Biz yazının eleştiri Brian K. Washburn teşekkür KMJ 20582 - Bu çalışma USDA Ulusal Gıda ve Tarım Enstitüsü, Tarım ve Gıda Araştırma Girişimi hibe 2010-65108 tarafından finanse edildi.

Adımların gerçekleştirilmesi 1, 2, 4, ve steril bir laminar akış başlığı içinde 6 önerilir. 1.. M. hazırlanması truncatula A17 Fideler Not: M. Bu çalışmalarda kullanılan truncatula A17 tohumlar 22 ° C ° &#39;de veya ~ 150-400 mmol / m-2 s -1 ışık ile 22-26 ° C de muhafaza edilen bir bitki büyüme odasında soğutuldu, sera koşulları altında üretilmektedir. <ol><li> Tohum çimlenme plakaları dökün: 100 mm kare plakaları (derinlik 15 mm) kullanın ve 3-5 mm derinliğe kadar 10 ağar arıtılmış w / v otoklava 1.1-1.2% dökün. Her bir plaka (63-125 tohum / plaka eşdeğeri) tohum ~ 0,25-0,5 g çimlenmeye kullanılacaktır. Not: Bu protokolde tarif edilen tüm levhalar için bitki hücre kültür içinde test edilmiş, arıtılmış, agar kullanımı için çok önemlidir. Agar için satıcı ve katalog numarası bilgileri özel reaktifler ve ekipman Tablo listelenir. </li><li> Kanatın / M. sterilize truncatula A17 tohums: fidan istenilen sayıda için yeterli tohum tartılır. (, Bu ~ 63-125 tohumu 0,25-0,5 g tohum / şişe) ve pipet konsantre edildi (% 96) 20 ml steril folyo kapakları ile steril 125 ml şişelere yer tohumları (M. A17 tohumları, ~ 4 mg olan truncatula) H 2 SO şişenin yanları boyunca 4. Not: Asit scarification tohum sterilize edecek. Aynı zamanda, şişenin yanları boyunca asit pipetleme, bu sterilize edilmemiş tohumları ile temas halinde olan şişenin içine yeniden sterilize olacaktır. </li><li> Steril bir cam pipet ile tohum öbekler kırmak. 10-12 dakika boyunca sık sık, her şişe döndürülür. Küçük, kahverengi çukurları tohumlar üzerinde görünür hale gelecektir. Bu tohum kat 11 küçük delikler vardır. Not: SO 4 konsantre H 2 ile çalışırken koruyucu gözlük ve eldiven giyin. </li><li> SO 4 H 2 çıkarın ve tohum durulama: tohumların en az% 10, küçük kahverengi çukurları ya da 12 dk olduğunda geçti, hangisiilk olarak söz konusu olduğunda, steril bir cam pipet ile şişelerden ALL asiti çıkarmak. (En az 300 ml musluk suyu ihtiva eden bir 1-2 L behere yer atık asit elde edildi. Bu seyreltik asit ve aşırı ısınmayı önler. Doyurmaya) şişenin eğrisinde kalan asidi toplamak için şişeyi yatırın ve küçük bir cam pipet için kullanımı Tüm geri kalan asidi çıkarmak. Kalan asit kalırsa, bu, durulama su ile reaksiyona tohumları ısıtmak ve onları öldürecek. <ol><li> Hızlı bir şekilde her şişeye steril aşırı saf su ve 100 ml dökülerek tohum durulayın. Suyun fazla hacmi seyreltik asit ve su ile asidin reaksiyonu esnasında aşırı ısınma ve tohum zarar görmesini engeller. Su dökün ve şişenin dudak alev sterilize edin. </li><li> Steril aşırı saf 50 ml su ile tohum 8-10x durulayın. Her durulama sırasında şişeyi girdap. Şişe bu noktada steril olduğu kabul edilmelidir ve şişenin her bir dudak durulama önce yakılmış olmalıdır. </li></ol></li><li> Tohumlar gecede öğrenmek edelim: Mesaison durulama, gece boyunca karanlıkta 4 ° C de, her bir kaba ve bir yere steril folyo kapağı yerine, her bir şişeye 50 ml steril saf su dökün. </li><li> Çimlenme tabakta Yeri tohumları: icar tohumları gecede öğrenmek sonra, tohum tekrar süspansiyon ve bir 1.1-1.2% agar çimlenme plaka üzerine dökmek için 20 ml steril saf su, girdap eklemek sonra, ~ 25 ml saf su ile 2x yıkayın, suyu dökün 1.1 adım. Tohum şişe içinde kalır, daha fazla su ilave edin ve tekrar dökün. Her bir şişeden bir plaka (63-125 tohum / plaka) için tohum dağıtın. <ol><li> Tohum dağıtmak için plaka çalkalanır. Tohumlar, plakanın bir ucunda bir 4-5 cm bandında eşit dağıtılmalıdır. Bu plakanın &quot;üst&quot; olacaktır. &quot;Alt&quot;, 5-6 cm (Şekil 2A) Tohumların serbest tutulmalıdır. </li><li> Steril bir pipet ile suyu çizin. Plakanın altına kalan su tahliye etmek için bir 45 ° açıyla plaka eğin. Til üzerindeki kapağı değiştirinted plakası ve ışıktan korumak. Plakalar, 10-20 dakika boşaltmak için izin verilmelidir. (Şekil 2B). </li></ol></li><li> Çimlenmesini kurmak: Steril bir pipet ile eğik plakanın altındaki topladığı tüm suyunu çıkartın. <ol><li> Kapağı takın ve parafilm plaka mühür. Eldiven giyin ve (Şekil 2C) steril tutmak. </li><li> Çimlenme plakaları yığını ve daha sonra bir 90 ° açıyla hepsini açmak. Tohumlar agar dikey yüzey yatan olacaktır. Tamamen emdirilmiş tohumlar kolaylıkla ağar uymalıdır. Kökleri aşağıya doğru (Şekil 2B) artacak. </li><li> Işığı bloke eder ve 3 gün boyunca 25 ° C&#39;de tutmak için folyo çimlenme plakaların yığınını sarın. </li></ol></li></ol> Not: en az 3 gün boyunca çimlenme gelirleri ise, kökleri mikrokosmlarından yılında agar ulaşmak için çok kısa olabilir. Çimlenme daha 4 gün evren plakaları aktarılmadan önce devam ederse, fidelerin hayatta olacakfakir. Eğer M. daha yavaş çimlenme oranları ile truncatula ekotipler veya mutantlan karşılaştırılacak olan, yavaş yavaş filizlenen ekotip 3 günden daha fazla çimlenme izin verilmelidir. 2. Bireysel Plate microcosms hazırlanması <ol><li> Her mikrokozmosu için Jensen orta 12 (kompozisyon bkz. Tablo 1), izin ~ 70 ml ortamı hazırlayın. Için uygundur sürahi veya şişeler içinde hazırlayın hızlı dökme (sürahi başına en fazla 1-2 L) ve otoklav sırasında sürahi bir manyetik karıştırma çubuğu bırakın. <ol><li> Orta ~ 55-65 ° C, takviyeleri ilave edilmiştir soğuyana ve pH (bkz. Tablo 1) kontrol edildikten sonra, yuvarlak 100 mm çaplı içine 15 mm derin plakaları dökün. Tabaklar ~ 0,9-1 cm derinliğinde (~ 70 ml / plaka) dökülmelidir. </li><li> Jensen ortamının bileşenleri bulanık bir çökelti meydana getirebilir, bu nedenle yerleştikten bileşenleri önlemek için periyodik olarak manyetik karıştırma plakasına sürahi dönmek için önemlidir. Çökeltiler vis olabilirkatılaşma sonra plakadaki bağdaş ve sürece eşit plakalar arasında dağıtılır olarak performansını etkilemez. </li><li> Plaka kapaklarındaki yoğuşma oluşumunu önlemek için dökme sırasında plakaları yığını. </li></ol></li><li> Jensen plakaları katılaşan sonra, bir U-şekilli 5 (Şekil 3A) bükülmüş olan bir tartı spatula ile iki tabak ve kapaklar çentik. Kırmızı sıcak, çentik 5-6 plakalar kadar bir brülör ile spatula bend ısıtın ve sonra tekrar ısı. Çentikli kapak çentikli plakası üzerine yerleştirilir, bu fidenin ateş (Şekil 3B) artacak, üzerinden bir oval portal oluşturacaktır. Çentikli plakaları saklanacak ise, parafin film ile ayrı ayrı sarın .. </li></ol> 3. Sinorhizobium meliloti hazırlanması Kültürleri İki gün bitki inokulasyonlarda önce, tüm S. kültürleri başlar meliloti fideleri üzerine inoküle edilecek suşları. Cultures LBMC 2.5 mM MgSO 4, 2.5 mM CaCI2, ve uygun antibiyotikler (TY ortam ayrıca iyi çalışır) ile desteklenmiş (Luria-Bertani [Miller]) ortamı içinde 13 yetiştirilmelidir. Her kültürün az 2-3 ml yeterli olacaktır. <ol><li> Hücreler yoğun kadar 2 gün boyunca çalkalanarak 30 ° C&#39;de büyür. </li><li> Çoğu bitki aşıları için, S. büyüme fazı meliloti kritik değildir. Tipik olarak, geç log ya da erken durağan faz hücreleri kullanılır. </li></ol> 4. M. dışarı atarken Bireysel Mikrokozmoslar üzerinde truncatula Fideler <ol><li> 3 gün sonra, (aşama 1 &#39;de hazırlanan) bir çimlenme plakası açık ve derhal steril aşırı saf su ile sel. Dip etanol ve sterilize etmek alev kısaca forseps. Hafifçe kurumasını önlemek için su altında tüm fidan kök ipuçları itmek için steril forseps kullanın. Kökleri uzun 2-6 cm arasında değişmektedir. Çoğunluk 3-4 cm olacaktır. Düz kökleri ve hiçbir belirgin ile fidan seçindefektleri. </li><li> Yoğuşma birikmesi için Jensen orta mikrokosmlarından kapaklarını kontrol ediniz. Yoğunlaşma kaldırmak veya yeni bir çentikli kapak ile değiştirmek için kapağı hafifçe vurun. Kapağın üzerinde yoğunlaşma fazlalığı varsa, fide kök kapağa yapışabilir ve yoğunlaşma kuruduktan sonra daha sonra ölür. </li><li> Forseps kullanarak, hafifçe kotiledonlarının tarafından çimlenme plakadan bir fide almak ve Jensen orta mikrokozmos üzerindeki kök yatıyordu. Kök ucu agar ile temas halinde olduğundan emin olun. </li><li> Hala mevcut olup olmadığını nazikçe tohum kat kaldırmak. Tohum kabukları 5-10 dakika boyunca suda ıslatıldıktan sonra gevşek olmalıdır. Yavaşça yol verir kadar forseps ile tohum ceket kızdırmak, ve atın. Sürgün Kotiledonlar ve yaklaşık olarak 0.5 cm plaka (Şekil 4A) &#39;de U-çentik üzerinden çıkıntı gerekir. Dikkatlice fide (Şekil 4B) için bir portal oluşturma, fidenin üzerinde kapağın U-çentik ile plaka kapağı yerine takın.Tüm fidanları mikrokosmlarından konuldu kadar yatay yığınlar kenara tabak ayarlayın. </li><li> Canlı bakmak ve düz bir kök var her çimlenme plaka tüm fide kullanın. (Mümkünse, hemen aşılamadan önce solmuş fide için yedek olarak kullanmak için açılmamış fidelerin bir tabak bırakın.) </li><li> Tüm fidan dışarı atarken sonra, onları yatay Jensen mikrokosmlarından oturmak için izin verirken S. meliloti inokulum süspansiyonlar hazırlanmaktadır. </li></ol> 5. S. hazırlanması meliloti Aşı Cezalı <ol><li> S. edin onlar büyüyor emin olmak için periyodik aşılamadan sonra kültürleri meliloti. 2 günlük bir büyümeden sonra, OD 600 2 ve 4 arasında olmalıdır. </li><li> Pipet steril bir 1.5 ml tüp ve pelet için santrifüje her bir kültür 0.5 ml. Süpernatantı. </li><li> % 0.85 NaCl veya steril aşırı saf, steril su içinde ya da hücreler, iki kez yıkayın. 0.5 ml% 0,85 ste hücrelerin yeniden süspanseNaCl veya saf su kızdırmak. </li><li> S. yeniden süspansiyon haline getirilmiş bir 1/10 sulandırma OD 600 ölçün adım 5.3 den kültürleri meliloti. Bu okuma göre, OD 600 = 0.05 steril aşırı saf su içinde her bir kültürün bir süspansiyon elde etmek. Hücre yoğunluğu çok yüksekse, nodülasyon inhibe edilebilir. 100 ul her bir fide üzerine aşılanır, böylece seyreltik süspansiyonun yeterince olun. OD 600 = 0.05 süspansiyon bulutluluk gözle zar zor algılanabilir olmalıdır. </li></ol> 6. Aşılama ve mikrokosmlarından Sızdırmazlık <ol><li> Hemen öncesinde başlayan İnokülasyonlara, Jensen orta mikrokosmlarından için transferi hayatta değil soldu fidelerin kontrol edin. Çimlenme plakalardan taze fidan olan fidan değiştirin. </li><li> Her evren açın ve uygun S. 100 ul aşılamak fide kök üzerine süspansiyon meliloti. Kapağı takın ve yatay istiflenmiş kenara koyun6-10 mikrokosmlarından ks. Her S. meliloti gerginlik karşılaştırıldığında olmak, en az 15 bitki aşılamak. Simbiyotik verimlilik ince farklar var suşları için, 30-35 bitkiler aşılamak. Bir negatif kontrol olarak, aşılanmamış en az 10 bitkiler bırakın. S. ile 30-35 bitkiler inoküle meliloti 1021 veya diğer uygun doğal tipte suş, pozitif kontrol olarak hizmet vermektedir. </li><li> Sonra, S. meliloti süspansiyon, kök yüzeyi üzerine adsorbe etmek için zaman oldu ve süspansiyon, sıvı, agar (en az 20 dak.) içine batırılmış, parafin film ile her bir levha sarın. Tabaklar çentik çok kenarına sarılmış olmalı, ancak parafin filmi fide (Şekil 4C) büyümesini engellemek gerekir. </li><li> Sarma sırasında, plaka kapağın içine yapıştırılmış kökleri için bir kez kontrol edin. , Kapaktan yapışmış kökleri kaldırın bankta düz plaka yatıyordu ve ağar su üzerine tekrar aşağı kök vurmak için kapağı dokunun veya fiskerface. </li><li> 6-10 plakaların her yığınının fide portalları hizaya. Fide (Şekil 4D) yukarı işaret eden bir 90 ° açıyla yığını yatıyordu. Parafin filmin yapışkanlığı fideleri (Şekil 4E) ortaya çıktığı açılmamış bir 1-2 cm şerit bırakarak folyo yığının tamamını sarmak için yeterince uzun levhaları yerinde tutacaktır. Folyo ışıktan kökleri koruyacaktır. </li><li> (16 saat ışık / 8 saat karanlık döngüsünde 21-25 ° C,% 60-70 nispi nem ve 100-175 umol / m-2 s -1 ışık ışıklı bir büyütme odası ya da büyüme odasında folyo sarılmış yığınları yerleştirin Şekil 1A). Bu büyüme koşulları altında, ışık seviyelerinde uzun kuluçka daha yüksek 200 mol / m -2 s -1 bitki büyümesi üzerinde zararlı etkisi olabilir. </li></ol> 7. Kök Sistemleri ve Simbiyotik fenotipleri Nicel İncelenmesi Bitkiler korunabilirkadar 9 hafta boyunca mikrokozmosları. <ol><li> Nodül sayısı her yığından folyo açılması ve nodüller sayarak zaman noktalarının bir dizi de belirlenebilir. S ile aşılanmış bitkilerdeki nodülleri geliştirilmesi meliloti 1021 vahşi tip aşılamadan sonra 10-14 gün daha belirgindir. </li><li> Symbiotic verimliliği de ortaya çıkan sürgünün uzunluğunun ölçülmesi ile, her bir zaman noktasında ölçülebilir. </li><li> Simbiyotik verimlilik Final miktarlandınlması genellikle ateş ayırma ve sürgün taze ağırlığını ölçerek aşılamadan sonra 7 hafta gerçekleştirilir. Daha fazla büyüme isteniyorsa, bu adım olarak geç 9 hafta gibi gerçekleştirilebilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Galibert, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+composite+genome+of+the+legume+symbiont+Sinorhizobium+meliloti.">The composite genome of the legume symbiont Sinorhizobium meliloti.</a> Science. 293, 668-672 (2001).</li><li>Young, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Medicago+genome+provides+insight+into+the+evolution+of+rhizobial+symbioses.">The Medicago genome provides insight into the evolution of rhizobial symbioses.</a> Nature. 480, 520-524 (2011).</li><li>Glazebrook, J., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+techniques+in+Rhizobium+meliloti.">Genetic techniques in Rhizobium meliloti.</a> Methods Enzymol. 204, 398-418 (1991).</li><li>Cheng, X., Wen, J., Tadege, M., Ratet, P., Mysore, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+genetics+in+medicago+truncatula+using+Tnt1+insertion+mutants.">Reverse genetics in medicago truncatula using Tnt1 insertion mutants.</a> Methods Mol Biol. 678, 179-190 (2011).</li><li>Leigh, J. A., Signer, E. R., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exopolysaccharide-deficient+mutants+of+Rhizobium+meliloti+that+form+ineffective+nodules.">Exopolysaccharide-deficient mutants of Rhizobium meliloti that form ineffective nodules.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82, 6231-6235 (1985).</li><li>Wong, K. K. Y., Fortin, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Petri+Dish+Technique+for+the+Aseptic+Synthesis+of+Ectomycorrhizae.">A Petri Dish Technique for the Aseptic Synthesis of Ectomycorrhizae.</a> Canadian Journal of Botany-Revue Canadienne De Botanique. 67, 1713-1716 (1989).</li><li>Barker, D. G., Mathesius, U., Journet, E. P., Sumner, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Medicago truncatula handbook. , (2006).</li><li>Leonard, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simple+Assembly+for+Use+in+the+Testing+of+Cultures+of+Rhizobia.">A Simple Assembly for Use in the Testing of Cultures of Rhizobia.</a> J Bacteriol. 45, 523-527 (1943).</li><li>Trung, B. C., Yoshida, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+of+Leonard+jar+assembly+for+screening+of+effective+rhizobium.">Improvement of Leonard jar assembly for screening of effective rhizobium.</a> Soil Sci Plant Nutr. 29, 97-100 (1983).</li><li>Penmetsa, R. V., Cook, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+characterization+of+diverse+developmental+mutants+of+Medicago+truncatula.">Production and characterization of diverse developmental mutants of Medicago truncatula.</a> Plant Physiol. 123, 1387-1398 (2000).</li><li>Garcia, J., Barker, D. G., Journet, E. P., Mathesius, U., Journet, E. P., Sumner, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Medicago truncatula handbook. , (2006).</li><li>Vincent, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Manual for the Practical Study of the Root-Nodule Bacteria. , (1970).</li><li>Sambrook, J., Fritsch, E. F., Maniatis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular cloning: a laboratory manual. , (1982).</li><li>Pladys, D., Vance, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolysis+during+Development+and+Senescence+of+Effective+and+Plant+Gene-Controlled+Ineffective+Alfalfa+Nodules.">Proteolysis during Development and Senescence of Effective and Plant Gene-Controlled Ineffective Alfalfa Nodules.</a> Plant Physiology. 103, 379-384 (1993).</li><li>Vasse, J., de Billy, F., Truchet, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abortion+of+infection+during+the+Rhizobium+meliloti-alfalfa+symbiotic+interaction+is+accompanied+by+a+hypersensitive+reaction.">Abortion of infection during the Rhizobium meliloti-alfalfa symbiotic interaction is accompanied by a hypersensitive reaction.</a> The Plant J. 4, 555-566 (1993).</li><li>Johnson, L. E. B., Vance, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+and+Biochemical+Comparisons+of+Plant+Induced+Ineffective+Nodules.">Histological and Biochemical Comparisons of Plant Induced Ineffective Nodules.</a> Phytopathology. 71, 884 (1981).</li><li>Vance, C. P., Johnson, L. E. B., Hardarson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+Comparisons+of+Plant+and+Rhizobium+Induced+Ineffective+Nodules+in+Alfalfa.">Histological Comparisons of Plant and Rhizobium Induced Ineffective Nodules in Alfalfa.</a> Physiological Plant Pathology. 17, 167 (1980).</li><li>Van de Velde, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+in+legume+symbiosis.+A+molecular+view+on+nodule+senescence+in+Medicago+truncatula.">Aging in legume symbiosis. A molecular view on nodule senescence in Medicago truncatula.</a> Plant Physiol. 141, 711-720 (2006).</li><li>Jones, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+production+of+the+exopolysaccharide+succinoglycan+enhances+Sinorhizobium+meliloti+1021+symbiosis+with+the+host+plant+Medicago+truncatula.">Increased production of the exopolysaccharide succinoglycan enhances Sinorhizobium meliloti 1021 symbiosis with the host plant Medicago truncatula.</a> J Bacteriol. 194, 4322-4331 (2012).</li><li>Queiroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+genomics+screen+identifies+a+Sinorhizobium+meliloti+1021+sodM-like+gene+strongly+expressed+within+host+plant+nodules.">A comparative genomics screen identifies a Sinorhizobium meliloti 1021 sodM-like gene strongly expressed within host plant nodules.</a> BMC Microbiol. 12, 74 (2012).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Başarı için kritik olan protokolün birçok adım vardır: 1) saflaştırılmış, bitki hücre kültürü kullanarak gerekliliği ağar gereğinden fazla vurgulanan olamaz test. Bu, alfalfa fideleri için kritik öneme sahip değildir, ancak M. büyümesi için çok önemlidir truncatula A17. 2) Aşama 1 &#39;de tarif edildiği gibi, dikey agar plakaları üzerinde fide çimlenme için önemlidir. Fide kökleri düz çok kısa ve / veya değil, olacak çünkü 15 mm derin bir plaka 7 ter...

Baklagil konak bitki Medicago truncatula A17 ve Sinorhizobium 1021 meliloti rhizobial bakteri arasında etkileşim kök nodül gelişimi ve azot sabitleme ortak yaşam çalışma için en uysal bir model sistemlerinden biridir. Her iki simbiyotik ortakların genomları 1,2 dizilendi ve bitki ve bakteri hem genetik manipülasyon 3,4 mükellef bulunmaktadır. Bitki ve bakteri mutantlar hem fenotipleri Analizi nodül gelişme aşamalarını gözlemlemek ve zamanla simbiyotik verimliliğini ölçmek için yeteneği gerektirir. Burada M. kök nodül gelişme gözlem için bir yöntem tarif cv truncatula. S ile aşılandı Jemalong A17 standart, yuvarlak 100 mm çapında, 15 mm derinliğinde laboratuar plakaları (Şekil 1A) yapılan bireysel mikrokosmlarından içinde meliloti 1021. Sürgün plakanın tarafında çentikli bir portal (aracılığıyla maruz ve büyür Figüres 1B, 1C ve 1 E). Kökler microcosms içinde bulunan ve plaka (Şekil 1D) ve kapak boyunca gözlem izin verirken, steril tutulur. Sürgün erişilebilir olduğu için, büyüme kısıtlı değildir ve bu kök sterilitesini ödün vermeden periyodik aralıklarla ölçülebilir. Çentikli plaka Mikrokozmoslar oluşturma yöntem aslında yonca büyüyen bitkiler için Leigh, vd. 5 tarafından geliştirilen, ancak yaygın olarak diğer yöntemlere göre birçok avantajları rağmen kabul edilmedi. Bu yöntemin bir varyasyonu, aynı zamanda bitki köklerine ve mikorhizalların 6 arasındaki etkileşimin analizi için geliştirilmiştir. Şimdi M. büyümesi için uyarlanmış ve bu yöntemi optimize truncatula bitkiler. Daha yaygın olarak kullanılan yöntemlere göre bu protokol avantajları aşağıda tarif edilmektedir. M. nodülasyon çalışmalar için geniş şu anda kullanımda olan birkaç yöntem vardır truncatula inocuS. ile lated meliloti 7. Nodulated köklerin büyük ölçekli hazırlanması için en yaygın olarak kullanılan yöntem aeroponic kesonların 7 de büyüme. Bu yöntemde, bitki büyük bir kap üzerine asılır ve kökleri S. oluşan bir karışım ile havalandınlır meliloti ve besleyici çözelti 7. Bu yöntem pratik ise S. tek bir genotip meliloti, test edilecek olan. Bu bakterilerin yüksek konsantrasyonlarda aerosol haline gerektirdiğinden, farklı bakteri türleri ile aşılanmış kesonlar arasında çapraz kontaminasyon yüksek bir olasılıktır. Genellikle aşılanmış bitkilerin büyük miktarlarını hazırlamak için kullanılan diğer bir yöntem küvet veya perlit, vermikülit, kum veya besleyici çözelti ile aşılanmış ve S ile aşılanır kalsine kil tencere büyüme meliloti 7. Bu yöntem, açık tüplerde veya tencere kullanımını gerektirir, ve besin çözeltisi sulama ve ikmal gerektirir. Tencere bir diğer dezavantajı olduğu bitkikökler ve nodüllerin incelenmesi için bu parçacık matris çıkarılmalıdır. Bu yöntemin diğer bir sakıncası olduğunda pek çok farklı S. kuluçka alanı geniş bir alan gerekli olmasıdır meliloti genotip ayrı bir kap her bir bakteri genotip için kullanılmalıdır, çünkü karşılaştırılabilir vardır. &quot;Leonard kavanoz&quot; Bu yöntem, 8,9 üzerinde bir çeşididir. A Leonard kavanoz diğerinin üstüne yığıldığında ve bir fitil birbirine bağlanan iki steril kapların oluşmaktadır. Büyüme ortamı, alt kabına yerleştirilir ve perlit, vermikülit, kum ya da üst tekne içinde kalsine kil büyüme matris içine kılcal hareket ile lamba fitili üzerinden çekilmektedir. Fide (ler) büyüme matris içine yerleştirilmiş ve S ile aşılanmıştır meliloti. Bu yöntem, sulama gerektirmez, fakat kök ve nodüllerin inceleme fide parçacık büyüme matris kaldırılması gerekir. Roo kolay muayene izin vermeyiz birkaç yöntem vardırts. Bunlardan biri, saydam plastik &quot;büyüme poşet&quot; 7&#39;dir. Bu yöntemin bir dezavantajı, sık sulama sıvı ortam M. büyüme için uygun olan tek ≤ 10 ml Başlangıcı gerekli olmasıdır torbalar 7&#39;de truncatula. Kese deneyler genellikle nedeniyle torba içindeki kağıt fitilin arıza, ~ 2 hafta 7 ile sınırlıdır. Yaygın olarak kullanılan diğer iki yöntem bitki agarı üzerinde büyümüş ve kökleri görebilir olduğu bizim yönteme benzer, ancak bu yöntemler aynı zamanda işlemdir önler dezavantajları vardır. Bu yöntemlerde, bitkiler tamamen 24.5 cm gözenekli bir ameliyat bandı ile üst çevresinde kapatılmış veya pamuk tıpalı ya da plastik kapaklar 7-tıpalı agar eğik tüpler içinde yetiştirilen x 24.5 cm agar plakaları içinde yer alır. Bu yöntemlerin her ikisi de köklerin kolayca incelenmesine olanak ve steril tutulabilir. Ancak, agar eğimli tüpleri genellikle orta 7 ağar sadece 20 ml ile yetiştirilen ve sulama ve besin a gerektirirBitkilerin uzun-vadeli büyüme için ddition. 24.5 cm içinde yetiştirilen bitkiler 24,5 cm agar mikrokozmosları yeterli nemi ve uzun vadeli büyüme için besin var, ama büyüyen sürgün hızla kapalı plaka evren ve etilen gazı Nodülasyona 7 inhibe kurabilirsiniz içinde kısıtlı olur x. Burada tarif edilen prosedür olarak, sürgün maruz kalır ve uzun süreli büyüme sağlayan, ~ 70 ml ortam içeren evren dışına serbestçe büyür. Burada tarif edilen prosedür baklagil bitkileri nodülasyon çalışma için değil, aynı zamanda, diğer orta boy bitkilerin kök fenotiplerinin incelenmesi için de yararlı olabilir. Bu microcosms ve geleneksel bir polikarbonat bitki dokusu kültürü kavanoz arasındaki fark, burada tarif edilen plaka microcosms kökleri aşağı kavanozun altındaki agar yatay bir tabaka halinde agar dikey yüzeyi üzerinde büyümeye yerine olmasıdır. Bu kök minimal d agar yüzeyinden kaldırılması sağlar:kök tüyleri ve mikroskopi ile kök tüyleri incelenmesini kolaylaştıran kök yüzeyine, agar minimal yapışmasına Amage.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of Material/ Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Agar purified, plant cell culture-tested</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7921</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

single-plant, sterile microcosms for nodulation and growth of the legume plant medicago truncatula with the rhizobial symbiont sinorhizobium meliloti

Rhizobial bakteriler uyumlu ana baklagil bitkilerin kökleri üzerinde simbiyotik azot sabitleme nodül oluşturur. Bu etkileşimleri çalışmak için en iyi gelişmiş bir model sistemleri Medicago cv truncatula bitkidir. Jemalong A17 ve rhizobial bakteri Sinorhizobium meliloti 1021. Bitki kökleri ve simbiyotik fenotipleri puanlama tekrarlanan görüntüleme bitki veya bakteri birine tahribatsız yöntemleri gerektirir. Bazı bitki ve bakteriyel mutantlann simbiyotik fenotipleri büyüme göreceli olarak kısa bir süre sonra belirgin hale gelir ve ana / symbiont etkileşiminin uzun süreli takip gerektirmez. Bu atılır Ancak, önce nodülasyon sürecinin erken aşamalarında belirgin değildir simbiyotik verim ve nodül yaşlanma fenotipleri ince farkları nispeten uzun bir büyüme dönemleri gerektirmektedir. Çeşitli yöntemler, uzun vadeli büyüme ve bu ana / symbiont çiftinin gözlem için geliştirilmiştir.Ancak, bu yöntemleri birçok diğer mikroplar tarafından bulaşma olasılığını arttırır tekrarlanan sulama gerektirir. Diğer yöntemler bitkilerin çok sayıda büyüme için nispeten büyük bir alan gerektirir. Bir yöntem olup, burada M. simbiyotik büyüme tarif truncatula / S. steril, tek bitki microcosms in meliloti, birçok avantajı vardır. Bu mikrokosmlarından Bitkiler bu sulama sulama sırasında çapraz bulaşmayı önlemede kadar 9 hafta boyunca gerekli değildir sağlamak için yeterli nem ve besin var. Bu fenotipleri Bu nodül gelişimi ve erken nodül yaşlanmasında ince gecikmeler gibi kısa-vadeli büyüme sistemleri, kaçırmış olabileceğini sayısal sağlar. Up-köklenme gözlem için bitkilerin gerekli değildir bu yüzden de, insan olarak kökleri ve nodüller kolayca, levha kapak aracılığıyla izlenir.

Bu plaka mikrokosmlarından hazırlanması ve aşı Giriş bölümünde anlatılan çok diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında oldukça basittir. Bu mikrokosmlarından kullanımı da sulama veya besin takviyesi, kök sterilite bakım, hem de kökleri ve ışıktan köklerinin korunması kolay muayene olmadan (9 haftaya kadar) uzun süre bitki gelişimini sağlar, bitkinin büyümesi için serbest çekimine, kolay erişim vuruyor uzunluk ölçümü ve kök tüyleri minimal hasar ile mikrokosmlarından bitkileri...

Watch this Scientific Journal Video about Single-plant, Sterile Microcosms for Nodulation and Growth of the Legume Plant Medicago truncatula with the Rhizobial Symbiont Sinorhizobium meliloti at JoVE.

Single-plant, Sterile Microcosms for Nodulation and Growth of the Legume Plant Medicago truncatula with the Rhizobial Symbiont Sinorhizobium meliloti

Standart laboratuvar plakalardan yapılmış bireysel, steril mikrokosmlarından yılında azot bağlayıcı bakteriler Sinorhizobium meliloti ile simbiyoz Medicago truncatula bitkilerin büyüme ödün vermeden, sterilite kök sistemleri ve nodüller sık muayene izin verir. Bitkiler kadar 9 hafta boyunca bu büyüme odalarına korunabilir.

Nodülasyona ve Baklagil Bitki Büyüme için tek-bitki, Steril Mikrokozmoslar<em&gt; Medicago truncatula</em&gt; Rhizobial Symbiont ile<em&gt; Sinorhizobium meliloti</em

Rhizobial  bacteria form symbiotic, nitrogen-fixing nodules on the roots of compatible host  legume plants.  One  of the most well-developed model systems ...

single-plant-sterile-microcosms-for-nodulation-growth-legume-plant

Research

JoVE Journal

Environment

Single-plant, Sterile Microcosms for Nodulation and Growth of the Legume Plant Medicago truncatula with the Rhizobial Symbiont Sinorhizobium meliloti

16.9K Görüntüleme.  Florida State University.  Standart laboratuvar plakalardan yapılmış bireysel, steril mikrokosmlarından yılında azot bağlayıcı bakteriler Sinorhizobium meliloti ile simbiyoz Medicago truncatula bitkilerin büyüme ödün vermeden, sterilite kök sistemleri ve nodüller sık muayene izin verir. Bitkiler kadar 9 hafta boyunca bu büyüme odalarına korunabilir. 

Video: Single-plant, Sterile Microcosms for Nodulation and Growth of the Legume Plant Medicago truncatula with the Rhizobial Symbiont Sinorhizobium meliloti

Methods for Facilitating Microbial Growth on Pulp Mill Waste Streams and Characterization of the Biodegradation Potential of Cultured Microbes

The kraft process is applied to wood chips for separation of lignin from the polysaccharides within lignocellulose for pulp that will produce a high quality paper. Black liquor is a pulping waste generated by the kraft process that has potential for downstream bioconversion. However, the recalcitrant nature of the lignocellulose resources, its chemical derivatives that constitute the majority of available organic carbon within black liquor, and its basic pH present challenges to microbial biodegradation of this waste material. Methods for the collection and modification of black liquor for microbial growth are aimed at utilization of this pulp waste to convert the lignin, organic acids, and polysaccharide degradation byproducts into valuable chemicals. The lignocellulose extraction techniques presented provide a reproducible method for preparation of lignocellulose growth substrates for understanding metabolic capacities of cultured microorganisms. Use of gas chromatography-mass spectrometry enables the identification and quantification of the fermentation products resulting from the growth of microorganisms on pulping waste. These methods when used together can facilitate the determination of the metabolic activity of microorganisms with potential to produce fermentation products that would provide greater value to the pulping system and reduce effluent waste, thereby increasing potential paper milling profits and offering additional uses for black liquor.

Industrial wastes can be collected and modified to analyze microbial growth. Lignocellulose extraction techniques provide components to analyze specific biodegradation ability. Gas chromatography-mass spectrometry identifies fermentation products of microorganisms grown on pulping waste. These methods determine the metabolic capacity of microorganisms to degrade pulping waste.

The kraft process is applied to wood chips for separation of lignin from the polysaccharides within lignocellulose for pulp that will produce a high ...

Çevre

Transcript and Metabolite Profiling for the Evaluation of Tobacco Tree and Poplar as Feedstock for the Bio-based Industry

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the exploration of renewable resources are necessary to overcome these challenges. Within the multinational framework MultiBioPro we are developing biorefinery pipelines to maximize the use of plant biomass. More specifically, we use poplar and tobacco tree (Nicotiana glauca) as target crop species for improving saccharification, isoprenoid, long chain hydrocarbon contents, fiber quality, and suberin and lignin contents. The methods used to obtain these outputs include GC-MS, LC-MS and RNA sequencing platforms. The metabolite pipelines are well established tools to generate these types of data, but also have the limitations in that only well characterized metabolites can be used. The deep sequencing will allow us to include all transcripts present during the developmental stages of the tobacco tree leaf, but has to be mapped back to the sequence of Nicotiana tabacum. With these set-ups, we aim at a basic understanding for underlying processes and at establishing an industrial framework to exploit the outcomes. In a more long term perspective, we believe that data generated here will provide means for a sustainable biorefinery process using poplar and tobacco tree as raw material. To date the basal level of metabolites in the samples have been analyzed and the protocols utilized are provided in this article.

Plant biomass offers a renewable resource for multiple products, including fuel, feed, food, and a variety of materials. In this paper we investigate the properties of tobacco tree (Nicotiana glauca) and poplar as suitable sources for a biorefinery pipeline.

Bio-tabanlı Sanayi Feedstock olarak Tütün Ağacı ve Kavak Değerlendirme transkript ve metabolit profil

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the ...

The Use of High-resolution Infrared Thermography (HRIT) for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

Freezing events that occur when plants are actively growing can be a lethal event, particularly if the plant has no freezing tolerance. Such frost events often have devastating effects on agricultural production and can also play an important role in shaping community structure in natural populations of plants, especially in alpine, sub-arctic, and arctic ecosystems. Therefore, a better understanding of the freezing process in plants can play an important role in the development of methods of frost protection and understanding mechanisms of freeze avoidance. Here, we describe a protocol to visualize the freezing process in plants using high-resolution infrared thermography (HRIT). The use of this technology allows one to determine the primary sites of ice formation in plants, how ice propagates, and the presence of ice barriers. Furthermore, it allows one to examine the role of extrinsic and intrinsic nucleators in determining the temperature at which plants freeze and evaluate the ability of various compounds to either affect the freezing process or increase freezing tolerance. The use of HRIT allows one to visualize the many adaptations that have evolved in plants, which directly or indirectly impact the freezing process and ultimately enables plants to survive frost events.

The Use of High-resolution Infrared Thermography HRIT for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

Here we present a protocol that allows one to visualize sites of ice formation and avenues of ice propagation in plants utilizing high resolution infrared thermography (HRIT).

Bitkilerde Buz Çekirdeklenme ve Buz Yayma Çalışmaları Yüksek çözünürlüklü kızılötesi Termografi (HRIT) Kullanımı

Freezing events that occur when plants are actively growing can be a lethal event, particularly if the plant has no freezing tolerance. Such frost events ...

A New Application of the Electrical Penetration Graph (EPG) for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

Electrophysiological properties of cells are often studied in vitro, after dissociating them from their native environments. However, the study of electrical transmission between distant cells in an organism requires in vivo, artifact-free recordings of cells embedded within their native environment. The transmission of electrical signals from wounded to unwounded areas in a plant has since long piqued the interest of botanists. The phloem, the living part of the plant vasculature that is spread throughout the plant, has been postulated as a major tissue in electrical transmission in plants. The lack of suitable electrophysiological methods poses many challenges for the study of the electrical properties of the phloem cells in vivo. Here we present a novel approach for intracellular electrophysiology of sieve elements (SEs) that uses living aphids, or other phloem-feeding hemipteran insects, integrated in the electrical penetration graph (EPG) circuit. The versatility, robustness, and accuracy of this method made it possible to record and study in detail the wound-induced electrical signals in SEs of central veins of the model plant Arabidopsis thaliana1. Here we show that EPG-electrodes can be easily implemented for intracellular electrophysiological recordings of SEs in marginal veins, as well as to study the capacity of SEs to respond with electrical signals to several external stimuli. The EPG approach applied to intracellular electrophysiology of SEs can be implemented to a wide variety of plant species, in a large number of plant/insect combinations, and for many research aims.

A New Application of the Electrical Penetration Graph EPG for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

Electrical Penetration Graph (EPG) is a well-established technique for studying the feeding behavior of stylet-bearing insects. Here we show a new application of EPG as a non-invasive tool for the acquisition of intracellular electrophysiology recordings of sieve elements (SEs), the cells that form the phloem vasculature in plants.

Floem Elek Elements Elektrik Sinyallerini Edinme ve Ölçüm Elektrik Penetrasyon Grafik (EPG) Yeni Bir Uygulama

Electrophysiological properties of cells are often studied in vitro, after dissociating them from their native environments. However, the study of ...

A Gusseted Thermogradient Table to Control Soil Temperatures for Evaluating Plant Growth and Monitoring Soil Processes

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a series of incubators. A temperature gradient is passively established across the surface of the table between the heated and cooled ends and is lost quickly at distances above the surface. Since temperature is only controlled on the table surface, experiments are restricted to shallow containers, such as Petri dishes, placed on the table. Welding continuous aluminum vertical strips or gussets perpendicular to the surface of a table enables temperature control in depth via convective heat flow. Soil in the channels between gussets was maintained across a gradient of temperatures allowing a greater diversity of experimentation. The gusseted design was evaluated by germinating oat, lettuce, tomato, and melon seeds. Soil temperatures were monitored using individual, battery-powered dataloggers positioned across the table. LED lights installed in the lids or along the sides of the gradient table create a controlled temperature chamber where seedlings can be grown over a range of temperatures. The gusseted design enabled accurate determination of optimum temperatures for fastest germination rate and the highest percentage germination for each species. Germination information from gradient table experiments can help predict seed germination and seedling growth under the adverse soil conditions often encountered during field crop production. Temperature effects on seed germination, seedling growth, and soil ecology can be tested under controlled conditions in a laboratory using a gusseted thermogradient table.

Traditional thermogradient tables create a range of temperatures across the surface. Welding gussets perpendicular to the surface of a thermogradient table will control temperature in depth increasing possible research applications.

Bir Körüklü Thermogradient Tablo Toprak Süreçleri Bitki Büyüme değerlendirilmesi ve İzleme Toprak Sıcaklıklar Denetim

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a ...

Operation of a 25 KWth Calcium Looping Pilot-plant with High Oxygen Concentrations in the Calciner

Calcium looping (CaL) is a post-combustion CO2 capture technology that is suitable for retrofitting existing power plants. The CaL process uses limestone as a cheap and readily available CO2 sorbent. While the technology has been widely studied, there are a few available options that could be applied to make it more economically viable. One of these is to increase the oxygen concentration in the calciner to reduce or eliminate the amount of recycled gas (CO2, H2O and impurities); therefore, decreasing or removing the energy necessary to heat the recycled gas stream. Moreover, there is a resulting increase in the energy input due to the change in the combustion intensity; this energy is used to enable the endothermic calcination reaction to occur in the absence of recycled flue gases. This paper presents the operation and first results of a CaL pilot plant with 100% oxygen combustion of natural gas in the calciner. The gas coming into the carbonator was a simulated flue gas from a coal-fired power plant or cement industry. Several limestone particle size distributions are also tested to further explore the effect of this parameter on the overall performance of this operating mode. The configuration of the reactor system, the operating procedures, and the results are described in detail in this paper. The reactor showed good hydrodynamic stability and stable CO2 capture, with capture efficiencies of up to 70% with a gas mixture simulating the flue gas of a coal-fired power plant.

Operation of a 25 KWth Calcium Looping Pilot-plant with High Oxygen Concentrations in the Calciner

This manuscript describes a procedure for operating a calcium looping pilot-plant for post-combustion carbon capture with high oxygen concentrations in the calciner in order to reduce or eliminate the flue gas recycle.

Bir bitkinin 25 KWth kalsiyum döngü Pilot-Calciner yüksek oksijen konsantrasyonları ile işlem

Calcium looping (CaL) is a post-combustion CO2 capture technology that is suitable for retrofitting existing power plants. The CaL process uses limestone ...

Procedures of Laboratory Fumigation for Pest Control with Nitric Oxide Gas

Nitric oxide (NO) is a newly discovered fumigant for postharvest pest control. This paper provides detailed protocols for conducting NO fumigation on fresh products and procedures for residue analysis and product quality evaluation. An airtight fumigation chamber containing fresh fruit and vegetables is first flushed with nitrogen (N2) to establish an ultralow oxygen (ULO) environment followed by injection of NO. The fumigation chamber is then kept at a low temperature of 2 - 5 &#176;C for a specified time period necessary to kill a target pest to complete a fumigation treatment. At the end of a fumigation treatment, the fumigation chamber is flushed with N2 to dilute NO prior to opening the chamber to ambient air to prevent the reaction between NO and O2, which produces NO2 and may damage delicate fresh products. At different times after NO fumigation, NO2 in headspace and nitrate and nitrite in liquid samples were measured as residues. Product quality was evaluated after 2 weeks of post-treatment cold storage to determine effects of NO fumigation on product quality. Keeping&#160;O2 from reacting with NO is critical to NO fumigation and is an important part of the protocols. Measuring NO levels is challenging and a practical solution is provided. Possible protocol modifications are also suggested for measuring NO levels in the fumigation chambers as well as residues. NO fumigation has the potential to be a practical alternative to methyl bromide fumigation for postharvest pest control on fresh and stored products. This publication is intended to assist other researchers in conducting NO fumigation research for postharvest pest control and accelerating the development of NO fumigation for practical applications.

This paper describes nitric oxide (NO) fumigation protocols for postharvest pest control. Fumigation chambers are flushed with nitrogen (N2) to establish ultralow oxygen conditions before NO is injected. At the end, chambers are flushed with N2 to dilute NO before exposing products to ambient air to prevent exposure to NO2.

Laboratuvar İlaçlama haşere kontrolü ile nitrik oksit gaz için prosedürleri

Nitric oxide (NO) is a newly discovered fumigant for postharvest pest control. This paper provides detailed protocols for conducting NO fumigation on ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current measures to combat such pathogens have proved too conservative and, thus, not sufficiently effective, and they can potentially pose environmental risks. Therefore, it is extremely necessary to identify host-resistance factors to assist in controlling plant diseases naturally through the identification of resistant germplasm, the isolation and characterization of resistance genes, and the molecular breeding of resistant cultivars. In this regard, there is need to establish an accurate, rapid, and large-scale inoculation method to breed and develop plant resistance genes. The rice blast fungal pathogen Magnaporthe grisea causes severe disease symptoms and yield losses. Recently, M. grisea has emerged as a model organism for studying the mechanisms of plant-fungal pathogen interactions. Hence, we report the development of a plant virulence test method that is specific for M. grisea. This method provides for both spray inoculation with a conidial suspension and wounding inoculation with mycelium cubes or droplets of conidial suspension. The key step of the wounding inoculation method for detached rice leaves is to make wounds on plant leaves, which avoids any interference caused by host penetration resistance. This spray/wounding protocol contributes to the rapid, accurate, and large-scale screening of the pathotypes of M. grisea isolates. This integrated and systematic plant infection method will serve as an excellent starting point for gaining a broad perspective of issues in plant pathology.

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Here, we present a protocol to test plant virulence with the plant pathogen Magnaporthe grisea. This report will contribute to the large-scale screening of the pathotypes of fungi isolates and serve as an excellent starting point for understanding the resistant mechanisms of plants during molecular breeding.

Bitki enfeksiyon Test: Sprey ve bitki patojeni Magnaporthe Grisea ile aşı yara-aracılı

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

A Flexible Low Cost Hydroponic System for Assessing Plant Responses to Small Molecules in Sterile Conditions

A wide range of studies in plant biology are performed using hydroponic cultures. In this work, an in vitro hydroponic growth system designed for assessing plant responses to chemicals and other substances of interest is presented. This system is highly efficient in obtaining homogeneous and healthy seedlings of the C3 and C4 model species Arabidopsis thaliana and Setaria viridis, respectively. The sterile cultivation avoids algae and microorganism contamination, which are known limiting factors for plant normal growth and development in hydroponics. In addition, this system is scalable, enabling the harvest of plant material on a large scale with minor mechanical damage, as well as the harvest of individual parts of a plant if desired. A detailed protocol demonstrating that this system has an easy and low-cost assembly, as it uses pipette racks as the main platform for growing plants, is provided. The feasibility of this system was validated using Arabidopsis seedlings to assess the effect of the drug AZD-8055, a chemical inhibitor of the target of rapamycin (TOR) kinase. TOR inhibition was efficiently detected as early as 30 min after an AZD-8055 treatment in roots and shoots. Furthermore, AZD-8055-treated plants displayed the expected starch-excess phenotype. We proposed this hydroponic system as an ideal method for plant researchers aiming to monitor the action of plant inducers or inhibitors, as well as to assess metabolic fluxes using isotope-labeling compounds which, in general, requires the use of expensive reagents.

A simple, versatile, and low-cost in vitro hydroponic system was successfully optimized, enabling large-scale experiments under sterile conditions. This system facilitates the application of chemicals in a solution and their efficient absorption by roots for molecular, biochemical, and physiological studies.

Küçük moleküllere steril koşullarda bitki yanıt-e doğru değerlendirmek için Hydroponic sistemi esnek bir düşük maliyetli

A wide range of studies in plant biology are performed using hydroponic cultures. In this work, an in vitro hydroponic growth system designed for ...

An Optimized Rhizobox Protocol to Visualize Root Growth and Responsiveness to Localized Nutrients

Roots are notoriously difficult to study. Soil is both a visual and mechanical barrier, making it difficult to track roots in situ without destructive harvest or expensive equipment. We present a customizable and affordable rhizobox method that allows the non-destructive visualization of root growth over time and is particularly well-suited to studying root plasticity in response to localized resource patches. The method was validated by assessing maize genotypic variation in plasticity responses to patches containing 15N-labeled legume residue. Methods are described to obtain representative developmental measurements over time, measure root length density in resource-containing and control patches, calculate root growth rates, and determine 15N recovery by plant roots and shoots. Advantages, caveats, and potential future applications of the method are also discussed. Although care must be taken to ensure that experimental conditions do not bias root growth data, the rhizobox protocol presented here yields reliable results if carried out with sufficient attention to detail.

Visualizing and measuring root growth in situ is extremely challenging. We present a customizable rhizobox method to track root development and proliferation over time in response to nutrient enrichment. This method is used to analyze maize genotypic differences in root plasticity in response to an organic nitrogen source.

Kök büyüme ve yerelleştirilmiş besin kavramaları görselleştirmek için en iyi duruma getirilmiş bir Rhizobox Protokolü

Roots are notoriously difficult to study. Soil is both a visual and mechanical barrier, making it difficult to track roots in situ without destructive ...