우리는 원고의 중요한 검토를 위해 브라이언 K. 워시번 감사 KMJ에 20582 -이 작품은 USDA 국립 식량 농업 연구소, 농업 및 식품 연구 이니셔티브 부여 2010-65108에 의해 투자되었다.

단계를 수행하는 1, 2, 4, 멸균 층류 후드에있는 6 좋습니다. 1. M.의 준비 truncatula A17 모종 참고 : M. 이 연구에 사용 truncatula A17 씨는 22 ° C ~에서, 또는 ~ 150-400 밀리몰 / m -2 -1의 빛 22 ~ 26 ° C에서 유지 식물의 성장 룸 냉각 온실 조건에서 생산됩니다. <ol><li> 종자 발아 판을 따르십시오 : 100mm 사각 접시 (깊이 15mm)를 사용하여 3 ~ 5 mm의 깊이에 10 한천 정제 V / w를 멸균 1.1 ~ 1.2 %를 붓는다. 각 플레이트 (63-125 씨 / 플레이트에 해당) 씨의 ~ 0.25-0.5 g 발아하는 데 사용됩니다. 참고 :이 프로토콜에 설명 된 모든 플레이트에 식물 세포 배양 테스트, 정제 한천을 사용하는 것이 중요합니다. 한천의 공급 업체와 카탈로그 번호 정보는 특정 시약 및 장비의 표에 나열되어 있습니다. </li><li> 혹평 / M.에게 소독 truncatula A17 씨의 : 모종의 원하는 번호에 대한 충분한 씨앗의 무게. (;이는 ~ 63-125 씨입니다 0.25-0.5 G 씨 / 플라스크) 피펫 집중 (96 %) 20 ㎖ 멸균 호일 커버와 함께 멸균 125 ㎖의 플라스크에 넣고 씨앗 (M.는 A17 씨가 각각 1 ~ 4 MG 있습니다 truncatula) H 2 SO 플라스크의 측면을 따라 4. 참고 : 산 혹평이 씨앗을 소독합니다. 또한, 플라스크의 측면을 따라 산을 피펫 팅함으로써, 살균되지 않은 종자에 접촉 내용 플라스크의 내부를 다시 소독한다. </li><li> 멸균 유리 피펫 씨의 대단히 짧은 시간을 휴식. 10 ~ 12 분 동안 자주 각 플라스크를 소용돌이 친다. 작은 갈색 구덩이 씨에 표시 될 것입니다. 이들은 종피 (11)에 작은 구멍이다. 주 : SO 4 집중 H 2로 작업 할 때 눈 보호 장갑을 착용 할 것. </li><li> SO 4 H 2를 제거하고 종자를 씻어 : 씨앗의 10 % 이상이 작은 갈색 피트, 또는 12 분을 할 때 &#39;통과, 어느첫 번째 온다, 멸균 유리 피펫으로 플라스크에서 모든 산을 제거합니다. (최소 300 ㎖의 수돗물을 포함하는 1 ~ 2 L 비이커에 장소의 쓰레기 산.이 산을 희석하고 과열을 방지합니다. 것) 플라스크의 곡선에 남아있는 산을 수집 플라스크를 기울이고 작은 유리 피펫을 사용하여 남아있는 모든 산을 제거합니다. 잔여 산가 남아있는 경우는, 헹굼 물과 반응 씨앗을 가열하고 그들을 죽일 것입니다. <ol><li> 신속하게 각각의 플라스크에 멸균 초순수 100 ㎖를 부어 씨앗을 씻어. 과량의 물 볼륨이 산을 희석하고 물과 산의 반응시 발열 및 종자의 손상을 방지 할 것이다. 물을 붓고 플라스크의 입술을 화염 소독. </li><li> 멸균 초순수 50 ㎖의 씨앗 8 배를 씻어. 각 린스 동안 플라스크를 소용돌이 친다. 플라스크를이 시점에서 멸균 간주되어야하고 플라스크의 립 각 린스 전에 골조한다. </li></ol></li><li> 씨앗이 하룻밤을 마시다 보자 후마지막 헹굼은 어두운 하룻밤에 4 ° C에서 각각의 플라스크와 장소에 멸균 호일 덮개를 장착, 각각의 플라스크에 50 ㎖ 멸균 초순수 물을 부어. </li><li> 발아 접시에 장소 씨 :시키는 씨앗이 밤새 마시다 후, 씨앗을 재현 탁과에서 1.1 ~ 1.2 % 한천 발아 판에 그들을 부어 20 ㎖ 멸균 초순수, 소용돌이를 추가 한 후, ~ 25 ㎖를 초순수로 배를 씻어 물을 부어 1.1 단계. 씨앗 플라스크에 남아있는 경우, 더 많은 물을 추가하고 다시 붓​​는다. 각 플라스크에서 한 판 (63-125 씨 / 플레이트)에 씨앗을 배포합니다. <ol><li> 씨앗을 배포 판을 소용돌이 친다. 종자는 플레이트의 일단에 4~5cm 대역 균일하게 분포되어야한다. 이 판의 &quot;최고&quot;입니다. &quot;바닥&quot;5~6cm (그림 2A) 씨의 무료 보관해야합니다. </li><li> 멸균 피펫으로 물을 그립니다. 접시의 바닥에 남아있는 물을 배수를하도록 45 ° 각도로 플레이트를 기울이십시오. 참깨에 덮개를 교체합니다테드 플레이트와 빛으로부터 보호합니다. 플레이트는 20 분을 배출 허용해야합니다. (그림 2B). </li></ol></li><li> 발아를 설정 : 멸균 피펫으로 기울어 진 판의 바닥에서 수집 한 모든 물을 제거합니다. <ol><li> 뚜껑을 교체하고 파라 필름과 플레이트를 밀봉. 장갑을 착용하고 (그림 2C) 무균 유지. </li><li> 발아 플레이트 스택 다음 90 ° 각도로 그들 모두를 켭니다. 씨앗은 한천의 수직 표면에 누워됩니다. 완전히 흡수 된 씨앗 쉽게 한천을 준수해야합니다. 뿌리는 아래 (그림 2D)으로 성장할 것입니다. </li><li> 빛을 차단하고 3 일 동안 25 ° C로 유지하기 위해 호일에 발아 판의 스택을 감싸십시오. </li></ol></li></ol> 참고 : 미만 3 일간 발아가 진행되면 뿌리가 소우주에 한천에 도달이 너무 짧은 경우 일 수 있습니다. 발아는 4 일 이상 소우주 플레이트로 전송하기 전에 진행하는 경우, 모종의 생존 것가난. 만약 M. 느린 발아 속도로 truncatula의 생태형 또는 돌연변이 비교하기 위하여, 천천히 발아 생태형은 3 일 이상 발아 할 수 있어야합니다. 2. 개인 접시 소우주의 준비 <ol><li> 각각의 소우주에 대한 Jensen의 매체 (12) (컴포지션 표 1 참조), 수 ~ 70 ml의 매체를 준비합니다. 편리한 투수 또는 플라스크에 준비 빠른 쏟아져 (투수마다 더 이상 1-2 이상의 L) 및 고압 증기 멸균시 투 자기 교반 막대를 둡니다. <ol><li> 매체 ~ 55 ~ 65 ° C의 보충이 추가 된 것으로 냉각, 및 pH가 (표 1 참조) 확인 한 후, 둥근 직경 100mm로 15mm 깊은 접시를 붓는다. 플레이트 ~ 0.9-1 cm 깊이 (~ 70 ㎖ / 플레이트) 주입해야한다. </li><li> Jensen의 매질의 성분은 흐린 침전물을 형성 할 수있다, 그래서 아웃 침강 성분을 방지하기 위해 주기적으로 자기 교반 플레이트에 투수를 반환하는 것이 중요하다. 침전물을 마주 할 수있다그들은 응고 후 접시에 호 환, 등 그들이 균등 판에 분산되므로 성능에 영향을주지 않습니다. </li><li> 접시 뚜껑에 응축의 형성을 방지하도록 붓는 도중 플레이트 스택. </li></ol></li><li> Jensen의 플레이트가 응고 한 후, U 자형 5 (그림 3A)에 구부러진 된 무게 주걱 두 접시와 뚜껑을 노치. 레드 핫, 노치 5-6 판까지 버너 주걱의 굴곡을 가열 한 후 다시 가열한다. 노치 뚜껑이 금이 간 접시에 배치되면,이 모종의 촬영 (그림 3B)를 성장할 통해 타원형 포털을 만들 것입니다. 노치 플레이트가 저장 될 경우에, 파라핀 필름으로 개별적으로 래핑 .. </li></ol> 3. Sinorhizobium의 준비 문화를 meliloti 이틀 식물 접종하기 전에, 모든 S.의 문화를 시작 meliloti 모종에 접종하는 변종. Cultu입술은 LBMC 2.5 mM의 망초, 2.5 mM의 염화칼슘, 적절한 항생제 (TY 매체도 잘 작동) 보충 (루리아 - 베르 타니 [밀러]) 매체 (13)에서 성장해야한다. 각 문화의 한 작은 2-3로 ML은 충분합니다. <ol><li> 세포 밀도가 될 때까지 2 일 동안 진탕 30 ° C에서 성장. </li><li> 대부분의 식물 접종의 경우, S.의 성장기 meliloti는 중요하지 않습니다. 일반적으로, 후반 로그인 또는 초기 정지상 세포가 사용됩니다. </li></ol> 4. M.를 세우고 개인 소우주에 truncatula 모종 <ol><li> 3 일 후에, (1 단계에서 준비) 발아 판을 열고 즉시 살균 초순수로 홍수. 딥 에탄올 및 살균하는 불꽃 간단히에 핀셋. 부드럽게 건조를 방지하기 위해 물 아래에있는 모든 모종의 뿌리 끝을 밀어 멸균 집게를 사용합니다. 뿌리는 긴 2-6센티미터 범위이다. 대부분 3 ~ 4 cm입니다. 바로 뿌리 명백한와 모종을 선택결함. </li><li> 응축의 빌드 - 업에 대한 Jensen의 매체 소우주의 뚜껑을 확인합니다. 응축을 제거하거나 새로운 노치 덮개로 교체 뚜껑 톡. 뚜껑에 응축 과잉이 있으면, 모종 뿌리 덮개에 부착 될 결로가 건조 후에 후 죽는다. </li><li> 집게를 사용하여 부드럽게 자엽에 의해 발아 판에서 모종을 선택하고 Jensen의 매체 소우주의 루트를하다. 루트 끝이 한천과 접촉해야합니다. </li><li> 여전히 존재하는 경우 조심스럽게 종피를 제거합니다. 종자 코트 5 ~ 10 분 동안 물에 몸을 담근 후 푼다. 조심스럽게이 방법을 제공 할 때까지 집게와 종피를 애타게하고 폐기. 촬영의 자엽 약 0.5 cm 플레이트 (그림 4A)에서 U-홈 밖으로 돌출한다. 조심스럽게 모종 (그림 4B)에 대한 포털을 만들어 모종에 뚜껑의 U-노치 접시의 뚜껑을 교체합니다.모든 모종이 소우주에 배치 될 때까지 수평 스택에 옆에 접시를 설정합니다. </li><li> 가능한 모양과 직선 루트가 각각의 발아 판에서 모든 모종을 사용합니다. (가능하면 그냥 접종 전에 시들지 모종 용 교체로 사용할 미개봉 모종의 한 판을 둡니다.) </li><li> 모든 모종을 레이아웃 한 후, 그들이 수평 Jensen의 소우주에 앉아 할 수있는 동안 S. meliloti 접종 현탁액을 준비하고있다. </li></ol> 5. S.의 준비 meliloti 접종 정학 <ol><li> S. 확인 그들이 성장하고 있는지 확인하기 위해 주기적으로 접종 문화를 meliloti. 이일 성장 후, OD (600)는 2와 4 사이 여야합니다. </li><li> 피펫 멸균 1.5 ML 튜브 및 펠렛 원심 분리기에 각 문화의 0.5 ML. 뜨는을 제거합니다. </li><li> 0.85 %의 NaCl 멸균 또는 살균 초순수 하나의 셀을 두 번 씻으십시오. 0.5 ml의 0.85 % 인트에 세포를 재현 탁염화나트륨 또는 초순수를 화나게. </li><li> 재현 탁 S.의 1 / 10 희석의 OD 600을 측정 단계 5.3에서 문화를 meliloti. 이 독서를 바탕으로, OD 600 = 0.05 살균 초순수의 각 문화의 현탁액을 만든다. 셀 밀도가 너무 높으면, 유괴가 억제 될 수있다. 100 ㎕를 각 모종에 접종 할 수 있도록 희석 현탁액을 충분히 확인합니다. OD 600 = 0.05 현탁액의 구름 양이 눈으로 겨우인지 할 수 있어야한다. </li></ol> 6. 예방 접종과 소우주의 씰링 <ol><li> 직전부터 예방 접종에, 젠슨의 매체 소우주로 전송 살아남은하지 않은 시들지 모종을 확인합니다. 발아 플레이트에서 신선한 모종과 그 묘목을 교체합니다. </li><li> 각각의 소우주를 열고 해당 S. 100 μl를 접종 모종의 루트에 현탁액을 meliloti. 뚜껑을 교체하고 수평 STAC에 따로6-10 소우주 캔자스. 각 S.위한 meliloti 변형이 비교되는, 적어도 15 식물을 접종. 공생의 생산성에 미묘한 차이가있을 균주의 경우, 30 ~ 35 식물을 접종. 음성 대조군으로 uninoculated 최소 10 식물을 둡니다. S.와 30-35 식물을 접종 meliloti 1021 또는 기타 적절한 야생형 균주는 양성 대조군 역할을한다. </li><li> 후 S. meliloti 서스펜션은 루트 표면에 흡착하는 시간을 가졌으며 현탁액은 한천 (20 분 이상).에 배어있다, 파라핀 필름 개별적으로 판을 감싸줍니다. 플레이트는 노치의 매우 가장자리에 싸여해야하지만, 파라핀 필름은 모종 (그림 4C)의 성장을 차단되지 않아야합니다. </li><li> 포장시에는, 접시 뚜껑의 안쪽에 부착 뿌리에 대한 최종적인 검사를한다. 뚜껑의 부착 뿌리를 제거 벤치에 플랫 플레이트를 놓고 한천 SU에 다시 아래로 뿌리를 노크 뚜껑을 누르거나 가볍게하려면rface. </li><li> 6-10 플레이트의 각 스택의 모종 포털을 라인업. 모종 (그림 4D) 위쪽을 가리키는 90 ° 각도로 스택을 놓습니다. 파라핀 필름의 끈적 거림은 모종 (그림 4E)를 등장 곳에 풀린 1-2 센티미터 지구를 떠나, 호일에서 전체 스택을 바꿈에 충분히 장소에 접시를 개최한다. 호일은 빛으로부터 뿌리를 보호 할 것입니다. </li><li> (16 시간 조명 / 8 시간 어두운주기에 21 ~ 25 ° C의 60 % ~ 70 %의 상대 습도와 100-175 μmol / m -2 -1의 빛을 조명 성장 챔버 또는 성장 방에 호일 포장 스택을 배치 그림 1A). 이러한 성장 조건에서 가벼운 수준에서 장기간 배양보다 높은 200 μmol / m -2 -1의 식물 성장에 해로운 영향을 미칠 수 있습니다. </li></ol> 7. 루트 시스템 및 공생 표현형의 정량 시험 식물에서 유지 될 수있다최대 9 주 소우주. <ol><li> 결절 번호는 각 스택에서 포일 언 래핑 및 결절 계수함으로써 일련의 시점들에서 정량화 될 수있다. S. 접종 식물에 결절 개발 meliloti 1021 야생형 접종 후 10-14일에 의해 명백하다. </li><li> 공생 생산성 또한 새로운 싹의 길이를 측정함으로써 각 시점에서 측정 될 수있다. </li><li> 공생 생산성의 최종 정량은 일반적으로 촬영을 분리하고 촬영의 신선한 무게를 측정하여 접종 후 7 주에 수행된다. 이상 성장이 요구되는 경우에는이 단계를 늦게 구주로서 수행 될 수있다. </li></ol>

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	<li>Galibert, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+composite+genome+of+the+legume+symbiont+Sinorhizobium+meliloti.">The composite genome of the legume symbiont Sinorhizobium meliloti.</a> Science. 293, 668-672 (2001).</li><li>Young, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Medicago+genome+provides+insight+into+the+evolution+of+rhizobial+symbioses.">The Medicago genome provides insight into the evolution of rhizobial symbioses.</a> Nature. 480, 520-524 (2011).</li><li>Glazebrook, J., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+techniques+in+Rhizobium+meliloti.">Genetic techniques in Rhizobium meliloti.</a> Methods Enzymol. 204, 398-418 (1991).</li><li>Cheng, X., Wen, J., Tadege, M., Ratet, P., Mysore, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+genetics+in+medicago+truncatula+using+Tnt1+insertion+mutants.">Reverse genetics in medicago truncatula using Tnt1 insertion mutants.</a> Methods Mol Biol. 678, 179-190 (2011).</li><li>Leigh, J. A., Signer, E. R., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exopolysaccharide-deficient+mutants+of+Rhizobium+meliloti+that+form+ineffective+nodules.">Exopolysaccharide-deficient mutants of Rhizobium meliloti that form ineffective nodules.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82, 6231-6235 (1985).</li><li>Wong, K. K. Y., Fortin, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Petri+Dish+Technique+for+the+Aseptic+Synthesis+of+Ectomycorrhizae.">A Petri Dish Technique for the Aseptic Synthesis of Ectomycorrhizae.</a> Canadian Journal of Botany-Revue Canadienne De Botanique. 67, 1713-1716 (1989).</li><li>Barker, D. G., Mathesius, U., Journet, E. P., Sumner, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Medicago truncatula handbook. , (2006).</li><li>Leonard, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simple+Assembly+for+Use+in+the+Testing+of+Cultures+of+Rhizobia.">A Simple Assembly for Use in the Testing of Cultures of Rhizobia.</a> J Bacteriol. 45, 523-527 (1943).</li><li>Trung, B. C., Yoshida, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+of+Leonard+jar+assembly+for+screening+of+effective+rhizobium.">Improvement of Leonard jar assembly for screening of effective rhizobium.</a> Soil Sci Plant Nutr. 29, 97-100 (1983).</li><li>Penmetsa, R. V., Cook, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+characterization+of+diverse+developmental+mutants+of+Medicago+truncatula.">Production and characterization of diverse developmental mutants of Medicago truncatula.</a> Plant Physiol. 123, 1387-1398 (2000).</li><li>Garcia, J., Barker, D. G., Journet, E. P., Mathesius, U., Journet, E. P., Sumner, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Medicago truncatula handbook. , (2006).</li><li>Vincent, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Manual for the Practical Study of the Root-Nodule Bacteria. , (1970).</li><li>Sambrook, J., Fritsch, E. F., Maniatis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular cloning: a laboratory manual. , (1982).</li><li>Pladys, D., Vance, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolysis+during+Development+and+Senescence+of+Effective+and+Plant+Gene-Controlled+Ineffective+Alfalfa+Nodules.">Proteolysis during Development and Senescence of Effective and Plant Gene-Controlled Ineffective Alfalfa Nodules.</a> Plant Physiology. 103, 379-384 (1993).</li><li>Vasse, J., de Billy, F., Truchet, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abortion+of+infection+during+the+Rhizobium+meliloti-alfalfa+symbiotic+interaction+is+accompanied+by+a+hypersensitive+reaction.">Abortion of infection during the Rhizobium meliloti-alfalfa symbiotic interaction is accompanied by a hypersensitive reaction.</a> The Plant J. 4, 555-566 (1993).</li><li>Johnson, L. E. B., Vance, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+and+Biochemical+Comparisons+of+Plant+Induced+Ineffective+Nodules.">Histological and Biochemical Comparisons of Plant Induced Ineffective Nodules.</a> Phytopathology. 71, 884 (1981).</li><li>Vance, C. P., Johnson, L. E. B., Hardarson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+Comparisons+of+Plant+and+Rhizobium+Induced+Ineffective+Nodules+in+Alfalfa.">Histological Comparisons of Plant and Rhizobium Induced Ineffective Nodules in Alfalfa.</a> Physiological Plant Pathology. 17, 167 (1980).</li><li>Van de Velde, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+in+legume+symbiosis.+A+molecular+view+on+nodule+senescence+in+Medicago+truncatula.">Aging in legume symbiosis. A molecular view on nodule senescence in Medicago truncatula.</a> Plant Physiol. 141, 711-720 (2006).</li><li>Jones, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+production+of+the+exopolysaccharide+succinoglycan+enhances+Sinorhizobium+meliloti+1021+symbiosis+with+the+host+plant+Medicago+truncatula.">Increased production of the exopolysaccharide succinoglycan enhances Sinorhizobium meliloti 1021 symbiosis with the host plant Medicago truncatula.</a> J Bacteriol. 194, 4322-4331 (2012).</li><li>Queiroux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+genomics+screen+identifies+a+Sinorhizobium+meliloti+1021+sodM-like+gene+strongly+expressed+within+host+plant+nodules.">A comparative genomics screen identifies a Sinorhizobium meliloti 1021 sodM-like gene strongly expressed within host plant nodules.</a> BMC Microbiol. 12, 74 (2012).</li></ol>

저자가 공개하는 게 없다.

성공을위한 중요한 프로토콜의 몇 가지 단계가 있습니다 : 1) 정제, 식물 세포 배양을 사용의 필요성은 한천은 아무리 강조해도 지나치지 않습니다 테스트. 이것은 알팔파 모종 중요하지이지만, M.의 성장에 중요 truncatula A17. 2) 1 단계에서 설명 된대로 수직 한천 플레이트에 모종을 발아하는 것이 중요합니다. 모종의 뿌리가 바로 너무 짧은 및 / 또는 일 것이다 때문에 15mm 깊이 판 (...

콩과 식물 기주 식물 개자리의 truncatula A17와 Sinorhizobium는 1021 meliloti rhizobial 박테리아 사이의 상호 작용은 루트 결절 개발 및 질소 고정 공생의 연구를위한 가장 다루기 쉬운 모델 시스템 중 하나입니다. 모두 공생 파트너의 게놈은 1,2 염기 서열을 한 식물과 박테리아 모두 유전자 조작 3,4 의무가 있습니다. 식물과 박테리아의 돌연변이 모두의 표현형 분석 결절 개발의 단계를 관찰하고 시간이 지남에 따라 공생 생산성을 정량화 할 수있는 능력을 필요로한다. 여기에서 우리는 M.의 루트 결절 개발을 관찰하는 방법을 설명합니다 이력서를 truncatula. S. 접종 Jemalong A17 표준, 둥근 직경 100mm, 15mm 깊은 실험실 접시 (그림 1A)에서 만든 각각의 소우주 내 meliloti 1021. 촬영은 접시의 측면에있는 노치 포털 (를 통해 노출 및 성장한다 FigurES 1B, 1C 및 1E). 뿌리는 소우주에 포함 된 플레이트 (그림 1D)의 뚜껑을 통해 관찰을 허용하면서, 멸균 보관됩니다. 촬영에 액세스하기 때문에, 그 성장이 제한되지 않고 루트의 무균 저하없이 주기적으로 측정 될 수있다. 노치 플레이트 소우주를 만드는 방법은 원래 알팔파 식물 성장을위한 리, 등. (5)에 의해 개발 된,하지만 널리 다른 방법에 비해 수많은 장점에도 불구하고 채택되지 않았다. 이 방법의 변형은 식물 뿌리와 mycorrhizae (6) 사이의 상호 작용의 분석을 위해 개발되었다. 우리는 지금 M.의 성장에 적응이 방법을 최적화 한 truncatula 식물. 더 일반적으로 사용되는 방법을 통해이 프로토콜의 장점은 다음과 같습니다. M.의 유괴 연구에 대한 폭 넓은 현재 사용중인 방법은 여러 가지가 있습니다 truncatula inocuS.와 lated meliloti 7. 마디가있는 뿌리의 대규모 준비를 위해 가장 일반적으로 사용되는 방법은 aeroponic 케이슨 7의 성장입니다. 이 방법에서는, 식물은 큰 용기에 일시 중단 뿌리는 S.의 혼합물로 폭기된다 meliloti 및 영양 솔루션 7. 이 방법은 실제적인 경우 S. 단 하나의 유전자형 meliloti 테스트 할 수 있습니다. 이 세균의 높은 농도의 에어로졸 화를 필요로하기 때문에, 서로 다른 박테리아 균주를 접종 케이슨 간의 교차 오염의 가능성이 높다. 종종 접종 식물의 대량 제조에 사용되는 또 다른 방법은 욕조 또는 펄라이트, 버미큘라이트, 모래 또는 양액 주입 및 S. 접종되어 소성 점토 냄비 성장이다 meliloti 7. 이 방법은 오픈 욕조 또는 포트의 사용을 필요로하고, 양액의 급수 및 보충을 필요로한다. 냄비의 또 다른 단점은 식물뿌리와 결절의 진단이 미립자 행렬에서 제거해야합니다. 이 방법의 또 다른 단점은 다양한 S. 때 인큐베이터 공간의 넓은 면적이 요구된다는 것이다 meliloti 유전자형은 별도 냄비 각 세균의 유전자형을 위해 사용되어야하기 때문에, 비교해야한다. &quot;레너드 항아리는&quot;이 방법 8,9의 변형입니다. 레너드 항아리는 하나가 다른 하나의 위에 스택 및 심지에 의해 연결된 두 개의 멸균 용기로 구성되어있다. 성장 배지는 하부 용기에 넣고, 펄라이트, 버미큘라이트, 모래 또는 상측 용기에서 하소 점토의 성장 매트릭스에 모세관 현상에 의해 심지를 통해 그려진다. 모종 (들)은 성장 행렬에 넣고 S.로 접종 meliloti. 이 방법은 물을 필요로하지 않지만, 뿌리와 결절의 검사는 모종은 입자 성장 매트릭스에서 제거해야합니다. 타나로 오의 쉬운 시험을 허용 않는 방법은 여러 가지가 있습니다TS. 이 중 하나는 투명 플라스틱 &quot;성장 주머니&quot;7입니다. 이 방법의 단점은 자주 물이 액체 배지가 M. 성장에 최적입니다 만 ≤ 10 ㎖ 때문에 필요한 것입니다 파우치 7 truncatula. 주머니 실험은 일반적으로 인해 주머니 안에 종이 심지의 고장, 2 주 ~ 7로 제한됩니다. 일반적으로 사용되는 두 가지 다른 방법은 식물이 한천에서 성장하고 뿌리를 볼 수 있습니다 것을 우리의 방법과 유사하지만, 이러한 방법은 우리의 절차는 피할 단점이 있습니다. 이러한 방법으로, 식물이 완전히 24.5 cm 다공성 외과 테이프를 맨 주위를 밀봉하거나면 마개 또는 플라스틱 캡 7 마개 한천 경사 관에서 재배 X 24.5 cm 한천 플레이트에 포함됩니다. 두 방법 모두 뿌리 쉽게 시험을 허용하고 멸균 유지 될 수있다. 그러나, 한천 기울기 튜브는 일반적으로 중간 7 한천 20 ㎖로 성장하고 물과 영양분이 필요합니다식물의 장기 성장 ddition. 24.5 cm 내에서 재배 식물은 24.5 cm 한천 플레이트 소우주 충분한 수분과 장기 성장을위한 영양분을 가지고 있지만, 성장 촬영이 빨리 동봉 판 소우주와 에틸렌 가스가 유괴 7을 억제 구축 할 수 있습니다 내에서 제한된다 x. 여기에 기술 된 절차에서, 촬영은 노출 및 장기 성장을 가능 매체 ~ 70 ㎖에 포함 축도 외측 자유롭게 성장한다. 여기에서 설명하는 절차는 콩과 식물의 유괴의 연구뿐만 아니라 다른 중간 크기의 식물의 뿌리 표현형의 연구뿐만 아니라 유용 할 수 있습니다. 이 소우주와 기존의 폴리 카보네이트 공장 조직 문화 단지의 차이는 여기에 설명 된 판의 소우주에 뿌리가 아래로 항아리의 맨 아래에있는 한천의 수평 층으로 한천의 수직 표면에 성장이 아닌 것입니다. 이 루트는 최소한의 개발과 한천 표면의 오프 해제 할 수 있습니다루트 머리와 현미경으로 루트 머리카락의 시험을 용이하게 뿌리 표면에 한천의 최소한의 접착에 amage.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of Material/ Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Agar purified, plant cell culture-tested</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7921</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

single-plant, sterile microcosms for nodulation and growth of the legume plant medicago truncatula with the rhizobial symbiont sinorhizobium meliloti

Rhizobi​​al 박테리아는 호환 호스트 콩과 식물의 뿌리에 공생 질소 고정 결절을 형성한다. 이러한 상호 작용을 연구하기위한 가장 잘 개발 된 모델 시스템 중 하나는 개자리는 이력서를 truncatula 식물입니다. Jemalong A17와 rhizobial 박테리아 Sinorhizobium는 1021 meliloti. 식물 뿌리와 공생 표현형의 득점 반복 영상은 식물이나 박테리아 중 하나에 비 파괴적 방법이 필요합니다. 일부 식물 및 박테리아 변이주의 표현형 공생 성장의 상대적으로 짧은 기간 후에 명백하고, 호스트 / 공생 상호 작용의 장기 관측을 필요로하지 않는다. 그들이 득점하기 전에 그러나, 유괴 과정의 초기 단계에서 식별 할 수없는 공생의 효율성과 결절 노화 표현형에 미묘한 차이가 비교적 긴 성장 기간을 필요로합니다. 몇몇 방법들은 장기적인 성장 및이 호스트 / 공생 쌍의 관측을 위해 개발되었다.그러나, 이러한 방법의 대부분은 다른 미생물에 의한 오염의 가능성을 증가 반복 물을 필요로합니다. 다른 방법은 식물의 많은 수의 성장을 위해 상대적으로 큰 공간이 필요합니다. 상기 방법은 여기에서 M. 공생의 성장을 설명 truncatula / S. 살균, 단일 식물 소우주에 meliloti은 몇 가지 장점이 있습니다. 이 소우주에있는 식물은 물이 물을 때 교차 오염을 방지, 최대 9 주 동안 필요하지 않습니다 보장하기 위해 충분한 수분과 영양분이 있습니다. 이 표현형는 결절의 개발 및 초기 결절 노화의 미묘한 지연 등의 단기 성장 시스템에서 누락 될 수 있습니다 것을 정량화 할 수 있습니다. 업 응원 관찰 식물이 필요하지 않도록 또한, 소우주의 뿌리 결절은 쉽게 플레이트 뚜껑을 통해 볼 수 있습니다.

이 판의 소우주의 준비 및 접종 소개 참조 대부분의 다른 방법에 비해 비교적 간단하다. 이 소우주의 사용은 또한 물이나 영양 보충, 루트 불임의 유지 보수, 모두 뿌리와 빛으로부터 뿌리를 보호 쉽게 검사하지 않고 (9 주간까지) 연장 식물의 성장을 허용, 식물의 제약 성장의 촬영에 쉽게 액세스를 촬영 길이 측정 및 루트 모발 손상을 최소화 소우주에서 식물의 제거. 그림 1A는 인큐?...

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Single-plant, Sterile Microcosms for Nodulation and Growth of the Legume Plant Medicago truncatula with the Rhizobial Symbiont Sinorhizobium meliloti

표준 실험실 접시에서 만든 개별 멸균 소우주의 질소 고정 박테리아 Sinorhizobium meliloti과의 공생에 개자리의 truncatula 식물의 성장 저하 불임없이 루트 시스템과 결절의 자주 검사를 허용합니다. 식물은 최대 9 주 동안 이러한 성장 챔버에서 유지 될 수있다.

유괴와 콩과 식물의 성장을위한 단일 공장, 무균 소우주<em&gt; 개자리 truncatula</em&gt; Rhizobi​​al 공생과<em&gt; Sinorhizobi​​um meliloti</em

Rhizobial  bacteria form symbiotic, nitrogen-fixing nodules on the roots of compatible host  legume plants.  One  of the most well-developed model systems ...

single-plant-sterile-microcosms-for-nodulation-growth-legume-plant

Research

JoVE Journal

Environment

Single-plant, Sterile Microcosms for Nodulation and Growth of the Legume Plant Medicago truncatula with the Rhizobial Symbiont Sinorhizobium meliloti

16.9K 조회수.  Florida State University.  표준 실험실 접시에서 만든 개별 멸균 소우주의 질소 고정 박테리아 Sinorhizobium meliloti과의 공생에 개자리의 truncatula 식물의 성장 저하 불임없이 루트 시스템과 결절의 자주 검사를 허용합니다. 식물은 최대 9 주 동안 이러한 성장 챔버에서 유지 될 수있다. 

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Methods for Facilitating Microbial Growth on Pulp Mill Waste Streams and Characterization of the Biodegradation Potential of Cultured Microbes

The kraft process is applied to wood chips for separation of lignin from the polysaccharides within lignocellulose for pulp that will produce a high quality paper. Black liquor is a pulping waste generated by the kraft process that has potential for downstream bioconversion. However, the recalcitrant nature of the lignocellulose resources, its chemical derivatives that constitute the majority of available organic carbon within black liquor, and its basic pH present challenges to microbial biodegradation of this waste material. Methods for the collection and modification of black liquor for microbial growth are aimed at utilization of this pulp waste to convert the lignin, organic acids, and polysaccharide degradation byproducts into valuable chemicals. The lignocellulose extraction techniques presented provide a reproducible method for preparation of lignocellulose growth substrates for understanding metabolic capacities of cultured microorganisms. Use of gas chromatography-mass spectrometry enables the identification and quantification of the fermentation products resulting from the growth of microorganisms on pulping waste. These methods when used together can facilitate the determination of the metabolic activity of microorganisms with potential to produce fermentation products that would provide greater value to the pulping system and reduce effluent waste, thereby increasing potential paper milling profits and offering additional uses for black liquor.

Industrial wastes can be collected and modified to analyze microbial growth. Lignocellulose extraction techniques provide components to analyze specific biodegradation ability. Gas chromatography-mass spectrometry identifies fermentation products of microorganisms grown on pulping waste. These methods determine the metabolic capacity of microorganisms to degrade pulping waste.

The kraft process is applied to wood chips for separation of lignin from the polysaccharides within lignocellulose for pulp that will produce a high ...

연구

환경과학

Transcript and Metabolite Profiling for the Evaluation of Tobacco Tree and Poplar as Feedstock for the Bio-based Industry

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the exploration of renewable resources are necessary to overcome these challenges. Within the multinational framework MultiBioPro we are developing biorefinery pipelines to maximize the use of plant biomass. More specifically, we use poplar and tobacco tree (Nicotiana glauca) as target crop species for improving saccharification, isoprenoid, long chain hydrocarbon contents, fiber quality, and suberin and lignin contents. The methods used to obtain these outputs include GC-MS, LC-MS and RNA sequencing platforms. The metabolite pipelines are well established tools to generate these types of data, but also have the limitations in that only well characterized metabolites can be used. The deep sequencing will allow us to include all transcripts present during the developmental stages of the tobacco tree leaf, but has to be mapped back to the sequence of Nicotiana tabacum. With these set-ups, we aim at a basic understanding for underlying processes and at establishing an industrial framework to exploit the outcomes. In a more long term perspective, we believe that data generated here will provide means for a sustainable biorefinery process using poplar and tobacco tree as raw material. To date the basal level of metabolites in the samples have been analyzed and the protocols utilized are provided in this article.

Plant biomass offers a renewable resource for multiple products, including fuel, feed, food, and a variety of materials. In this paper we investigate the properties of tobacco tree (Nicotiana glauca) and poplar as suitable sources for a biorefinery pipeline.

바이오 기반 산업을위한 원료로 담배 나무와 포플러의 평가에 대한 성적 증명서 및 대사 산물 프로파일

The global demand for food, feed, energy, and water poses extraordinary challenges for future generations. It is evident that robust platforms for the ...

The Use of High-resolution Infrared Thermography (HRIT) for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

Freezing events that occur when plants are actively growing can be a lethal event, particularly if the plant has no freezing tolerance. Such frost events often have devastating effects on agricultural production and can also play an important role in shaping community structure in natural populations of plants, especially in alpine, sub-arctic, and arctic ecosystems. Therefore, a better understanding of the freezing process in plants can play an important role in the development of methods of frost protection and understanding mechanisms of freeze avoidance. Here, we describe a protocol to visualize the freezing process in plants using high-resolution infrared thermography (HRIT). The use of this technology allows one to determine the primary sites of ice formation in plants, how ice propagates, and the presence of ice barriers. Furthermore, it allows one to examine the role of extrinsic and intrinsic nucleators in determining the temperature at which plants freeze and evaluate the ability of various compounds to either affect the freezing process or increase freezing tolerance. The use of HRIT allows one to visualize the many adaptations that have evolved in plants, which directly or indirectly impact the freezing process and ultimately enables plants to survive frost events.

The Use of High-resolution Infrared Thermography HRIT for the Study of Ice Nucleation and Ice Propagation in Plants

Here we present a protocol that allows one to visualize sites of ice formation and avenues of ice propagation in plants utilizing high resolution infrared thermography (HRIT).

식물의 얼음 핵 얼음 전파의 연구에 대한 고해상도 적외선 체열 (HRIT)의 사용

Freezing events that occur when plants are actively growing can be a lethal event, particularly if the plant has no freezing tolerance. Such frost events ...

A New Application of the Electrical Penetration Graph (EPG) for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

Electrophysiological properties of cells are often studied in vitro, after dissociating them from their native environments. However, the study of electrical transmission between distant cells in an organism requires in vivo, artifact-free recordings of cells embedded within their native environment. The transmission of electrical signals from wounded to unwounded areas in a plant has since long piqued the interest of botanists. The phloem, the living part of the plant vasculature that is spread throughout the plant, has been postulated as a major tissue in electrical transmission in plants. The lack of suitable electrophysiological methods poses many challenges for the study of the electrical properties of the phloem cells in vivo. Here we present a novel approach for intracellular electrophysiology of sieve elements (SEs) that uses living aphids, or other phloem-feeding hemipteran insects, integrated in the electrical penetration graph (EPG) circuit. The versatility, robustness, and accuracy of this method made it possible to record and study in detail the wound-induced electrical signals in SEs of central veins of the model plant Arabidopsis thaliana1. Here we show that EPG-electrodes can be easily implemented for intracellular electrophysiological recordings of SEs in marginal veins, as well as to study the capacity of SEs to respond with electrical signals to several external stimuli. The EPG approach applied to intracellular electrophysiology of SEs can be implemented to a wide variety of plant species, in a large number of plant/insect combinations, and for many research aims.

A New Application of the Electrical Penetration Graph EPG for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

Electrical Penetration Graph (EPG) is a well-established technique for studying the feeding behavior of stylet-bearing insects. Here we show a new application of EPG as a non-invasive tool for the acquisition of intracellular electrophysiology recordings of sieve elements (SEs), the cells that form the phloem vasculature in plants.

체관부 체 요소에 전기 신호를 획득 및 측정을위한 전기 침투 그래프 (EPG)의 새로운 응용 프로그램

Electrophysiological properties of cells are often studied in vitro, after dissociating them from their native environments. However, the study of ...

A Gusseted Thermogradient Table to Control Soil Temperatures for Evaluating Plant Growth and Monitoring Soil Processes

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a series of incubators. A temperature gradient is passively established across the surface of the table between the heated and cooled ends and is lost quickly at distances above the surface. Since temperature is only controlled on the table surface, experiments are restricted to shallow containers, such as Petri dishes, placed on the table. Welding continuous aluminum vertical strips or gussets perpendicular to the surface of a table enables temperature control in depth via convective heat flow. Soil in the channels between gussets was maintained across a gradient of temperatures allowing a greater diversity of experimentation. The gusseted design was evaluated by germinating oat, lettuce, tomato, and melon seeds. Soil temperatures were monitored using individual, battery-powered dataloggers positioned across the table. LED lights installed in the lids or along the sides of the gradient table create a controlled temperature chamber where seedlings can be grown over a range of temperatures. The gusseted design enabled accurate determination of optimum temperatures for fastest germination rate and the highest percentage germination for each species. Germination information from gradient table experiments can help predict seed germination and seedling growth under the adverse soil conditions often encountered during field crop production. Temperature effects on seed germination, seedling growth, and soil ecology can be tested under controlled conditions in a laboratory using a gusseted thermogradient table.

Traditional thermogradient tables create a range of temperatures across the surface. Welding gussets perpendicular to the surface of a thermogradient table will control temperature in depth increasing possible research applications.

거싯 Thermogradient 표는 토양 프로세스 식물 성장 평가 및 모니터링을위한 토양 온도를 제어하는

Thermogradient tables were first developed in the 1950s primarily to test seed germination over a range of temperatures simultaneously without using a ...

Operation of a 25 KWth Calcium Looping Pilot-plant with High Oxygen Concentrations in the Calciner

Calcium looping (CaL) is a post-combustion CO2 capture technology that is suitable for retrofitting existing power plants. The CaL process uses limestone as a cheap and readily available CO2 sorbent. While the technology has been widely studied, there are a few available options that could be applied to make it more economically viable. One of these is to increase the oxygen concentration in the calciner to reduce or eliminate the amount of recycled gas (CO2, H2O and impurities); therefore, decreasing or removing the energy necessary to heat the recycled gas stream. Moreover, there is a resulting increase in the energy input due to the change in the combustion intensity; this energy is used to enable the endothermic calcination reaction to occur in the absence of recycled flue gases. This paper presents the operation and first results of a CaL pilot plant with 100% oxygen combustion of natural gas in the calciner. The gas coming into the carbonator was a simulated flue gas from a coal-fired power plant or cement industry. Several limestone particle size distributions are also tested to further explore the effect of this parameter on the overall performance of this operating mode. The configuration of the reactor system, the operating procedures, and the results are described in detail in this paper. The reactor showed good hydrodynamic stability and stable CO2 capture, with capture efficiencies of up to 70% with a gas mixture simulating the flue gas of a coal-fired power plant.

Operation of a 25 KWth Calcium Looping Pilot-plant with High Oxygen Concentrations in the Calciner

This manuscript describes a procedure for operating a calcium looping pilot-plant for post-combustion carbon capture with high oxygen concentrations in the calciner in order to reduce or eliminate the flue gas recycle.

25 KW회 칼슘 반복 파일럿-식물은 Calciner에서 높은 산소 농도와 운영

Calcium looping (CaL) is a post-combustion CO2 capture technology that is suitable for retrofitting existing power plants. The CaL process uses limestone ...

Procedures of Laboratory Fumigation for Pest Control with Nitric Oxide Gas

Nitric oxide (NO) is a newly discovered fumigant for postharvest pest control. This paper provides detailed protocols for conducting NO fumigation on fresh products and procedures for residue analysis and product quality evaluation. An airtight fumigation chamber containing fresh fruit and vegetables is first flushed with nitrogen (N2) to establish an ultralow oxygen (ULO) environment followed by injection of NO. The fumigation chamber is then kept at a low temperature of 2 - 5 &#176;C for a specified time period necessary to kill a target pest to complete a fumigation treatment. At the end of a fumigation treatment, the fumigation chamber is flushed with N2 to dilute NO prior to opening the chamber to ambient air to prevent the reaction between NO and O2, which produces NO2 and may damage delicate fresh products. At different times after NO fumigation, NO2 in headspace and nitrate and nitrite in liquid samples were measured as residues. Product quality was evaluated after 2 weeks of post-treatment cold storage to determine effects of NO fumigation on product quality. Keeping&#160;O2 from reacting with NO is critical to NO fumigation and is an important part of the protocols. Measuring NO levels is challenging and a practical solution is provided. Possible protocol modifications are also suggested for measuring NO levels in the fumigation chambers as well as residues. NO fumigation has the potential to be a practical alternative to methyl bromide fumigation for postharvest pest control on fresh and stored products. This publication is intended to assist other researchers in conducting NO fumigation research for postharvest pest control and accelerating the development of NO fumigation for practical applications.

This paper describes nitric oxide (NO) fumigation protocols for postharvest pest control. Fumigation chambers are flushed with nitrogen (N2) to establish ultralow oxygen conditions before NO is injected. At the end, chambers are flushed with N2 to dilute NO before exposing products to ambient air to prevent exposure to NO2.

산화 질소 가스와 해충에 대 한 훈 증 실험실의 절차

Nitric oxide (NO) is a newly discovered fumigant for postharvest pest control. This paper provides detailed protocols for conducting NO fumigation on ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current measures to combat such pathogens have proved too conservative and, thus, not sufficiently effective, and they can potentially pose environmental risks. Therefore, it is extremely necessary to identify host-resistance factors to assist in controlling plant diseases naturally through the identification of resistant germplasm, the isolation and characterization of resistance genes, and the molecular breeding of resistant cultivars. In this regard, there is need to establish an accurate, rapid, and large-scale inoculation method to breed and develop plant resistance genes. The rice blast fungal pathogen Magnaporthe grisea causes severe disease symptoms and yield losses. Recently, M. grisea has emerged as a model organism for studying the mechanisms of plant-fungal pathogen interactions. Hence, we report the development of a plant virulence test method that is specific for M. grisea. This method provides for both spray inoculation with a conidial suspension and wounding inoculation with mycelium cubes or droplets of conidial suspension. The key step of the wounding inoculation method for detached rice leaves is to make wounds on plant leaves, which avoids any interference caused by host penetration resistance. This spray/wounding protocol contributes to the rapid, accurate, and large-scale screening of the pathotypes of M. grisea isolates. This integrated and systematic plant infection method will serve as an excellent starting point for gaining a broad perspective of issues in plant pathology.

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Here, we present a protocol to test plant virulence with the plant pathogen Magnaporthe grisea. This report will contribute to the large-scale screening of the pathotypes of fungi isolates and serve as an excellent starting point for understanding the resistant mechanisms of plants during molecular breeding.

식물 감염 테스트: 스프레이 식물 병원 체 Magnaporthe Grisea 와 상처-중재 접종

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

A Flexible Low Cost Hydroponic System for Assessing Plant Responses to Small Molecules in Sterile Conditions

A wide range of studies in plant biology are performed using hydroponic cultures. In this work, an in vitro hydroponic growth system designed for assessing plant responses to chemicals and other substances of interest is presented. This system is highly efficient in obtaining homogeneous and healthy seedlings of the C3 and C4 model species Arabidopsis thaliana and Setaria viridis, respectively. The sterile cultivation avoids algae and microorganism contamination, which are known limiting factors for plant normal growth and development in hydroponics. In addition, this system is scalable, enabling the harvest of plant material on a large scale with minor mechanical damage, as well as the harvest of individual parts of a plant if desired. A detailed protocol demonstrating that this system has an easy and low-cost assembly, as it uses pipette racks as the main platform for growing plants, is provided. The feasibility of this system was validated using Arabidopsis seedlings to assess the effect of the drug AZD-8055, a chemical inhibitor of the target of rapamycin (TOR) kinase. TOR inhibition was efficiently detected as early as 30 min after an AZD-8055 treatment in roots and shoots. Furthermore, AZD-8055-treated plants displayed the expected starch-excess phenotype. We proposed this hydroponic system as an ideal method for plant researchers aiming to monitor the action of plant inducers or inhibitors, as well as to assess metabolic fluxes using isotope-labeling compounds which, in general, requires the use of expensive reagents.

A simple, versatile, and low-cost in vitro hydroponic system was successfully optimized, enabling large-scale experiments under sterile conditions. This system facilitates the application of chemicals in a solution and their efficient absorption by roots for molecular, biochemical, and physiological studies.

유연한 저비용 수경 시스템 살 균 조건에서 작은 분자에 식물 응답을 평가 하기 위한

A wide range of studies in plant biology are performed using hydroponic cultures. In this work, an in vitro hydroponic growth system designed for ...

An Optimized Rhizobox Protocol to Visualize Root Growth and Responsiveness to Localized Nutrients

Roots are notoriously difficult to study. Soil is both a visual and mechanical barrier, making it difficult to track roots in situ without destructive harvest or expensive equipment. We present a customizable and affordable rhizobox method that allows the non-destructive visualization of root growth over time and is particularly well-suited to studying root plasticity in response to localized resource patches. The method was validated by assessing maize genotypic variation in plasticity responses to patches containing 15N-labeled legume residue. Methods are described to obtain representative developmental measurements over time, measure root length density in resource-containing and control patches, calculate root growth rates, and determine 15N recovery by plant roots and shoots. Advantages, caveats, and potential future applications of the method are also discussed. Although care must be taken to ensure that experimental conditions do not bias root growth data, the rhizobox protocol presented here yields reliable results if carried out with sufficient attention to detail.

Visualizing and measuring root growth in situ is extremely challenging. We present a customizable rhizobox method to track root development and proliferation over time in response to nutrient enrichment. This method is used to analyze maize genotypic differences in root plasticity in response to an organic nitrogen source.

루트 성장 및 지역화 된 양분에 응답을 시각화 하는 최적화 된 Rhizobox 프로토콜

Roots are notoriously difficult to study. Soil is both a visual and mechanical barrier, making it difficult to track roots in situ without destructive ...