Yazarlar Hyewon Cooper&#39;ın sanatsal katkılarından dolayı minnettarız.

1.. Propodite-dactylopodite (PD) Sinir gelen Diseksiyon ve Kayıt Elektrik Etkinliği <ol><li> Arkasından karapaksla karşısında Yengeç tutun ve pençeleri kaçınarak, forseps ile meropodite proksimal kısmını çimdik. Bacak ölüme kanama hayvan önlemek için autotomize olacaktır. Onlar yerine agresif ve çok hızlı olarak mavi yengeçler tutarken dikkatli olun. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig1.jpg" width="500px" /> Şekil 1. İlk yengeç bacağını yürüyüş. Chordotonal organların (taralı bölgeler) arasında anatomik konumu bu şekil üzerine bindirilmiş. Çift ok başı nerede PD sinir deneyler için bacak transect gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig1highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Propodite ve carpodite arasında bir kesim olun. Carpopodite ve t atın<html> o (Şekil 1) meropodite eklenmiş. </li><li> . Derinden kesmeyin: # 11 bıçak (Şekil 2 ve 3) Not ile bir neşter ile propodite pigmentli (lateral) taraftaki manikür büyük bir pencere kesti. </li><li> Altında neşter bıçağı kaydırarak Kütikül çıkarın ve manikür paralel. Bu kütikül bağlı kas liflerinin koparır. </li><li> Aynı tekniği kullanarak pigmentless propodite (medial) tarafında küçük bir pencere kesmek, ama (mafsal ya da bölümler arasındaki menteşe) kondilini bırakın eki bozulmamış. <img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig2.jpg" width="500px" /> Şekil 2. Propodite noktalı çizgi boyunca kesin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig2highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . n &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/51050/51050fig3.jpg &quot;width =&quot; 500px &quot;/&gt; Şekil 3. Penceresinde siniri (oklar sinir demeti özetleyecek) Açığa. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig3highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Aşağı hazırlık pin yengeç tuzlu su içeren bir Sylgard kaplı çanak hazırlayın Not:. Türe özgü tuzlu yemek tarifleri için Tablo 1&#39;e bakınız. </li><li> Dikkatle yangın parlatılmış cam iğne ile araştırılarak PD organı bulun. Eklemi kapsayan elastik kordon gümüş bir görünüme sahiptir. </li><li> Tendonun her iki taraftan organ görünümünü belirsiz kas liflerini çıkarın. PD organ veya onun sinir kesmemeye çok dikkatli olun. </li><li> Bu sağlandıktan sonra, sıkıca (Şekil 4) yukarı bakacak (yanal) pigment tarafı ile çanak hazırlık yatıştırıldı. <img alt="Şekil 4," fo:content-width= &quot;5in&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/51050/51050fig4.jpg&quot; width = &quot;500px&quot; /&gt; Şekil 4. PD organ ve sinir Exposed. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig4highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Özgür-up sinir uzun bir uzunluğu (1.5 cm) kayıt amaçlı sırayla kadar proksimale mümkün Propodite yılında PD organı sinir izleyin. PD sinir hala ana bacak sinirine takılı iken bu en iyi yapılır. </li><li> Cam iğneler yardımı ile ana bacak sinir PD sinir ayırdıktan sonra, iris makası ile proksimale PD sinir sever Not:. Diseksiyonu sırasında germek veya sinir çekmeyin. </li><li> Uzatılmış ve tam fleksiyon konuma dactylopodite getirin. Aşırı fleksiyon ve ekstansiyon pozisyonları ve daha sonra kullanılmak üzere bir yarım noktası nerede not alın. </li><li> Tuzlu su banyosu içinde bir topraklama kablosu yerleştirin. </li><li> E açınlectrophysiology kayıt donanım / yazılım Not:. Bizim kurulum önce 23 tarif edilmiştir. </li><li> Bu mikroskop sahne bakan böylece mikroskop yerleştirin. Hazırlık çanak sahnede yerleştirildikten sonra, en iyi hazırlık görselleştirmek için yüksek yoğunluklu aydınlatıcı ışınının konumunu ayarlamak gerekir. </li><li> Ekli emme elektrot takımı tuzlu su banyosu ve hazırlanması kolay erişim böylece mikromanipülatör yerleştirin. Bir online video 24 de gösterildiği gibi, emme elektrodu inşa edilmiştir. </li><li> , Nöral aktiviteyi tespit emme elektrot içine PD sinirin kesik ucunu çizmek için. </li><li> Bir cam prob veya tahta takoz yardımı ile birkaç döngüleri için genişletilmiş ve fleksiyonda pozisyonlarda boyunca Dactyl taşıyın. </li><li> Dactyl, genişletilmiş fleksiyonda ve orta pozisyonlarda tutturulmuş zaman bir sonraki etkinliği gözlemlemek. </li></ol> 2. Gerginlik Elektrik Hareketi KayıtKuvvet Nesil İzleme sinir ederken <ol><li> Bacağın lateral ve medial tarafı belirler. Medial tarafı bir tırnak ile Meropodite bölgede hafifçe sıkarak hissedilebilir bir yumuşak bir dokuya sahiptir. </li><li> Çanak, bu yumuşak manikür tarafı yukarı yerleştirin. Açıcı kas innervates excitor motor sinir da Carpopodite sedye kas innerve. </li><li> Açıcı kas uyarmak amacıyla carpodite bölgedeki sedye motor sinir izole edilir ve bir emme elektrodu ile uyarılır. Bacağın proksimal kısmı makasla meropodite kesilmesiyle çıkarılır. </li><li> Iç taraftaki bilek bölgesindeki kütikül bir bölümünü (medial yan, Şekil 5A) çıkarın. </li><li> Bükücü kas apodeme kesin ve bacak boşluğundan dışarı ana bacak sinir çekme olmayacak şekilde kas çıkarın (Şekil 5B, C apodeme ayrılır bender için oklara dikkat edin). Ana bacak sinir ve bir sutyenNCH ​​sedye kas sonra (Şekil 5D) gözlenebilir. </li><li> Sedye kas (ok at Şekil 5E) ana sinir demeti dallanma sinir bulun. Bu yakın kas kesmek ve uyarmak için bir emme elektrot içine çekilebilir (Şekil 5F ve G, ok dalı gösteriyor). </li><li> Siniri sıkıştırmasıyla olmadan açacağı doğru çıkıntı sinirin bir bölümünü kızdırmak. Sedye / açacağı motor sinir transect. </li><li> Emme elektrodu içine motor sinir çekin ve sonra uyarır. </li><li> Açıcı kas ve sinir gerginlik maruz yakın kas ve propodite ventral bölgesini kaldırın. Propodite bir # 11 bıçak (Şekil 6) ile bir neşter ile yakın kas kesti Not:. Bunun açacağı motor sinirine zarar verebilir çünkü yakın bölgede derin kesmeyin. <img alt="Şekil 5," fo:content-width = &quot;5in&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/51050/51050fig5.jpg&quot; width = &quot;500px&quot; /&gt; Şekil 5. Açacağı kas uyarıcı için motor nöron sergilemek için Diseksiyon adımlar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig5highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 6," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig6.jpg" width="500px" /> Şekil 6,. Kaldırılamaz böylece yakın kas maruz propodite ventral yarısında manikür kesti. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig6highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Canlı nöronlar tutmak için diseksiyon işlemi boyunca taze soğutulmuş tuzlu suyla tuzlu değişimi. Daha fazla diseksiyon için, bir mikroskop altında hazırlanması çanak yerleştirin ve fiber optik aydınlatma kullanın. </li><li> Dikkatli olan ek yakın tendon kestisivri uçlu orta boy makas kullanarak dactyl. </li><li> Açıkça görünür olmalıdır ana bacak sinir açıcı kas dalları rahatsız etmemek için çok dikkatli olun. </li><li> Çıkarın ve yakın kas ve tendon atın. </li><li> Bir diseksiyon iğne ile Dactyl bir delik açın. Bu delik, bir gerilim (kuvvet) dönüştürücü metal pim bağlamak için daha sonra kullanılabilir, ancak bu işlem, bu aşamada yapmak gereklidir. </li><li> Açıcı kas distal bölgesinde açıcı kas ve apodeme için projeler sinir dalı bulun. Dikkatle yangın parlatılmış cam aracı ile sinir prob. </li><li> Motor sinir demetine apodeme hasılatı distal ucundan ortaya çıkan gerilim sinir dikkate alınmalıdır. </li><li> , Nöral aktiviteyi tespit yengeç tuzlu su ile bir emme elektrot doldurmak ve elektrot içine açacağı gerilim sinirin kesik ucunu çizmek için. Emme elektrot sinir üzerine sıkıca oturduğundan emin olun. </li><li> Neura için inceleyinaçacağı apodeme pasif gerginlik l bağlılaşığı. Gerginlik sinir elektriksel aktivite kaydederken, (yani açacağı kas germe) uzun bir eklem içine hızla Dactyl döndürün. </li><li> Sonraki, stimülasyon frekansı ile ilgili test aktif güç geliştirme. </li><li> Kanca ucu Dactyl küçük bir delikten geçer ve böylece sıkıca metal kanca takmak. </li><li> . Kuvvet transformatörüne metal kanca diğer ucunu Not: pin dik üretilen kuvvetin maksimum tespiti için dönüştürücüye, böylece güç çevrim, 90 ° açı ile her zaman olduğundan emin olun. </li><li> Bu açacağı eklemin yaklaşık 45 ° &#39;lik açıyla böylece kanca ve Dactyl çekin. </li><li> Şimdi 250 msn için, 100 Hz&#39;de, motor sinir uyarmak ve kuvvet gibi gerilim sinirin ateşleme frekansını ölçmek. </li><li> Açıcı yumuşak kas lifleri, böylece, tam uzatılmış pozisyona ortak yerleştirin. </li><li> S250 msn için, 100 Hz&#39;de, motor sinir ve timulate kuvveti hem de germe sinirin ateşleme frekansını ölçmek. </li><li> Tamamen (~ 90 °) fleksiyonda böylece viraj / eklemi esnetin. Bu konumda açıcının kas lifleri tamamen gerilir. Nedeniyle kas bu pasif germek dönüştürücü tarafından ölçülen bazı güç olabilir. </li><li> 250 msn için, 100 Hz&#39;de, motor sinir ve teşvik kuvveti hem de germe sinirin ateşleme frekansını ölçmek. </li><li> Bir kuvvet ölçüm sonra çeşitli frekansların bir dizi devam: Her ortak konumda, 8-10 saniye boyunca 20, 40, 60, 80, ve 100 Hz. </li><li> Hızlı bir gerilim sürümü ile tepkisini ölçmek. Kuvvet dönüştürücü üzerinde kanca kolayca Dactyl delikten dışarı itilmesi, böylece hazırlık düzenleyin. </li><li> Tamamen (~ 90 °) fleksiyonda böylece viraj / eklemi esnetin. Şimdi 5 sn sürekli stimülasyon ile 100 Hz motor sinirini uyarır. </li><li> İlk secon sonragerginlik açıcı kas inşa gibi d veya daha az, Dactyl delikten dışarı pimini itin. </li><li> Dactyl tutan pimin yayımlanmasından önce ve sonra gerginlik sinir kaydını inceleyin. </li><li> Bu gerilim nöronların çıkışını değiştirmek Octopamine, serotonin ve proctolin gibi nöro-aktif maddelerin modüle edici etkileri, açıktaki açıcı kas üzerinde banyo ortamı için bu moleküllerin eklenmesi ve tekrar deneyleri ile tespit edilebilir. </li><li> Bir pipet kullanın ve hazırlanması üzerinde 1-2 ml damla. </li></ol> 3. Crustacean içinde boyama Periferik Sinir Sistemi Yapıları Ayakları Yürüyüş <ol><li> Metilen mavisi tekniği <ol><li> Damıtılmış su, iki parçalı bir parça metilen mavisi klorür stok solüsyonu (% 0.25) seyreltin. </li><li> Tamponlu tuz beş parça için bu karışımı ekleyin. Iyice ilgi alanı sulayacak. </li><li> 1. bölümdeki protokole göre bir bacak teşrih. Ön inkübe12-13 ° C&#39;de metilen mavisi çözeltisi içinde Terkip </li><li> Hazırlayıcıları boyamanın ilerleme takip düşük yoğunluklu aydınlatma kullanılarak mikroskop ile her 10-15 dk inceleyin. Boyama diğerleri, bir saat içinde tamamlanmış olacak bazı durumlarda bu gecede alabilir. </li></ol></li><li> 4-di-2-ASP tekniği <ol><li> Floresan boyalar geri-dolgu PD nöron veya doğrudan banyosundan hazırlanmasını leke için kullanılabilir. Ancak floresan boya görüntülemek için yetenekleri olan, uygun bir mikroskop gereklidir. </li><li> 1. bölümdeki bir protokole göre bir bacak teşrih. </li><li> 4-Di-2-ASP çözeltisi, 10 uM konsantrasyonda in hazırlanmasını inkübe edin ve 15 dakika boyunca buzdolabında hazırlanmasını bırakın. Hazırlık karşılamak için yeterli bir çözüm kullanın. </li><li> Hızla hazırlıklarını fotoğraflamak ve cıva ışığa maruz kaldıktan kaçının. Bu floresan boya nispeten hızlı bir şekilde kaybolur. </li></ol></li><li&gt; Kobalt klorid tekniği <ol><li> 1. bölümde protokolüne göre PD siniri ortaya çıkarmak ve soğuk tuzlu su içinde bekletildi tutun. </li><li> CoCl2 tutmak için jöle de bir petrol olun. Herhangi bir CoCl2 tuzlu su dökülür durumunda tüm hazırlık kara leke, ve preparat atılmalıdır. </li><li> , Bir polistiren levha küçük bir kesim Kayma plastik platformu yapmak için, ve uzakta yüzer veya (Şekil 7) tuzlu su banyosu dalmış haline olmaz böyle bir şekilde bunu pin. <img alt="Şekil 7" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig7.jpg" width="500px" /> Çanak yerinde tutmak için iğne ile Şekil 7.. Polistiren levha. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig7highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Bir tek şırıngaya tutturulmuş ince bir derialtı iğne vazelin çıkarın,sonra sinir polistiren kayma üstüne, üzerinde bol dökümlü olacak orta sığ bir &quot;V&quot; dışında yüksek yaklaşık 1-1.5 mm olmalıdır bir engel (bir daire işe yarayabilecek) yapmak. </li><li> &quot;V&quot; yakın bariyerin iki tarafında tuzlu küçük bir su birikintisi yapın. Germek veya tutam sinir, çanak dikkatlice sinir kaldırın ve jöle de petrol tuzlu su birikintisi içinde yerleştirmek için özen. </li><li> Sinir bölümü siniri açığa karşılamak için vazelin çıkarma dikkatle, kurumasına değil o kadar hızlı çalışır. Şimdi tuzlu su ile bariyer testi ve emin sızıntı olmadığından emin olun. </li><li> Bariyerin iç tuzlu uzak kurutun ve banyo tuzlu iki tarafı (Şekil 8) birbirinden izole edilir emin olmak için vazelin çeperi etrafında yüksek olduğunda doldurur bakın. <img alt="Şekil 8," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig8.jpg" width="500px" /> <stro<html> ng&gt; Şekil 8. vazelin de tuzlu ve PD sinir iyice yayılan ile. PD sinir henüz kesilmiş değil. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig8highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Iyi doku bir parça kağıt kullanarak tuzlu fitil. Kağıt sinir kadar tamamlamayı icar kaçının. </li><li> Distile su birkaç küçük damla kullanarak yeni bir su birikintisi olun ve sonra sinir ucunu kesti. Kesim yaparken bariyer boyunca sinir çekmek için çok dikkatli olun. Distile su ozmotik şok olacak &quot;balon&quot; aksonlar. </li><li> 30 saniye içinde, suya CoCl2 küçük bir damla bu çözüm emmesi ve daha sonra sinirin bu kısaltılmış bölüm (Şekil 9) üzerinde bir su birikintisi oluşturacak kadar CoCl2 ekleyin. Preparatlar en iyi, 12-24 saat boyunca 13 ° C&#39;de buzdolabında saklanır. tp_upload/51050/51050fig9.jpg &quot;width =&quot; 500px &quot;/&gt; Şekil 9. Kesim PD sinir CoCl2 maruz. Kesim sinir nöron hücresi bedenlerine aksonlar aracılığıyla boya moleküllerinin hareketini kolaylaştırır ve hızlandırır suyun varlığında şişer. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig9highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . </li><li> Nemlendirme su birikintileri çıkarın. Bir dokusu kullanılarak kobalt çözüm uzak kurulayın ve tuzlu çeşitli değişiklikler ile kobalt kalıntıları silsin. </li><li> Yengeç tuzlu çözeltinin yaklaşık 10 ml içeren bir küçük bir cam Petri tabağına izole edilmiş bir preparasyonunu aktarın. Nöronlar, yıkanır ve aşağıdaki adımları yerinde gerçekleştirilir. İyi metal aletler, bu adımdan sonra hazırlık (eğer fizyolojisi için daha sonraki bir zamanda kullanılmak üzere olmayan belirli araçları kullanmak gerekir) işlemek için kullanılacak değildir. </li><li> (Amonyum sülfid 1-2 damla NH4) tuzlu 2 S. Sıkıca (NH 4) 2 S şişe kapağı ve arka kaputun içine yerleştirin. Bir mikroskop altında hazırlanmasında, reaksiyonu dikkate </li><li> 1-2 dakika içinde, kobalt-dolu nöronlar ve bunların işlemleri onlar siyah leke çünkü görünmeye başlamalıdır. </li><li> 5-10 dakika sonra, taze tuzlu çözelti ile geliştirme çözümü değiştirin. </li><li> Eğer lavabonun drenaj dökülür var geliştirme çözümü birkaç dakika veya kapaklı bir çöp şişe akan musluk suyu ile takip emin olun. </li><li> Tuzlu su dökün ve Bouin çözeltisi sabitleyici iki değişiklik ile yaklaşık 15 dakika boyunca sinir hazırlık düzeltin. Açıcı kas gibi daha büyük dokular için (gerilim nöronlar leke), 30 dakika tespitin süresini artırır. </li><li> % 70 (örneğin% 70,% 80,% 90,% 100) başlayan etanol konsantrasyonuna göre artan bir dizi kurutmak. Her bir konsantrasyonda yaklaşık 10 dakika için yeterlidirküçük dokular. </li><li> % 100 etanol iki kez değiştirilerek yaklaşık 10-15 dakika sonra,% 100 metil salisilat ile etanol değiştirerek doku temizleyin. Hazırlık tekrarlanan görüntüleme için sürekli bu çözüm kalacak. Çevredeki doku daha açık hale gelecektir, çünkü zaman ile doldurulmuş hücreler, daha fazla belirgin hale gelecektir. İntensifikasyon yöntemler zaman üzerinde 25 solmaya önlemek için kullanılabilir. </li><li> CoCl 2 ile gerginlik sinir doldurmak için aynı işlemi kullanın. Bununla birlikte, her etanol dehidrasyon adımda etanol çözeltisi birden çok kez değiştirebilir ve iyice kas dihidrat ve onları iyi temizlenmesi için, her adım için yaklaşık 20 dakika boyunca alkol içinde hazırlanmasını inkübe edin. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Whitear, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chordotonal+organs+in+Crustacea.">Chordotonal organs in Crustacea.</a> Nature. 187, 522-523 (1038).</li><li>Alexandrowicz, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+anatomy+of+leg+propriocetors+in+some+decapod+Crustacea.">The comparative anatomy of leg propriocetors in some decapod Crustacea.</a> J. Mar. Biol. Assoc. U.K. 52 (3), 605-634 (1972).</li><li>Hartman, H. B., Boettiger, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+functional+organization+of+the+propys-dactylus+organ+in+Cancer+irroratus+Say.">The functional organization of the propys-dactylus organ in Cancer irroratus Say.</a> Comp. Biochem. Physiol. 22, 651-663 (1967).</li><li>Cooper, R. L., Hartman, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+the+bender+apodeme+tension+receptors+in+the+Dungeness+crab,+Cancer+magister.">Responses of the bender apodeme tension receptors in the Dungeness crab, Cancer magister.</a> Comp. Biochem. Physiol. A Physiol. 109 (2), 479-486 (1994).</li><li>Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+proprioceptive+neurons+on+chordotonal+organs+in+the+crab,+Cancer+magister.">Mapping proprioceptive neurons on chordotonal organs in the crab, Cancer magister.</a> Crustaceana. 81 (4), 447-475 (2008).</li><li>Burke, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organ+for+proprioception+and+vibration+sense+in+Carcinus+maenas.">An organ for proprioception and vibration sense in Carcinus maenas.</a> J. Exp. Biol. 31, 127-138 (1953).</li><li>Hill, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> First and Last Experiments in Muscle Mechanics. , (1970).</li><li>Stuart, D. G., Mosher, C. C., Gerlach, R. L., Reinking, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+arrangement+and+transducing+properties+of+Golgi+tendon+organs.">Mechanical arrangement and transducing properties of Golgi tendon organs.</a> Exp. Brain Res. 14 (3), 274-292 (1972).</li><li>Macmillan, D. L., Dando, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tension+receptors+on+the+apodemes+of+muscles+in+the+walking+legs+of+the+crab,+Cancer+magister.">Tension receptors on the apodemes of muscles in the walking legs of the crab, Cancer magister.</a> Mar. Behav. Physiol. 1 (1-4), 185-208 (1972).</li><li>B&#233;vengut, M., Simmers, A. J., Clarac, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+neuronal+projections+and+neuromuscular+organization+of+the+basal+region+of+the+shore+crab+leg.">Central neuronal projections and neuromuscular organization of the basal region of the shore crab leg.</a> J. Comp. Neurol. 221 (2), 185-198 (1983).</li><li>El Manira, A., Cattaert, D., Clarac, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monosynaptic+connections+mediate+resistance+reflex+in+crayfish+(Procambarus+clarkii)+legs.">Monosynaptic connections mediate resistance reflex in crayfish (Procambarus clarkii) legs.</a> J. Comp. Physiol. A. 168 (3), 337-349 (1991).</li><li>Le Bon-Jego, M., Cattaert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+component+of+the+resistance+reflex+in+the+locomotor+network+of+the+crayfish.">Inhibitory component of the resistance reflex in the locomotor network of the crayfish.</a> J. Neurophysiol. 88 (5), 2575-2588 (2002).</li><li>Ray, D. L., Clarac, F., Cattaert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+analysis+of+the+sensory+motor+pathway+of+resistance+reflex+in+crayfish.+I.+Multisensory+coding+and+motor+neuron+monosynaptic+responses.">Functional analysis of the sensory motor pathway of resistance reflex in crayfish. I. Multisensory coding and motor neuron monosynaptic responses.</a> J. Neurophysiol. 78 (6), 3133-3143 (1997).</li><li>Wiersma, C. A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vergleichende+Untersuchungen&#252;ber+das+periphere+Nerve-muskelsystem+von+Crustaceen+(Comparative+studies+on+the+peripheral+nerve-muscle+system+of+crustaceans).">Vergleichende Untersuchungen&#252;ber das periphere Nerve-muskelsystem von Crustaceen (Comparative studies on the peripheral nerve-muscle system of crustaceans).</a> J. Comp. Physiol. 19, 349-385 (1933).</li><li>Wiersma, C. A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Movement+receptors+in+decapod+crustacea.">Movement receptors in decapod crustacea.</a> J. Mar. Biol. Assoc. U.K. 38 (01), 01-143 (1959).</li><li>Hartman, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tension+receptors+on+the+closer+muscle+apodeme+in+the+walking+legs+of+the+blue+crab+Callinectes+sapidus.">Tension receptors on the closer muscle apodeme in the walking legs of the blue crab Callinectes sapidus.</a> J. Comp. Physiol. A. 157 (3), 355-362 (1985).</li><li>Holsinger, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The effect of regional phenotypic differences of Procambarus clarkii opener muscle on sarcomere length, fiber diameter, and force development MSc thesis [dissertation]. , (2013).</li><li>Parsons, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+morphology+and+ultrastructure+of+tension+receptors+in+the+walking+legs+of+the+crab,+Carcinus+maenas.">The morphology and ultrastructure of tension receptors in the walking legs of the crab, Carcinus maenas.</a> Cell Tissue Res. 211 (1), 139-149 (1980).</li><li>Parsons, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+and+central+interactions+of+tension+receptors+in+the+leg+muscle+of+Carcinus.">Responses and central interactions of tension receptors in the leg muscle of Carcinus.</a> Comp. Biochem. Physiol. A Physiol. 72 (2), 391-399 (1982).</li><li>Tryba, A. K., Hartman, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+responses+of+series+force+receptors+innervating+the+opener+muscle+apodeme+in+the+blue+crab,+Callinectes+sapidus.">Dynamic responses of series force receptors innervating the opener muscle apodeme in the blue crab, Callinectes sapidus.</a> J. Comp. Physiol. A. 180 (3), 215-221 (1997).</li><li>Whitear, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fine+structure+of+crustacean+proprioceptors.+I.+The+chordotonal+organs+in+the+legs+of+the+shore+crab,+Carcinus+meanas.">The fine structure of crustacean proprioceptors. I. The chordotonal organs in the legs of the shore crab, Carcinus meanas.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 245 (725), 291-325 (1962).</li><li>Whitear, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fine+structure+of+crustacean+proprioceptors.+II.+The+thoracico-coxal+organs+in+Carcinus,+Pagurus+and+Astacus.">The fine structure of crustacean proprioceptors. II. The thoracico-coxal organs in Carcinus, Pagurus and Astacus.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 248 (752), 437-456 (1965).</li><li>Leksrisawat, B., Cooper, A. S., Gilberts, A. B., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Receptor+Organs+in+the+Crayfish+Abdomen:+A+Student+Laboratory+Exercise+in+Proprioception.">Muscle Receptor Organs in the Crayfish Abdomen: A Student Laboratory Exercise in Proprioception.</a> J. Vis. Exp. (45), e2323 (2010).</li><li>Baierlein, B., Thurow, A. L., Atwood, H. L., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+Potentials,+Synaptic+Responses,+Neuronal+Circuitry,+Neuromodulation+and+Muscle+Histology+Using+the+Crayfish:+Student+Laboratory+Exercises.">Membrane Potentials, Synaptic Responses, Neuronal Circuitry, Neuromodulation and Muscle Histology Using the Crayfish: Student Laboratory Exercises.</a> J. Vis. Exp. (47), e2322 (2011).</li><li>Delaney, K., Gelperin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+interneurons+controlling+fictive+feeding+in+Limaxmaximus;+I.+Anatomy+and+criteria+for+re-identification.">Cerebral interneurons controlling fictive feeding in Limaxmaximus; I. Anatomy and criteria for re-identification.</a> J. Comp. Physiol. A. 166, 297-310 (1990).</li><li>Hartman, H. B., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+and+molting+effects+on+a+proprioceptor+organ+in+the+Dungeness+crab,+Cancer+magister.">Regeneration and molting effects on a proprioceptor organ in the Dungeness crab, Cancer magister.</a> J. Neurobiol. 25 (5), 461-471 (1994).</li><li>Hartman, H. B., Austin, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proprioceptor+organs+in+the+antennae+of+Decapoda+Crustacea.">Proprioceptor organs in the antennae of Decapoda Crustacea.</a> J. Comp. Physiol. 81 (2), 187-202 (1972).</li><li>Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+sensory+processes+during+limb+regeneration+in+adult+crayfish.">Development of sensory processes during limb regeneration in adult crayfish.</a> J. Exp. Biol. 201 (Pt 11), 1745-1752 (1998).</li><li>Chung, Y. -. S., Cooper, R. M., Graff, J., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+acute+and+chronic+effect+of+low+temperature+on+survival,+heart+rate+and+neural+function+in+crayfish+(Procambarus+clarkii)+and+prawn+(Macrobrachium+rosenbergii)+species.">The acute and chronic effect of low temperature on survival, heart rate and neural function in crayfish (Procambarus clarkii) and prawn (Macrobrachium rosenbergii) species.</a> Open J. Mol. Int. Physiol. 2 (3), 75-86 (2012).</li><li>Blundon, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+temperature+and+thermal+history+on+neuromuscular+properties+of+two+crustacean+species.">Effects of temperature and thermal history on neuromuscular properties of two crustacean species.</a> J. Comp. Physiol. B. 158 (6), 689-696 (1989).</li><li>Cooper, R. M., Schapker, H., Adami, H., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+and+ventilatory+measures+in+crayfish+during+copulation.">Heart and ventilatory measures in crayfish during copulation.</a> Open J. Mol. Int. Physiol. 1 (3), 36-42 (2011).</li><li>Bierbower, S. M., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanistic+action+of+carbon+dioxide+on+a+neural+circuit+and+NMJ+communication.">The mechanistic action of carbon dioxide on a neural circuit and NMJ communication.</a> Journal of Experimental Zoology. , (2013).</li><li>Bierbower, S. M., Shuranova, Z. P., Viele, K., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+systems+and+environmental+change+on+behavior+during+social+interactions.">Sensory systems and environmental change on behavior during social interactions.</a> Brain Behav. 3 (1), 4-13 (2013).</li></ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Bu deney setinin amacı 1) öğretmek ve sergi dışı kayıtların temel ilkelerini tanımlanabilir proprioseptif organ ve gerginlik sinir ve 2) belirli duyusal sistemlerin fizyolojik fonksiyonu ile ilgili anatomik haritalama önemini vurgulamak için. Kullanılan Bu deneysel yaklaşımı ve hayvan modelleri ucuz ve nörofizyoloji öğretim laboratuvarlarda yapmak nispeten kolaydır. Chordotonal organların nöronlar iki özel fonksiyonel türleri, hareket yanıt olanlar ve statik pozisyonları yanıt olanlar bulunmaktadır. Chordotonal organların çeşitli tek hücre kayıtları olursa olsun, ortak incelendiğinde ki, bu durumda 3,5 olduğu gösterilmiştir. Nitekim, ıstakoz antennal eklem ile ilişkili chordotonal organlar aynı iki duyusal türleri ve temel anatomi 27 ortaya koymaktadır. Orada iki nöron türleri (hareket ve positi olmanın yanı sıra) hakkında, nöronlar ilgili elastik iplik üzerinde aynı anatomik düzenleme paylaşır. Iplikçikteki proksimale büyük somata dinamik hareket hassas nöronlara ait eğilimindedir. Statik pozisyonları sinyal Nöronlar küçük somata var ve distalde yer almaktadır. Bu hücreler, tonik olarak aktiftir. Bilek-propodus (CP) ve Merus-carpus (MC) eklemlerde iki chordotonal organ varken PD ortak tek bir chordotonal organı içerir. Elektrofizyolojik kayıt için mavi yengeç (C. sapidus) propriosepsiyonda yapılarını göstermek için diseksiyon duyusal nöronlardan kayıt sırasında eklem hareketleri doğal pozisyonlarında yer almak için izin veren bir strateji gerektirir. Yürüyüş bacak açıcı kas gerginliği sinir birkaç nöronlardan oluşan çok ince bir sinir olduğunu. Bakım alınmadığı takdirde, gerginlik sinir yanı sıra motor sinir uyarıldığında edilecek kas innerve, bu diseksiyon sırasında zarar görebilir. Içinuygun kayıtları emme elektrotlar sinir boyutuna uygun olması gerekir. Kayıtlar 30-40X büyütme mikroskop ve düşük-uç mikromanipülatörler kullanan bir öğrenci laboratuvarda kolayca erişilebilir. Eklem chordotonal organları ile takip etmek ilginç olacaktır Gelecek deneyleri olarak yaşam döngüsünün farklı aşamalarında çeşitli türlerde bacak rejenerasyon sırasında yapısal ve fizyolojik profillerini incelemek olacağını bir Cancer magister 19,26 kullanılan bir ilk çalışmaya kadar takip . Bir uzuv yenileyici ele alınması Kalan Sorular) 1 rejenere nöronların dağıtım ve organizasyon hayvanın yaşına bağlıdır yok, 2) fonksiyonel bir rejenerasyon uzuvun MSS (ventral sinir kablosu) için aksonal projeksiyonlar veya bunu yapar uzuv autot olduğunda fonksiyonel bağlantıları kurmak için zaman ve ortak kullanımı almak, ve 3) ne autotomy düzlemine yakın kopmuş akson oluromized? 28 Kabuklular çevre koşulları ve çevre sıcaklığına uygun, ama nöronlar sıcaklık değişimlerine tepki olarak faaliyetlerini değiştirmek gibi bir nöral devre içinde koordinasyonu sağlamak nasıl belirsizdir. Hızlı bir değişim, 30 not29 oysa değişim hızının az hayvana alışmaları için biraz zaman izin verebilir. Nedeniyle metabolizma, davranış 31, ya da çevresel etkilerle pH veya osmolaritesi fizyolojik değişiklikler propriosepsiyon katılan nöral devreleri benzer zorluklar olabilir. Bu kabuklu hazırlıklarını kendi işlevi de tek hücre düzeyinde karakterize edilir, çünkü bu tür sorunları ele almak için idealdir. Bu protokolde açıcı kası tarafından üretilen kuvvet izlenmesinde gerginlik nöronların fizyolojik önemini göstermiştir. Bu gerginlik reseptörler boyama prosedürleri kullanarak apodeme içindeki konumlarına izlenebilmektedir. Bunlarnöronlar, memelilerde gibi, çeşitli düzeylerde kuvveti tespit eder ve kuvvet arttıkça ek nöronlar işe. Alımı, doygunluğa ulaşıncaya kadar aktivite sıklığı, motor nöronun uyarım frekansı ile ilgilidir. Fleksiyonda dactylus eklem ile bir çabuk protokolünü kullanarak, gerginlik aktivite hızla kaybolur ama sonra tamamen uzatılmış eklemde gerginlik kazanmak üzerine döner. Bu gerilim, reseptörler tarafından ölçülen kuvvet göstermek için, klasik bir deneysel işlemdir. Çeşitli nöromodülatörler Bu kuvvet ve nöronal yanıtın gelişimini etkileyen görmek için hazırlanmasına uygulanabilir. Önemli yönlerinden biri nöral tepkiler işlenir ve merkezi sinir sistemi ve motor nöron aktivitesi üzerindeki etkileri entegre nasıl. Biz göstermiştir teknikleri bir geri gerginlik (duyu) sinir-motor nöron devresi fonksiyon, gangliyona sağlam bir bacak yani sinyal ve hakkında daha fazla bilgi adres başlamak için izinkas. Göstermiştir boyama işlemleri proprioseptif organları innerve duyu nöronlarının fizyolojisini anlamak için anahtardır. Fonksiyon ve soma boyutuna göre nöronların anatomik düzenleme Yengeç bacakları içinde çeşitli chordotonal organlarda benzerdir. Benzer nöronal düzenlemeler aynı zamanda diğer kabuklu türleri veya böcek bulunursa bilinmemektedir. Tek hücre fizyolojik kayıtları birleştirerek ve konumunu haritalama doğrudan yapı işlev ilişkileri sağlar. CoCl 2 boyama ve sabitleme ile anatomik düzenlemenin uzun vadeli koruma biri arkaya tedbirleri yapmak ve yapısal düzenleme değerlendirmenizi sağlar. Propriyosepsiyon ve iskelet kaslarının gerginliği resepsiyon iskelet kas yapılandırma çeşitli belden hayvanlar için koordineli davranışları ve dış ve iç çevre yanıtları sağlayacak duyu modaliteleri vardırs. , Kerevit karın kas reseptör organı başka iyi belgelenmiş hazırlık (Crawdad Projesi görürsünüz <a href="http://www.crawdad.cornell.edu/">http://www.crawdad.cornell.edu/</a> karın hemi-segmentinde 23 başına sadece iki nöronlar ile propriyosepsiyonunun öğretim amaçları için) . Duyusal sinir demetleri tek nöronlar kayıt edememek daha fazla detay duyusal alımı temel ilkelerini kavrayarak bu yardım sağlar. Bu nispeten basit kabuklu hazırlıklarını bir proprioseptif ve diğer duyusal girdilerin 9-12, 32, 33 merkezi entegrasyonu sağlamak nöral devreleri belirlemek için potansiyeli olan, propriosepsiyon ve gerilim izleme temel yönlerini ele verir.

Propriyosepsiyon koordine motor davranış sağlayan ekstremite pozisyon ve hareket hissi olduğunu. Proprioseptörlere pozisyonunda (statik) ve hareket (kinestetik) reseptörleri oluşur. Böcekler ve kabuklular olarak, chordotonal organları MSS 1 bu bilgileri sağlayan yapılardır. Tüm chordotonal organların ortak bir yayılabilir ama onlar hala nedeniyle eklem yayılan ve iskelet kas ve eklem kıkırdağında ile birlikte hareket apodemes (yapılar gibi tendon) kendi eki eklem hareketlerini izleyebilirsiniz. Yengeç bacakları altı eklem, bir ya da iki chordotonal organları 2 olan her var. Tipik bir chordotonal organı elastik bir iplikçik içinde gömülü 60-100 veya daha fazla duyusal nöronlar, statik ortak pozisyon, yön ve hareket 3-6 hızını sinyal nöronlar vardır. Her eklem ve bacak chordotonal organlardan input merkezi hayvan tarafından koordineli hareketleri sağlayan işlenir. <p class="jove_content"&gt; Bacak kasları izometrik ve izotonik kasılmalar sırasında üretmek güçleri kas lifleri ve apodemes7-9 ekleri ile ilişkili gerilim reseptörleri tarafından tespit edilir. Primer duyusal propriosepsiyonu izlemek nöronlar ve kas lifleri ile üretilen kuvvetler yanıt nöronlardan gelen kayıtları için metodoloji mevcut izleyin kabuklu yürüyüş bacak protokollerde. Bacak hareketlerini aktive ve güç üretimi ölçülmesi için bir teknik de sunulmuştur, hem de bu periferik sinir sistemi yapılarının düzenleme karakterize etmek için kullanılabilir anatomik teknikleridir. Aşağıda gösterildiği prosedürleri chordotonal elastik iplikçik ve apodeme kendi konumuna göre reseptörlerinin her iki tür innerve nöronların yapısal ve fonksiyonel analiz sağlar. Göstermek için, biz propodite-dactylopodite (PD) chordotonal organı, yengeç bacağı 3 distal en segmentini kapsayan organı kullanın.Ayrıntılı elektrofizyolojik çalışmalar 1930&#39;larda başladı ve bugün hala yürütülmektedir rağmen, bazı yönleri muscles10-16 koordineli kontrolünde çeşitli eklem ve rolleri proprioseptörlere segmental bağlantıları hakkında bilinen haline gelmiştir. Proprioseptif organlar, kaslar ve sinir sistemi arasındaki yapı-fonksiyon ilişkisini kuran ayrıca bu rolleri tanımlamak yardımcı olacaktır. Örneğin, somata ve apodeme yerleştirilen germe nöronların uzak uçları etiketleme kas liflerinin 8,17-21 için kendi göreli konum ortaya çıkaracaktır. Biz araştırma veya akademik laboratuvarlarda kullanılan kabuklu bacaklar için üç boyama tekniklerini sunuyoruz. Metilen mavisi boyama kaslar ve sinirler için uygun kontrast sağlar ve öğrencilerin anatomi öğrenmek için basit bir teknik olarak önerilmektedir. Floresan mikroskopi kurulumları Labs kısaca siniri açığa daha seçici nöronal boyanma başarabilirsinizhayati boya 4-di-2-ASP s. Üçüncü bir alternatif nöronları lekeler ve düzeltmeleri CoCl2 dolgu, ve flüoresan görüntüleme gerektirmez. Emek ve zaman yoğun olmasına rağmen, bu boyama işlemi dolu sinirler için yüksek kontrast ve seçiciliğini verir. Birlikte bu teknikler, bir uzuv içinde veya komponentler arasında değil, aynı zamanda diğer kabuklu böcek türleri ve 20-22 arasında, çeşitli chordotonal organları karşılaştırmak için kullanılabilir. Fizyolojik kayıtları ve anatomik boyanması için kullanılan mavi yengeç (C. sapidus) tüm Amerika Birleşik Devletleri&#39;nin Güney ve Güneydoğu sınır çevresinde hazır. Bu tür çoğu yengeçler bulunan chordotonal ve gerginlik sinir düzenlemelerin bir temsilcisi olarak hizmet vermektedir. Batı kıyısında Laboratuvarları bu deneyler için çok daha büyük Dungeness Yengeç (Cancer magister) kullanmayı tercih edecektir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="686">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sylgard</td>
			<td style="width:184px;">Dow Corning</td>
			<td style="width:119px;">182 silicone kit</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S7653</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KCl</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P9333</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CaCl2</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C5670</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HEPES acid</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">3375</td>
			<td style="width:167px;">Free acid, crystalline</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HEPES base</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">D-Glucose</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">G7021</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M2643</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Na2SO4&#8226;10H2O</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">246980</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Bouin&#8217;s solution fixative</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">HT10-1-32</td>
			<td style="width:167px;">Caution: Hazardous material (Special shipping cost required)</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">CoCl2</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Caution: Hazardous material. Please follow proper disposal according to local and federal regulations.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Methylene blue chloride</td>
			<td style="width:184px;">Matheson Co., Inc</td>
			<td style="width:119px;">Basic Blue 9, C.I. 52015</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">4-Di-2-ASP</td>
			<td style="width:184px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">4-(4-diethylaminostyryl)-N-methylpyridinium iodide</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bleach</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">To chloride silver wire</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaOH</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">221465</td>
			<td style="width:167px;">To adjust pH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HCl</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H1758</td>
			<td style="width:167px;">To adjust pH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Materials</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dissecting tools</td>
			<td style="width:184px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">assortment</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Intracellular electrode probe</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Faraday cage</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Insect Pins</td>
			<td style="width:184px;">Fine Science Tools, Inc</td>
			<td style="width:119px;">26001-60</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dissecting microscope (100X)</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fiber optic lamp</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Small adjustable mirror</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">To direct light beam toward the preparation.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Glass electrodes</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">CLS7095B5X</td>
			<td style="width:167px;">Box of 200, suction electrodes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:184px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">MD4-M3-R</td>
			<td style="width:167px;">Can fix for base or on a metal rod</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Raised preparation stand</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Silver wire (10/1,000 inch)</td>
			<td style="width:184px;">A-M Systems</td>
			<td style="width:119px;">782500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Computer</td>
			<td style="width:184px;">Any company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">AC/DC differential amplifier</td>
			<td style="width:184px;">A-M Systems</td>
			<td style="width:119px;">Model 3000</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PowerLab 26T</td>
			<td style="width:184px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:119px;">27T</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Force transducer</td>
			<td style="width:184px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:119px;">0-50g</td>
			<td style="width:167px;">MLTF050/ST</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Head stage</td>
			<td style="width:184px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Comes with AC/DC amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">LabChart7</td>
			<td style="width:184px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Electrical leads</td>
			<td style="width:184px;">Any company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glass tools</td>
			<td style="width:184px;">Make yourself</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">For manipulating nerves</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cable and connectors</td>
			<td style="width:184px;">Any company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pipettes with bulbs</td>
			<td style="width:184px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-711-7</td>
			<td style="width:167px;">Box of 500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Beakers</td>
			<td style="width:184px;">Any company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Wax or modeling clay</td>
			<td style="width:184px;">Any company or local stores</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Stimulator</td>
			<td style="width:184px;">Grass Instruments</td>
			<td style="width:119px;">SD9 or S88</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="84" rowspan="2" style="height:84px;width:216px;">Plastic tip for suction electrode</td>
			<td rowspan="2" style="width:184px;">Local hardware store (Watt&#8217;s brand)</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">&#188; inch OD x 0.170 inch ID</td>
			<td style="width:167px;">Cut in small pieces. Pull out over a flame and cut back the tip to the correct size</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

proprioception and tension receptors in crab limbs: student laboratory exercises

Bu işlemlerin temel amacı, ortak konumunu ve hareketini tespit ve kas gerginliği gibi propriosepsiyon sorumlu primer duyusal nöronları yaşam aktivitesini kaydetmek için nasıl öğretim ve araştırma amaçlı göstermektir. Kabuklu proprioseptörlere ve gerilim reseptörlerinden elektriksel aktivitesi temel nörofizyolojik enstrümantasyon tarafından kaydedilir ve bir dönüştürücü aynı zamanda, bir motor sinir uyarıcı tarafından oluşturulan kuvvetini ölçmek için kullanılır. Buna ek olarak, biz onların anatomik düzenlemenin hızlı bir değerlendirme için veya kalıcı tespit için nöronlar leke nasıl gösterilmektedir. Boyama en kabuklularda chordotonal organların temsili anatomik organizasyon ortaya koymaktadır. Proprioseptif yanıtları gerginlik sinir yanıtları karşılaştırarak bu duyusal nöronlar fonksiyonel olarak tanımlanmış ve nasıl anatomi işlevine ilişkilidir nasıl belirlemede etkili bir öğretim aracıdır. Üç boyama teknikleriaraştırmacılar ve öğretim laboratuvar için ideal bir yöntem seçmek için izin sunulmaktadır.

PD organı tam olarak ortak uzanan ile gerildiği zaman, PD sinir aktivitesi açık konumda hala tutulduğu sürece. Bir miktar etkinlik kalır, Şekil 10 &#39;de birinci, ikinci için gösterildiği gibi, hareket sırasında sağlamdır. Bu aktivite, statik pozisyonu duyarlı nöronlar (Şekil 10&#39;da gösterilen kayıt ikinci yarısı) arasındadır. Hareket sırasında yerinden bir yanıt uyandıran ve ateşleme (Şekil 11) chordotonal şeridinin gerilmesi sırasında çoğunlukla mevcuttur. Sivri başka bir analizi kolayca göreli genlikleri sıralayarak yaklaştı olabilir. Bu pozisyonlara veya hareketlerin 5 türleri için işe ediliyor duyusal nöronlar farklı popülasyonlar göstermek için bir yaklaşımdır. Tipik genlikleri 0.25-1.5 mV arasında değişir, ancak bu değerler emme elektrot mühür direnci (yani sıkılık) bağlıdır. T sivri SıklığıÇeşitli boyut aralıkları da grafik analizi için temsil edilebilir. Uyarım frekansı ile ilgili olarak açıcı kas tarafından üretilen kuvvetler (Şekil 13A ve B) birbirlerinin üzerine ilgili gerilim-zaman-izleri üzerine bindirmek sureti ile karşılaştırılabilir. Bu, aynı zamanda, her belirli bir uyarım bir frekansta her bir ortak pozisyon için gerçekleştirilebilir. Germe sinir aktivitesi daha sonra her bir uyarım frekansında üretilen nispi kuvvet miktarı ile ilişkili, ve her bir pozisyon için ortak olabilir. PD sinir olduğu gibi, başak genlikleri çeşitli açıcı kas (Şekil 13C) kasılması görülür. Yürüme bacak nöronların anatomik düzenleme açıkça metilen mavi lekeleme (Şekil 14) ile görülmektedir. Apodeme yakın elastik chordotonal iplikçik ve gerginlik nöron unutmayın. Farklı çaplara sahip çeşitli somata bird belirli yerleri bu şekilde de görülebilir. Gerilim sinir ve sedye motor sinirin tüm tabii ki, Şekil 15 &#39;de gösterilmiştir. PD sinir bireysel nöronlar 4-Di-2-ASP (Şekil 16) ve CoCl 2 (Şekil 17) teknikleri Dolgu kullanarak yüksek kontrast ile gösterilir. Yüksek büyütmede duyusal sonlar destekleyici scolopales (Şekil 16B) 21,22,26 içinde görülebilir. <img alt="Şekil 10," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig10.jpg" width="500px" /> Şekil 10. Taşıyın ve 0 ° tutun. Dinamik nöronlar hareketi sırasında ateş sağlam ve ortak açık tutulurken statik duyarlı nöronların ani mevcuttur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig10highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için tıklayın &lt;</a>/ A&gt;. <img alt="Şekil 11" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig11.jpg" width="500px" /> Şekil 11. Rapid açık ve tamamen genişletilmiş (90-0 °) konumuna fleksiyonda den kapanış. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig11highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 12" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig12.jpg" width="500px" /> PD sinir kaydedildi Şekil 12.. Ekstrasellüler sivri. Eklem tamamen uzatılmış ve daha sonra hızlı bir şekilde ½ taşındı konumunu fleksiyonda ve daha sonra yine yapılır. Hareketi sırasında etkinlik fark ve ne zaman statik aktivite azalmış. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig12highres.jpg" target="_blank">büyük ima görmek için buraya tıklayın</a>ge. <img alt="Şekil 13" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig13.jpg" width="500px" /> Şekil 13. Eklem ile geliştirilir bağıl güçleri tamamen fleksiyona ve çeşitli frekanslarda uyarılır. (A) güç dönüştürücüsünden gerilim-zaman-izleri her uyarım frekansı ile gösterilmiştir. (B) Panel A&#39;da izleri karşılaştırıldığında kolaylığı için farklı renklerde birleştirilir. (C) Gerilim-zamanlı motor sinir 80 Hz uyarıldığı zaman gerginlik sinir kaydedilen elektriksel aktivite izleri. Nöral etkinlik ile karşılaştırıldığında uyarıcı eserler düzenli desen dikkat edin. Ayrıca, nöral yanıtların çeşitli genlikleri unutmayın. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig13highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . Yürüme bacak hazırlık 14. Metilen mavisi leke rakam. Bireysel somas onların duyusal sonlar elastik iplikçik içine çıkıntı ile gösterilir. Bir gerilim nöron gösterilir apodeme yakın. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig14highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 15" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig15.jpg" width="500px" /> Şekil 15. Uzak ucuna (kırmızı oklar) kaynaklanan ve motor sinir (yeşil ok) katılmadan gerginlik sinir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig15highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . 4-Di-2-ASP ile Kanser magister yılında PD sinirin Şekil 16.. (A) geri dolgu. (B) duyusal sonlar Yükseköğretim büyütme. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig16highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 17," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig17.jpg" width="500px" /> Şekil 17. COCI 2 ile dolu ve işlenmiştir Nöronlar (A). Gösterilen lekeli hazırlık takip anahat (B). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig17highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> . <table border="0" cellpadding="0" cellspacing = &quot;0&quot; width = &quot;392&quot;&gt; <colgroup><col /><col /></colgroup><tbody><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;width:235px;"> Tuzlu </td><td style="width:157px;"> g / L </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> NaCl </td><td style="width:157px;"> 27.29 </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> KCl </td><td style="width:157px;"> 0.81 </td></tr><tr height="26"><td height="26" style="height:26px;width:235px;"> MgSO 4 • 7H 2 O </td><td style="width:157px;"> 4.81 </td></tr><tr height="26"><td height="26" style="height:26px;width:235px;"> CaCl2 • 2 O 2H </td><td style="width:157px;"> 1.85 </td></tr><tr height="26"><td height="26" style="height:26px;width:235px;"> Na 2 SO 4 • 2 O 10H </td><td style="width:157px;"> 0.97 </td></tr><tr height=&quot;20&quot;&gt; <td height="20" style="height:20px;width:235px;"> Dekstroz (D-glikoz) </td><td style="width:157px;"> 1.982 </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> Hepes asit </td><td style="width:157px;"> 0.476 </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> Hepes tuz </td><td style="width:157px;"> 2.08 </td></tr><tr height="40"><td height="40" style="height:40px;width:235px;"> NaOH veya HCI ile pH 8.1 &#39;e ayarlayın </td><td style="width:157px;"></td></tr></tbody></table> Tablo 1. Yengeç tuzlu için Tarifler.

Watch this Scientific Journal Video about Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises at JoVE.com

Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs | Biology | Video

Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

Fizyolojik ve anatomik teknikler kabuklu yürüme bacaklarda eklem proprioseptörlere ve kas gerginliği reseptörleri için işlevini ve yapısını ele gösterilmiştir.

Yengeç Parmak Propriyoseptör ve Gerilim reseptörleri: Öğrenci Laboratuvarı Egzersizler

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons ...

proprioception-tension-receptors-crab-limbs-student-laboratory

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Neuroscience

Fundamentals

Scientific Inquiry

SCIENTISTS IN ACTION

25.0K Görüntüleme.  University of Kentucky.  Fizyolojik ve anatomik teknikler kabuklu yürüme bacaklarda eklem proprioseptörlere ve kas gerginliği reseptörleri için işlevini ve yapısını ele gösterilmiştir. 

Video: Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

Combining Behavioral Endocrinology and Experimental Economics: Testosterone and Social Decision Making

Behavioral endocrinological research in humans as well as in animals suggests that testosterone plays a key role in social interactions. Studies in rodents have shown a direct link between testosterone and aggressive behavior1 and folk wisdom adapts these findings to humans, suggesting that testosterone induces antisocial, egoistic or even aggressive behavior2. However, many researchers doubt a direct testosterone-aggression link in humans, arguing instead that testosterone is primarily involved in status-related behavior3,4. As a high status can also be achieved by aggressive and antisocial means it can be difficult to distinguish between anti-social and status seeking behavior.
We therefore set up an experimental environment, in which status can only be achieved by prosocial means. In a double-blind and placebo-controlled experiment, we administered a single sublingual dose of 0.5 mg of testosterone (with a hydroxypropyl-&beta;-cyclodextrin carrier) to 121 women and investigated their social interaction behavior in an economic bargaining paradigm. Real monetary incentives are at stake in this paradigm; every player A receives a certain amount of money and has to make an offer to another player B on how to share the money. If B accepts, she gets what was offered and player A keeps the rest. If B refuses the offer, nobody gets anything. A status seeking player A is expected to avoid being rejected by behaving in a prosocial way, i.e. by making higher offers.
The results show that if expectations about the hormone are controlled for, testosterone administration leads to a significant increase in fair bargaining offers compared to placebo. The role of expectations is reflected in the fact that subjects who report that they believe to have received testosterone make lower offers than those who say they believe that they were treated with a placebo. These findings suggest that the experimental economics approach is sensitive for detecting neurobiological effects as subtle as those achieved by administration of hormones. Moreover, the findings point towards the importance of both psychosocial as well as neuroendocrine factors in determining the influence of testosterone on human social behavior.

The procedure described in this protocol shows that testosterone administration and folk beliefs about testosterone may be associated with directly opposed social behaviors.

Davranış Endokrinoloji ve Deneysel İktisat birleştiren: Testosteron ve Sosyal Karar Verme

Behavioral endocrinological research in humans as well as in animals suggests that testosterone plays a key role in social interactions. Studies in ...

Nörobilim

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse. Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the neurobiology and phenomenology of relapse to drug use. Although procedural variations have emerged over the past several decades, the most conventional reinstatement procedures are based on the drug self-administration (SA) model. In this model, an animal is trained to perform an operant response to obtain drug. Subsequently, the behavior is extinguished by withholding response-contingent reinforcement. Reinstatement of drug seeking is then triggered by a discrete event, such as an injection of the training drug, re-exposure to drug-associated cues, or exposure to a stressor 1.
Reinstatement procedures were originally developed to study the ability of acute non-contingent exposure to the training drug to reinstate drug seeking in rats and monkeys 1, 2. Reinstatement procedures have since been modified to study the role of environmental stimuli, including drug-associated cues and exposure to various forms of stress, in relapse to drug seeking 1, 3, 4.
Over the past 15 years, a major focus of the reinstatement literature has been on the role of stress in drug relapse. One of the most commonly used forms of stress for studying this relationship is acute exposures to mild, intermittent, electric footshocks. The ability of footshock stress to induce reinstatement of drug seeking was originally demonstrated by Shaham and colleagues (1995) in rats with a history of intravenous heroin SA5. Subsequently, the effect was generalized to rats with histories of intravenous cocaine, methamphetamine, and nicotine SA, as well as oral ethanol SA 3, 6.
Although footshock-induced reinstatement of drug seeking can be achieved reliably and robustly, it is an effect that tends to be sensitive to certain parametrical variables. These include the arrangement of extinction and reinstatement test sessions, the intensity and duration of footshock stress, and the presence of drug-associated cues during extinction and testing for reinstatement. Here we present a protocol for footshock-induced reinstatement of cocaine seeking that we have used with consistent success to study the relationship between stress and cocaine seeking.

Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the role of stress in relapse to drug seeking. Here, we report on a method for inducing the reinstatement of cocaine seeking in laboratory rats via acute exposures to mild, intermittent electric footshock.

Laboratuar Farelerinde Aradığınız Kokain Footshock Bağlı Yürürlüğe Girmesi incelenmesi için Usulü

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Membrane Potentials, Synaptic Responses, Neuronal Circuitry, Neuromodulation and Muscle Histology Using the Crayfish: Student Laboratory Exercises

The purpose of this report is to help develop an understanding of the effects caused by ion gradients across a biological membrane. Two aspects that influence a cell's membrane potential and which we address in these experiments are: (1) Ion concentration of K+ on the outside of the membrane, and (2) the permeability of the membrane to specific ions. The crayfish abdominal extensor muscles are in groupings with some being tonic (slow) and others phasic (fast) in their biochemical and physiological phenotypes, as well as in their structure; the motor neurons that innervate these muscles are correspondingly different in functional characteristics. We use these muscles as well as the superficial, tonic abdominal flexor muscle to demonstrate properties in synaptic transmission. In addition, we introduce a sensory-CNS-motor neuron-muscle circuit to demonstrate the effect of cuticular sensory stimulation as well as the influence of neuromodulators on certain aspects of the circuit. With the techniques obtained in this exercise, one can begin to answer many questions remaining in other experimental preparations as well as in physiological applications related to medicine and health. We have demonstrated the usefulness of model invertebrate preparations to address fundamental questions pertinent to all animals.

The experiments demonstrate an easy approach for students to gain experience in examining muscle structure, synaptic responses, the effects of ion gradients and permeability on membrane potentials. Also, a sensory-CNS-motor-muscle circuit is presented to show a means to test effects of compounds on a neuronal circuit.

Membran Potansiyelleri, Synaptic Yanıtları, Sinir Devresi, Nöromodülasyon ve Kerevit kullanarak kas Histoloji: Öğrenci Laboratuvarı Egzersizler

The purpose of this report is to help develop an understanding of the effects caused by ion gradients across a biological membrane. Two aspects that ...

Muscle Receptor Organs in the Crayfish Abdomen: A Student Laboratory Exercise in Proprioception

The primary purpose of this experiment is to demonstrate primary sensory neurons conveying information of joint movements and positions as proprioceptive information for an animal. An additional objective of this experiment is to learn anatomy of the preparation by staining, dissection and viewing of neurons and sensory structures under a dissecting microscope. This is performed by using basic neurophysiological equipment to record the electrical activity from a joint receptor organ and staining techniques. The muscle receptor organ (MRO) system in the crayfish is analogous to the intrafusal muscle spindle in mammals, which aids in serving as a comparative model that is more readily accessible for electrophysiological recordings. In addition, these are identifiable sensory neurons among preparations. The preparation is viable in a minimal saline for hours which is amenable for student laboratory exercises. The MRO is also susceptible to neuromodulation which encourages intriguing questions in the sites of modulatory action and integration of dynamic signals of movements and static position along with a gain that can be changed in the system.

The primary purpose of this experiment is to understand how primary sensory neurons convey information of joint movements and positions as proprioceptive information for an animal. An additional objective of this report is present the anatomy of the preparation by dissection and viewing of neurons under a dissecting microscope.

Kerevit Karın kas Reseptör Organlar: Propriyoseptör Öğrenci Laboratuvar Egzersiz

The primary purpose of this experiment is to demonstrate primary sensory neurons conveying information of joint movements and positions as proprioceptive ...

Physiological Experimentation with the Crayfish Hindgut: A Student Laboratory Exercise

The purpose of the report is to describe dissection techniques for preparing the crayfish hindgut and to demonstrate how to make physiological recordings with a force transducer to monitor the strength of contraction. In addition, we demonstrate how to visually monitor peristaltic activity, which can be used as a bioassay for various peptides, biogenic amines and neurotransmitters. This preparation is amenable to student laboratories in physiology and for demonstrating pharmacological concepts to students. This preparation has been in use for over 100 years, and it still offers much as a model for investigating the generation and regulation of peristaltic rhythms and for describing the mechanisms underlying their modulation. The pharmacological assays and receptor sub-typing that were started over 50 years ago on the hindgut still contribute to research today. This robust preparation is well suited to training students in physiology and pharmacology.

In this report we demonstrate techniques that can be used to investigate the biology of the crayfish hindgut. We show how to dissect a crayfish abdomen and study the associated anatomy, physiology and modulation of activity. The peristaltic activity and strength of contractions are measured using a force transducer.

Kerevit Hindgut Fizyolojik Deney: Öğrenci Laboratuvar Egzersiz

The purpose of the report is to describe dissection techniques for preparing the crayfish hindgut and to demonstrate how to make physiological recordings ...

Assaying Surface Expression of Chemosensory Receptors in Heterologous Cells

The vivid world of odors is recognized by the sense of olfaction. Olfaction in mice is mediated by a repertoire of about 1200 G Protein Coupled Receptors (GPCRs) 1 that are postulated to bind volatile odorant molecules and converting the extracellular signal into an intracellular signal by coupling with G protein G&alpha;olf. Binding of the odorants to the receptors is thought to follow a combinatorial rule, that is, one odorant may bind several receptors and one receptor may bind several odorants to varying degrees 2. Biochemical, signaling and ligand binding studies have been conveniently carried out for most GPCRs using heterologous cells. However use of heterologous cells for study of odorant receptors, was precluded for a long time since on transfection they failed to export to the surface. Saito et al have demonstrated single membrane pass Receptor Transporting Protein (RTP) family chaperones show enhanced expression in the olfactory sensory neurons and act as chaperones to traffic odorant receptors to the surface in heterologous cells, when co transfected together 3. To carry out biochemical assays for receptors using heterologous cells, one must first determine if the receptor shows robust surface expression in the cell line. This can be assayed by overexpressing the receptors with the chaperone RTP1S followed by live cell staining to fluorescently label the extracellular domain or a tag in the extracellular domain exclusively. Here we demonstrate a protocol to carry out live cell staining that can be used to detect odorant receptors on the surface of HEK293T cells conveniently. In addition, it may also be used to assay for surface expression of other chemosensory receptors or GPCRs.

Here we demonstrate a protocol to carry out live cell staining that can be used to detect odorant receptors on the surface of HEK293T cells conveniently. In addition, it may also be used to assay for surface expression of other chemosensory receptors or GPCRs.

Heterolog Hücreler kimyasal-duyusal reseptörleri Yüzey İfade Assaying

The vivid world of odors is recognized by the sense of olfaction. Olfaction in mice is mediated by a repertoire of about 1200 G Protein Coupled Receptors ...

Optical Imaging of Neurons in the Crab Stomatogastric Ganglion with Voltage-sensitive Dyes

Voltage-sensitive dye imaging of neurons is a key methodology for the understanding of how neuronal networks are organised and how the simultaneous activity of participating neurons leads to the emergence of the integral functionality of the network. Here we present the methodology of application of this technique to identified pattern generating neurons in the crab stomatogastric ganglion. We demonstrate the loading of these neurons with the fluorescent voltage-sensitive dye Di-8-ANEPPQ and we show how to image the activity of dye loaded neurons using the MiCAM02 high speed and high resolution CCD camera imaging system. We demonstrate the analysis of the recorded imaging data using the BVAna imaging software associated with the MiCAM02 imaging system. The simultaneous voltage-sensitive dye imaging of the detailed activity of multiple neurons in the crab stomatogastric ganglion applied together with traditional electrophysiology techniques (intracellular and extracellular recordings) opens radically new opportunities for the understanding of how central pattern generator neural networks work.

Here we present the methodology for fast and high resolution fluorescent voltage-sensitive dye imaging of detailed activity of neurons in the crab stomatogastric ganglion.

Gerilim duyarlı Boyalar ile Yengeç Stomatogastric Ganglion Nöronlar Optik Görüntüleme

Voltage-sensitive dye imaging of neurons is a key methodology for the understanding of how neuronal networks are organised and how the simultaneous ...

Use of pHluorin to Assess the Dynamics of Axon Guidance Receptors in Cell Culture and in the Chick Embryo

During development, axon guidance receptors play a crucial role in regulating axons sensitivity to both attractive and repulsive cues. Indeed, activation of the guidance receptors is the first step of the signaling mechanisms allowing axon tips, the growth cones, to respond to the ligands. As such, the modulation of their availability at the cell surface is one of the mechanisms that participate in setting the growth cone sensitivity. We describe here a method to precisely visualize the spatio-temporal cell surface dynamics of an axon guidance receptor both in vitro and in vivo in the developing chick spinal cord. We took advantage of the pH-dependent fluorescence property of a green fluorescent protein (GFP) variant to specifically detect the fraction of the axon guidance receptor that is addressed to the plasma membrane. We first describe the in vitro validation of such pH-dependent constructs and we further detail their use in vivo, in the chick spinal chord, to assess the spatio-temporal dynamics of the axon guidance receptor of interest.

We describe here the use of a pH-sensitive green fluorescent protein variant, pHluorin, to study the spatio-temporal dynamics of axon guidance receptors trafficking at the cell surface.&#160;The pHluorin-tagged receptor is expressed both in cell culture and in vivo, using electroporation of the chick embryo.

Hücre Kültüründe ve Civciv Embriyosunda Akson Kılavuz Reseptörlerinin Dinamiklerini Değerlendirmek için pHluorin Kullanımı

During development, axon guidance receptors play a crucial role in regulating axons sensitivity to both attractive and repulsive cues. Indeed, activation ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be stimulated by neuronally-released transmitter. However, the ability of astrocytic receptors to exhibit plasticity in response to changes in neuronal activity has received little attention. Here we describe a model system that can be used to globally scale up or down astrocytic group I metabotropic glutamate receptors (mGluRs) in acute brain slices. Included are methods on how to prepare parasagittal hippocampal slices, construct chambers suitable for long-term slice incubation, bidirectionally manipulate neuronal action potential frequency, load astrocytes and astrocyte processes with fluorescent Ca2+ indicator, and measure changes in astrocytic Gq GPCR activity by recording spontaneous and evoked astrocyte Ca2+ events using confocal microscopy. In essence, a &#8220;calcium roadmap&#8221; is provided for how to measure plasticity of astrocytic Gq GPCRs. Applications of the technique for study of astrocytes are discussed. Having an understanding of how astrocytic receptor signaling is affected by changes in neuronal activity has important implications for both normal synaptic function as well as processes underlying neurological disorders and neurodegenerative disease.

Here we describe an adaptation of protocols used to induce homeostatic plasticity in neurons for the study of plasticity of astrocytic G protein-coupled receptors. Recently used to examine changes in astrocytic group I mGluRs in juvenile mice, the method can be applied to measure scaling of various astrocytic GPCRs, in tissue from adult mice in situ and in vivo, and to gain a better appreciation of the sensitivity of astrocytic receptors to changes in neuronal activity.

Nöronal Ateşleme Oranlarının Manipülasyon tarafından Astrositik reseptörleri Plastisite Inducing

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

Receptor Autoradiography Protocol for the Localized Visualization of Angiotensin II Receptors

This protocol describes receptor binding patterns for Angiotensin II (Ang II) in the rat brain using a radioligand specific for Ang II receptors to perform receptor autoradiographic mapping.
Tissue specimens are harvested and stored at -80 &#176;C. A cryostat is used to coronally section the tissue (brain) and thaw-mount the sections onto charged slides. The slide-mounted tissue sections are incubated in 125I-SI-Ang II to radiolabel Ang II receptors. Adjacent slides are separated into two sets: &#39;non-specific binding&#39; (NSP) in the presence of a receptor saturating concentration of non-radiolabeled Ang II, or an AT1 Ang II receptor subtype (AT1R) selective Ang II receptor antagonist, and &#39;total binding&#39; with no AT1R antagonist. A saturating concentration of AT2 Ang II receptor subtype (AT2R) antagonist (PD123319, 10 &#181;M) is also present in the incubation buffer to limit 125I-SI-Ang II binding to the AT1R subtype. During a 30 min pre-incubation at ~22 &#176;C, NSP slides are exposed to 10 &#181;M PD123319 and losartan, while &#39;total binding&#39; slides are exposed to 10 &#181;M PD123319. Slides are then incubated with 125I-SI-Ang II in the presence of PD123319 for &#39;total binding&#39;, and PD123319 and losartan for NSP in assay buffer, followed by several &#39;washes&#39; in buffer, and water to remove salt and non-specifically bound radioligand. The slides are dried using blow-dryers, then exposed to autoradiography film using a specialized film and cassette. The film is developed and the images are scanned into a computer for visual and quantitative densitometry using a proprietary imaging system and a spreadsheet. An additional set of slides are thionin-stained for histological comparisons.
The advantage of using receptor autoradiography is the ability to visualize Ang II receptors in situ, within a section of a tissue specimen, and anatomically identify the region of the tissue by comparing it to an adjacent histological reference section.

Here we present a protocol to describe the localization of angiotensin II Type 1 receptors in the rat brain by quantitative, densitometric, in vitro receptor autoradiography using an iodine-125 labeled analog of angiotensin II.

Anjiyotensin II Reseptör lokalize Görselleştirme için Reseptör Otoradyografi Protokolü

This protocol describes receptor binding patterns for Angiotensin II (Ang II) in the rat brain using a radioligand specific for Ang II receptors to ...