol><ol class="lalpha"><li> Histochemistry : myeloperoxidase (MPO) 착색 침투 PMNs은 다음 MPO의 얼룩 프로토콜을 면밀히 검토 할 수 있습니다. <ol><li> 10 MG H를 해결앙커 예이츠의 10 ML의 KHB의 시약 (Polyscience 유럽, Eppelheim, 독일)와 3 % H 2 O 2의 100 μl를 추가합니다. 사용하고 재사용하지 않는 신선하게 바로 앞에 솔루션을 준비합니다. </li><li> 실온에서 10 분 동안 전체 마운트를 품다. </li><li> 10 분에 추위 KHB 및 배양에 광범위하게 표본을 씻어. </li><li> 가벼운 현미경에서 2 시간 분석 슬라이드에 건조 후 수성 장착 매체에서 표본 (Aquatek, 머크, 다름슈타트, 독일) 탑재합니다. </li><li> 5 무작위로 선택한 분야에서 세포의 숫자를 계산하고 MPO 긍정적 인 세포 / mm 2로 계산합니다. </li></ol></li><li> Immunohistochemical 착색 : 따라서 histochemical MPO의 착색에, 전체 마운트의 immunohistochemical stainings을 수행 할 수 있습니다. 주로, 세포 문화 나 조직 슬라이스의 기존 immunohistochemical 얼룩 프로토콜은 쉽게 전체 마운트 착색에 적용 할 수 있습니다. 그러나 특정 백신에 대한 절차를 최적화시체는 것이 좋습니다 있습니다. <ol><li> 5 × 5 밀리미터 조각으로 표본을 잘라 ~ 150 μl에 2.0 ML 둥근 바닥 원심 분리기 튜브에 얼룩 수행 - 200 μl 항체 솔루션입니다. </li><li> 고정 및 절차를 차단 (실온에서 1 시간을위한 PBS의 예를 들면 3 % BSA)은 &quot;sylgard 요리&quot;에 수행 할 수 있습니다. </li><li> PBS 또는 다른 버퍼의 세척 단계는 12 잘 접시에 수행 할 수 있습니다. </li><li> 착색 튜브와 식기 플레이트 사이에 날카로운 집게로 조심스럽게. 표본을 전송합니다. </li><li> 표지 용지와 안티 - 변색 장착 중간의 마지막 세척 절차 탑재 표본 한 후에 형광 현미경으로 분석 할 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 6. ME의 조직 문화 <ol><li> 전체 작은 창자는 IM 후 24 시간을 resected 200 U / ML 페니실린 G 및 100 μg / ML 스트렙토 마이신 (KHB + P / S)를 포함 추운 KHB에 배치되어 있습니다. </li><li> 3cm 길이로 용기를 내서 잘라 gl​​a를 포함하는 Sylgard에 각 세그먼트를 다운 핀SS 요리. </li><li> 고급 가위로 장간막를 제거하고 뜨개질 바늘에 장을 나오십시오. </li><li> 부드럽게 날카로운 집게로 ME를 절개하고 젖은면 작은 주걱을 사용하여 submucosa에서를 제거. 혈관의 점막은 뜨개질 바늘에 남아 추가 조사를 냉동 스냅 할 수 있습니다. ME는 추위 KHB에 수집 + P / S. </li><li> 2 작은 조각으로 ME 절연 스트립 잘라 내기 - 4 밀리미터 길이를하고 + P / S 반 시간 동안 얼음 차가운 KHB에 배양 및 표본 여러 번 씻어. </li><li> 500 μl Dulbecco의 수정 이글 배지 (DMEM)을 포함하는 살균 24 잘 플레이트에서 약 50-60 MG ME (한 작은 창자의 절반 ME 이상) 전송합니다. </li><li> 37 품다 ° C, 5 %의 추가 24 시간에 대한 CO 2. </li><li> 현미경으로 세균이나 곰팡이 오염에 대한 세포 문화를 검사합니다. </li><li> 표면에 뜨는 수집, 액체 질소 1,000 rcf 및 스냅 동결에서 5 분을 위해 스핀 다운. 한편 musc 건조 얼룩30 초와 무게에 대한 깨끗한 조직에 르 조직. </li><li> Supernatants는 지시를 생산에 따라 엘리사 또는 표면에 뜨는 다른 metabolites (예 : 아질산)에 의해 발표 크린 시토 킨의 후속 분석 (IL-6)에 사용할 수 있습니다. </li><li> ME 조직의 무게 당 측정 된 농도를 정상화. </li></ol> 7. 대표 결과 <ol><li> 기능성 연구 POI의 심각도를 평가하는 가장 중요한 매개 변수는 생체 내 GIT의 시험입니다. 그림 1A는 치료 컨트롤의 위장관 따라 FITC dextran의 전형적인 분포를 보여주고 intestinally 수술 후 마우스 24 시간을 조작. IM은 근위 공장에서 GIT의 상당한 지연 (그림 1B)로 이끌어 동안 동물이게 맹장에서 계산 기하학적 센터 (GC)와 일반 GIT을 보여 주었다 &quot;위장가 운영하는&quot; Colonic 운동성은 별도로 볼 배설 시간이 O의 측정에 의해 집중되었다FA 2mm 유리 볼. IM은 470 사이의 연장 배설 시간이 주도하면서 200 초 - - 위장 쥐 48의 배설 시간을 보여 운영 775 초 (그림 1C)을. </li><li> 형태학 연구 염증을 설명하는 것은 백혈구의 ME 여러 phenotypes 내에서 연장이 histochemistry 또는 immunohistochemistry를 사용하여 분석 할 수있다. 그림 2A + B의 PMNs의 낮은 존재 동물 (39 ± 7 세포 / mm 2) 관찰 할 수 있었다 &quot;사기가 운영하는&quot;. 작은 창자의 IM은 가짜 운영 마우스에 비해 강력한 PMN의 침투 (660 ± 86 셀 / mm 2)으로 이어 </li><li> ME 조직 문화 세포에서 해방 많은 염증성 중재자는 조직 lysates에 감지 할 수 어렵습니다. 조직 문화는 문화 표면에 뜨는에서 석방 된 중재자의 확인을 할 수 있습니다. POI의 대표 중재자는 위장관의 주요 억제 신경 전달 물질로입니다, 없다 5. NO는 ME 오르간 막에 감지되지 수 없습니다unoperated 제어 동물의 진짜야의 supernatants (5 ± 6 μM / 24 시간 / MG 조직). 허위 조작 (개복술) 쥐 기초는 53 NO 수준의 ± 36 μM / 24 시간 / MG 조직은 관찰되지 않았습니다. intestinally (수술 후 24 시간을 수확) 조작 쥐 ME 문화는 (그림 3) 24 시간 ME 오르간 문화 중 (2,254 ± 853 μM / 24 시간 / MG 조직) 더 NO 크게 생산하지 않습니다. </li></ol><img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4086/4086fig1.jpg" /> 그림 1. GIT (A + B)과 colonic 운송에 IM의 효과가 (C) GIT 15 위장 세그먼트 - 위 (스토), 소장 (SI 1-9로 비 흡수성 fluorescein-라벨 dextran의 비율로 측정되었다 ),이게 맹장 (CEC) 및 콜론 (CO) 경구 섭취 후 -90 분. Colonic 교통은 2mm 유리 구슬의 배설 될 때까지 누 프로브를 뽑아에서 시간을 측정 하였다. fluorescein isothiocyanate - 덱스의 (A) 위장 배포허위 조작이나 IM 후 트란. 허위 조작 동물에서 마커의 대부분은 조작 동물의 근위 jejunal 위치와 비교하여이게 맹장 또는 근위 대장에 자리 잡고 있습니다. 점선은 GC 계산 나타냅니다. (B) GC의 계산은 IM 후 연장 위장 소요 시간을 보여 주었다. (C) Colonic 소요 시간은 사기 운항 동물에 비해 IM 마우스에 상당한 지연을 보여 주었다. 15 장 세그먼트에 대한 GC는 (N = 5) 의미로 표시됩니다. Colonic 교통 시간은 모든 개별 값 (N = 6)와 의미 표시했다. *** = P &lt;0.001, 학생의 t-테스트합니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/4086/4086fig2.jpg" /> 그림 2. 작은 창자 ME 내 MPO 긍정적 인 세포의 감지. (A) ME 전체 마운트가 MPO 긍정적 인 개복술 후 PMN 24 시간 (사기) 또는 IM 절차의 검출을위한 열망 예이츠 시약 물들했다. 마우스 당 5 무작위로 선택한 분야에서 MPO 긍정적 인 세포의 (B) 정량화. N = 6그룹 당 nimals. *** = P &lt;0.001, 학생의 t-테스트합니다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/4086/4086fig3.jpg" /> 그림 3. ME의 문화 supernatants에서 NO 생산. unoperated 컨트롤의 근육 표본은 사기가 운영하는 IM 마우스는 postoperatively 24 시간을 촬영, 24 시간에 배양 하였다. 치료 마우스는 NO 만 매우 낮은 기저 생산을 보여 주었다. 개복술 후 어떠한 해방은 통제 그룹과 가짜 운영 마우스 사이의 차이를 측정하지 않고 증가하지 않습니다. IM NO 생산 후 24 시간이 급격히 치료 또는 가짜 운영 마우스와 비교 증가된다. 그룹 당 n은 = 5 동물. *** = P &lt;0.001, 1 방법 ANOVA.

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Biol. 63, 683-691 (1998).</li><li>Kehlet, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postoperative+ileus.">Postoperative ileus.</a> Gut. 47, iv85-iv86 (2000).</li><li>Wehner, S., Schwarz, N. T., Hundsdoerfer, R., Hierholzer, C., Tweardy, D. J., Billiar, T. R., Bauer, A. J., Kalff, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+IL-6+within+the+rodent+intestinal+muscularis+after+intestinal+surgical+stress.">Induction of IL-6 within the rodent intestinal muscularis after intestinal surgical stress.</a> Surgery. 137, 436-446 (2005).</li><li>Kalff, J. C., Schraut, W. H., Billiar, T. R., Simmons, R. L., Bauer, A. 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IM (10 분 대 부드럽게이게 맹장에 작은 창자 내용의 피난과 IM 2 대면 applicators를 사용하여 작은 창자의 검사를위한 작은 창자 eventration)의 다른 수준을 분석 비교 연구는 수술 조작 및 POI의 범위 사이의 상관 관계를 발표했다. IM은 장기와 심한 POI의 결과 ME (PNMs, 대 식세포 및 마스트 세포)에 백혈구의 최고 금액을 보여 주었다. 8 다른 그룹과 비교했다. IM의 모델을 확립 ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 / 장비의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> Ethilon 5 / 0 </td><td> Ethicon </td><td> 1666H </td></tr><tr><td> 면 applicators </td><td> 다쳤다 </td><td> 71,010 </td></tr><tr><td> 동맥 카테터 </td><td> Vygon </td><td> 115-798 </td></tr><tr><td> 96 잘 플레이트 (블랙) </td><td> Greiner 바이오 하나 </td><td> 655096 </td></tr><tr><td> 유리 볼 (2 밀리미터 직경) </td><td> 워프 </td><td> 요청시 이용 가능 </td></tr><tr><td> 곤충 핀 </td><td> 정밀 과학 도구 </td><td> 26000-25 </td></tr><tr><td> 열망 예이츠의 시약 </td><td> Polyscience </td><td> 560694 </td></tr><tr><td> Aquatek </td><td> 머크 </td><td> HC109850 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Lonza </td><td> BE12-604 F </td></tr><tr><td> FITC-dextran (MW 70,000) </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> 46945-500MG-F </td></tr></tbody></table>

functional assessment of intestinal motility and gut wall inflammation in rodents: analyses in a standardized model of intestinal manipulation

위장관의 염증은 인간의 질병의 다양한 일반적인 이유입니다. 동물 연구 모델은 장 병리학의 휴대 복잡하고 분자를 조사에 중요합니다. 혈관의 점막이 muscularis 바깥이 (ME)도 주민 immunocytes의 조밀 한 네트워크를 비호하는 것이 매우 면역 적격 기관입니다 종종 많은 염증성 질환, 시연 최근 작품에 대한 관심의 기관이지만. 1,2는이 작품은 표준화 내에서 수행 된 주로 ME로 제한 대장 벽의 염증에 이르게 장 조작의 모델 (IM). 염증은 이러한 IL-6 4 또는 IL-1β 또는 억제 신경 전달 물질과 같은 염증성 중재자의 해방을 특징으로하는 임상이 염증은 복부 수술 후 자주와 피할 수없는 합병증이 수술 후 장폐색 (POI)로 알려진 연장 장 dysmotility. 3 연결 nitri 같은C 산화가 (NO) 5. 그 후, immunocytes의 엄청난 숫자가 polymorphonuclear 호중구 (PMN)과 단핵 세포에 의해 지배, ME에 extravasate 그리고 마지막으로 POI를 유지하고 있습니다. 일 동안 지속이,이 장 마비는 흡인의 위험이 증가, 세균 translocation로 연결 및 패혈증 및 다중 장기 실패까지 합병증 전염성하고 높은 경제적 부담을 초래합니다. 6 이 원고에서 우리는 IM과 위장 교통 (GIT)과 colonic 교통의 생체 평가의 표준화 된 모델을 보여줍니다. 또한 이러한 높은 immunoactive 장 벽 구획 모두에서 염증 반응을 구별 할 중요 면역 분석, 다음에 혈관의 점막에서 ME의 분리하는 방법을 보여줍니다. 모든 분석은 위장 기능에 영향을 미치는 쉽게 다른 연구 모델에 양도합니다.

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Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

수술 후 장폐색 (POI)가 증가 병적 상태와 장시간 입원으로 이어지는 복부 수술의 합병증입니다. 예방 또는 치료 전략이 심화 연구를 부족하기 때문에하는 것은 필요합니다. 따라서 우리는 POI의 pathophysiology를 조사하고 잠재적 인 치료 옵션을 연구하기위한 표준화하고 실현 가능한 마우스 모델을 만들었습니다.

장 조작의 표준화 된 모델의 분석 : 쥐의 장 운동성 및 내장 벽의 염증의 기능 평가

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

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21.9K 조회수.  University of Bonn. 수술 후 장폐색 (POI)가 증가 병적 상태와 장시간 입원으로 이어지는 복부 수술의 합병증입니다. 예방 또는 치료 전략이 심화 연구를 부족하기 때문에하는 것은 필요합니다. 따라서 우리는 POI의 pathophysiology를 조사하고 잠재적 인 치료 옵션을 연구하기위한 표준화하고 실현 가능한 마우스 모델을 만들었습니다.