(; Henry Dryerre şeması LL) ve finansman İngiliz Kalp Vakfı (PWFH, BRW, DJW; Bu çalışma Edinburgh Üniversitesi (NSK) ve Carnegie Trust studentships tarafından desteklenen RG / 05/008; PG / 05/007; PG / 08/068/25461) ve Wellcome Trust (JRS, BRW, DJW; 08314 / Z / 07 / Z). Yazarlar Kardiyovasküler Bilim Merkezi&#39;nin Araştırma Mükemmellik ödülü BHF-finanse Merkezi tarafından sağlanan çalışmaları için desteklemek için minnettarız. Yazarlar neointimal lezyon üretiminin cerrahi modellerinin kurulmasına ilişkin Profesör Masataka Sata (Tokushima Üniversitesi) ve (Mount Sinai Tıp Okulu Dr Ernane Reis&#39;in grubunda) Dr. Igor Chersehnev tavsiye için özellikle minnettarız. Video üretilen ve SATA ve arkadaşları tarafından sunulmuştur. (http://plaza.umin.ac.jp/~msata/english.htm) özellikle yararlı olmuştur.

Fare Femoral Arter içinde neointimal Lezyonlarının 1. Cerrahi İndüksiyon <ol><li> Hayvanları kullanarak deneyler ulusal ve kurumsal etik şartlarına uygun olarak yapılmalıdır. Tüm cerrahi uygun aseptik teknik kullanılarak yapılmalıdır. Neointimal lezyonların indüksiyonu Roque ve ark., 12 ve SATA ve ark., 13 tarafından tarif edilen tekniğin bir modifikasyonu kullanılarak elde edilir. </li><li> Erkek C57BL6 / J fareler tartılır (Yaş 10-12 hafta, ağırlık 25-30 g) indüksiyon odasında% 4-5 izofluran sunarak uyuşturan. Anestezinin sonra, 37 ° C &#39;de vücut ısısını korumak için ısıtılmış mata fare aktarın. Maske ile izofluran (% 2-3) &#39;in uygulanmasını devam edin. </li><li> Anestezi uygun bir düzeyde (ayak tutam tepki olmaması) neden sonra, buprenorfin uygulanması ile analjezik örtü sağlamak (0.1 mg / kg-1). Sonra sırtüstü pozisyon An fare koyunsol hindlimb ventral yüzeyi tıraş d. </li><li> Popliteal arter ve karın duvarı ile çatallanma arasında, femoral sinir femoral arter ve ven izole etmek künt diseksiyon kullanın, üst hindlimb kasları ortaya çıkarmak için bir kesi yapmak ve. / V lignokain% 1 w kullanarak gerektiği gibi yarayı yıkayın. </li><li> (Popliteal arter hemen dalı altında) (karın duvarına yakın) ve distal proksimal femoral arter ve kan akışını kontrol etmek için ven etrafında geçici birleşik harfleri (6/0 Mersilk) yerleştirin. Sonra (femoral arter ile şubeye uzak yaklaşık 2-5 mm) popliteal arteri izole ve distale Arter. Popliteal arter altında ikinci bir çözdü bitişik harfleri yerleştirin. </li><li> Proksimal geçici ligature basınç uygulayarak kanamayı önleyen femoral arter dal hemen distalinde popliteal arterde küçük bir kesi (Arteriyotomi), emin olun. Düz Advance, 0.014 &quot;kılavuz teli çoğaldığınıKarın duvarı yönünde femoral arter boyunca 1-1.5 cm ve 30 saniye (Şekil 1A) yerinde bırakın. </li><li> Kılavuz teli çıkarın ve bu amaçla yerleştirilen bitişik harfleri kullanarak ve femoral arter tıkamak için özen, arteriotomi üzerinde popliteal arteri Arter. NOT: ligasyon kaynaklı yaralanma için. Intraluminal yaralanma olmadan neointimal biçimlenme femoral veya popliteal arter (Şekil 1B ve 1C) bağlanarak tarafından uyarılan edilebilir. Bu takip 1,1-1,5 adımları elde etmek için. Ancak, arteriyotomi yapmazlar ama ya (i) (adım 1.6 kaçınarak) popliteal arter ile şube noktada femoral arter veya (ii) Arter femoral arterin hemen distalinde popliteal arteri Arter. Sonra adım 1.8 ile devam edin. </li><li> Geçici bitişik harfler çıkarın süreksiz dış sütür (5/0 Mersilk) ile yarayı kapatmak ve EMLA krem ​​(% 2.5 lidokain,% 2.5 prilokain) uygulanır. Hayvanlar yeniden izin ver<html> bilinç (genellikle 5-10 dk) kazanmak ve onların kafes etrafında serbestçe hareket ediyor emin olun (hafif topallık etkilenen bacakta belirgin olabilir ama bu ameliyattan sonra ilk 2-3 gün içinde çözmelidir) oda tutan dönmeden önce. Fareler ameliyat sonrası tek başına ev sahipliği zorunda değilsiniz. </li><li> Hayvanlar kadar 3 ay boyunca kurtarmak için izin verin. Küçük lezyonlar 7 gün tel yaralanma sonrası ~ görünmeye başlayacak ve 21-28 gün sonra ~ istikrarlı bir maksimum boyutu ulaşacaktır. </li></ol> Apolipoprotein E Aterosklerotik Lezyonlarının 2. İndüksiyon - / - Fareler <ol><li> 12 hafta boyunca erkek, 6 hafta (evde yetiştirilen) eski ApoE boş fareler için, batı diyet (Araştırma Diyetler, ABD% 0.2 kolesterol) uygulayınız. </li><li> Aterosklerotik lezyonlar genellikle aort kavsi ve onun büyük dalları (Şekil 2) brüt inceleme üzerine görebilir. </li></ol> 3. Analiz Arter Lezyonları kullanarak Optik Projeksiyon Tomografi (OPT) nt &quot;&gt; NOT: fare femoral arter ve aortik ark örneklerinde lezyonların OPT görüntüleri optik projeksiyon tomografleri kullanılarak elde edilmiştir. <ol><li> % 10 nötr tamponlu formalin, ardından heparinize (10 U / ml) fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile terminal anestezi (80 mg / kg sodyum pentobarbital) kapsamında transkardiyak perfüzyon tespit ve kanları tümüyle alınarak fareler öldürülür. </li><li> Uygun şekilde femoral arter veya aort arkı ve ana dalları (sol karotid arter, sol subklavyen arter, brakiyosefalik gövde), yalıtmak ve yabancı peri-adventisyal malzeme çıkarmak. Gerekli olana kadar% 70 etanol içinde depolamadan önce% 10 tamponlu formalin ile O / N sonrası düzeltme. </li><li> % 1.5 düşük erime noktalı agaroz gömme arterler, Whatman 113 V kağıt ile ön-filtre edildi. Manyetik OPT her örnek takın mount o doğrultusunda damar ekseni ile siyanoakrilat yapıştırıcı ile monte edilir. Konik şekle aşırı agaroz Trim. En az 12 saat süre ile% 100 metanol içinde kurutmak. </li><li> Cbenzil alkol ve benzil benzoat karışımı içinde (12-24 saat) daldırılarak emizle kaplar (1: 2 h / h). </li><li> Kalibre tomografi temizlenir örnekleri yerleştirin. 1024 x 1,024 çözünürlüğü ayarlayın ve ilgi tüm alanı görülebilir sağlayan bir optik büyütme belirler. OPT hacim Z ekseni aynı çözünürlüğe yeniden bir izotropik (yani, 1.024 x 1,024 x 1,024), voksel boyutu ~ 200 mikron. Imar eserler olması muhtemel olduğu gibi bu kararın aşırı tahminini temsil edebilir. O parlak alan, iletim kanalı içinde görüş alanının merkezinde kendi ekseni üzerine döner, böylece örnek konumunu ayarlayın. </li><li> GFP1 filtre emisyon kanalı (uyarma filtresi 425 nm bant geçiren nm 40 ile; emisyon filtresi: 475 nm uzun geçiş) ise, numune odak ve elde edilen görüntünün dinamik aralığı en üst düzeye çıkarmak için pozlama süresini ayarlamak (aşırı doygunluk kaçının). 0.9 ° dönme adım, sadece GFP1 emisyon kanalında gemi tarayın. &lt;/ Li&gt; <li> Bitiminde DataViewer yazılımı kullanarak veri toplama kalitesini teyit etmektedir. Tarayıcıdan numune çıkarın. </li><li> Işlem, normal olarak mum, parafin önce, sonraki histolojik analiz,&gt; 24 saat boyunca% 100 metanol içinde yer örneği sağlamak için. </li></ol> 4. Görüntü İmar ve Analizi Filtre edilmiş geri yansıtma ile Tomografi yeniden yapılandırılması NRecon yazılım veya benzeri kullanılarak gerçekleştirilir. Rekonstrüksiyonları gruplar halinde, sahipsiz yapılabilir. <ol><li> Kaymaları dengeleyebilir ve görüntü yoğunluk seviyelerini ayarlayarak görüntü kalitesini artırmak. </li><li> DataViewer yazılımını kullanarak görüntü rekonstrüksiyon kalitesini kontrol edin. </li><li> Analiz için numune uygun bölümü belirlenmesi. Lümen boyutları kaydedildi isteniyorsa gemiler arasında tutarlı Bu uzunluk tutun. </li><li> El her 50 yeniden inşa kesitler içinde 1 uygun sınır izleme tarafından lezyonların taslağını tanımlayın. </li><li> Bilgisayar tarafından oluşturulan interpolations doğru olduğundan emin olmak için her Interleaved kesite edin. Gerektiğinde el ile sınır ayarlayın. </li><li> Yalnızca lezyon seçilir, böylece gri-seviyeli eşiğini ayarlayın ve ölçüm veri ihracat. </li><li> Her tarama için, lezyon içeren bir ilgi dikey bölgesini tanımlamak ve medya ve neointimaya arasındaki sınırı iz (yani., Internal elastik lamina pozisyonu) her 50 inci tarama hattı için. Yazılımda interleaved tarama hatları için intima / media sınırları katmak ve doğrulamak ve gerektiğinde uygun düzeltin. Daha fazla kademeli bu beyaz piksel neointima temsil siyah piksel lümen temsil ettiği bir ikili görüntü setini üretmek için elle tanımlanmış yoğunluğu eşiğine üç boyutlu hacmi tanımlanır. </li><li> Alınan ölçümler şunlardır: toplam lezyon hacmi (nesne hacmi), lümen hacmini (toplam hacim - nesne hacmi) ve lezyonun ve çapraz mezhep lümen dağılımıçalışılan kabın eksenel uzunluğu boyunca uğratarak alanı. </li></ol>

<ol>
	<li>Luis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerosis.">Atherosclerosis.</a> Nature. 407, 233-241 (2000).</li><li>Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerosis&#8211;an+inflammatory+disease.">Atherosclerosis&#8211;an inflammatory disease.</a> N Engl J Med. 340, 115-126 (1999).</li><li>Deuse, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+In-Stent+Restenosis:+An+Inexpensive,+Reliable,+and+Rapid+Preclinical+Model.">Imaging In-Stent Restenosis: An Inexpensive, Reliable, and Rapid Preclinical Model.</a> J Vis Ex. (31), (2009).</li><li>McAteer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+and+3D+reconstruction+of+atherosclerotic+plaque+components+in+apolipoprotein+E+knockout+mice+using+ex+vivo+high-resolution+MRI.">Quantification and 3D reconstruction of atherosclerotic plaque components in apolipoprotein E knockout mice using ex vivo high-resolution MRI.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 2384-2390 (2004).</li><li>Martinez, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+Computed+Tomography-Based+Virtual+Histology+for+Visualization+and+Morphometry+of+Atherosclerosis+in+Diabetic+Apolipoprotein+E+Mutant+Mice.">Microscopic Computed Tomography-Based Virtual Histology for Visualization and Morphometry of Atherosclerosis in Diabetic Apolipoprotein E Mutant Mice.</a> Circulation. 120, 821-822 (2009).</li><li>Langheinrich, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerotic+Lesions+at+Micro+CT:+Feasibility+for+Analysis+of+Coronary+Artery+Wall+in+Autopsy+Specimens.">Atherosclerotic Lesions at Micro CT: Feasibility for Analysis of Coronary Artery Wall in Autopsy Specimens.</a> Radiology. 231, 675-681 (2004).</li><li>Ambrosi, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virtual+histology+of+the+human+heart+using+optical+coherence+tomography.">Virtual histology of the human heart using optical coherence tomography.</a> J Biomed Opt. 14, 054002 (2009).</li><li>Ku, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoacoustic+microscopy+with+2-micron+transverse+resolution.">Photoacoustic microscopy with 2-micron transverse resolution.</a> J Biomed Opt. 15, 021302 (2010).</li><li>Sharpe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+projection+tomography+as+a+tool+for+3D+microscopy+and+gene+expression+studies.">Optical projection tomography as a tool for 3D microscopy and gene expression studies.</a> Science. 296, 541-545 (2002).</li><li>Sharpe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+projection+tomography.">Optical projection tomography.</a> Annu Rev Biomed Eng. 6, 209-228 (2004).</li><li>Kirkby, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+3-Dimensional+Imaging+of+Murine+Neointimal+and+Atherosclerotic+Lesions+by+Optical+Projection+Tomography.">Quantitative 3-Dimensional Imaging of Murine Neointimal and Atherosclerotic Lesions by Optical Projection Tomography.</a> PloS ONE. 6 (2), e16906 (2011).</li><li>Roque, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+femoral+artery+denudation+injury+associated+with+the+rapid,+accumulation+of+adhesion+molecules+on+the+luminal+surface+and+recruitment+of+neutrophils.">Mouse model of femoral artery denudation injury associated with the rapid, accumulation of adhesion molecules on the luminal surface and recruitment of neutrophils.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20, 335-342 (2000).</li><li>Sata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+vascular+injury+that+induces+rapid+onset+of+medial+cell+apoptosis+followed+by+reproducible+neointimal+hyperplasia.">A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia.</a> J Mol Cell Cardiol. 32, 2097-2104 (2000).</li><li>Richards-Kortum, R., Sevick-Muraca, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+optical+spectroscopy+for+tissue+diagnosis.">Quantitative optical spectroscopy for tissue diagnosis.</a> Annu Rev Phys Chem. 47, 555-606 (1996).</li><li>Kirkby, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-endothelial+cell+endothelin-B+receptors+limit+neointima+formation+following+vascular+injury.">Non-endothelial cell endothelin-B receptors limit neointima formation following vascular injury.</a> Cardiovascular Research. 95, 19-28 (2012).</li><li>Kipari, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=11-hydroxysteroid+dehydrogenase+type+1+deficiency+in+bone+marrow-derived+cells+reduces+atherosclerosis.">11-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 deficiency in bone marrow-derived cells reduces atherosclerosis.</a> FASEB J. 27 (4), 1519-1531 (2013).</li><li>Mackinnon, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+galectin-3+reduces+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E+deficient+mice.">Inhibition of galectin-3 reduces atherosclerosis in apolipoprotein E deficient mice.</a> Glycobiology. 23 (6), 654-663 (2013).</li><li>Kumar, A., Lindner, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remodeling+with+neointima+formation+in+the+mouse+carotid+artery+after+cessation+of+blood+flow.">Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 17, 2238-2244 (1997).</li><li>Walls, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+artefacts+in+optical+projection+tomography.">Correction of artefacts in optical projection tomography.</a> Phys Med Biol. 50, 4645-4665 (2005).</li><li>Walls, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+improvement+in+emission+optical+projection+tomography.">Resolution improvement in emission optical projection tomography.</a> Phys Med Biol. 52, 2775-2790 (2007).</li><li>Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+methods+for+three-dimensional+reconstructions+from+confocal+images:+I.+tissue+shrinking+and+axial+scaling.">Correction methods for three-dimensional reconstructions from confocal images: I. tissue shrinking and axial scaling.</a> Journal of Neuroscience Methods. 100, 135-143 (2000).</li><li>Alanentalo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tomographic+molecular+imaging+and+3D+quantification+within+adult+mouse+organs.">Tomographic molecular imaging and 3D quantification within adult mouse organs.</a> Nat Methods. 4, 31-33 (2007).</li></ol>

The authors have no competing financial interest.

3-boyutlu analiz değiştirilmesi veya hala arteriyel lezyon oluşumu soruşturmaların çoğunluğu temelini 2 boyutlu histolojik teknikler ekleyerek için büyük bir potansiyele sahiptir. İşte OPT (muhtemelen bu tekniği kullanarak başarılı bir şekilde analiz edilebilir en küçük gemiler temsil fare femoral arterler ile), küçük fare arterlerde gösterilir. Ayrıca, bununla birlikte, damar (ve lezyonlar), küçük ve orta büyüklükteki gemiler, insan da dahil olmak üzere diğer türlerden gelen ile kullanım için uygundur; Grubumuzun başarıyla tavşan aort lezyonları analiz tekniği kullandı (Bezuidenhout ark;. yayımlanmamış). OPT geleneksel histoloji ile karşılaştırıldığında daha hızlı analiz ve artan yapısal bilgiler vaat ve histolojik ve immünohistokimyasal hem tekniklerini kullanarak numunenin sonraki analizlere engellemediğini avantajına sahiptir. OPT kullanılarak üretilen görüntüler lezyon oluşumu siteleri gösteren anatomik detay verdive bu alanda lezyon boyutu. Bu araştırmalarda kullanılan arterler nedenle (muhtemelen rotasyon hiza, eksik takas, yansıma / kırılma agaroz köşelerinde ve odaklama sorunlardan kaynaklanan) eserler belirli bir dereceye kadar bozulur tekniği ve görüntü kalitesi için çözünürlük sınırı muhtemelen yakın . Buna rağmen, gerekli bilgileri (örneğin, damar duvarının tabakalar) ayırt edilebilir kalır ve bu nedenle, teknik, tek tek tabakaların ölçümü için son derece yararlıdır. Gerçekten de, resim örneğinde seçilen alanlarda kabın plaka taşıyan bölümlerde lezyon ve luminal miktarlarının yanı sıra, lezyonun kesit alanları ve lümen sağlamak için hızlı ve yeniden üretilebilir bir miktarı olabilir. Büyük (aort) ve orta ölçekli (femur, karotid, subklavyen) sıçangil arterler - bu, genellikle farelerde aterosklerotik lezyon oluşumu ve neotintimal analizi için kullanılan - başarılı idiBu yöntemi kullanarak analiz edildi. Nitekim biz şimdi aterosklerotik lezyon ve neointimal boyutuna farmakolojik girişimler ve genetik manipülasyon etkisini göstermek için OPT kullandık. Vasküler endotel endotelin B reseptörü seçici silme 15 vermedi oysa Örneğin, endotelin reseptör blokajı neointimal lezyon oluşumu değişmiş. Ateroskleroz eğilimli farelerde, genetik enzimlerin silinmesi 11β-HSD1 16 veya galektin 3 17 aterosklerotik lezyonların boyutunu azaltmak için gösterildi. Lezyon hacmi miktarının OPT bariz bir faydadır. Genellikle histolojik yöntemlerle elde edilen daha bir arter 4 toplam lezyon yükünün daha detaylı şekilde göstermektedir. Tüm lezyonu analiz eden bir geminin ayrık bölümleri analiz için seçilen zaman kaçınılmaz oluşacak seçim yanlılığı ve hatayı azaltır. Boyuna lezyon profillerinin üretimi OPT bir başka gücüYaralanma 13,16 farklı (Şekil 5) tarafından uyarılan lezyonlar açısından vurgulanmıştır. Örneğin, tam ligasyonu ve tel yerleştirme hem femero-popliteal çatallanma yakın neredeyse tam tıkanıklık kaynaklı. Tel yaralanması, arter ligasyonu ile uyarılmış lezyonlar hızlı küçülmüş ve yok ise, taranan bölümünün bütün uzunluğu boyunca uzanan, ancak, üretilen lezyonlar. Bu model, anjiyoplasti, kılavuz telin yerleştirilmesi kaynaklanan yaralanma büyük ölçüde uyumludur. Histolojik kesitler kullanılarak benzer sonuçlar üreten pahalı, zaman alıcı ve emek yoğun. OPT avantajları (biz rutin günde 20 gemileri taranmış var) ürettiği görüntülerin kalitesini ve göreceli hız ve basitlik bulunmaktadır. Görüntü kalitesi 3 boyutlu görüntüler oluşturmak için diğer yöntemlere üstün veya en azından kıyaslanabilir görünür ex vivo, y (örneğin MR ve BT mikro gibi)et OPT (çalışmalarımız / resim genelde 1-2sec oldu entegrasyon süresi) ve daha az pahalı kısa tarama süreleri gerektirmektedir. Örnek hazırlama birkaç gün boyunca uzanır, ancak çok az iş gücü, gemi gruplar halinde hazırlanabilir gerektirir ve verileri tek bir oturumda elde edilebilir. Sonuç olarak, çıktı yüksektir ve tarayıcı genişletilmiş kullanımını gerektirmez. Önemlisi, OPT tahribatsız doğası immünohistokimyasal inceleme için ilgi siteleri belirlemek için kullanılabileceği anlamına gelmektedir; Bu şekilde kesme miktarını azaltmak ve gerekli boyama. Bu yüksek çözünürlüklü ultrason gelişme arterlerde lezyonlar bu boyutta hacimsel ölçümü için alternatif bir yöntem sağlamak olasıdır, ancak yazarlar bu uygulamayı gösteren herhangi yayınların farkında değiller. Belki şaşırtıcı, OPT görüntü kalitesi (tabii ki, yalnızca küçük örnekler üzerinde yapılabilir) mikroskobik tekniklerine geridedir. Önerilen iyileştirmeler reconstructio içinVerilerin n görüntü kalitesi 19,20 gelecekteki gelişme izin vererek bu sınırlama hitap edebilir. Başka bir metodolojik endişe doku işleme örneğinin özelliklerini değiştirir olmasıdır. Örneğin temizleme ajanı lipofilik doğası, benzil alkol / benzil benzoat (BABB), tabii ki, dehidrasyon ve lipid temizleme adımları da bir özelliği vardır, her ne kadar önceden dehidrasyon (daralmasına neden olabilir iken, aterosklerotik lezyonlar lipid çıkarmak olasıdır parafin gömme için numune hazırlama). BABB (örneğin, gliserol 21), morfoloji sadece küçük değişiklikler olur hidrofilik temizleme maddeleri ile karşılaştırıldığında, bu araştırmada kullanılmıştır. Özellikle kilit hücrelerin 3 boyutlu düzenleme, izleme ve arteriyel yeniden rol oynayan faktörleri sinyalizasyon konusunda OPT daha da gelişmesi ve arıtma için çeşitli olasılıklar vardır. örneğin a, atardamar dokusu güçlü otofloresansı,Anatomik görüntülerin nesil n avantaj, ağartma 22 mevcut yöntemlerle söndürülür değildir ve RNA ve protein dağıtım modellerini değerlendirmek için floresan probların kullanımını kısıtlayabilir. İletim görüntüleme ile görüntülendi kolorimetrik probların kullanımı (örneğin β-galaktosidaz) bu sınırlamanın üstesinden gelebilir. Sonuç olarak, OPT fare intimanın lezyonların 3 boyutlu görüntüleme için büyük bir potansiyele sahiptir. Genel olarak emek yoğun ve etkili bir şekilde, toplam lezyon hacmini temsil etmez 2 boyutlu yöntemler üzerinde önemli bir ilerlemeyi temsil etmektedir. OPT nispeten hızlı, rahat ve tahribatsız. Görüntü analizi yeni gelişmeler daha da tekniğin gücünü ve yarar artırmak için söz veriyorum.

arteriyel lezyonların oluşumu kardiyovasküler hastalık 1 ile ilişkili yüksek morbidite ve mortalite merkezindedir. Lezyon oluşumu yaralanması 2 arteriyel dizginsiz bir inflamatuvar yanıt kaynaklandığı düşünülmektedir. Restenotik lezyonlar hızla (stent implantasyonu sonrası, örneğin), akut mekanik hasar takip geliştirmek oysa Aterosklerotik lezyonlar arter duvarına kronik zedelenme yanıt yavaş yavaş oluşturur. Arteriyel lezyonu gelişimine katkıda mekanizmaları genellikle ilgili genetik manipülasyonlar 1 ile kombinasyon halinde, uygun bir hayvan modelinde kullanılması ile önemli ölçüde açıklığa kavuşturulmuştur. Bu, in vivo ve ex vivo saptanması ve küçük hayvanların lezyon analizi için geliştirilmiş yöntemlere gelişimi ile değişmektedir, ancak lezyon boyutu ve bileşimi analizi, klasik (ex vivo 2 boyutlu dokusu üzerine yoğun bir şekilde bağlı olan &lt;sup&gt; 3). Arteriyel lezyonların Histolojik analiz emek yoğun, zaman alıcıdır ve 3-boyutlu yapının sınırlı bilgi içerir. Örneğin, lezyon yükü genellikle bir lezyonun enine kesit alanı ölçülerek değerlendirilir (ya rastgele seçilen alanlarda veya maksimum tıkanma yerinde). Bu genel lezyon yükünün eksik analizini sağlar. 3 boyutlu görüntüleme teknolojisi bu soruna olası bir çözüm sağlar ama şaşırtıcı birkaç uygun yaklaşım tarif edilmiştir tüm montaj. Bu manyetik rezonans görüntüleme (MRG) 4 ve X-ray bilgisayarlı tomografi (BT) 5 için tek foton konfokal mikroskopi için çok büyük ama çok küçük fare arterlerin boyutu ağırlıklı olarak bağlı olabilir. Farelerde aterosklerotik lezyonların çalışma ex vivo MR uygulanması ve mikro CT hatta nispeten büyük damarlarda sınırlı çözünürlük sunan göstermektedir. Bu eklendi, nispeten uzun kazanım süreleri gerekliverimi sınırlayan (ve tarama maliyetlerini artırmak) 4,6. (Örneğin optik koherens tomografi 3,7 ve fotoğraf-akustik tomografi 8 gibi) yeni optik görüntüleme yöntemlerinin geliştirilmesi fare arterlerde lezyonların görüntüleme geliştirmek için çok potansiyel sunmaktadır. Benzer bir potansiyel fare embriyoları analizini sağlamak için geliştirilen optik projeksiyon tomografi (OPT) ile gösterilir. OPT çapı 9 ~ 0,3-10 mm arasında değişen görüntü örneklerinde için tasarlanmıştır. İletim görüntüleme polikromatik görünür ışığa yarı saydam örnek opaklığını kaydeder ve anatomik yapıların tanımlanması için de kullanılabilir. Endojen belirli dalga boyunda (örneğin, kolajen, elastin) ve örnek eksojen fluorophores uyarma sonrasında ışık yayılmasının görüntülenmesi kayıt emisyonu. Farklı doku bileşenleri türü ve otofloresan türlerinin yoğunluk farklı olabilir, çünkü bu, aynı zamanda (anatomik bilgi sağlayabilirMevcut). Buna ek olarak, immüno veya gen ifadesi dağılımı, uygun floresan probları 10 kullanımı ile tespit edilebilir. Her iki görüntüleme modu (iletim veya emisyon), ışık örnek dönerken (0.9 ° &#39;lik artışlarla genellikle 400 görüntü) olarak iteratif görüntü yakalama izin vermek için bir şarj çiftli cihaza odaklanmıştır. Bunlar (örneğin koni algoritması kullanarak filtre arka projeksiyon () veya yinelemeli rekonstrüksiyonu gibi) standart tomografik rekonstrüksiyon yöntemleri ile hacminin hesaplanması için kullanılabilir. Daha önce Kirkby ve ark., 11&#39;de tarif edildiği gibi bu, video, aterosklerotik ve neointimal lezyon, hızlı bir şekilde ölçülebilir ve uygun maliyetli 3 boyutlu analiz için tercih bizim yeni bir uygulamasını göstermektedir. tekniği üç yaygın olarak kullanılan model lezyon büyüklüğü ölçülmesi için uygun olduğu gösterilmiştir: (i) femoral arter tel yaralanması; Apolipoprotei (ii) femoral arter bağlanması, ve (iii) diyetin neden olduğu aterosklerozunn E eksikliği (apo - / -) fareler.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="691">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Name of Reagent/Material</td>
			<td style="width:180px;">Company</td>
			<td style="width:137px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:180px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Operating Microscope</td>
			<td style="width:180px;">Zeiss, Germany</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;">OPMI Pico i</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Anaesthetic Machine</td>
			<td style="width:180px;">Vet Tech, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Fluovac</td>
			<td style="width:180px;">Harvard Apparatus UK</td>
			<td style="width:137px;">340387</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Fluosorber</td>
			<td style="width:180px;">Harvard Apparatus UK</td>
			<td style="width:137px;">340415</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Bead Steriliser</td>
			<td style="width:180px;">Fine Science Tools, UK</td>
			<td style="width:137px;">1800-45</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Heated Mat</td>
			<td style="width:180px;">Fine Sceince Tools, UK</td>
			<td style="width:137px;">21061-10</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Balance</td>
			<td style="width:180px;">Mettler Toledo</td>
			<td style="width:137px;">MS1602S</td>
			<td style="width:180px;">PB1502 or equivalent</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Sutures</td>
			<td style="width:180px;">Ethicon, UK</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:180px;">5/0 Mersilk</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Guidewire</td>
			<td style="width:180px;">Cook Inc, USA</td>
			<td style="width:137px;">C-PMS-251</td>
			<td style="width:180px;">0.014&#8221;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Suture Silk</td>
			<td style="width:180px;">Fine Science Tools, UK</td>
			<td style="width:137px;">18020-60</td>
			<td style="width:180px;">6/0 Mersilk</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="169" rowspan="6" style="height:169px;width:195px;">Surgical Tools</td>
			<td rowspan="6" style="width:180px;">Fine Science Tools, UK</td>
			<td style="width:137px;">14058-09</td>
			<td style="width:180px;">Toughcut Iris scissors</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:137px;">15000-01</td>
			<td style="width:180px;">Cohan-Vannas Spring Scissors</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:137px;">11251-35</td>
			<td style="width:180px;">Dumont #5/45 Forceps</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:137px;">11370-31</td>
			<td style="width:180px;">Moria Iris Forceps</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:137px;">13008-12</td>
			<td style="width:180px;">Halsted-Mosquito Haemostat</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:137px;">18050-35</td>
			<td style="width:180px;">Bulldog clips</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Bioptonics 3001 Tomograph&#160;</td>
			<td style="width:180px;">Bioptonics, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Magnetic OPT Mount</td>
			<td style="width:180px;">Bioptonics, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Computer</td>
			<td style="width:180px;">Dell Inc, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Peristaltic pump</td>
			<td style="width:180px;">Gilson</td>
			<td style="width:137px;">F117606</td>
			<td style="width:180px;">Minipuls 3</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">DataViewer software&#160;</td>
			<td style="width:180px;">Skyscan, Belgium</td>
			<td style="width:137px;">v.1.4.4</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">NRecon software&#160;</td>
			<td style="width:180px;">Skyscan, Belgium</td>
			<td style="width:137px;">v.1.6.8</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">CTan software</td>
			<td style="width:180px;">Skyscan, Belgium</td>
			<td style="width:137px;">v.1.12</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:195px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:195px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:180px;">Merial Animal Health Ltd, UK</td>
			<td style="width:137px;">AP/Drugs/220/96</td>
			<td style="width:180px;">100% Inhalation vapour, liquid</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Medical Oxygen</td>
			<td style="width:180px;">BOC Medical, UK</td>
			<td style="width:137px;">UN1072</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:195px;">Vetergesic</td>
			<td style="width:180px;">Alstoe Animal Health Ltd, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;">0.3mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:195px;">1% Lignocaine</td>
			<td style="width:180px;">Hamlen Pharmaceuticals, UK</td>
			<td style="width:137px;">LD1010</td>
			<td style="width:180px;">10ml ampoule</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">EMLA Cream</td>
			<td style="width:180px;">Astra Zeneca, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:195px;">Sodium Pentobarbital</td>
			<td style="width:180px;">Ceva Animal Health Ltd, UK</td>
			<td style="width:137px;">N/A</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Western Diet</td>
			<td style="width:180px;">Research Diets, USA</td>
			<td style="width:137px;">D12079B</td>
			<td style="width:180px;">0.2% cholesterol</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:180px;">Sigma UK</td>
			<td style="width:137px;">P4417</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Heparin (Mucous)</td>
			<td style="width:180px;">Leo Laboratories, UK</td>
			<td style="width:137px;">PL0043/003GR</td>
			<td style="width:180px;">25, 0000 Units</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Neutral Buffered Formalin</td>
			<td style="width:180px;">Sigma, UK</td>
			<td style="width:137px;">HT501128</td>
			<td style="width:180px;">10%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Ethanol</td>
			<td style="width:180px;">VWR BDH Prolabo, UK</td>
			<td style="width:137px;">20821.33</td>
			<td style="width:180px;">Absolute AnalaR&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Agarose</td>
			<td style="width:180px;">Invitrogen, UK</td>
			<td style="width:137px;">16020050</td>
			<td style="width:180px;">Low melting point</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Filter Paper</td>
			<td style="width:180px;">GE Healthcare, UK</td>
			<td style="width:137px;">113v</td>
			<td style="width:180px;">Whatman</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Cyanoacrylate adhesive</td>
			<td style="width:180px;">Henkel, UK</td>
			<td style="width:137px;">4304</td>
			<td style="width:180px;">Loctite</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Benzyl alcohol</td>
			<td style="width:180px;">Sigma, UK</td>
			<td style="width:137px;">B6630</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Benzyl benzoate</td>
			<td style="width:180px;">Sigma, UK</td>
			<td style="width:137px;">402834</td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:195px;">Methanol</td>
			<td style="width:180px;">VWR BDH Prolabo, UK</td>
			<td style="width:137px;">20856.296</td>
			<td style="width:180px;">100%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation and 3-dimensional quantitation of arterial lesions in mice using optical projection tomography

uygun hayvan modellerinde üretim ve vasküler lezyonların analizi lezyon oluşumu patogenezi ve yeni tedavilerin eylem hakkında önemli bilgiler üreten, kardiyovasküler hastalık araştırmalarına bir köşe taşıdır. Ateroskleroz eğilimli farelerde lezyon indüksiyon cerrahi yöntemler ve diyet modifikasyonu kullanımı dramatik hastalık gelişimi ve yeni tedavilerin potansiyeline katkıda bulunan mekanizmaların anlaşılmasını geliştirdi. Klasik, lezyonların analizi 2 boyutlu histolojik teknikler kullanılarak ex vivo yapılır. Bu makalede, arteryel lezyonların 3 boyutlu kantitatif optik yansıtma tomografi (OPT) uygulanmasını tarif etmektedir. Bu teknik, tahribatsız olarak, standart histolojik ve immünohistokimyasal analizler bir yardımcı olarak kullanılabilir. Neointimal lezyonlar fare femur sanat tel yerleştirilmesi veya ligasyonu ile uyarılan edildiAterosklerotik lezyonların iken ery apo-eksikliği olan farelerde bir aterojenik diyet uygulaması ile elde edildi. Lezyonlar tamamlayıcı histolojik ve immünohistokimyasal analizi ile takip autofluorescent emisyonunun OPT görüntüleme kullanılarak incelenmiştir. Altta yatan vasküler duvar açıkça ayırt lezyonlar OPT. Lezyon boyutu lezyon hacmi ve maksimum enine kesit alanına hesaplanmasına imkan veren, planimetrisi kullanılarak 2-boyutlu bölümler içinde hesaplanmıştır. OPT kullanılarak oluşturulan veriler tekniğin doğruluğunu ve analiz geleneksel yöntemlerle (yerine alternatif daha) bir tamamlayıcısı olarak potansiyel teyit histoloji kullanılarak elde edilen ölçümler ile uyumlu idi. Bu çalışma aterosklerotik lezyonların ve neointimal görüntülenmesinde OPT potansiyelini gösteriyor. Bu vasküler yeniden rutin 3 boyutlu ölçümü için hızlı, çok gerekli ex vivo tekniği sağlar.

Sağlıklı (lezyonsuz) fare femoral arterlerin ön tarama (n = 5) iletim görüntüleme yararlı görüntüleri vermedi gösterdi. Yayılan sinyalin hiçbir absorbans / saçılma olduğu gibi bu iletim imaging.However için çok şeffaf (yerine çok opak) olma temizlendi arterlerin bir sonucuydu, bu emisyon görüntüleme için faydalıdır. Bunun aksine, femoral arter (14 elastin için 410 nm eksitasyon zirve ile tutarlıdır) 405-445 nm&#39;de uyarma sonrasında büyük sinyal ile emisyon kanalına güçlü autofluoresce. Bu görüntülerden yeniden 2 boyutlu dilim açıkça lümenin ve adventisyanın ve lümen medya ayırt. Murin femoral arter 28 gün telsiz sonra (n = 6) ya da ligasyonu (n = 5) neden olduğu hasarı neointimal koyulaştırıcı olmayan tomografik salım çıkıntılar belirgindi (Şekil 3A) hasat edildi. Yeniden 2-DIMENS olarakional dilimleri, eş neointimal lezyonlar zayıf emisyon (Şekil 3B ve Şekil S1) tarafından medya ayırt edilebilir. Aterosklerotik farelerin OPT emisyon arkus tüm montaj örnekleri görüntüleri ve ana dalları (n = 8) ön görülen anatomik dağılım ile özdeşleşmiş lezyonlar (örn., Aort kavsi, brakiyosefalik arter ve kökenleri daha az eğrilik sol karotis ve sol subklavian arterlerin (Şekil 4A). kesit görüntüleri bu (Şekil 4B, S2 ve S3 Rakamlar), tipik olarak eksantrik lezyonlar ve kolayca medya ve lümen ayırt olduğunu göstermiştir. OPT aşağıdaki histolojik analiz için İşleme arterler başarıyla histolojik (Amerika Birleşik Devletleri Trichrome, Picr kullanılarak boyanan kesitler ile OPT tahribatsız doğa doğruladıosirius kırmızı) ve immünohistokimyasal (α-SMA, Mac-2) teknikleri (Şekil 3C ve 4C). OPT ile lezyon boyutu ölçümü aynı arter 11 alınan histolojik kesitlerin görüntü analizi kullanılarak elde edilen ölçümler ile uyumlu olduğu gösterilmiştir. Telsiz (R 2 = 0.92) ve ligasyon kaynaklı (R 2 = 0.89) neointimal lezyonlar ve aterosklerotik plakların (R = 0.85 2) için OPT ve lineer regresyon ile yakından ilişkili histoloji ile elde edilen lezyon alanının planimetrik ölçümleri. OPT önemli bir faydası 3 boyutlu analizini sağlamak için yeteneğidir. Bu teknikle lezyonların hacimsel ölçümü geliştirerek, telsiz lezyon hacimleri kaydetmek başardık (0,1100 ± 0,0091 mm, 3, n = 6) ve ligasyon-yaralı femoral arter (0,0200 ± 0.0089 mm 3, n = 5) ve aynı zamanda aterosklerotik brakiyosefalik arterlerde (0.180 ± 0.018 mm 3; n = 8). Ölçümler son derece tekrarlanabilir (sırasıyla varyasyon% 5,4 katsayıları,% 11.4 ve% 4.8, n = 4) olan lezyonun her türlü. Tel hasarlı damarların neointimal lezyon önceki açtığı hasar daha yüksek derecede uyumlu ligasyon ile üretilen, daha büyük (p &lt;0.0001) vardı. oluşturulan veriler de (Şekiller bkz S1 - S3) lezyon profillerinin (Şekil 5) olarak ifade edilir ve dinamik, nitel değerlendirme için render olabilir. Bu yaklaşım açıkça farklı yaralanma prosedürlerine yanıt lezyon oluşumu kapsamını gösterdi ve yaralı damarlarda lezyon oluşumu düzensiz dağılımı vurguladı. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/50627/50627fig1.jpg" /> Şekil 1: fare femoral arter lezyon oluşumunu başlatmak için Yöntemler &amp; #.160; popliteal arter bir arteriyotomi vasıtasıyla femoral artere kılavuz tel, bir anjiyoplasti (A) retrograd yerleştirme hasarı ve endotelyumun çıkarılması germek için yanıt olarak lezyon oluşumunu teşvik eder. Kan akışı, yaralı damar bölgesinden bölümü üzerine yeniden kurulur. Intraluminal streç, soyulma ya da kan akışına kesinti olmadan (B) neointimal proliferasyon femoral veya femoral arter bifurkasyonunun hemen distalinde popliteal arter ya bağlanarak tarafından uyarılan edilebilir. (C) daha şiddetli olmayan denuding yaralanma / çoğalması tepkisi femoral arter dal noktası üzerinde femoral ve popliteal arterler hem bağlanarak tarafından uyarılan edilebilir. Bu teknik aynı zamanda femoral arterin distal kısmına kan akışını engeller. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/50627/50627fig2.jpg" /> Şekil 2:. 12 hafta arkus ve ana dallarında lezyon birikimi karakteristik desen geliştirmek için fare arkus içinde aterom karakteristik çökelme eğilimli Ateroskleroz (Apolipopotein E yoksun fareler), yüksek kolesterol batı diyet ile beslenen. Gösterildiği gibi, lezyonlar aort arkı, brakiyosefalik arterde, bir mikroskop altında brüt muayene ile, görünür (oklar), ve sol karotis arter ve sol subklavyen arter deliklerinin içinde. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/50627/50627fig3.jpg" /> Şekil 3:. Sol femoral arter ligasyonu aşağıdaki Lezyon oluşumu (netlik artırmak için ters - karanlık bölgeler daha güçlü emisyon karşılık) (A) Sigara tomografik floresans emisyon görüntüleri intimal kalınlaşma tanımlanmasına izin (kırmızı arrowhereklamlar). (B) Farklı vasküler bölgeler ve lümen tomografik rekonstrüksiyonlarında ayırt edilebilir. (C) histolojik analizi (Amerika Birleşik Devletleri trichrome) OPT kullanılarak elde görüntüleri ile açık benzerlik vurguluyor. (AC) Ölçek çubukları 200 mm&#39;dir. Kirkby ark. (AC) 11 Ölçek çubukları uyarlanmıştır 200 mikron bulunmaktadır. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/50627/50627fig4.jpg" /> Şekil 4:. Aortik arkın (koyu bölgeler, böylece berraklığını geliştirmek, daha güçlü bir emisyon göstermektedir, böylece ters) ateroskleroz eğilimli farelerin aortik arkında ateromanın Görüntüleme (A) ateromlar (kırmızı ok başları), hali hazırda olmayan tomografi belirgindir siteleri (Şekil 2) ışık mikroskobu altında incelenmesi ile ateroma-yatak olarak öngördü. (B) dağılım Bu model tomografik cr teyit edilmiştiross-kesitler. (C) histolojik (Amerika Birleşik Devletleri trichrome) boyama lezyon analizi, geleneksel yaklaşımlara OPT tamamlayıcı doğasını birkaç farklı antikorları vurgulayan kullanarak yakın tomografik kesitler ile benzerlik ve immunohistokimyasal gösterir. (A-B) &#39;de Ölçek çubukları 1 mm; (C) &#39;deki ölçek çizgisi 250 mm. RSA, sağ subklavian arter; RCA, sağ karotid arter; LCA, sol karotid arter; LSA, subklavian arter sol; BCA, brakiyosefalik arter; AAo, asendan; Dao, inen aorta. Kirkby ark uyarlanmıştır. 11 <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/50627/50627fig5.jpg" /> Şekil 5: lezyon ve lümen profillerinin analizi arteriyel yaralanma farklı yöntemler cevaben neointimal çoğalma ölçüde değişen belirtir Optik projeksiyon tomografi lezyonu izin verir ve lümen kesit ÖLÇME çapraz.ts femoral arter boyunca mesafeye karşı çizilecek. Bu açık bir şekilde, toplam bağlanma (C), ligasyon yerinde tam t üretir ancak lezyon arter boyunca kadar uzanmaz, oysa bir zarar görmemiş arter (A), kısmi ligasyonu (B) ile karşılaştırıldığında, küçük, nispeten ayrı lezyonlar, göstermektedir . Lumen kablo hasarı (D) hemen hemen tamamen numunenin uzak kısmını emen ve arter taranmış bölümünün bütün uzunluğu boyunca uzanan bir lezyon verir. Kirkby ark uyarlanmıştır. 11 Şekil S1. Ligasyon yaralanmasını izleyen bir fare femoral arterden alınan kesit görüntüleri Hareketli rekonstrüksiyonu. Animasyonlu resim Bu tip hem kalitatif ve kantitatif analiz için yararlıdır. Animasyon arterin distal bölümlerine proksimal bir tıkayıcı neointimaya kademeli gelişimini hareket ettikçe, disklumen ve ortamdan ernible, hali hazırda belirgindir. Yan dallar kolaylıkla tespit edilebilir ve belirgin lümen tıkanıklığı ve boyutu lezyon arttıkça arterin dışa biçimlenme vardır. Ligasyon site ulaşıldığında geminin tam tıkanma meydana gelir. Kirkby ark uyarlanmıştır. 11 .. (- Ilk göründüğünde sol) ve azalan (sağ) aort Şekil S2, bir ateroskleroz eğilimli fare aort arkın kesit görüntüleri Hareketli yeniden canlandırma yükselen kesitleri ile başlar. Küçük lezyonlar arkus yönünde tarama hamle olarak çıkan aorta görünür. Görüntüler daha sonra brakiyosefalik (solda), sol karotis (orta) ve sol subklavian (sağ) arterlerin ağır lezyonlu ostiumları göstermek için kemer dolaşmak. Tarama Bu dalların boyunca distal hamle olarak lezyonlar yavaş yavaş subc ilk azaltmak ve yoklavian arter, daha sonra karotid ve son olarak brakiyosefalik arter. İlginçtir ki, bu geminin gibi akış bölücü üzerine brakiyosefalik arter hamlede lezyon sağ karotis ve sağ subklavian arterlerin ayrılır. Kirkby ark uyarlanmıştır. 11 Şekil S3. Animasyon, bir ateroskleroz eğilimli fare aort arkın hacim görüntü render. Optik projeksiyon tomografi bir apolipoprotein E eksik fare aortik arkında lezyon dağılımını gösteren bu durumda, 3 boyutlu görüntülerin nesil verir. (A) Aterom (sol karotis ve subklavian arterlerin çıkımının ve arkus daha az eğrilik, brakiyosefalik arter boyunca) beklenen siteler mevcuttur. Orijinal görüntünün üzerine bindirilmiş zaman kesitler taşıyan (B) Segmentasyon ve (kırmızı ile gösterilen) lezyon oluşturma plakların dağılımını vurguluyor.Kirkby ark uyarlanmıştır. 11

Watch this Scientific Journal Video about Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography at JoVE.com

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

Ex vivo analysis of arterial lesions from animal models of cardiovascular disease classically relies on histological and immunohistochemical techniques. These provide 2-dimensional measurements in 3-dimensional lesions. This manuscript describes the generation of arterial lesions for quantitative analysis in 3-dimensions using optical projection tomography.

Üretim ve Farelerde arteriyel Lezyonlarının 3-Boyutlu kantitasyonu Optik Projeksiyon Tomografi ile

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

generation-3-dimensional-quantitation-arterial-lesions-mice-using

Research

JoVE Journal

Medicine

9.7K Görüntüleme.  The Queen's Medical Research Institute. Ex vivo analysis of arterial lesions from animal models of cardiovascular disease classically relies on histological and immunohistochemical techniques. These provide 2-dimensional measurements in 3-dimensional lesions. This manuscript describes the generation of arterial lesions for quantitative analysis in 3-dimensions using optical projection tomography.

Video: Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

Doppler Optical Coherence Tomography of Retinal Circulation

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double circular scan (CDCS) that scans around the optic nerve head at 3.40 mm and 3.75 mm diameters. The double concentric circles are performed 6 times consecutively over 2 sec. The CDCS scan is saved with Doppler shift information from which flow can be calculated. The standard clinical protocol calls for 3 CDCS scans made with the OCT beam passing through the superonasal edge of the pupil and 3 CDCS scan through the inferonal pupil. This double-angle protocol ensures that acceptable Doppler angle is obtained on each retinal branch vessel in at least 1 scan. The CDCS scan data, a 3-dimensional volumetric OCT scan of the optic disc scan, and a color photograph of the optic disc are used together to obtain retinal blood flow measurement on an eye. We have developed a blood flow measurement software called "Doppler optical coherence tomography of retinal circulation" (DOCTORC). This semi-automated software is used to measure total retinal blood flow, vessel cross section area, and average blood velocity. The flow of each vessel is calculated from the Doppler shift in the vessel cross-sectional area and the Doppler angle between the vessel and the OCT beam. Total retinal blood flow measurement is summed from the veins around the optic disc. The results obtained at our Doppler OCT reading center showed good reproducibility between graders and methods (&lt;10%). Total retinal blood flow could be useful in the management of glaucoma, other retinal diseases, and retinal diseases. In glaucoma patients, OCT retinal blood flow measurement was highly correlated with visual field loss (R2&gt;0.57 with visual field pattern deviation). Doppler OCT is a new method to perform rapid, noncontact, and repeatable measurement of total retinal blood flow using widely available Fourier-domain OCT instrumentation. This new technology may improve the practicality of making these measurements in clinical studies and routine clinical practice.

Total retinal blood flow is measured by Doppler optical coherence tomography and semi-automated grading software.

Retina Sirkülasyon Doppler Optik Koherens Tomografi

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double ...

Tıp

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy tissue is the root cause of disease and death. For other cancers (e.g. breast, lung, etc.), it is the process of metastasis, in which tumor cells move from a primary tumor mass, colonize distal sites and ultimately contribute to organ failure, that eventually leads to morbidity and mortality 3. It has been estimated that invasion and metastasis are responsible for 90&#37; of cancer deaths 4. As a result, there has been intense interest in identifying the molecular processes and critical protein mediators of invasion and metastasis for the purposes of improving diagnosis and treatment 5.
A challenge for cancer scientists is to develop invasion assays that sufficiently resemble the in vivo situation to enable accurate disease modeling 6. Two-dimensional cell motility assays are only informative about one aspect of invasion and do not take into account extracellular matrix (ECM) protein remodeling which is also a critical element. Recently, research has refined our understanding of tumor cell invasion and revealed that individual cells may move by elongated or rounded modes 7. In addition, there has been greater appreciation of the contribution of collective invasion, in which cells invade in strands, sheets and clusters, particularly in highly differentiated tumors that maintain epithelial characteristics, to the spread of cancer 8.
We present a refined method 9 for examining the contributions of candidate proteins to collective invasion 10. In particular, by engineering separate pools of cells to express different fluorescent proteins, it is possible to molecularly dissect the activities and proteins required in leading cells versus those required in following cells. The use of RNAi provides the molecular tool to experimentally disassemble the processes involved in individual cell invasion as well as in different positions of collective invasion. In this procedure, mixtures of fluorescently-labeled cells are plated on the bottom of a Transwell insert previously filled with Matrigel ECM protein, then allowed to invade "upwards" through the filter and into the Matrigel. Reconstruction of z-series image stacks, obtained by confocal imaging, into three-dimensional representations allows for visualization of collectively invading strands and analysis of the representation of fluorescently-labeled cells in leading versus following positions.

Models of tumor cell invasion into three-dimensional extracellular matrix better reflect the in vivo situation than two-dimensional motility assays. Using matrix invasion assays combined with confocal imaging of fluorescently-labeled cells, detailed information on invasion modes and the distinct contributions of leading versus following cells can be obtained.

Modelleme ve Görüntüleme 3-Boyutlu Toplu Hücre Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

In organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is indispensable for proper physiological function, and the formation and maintenance of these structures is a highly regulated process. The analysis of these complex, 3-dimensional structures has greatly depended on either 2-dimensional examination in section or on dye injection studies. These techniques, however, are not able to provide a complete and quantifiable representation of the ductal or vascular structures they are intended to elucidate. Alternatively, the nature of 3-dimensional plastic resin casts generates a permanent snapshot of the system and is a novel and widely useful technique for visualizing and quantifying 3-dimensional structures and networks.
A crucial advantage of the resin casting system is the ability to determine the intact and connected, or communicating, structure of a blood vessel or duct. The structure of vascular and ductal networks are crucial for organ function, and this technique has the potential to aid study of vascular and ductal networks in several ways. Resin casting may be used to analyze normal morphology and functional architecture of a luminal structure, identify developmental morphogenetic changes, and uncover morphological differences in tissue architecture between normal and disease states. Previous work has utilized resin casting to study, for example, architectural and functional defects within the mouse intrahepatic bile duct system that were not reflected in 2-dimensional analysis of the structure1,2, alterations in brain vasculature of a Alzheimer's disease mouse model3, portal vein abnormalities in portal hypertensive and cirrhotic mice4, developmental steps in rat lymphatic maturation between immature and adult lungs5, immediate microvascular changes in the rat liver, pancreas, and kidney in response in to chemical injury6.
Here we present a method of generating a 3-dimensional resin cast of a mouse vascular or ductal network, focusing specifically on the portal vein and intrahepatic bile duct. These casts can be visualized by clearing or macerating the tissue and can then be analyzed. This technique can be applied to virtually any vascular or ductal system and would be directly applicable to any study inquiring into the development, function, maintenance, or injury of a 3-dimensional ductal or vascular structure.

A method of visualizing and quantifying the 3-dimensional structure of mouse hepatic portal vein or intrahepatic bile duct is described. This resin cast technique can also be applied to other ductal or vascular systems and allows for in situ visualization or quantification of a system's intact communicating architecture.

3-Boyutlu Reçine Döküm ve Fare Portal Ven veya intrahepatik safra Sisteminin Görüntüleme

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of &beta;-cell Mass Distribution in Diabetes Research

By adapting OPT to include the capability of imaging in the near infrared (NIR) spectrum, we here illustrate the possibility to image larger bodies of pancreatic tissue, such as the rat pancreas, and to increase the number of channels (cell types) that may be studied in a single specimen. We further describe the implementation of a number of computational tools that provide: 1/ accurate positioning of a specimen's (in our case the pancreas) centre of mass (COM) at the axis of rotation (AR)2; 2/ improved algorithms for post-alignment tuning which prevents geometric distortions during the tomographic reconstruction2 and 3/ a protocol for intensity equalization to increase signal to noise ratios in OPT-based BCM determinations3. In addition, we describe a sample holder that minimizes the risk for unintentional movements of the specimen during image acquisition. Together, these protocols enable assessments of BCM distribution and other features, to be performed throughout the volume of intact pancreata or other organs (e.g. in studies of islet transplantation), with a resolution down to the level of individual islets of Langerhans.

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of &amp;#946;-cell Mass Distribution in Diabetes Research

We describe the adaptation of optical projection tomography (OPT)1 to imaging in the near infrared spectrum, and the implementation of a number of computational tools. These protocols enable assessments of pancreatic &beta;-cell mass (BCM) in larger specimens, increase the multichannel capacity of the technique and increase the quality of OPT data.

Diyabet Araştırma β-hücre Kütle Dağılımı değerlendirmelerinde Kızılötesi Optik Projeksiyon Tomografi civarında

By adapting OPT to include the capability of imaging in the near infrared (NIR) spectrum, we here illustrate the possibility to image larger bodies of ...

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real time images with a 15 &#181;m axial resolution at an effective tissue penetration of 2-3 mm. Within the OCT images the loss of signal intensity per millimeter of tissue penetration, the attenuation coefficient, is calculated. The attenuation coefficient is a tissue specific property, providing a quantitative parameter for tissue differentiation. 
Until now, renal mass treatment decisions have been made primarily on the basis of MRI and CT imaging characteristics, age and comorbidity. However these parameters and diagnostic methods lack the finesse to truly detect the malignant potential of a renal mass. A successful core biopsy or fine needle aspiration provides objective tumor differentiation with both sensitivity and specificity in the range of 95-100%. However, a non-diagnostic rate of 10-20% overall, and even up to 30% in SRMs, is to be expected, delaying the diagnostic process due to the frequent necessity for additional biopsy procedures. 
We aim to develop OCT into an optical biopsy, providing real-time imaging combined with on-the-spot tumor differentiation. This publication provides a detailed step-by-step approach for percutaneous, needle based, OCT of renal masses.

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

Optical coherence tomography (OCT) is a high resolution imaging technique that allows analysis of tissue specific optical properties providing the means for tissue differentiation. We developed needle based OCT, providing real-time imaging combined with on-the-spot tumor differentiation. This publication describes a method for percutaneous, needle based OCT of renal masses.

Vivo, Perkütan, İğne Tabanlı, Böbrek Kitlelerin Optik Koherens Tomografi

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real ...

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the subretinal space, and to evaluate toxicity and efficacy in vivo. HR-SD-OCT uses near infrared light (800-880 nm) and has optics specifically designed for the unique optics of the mouse eye with sub-2-micron axial resolution. Transgenic mouse models of outer retinal (photoreceptor) degeneration and controls were imaged to assess the disease progression. Pulled glass microneedles were used to deliver sub retinal injections of adeno-associated virus (AAV) or nanoparticles (NP) via a trans-scleral and trans-choroidal approach. Careful positioning of the needle into the subretinal space was required prior to a calibrated pressure injection, which delivers fluid into the sub retinal space. Real time subretinal surgery was conducted on our retinal imaging system (RIS). HR-SD-OCT demonstrated progressive uniform retinal degeneration due to expression of a toxic mutant human mutant rhodopsin (P347S) (RHOP347S) transgene in mice. HR-SD-OCT allows rigorous quantification of all the retinal layers. Outer nuclear layer (ONL) thickness and photoreceptor outer segment length (OSL) measurements correlate with photoreceptor vitality, degeneration, or rescue. The RIS delivery system allows real-time visualization of subretinal injections in neonatal (~P10-14) or adult mice, and HR-SD-OCT immediately determines success of delivery and maps areal extent. HR-SD-OCT is a powerful tool that can evaluate the success of subretinal surgery in mice, in addition to measuring vitality of photoreceptors in vivo. HR-SD-OCT can also be used to identify uniform animal cohorts to evaluate the extent of retinal degeneration, toxicity, and therapeutic rescue in preclinical gene therapy research studies.

Here we demonstrate a novel approach to using high resolution spectral-domain optical coherence tomography (HR-SD-OCT) to assist delivery of gene therapy agents into the subretinal space, assess its areal coverage, and characterize photoreceptor vitality.

Ultrahigh çözünürlük fare optik koherens tomografi göz içi enjeksiyon Retina gen terapisi araştırma yardımcı olmak için

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the present protocol, mice expressing green fluorescent protein (gfp) under the promoter of Cx3cr1 (BALB/c-Cx3cr1gfp/gfp) were used to image microglia cells in vivo in the retina. Microglia are resident macrophages of the retina and have been implicated in several retinal diseases1,2,3,4,5,6. This protocol provides a detailed approach for generation of retinal B-scans, with SD-OCT, and imaging of microglia cell distribution in Cx3cr1gfp/gfp mice with SLO in vivo, using an ophthalmic imaging platform system. The protocol can be used in several reporter mouse lines. However, there are some limitations to the protocol presented here. First, both SLO and SD-OCT, when used in the high-resolution mode, collect data with high axial resolution but the lateral resolution is lower (3.5 &#181;m and 6 &#181;m, respectively). Moreover, the focus and saturation level in SLO is highly dependent on parameter selection and correct alignment of the eye. Additionally, using devices designed for human patients in mice is challenging due to the higher total optical power of the mouse eye compared to the human eye; this can lead to lateral magnification inaccuracies7, which are also dependent on the magnification by the mouse lens among others. However, despite that the axial scan position is dependent upon lateral magnification, the axial SD-OCT measurements are accurate8.

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

This protocol describes how high-resolution imaging techniques such as spectral domain optical coherence tomography and scanning laser ophthalmoscopy can be utilized in small rodents, using an ophthalmic imaging platform system, to obtain information on retinal thickness and microglial cell distribution, respectively.

Vivo Tayf alanlı optik Koherens tomografi ve lazer Ophthalmoscopy tarama Cx3cr1gfp/gfp muhabir farelerin görüntüleme

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the ...

Ablation of Ischemic Ventricular Tachycardia Using a Multipolar Catheter and 3-dimensional Mapping System for High-density Electro-anatomical Reconstruction

Ventricular tachycardia (VT) in patients with ischemic cardiomyopathy mainly results from endocardial scars after myocardial infarction; those scars represent zones of slow conduction that allow the occurrence and maintenance of reentrant circuits. Catheter ablation enables substrate modification of those low voltage areas and thus can help to alter the scar tissue in such a way that arrhythmias cannot appear anymore. Hospitalizations of concerned patients decrease, quality of life and outcome rise. Consequently, VT ablation represents a growing field in electrophysiology, especially for patients with endocardial scars in ischemic heart disease after myocardial infarction. However, ablation of ventricular tachycardia remains one of the most challenging procedures in the electrophysiology lab. Precise scar definition and localization of abnormal potentials are critical for ablation success. The following manuscript describes the use of a multipolar mapping catheter and 3-dimensional (3D) mapping system to create a high density electro-anatomical map of the left ventricle including a precise scar representation as well as mapping of fractionated and late potentials in order to allow a highly accurate substrate modification.

With the following protocol, we provide an approach to Ventricular Tachycardia (VT) ablation using high density mapping with a multipolar catheter and 3D mapping system enhancing the success of the procedure.

İskemik ventriküler taşikardi Multipolar kateter ve 3 boyutlu haritalama sistemi yüksek yoğunluklu elektro-anatomik imar için kullanılarak ablasyon

Ventricular tachycardia (VT) in patients with ischemic cardiomyopathy mainly results from endocardial scars after myocardial infarction; those scars ...

Quantitative Analysis of Cellular Composition in Advanced Atherosclerotic Lesions of Smooth Muscle Cell Lineage-Tracing Mice

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel interventions have remained elusive. This is likely due, in part, to a reliance on preclinical prevention models investigating the effects of genetic manipulations or pharmacological treatments on atherosclerosis development rather than the established disease. Also, results of these studies are often confounding because of the use of superficial lesion analyses and a lack of characterization of lesion cell populations. To help overcome these translational hurdles, we propose an increased reliance on intervention models that employ investigation of changes in cellular composition at a single cell level by immunofluorescent staining and confocal microscopy. To this end, we describe a protocol for testing a putative therapeutic agent in a murine intervention model including a systematic approach for animal dissection, embedding, sectioning, staining, and quantification of brachiocephalic artery lesions. In addition, due to the phenotypic diversity of cells within late-stage atherosclerotic lesions, we describe the importance of using cell-specific, inducible lineage tracing mouse systems and how this can be leveraged for unbiased characterization of atherosclerotic lesion cell populations. Together, these strategies may assist vascular biologists to more accurately model therapeutic interventions and analyze atherosclerotic disease and will hopefully translate into a higher rate of success in clinical trials.

We propose a standardized protocol to characterize the cellular composition of late-stage murine atherosclerotic lesions including systematic methods of animal dissection, tissue embedding, sectioning, staining, and analysis of brachiocephalic arteries from atheroprone smooth muscle cell lineage tracing mice.

Kantitatif analiz düz kas hücre soy izleme farelerin gelişmiş aterosklerotik lezyonları içinde hücresel kompozisyon

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...

High-Throughput Analysis of Optical Mapping Data Using ElectroMap

Optical mapping is an established technique for high spatio-temporal resolution study of cardiac electrophysiology in multi-cellular preparations. Here we present, in a step-by-step guide, the use of ElectroMap for analysis, quantification, and mapping of high-resolution voltage and calcium datasets acquired by optical mapping. ElectroMap analysis options cover a wide variety of key electrophysiological parameters, and the graphical user interface allows straightforward modification of pre-processing and parameter definitions, making ElectroMap applicable to a wide range of experimental models. We show how built-in pacing frequency detection and signal segmentation allows high-throughput analysis of entire experimental recordings, acute responses, and single beat-to-beat variability. Additionally, ElectroMap incorporates automated multi-beat averaging to improve signal quality of noisy datasets, and here we demonstrate how this feature can help elucidate electrophysiological changes that might otherwise go undetected when using single beat analysis. Custom modules are included within the software for detailed investigation of conduction, single file analysis, and alternans, as demonstrated here. This software platform can be used to enable and accelerate the processing, analysis, and mapping of complex cardiac electrophysiology.

This protocol describes the setup and use of ElectroMap, a MATLAB-based open-source software platform for analysis of cardiac optical mapping data. ElectroMap provides a versatile high-throughput tool for analysis of optical mapping voltage and calcium datasets across a wide range of cardiac experimental models.

Elektromap kullanarak optik haritalama verilerinin yüksek verim Analizi

Optical mapping is an established technique for high spatio-temporal resolution study of cardiac electrophysiology in multi-cellular preparations. Here we ...