Biz çekimler sırasında yardımcı tavsiye ve yardım için Osman Kaftanoğlu teşekkür ederim. Biz anlayışlı yorumlar için anonim eleştirmenlerine teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Norveç Araştırma Konseyi (180.504, 191.699, 213.976 ve hibe), Marie Curie/FP7 (proje ref. 238665), Yaşlanma (hibe NIA P01 AG22500) Ulusal Enstitüsü ve Pew Bağış Güven tarafından desteklenmiştir.

1.. Kronolojik Çağı&#39;na ihtiyarlama ayırımı Bu bölüm aynı kronolojik yaş (&quot;tek yaş kohort&quot;) ve yuva arıların bir grubu tespit paylaşan bireylerin bir kohort oluşan çift kohort kolonilerin, kurulumunu açıklar. Tek yaş grubu aynı yaştaki bireyler sonunda farklı yaşlanma dinamikleri farklı işçi tipe ayrı olacak - bu hızlandırılmış fonksiyonel düşüş yavaşladı ve toplayıcı arılar ile hemşire arılar vardır. Tüm prosedürler bir deney koloni için tarif edilmiştir. Biz böylece koloni etkileri (iki suret-tasarım) için kontrol edilebilir en az iki koloni için deneyler gerçekleştirmek için, ancak, çoğaltır öneriyoruz. <ol><li> Çift kohort sömürgeler için kovanı kutuları hazırlanıyor: bal ile iki gıda tarak alır normal bir kovan kutu, polen başka gıda tarak ve iki boş tarak hazırlayın. 3.000 &#39;den fazla olan bir evlendirdi kraliçe gibi bir donör koloni bulmak için emin olunyuva arılar. Her ikisi de daha sonra tanıtılacak (1.3). </li><li> Alınması ve benzeri kronolojik yaş ile bireylerin işaretleme: ortaya üzeredir mühürlü yavrularıyla tarak toplayın. Bir replikasını için 3.000-5.000 şapkalı kuluçka hücrelerinin toplam tarak toplamak için bekliyoruz. Her anne genotipleri (kovanı kökenli) çarpık dağılımları önlemek için en az üç farklı kovanı kaynaklardan damızlık dengeli miktarda kullanmak çoğaltmak için. <ol><li> % 60-70 bağıl nem ile 34 ° C&#39;ye ayarlanmış bir kuluçka makinesi içinde kuluçka tarak yerleştirin. Gelişmekte olan damızlık kaçamaz böyle bir şekilde tarak saklamak için emin olun. </li><li> Arılar iki gün boyunca ortaya edelim ve toraks (örneğin Uni Posca, Mitsubishi Pencil Co Ltd) üzerinde küçük bir boya etiketi ile bu arıları işaretlemek. Boya işareti tek yaş grubu (doğuşunun gün) arıları belirlenmesini sağlayacaktır, ve diğer çoğaltmak kolonilerden ayırt etmek. </li></ol></li><li> I kohort içeren bir çift kohort koloni kurmadentified, tek yaş arılar: gününde genç arılar işaretlenmiş, (bkz. (. Tartışma bölüm 1 karşılaştırmak), ve daha önce hazırlanan kovan kutusuna bu işaretlenmemiş arılar eklemek verici bir koloni yaklaşık 2,500-3,000 yuva arıları toplamak ) 1.1 adıma. İkinci bireyler tanımlanamayan yuva arı kohort teşkil edecektir. <ol><li> Başlangıçta bir kraliçe kafes (piyasada mevcut) sınırlı olacak kraliçeyi ekleyin. Yenilebilir şeker (örneğin Apifonda, Südzucker AG, Mannheim / Ochsenfurt, Almanya) işçi arıların kraliçe yavaşça serbest bırakmak yapmak ile kafesi kapatılmalıdır. </li><li> Tek yaş kohort teşkil edecek yeni ortaya çıkan ve işaretli arılar ekleyin. Bu arılar sadece işaretli kişiler vardır, ve tüm aşağıdaki adımları için odak grup vardır. </li></ol></li><li> Başlangıcı yem ve silaj işaretleme İzleme: başlangıcı ve tek yaş grubundaki hasta-hemşire forager geçiş dinamikleri değerlendirmek için, toplayıcı faaliyeti e demografik gelişimini izlemekHer koloninin çok gün. Koloniler (Şekil 1) kuruldu sonra beş gün saymaya başlayacaktır. <ol><li> Sabit zamanlarda 3 x 20 dk gözlem süreler içinde uçuşlar (giriş sayımları) kazarak dönen arıların toplam sayısını. (Tartışma) oryantasyon uçuş dönemlerinde arıları saymak değil emin olun. </li><li> Giriş sayısı (&gt; 100 giriş sayım / gün) başlaması için önemli bir yiyecek arama etkinliğini gösterir zaman, silaj işaretleme başlar. Bunu yapmak için, tek yaş grubunda (tek işaretli kişi) silaj ilk toplayıcı uçuşları dönen üzerine ikinci bir boya izi alırsınız. Bu boya işareti başlangıcını toplayıcı gününü belirler ve daha sonra her forager toplayıcı yaş tanımanızı sağlayacak. </li><li> Arıların yeterli sayıda işaretlenmiş kadar günlük işaretlerini tekrarlayın. Bu arı tipik olarak 14 gün sonra, yaş edildikten sonra işaretli toplayıcılar yeterli sayıda tahmin etmek için, en fazla 5-10% arasında bir alma oranı beklemekforaging. </li></ol></li><li> Örnekleme: Tüm başlangıçta işaretli arılar benzer bir kronolojik yaş olduğundan silaj ≥ 14 gün boyunca foraged ne zaman, hemşire ve eski arayıcıların yaştaki gruplar, aynı anda tahsil edilebilir. <ol><li> Tek belirgin hemşire arılar kovan içinde toplanır ve hemşirelik davranış (açık yavru hücrelere aşağı koymak başkanları ile besleme ve larva temizlik) ile tanımlanır. </li><li> Günlük toplayıcı aktivite başlamadan önce Çift işaretlenmiş silaj da kovan içinde toplanır. </li><li> Yeterli havalandırma sağlamak kafeslere (tüpler, kutular) arıların toplayın, ve daha fazla işlem kadar karanlık tutun. Alternatif olarak, Transkriptomik, epigenetik veya proteomik çalışmalar için, doğrudan sıvı nitrojen içinde dondurularak arılar oturtun. Tüm test gruplardan bireylerin dengeli numaralarını toplamak ve koloniler çoğaltmak. </li></ol></li></ol> 2. Hive Demografi &lt;değiştirme tarafından Slowed Yaşlanma ile İşçi Rapid ile İşçi iptali/ P&gt; Bu bölümde yavaşladı yaşlanma (hemşire arılar) ile işçilere hızlandırılmış yaşlanma (silaj) ile işçiler dönüş yapılır nasıl ayrıntıları. Silaj normalde yavru bakımı meşgul hemşire arıların eksikliği, karşılaştığınızda bu tür davranışsal ters, uyarılmaktadır. Hemşire arı fraksiyonu ile bir kovan (&quot;hemşire-türetilmiş&quot;), ve silaj fraksiyonu ile başka bir (&quot;toplayıcı-türetilmiş&quot;): reversiyon yordam tek bir koloni iki kurdeşen içine çoğaltmak ayrı olacaktır. Başarılı ters, plastik olası belirtileri ve ters yaşlanma döndürüldü işçiler, devam silaj, sürekli hemşire arılar ve yeni işe silaj ile tek yaş grubunda okudu olabilir sonra. Daha önce olduğu gibi, tek bir yaş grubunda, değil tanımlanamayan yuva arıların kohort arasında belirlenen arılar, deneysel odak grubu oluşturmaktadır. <ol><li> Hazırlanışı: Bir önceki bölümde açıklandığı gibi hemşireler (tek işaretli) ve silaj (çift işaretli) ile kovanlarını Çoğaltılamıyor hazır. Dönme tamamlandıktan sonra yeterli alınmasını sağlamak için tekrarlanan koloni başına en az 500 belirgin silaj ile reversiyonunu başlamak değil emin olun. <ol><li> Dönüşü sonrası test grupları güvenli bir kimlik için orijinal kovanında tüm silaj nüfus reversiyon öncesinde kapalı işaretlendiğini önemlidir. Aşağıdaki prosedür, bir örnek için açıklanmaktadır. </li><li> Reversiyon önce bir gün, silaj-türetilen kovanı için bir ek kovan kutusu (adım 1.1) hazırlamak. Donör kovandan iki kız ve iki kuluçka tarak bulun. Deneysel koloniler transferden önce bu taraklar Tüm yetişkin arıları uzak fırça. Bir kafesli kraliçe (adım 1.3) ve bir kuluçka tarak orijinal kovan kutusuna kraliçe ve kuluçka tarak yerini alacak. Kraliçe ve damızlık tarak diğer dizi yeni kovan kutusu için ertesi gün kullanılacaktır. Hem özgün ve yeni kovan emin olmak için tavsiye edilir yeni yavru taraklar ve yabancı kraliçelerin Benzer tahsisi ayrılmış yem ve hemşires eşit deneyimi kovan yardımlar (&quot;kovanı koku&quot;) değişmiş olacaktır. </li></ol></li><li> Reversion: Sabah, hemen reversion önce, toplayıcı-türetilmiş bir kısmını alacak yeni kutusuna kafesli kraliçe ve kuluçka tarak ekleyin. Zirve toplayıcı zaman başlayana kadar bekleyin. Sonra en az 100 m uzakta orijinal konumundan işaretlenmiş silaj ve hemşire arılar ile orijinal koloni taşıyın. <ol><li> Özgün konumda, damızlık ve sadece kraliçe ile toplayıcı-türetilmiş kovan için yeni bir kutu kurmak. </li><li> Silaj disloke orijinal kovan kutusunu bırakın ve özgün konumlarına geri başkanlık edecek. Silaj yuva arılar toplayıcı nüfusun ayrılmasını tamamlamak için bir sonraki ulaşmak için 2 saat boyunca özgün konumuna geri dönmek için izin verir. </li><li> Ardından, ayrılık sona orijinali kapatmak, şimdi kovanı &quot;hemşire-türetilmiş&quot;, ve en az 3 km uzaklıkta bir arılık aktarmak. </li></ol></li><li> Başarılı bir sosyal görev için kovan bakım ve izlemeters: Sağlıklı, açık damızlık düzenli deneysel kovanlarını kontrol edin. <ol><li> Koloni manipülasyonu sonrası ilk günlerinde potansiyel patojen yükünü azaltmak için gözetimsiz ve ölü yavru değiştirin. </li><li> Dönme deney (Şekil 2) tamamlandığında taraklar değiştirilmesi veya zaman yine bu tanıtmadan önce yavru peteklerin fotoğraf çekmek, ve, toplayıcı-türetilmiş kovanı içinde başarılı tersine doğrulamak için. Önceden değişkenliklidir yavrularıyla ve açık, canlı damızlık Alanları toplayıcı-türetilmiş koloniler hemşirelik faaliyet güvenilir göstergeleridir. </li></ol></li><li> Örnekleme: Sosyal ters eşlik fizyolojik etkileri 3-8 gün silaj ve hemşireler sonra tespit edilebilir ayrıldı. <ol><li> Biz ters başlatılan 8 gün sonra tüm test grupları, yani geri döndü işçi ve devam silaj (toplayıcı-türetilmiş kovan), hem de sürekli hemşire ve yeni işe silaj (hemşire-türetilmiş kovan) örnekleme öneriyoruz. </li><li> ColAdım 1.5 &#39;de tarif edildiği gibi lect örnekleri. </li></ol></li></ol> 3. Lipofusin Nicelik ile İşçi-tipi özel Hücresel Yaşlılık Desenler analiz Lipofusin Hücresel yaşlanma evrensel biyomarkerdir. Içsel bir birikim ürünü olarak, lipofusin spesifik otofloresan (emisyon max = 530-650 nm) tespiti 18 için kullanılabilir. <ol><li> Diseksiyon ve sabitleme: hareketsiz kadar buz üzerinde soğutun arılar, kaldırmak ve istenilen doku örneği teşrih. <ol><li> 4 ° C&#39;de gece boyunca inkübasyon için, sabitleyici içerisine (pH 7.2 fosfat tamponlu tuzlu su, PBS içinde% 4 paraformaldehid) aktarın </li><li> PBS içinde numuneleri 3 kez yıkayın. </li></ol></li><li> Doku işleme ve montaj: titreşimli bir bıçak mikrotom örneğin Leica VT 1000&#39;ler (Leica Biosystems, Nussloch, Almanya) kullanılarak, örneğin, en fazla 40 um &#39;den kalınlıkta bölümlere doku örnekleri kesin. <ol><li&gt; Temizleme için,% 30 gliserol (PBS) içinde bir gece boyunca inkübe doku bölümleri ve% 50 gliserol (PBS) içinde bir 2 hr. </li><li> % 50 gliserol (PBS) içinde mikroskopik slaytlar üzerine bölümlerini monte edin. Uzun süreli depolama mühür kapağı oje ile kayıyor. </li></ol></li><li> Görüntü edinimi: Lipofusin algılamak için, λ = 514, 561nm veya uyarma için benzer lazer çizgiler sağlayan bir lazer tarama konfokal mikroskop kullanılarak önermek ve dedektör bant genişliği 570-650 nm&#39;ye ayarlanmış. <ol><li> Lipofusin daha iyi tanımlanması için, ikinci bir kanal içerir ve kısa dalga boyu spektrumları bir eşzamanlı tarama yapmak (uyarım = 405 nm, emisyon = 410-450 nm). Uzun dalga boyu kanal nedeniyle autofluorescent trakea ve diğer non-taneli yapılara, granül Lipofusin hem de ortaya, ama aynı zamanda belirsiz &quot;arka plan&quot; olacak. Ikinci, daha kısa dalga boyu kanal sadece spesifik otoflüoresanı ortaya, ama değil lipofusin olacaktır. Bu durumda, kimlik lipofusin tesislerinin olabilir,<html> sadece bir tanesi lipofusin özel floresan ile granüller ortaya ile, her iki kanal sinyalleri karşılaştırarak tated. </li><li> Yüksek çözünürlüklü görüntülerin elde 40X büyütme veya daha yüksek, ve 1.25 veya daha yüksek, tercihen bir sayısal açıklığa sahip bir objektif kullanın. Tarama görüntü yaklaşık 100 x 100 x 10 mm boyutlarında 3 ile yığınlar. Her birey ve doku örneği, birden çok görüntü yığınlarının tarafından temsil edilmelidir. </li><li> Teknik varyasyonu neden içi bireysel ve bireyler arası farklılıkları azaltmak için, her zaman lazer güç ve dedektör hassasiyeti sabit tutmak. </li><li> Gün için günlük teknik varyasyonlar tarafından yanlılığı azaltmak için çeşitli tarama oturumları her tüm test grupları eşit örnek numaraları tarayın. </li></ol></li><li> Görüntü işleme: mikroskobik görüntü yığınlarının gelişmiş işleme izin modülleri ile yazılım paketleri kullanın, örneğin ImageJ (Sağlık, Bethesda, Maryland, ABD ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri,gej.nih.gov / ij / &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; http://imagej.nih.gov/ij/). <ol><li> 3D görüntü yığınlarının her biri için en fazla 2 boyutlu çıkıntı oluşturur. </li><li> Yüksek frekans gürültüyü azaltmak için, ve lipofusin granül boyutları ile yapıları korumak için bir miktar çekirdek büyüklüğüne sahip bir Gauss filtre uygulama. </li><li> Lipofusin kimlik (adım 3.2) kolaylaştırmak için her iki renk kanallarını birleştirme. </li></ol></li><li> Görüntü analizleri: sayısallaştırma adımları gerçekleştirmeden denek grubu kimliğini test kör olacak emin olun. <ol><li> Tüm görüntüler için, ilk olarak, ilgili yapıları kapsar ve diğer görüntüleri ROI&#39;ler benzer boyutlara sahip çıkar (ROI) bir bölge seçin. </li><li> Sonra her ROI temsil lipofusin granüllerinin istediğiniz numarayı seçin. Bir ROI içinde lipofusin granülleri seçerken, aşağıdaki kuralların uygulanması öznel önyargı azaltacaktır. <ol><li> İlk Granu seçmek için tutarlı bir konum seçinle. Bu durum, örneğin, bir ROI en sol kenar ve kenarına en yakın olan granül her zaman ilk seçim olacaktır olabilir. </li><li> Birbiri ardına, granüller önceki seçime (sonraki komşu) en yakın olduğu seçilir. </li><li> Sonraki komşusu seçerken, sadece bir önceki seçimden doğru arama, örneğin, sadece bir yöne doğru hareket ettirin. Bu kural seçim yoğun dolu granüller arada kümeleri hakimdir önler. </li><li> Seçme işlemi tamamlandığında, söz konusu granül alan ana hatlarını ve ölçülerek, her lipofusin parçacık boyutunu değerlendirmek. Farklı test grupları bireyleri karşılaştırmak uygun istatistiksel testler kullanın. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Munch, D., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+curious+case+of+aging+plasticity+in+honey+bees.">The curious case of aging plasticity in honey bees.</a> FEBS Lett. 584, 2496-2503 (2010).</li><li>Buffenstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negligible+senescence+in+the+longest+living+rodent,+the+naked+mole-rat:+insights+from+a+successfully+aging+species.">Negligible senescence in the longest living rodent, the naked mole-rat: insights from a successfully aging species.</a> J Comp Physiol B. 178, 439-445 (2008).</li><li>Parker, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+are+social+insects+telling+us+about+aging?.">What are social insects telling us about aging?.</a> Myrmecological News. 13, 103-110 (2010).</li><li>Seeley, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Wisdom of the Hive. , (1995).</li><li>Amdam, G. V., Omholt, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulatory+anatomy+of+honeybee+lifespan.">The regulatory anatomy of honeybee lifespan.</a> J Theor Biol. 216, 209-228 (2002).</li><li>Amdam, G. V., Norberg, K., Hagen, A., Omholt, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+exploitation+of+vitellogenin.">Social exploitation of vitellogenin.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 1799-1802 (2003).</li><li>Guidugli, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitellogenin+regulates+hormonal+dynamics+in+the+worker+caste+of+a+eusocial+insect.">Vitellogenin regulates hormonal dynamics in the worker caste of a eusocial insect.</a> FEBS Lett. 579, 4961-4965 (2005).</li><li>Amdam, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+reversal+of+immunosenescence+in+honey+bee+workers.">Social reversal of immunosenescence in honey bee workers.</a> Exp Gerontol. 40, 939-947 (2005).</li><li>Seehuus, S. C., Norberg, K., Gimsa, U., Krekling, T., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+protein+protects+functionally+sterile+honey+bee+workers+from+oxidative+stress.">Reproductive protein protects functionally sterile honey bee workers from oxidative stress.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 962-967 (2006).</li><li>Scheiner, R., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+tactile+learning+is+related+to+social+role+in+honeybees.">Impaired tactile learning is related to social role in honeybees.</a> J Exp Biol. 212, 994-1002 (2009).</li><li>Behrends, A., Scheiner, R., Baker, N., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+aging+is+linked+to+social+role+in+honey+bees+(Apis+mellifera.">Cognitive aging is linked to social role in honey bees (Apis mellifera.</a> Exp Gerontol. 42, 1146-1153 (2007).</li><li>M&#252;nch, D., Baker, N., Kreibich, C. D., Braten, A. T., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+the+laboratory+and+during+free-flight:+old+honey+bees+reveal+learning+and+extinction+deficits+that+mirror+mammalian+functional+decline.">In the laboratory and during free-flight: old honey bees reveal learning and extinction deficits that mirror mammalian functional decline.</a> PLoS One. 5, e13504 (2010).</li><li>Vance, J. T., Williams, J. B., Elekonich, M. M., Roberts, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+age+and+behavioral+development+on+honey+bee+(Apis+mellifera)+flight+performance.">The effects of age and behavioral development on honey bee (Apis mellifera) flight performance.</a> J Exp Biol. 212, 2604-2611 (2009).</li><li>Dukas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+rates+of+honey+bees+in+the+wild.">Mortality rates of honey bees in the wild.</a> Insect Soc. 55, (2008).</li><li>Behrends, A., Scheiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+at+old+age:+a+study+on+winter+bees.">Learning at old age: a study on winter bees.</a> Front Behav Neurosci. 4, 15 (2010).</li><li>Huang, Z. -. Y., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Honeybee+colony+integration:+Worker-worker+interactions+mediate+hormonally+regulated+plasticity+in+division+of+labor.">Honeybee colony integration: Worker-worker interactions mediate hormonally regulated plasticity in division of labor.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 89, 11726-11729 (1992).</li><li>Huang, Z. Y., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+honey+bee+division+of+labor+by+colony+age+demography.">Regulation of honey bee division of labor by colony age demography.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 39, 147-158 (1996).</li><li>Double, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+biology+of+neuromelanin+and+lipofuscin+in+the+human+brain.">The comparative biology of neuromelanin and lipofuscin in the human brain.</a> Cell Mol Life Sci. 65, 1669-1682 (2008).</li><li>Fonseca, D. B., Brancato, C. L., Prior, A. E., Shelton, P. M., Sheehy, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Death+rates+reflect+accumulating+brain+damage+in+arthropods.">Death rates reflect accumulating brain damage in arthropods.</a> Proc Biol Sci. 272, 1941-1947 (2005).</li><li>Baker, N., Wolschin, F., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+learning+deficits+can+be+reversible+in+honeybees+Apis+mellifera.">Age-related learning deficits can be reversible in honeybees Apis mellifera.</a> Exp Gerontol. 47, 764-772 (2012).</li><li>Capaldi, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+orientation+flight+in+the+honeybee+revealed+by+harmonic+radar.">Ontogeny of orientation flight in the honeybee revealed by harmonic radar.</a> Nature. 403, 537-540 (2000).</li><li>Marco Antonio, D. S., Guidugli-Lazzarini, K. R., do Nascimento, A. M., Simoes, Z. L., Hartfelder, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi-mediated+silencing+of+vitellogenin+gene+function+turns+honeybee+(Apis+mellifera)+workers+into+extremely+precocious+foragers.">RNAi-mediated silencing of vitellogenin gene function turns honeybee (Apis mellifera) workers into extremely precocious foragers.</a> Naturwissenschaften. 95, 953-961 (2008).</li><li>Whitfield, C. W., Cziko, A. -. M., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiles+in+the+brain+predict+behavior+in+individual+honey+bees.">Gene expression profiles in the brain predict behavior in individual honey bees.</a> Science. 302, 296-299 (2003).</li><li>Schmidt, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attraction+of+reproductive+honey+bee+swarms+to+artificial+nests+by+Nasonov+pheromone.">Attraction of reproductive honey bee swarms to artificial nests by Nasonov pheromone.</a> Journal of Chemical Ecology. 20, 1053-1056 (1994).</li><li>De Moraes, R., Bowen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modes+of+cell+death+in+the+hypopharyngeal+gland+of+the+honey+bee+(Apis+mellifera+L).">Modes of cell death in the hypopharyngeal gland of the honey bee (Apis mellifera L).</a> Cell Biol Internat. 24, 737-743 (2000).</li><li>Sheehy, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+flow-cytometric+method+for+quantification+of+neurolipofuscin+and+comparison+with+existing+histological+and+biochemical+approaches.">A flow-cytometric method for quantification of neurolipofuscin and comparison with existing histological and biochemical approaches.</a> Arch Gerontol Geriatr. 34, 233-248 (2002).</li><li>Hsieh, Y. S., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Honeybee+trophocytes+and+fat+cells+as+target+cells+for+cellular+senescence+studies.">Honeybee trophocytes and fat cells as target cells for cellular senescence studies.</a> Exp Gerontol. 46, 233-240 (2011).</li><li>Wolschin, F., Munch, D., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+proteomic+analyses+reveal+regional+brain+differences+during+honeybee+aging.">Structural and proteomic analyses reveal regional brain differences during honeybee aging.</a> J Exp Biol. 212, 4027-4032 (2009).</li></ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Biz burada daha önce açıklanan 8,16,17,19,20 yaklaşımları benimsemek, bal arıları ve esnek yaşlanmayı okuyan kolaylaştıracak tek bir iş akışına entegre. Amacımız, ilgili örnek materyal elde etmek için ayarlanmış bir standart araç ile bu alana acemi bilim adamları sağlamak ve farklı araştırma ekipleri arasında deneysel tekrarlanabilirlik geliştirmektir. Bizim prosedürleri basitleştirilmiş ve (örneğin 8 karşılaştırmak) önceki açıklamalarında olduğu gibi öz...

Çok sosyal hayvanlar kompleks koloni yapıları üreme kastın etkileşimi yoluyla korunur ve farklı sosyal görev davranışları tipik olmayan-yenidenüretim işçilerin bir yardımcı kast. Farklı işçiler, belirli fizyolojik adaptasyonlar farklı sib bakım davranışlarını sağlamak ve aynı zamanda aşırı ömrü farklılıklara bağlıdır. Bal arıları ve körfareler toplumsallık hızlandırılmış, ihmal veya 1-3 yaşlanma ters kalıpları ile nasıl bağlantılı olduğunu incelemek için en gelişmiş hayvan modellerini temsil eder. Bal arısı kolonilerinde, bir tek yumurtlayan kraliçe gıda için damızlık, yem eğilimindedir binlerce işçi tarafından destekli, ve, termoregülasyon veya hijyenik davranışları 4 koruma meşgul. Bu işçiler arasında, son derece kısa ömürlü yem, ara ile hemşire arılar, ve uzun ömürlü kış (diutinus) arı vardır. Bireyler, ancak, belirli bir kalıcı wo bağlı değildirrker-tipi, ancak esnek bir davranış ontogenezini görüntüler: Onlar (&quot;temporal kastlara&quot;) bir sosyal görev davranışı değiştirmez. Toy arılar sonunda dışında toplayıcı değişebilir ki, yavru eğilimi hemşire arılar için değiştirebilirsiniz. Ancak, toy yuva arılar da uzun ömürlü kış arıları dönüşebilmektedir ve kısa ömürlü yem bile genellikle uzun ömürlü hemşire içine dönebilirsiniz. Aşırı (kış arılar) ve orta (hemşire arılar) ömrü ile İşçi bol kaynakları ile gıda üretim ve depolama organları iyi gelişmiştir - (1,5 gözden) kısa ömürlü aramayanlara aksine. Ancak, bireysel ömrü düzenleme bireyin kaynak dengesi basit değişiklikler ötesinde böyle jöle üretimi 6, hormonal kontrol 7, bağışıklık gibi olmayan çoğaltılması işçi kast çeşitli adapte işlevleri vardır, bir yumurta sarısı protein, üzerinde araştırma tarafından önerilmektedir 8 ve anti-oksidan savunma 9. F Desenlerkoku için kurulmuş, ve diğer beyin veya motor fonksiyonların 10-13 gibi Fonk düşüş (ihtiyarlık) işçiler arasında ayna ömrü eşitsizlikler,. Uzun ömürlü kış arı 15 saptanabilir bir düşüş (ihmal edilebilir ihtiyarlama) eksikliği karşı Spesifik olarak, toplayıcı sadece iki hafta sonra öğrenme fonksiyonunda önemli bir düşüş, toplayıcılar 14 benzer bir ölüm ilerlemesini eşleşir. Biz izleme ve yaşlanma-tip geçişler 8,16,17 işlemek için izin kurulan deneysel paradigmalar uyarlanmış esnek yaşlanmanın moleküler parmak izlerini tespit etmek. Kronolojik yaş ve yaşlanma üzerinde işçi-tipi belirli sosyal davranışların etkileri ayrılabilir hangi örnekleri edinme 1. ayrıntıları deneme. Deney 2 yavaşladı yaşlanma dinamikleri ile hemşire arılar içine hızlandırılmış ile arayıcıların tersine anlatılmaktadır. Deney 3 Anatomica tarafından hücresel yaşlanma etkilerini incelenmesi için bir yaklaşım sağlarHücresel yaşlanma (lipofusin) 18 için kurulmuş bir biyolojik belirteç l ölçümü.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Apifonda</td>
 <td>S&uuml;dzucker AG, Mannheim/Ochsenfurt, Germany</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>paraformaldehyde</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>158127</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>phosphate-buffered saline</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P4417</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Glycerol</td>
 <td>Merck</td>
 <td>1.04094.1000</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

obtaining specimens with slowed, accelerated and reversed aging in the honey bee model

Çok sosyal hayvanlar Dernekleri yakından ilgili bireyler arasında büyük farklılıklar ömrü bulunmaktadır. Sosyal böcekler arasında, bal arısı ömrü ve yaşlanmanın plastisite sosyal faktörler ile açıklanmaktadır nasıl çalışma için iyi kurulmuş bir modeldir. Bal arılarının işçi kast nektar ve polen toplamak damızlık eğilimi hemşire arılar, arılar ve silaj içerir. Önceki iş beyin fonksiyonları ve uçuş performans hemşireler daha silaj daha hızlı senesce göstermiştir. Silaj geri hemşirelik görevleri dönmek Ancak, beyin fonksiyonları, kurtarabilirsiniz. Hızlandırılmış yaşlanma ve ters fonksiyonel bu gibi desenler protein bolca değişikler ve bağışıklık fonksiyonu, değiştirilmiş metabolik kaynak seviyeleri ile bağlantılıdır. , Vitelogenin, hormonal kontrol ve hücresel savunma uyarlanmış işlevleri olan bir yumurta sarısı protein, işçi farklı yaşlanma dinamiklerini kontrol eden bir ağda önemli bir düzenleyici eleman olarak hizmet edebilir. Burada hemşire ve silaj ortaya çıkması izlenir, ve daha uzun ömürlü hemşire içine genellikle kısa ömürlü silaj ters dahil olmak üzere, nasıl manipüle edilebileceğini açıklar. Bizim temsilcisi sonuçları benzer kronolojik yaş ile bireylerin deneysel koşullar altında silaj ve hemşire arıların içine ayırt nasıl gösterebilir. Biz geri hemşirelerle silaj davranış tersine valide nasıl örneklemektedir. Son olarak, burada hücresel yaşlanma lipofusin birikimi, yaşlanma evrensel bir biyomarker ölçülerek değerlendirilebilir kadar farklı gösterir. Sosyal etkileri bağlantı olabilir mekanizmaları eğitim ve plastisite yaşlanma için, bu protokol, ilgili örnek malzeme elde etmek ve gelecekteki çalışmalar arasında veri karşılaştırılabilirliği artırmak için ayarlanmış standart bir araç sağlar.

Protokol bölüm 1 ve deney grupları hızlandırılmış niteliklerini incelemek için elde edilebilir nasıl 2 ayrıntı, yavaşladı ve tek bir yaş grubu ile koloniler yaşlanma tersine. (Şekil 1, bölüm 1 karşılaştırma) 6 koloni için silaj sayıları (&quot;giriş sayar&quot;) değerlendirilir, normal ontogenezini eşlik işçi-tipi farklılaşmasını izlemek için. Grafikler bireylerin daha 10 gün eski önce silaj devlete hemşire gelen önemli değişiklik, tipik olarak gözlenen olmadı...

Watch this Scientific Journal Video about Obtaining Specimens with Slowed, Accelerated and Reversed Aging in the Honey Bee Model at JoVE.com

Obtaining Specimens with Slowed, Accelerated and Reversed Aging in the Honey Bee Model

Bal arısı işçiler, yaşlanma sosyal davranışları ziyade kronolojik yaşına bağlıdır. Burada çok farklı yaşlanma desenleri ile işçi-tipleri elde edilmiş ve hücresel yaşlanma için analiz edilebilir göstermek.

, Yavaşlatıldı Hızlandırılmış ve Ters Honey Bee Model Yaşlanma ile Örneklerin Alınması

Societies of highly social animals feature vast lifespan differences between closely related individuals. Among social insects, the honey bee is the best ...

obtaining-specimens-with-slowed-accelerated-reversed-aging-honey-bee

Research

JoVE Journal

Biology

11.2K Görüntüleme.  Norwegian University of Life Sciences.  Bal arısı işçiler, yaşlanma sosyal davranışları ziyade kronolojik yaşına bağlıdır. Burada çok farklı yaşlanma desenleri ile işçi-tipleri elde edilmiş ve hücresel yaşlanma için analiz edilebilir göstermek. 

Video: Obtaining Specimens with Slowed, Accelerated and Reversed Aging in the Honey Bee Model

Brain Banking: Making the Most of your Research Specimens

Unbiased stereology is a method for accurately and efficiently estimating the total neuron number (or other cell type) in a given area of interest1. To achieve this goal 6-10 systematic sections should be probed covering the entire structure. Typically this involves processing 1/5 sections which leaves a significant amount of material unprocessed. In order to maximize the material, we propose an inexpensive method for preserving fixed tissue as part of a long-term storage research plan. As tissue is sliced and processed for the desired stain or antibody, alternate sections should be systematically placed in antigen preserve at -20&deg;C for future processing. Using 24-well plates, sections can be placed in order for future retrieval. Using this method, tissue can be stored and processed for immunohistochemistry over the course of years.

Brain banking and systematic sampling of biological material provides the basis for unbiased stereology and maximizes the potential data obtained from each specimen.

Beyin Bankacılık: Araştırma Örneklerinin En iyi şekilde

Unbiased stereology is a method for accurately and efficiently estimating the total neuron number (or other cell type) in a given area of interest1.  To ...

Biyoloji

In vivo Ca2+- Imaging of Mushroom Body Neurons During Olfactory Learning in the Honey Bee

The in vivo and semi-in vivo preparation for Calcium imaging has been developed in our lab by Joerges, K&uuml;ttner and Galizia over ten years ago, to measure odor evoked activity in the antennal lobe1. From then on, it has been continuously refined and applied to different neuropiles in the bee brain. Here, we describe the preparation currently used in the lab to measure activity in mushroom body neurons using a dextran coupled calcium-sensitive dye (Fura-2). We retrogradely stain mushroom body neurons by injecting dye into their axons or soma region. We focus on reducing the invasiveness, to achieve a preparation in which it is still possible to train the bee using PER conditioning. We are able to monitor and quantify the behavioral response by recording electro-myograms from the muscle which controls the PER (M17)2.
After the physiological experiment the imaged structures are investigated in greater detail using confocal scanning microscopy to address the identity of the neurons.

In vivo Ca2+- Imaging of Mushroom Body Neurons During Olfactory Learning in the Honey Bee

Bees can be conditioned in an appetitive olfactory learning paradigm (PER-conditioning). Using odors as stimuli, we established a method in which behavior is recorded while simultaneously Calcium Imaging is used to measure odor evoked activity in mushroom body neurons in vivo.

In vivo Ca 2 + - Bal Arısı Koku Öğrenme sırasında Mantar Vücut Nöronlar Görüntüleme

The in vivo and semi-in vivo preparation for Calcium imaging has been developed in our lab by Joerges, K&uuml;ttner and Galizia over ten years ago, to ...

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

The Drosophila heart has recently emerged as a good model system for examining the genetic, cellular, and molecular mechanisms underlying function in myogenic hearts. A key step in examining heart function in the fly is finding a way to access the heart in a manner that preserves its myogenic function while still allowing the beating heart organ to be observed and recorded. Two different methods for observing and recording the beating heart in both larva and adult Drosophila are described here. Our semi-intact preparation using adult flies allows clear visualization of the abdominal heart without interference from the pigmented cuticle and overlying fat bodies. To record larval heart beats it is necessary to immobilize the larva, which minimizes body wall movements thereby reducing heart movements that are not associated with myocardial contractions. Our methodologies produce stable adult and larval heart preparations that can beat for hours at rates of 1-3 Hz.

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

Technique required for visualizing the beating heart in larval and adult Drosophila are presented. Each life stage requires a different methodology.

Dayak Kalp görselleştirme Drosophila</em

The Drosophila heart has recently emerged as a good model system for examining the genetic, cellular, and molecular mechanisms underlying function in ...

Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees collect and convert to beebread by placing colonies in a specially constructed enclosed flight area. Methods were developed to analyze the protein and amino acid composition of the pollen and beebread. We also describe how consumption of the beebread was measured and methods used to determine adult worker bee hemolymph protein titers after feeding on beebread for 4, 7 and 11 days after emergence. Methods were applied to determine if genotype affects the conversion of pollen to beebread and the rate that bees consume and acquire protein from it. Two subspecies (European and Africanized honey bees; EHB and AHB respectively) were provided with the same pollen source. Based on the developed methods, beebread made by both subspecies had lower protein concentrations and pH values than the pollen. In general, amino acid concentrations in beebread made by either EHB or AHB were similar and occurred at higher levels in beebread than in pollen. Both AHB and EHB consumed significantly more of the beebread made by AHB than by EHB. Though EHB and AHB consumed similar amounts of each type of beebread, hemolymph protein concentrations in AHB were higher than in EHB. Differences in protein acquisition between AHB and EHB might reflect environmental adaptations related to the geographic region where each subspecies evolved. These differences could contribute to the successful establishment of AHB populations in the New World because of the effects on brood rearing and colony growth.

Here are methods to quantify nutrients in pollen before and after its conversion to beebread by two subspecies of honeybees. We describe techniques to measure beebread consumption and resulting protein titers in both subspecies.

Africanized ve Avrupa Bal Arısı Made by beebread besin tuzu karşılaştırılması yöntemleri ve Hemolenf Protein Titrelerin Etkileri

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees ...

Dissection and Observation of Honey Bee Dorsal Vessel for Studies of Cardiac Function

The European honey bee, Apis mellifera L., is a valuable agricultural and commercial resource noted for producing honey and providing crop pollination services, as well as an important model social insect used to study memory and learning, aging, and more. Here we describe a detailed protocol for the dissection of the dorsal abdominal wall of a bee in order to visualize its dorsal vessel, which serves the role of the heart in the insect. A successful dissection will expose a functional heart that, under the proper conditions, can maintain a steady heartbeat for an extended period of time. This allows the investigator to manipulate heart rate through the application of cardiomodulatory compounds to the dorsal vessel. By using either a digital microscope or a microscope equipped with a digital camera, the investigator can make video recordings of the dorsal vessel before and after treatment with test compounds. The videos can then be scored at a time convenient to the user in order to determine changes in heart rate, as well as changes in the pattern of heartbeats, following treatment. The advantages of this protocol are that it is relatively inexpensive to set up, easy to learn, requires little space or equipment, and takes very little time to conduct.

The abdominal dorsal vessel of the honey bee and other insects serves as the functional equivalent of the mammalian heart and plays an important role in nutrient transport, waste removal, immune function, and more. Here we describe a protocol for the visualization and pharmacological manipulation of bee heart rate.

Kalp Fonksiyon Çalışmaları Diseksiyon ve Bal Arısı Dorsal Vessel Gözlem

The European honey bee, Apis mellifera L., is a valuable agricultural and commercial resource noted for producing honey and providing crop pollination ...

Monitoring Colony-level Effects of Sublethal Pesticide Exposure on Honey Bees

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment methods. Here we describe methods to measure the quantities of adult bees, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, by photographing frames, and by installing hives on scales and with internal sensors. Data from these periodic evaluations are then combined with running average and daily detrended data on hive weight and internal hive temperature. The resulting datasets have been used to detect colony-level effects of imidacloprid applied in a sugar syrup as low as 5 parts per billion. The methods are objective, require little training, and provide permanent records in the form of sensor output and photographs.

Sublethal doses of pesticides may affect colonies in ways that are difficult to detect using only periodic or visual methods. Methods to measure total adult bee mass, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, photographing frames, and installing sensors, are provided. Data analysis is also addressed.

Bal arıları üzerinde Sublethal pestisit pozlama koloni düzeyi etkilerinin izlenmesi

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These age-associated disorders are characterized by the appearance of protein aggregates with fibrillary structure in the brains of these patients. Exactly why normally soluble proteins undergo an aggregation process remains poorly understood. The discovery that protein aggregation is not limited to disease processes and instead part of the normal aging process enables the study of the molecular and cellular mechanisms that regulate protein aggregation, without using ectopically expressed human disease-associated proteins. Here we describe methodologies to examine inherent protein aggregation in Caenorhabditis elegans through complementary approaches. First, we examine how to grow large numbers of age-synchronized C. elegans to obtain aged animals and we present the biochemical procedures to isolate highly-insoluble-large aggregates. In combination with a targeted genetic knockdown, it is possible to dissect the role of a gene of interest in promoting or preventing age-dependent protein aggregation by using either a comprehensive analysis with quantitative mass spectrometry or a candidate-based analysis with antibodies. These findings are then confirmed by in vivo analysis with transgenic animals expressing fluorescent-tagged aggregation-prone proteins. These methods should help clarify why certain proteins are prone to aggregate with age and ultimately how to keep these proteins fully functional.

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

The goal of the method presented here is to explore protein aggregation during normal aging in the model organism C. elegans. The protocol represents a powerful tool to study the highly insoluble large aggregates that form with age and to determine how changes in proteostasis impact protein aggregation.

Yöntemleri ile Caenorhabditis elegans çağda doğal Protein toplama çalışma değişikliklere

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...

SA-&#946;-Galactosidase-Based Screening Assay for the Identification of Senotherapeutic Drugs

Cell senescence is one of the hallmarks of aging known to negatively influence a healthy lifespan. Drugs able to kill senescent cells specifically in cell culture, termed senolytics, can reduce the senescent cell burden in vivo and extend healthspan. Multiple classes of senolytics have been identified to date including HSP90 inhibitors, Bcl-2 family inhibitors, piperlongumine, a FOXO4 inhibitory peptide and the combination of Dasatinib/Quercetin. Detection of SA-&#946;-Gal at an increased lysosomal pH is one of the best characterized markers for the detection of senescent cells. Live cell measurements of senescence-associated &#946;-galactosidase (SA-&#946;-Gal) activity using the fluorescent substrate C12FDG in combination with the determination of the total cell number using a DNA intercalating Hoechst dye opens the possibility to screen for senotherapeutic drugs that either reduce overall SA-&#946;-Gal activity by killing of senescent cells (senolytics) or by suppressing SA-&#946;-Gal and other phenotypes of senescent cells (senomorphics). Use of a high content fluorescent image acquisition and analysis platform allows for the rapid, high throughput screening of drug libraries for effects on SA-&#946;-Gal, cell morphology and cell number.

Cellular senescence is the key factor in the development of chronic age-related pathologies. Identification of therapeutics that target senescent cells show promise for extending healthy aging. Here, we present a novel assay to screen for the identification of senotherapeutics based on measurement of senescence associated &#946;-Galactosidase activity in single cells.

Senoterapötik Ilaçların tanımlanması için SA-β-Galactosidaz tabanlı tarama tahlili

Cell senescence is one of the hallmarks of aging known to negatively influence a healthy lifespan. Drugs able to kill senescent cells specifically in cell ...

A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee (Bombus) Hive Entrances

To verify the plant sources from which bumble bees forage for pollen, individuals must be collected to remove their corbicular pollen loads for analysis. This has traditionally been done by netting foragers at nest entrances or on flowers, chilling the bees on ice, and then removing the pollen loads from the corbiculae with forceps or a brush. This method is time and labor intensive, may alter normal foraging behavior, and can result in stinging incidents for the worker performing the task. Pollen traps, such as those used on honey bee hives, collect pollen by dislodging corbicular pollen loads from the legs of workers as they pass through screens at the nest entrance. Traps can remove a large quantity of pollen from returning forager bees with minimal labor, yet to date no such trap is available for use with bumble bee colonies. Workers within a bumble bee colony can vary in size making size selection of entrances difficult to adapt this mechanism to commercially reared bumble bee hives. Using 3D printing design programs, we created a pollen trap that successfully removes the corbicular pollen loads from the legs of returning bumble bee foragers. This method significantly reduces the amount of time required by researchers to collect pollen from bumble bee foragers returning to the colony. We present the design, results of pollen removal efficiency tests, and suggest areas of modifications for investigators to adapt traps to a variety of bumble bee species or nest box designs.

A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee Bombus Hive Entrances

We present a non-lethal and automated mechanism to collect pollen from bumble bee (Bombus) workers returning to a hive. Instructions for producing, preparing, installing and using the devices are included. By using 3D-printed objects, modification to the design was timely, efficient and allowed for quick turnaround for testing.

Bombus Arısı (Bombus) Kovan Girişleri için 3D Baskılı Polen Tuzağı

To verify the plant sources from which bumble bees forage for pollen, individuals must be collected to remove their corbicular pollen loads for analysis.  ...

Gonadectomy and Blood Sampling Procedures in the Small Size Teleost Model Japanese Medaka (Oryzias latipes)

Sex steroids, produced by the gonads, play an essential role in brain and pituitary tissue plasticity and in the neuroendocrine control of reproduction in all vertebrates by providing feedback to the brain and pituitary. Teleost fishes possess a higher degree of tissue plasticity and variation in reproductive&#160;strategies compared to mammals and appear to be useful models to investigate the role of sex steroids and the mechanisms by which they act. The removal of the main source of sex steroid production using gonadectomy together with blood sampling to measure steroid levels has been well-established and fairly feasible in bigger fish and is a powerful technique to investigate the role and effects of sex steroids. However, these techniques raise challenges when implemented in small size teleost models. Here, we describe the step-by-step procedures of gonadectomy in both males and female Japanese medaka followed by blood sampling. These protocols are shown to be highly feasible in medaka indicated by a high survival rate, safety for the life span and phenotype of the fish, and reproducibility in terms of sex steroid clearance. The use of these procedures combined with the other advantages of using this small teleost model will greatly improve the understanding of feedback mechanisms in the neuroendocrine control of reproduction and tissue plasticity provided by sex steroids in vertebrates.

Gonadectomy and Blood Sampling Procedures in the Small Size Teleost Model Japanese Medaka Oryzias latipes

The article describes a quick protocol to gonadectomize and sample blood from the small teleost fish, using Japanese medaka (Oryzias latipes) as a model, to investigate the role of sex steroids in animal physiology.

Küçük Boyutlu Teleost Model Japonca Medaka'da Gonadektomi ve Kan Örnekleme İşlemleri (Oryzias latipes)

Sex steroids, produced by the gonads, play an essential role in brain and pituitary tissue plasticity and in the neuroendocrine control of reproduction in ...