Yardım laboratuvar yöntemlerinin geliştirilmesi sırasında Scott Treece, Katelyn Arter, Jeremy Ragsdell, Tony Lamark James, Amy Fischer, Hannah Blair, ve Cheyenne Gerdes&#39;ten sağlandı. TLC tarama densitometri ile yardım için, biz Medine-Bolivar Laboratuvarı (Arkansas Bıoscıences Enstitüsü Luis H. Nopo-Olazabal) teşekkür etmek istiyorum. Arkansas Biosciences Enstitüsü Arkansas VARLIĞI Girişimi P3 Merkezi (EPS-0701890): MALDI-TOF MS bu proje için kullanılan NSF EPSCoR, Rll&#39;nin yoluyla sağlanmıştır. Finansman ABD Balıkçılık ve Vahşi Yaşam Servisi / Arkansas State Wildlife Grant, Ulusal Mağara Derneği, ve Indiana State Üniversitesi&#39;nde Kuzey Amerika Bat Araştırma ve Koruma Merkezi tarafından sağlandı.

DİKKAT: peşin, taşıma taşıma ve yarasalar depolamak için tüm gerekli eyalet ve federal izinler alınmalıdır. Onayları kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi, yanı sıra kurumsal biyogüvenlik komitesi den de temin edilmelidir. Canlı yarasalar (veya sinir sistemi dokusu) ele alınması ise, hayvan işleyicileri kuduz aşısı yapılmalıdır. Mevcut çalışmada kullanılan Yarasalar standart yöntemlerle (Arkansas State Üniversitesi Kurumsal Biyogüvenlik Kurulu onayı # 135349-1) 28 göre 2010 yaz döneminde Ozark Francis National Forest, AR, toplanmıştır. 1.. Doku Tedavi ve Lipid Ekstraksiyon <ol><li> Öncesi ve farklı bireyler doku toplama arasındaki metanol ile bütün aletleri temizleyin. Bir 125 ml Erlenmeyer şişesi içinde bir makas ve yer ile deriden saç (yaklaşık 1.0 g) kesin. Kloroform ile ıslatılmış pamuk topları 6 - 4 ile cildinizi ovarak kanat yüzeyinden numune sebum: Metanol solvent (C: M, 03:02 v / v), ve ayrı bir şişede, bu yerleştirin. </li><li> C 10 ml doku ekstrakte: M (2:1 v / v) 29 oksidasyonunu önlemek için% 0.5 butile hidroksitoluen (BHT) ihtiva etmektedir. Sadece HPLC kaliteli solventler kullanmayın. </li><li> 2 saat sonra, her bir şişeye 0.5 g susuz sülfat eklemek kısa bir süre karıştırmak ve filtre kağıdı içinden süzme ile çözücü toplar. </li><li> Tekrar iki defa 1.2 ve 1.3 adımları. M.: Bir kere 1:1 C: 01:02 C M ve ardışık Havuz birlikte filtratları. </li><li> N2 akışı altında bir araya getirilmiş filtratlar buharlaştırılmakta ve kuru ağırlığın belirlenmesi ve 3:02 C lipid tortu çözülür: 10 mg / ml &#39;lik bir konsantrasyona kadar M (BHT ile% 0.5). -20 ° C de, cam şişeler saklayın örnek Bu örnek alınmasından sonra bir ay içinde örnekleri analiz etmek ve donma-çözülme döngüleri en aza indirmek için genellikle en iyisidir. </li></ol> 2. Preparatif ince-tabaka kromatografisi ile ayırma Lipid <ol><li> Önceden bir çözücü ile yıkanmış, 1.5 ml microce in hazırlanması, E, aseton ile durulanır ve hava-kurutma: C 03:02 ile doldurularak ntrifuge boruları. Bu, daha sonra kütle spektrometresi analizi engelleyebilir plastikleştirici kaldırmak için yapılır. Tozsuz bir kap içinde örnek tüplerini saklayın ve cilt yağları kirlenmesini önlemek için sadece eldiven ile bu tüpler anlaştım. </li><li> M.: İlk 03:02 C ile ön geliştirerek TLC plakası etkinleştirin , 1 cm derinliğe kadar TLC bölmeye kadar çözücü ekleme sonra (kapat cam kapaklı) odacık içinde levhayı ve çözücü plakanın üstüne tamamen çalışmasına izin verir. Bu yaklaşık 45 dakika sürer. </li><li> Çözücü buharlaşana (yaklaşık 15 dakika) kadar bir çeker ocak içinde plakası ve kurutun, daha sonra 120 ° C&#39;de en az 10 dakika boyunca bir fırın içinde yer Numuneler uygulandığında yönünü sağlamak için levhanın üstünde bir kalem işareti koyun. Numune ve standartlar yerleştirileceği temel işaretlemek için, 1.5 cm levhasının alt kenarından, bir kurşun kalem çizgisinin düz yerleştirin. </li><li> Bir kesim tarafından TLC haznesi hazırlayıniki kısa duvarları hat için yeterince büyük ve uzun bir duvar filtre kağıt parçası. Odacık içine filtre kağıdı astar yerleştirin. Solvent bölmeye tamamen ıslak eklenir zaman. </li><li> Dietil eter: asetik asit solvent heksandır mobil faz, 100 ml hazırlayın (H: E: A; 80:20:2 v / v / v). Yaklaşık 1 sm kadar bir derinliğe vermek için bölme içine solvent dökün. Haznenin üst kenarı boyunca, bir silikon yağ mühür kullanılarak cam kapakla kapatın. Odası kullanmadan önce gece boyunca dengelenmeye bırakın. </li><li> Diğer kenarına 1,5 cm bir kenarından yaklaşık 1.5 cm ila sürekli bir çizgi gibi bir kılcal boru veya pipet ile hazırlanan plaka elle örnek uygulanır. Bir daha homojen bir çizgi içinde örnek yüklemek beri bir otomatik numune aplikatör tercih edilir. Yaklaşık 20 ul sterol karışımı, SYAleri, TAG ve sterol ester standartlarını noktaya TLC plakasının dış şerit kullanın (10 mg kullanımı / ml; Premade karışımlar elde edilebilir). </li><li> Içine yüklenen TLC plakasınıdengelenmiş kapak ile yakın odası, ve plaka geliştirmek çözücünün kadar üst kenarına çalışır. Bu, burada tarif edilen mobil faz ile yaklaşık 45 dakika sürer. Odasından plaka çıkarın ve fazla çözücü, yaklaşık 1 dakika boyunca bir çeker ocak içinde plakadan buharlaşmasına izin verin. </li><li> % 95 etanol içinde% 0.05 rodamin 6G ile sprey. Uzun dalga boylu ultraviyole lamba altında lipid bantları görselleştirmek. Bir kalem ile Mark numune ve standartlara çözülmesi floresan bantları için R f pozisyon. Bir fotoğraf kayıtları bu noktada alınabilir. </li><li> TAG standardına karşılık gelen bant tespit ve saydam kağıt ağırlığında büyük bir parça üzerine bir spatula ile silis kazınmasıyla plakasından çıkarın. Bir 1.5 ml solvent ile yıkanmış mikrosantrifüj tüpüne silis aktarın. </li><li> 03:02 C 1.0 ml ilave edilir: M solvent örnek tüp, 1 dakika boyunca sonikasyon, santrifüjleme ile silis pelet ve daha sonra yeni bir önceden tartılmış bir tüp içine çözücüyü aktarın. Tekrar incie Önceki adım, süzülen havuz ve bir N2 akışı altında çözücü buharlaştırılır. </li><li> Ek doku örnekleri, TLC ile ayrılır ise 4 ° C de karanlıkta N2 altında TAG içeren kuru tortu saklayın. Rhodamine 6G numunelerde mevcut olan, ancak heksan içinde çözünmez ve hemen MS analiz öncesi numune çözünme esnasında çıkarılır. </li></ol> 3. MALDI-TOF MS ile TAG Analizi <ol><li> Çözücü, 1 ml (49.5% etanol,% 49.5 asetonitril,% 1 ve% 0.1 sulu TFA) içinde 10 mg CHCA eritilmesi ile yeni bir α-siyano-4-hidroksi-sinnamik asit (CHCA) matrisi çözeltisi hazırlayın. </li><li> 10 pmol / ul elde etmek üzere% 0.1 trifluoroasetik asit (TFA) 39.5 ul ACTH (1 mg / ml) 1 ul karıştırılarak alet çözünürlük ve duyarlılık testleri için, adrenocarticotropic hormon (18-39 clip, 2465,1989 Da ACTH) hazırlanması stok solüsyonu. Bu durum daha sonra kullanılmak üzere -20 ° C&#39;de muhafaza edilebilir. </li><li> Taze bir çalışma ACTH solut hazırlayın, 10 pmol / ul stok çözeltisinden 1 ul alma 9 ul% 0.1 TFA ile karıştırılması ve daha sonra, bir 500 fmol elde etmek için CHCA matris solüsyon içerisinde 10 ul (1:1) karıştırılarak iyon (1 pmol / ul) / ul konsantrasyonu. </li><li> 03:02 C 10 mg / ml &#39;de TAG standartları hazırlayın: MALDI alet kalibrasyonu için M (örneğin tricaprin [470,361 Da], trikaprilin [554,455 Da], [638,549 Da] trilorin [722,642 Da] tripalmitin, [800,689 Da] tripalmitolein , [806,736 Da] trimiristin [884,783 Da], tri-11-eicosenoin [968,877 Da] trioleİn ve trierucin [1052,971 Da]). </li><li> Harici bir kilit kütleli TAG kalibrasyon standardı için M: 03:02 C 10 mg / ml &#39;de, triolein hazırlayın. </li><li> 10 mg / ml solüsyon heksan içinde depolanmış TAG örnekleri çözülür. </li><li> Bir 0.5 M (77,06 mg/1.0 mi) örnek ve standart bir matris olarak kullanmak için% 90 metanol ile, 2,5-dihidroksibenzoik asit (DHB) stok çözeltisi hazırlayın. Ayrıca, bir NaOH 1.0 M (2.0 g/50.0 mi) solüsyon hazırlanır. Alüminyum folyo ile DHB çözeltisi ile tüp Kapak<html> ışıktan korumak için l. </li><li> Mix (önceden yıkanmış tüpler) 10,0 ul DHB matris, 10.0 ul örnek veya standart ve 5.0 ul 1.0 M NaOH. Karıştır ve kısaca alt karışımı getirmek için tüp santrifüj. </li><li> Nokta kadar kuru bir desikatörde bir MALDI paslanmaz çelik hedef plakası ve yeri üzerine standart, numune veya ACTH 1.0 ul. Veri toplama için aracı haline hedef plakası yerleştirin. </li><li> Gerçekleştirin MALDI-TOF MS pozitif reflektron modunda analiz eder. Ayarlama ve ACTH ve TAG standart çözeltiler kullanılarak cihazın üreticisi tarafından tarif edildiği gibi aleti kalibre edin. </li><li> Hedef plaka üzerinde her bir örnek için tespit spektrumları elde edin (gösterge özellikleri ile tutarlıdır; bu iş için parametreler 5 Hz lazer ateşleme hızı, ortalama bir spektrum elde etmek için bir nokta başına ~ 100 çekim idi). MALDI spektrumları arka yumuşatma ve çıkarıldıktan sonra, online arama motoru LİPİT MAPS (manuel işlem iyon zirveleri/ Tools / ms / glycerolipids_batch &quot;target =&quot; _blank &quot;&gt; www.lipidmaps.org / tools / ms / glycerolipids_batch). </li><li> Öncü iyonların ve yoğunluğu kutusunun listesine liste spektrumları kopyalayın ve yapıştırın. Istenen asil bileşimine aramayı sınırlayın. Kütle / yük her numune için spektrumdaki mevcut iyonların (m / z) oranı ile tanımlamak TAG. Yağ asidi metil esteri (FAME) yüzdeleri ayrı GC / MS analizi varsa, mevcut TAG&#39;lerin olasılıkları elde etmek için bu veri eklemek. </li></ol> GÖSTERGE: Bu çalışmada kullanılan kütle spektrometresi (bir 337 nm 20 Hz N 2 lazer ile donatılmış) bir Waters MALDI Micro MX olduğunu. Pozitif reflektron mod özelliği ile her üreticinin MALDI alet kullanılabilir. Reflektron, 5.200 V;; kullanılan genel ayarlar darbe gerilimi, 2.000 V olan kaynak, 15.000 V, MassLynx yazılımı (vers. 4.0) kullanarak veri toplama ile. Bu çalışma koşulları 12.000 daha fazla kütle çözünürlüğü sağlar.

<ol>
	<li>Pappas, A., Anthonavage, M., Gordon, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+fate+and+selective+utilization+of+major+FAs+in+human+sebaceous+gland.">Metabolic fate and selective utilization of major FAs in human sebaceous gland.</a> Journal of Investigative Dermatology. 118 (1), 164-171 (2002).</li><li>Nicolaides, N., Hwei, H. C., Rice, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+skin+surface+lipids+of+man+compared+with+those+of+eighteen+species+of+animals.">The skin surface lipids of man compared with those of eighteen species of animals.</a> Journal of Investigative Dermatology. 51 (2), 83-89 (1968).</li><li>Desbois, A. P., Smith, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+free+fatty+acids:+activities,+mechanisms+of+action+and+biotechnological+potential.">Antibacterial free fatty acids: activities, mechanisms of action and biotechnological potential.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 85 (6), 1629-1642 (2010).</li><li>Munoz-Garcia, A., Williams, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutaneous+water+loss+and+lipids+of+the+stratum+corneum+in+Dusky+Antbirds,+a+lowland+tropical+bird.">Cutaneous water loss and lipids of the stratum corneum in Dusky Antbirds, a lowland tropical bird.</a> Condor. 109 (1), 59-66 (2007).</li><li>Catala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+function+of+very+long+chain+polyunsaturated+fatty+acids+in+the+pineal+gland.">The function of very long chain polyunsaturated fatty acids in the pineal gland.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1801, 95-99 (2010).</li><li>Stahl, J., Niedorf, F., Kietzmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+epidermal+lipid+composition+and+skin+morphology+of+animal+skin+ex+vivo.">Characterization of epidermal lipid composition and skin morphology of animal skin ex vivo.</a> European Journal of Pharmacology. 72 (2), 310-316 (2009).</li><li>Picardo, M., Ottaviani, M., Camera, E., Mastrofrancesco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sebaceous+gland+lipids.">Sebaceous gland lipids.</a> Dermato-Endocrinology. 1 (2), 68-71 (2009).</li><li>Ro, B. I., Dawson, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+sebaceous+gland+activity+and+scalp+microfloral+metabolism+in+the+etiology+of+seborrheic+dermatitis+and+dandruff.">The role of sebaceous gland activity and scalp microfloral metabolism in the etiology of seborrheic dermatitis and dandruff.</a> Journal of Investigative Dermatology. 10, 194-197 (2005).</li><li>Davoudi, S. M., Sadr, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+skin+sebum+and+elasticity+level+in+patients+with+sulfur+mustard-induced+dermatitis+and+healthy+controls.">Comparative study of skin sebum and elasticity level in patients with sulfur mustard-induced dermatitis and healthy controls.</a> Skin Research and Technology. 16 (2), 237-242 (2010).</li><li>Zampeli, V. A., Makrantonaki, E., Tzellos, T., Zouboulis, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+pharmaceutical+concepts+for+sebaceous+gland+diseases:+implementing+today's+pre-clinical+data+into+tomorrow's+daily+clinical+practice.">New pharmaceutical concepts for sebaceous gland diseases: implementing today's pre-clinical data into tomorrow's daily clinical practice.</a> Current Pharmaceutical Biotechnology. 13 (10), 1898-1913 (2012).</li><li>Horton, H. R., Moran, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Biochemistry. , (1993).</li><li>Fahy, E., Subramaniam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+classification+system+for+lipids.">A comprehensive classification system for lipids.</a> European Journal of Lipid Science and Technology. 107 (5), 337-364 (2005).</li><li>Fahy, E., Subramaniam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+of+the+LIPID+MAPS+comprehensive+classification+system+for+lipids.">Update of the LIPID MAPS comprehensive classification system for lipids.</a> Journal of Lipid Research. 50 (5), S9-S14 (2009).</li><li>Fuchs, B., S&#252;&#223;, R., Nimptsch, A., Schiller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MALDI-TOF-MS+directly+combined+with+TLC:+A+review+of+the+current+state.">MALDI-TOF-MS directly combined with TLC: A review of the current state.</a> Chromotagraphia. 69, S95-S105 (2009).</li><li>Savary, B. J., Vasu, P., Lorence, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Recombinant Gene Expression, Reviews and Protocols. , (2011).</li><li>Gidden, J., Liyanage, R., Durham, B., Lay, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reducing+fragmentation+observed+in+the+matrix-assisted+laser+desorption/ionization+time-of-flight+mass+spectrometric+analysis+of+triacylglycerols+in+vegetable+oils.">Reducing fragmentation observed in the matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometric analysis of triacylglycerols in vegetable oils.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 21, 1951-1957 (2007).</li><li>Fuchs, B., Schiller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+MALDI-TOF+mass+spectrometry+in+lipidomics.">Application of MALDI-TOF mass spectrometry in lipidomics.</a> European Journal of Lipid Science and Technology. 111 (1), 83-98 (2009).</li><li>Fuchs, B., S&#971;&#946;, R., Schiller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+update+of+MALDI-TOF+mass+spectrometry+in+lipid+research.">An update of MALDI-TOF mass spectrometry in lipid research.</a> Progress in Lipid Research. 49 (4), 450-475 (2010).</li><li>Karas, M., Bachmann, D., Hillenkamp, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+the+wavelength+in+high-irradiance+ultraviolet+laser+desorption+mass+spectrometry+of+organic+molecules.">Influence of the wavelength in high-irradiance ultraviolet laser desorption mass spectrometry of organic molecules.</a> Analytical Chemistry. 57 (14), 2935-2939 (1985).</li><li>Hillenkamp, F., Karas, M., Holtkamp, D., Klusener, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+deposition+in+ultraviolet+laser+desorption+mass+spectrometry+of+biomolecules.">Energy deposition in ultraviolet laser desorption mass spectrometry of biomolecules.</a> International Journal of Mass Spectrometry and Ion Processes. 69 (3), 265-276 (1986).</li><li>Knochenmuss, R., Cole, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Electrospray and MALDI Mass Spectrometry: Fundamentals, Instrumentation, Practicalities, and Biological Applications. , 149-262 (2010).</li><li>Pannkuk, E. L., Gilmore, D., Savary, B. J., Risch, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triacylglyceride+(TAG)+profiles+of+integumentary+lipids+isolated+from+three+bat+species+determined+by+matrix-assisted+laser+desorption+-+ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+(MALDI+-+TOF+MS).">Triacylglyceride (TAG) profiles of integumentary lipids isolated from three bat species determined by matrix-assisted laser desorption - ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI - TOF MS).</a> Canadian Journal of Zoology. 90 (9), 1117-1127 (2012).</li><li>Blehert, D., Hicks, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bat+white-nose+syndrome:+An+emerging+fungal+pathogen.">Bat white-nose syndrome: An emerging fungal pathogen.</a> Science. 323 (5911), 227-228 (2009).</li><li>Gargas, A., Trest, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geomyces+destructans+sp.+nov.+associated+with+bat+white-nose+syndrome.">Geomyces destructans sp. nov. associated with bat white-nose syndrome.</a> Mycotaxon. 108, 147-154 (2009).</li><li>Lorch, J. M., Meteyer, C. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+infection+of+bats+with+Geomyces+destructans+causes+white-nose+syndrome.">Experimental infection of bats with Geomyces destructans causes white-nose syndrome.</a> Nature. 480 (7377), 376-378 (2011).</li><li>Frick, W. F., Pollock, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+emerging+disease+causes+regional+population+collapse+of+a+common+North+American+bat+species.">An emerging disease causes regional population collapse of a common North American bat species.</a> Science. 329 (5992), 679-682 (2010).</li><li>Boyles, J. G., Cryan, P. M., McCracken, G. F., Kunz, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+economic+importance+of+bats+in+agriculture.">The economic importance of bats in agriculture.</a> Science. 332 (6025), 41-42 (2011).</li><li>Sikes, R. S., Gannon, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+of+the+American+Society+of+Mammalogists+on+the+use+of+wild+mammals+in+research.">Guidelines of the American Society of Mammalogists on the use of wild mammals in research.</a> Journal of Mammalogy. 92 (1), 235-253 (2011).</li><li>Law, S., Wertz, P. W., Swartzendruber, D. C., Squier, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+variation+in+content,+composition,+and+organization+of+porcine+epithelial+barrier+lipids+revealed+by+thin+layer+chromatography+and+transmission+electron+microscopy.">Regional variation in content, composition, and organization of porcine epithelial barrier lipids revealed by thin layer chromatography and transmission electron microscopy.</a> Archives of Oral Biology. 40 (12), 1085-1091 (1995).</li><li>Folch, J., Lees, M., Sloane Stanley, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+the+isolation+and+purification+of+total+lipids+from+animal+tissues.">A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues.</a> Journal of Biological Chemistry. 226 (1), 497-509 (1957).</li><li>Nicolaides, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+lipids:+Their+biochemical+uniqueness.">Skin lipids: Their biochemical uniqueness.</a> Science. 186 (4158), 19-24 (1974).</li><li>Camera, E., Ludovici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+analysis+of+the+major+lipid+classes+in+sebum+by+rapid+resolution+high-performance+liquid+chromatography+and+electrospray+mass+spectrometry.">Comprehensive analysis of the major lipid classes in sebum by rapid resolution high-performance liquid chromatography and electrospray mass spectrometry.</a> Journal of Lipid Research. 51, 3377-3388 (2011).</li><li>Fuchs, B., S&#252;&#223;, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+analysis+by+thin-layer+chromatography-+A+review+of+the+current+state.">Lipid analysis by thin-layer chromatography- A review of the current state.</a> Journal of Chromatography A. 1218 (19), 2754-2774 (2011).</li></ol>

Yazarlar herhangi bir mali çıkarlarını beyan.

Bu makale, lipid moleküllerinin zaman alıcı türetme olmaksızın, hazırlayıcı TLC ile memeli integument izole geniş bir lipit sınıfları ayrılması ve MALDI-TOF MS ile TAG profillerini belirlemek için basit ve sağlam bir yöntem sunar. MALDI-TOF MS ile TAG&#39;lerin kalite spektrumları üretiminde kritik adımları içerir: en az kirlenme ya da oksidasyon ile bileşik 1) başarılı bir şekilde uzaklaştırılması; kromatografisiyle 2) yeterli ayırma ve izolasyon ve MALDI-TOF ile 3) Yüksek çözünürlük ve kütle hassasiyeti MS. Bu kağıt TAG MS profillerini elde etmek için Doğu kırmızı yarasa plagiopatagium gelen nötral lipid kısmın ayrılması ve ayırarak yöntem gösterilmektedir. Bu çalışma bir yarasa türleri kullanılır iken (Mammalia: Chiroptera) bu yöntemlerin herhangi bir memeli türünün deriye lipitleri incelemek için uzatılabilir. Bat zar TAG, FFAs, squa düşük miktarda, esas olarak kolesterol olması ile karakterize edilirlene ve sterol / mum esterleri. (- Insanlarda% 7, ancak 26 - 1 yarasalardaki% 62) daha büyük bir kolesterol oranlarında işlem sırasında yarasalardaki Sebum lipid oranları bu skualen insanlarda farklıdır, (insanlarda kadar% 16 karşı) düşük miktarlarda mevcut olan 22 31. % 28 kadar oranlar Doğu kırmızı yarasa saç bulunur iken insan tüyler, yaklaşık% 3 TAG içerir. Bat&#39;lardan lipid örneklerinin çıkarma diğer türler için benzer. Bu çalışmada, bir çözücü ile ıslatılmış pamuk topları sebum çıkarmak için kullanılır, bir de birden çok kez zar yüzeyi üzerine solvent ihtiva eden bir şişe ya da örnek tüpü ters olabilir. İhtisas bant ürünleri de yüzey lipidler 32 ayıklamak için alternatif yollar sağlar. Uygun bir lipid ekstraksiyon kritik bir parçası cildi yağdan kontaminasyonu minimize etmektir. Bu da, tüm numuneler ve giyen muayene eldivenleri arasında bir doku ile silme eşyaları, metanol ile bir sıkma şişesi tutmak ve her cam ve püskürtme aletleri ile gerçekleştirilir. Oksidasyon of çoklu doymamış asiller BHT eklenmesi ile önlenir, ve ne olursa olsun örnekleri arasında saklanan sıcaklığın kullanılmalıdır. Biyomoleküler analiz genellikle kirliliklerden ilgi ayrı molekül için bir kromatografik adım gerektirir. TLC gaz ya da sıvı kromatografisi şartları enstrümantasyon önler ve sağlam ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için daha az bir teknik deneyim gerektirir, bu yöntemde, kullanılır. Ilgilenilen lipid sınıfına bağlı olarak, pek çok farklı mobil fazlar dahil edilebilir. Ayrıca, HPTLC plakaları ve tarama densitometresi kullanılmasıdır niceliksel sonuçlar elde etmek için kullanılabilir. TLC yöntemlerin varyasyonları burada sayılamayacak kadar çok olmakla birlikte, lipid TLC içinde kullanılan bazı yaygın mobil fazlar, kloroform yer alır: non-polar lipidler 28 ayrılması için etil eter: metanol: fosfolipidler ve glikolipitler veya izooktan ayrılması için su. E: diğer lipit sınıfları, H TAG ayırma açısından, bir çoklvent sistemi sürekli çalışır ve karşılaştırılabilir sonuçlar sağlar. TLC kullanmak için diğer bir avantajı, ilgi grupları hızla analitlerin önce türetme olmaksızın MALDI-TOF MS ile profilli olmasıdır. Bu çalışmada, silis TLC plakasına kaldırılır, ve, analit, yıkama çözücünün adsorban ve buharlaşma ayırmak için bir çözücü madde ve daha sonra santrifüj içinde sonikasyon ile ondan elüte edilir. Alternatif olarak, matris analit bantları TLC plakaları üzerinde ayrılmış ve daha sonra doğrudan MALDI-TOF MS ile analiz 33 üzerine direkt olarak tatbik edilebilir. MALDI-TOF MS tarafından Başarılı profilleme yeterli numune hazırlama ve ayarlama ve cihazı kalibre ile operatör yeterlilik itimat yok. Ilgilenilen moleküller için moleküler ağırlık aralığı, uygun düzgün kapsayan standartlara günlük olarak kalibre edilmelidir. Ekipmanın uygun hassasiyet ve çözünürlük (örneğin, ≥ 10.000) da onaylanmıştır olmalıdırACTH günlük d. Memeli integument yüzeyinde bulunan yağ lipid bileşenleri bakteri / mantar patojenler tarafından kolonizasyonuna bir rol oynayabilir. Bu nedenle türler ve bireyler arasında kimyasal bileşimi bilgi insan ve yaban hayatı hastalıklarının süreçleri hakkında ipuçları sağlayabilir. Hastalıklı ve sağlıklı bireyler arasında intraspecific farklılıklar klinik belirtilerini temsil edebilir ki hastalık teşhis ve tanı yardım. Mikrobiyal büyümeyi önleyen spesifik bileşikler mevcut Ayrıca, eğer, bu hastalıkların tedavisi ve önlenmesinde kullanım için tespit edilebilir.

Memeli kabukla dokular epidermis, keratin yapılar (örneğin saç ve tırnaklar) ve ekzokrin bezleri vardır. Yağ tipi salgı bezleri toplu Pilosebasöz birimi 1 olarak adlandırılır saç folikülleri, ile ilişkilidir. Yağ bezleri sebum olarak adlandırılan deri yüzeyi üzerine yağlı bir eksüda bırakın. Sebum gliserolipidler (örneğin triasilgliseridler [TAG]), serbest yağ asiller (SYA), sterol / balmumu esterleri, skualen ve büyük ölçüde oluşur. Sebum kimyasal kompozisyonu türe özgü 2&#39;dir. Doğuştan gelen bağışıklık sisteminin parçası olan ve antimikrobiyal fonksiyonu 3. sağlamanın yanı sıra, yağ lipidler cilt 4 yoluyla buharlaşan su kaybı, hücresel bütünlüğü ve gen regülasyonu 5 ve ilaç emilimi 6 olmak üzere önemli fizyolojik süreçleri etkiler. Yağ lipid bileşimleri, aynı zamanda hastalık işaretçileri olarak da hizmet edebilir. Altered oranları ve yağ b miktarlarıyol lipit sınıfları, diğerleri 10 arasında akne vulgaris 7, kepek 8, seboreik dermatit 8, asteatosis 9, gibi hastalıkların klinik belirtileri vardır. Epidermal ve saç dokuları sterol ve türevleri, TAG, SYAleri, seramid, fosfolipid, ve diğer küçük lipid bileşenleri içeren değişken profillerini içerir. Deriye lipitler, hastalık süreçlerinde işlev görebilir çünkü sağlıklı ve hastalıklı bireyler arasında TAG&#39;lerin kimyasal bileşimlerinde farklılıkları belirlemek hastalığının klinik tanısı için faydalı olabilir. Lipidler, genellikle polar olmayan veya polar olmayan, polar ya da ikame 11 ile suda çözülmeyen organik bileşikler olarak tanımlanır. Lipid yapıların uzun hidrokarbon zinciri, (balmumu esterleri, FFAs, alkoller, ketonlar ve aldehidler de dahil olmak üzere), oksijene alkanlar, ya da kolesterol 12 gibi kompleks halka yapıları olabilir. Yapısına dayalı lipidlerin sekiz ana sınıfları (SYA, glycerolipi vardırds [GL] gliserofosfolipitlerdir bağlı olarak kimyasal özelliklerinin geniş bir yelpazesi sergilerler [GP], sfingolipidler [SP], sterol lipidler [ST], prenol lipidler [PR], saccharolipids [SL] ve poliketidler [PK]) sınıf 13. Nedeniyle lipid sınıflarının kimyasal özellikleri en geniş varyasyon için, lipit moleküllerinin önceden türetme olmadan direk profil arzu edilir. Lipid araştırmalarda ortaya çıkan bir yöntemi, matris destekli lazer desorpsiyon / iyonizasyon time-of-flight kütle spektrometrisi (MALDI-TOF MS) 14 ile birlikte, ince-katman kromatografisi (TLC) &#39;dir. MALDI-TOF MS proteinleri belirlemek nedeniyle tripsin ile sindirilmiş proteinler 15 üretilen son derece hassas peptid iyon kütle &quot;parmak izi&quot; ile spesifik amino asit dizilerine ilişkilendirmek proteomik araştırmalarda yaygın olarak kullanılır. MALDI-TOF MS, aynı zamanda, TAG&#39;lerin 16-18 gibi lipitler dahil olmak üzere diğer biyomolekül sınıfları, profil için de kullanılabilir. MALDI bir matris, tip kullanımını gerektirir,aromatik ve konjuge çift bağ yapılarını içeren bir organik bileşik ically. Matris molekülleri yavaşça analitleri için lazerin enerji transferi proton transferini teşvik etmek ve tek yüklü gaz fazı üretmek için iyonları 19-21 vermektedir. İyonlar, yüksek vakum altında yüksek bir voltaj alana maruz kalan ve iyonlar, daha sonra kendi kütle-şarj oranı ile orantılı olan hız farklılıkları ile ayrılmış bir TOF kütle analizörü içine akselere edilmiştir. Hatta, çok büyük biyomoleküllerin basitleştirilmiş spektrum analiz için tek yüklü türlerin moleküler iyon üreten az parçalanma ile iyonize edilebilir. Önceden türetme olmadan direkt lipit molekülleri analiz yeteneği lipidomic araştırma 18 MALDI-TOF MS hazır benimsenmesini teşvik etmiştir. Bu kağıt saç deriye lipitleri izole ve analiz etmek için rutin bir yöntem sunuyor, sebase salgıları ve Doğu kırmızı yarasa plagiopatagium (Lasiurus borealis). Bu, beyaz Burun Sendromu (WNS) 22 hastalık sürecini açıklamak için bat deriye lipitlerinde türler arası farklılıklarını belirlemek için kullanılır. WNS yarasa bir mantar hastalığıdır ve Geomyces 23-25 ​​destructans yeni açıklanan psikrofilik türlerinin neden olur. WNS 5 milyondan fazla Kuzey Amerika mağara yarasaların ölümüne neden ve tarımsal sanayi 26,27 zarar milyarlarca dolar potansiyel ekonomik etkileri ile savunmasız yarasa türlerinin nesli, tehdit etti. G. adımları araştırmak enfeksiyon destructans, yağlar Doğu kırmızı sopaları saç ve kanat dokulardan ekstre edildi ve MALDI-TOF MS ile bir sonraki analiz için TAG fraksiyonunu izole etmek için TLC ile geniş lipid sınıfa ayrılır. TAG kısa asil zincirleri içeren ve kolay bir şekilde çok az müdahale ile matris MALDI-TOF MS ile tespit edilir.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of the reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue number</td>
			<td>Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butylated Hydroxytoluene</td>
			<td>MP Biomedicals, LLC</td>
			<td>101162</td>
			<td><a href="http://www.mpbio.com" target="_blank">www.mpbio.com</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TLC Flexible Plates</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>4410-222</td>
			<td><a href="http://www.whatman.com" target="_blank">www.whatman.com</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACTH</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chem. Co.</td>
			<td>A8346-5X1VL</td>
			<td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank">www.sigmaaldrich.com</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triolein</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chem. Co.</td>
			<td>44895-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TLC Lipid Standard</td>
			<td></td>
			<td>TLC 18-1</td>
			<td><a href="http://www.nu-chekprep.com" target="_blank">www.nu-chekprep.com</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MALDI TAG Standard</td>
			<td>Nu-Check Prep., Inc.</td>
			<td>NIH Code 53B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MALDI TAG Standard</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chem. Co.</td>
			<td>17810-1AMP-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Vials with Teflon Cap</td>
			<td>U.S. National Scientific Co.</td>
			<td>B7800-2</td>
			<td><a href="http://www.nationalscientific.com/" target="_blank">www.nationalscientific.com/</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DHB</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chem. Co.</td>
			<td>50862-1G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHCA</td>
			<td>Sigma-Aldrich Chem. Co.</td>
			<td>C8982-10X10 mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sebutape</td>
			<td>CuDerm</td>
			<td>S100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

profiling the triacylglyceride contents in bat integumentary lipids by preparative thin layer chromatography and maldi-tof mass spectrometry

Memeli zar cilt yüzeyi üzerine yağlı bir madde salgılar yağ bezleri içerir. Sebum üretim patojenik mikroplara karşı koruyucu olan doğuştan gelen bağışıklık sisteminin bir parçasıdır. Anormal sebum üretimi ve kimyasal bileşimi ayrıca belirli deri hastalıklarının klinik belirtisi vardır. Sebum türe özgü olduğu triaçilgliseridler, aşağıdakileri içeren lipidler, kompleks bir karışımını içerir. Çeşitli lipit sınıfları tarafından arzedilen geniş kimyasal özellikleri sebum bileşimin spesifik belirlenmesine engeller. Lipidler için analitik teknikler genellikle emek-yoğun ve artış numune hazırlama maliyetleri kimyasal türevlendirilmelerini gerektirir. Bu kağıt, ince-tabaka kromatografisi ile, memeli zarının, ayrı geniş lipid sınıflardan lipidlerin çıkarılmasına ve matris destekli lazer desorpsiyon / iyonizasyon time-of-flight kütle spektrometresi kullanılarak triasilgliseridler içeriği profil açıklamaktadır. Bu sağlam yöntem, doğrudan belirlenmesini sağlartürleri ve bireyler arasında triasilgliseridler profillerin ve hali hazırda, memelilerde herhangi bir taksonomik grubuna uygulanabilir.

Folch 30 tarafından tarif dokusundan toplam lipitleri izole etmek için ekstraksiyon yöntemi, burada uyarlanmış basit bir işlemdir. Doku çıkarımı ve çözücünün buharlaştırılmasından sonra, lipitler genellikle sarımsı bir film olarak görünür. Sarı renk, büyük olasılıkla, bir sıvı-sıvı ekstraksiyon yaparak kaldırılabilir kirletici protein, arasındadır. Hazırlayıcı TLC gibi kirleticilerden gelen TAG kısmını ayırır, çünkü bu ek örnek işleme Bu prosedürde gerekli değildir. Her filtre aşamalarında taze susuz sodyum sülfat ilavesi doğru lipid ağırlık saptamaları etkiler su kirlenmesini azaltır. Memeli deriye lipid H ile hazırlayıcı TLC analizleri: E: mobil faz olarak A genellikle steroller, FFAs, TAG&#39;lerin ve sterol esterleri / balmumu esterleri / skualen (Şekil 1) (kökenli başlayarak) karşılık gelen dört ayrı bant çözecektir. Vesilesiyle analyti kullanırkenE: H ile cal yüksek performanslı (HP) TLC mobil faz, sterol esterler, mumsu esterleri ve skualen ayrı ve üç ayrı bantlar olarak görünecektir. Bu çalışmada kullanılan koşullar altında, sterol / balmumu esterleri ayrı değildir. Etil eter (95:5 v / v) ve HPTLC plakası taramalı dansitometre ile analiz edilebilir: Bu bantlar ilgi ise, mobil faz izooktan için değiştirilebilir. Diğer faktörler arasında kötü ayrılmasına neden olabilir. Bunlar genellikle tutarlı kalite TLC ayrımı ve veri elde etmek için, oda içindeki filtre kağıdı yerleştirme kapağın sıkı bir conta için tatbik yağ, bir gece boyunca odası dengeye ve temiz TLC odaları tutarak elimine edilir. Doğu kırmızı bat izole TAG&#39;lerin elde Örnek MALDI-TOF kütle spektrumu, Şekil 2 ve 3&#39;te gösterilmiştir. Non-sucul memeli izole TAG&#39;lerin için tipik olan 910, - Bu spektrumları m / z 850 arasındaki kütle aralığında TAG iyon zirveleri içerirs. 1.0 M NaOH ilavesi, tek tek, H + iyonlarının daha stabildir Na + yüklü iyonlar teşvik etmektedir. Stabilitesi ilave olarak, H + ve K + iyonlarının yokluğu, spektrum analiz kolaylığını arttırmaktadır. M / z 850-910 iyon zirveleri 16:00, 18:00, 18:01 karşılık, ve 18:02 FA kısımları etiketleri baskın asil bileşenler (Tablo 1) olmak. TAG&#39;lerin olası FA kısımları, başlangıçta total iyon m / z MALDI-TOF MS spektrumları olarak mevcut ve çıkarsanmış türleri ve bireyler arasındaki farklılıklar ile belirlenebilir. Asil içeriğin özel oranları gereklidir, ancak, daha sonra MS / MS ya da gaz kromatografisi (GC / MS) kullanılmalıdır. Asil oranlar hakkında daha fazla bilgi spektrumun diasilgliseridler bölgede bulundu (Şekil 4) &#39;de tepe noktaları gözlemleyerek çıkarsanabilir. Diasilgliseridler MALDI kaynak TAG parçalanma üretilir ve m / z 590 bulunabilir - 650 bölgesi. TAG parçalanma arttırılabilir1.0 M NaOH 16 ve buna ek olarak ihmal. Doğu kırmızı bat kanat doku m / z 881,8 (sırasıyla, Şekil 2 ve 3) en baskın tepe m / z 879,7 ve saç dokuda baskın bir pik ile karakterize edilir. M / z 907,8, 879,7, 855,7 ve (POP, PPOs) tepe değeri 853,7 olma ~% 40 sıcaklıktaki dorukla tüy dokusunda (~% 50) yoğunluğu da yaklaşık olarak. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="2in"> Bileşim </td><td fo:width="1in"> Elemental Kompozisyon </td><td fo:width="1in"> Gözlemlenen Kütle </td></tr><tr><td> Na + TAG&#39;lar </td><td></td><td> Na + TAG&#39;lar </td></tr><tr><td> SSO </td><td> C 57 H 108 O 6 </td><td> 911,8 </td></tr><tr><td> OOS, LSS </td><td> C 57 H 106 O 6 </td><td> 909.8 </td></tr><tr><td> OOO, LnSS, LSO </td><td> C 57 H104 Ç 6 </td><td> 907,8 </td></tr><tr><td> LOO, LLS </td><td> C 57 H 102 O 6 </td><td> 905,8 </td></tr><tr><td> DÖİ, OOLn </td><td> C 57 H 100 O 6 </td><td> 903,7 </td></tr><tr><td> LLL </td><td> C 57 H 98 O 6 </td><td> 901,7 </td></tr><tr><td> LLLn </td><td> C 57 H 96 O 6 </td><td> 899,7 </td></tr><tr><td> LLnLn </td><td> C 57 H 94 O 6 </td><td> 897,7 </td></tr><tr><td> Lnlnln </td><td> C 57 H 92 O 6 </td><td> 895,7 </td></tr><tr><td> OSP </td><td> C 55 H 104 O 6 </td><td> 883,8 </td></tr><tr><td> LSP, OOP, Sopo </td><td> C 55 H 102 O 6 </td><td> 881,8 </td></tr><tr><td> LOP, LnSP, LSPo </td><td> C 55 H 100 O 6 &lt;/ Td&gt; <td> 879,7 </td></tr><tr><td> LLP, LNOP, lopo </td><td> C 55 H 98 O 6 </td><td> 877,7 </td></tr><tr><td> LnLP, LLPo, LnOPo </td><td> C 55 H 96 O 6 </td><td> 875,7 </td></tr><tr><td> LnLnP, LnLPo </td><td> C 55 H 94 O 6 </td><td> 873,7 </td></tr><tr><td> LnLnPo </td><td> C 55 H 92 O 6 </td><td> 871,7 </td></tr><tr><td> PPS </td><td> C 53 H 102 O 6 </td><td> 857,8 </td></tr><tr><td> POP, PPOs </td><td> C 53 H 100 O 6 </td><td> 855.7 </td></tr><tr><td> OOM, PPL, POPOS, Popo </td><td> C 53 H 98 O 6 </td><td> 853,7 </td></tr><tr><td> PPLn, ppol, PoPoO, MyOO </td><td> C 53 H 96 O 6 </td><td> 851,7 </td></tr><tr><td> LLM, LnOM </td><td> C 53 H 94 </sub&gt; O 6 </td><td> 849,7 </td></tr><tr><td> PPP, SSLa </td><td> C 51 H 98 O 6 </td><td> 829.7 </td></tr><tr><td> PPPo, Osla </td><td> C 51 H 96 O 6 </td><td> 827.7 </td></tr><tr><td> PPoPo, PMYO </td><td> C 51 H 94 O 6 </td><td> 825,7 </td></tr><tr><td> LnLnLa </td><td> C 51 H 86 O 6 </td><td> 817.6 </td></tr><tr><td> MMS, tokat, PPM </td><td> C 49 H 94 O 6 </td><td> 801,7 </td></tr><tr><td> SLaPo, PPOM, PPMy </td><td> C 49 H 92 O 6 </td><td> 799,7 </td></tr><tr><td> PoPoM, OOCa </td><td> C 49 H 90 O 6 </td><td> 797,7 </td></tr><tr><td> MMP </td><td> C 47 H 90 O 6 </td><td> 773,7 </td></tr><tr><td> MMPo, Ocap </td><td> C 47 H 88 O6 </td><td> 771,7 </td></tr><tr><td> OCaPo </td><td> C 47 H 86 O 6 </td><td> 769.6 </td></tr><tr><td> MMM, PPCa, PMLa </td><td> C 45 H 86 O 6 </td><td> 745.6 </td></tr><tr><td> PoPCa, PoMLa </td><td> C 45 H 84 O 6 </td><td> 743.6 </td></tr><tr><td> Popoca </td><td> C 45 H 82 O 6 </td><td> 741,6 </td></tr><tr><td> LaLaP, MMLa, PD </td><td> C 43 H 82 O 6 </td><td> 717,6 </td></tr><tr><td> LaLaPo </td><td> C 43 H 80 O 6 </td><td> 715,6 </td></tr><tr><td> OO </td><td> C 39 H 72 O 5 </td><td> 643,5 </td></tr><tr><td> OL </td><td> C 39 H 70 O 5 </td><td> 641.5 </td></tr><tr><td> LL </td><td> C 39 H 68 O 5 </td><td> 639.5 </td></tr><tr><td> SP </td><td> C 37 H 72 O 5 </td><td> 619,5 </td></tr><tr><td> OP </td><td> C 37 H 70 O 5 </td><td> 617,5 </td></tr><tr><td> LP </td><td> C 37 H 68 O 5 </td><td> 615.5 </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Yağ asidi kompozisyonu, element bileşimi ve triasilgliseridler ve diasilgliseridler of sodiated adüktlerinin izotopik kütle. Ln = linoleik asit (18:3), L = linoleik asit (18:2), O = oleik asit (18:1), S = stearik asit (18:00), P = palmitik asit (16:00), Po = palmitoleik asit (16:01), M = miristik asit (14:00), En = miristoleik asit (14:1) La = laurik asit (12:00), Ca = kaprik asit (10:00). <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/50757/50757fig1.jpg" /> Şekil 1. Dietil eter: asetik asit heksan geniş lipid sınıf ayırma ince katmanlı kromatogram(80:20:2 v / v / v), mobil faz olarak. Sterol ve FFA arasında bir bant, bir standart ile tespit edilmemiştir, ancak bir yağlı alkol ya da diester mum olabilir. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/50757/50757fig2.jpg" /> Şekil 2. Sodiated TAG&#39;lerin MALDI-TOF kütle spektrumunun genişletilmiş TAG bölgesi. - Doğu kırmızı yarasa (L. borealis) kanat doku dan (m / z 700 950) m / z 853,7 (OOM, PPL, POPOS, Popo) ve m tespit Peaks / z 879,7 (LOP, LnSP, LSPo). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50757/50757fig2large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/50757/50757fig3.jpg" /> Şekil 3,. Doğu kırmızı yarasa (L. borealis) saç doku dan - sodiated TAG&#39;lerin (950 m / z 700) MALDI-TOF kütle spektrumunun genişletilmiş TAG bölgesi.M / z 905,8 (LOO, LLS) ve m / z 907,8 (OOO, LnSS, LSO) de tespit Peaks. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50757/50757fig3large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/50757/50757fig4.jpg" /> Şekil 4. Sodiated DAG parçalarının MALDI-TOF kütle spektrumu (m / z 530-730) ve DAG bölgesi. Doğu kırmızı sopasının (L. borealis) kanat doku m / z 643,5 (OO) ve m / z 615,5 (LP) de tanımlanan Merkezleri . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50757/50757fig4large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> .

Watch this Scientific Journal Video about Profiling the Triacylglyceride Contents in Bat Integumentary Lipids by Preparative Thin Layer Chromatography and MALDI-TOF Mass Spectrometry at JoVE.com

Profiling the Triacylglyceride Contents in Bat Integumentary Lipids by Preparative Thin Layer Chromatography and MALDI-TOF Mass Spectrometry

Memeli integument bireysel türlerin kimyasal bileşimleri özelliği sağlayabilir çözücü-ekstrakte lipidler içerir. Bu çalışma, ince tabaka kromatografisi kullanılarak deriye ait dokulardan izole geniş bir lipit sınıfları ayıran ve matris destekli lazer desorpsiyon / iyonizasyon time-of-flight kütle spektrometresi ile triasilgliseridler profilini belirlemek için rutin bir yöntem sunar.

Hazırlayıcı ince tabaka kromatografisi ve MALDI-TOF kütle spektrometresi ile Bat Örtü Lipidler triasilgliseridler İçeriği profil

The mammalian integument includes sebaceous glands that secrete an oily material onto the skin surface. Sebum production is part of the innate immune ...

profiling-triacylglyceride-contents-bat-integumentary-lipids

Research

JoVE Journal

Chemistry

21.1K Görüntüleme.  Arkansas State University.  Memeli integument bireysel türlerin kimyasal bileşimleri özelliği sağlayabilir çözücü-ekstrakte lipidler içerir. Bu çalışma, ince tabaka kromatografisi kullanılarak deriye ait dokulardan izole geniş bir lipit sınıfları ayıran ve matris destekli lazer desorpsiyon / iyonizasyon time-of-flight kütle spektrometresi ile triasilgliseridler profilini belirlemek için rutin bir yöntem sunar. 

Video: Profiling the Triacylglyceride Contents in Bat Integumentary Lipids by Preparative Thin Layer Chromatography and MALDI-TOF Mass Spectrometry

Large Scale Non-targeted Metabolomic Profiling of Serum by Ultra Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (UPLC-MS)

Non-targeted metabolite profiling by ultra performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry (UPLC-MS) is a powerful technique to investigate metabolism. The approach offers an unbiased and in-depth analysis that can enable the development of diagnostic tests, novel therapies, and further our understanding of disease processes. The inherent chemical diversity of the metabolome creates significant analytical challenges and there is no single experimental approach that can detect all metabolites. Additionally, the biological variation in individual metabolism and the dependence of metabolism on environmental factors necessitates large sample numbers to achieve the appropriate statistical power required for meaningful biological interpretation. To address these challenges, this tutorial outlines an analytical workflow for large scale non-targeted metabolite profiling of serum by UPLC-MS. The procedure includes guidelines for sample organization and preparation, data acquisition, quality control, and metabolite identification and will enable reliable acquisition of data for large experiments and provide a starting point for laboratories new to non-targeted metabolite profiling by UPLC-MS.

Large Scale Non-targeted Metabolomic Profiling of Serum by Ultra Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry UPLC-MS

Non-targeted metabolite profiling by ultra performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry (UPLC-MS) is a powerful technique to investigate metabolism. This article outlines a typical workflow utilized for non-targeted metabolite profiling of serum including sample organization and preparation, data acquisition, data analysis, quality control, and metabolite identification.

Ultra Performans Sıvı Kromatografisi-Kütle Spektrometresi (UPLC-MS) ile Serum Büyük Ölçekli Sigara hedefli metabolomik Profilleme

Non-targeted metabolite profiling by ultra performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry (UPLC-MS) is a powerful technique to ...

Kimya

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first separated into polar and non-polar fractions by a liquid-liquid phase extraction, and partially purified to facilitate downstream analysis. Both aqueous (polar metabolites) and organic (non-polar metabolites) phases of the initial extraction are processed to survey a broad range of metabolites. Metabolites are separated by different liquid chromatography methods based upon their partition properties. In this method, we present microflow ultra-performance (UP)LC methods, but the protocol is scalable to higher flows and lower pressures. Introduction into the mass spectrometer can be through either general or compound optimized source conditions. Detection of a broad range of ions is carried out in full scan mode in both positive and negative mode over a broad m/z range using high resolution on a recently calibrated instrument. Label-free differential analysis is carried out on bioinformatics platforms. Applications of this approach include metabolic pathway screening, biomarker discovery, and drug development.

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

Untargeted metabolomics provides a hypothesis generating snapshot of a metabolic profile. This protocol will demonstrate the extraction and analysis of metabolites from cells, serum, or tissue. A range of metabolites are surveyed using liquid-liquid phase extraction, microflow ultraperformance liquid chromatography/high-resolution mass spectrometry (UPLC-HRMS) coupled to differential analysis software.

Ultra Performanslı Sıvı Kromatografi-Yüksek Çözünürlüklü Kütle Spektrometre (UPLC-HRMS) kullanarak Biyolojik Kaynaklar gelen hedefsiz Metabolomik

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight (MALDI-TOF) Mass Spectrometric Analysis of Intact Proteins Larger than 100 kDa

Effectively determining masses of proteins is critical to many biological studies (e.g. for structural biology investigations). Accurate mass determination allows one to evaluate the correctness of protein primary sequences, the presence of mutations and/or post-translational modifications, the possible protein degradation, the sample homogeneity, and the degree of isotope incorporation in case of labelling (e.g. 13C labelling).
Electrospray ionization (ESI) mass spectrometry (MS) is widely used for mass determination of denatured proteins, but its efficiency is affected by the composition of the sample buffer. In particular, the presence of salts, detergents, and contaminants severely undermines the effectiveness of protein analysis by ESI-MS. Matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) MS is an attractive alternative, due to its salt tolerance and the simplicity of data acquisition and interpretation. Moreover, the mass determination of large heterogeneous proteins (bigger than 100 kDa) is easier by MALDI-MS due to the absence of overlapping high charge state distributions which are present in ESI spectra.
Here we present an accessible approach for analyzing proteins larger than 100 kDa by MALDI-time of flight (TOF). We illustrate the advantages of using a mixture of two matrices (i.e. 2,5-dihydroxybenzoic acid and &#945;-cyano-4-hydroxycinnamic acid) and the utility of the thin layer method as approach for sample deposition. We also discuss the critical role of the matrix and solvent purity, of the standards used for calibration, of the laser energy, and of the acquisition time. Overall, we provide information necessary to a novice for analyzing intact proteins larger than 100 kDa by MALDI-MS.

Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight MALDI-TOF Mass Spectrometric Analysis of Intact Proteins Larger than 100 kDa

Accurate mass measurement represents an important step during the investigation of proteins. Matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) mass spectrometry (MS) can be used for such determination and its key advantage is the tolerance to salts, detergents and contaminants. Here we illustrate an accessible approach for the analysis of proteins larger than 100 kDa by MALDI-MS.

Uçuş lazer desorpsiyon / iyonizasyon zaman sağlam proteinler (MALDI-TOF) kütle spektrometrik analizi Matris destekli daha büyük 100 kDa

Effectively determining masses of proteins is critical to many biological studies (e.g. for structural biology investigations). Accurate mass ...

An HS-MRM Assay for the Quantification of Host-cell Proteins in Protein Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography Ion Mobility QTOF Mass Spectrometry

The analysis of low-level (1-100 ppm) protein impurities (e.g., host-cell proteins (HCPs)) in protein biotherapeutics is a challenging assay requiring high sensitivity and a wide dynamic range. Mass spectrometry-based quantification assays for proteins typically involve protein digestion followed by the selective reaction monitoring/multiple reaction monitoring (SRM/MRM) quantification of peptides using a low-resolution (Rs ~1,000) tandem quadrupole mass spectrometer. One of the limitations of this approach is the interference phenomenon observed when the peptide of interest has the "same" precursor and fragment mass (in terms of m/z values) as other co-eluting peptides present in the sample (within a 1-Da window). To avoid this phenomenon, we propose an alternative mass spectrometric approach, a high selectivity (HS) MRM assay that combines the ion mobility separation of peptide precursors with the high-resolution (Rs ~30,000) MS detection of peptide fragments. We explored the capabilities of this approach to quantify low-abundance peptide standards spiked in a monoclonal antibody (mAb) digest and demonstrated that it has the sensitivity and dynamic range (at least 3 orders of magnitude) typically achieved in HCP analysis. All six peptide standards were detected at concentrations as low as 0.1 nM (1 femtomole loaded on a 2.1-mm ID chromatographic column) in the presence of a high-abundance peptide background (2 &#181;g of a mAb digest loaded on-column). When considering the MW of rabbit phosphorylase (97.2 kDa), from which the spiked peptides were derived, the LOQ of this assay is lower than 50 ppm. Relative standard deviations (RSD) of peak areas (n = 4 replicates) were less than 15% across the entire concentration range investigated (0.1-100 nM or 1-1,000 ppm) in this study.

Here, we describe a chromatographic assay coupled with the ion mobility separation of peptide precursors followed by the high-resolution (~30,000) MS-detection of peptide fragments for the quantification of spiked peptide standards in a monoclonal antibody digest.

Bir HS-MRM tahlil için Protein Biyofarmasötikler sıvı Kromatografi iyon hareketlilik QTOF kütle spektrometresi tarafından Host-hücre proteinleri miktar

The analysis of low-level (1-100 ppm) protein impurities (e.g., host-cell proteins (HCPs)) in protein biotherapeutics is a challenging assay requiring ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental exposure in a non-invasive manner. In this work, we present a protocol to characterize the exhaled VOCs in real time by using secondary nanoelectrospray ionization coupled to high resolution mass spectrometry (Sec-nanoESI-HRMS). The homemade Sec-nanoESI source was readily set up based on a commercial nanoESI source. Hundreds of peaks were observed in the background-subtracted mass spectra of exhaled breath, and the mass accuracy values are -4.0-13.5 ppm and -20.3-1.3 ppm in the positive and negative ion detection modes, respectively. The peaks were assigned with accurate elemental composition according to the accurate mass and isotopic pattern. Less than 30 s is used for one exhalation measurement, and it takes approximately 7 min for six replicated measurements.

A protocol for characterizing chemical composition of exhaled breath in real time by using secondary nanoelectrospray ionization coupled to high resolution mass spectrometry is demonstrated.

İkincil Nanoelectrospray iyonlaşma kullanarak gerçek zamanlı nefes analiz için yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi birleştiğinde

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

Synthesis and Mass Spectrometry Analysis of Oligo-peptoids

Peptoids are sequence-controlled peptide-mimicking oligomers consisting of N-alkylated glycine units. Among many potential applications, peptoids have been thought of as a type of molecular information storage. Mass spectrometry analysis has been considered the method of choice for sequencing peptoids. Peptoids can be synthesized via solid phase chemistry using a repeating two-step reaction cycle. Here we present a method to manually synthesize oligo-peptoids and to analyze the sequence of the peptoids using tandem mass spectrometry (MS/MS) techniques. The sample peptoid is a nonamer consisting of alternating N-(2-methyloxyethyl)glycine (Nme) and N-(2-phenylethyl)glycine (Npe), as well as an N-(2-aminoethyl)glycine (Nae) at the N-terminus. The sequence formula of the peptoid is Ac-Nae-(Npe-Nme)4-NH2, where Ac is the acetyl group. The synthesis takes place in a commercially available solid-phase reaction vessel. The rink amide resin is used as the solid support to yield the peptoid with an amide group at the C-terminus. The resulting peptoid product is subjected to sequence analysis using a triple-quadrupole mass spectrometer coupled to an electrospray ionization source. The MS/MS measurement produces a spectrum of fragment ions resulting from the dissociation of charged peptoid. The fragment ions are sorted out based on the values of their mass-to-charge ratio (m/z). The m/z values of the fragment ions are compared against the nominal masses of theoretically predicted fragment ions, according to the scheme of peptoid fragmentation. The analysis generates a fragmentation pattern of the charged peptoid. The fragmentation pattern is correlated to the monomer sequence of the neutral peptoid. In this regard, MS analysis reads out the sequence information of the peptoids.

A protocol is described for the manual synthesis of oligo-peptoids followed by sequence analysis by mass spectrometry.

Sentez ve kütle spektrometresi analizleri Oligo-peptoids

Peptoids are sequence-controlled peptide-mimicking oligomers consisting of N-alkylated glycine units. Among many potential applications, peptoids have ...

Characterization of Synthetic Polymers via Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight (MALDI-TOF) Mass Spectrometry

There are many techniques that can be employed in the characterization of synthetic homopolymers, but few provide as useful of information for end group analysis as matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS). This tutorial demonstrates methods for optimization of the sample preparation, spectral acquisition, and data analysis of synthetic polymers using MALDI-TOF MS. Critical parameters during sample preparation include the selection of the matrix, identification of an appropriate cationization salt, and tuning the relative proportions of the matrix, cation, and analyte. The acquisition parameters, such as mode (linear or reflector), polarization (positive or negative), acceleration voltage, and delay time, are also important. Given some knowledge of the chemistry involved to synthesize the polymer and optimizing both the data acquisition parameters and the sample preparation conditions, spectra should be obtained with sufficient resolution and mass accuracy to enable the unambiguous determination of the end groups of most homopolymers (masses below 10,000) in addition to the repeat unit mass and the overall molecular weight distribution. Though demonstrated on a limited set of polymers, these general techniques are applicable to a much wider range of synthetic polymers for determining mass distributions, though end group determination is only possible for homopolymers with narrow dispersity.

Characterization of Synthetic Polymers via Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight MALDI-TOF Mass Spectrometry

A protocol for the matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) characterization of synthetic polymers is described including the optimization of sample preparation, spectral acquisition, and data analysis.

Matris ile sentetik polimerler karakterizasyonu Lazer Desorpsiyon iyonlaşma zaman uçuş (MALDI-TOF) kütle spektrometresi destekli

There are many techniques that can be employed in the characterization of synthetic homopolymers, but few provide as useful of information for end group ...

Analyzing Protein Architectures and Protein-Ligand Complexes by Integrative Structural Mass Spectrometry

Proteins are an important class of biological macromolecules that play many key roles in cellular functions including gene expression, catalyzing metabolic reactions, DNA repair and replication. Therefore, a detailed understanding of these processes provides critical information on how cells function. Integrative structural MS methods offer structural and dynamical information on protein complex assembly, complex connectivity, subunit stoichiometry, protein oligomerization and ligand binding. Recent advances in integrative structural MS have allowed for the characterization of challenging biological systems including large DNA binding proteins and membrane proteins. This protocol describes how to integrate diverse MS data such as native MS and ion mobility-mass spectrometry (IM-MS) with molecular dynamics simulations to gain insights into a helicase-nuclease DNA repair protein complex. The resulting approach provides a framework for detailed studies of ligand binding to other protein complexes involved in important biological processes.

Mass spectrometry (MS) has emerged as an important tool for the investigation of structure and dynamics of macromolecular assemblies. Here, we integrate MS-based approaches to interrogate protein complex formation and ligand binding.

Protein mimarileri ve Protein-Ligand komplekslerinin bütünleştirici yapısal kütle spektrometresi tarafından analiz

Proteins are an important class of biological macromolecules that play many key roles in cellular functions including gene expression, catalyzing ...

The Effect of Anodization Parameters on the Aluminum Oxide Dielectric Layer of Thin-Film Transistors

Aluminum-oxide (Al2O3) is a low cost, easily processable and high dielectric constant insulating material that is particularly appropriate for use as the dielectric layer of thin-film transistors (TFTs). Growth of aluminum-oxide layers from anodization of metallic aluminum films is greatly advantageous when compared to sophisticated processes such as atomic layer deposition (ALD) or deposition methods that demand relatively high temperatures (above 300 &#176;C) such as aqueous combustion or spray-pyrolysis. However, the electrical properties of the transistors are highly dependent on the presence of defects and localized states at the semiconductor/dielectric interface, which are strongly affected by the manufacturing parameters of the anodized dielectric layer. To determine how several fabrication parameters influence the device performance without performing all possible combination of factors, we used a reduced factorial analysis based on a Plackett-Burman design of experiments (DOE). The choice of this DOE permits the use of only 12 experimental runs of combinations of factors (instead of all 256 possibilities) to obtain the optimized device performance. The ranking of the factors by the effect on device responses such as the TFT mobility is possible by applying analysis of variance (ANOVA) to the obtained results.

Anodization parameters for growth of the aluminum-oxide dielectric layer of zinc-oxide thin-film transistors (TFTs) are varied to determine the effects on the electrical parameter responses. Analysis of variance (ANOVA) is applied to a Plackett-Burman design of experiments (DOE) to determine the manufacturing conditions that result in optimized device performance.

İnce Film Transistörlerinin Alüminyum Oksit Dielektrik Tabakasına Anodizasyon Parametrelerinin Etkisi

Aluminum-oxide (Al2O3) is a low cost, easily processable and high dielectric constant insulating material that is particularly appropriate for use as the ...

Fabrication of Thin Film Silver/Silver Chloride Electrodes with Finely Controlled Single Layer Silver Chloride

This paper aims to present a protocol to form smooth and well-controlled films of silver/silver chloride (Ag/AgCl) with designated coverage on top of thin film silver electrodes. Thin film silver electrodes sized 80 &#181;m x 80 &#181;m and 160 &#181;m x 160 &#181;m were sputtered on quartz wafers with a chromium/gold (Cr/Au) layer for adhesion. After passivation, polishing and cathodic cleaning processes, the electrodes underwent galvanostatic oxidation with consideration of Faraday&#39;s Law of Electrolysis to form smooth layers of AgCl with a designated degree of coverage on top of the silver electrode. This protocol is validated by inspection of scanning electron microscope (SEM) images of the surface of the fabricated Ag/AgCl thin film electrodes, which highlights the functionality and performance of the protocol. Sub-optimally fabricated electrodes are fabricated as well for comparison. This protocol can be widely used to fabricate Ag/AgCl electrodes with specific impedance requirements (e.g., probing electrodes for impedance sensing applications like impedance flow cytometry and interdigitated electrode arrays).

This paper aims to present a method to form smooth and well-controlled films of silver chloride (AgCl) with designated coverage on top of thin film silver electrodes.

İnce Kontrollü Tek Katmanlı Gümüş Klorürlü İnce Film Gümüş/Gümüş Klorür Elektrotlarının İmalatı

This paper aims to present a protocol to form smooth and well-controlled films of silver/silver chloride (Ag/AgCl) with designated coverage on top of thin ...