Davranış aygıtının ilk versiyonunun geliştirilmesine yardımcı olan Dr. Aravinthan Samuel ve Marc Gershow'a ve davranış aygıtını değiştiren Matthew Batie'ye minnettarız. Bu araştırma Cincinnati Çocuk Hastanesi, JST/PRESTO, March of Dimes ve NIH R01 GM107582'den F.N.H.'ye mütevelli hibesi tarafından desteklendi.

1. Sineklerin Hazırlanması
<ol><li>Açık Koyu (LD) Deneyler
	<ol>
<li>Sinekleri açık 12 saat/karanlık 12 saat (LD) döngüler altında inkübatörlerde (%25 °C/40-%60 bağıl nem (RH)) yükseltin. İnkübatörlerin ışık yoğunluğu ~ 500-1.000 lükstür.</li>
		<li>24 saat boyunca davranış testlerini tamamlamak için iki inkübatör gereklidir. Her iki inkübatör de AÇIK KAPASI işlevlerine sahip programlanabilir bir ışığa sahip olmalıdır. Ayrıca ışığa geçirgen olmayan sağlam kapılara da sahip olmalıdırlar(yani cam veya pleksiglas olmamalıdır). Not: Bir inkübatör "gün" inkübatörü olarak atanmalı ve 12 saat açık ve 12 saat karanlık bir LD döngüsüne ayarlanmalıdır. İkinci inkübatör bir "gece" inkübatörü olarak belirlenmeli ve 12 saat karanlık ve ardından 12 saat ışık ile ilkinin tersine ayarlanmalıdır. Gece inkübatörü karanlıkta erişilebilen odaya yerleştirilmelidir, böylece gece koşulları yaşayan sineklere deneyler için kolayca erişilebilir.</li>
		<li>Sinek şişelerini gündüz veya gece inkübatörlerine yerleştirin. Yeni yumurtadan çıkan sinekleri test başına 20-30 taze bir şişede toplayın ve aynı inkübatörde 2-3 gün saklayın.</li>
		<li>2-3 gün sonra, sıcaklık tercihi davranışsal test için sinek kullanın.<ol>
<li>Gün için (Zeitgeber zamanı (ZT) 0-12) deneyleri için, gün inkübatöründen sinekleri toplayın.</li>
			<li>Davranış deneylerinden hemen önce, toplanan sinek şişelerini gün inkübatöründen çıkar.</li>
			<li>Gece (ZT 13-24) deneyleri için, gece inkübatöründen sinekleri toplayın.</li>
			<li>Davranış deneylerinden hemen önce, toplanan sinek şişelerini gece inkübatöründen alın, alüminyum folyo ile sarın ve karanlık odada kırmızı bir lambanın altındaki bir kutuya yerleştirin. Not: Gece deneyleri için sıcaklık tercihi davranışsal tahlili karanlık altında yapıldığı için, davranış deneylerinin sonuna kadar sineklere ışık maruziyeti önlenmelidir. Not: Sinekler, deneylerin gerçekleşileceği gün karbondioksite maruz kalmamalıdır.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Sabit Karanlık (DD) Deneyleri
	<ol>
<li>
DD Günü
		<ol>
<li>Makalenin geri kalanı için "geçiş" inkübatörü olarak adlandırdığımız DD günü deneyleri için ekstra bir inkübatör gereklidir. Geçiş inkübatörü karanlıkta erişilebilen odaya yerleştirilmelidir, böylece DD koşulları yaşayan sineklere deneyler için kolayca erişilebilir. Bir geçiş inkübatörü için örnek bir ışık zamanlaması, 13:00-19:00 arası ışık KAPI ve 19:00-19:00'da ışık KAPA OLACAKTIR (Şekil 1).</li>
			<li>Gün inkübatöründe yetiştirilen sinekleri toplayın. Sinek şişelerini, ışığın YANDIğı 13:00-19:00 saatleri arasında geçiş inkübatörüne yerleştirin. Bu şekilde, sinekler saat 19:00'a kadar ışığa uygun şekilde maruz kalır ve bu sırada ışık KAPANıR.</li>
			<li>Ertesi gün, saat 13:00'den önce, karanlık koşullar altında, sinek şişelerini geçiş inkübatöründen alın, alüminyum folyo ile sarın ve bir kutuya yerleştirin. Kutuyu bir gün daha kuvözde tut.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
DD Gecesi
		<ol>
<li>Gece inkübatöründe karanlıkta kırmızı bir lamba altında yetiştirilen sinekleri toplayın. Veya ayrıca gece inkübatörünün ışığı AÇIK olduğunda sinekleri toplayın.</li>
			<li>Toplanan şişeleri ışıklar KAPALı olduğunda karanlıkta alüminyum folyo ile sarın ve şişeleri bir kutuya yerleştirin. Kutuyu iki gün daha herhangi bir inkübatörde tutun (Şekil 1B). Not: Gece deneyleri için sıcaklık tercihi davranışsal tahlili karanlık altında yapıldığı için, davranış deneylerinin sonuna kadar sineklere ışık maruziyeti önlenmelidir.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Sabit Işık (LL) Deneyleri
	<ol>
<li>
LL Günü
		<ol>
<li>LL günü deneyleri için ekstra bir inkübatör gereklidir. Bu inkübatör, ışığı sürekli olarak AÇıK olan LL durumunu (25 °C, 800 lüks) korur.</li>
			<li>Gün inkübatöründe yetiştirilen sinekleri toplayın. Sinek şişelerini "gün" boyunca istediğiniz zaman LL inkübatörüne yerleştirin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
LL Gecesi
		<ol>
<li>Gece inkübatöründe yetiştirilen sinekleri toplayın. Gece inkübatöründeki ışığın YANDIğı süre boyunca sinek şişelerini gece inkübatöründen LL inkübatörüne aktarın. Not: Örneğin, ışık gece inkübatöründe sabah 7'de KAPANIR. Sinek şişelerini gece inkübatöründen sabah 7'den önce LL inkübatörüne aktarın ve şişeleri 4 gün daha LL inkübatörde tutun. Not: LL koşullarında 4. günde, lokomotor aktivitesinin salınımı15,16, TPR hala devam ederken 3.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>2. Sıcaklık Tercihi Davranışsal Test için Aparat
<ol><li>Alüminyum bir plaka üzerine pleksiglas bir kapak (29 cm x 19,2 cm) (Şekil 4) yerleştirin.</li>
	<li>Plaka ve kapak arasındaki hava sıcaklığını izleyin. Şeritlerden biri içindeki kapağın iç kısmına çeşitli konumlarda altı sıcaklık probu tutturulur (Şekil 2). Not: Probların alüminyum plakaya veya pleksiglas kapağına temas etmediklerinden emin olun. Hava sıcaklığı 18-32 °C arasında bir gradyana ayarlanmalıdır.</li>
	<li>Cihazı % 25 °C/65-75 RH'de tutulan bir çevre odasına yerleştirin. Bu odanın dışarıdaki herhangi bir ışıktan kapatılması gerekiyor. Bir çevre odası normalde belirli bir sıcaklık ve nemi korumak için fanlarla donatılmıştır. Not: Fandan gelen hava muhtemelen cihazdaki sabit bir sıcaklık gradyanını rahatsız eder. Bunu önlemek için, cihazı çevreleyen alanı kapsayan şeffaf bir levha kullanıyoruz.</li>
	<li>Çevre odasındaki sıcaklık ve nemi kontrol etmek için bir termometre ve higrometre hazırlayın. Not: Işık Drosophila3sıcaklık tercihini etkiler. Aynı ışık yoğunluğu cihaza eşit olarak sağlanmalıdır. Çevre odası ışıklarımızın yoğunluğu ~ 800 lükstür. Not: Davranış deneyleri yapıldığında, sinekleri uyuşturmak ve kurtulmak için CO2 tankından bağlı bir tüp yerleştirin veya cihazın üst kısmının deliğinin yakınına tedarik edin.</li>
</ol>3. Cihazın Kullanıma Hazırlanması
<ol><li>Plakanın yüzeyinde sıcaklık gradyanını düzgün bir şekilde kurmak için cihazı en az 30 dakika açın (Şekil 3).</li>
	<li>Sineklerin kapağın duvarlarına veya tavanına tırmanmasını önlemek için davranış cihazının kapağını su itici ile kaplayın. Fazla su iticiyi silin ve kapağı kurumaya 25-30 dakika bekletin.</li>
	<li>Alüminyum plakadaki yoğuşmaları giderin. Pleksiglas kapağı alüminyum plakaya yerleştirin ve altı C kelepçesi ile sabitleyin (Şekil 2). Not: Kapağın iyi kapatılmış olması çok önemlidir, gerekirse çift çubuk bant kullanılabilir.</li>
	<li>Kapağı en az 15 dakika bekletin. Alüminyum plaka ile kapak arasındaki hava sıcaklığı gradyanı 18-32 °C'den oluşturulur.</li>
</ol>4. Sıcaklık Tercih Davranışı Tahlil
<ol><li>Sinekleri alüminyum plaka ile aparatın pleksiglas kapağı arasındaki boşluğa kapağın her şeridinin ortasındaki küçük deliklerden yükleyin (Şekil 2 ve 4). Sineklerin kaçmasını önlemek için delikleri kapak kaymalarıyla kapatın.</li>
	<li>Karanlık koşullar için, çevre odasındaki tüm ışıkları KAPATıN. Sinekler cihaza yerleştirildiğinde kırmızı bir lamba kullanılabilir. Davranış deneyleri yapılana kadar sineklerin kırmızı lamba dışında herhangi bir ışığın maruz kalmadığından emin olun.</li>
	<li>Her deneme için, sonraki denemelerde yeniden kullanılmayacak 20-25 yetişkin sinek kullanın. Davranışsal test 30 dakika boyunca gerçekleştirilir. Flaşlı veya flaşsız birkaç fotoğraf çekin. Deneyler sırasında çok fazla gürültü yapmamaya veya ani hareketler yapmamaya dikkat edin.</li>
	<li>Aparat üzerindeki altı sondanın da sıcaklığını kaydedin. Oda sıcaklığını ve nemi not alın.</li>
	<li>Cihazdaki sinekleri karbondioksit gazı ile uyuşturun, kelepçeleri gevşetin, pleksiglas kapağı çıkarın ve sinekleri plakadan çıkarın. Her deneyden sonra sinekler atılır. Plakadaki yoğuşma veya nemi silin. Plakadaki kapağı değiştirin ve bir sonraki deneye hazırlanmak için kelepçelerle sıkın.</li>
	<li>Tüm gün boyunca sıcaklık tercihinin bir temsiline sahip olmak için, 24 saat dilimi, dördü gündüz ve dördü gece olmak üzere sekiz saat dilimine ayrılır. Örneğin, bu ZT veya CT 1-3, 4-6, 7-9, 10-12, 13-15, 16-18, 19-21 ve 22-24 kullanıyoruz. Not: Işık AÇIK (ZT0) veya KAPA (ZT12) açıldıktan hemen sonra maskeleme etkilerinden kaynaklanan fenotip varyasyonları beklendiğinden, bu zamanlarda (ZT veya CT 0-1, 11.5-13 ve 23.5-24) sıcaklık tercih davranışını incelemeyiz. Sonuçların istatistiksel olarak sağlam olabilmesi için her saat diliminde en az beş deneme yapılmalıdır.</li>
</ol>5. Veri Analizi
<ol><li>Sıcaklık gradyanını aşağıdaki gibi hesaplayın: Pleksiglas kapağın kenarları boyunca üst ve alt tarafına yerleştirilen iki cetveli temel aarak sıcaklık problarının nereye yerleştirildiği belirleyin (Şekil 2A).</li>
	<li>Sıcaklık probları arasındaki sıcaklık gradyanı doğrusal olduğu tahmin edilmektedir. Sıcaklık problarının konumlarına ve ilgili kaydedilen sıcaklıklarına bağlı olarak, her sıcaklık derecesini resimlerde uygun konumda temsil eden çizgiler çizin. Her derece aralığında bulunan sinek sayısını sayın. Duvarlardaki veya kapağın tavanındaki sinekleri hariç tutun.</li>
	<li>Her şeridin her sıcaklık aralığındaki sineklerin yüzdesini hesaplayın. Ortalama bir tercih edilen sıcaklık, aşağıda gösterildiği gibi, her aralığın sinek ve sıcaklık yüzdesinin ürünlerinin toplandığı şekilde hesaplanır: Sineklerin % 18,5 °C + Sineklerin % 19,5 °C + Sineklerin % 20,5 °C ...+ Sineklerin % 31,5 °C + Sineklerin % 31,5 'i x 32,5 °C.</li>
	<li>Her saat diliminde ortalama tercih edilen sıcaklığı hesaplayın: Sıcaklık tercih davranışı her saat diliminde >5 kez gerçekleştirilir (ZT 1-3, 4-6, 7-9, 10-12, 13-15, 16-18, 19-21 ve 22-24). Her saat diliminde ortalama tercih edilen sıcaklığı hesaplamak için, her denemenin ortalama tercih edilen sıcaklığı birlikte ortalamalanır. s.e.m. hata çubukları denemeler arasındaki hataya eşittir.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Krauchi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thermophysiological+cascade+leading+to+sleep+initiation+in+relation+to+phase+of+entrainment.">The thermophysiological cascade leading to sleep initiation in relation to phase of entrainment.</a> Sleep Med. Rev. 11, 439-451 (2007).</li><li>Krauchi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+sleep-wake+cycle+reconsidered+from+a+thermoregulatory+point+of+view.">The human sleep-wake cycle reconsidered from a thermoregulatory point of view.</a> Physiol. Behav. 90, 236-245 (2007).</li><li>Kaneko, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+Rhythm+of+Temperature+Preference+and+Its+Neural+Control+in+Drosophila.">Circadian Rhythm of Temperature Preference and Its Neural Control in Drosophila.</a> Curr. Biol. 22, 1851-1857 (2012).</li><li>Allada, R., Chung, B. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+organization+of+behavior+and+physiology+in+Drosophila.">Circadian organization of behavior and physiology in Drosophila.</a> Annu. Rev. Physiol. 72, 605-624 (2010).</li><li>Garrity, P. A., Goodman, M. B., Samuel, A. D., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Running+hot+and+cold:+behavioral+strategies,+neural+circuits,+and+the+molecular+machinery+for+thermotaxis+in+C.+elegans+and+Drosophila..">Running hot and cold: behavioral strategies, neural circuits, and the molecular machinery for thermotaxis in C. elegans and Drosophila..</a> Genes Dev. 24, 2365-2382 (2010).</li><li>Hamada, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+internal+thermal+sensor+controlling+temperature+preference+in+Drosophila.">An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila.</a> Nature. 454, 217-220 (2008).</li><li>Hong, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cAMP+signalling+in+mushroom+bodies+modulates+temperature+preference+behaviour+in+Drosophila.">cAMP signalling in mushroom bodies modulates temperature preference behaviour in Drosophila.</a> Nature. 454, 771-775 (2008).</li><li>Dillon, M. E., Wang, G., Garrity, P. A., Huey, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+Thermal+preference+in+Drosophila.">Review: Thermal preference in Drosophila.</a> J. Therm. Biol. 34, 109-119 (2009).</li><li>Viswanath, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposite+thermosensor+in+fruitfly+and.">Opposite thermosensor in fruitfly and.</a> Nature. 423, 822-823 (2003).</li><li>Gallio, M., Ofstad, T. A., Macpherson, L. J., Wang, J. W., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+coding+of+temperature+in+the+Drosophila+brain.">The coding of temperature in the Drosophila brain.</a> Cell. 144, 614-624 (2011).</li><li>Stevenson, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relative+importance+of+behavioral+and+physiological+adjustments+controlling+body+temperature+in+terrestrial+ectotherms.">The relative importance of behavioral and physiological adjustments controlling body temperature in terrestrial ectotherms.</a> Am. Nat. 126 (3), (1985).</li><li>Refinetti, R., Menaker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+rhythm+of+body+temperature.">The circadian rhythm of body temperature.</a> Physiol. Behav. 51, 613-637 (1992).</li><li>Duffy, J. F., Dijk, D. J., Klerman, E. B., Czeisler, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Later+endogenous+circadian+temperature+nadir+relative+to+an+earlier+wake+time+in+older+people.">Later endogenous circadian temperature nadir relative to an earlier wake time in older people.</a> Am. J. Physiol. 275, 1478-1487 (1998).</li><li>Saper, C. B., Lu, J., Chou, T. C., Gooley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypothalamic+integrator+for+circadian+rhythms.">The hypothalamic integrator for circadian rhythms.</a> Trends Neurosci. 28, 152-157 (2005).</li><li>Konopka, R. J., Pittendrigh, C., Orr, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+behaviour+associated+with+altered+homeostasis+and+photosensitivity+of+Drosophila+clock+mutants.">Reciprocal behaviour associated with altered homeostasis and photosensitivity of Drosophila clock mutants.</a> J. Neurogenet. 6, 1-10 (1989).</li><li>Qiu, J., Hardin, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=per+mRNA+cycling+is+locked+to+lights-off+under+photoperiodic+conditions+that+support+circadian+feedback+loop+function.">per mRNA cycling is locked to lights-off under photoperiodic conditions that support circadian feedback loop function.</a> Mol. Cell Biol. 16, 4182-4188 (1996).</li><li>Crocker, A., Sehgal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+sleep.">Genetic analysis of sleep.</a> Genes Dev. 24, 1220-1235 (1220).</li><li>Hendricks, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rest+in+Drosophila+is+a+sleep-like+state.">Rest in Drosophila is a sleep-like state.</a> Neuron. 25, 129-138 (2000).</li><li>Shaw, P. J., Cirelli, C., Greenspan, R. J., Tononi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlates+of+sleep+and+waking+in+Drosophila+melanogaster.">Correlates of sleep and waking in Drosophila melanogaster.</a> Science. 287, 1834-1837 (2000).</li><li>Parisky, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDF+cells+are+a+GABA-responsive+wake-promoting+component+of+the+Drosophila+sleep+circuit.">PDF cells are a GABA-responsive wake-promoting component of the Drosophila sleep circuit.</a> Neuron. 60, 672-682 (2008).</li></ol>

Açıklayacak bir şey yok.

Burada, sıcaklık tercihi davranışsal aparatının ayrıntılarını ve TPR davranışının analizini göstermektedir. Drosophila, saat kontrollü TPR'nin göze çarpan, sağlam ve tekrarlanabilir özelliklerini sergiler. Bununla birlikte, verilerimiz ortam ışığı ve yaş olmak üzere en az iki faktörün TPR davranışsal fenotiplerini önemli ölçüde rahatsız ettiğini göstermektedir.
Işığın Drosophila'dasıcaklık tercihini önemli ölçüde etkilediğini g...

Sıcaklık her yerde bulunan bir çevresel işarettir. Hayvanlar zararlı sıcaklıklardan kaçınmak ve rahat olanları aramak için çeşitli davranışlar sergilerler. Drosophila sağlam bir sıcaklık tercih davranışı sergiler6,7. Sinekler 18-32 ° C'den bir sıcaklık gradyanı içine salındığında, sinekler hem sıcak hem de soğuk sıcaklıklardan kaçınır ve son olarak sabah3'te25 ° C'lik tercih edilen bir sıcaklık seçer. Sıcak sıcaklık sensörleri, Drosophila geçici reseptör potansiyelini (TPR) ifade eden bir dizi termossensör nöron, AC nöronlarıdır, TRPA16,9. Soğuk sıcaklık sensörleri 3. anten segmentlerinde bulunur, çünkü 3. anten segmentlerinin kaldırılması soğuk sıcaklıktan kaçınma eksikliğine neden olur6. Son zamanlarda, TRPP proteini Brivido (Brv)10. Brv, 3. anten segmentlerinde ifade edildiğinden ve soğuk algılamaya aracılık edildiğinden, Brv sıcaklık tercih davranışı için kritik olan olası bir soğuk algılama molekülüdür. Özetle, sinekler sıcak ve soğuk sıcaklıkları önlemek ve tercih edilen sıcaklığı bulmak için bu iki sıcaklık sensörlerini kullanır.
Memeliler vücut sıcaklıklarını düzenlemek için ısı üretirken, ektotermler genellikle vücut sıcaklıklarını ortam sıcaklığına uyarlar11. Bazı ektotermlerin, ektotermlerin BTR12'lerinidüzenlemeleri için bir strateji olduğuna inanılan günlük bir TPR davranışı sergilediği bilinmektedir. Sineklerin TPR sergileyip sergilemediğini belirlemek için, 24 saat boyunca çeşitli noktalarda sıcaklık tercihi davranış analizini tekrarladık. Drosophila'nın sabahları düşük, akşamları yüksek olan ve insanlarda BTR'ninkine benzer bir desen izleyen günlük bir TPR sergilediğini bulduk13.
Drosophila'dabeyinde ~150 saat nöron vardır. Lokomotor aktivitesini düzenleyen saat nöronlarına M ve E osilatörleri denir. Bununla birlikte, ilginç bir şekilde, M ve E osilatörleri TPR'yi düzenlemez, bunun yerine beyindeki DN2 saat nöronlarının TPR'yi düzenlediğini ancak lokomotor aktivitesini düzenlemediğini gösterdik. Bu veriler, TPR'nin lokomotor aktivitesinden bağımsız olarak düzenlendiğini göstermektedir. Özellikle, memeli BTR de lokomotor aktivitesinden bağımsız olarak düzenlenir. Sıçanlarda yapılan ablasyon çalışmaları, BTR'nin, lokomotor aktivitesini kontrol edenlerden farklı bir altparaventriküler bölge nöronlarını hedefleyen spesifik SCN nöronları aracılığıyla kontrol olduğunu göstermektedir14. Bu nedenle, verilerimiz memeli BTR ve sinek TPR'nin evrimsel olarak korunmuş olma olasılığını göz önünde bulundurmaktadır3Hem sinek TPR hem de memeli BTR, lokomotor aktivitesinden bağımsız olarak düzenlenen sirkadiyen saate bağlı sıcaklık ritimleri sergiler.
Burada, TPR davranışsal testinin nasıl analiz edeceğine dair ayrıntıları açıklıyoruz Drosophila. Bu yöntem, sadece TPR'nin moleküler mekanizmasının ve sinir devrelerinin değil, aynı zamanda beynin farklı çevresel ipuçlarını ve iç biyolojik saatleri nasıl entegre ederek entegre olduğunun araştırılmasına izin verir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="578">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:172px;">Bright Lab Jr. Safelight</td>
			<td style="width:109px;">Amazon</td>
			<td style="width:153px;">#B00013J8UY</td>
			<td style="width:144px;">Red light for dark rooms</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:172px;">Rain X</td>
			<td style="width:109px;">SOPUS products</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">Water repellent: Apply the plexiglass cover</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:172px;">C-Clamp</td>
			<td style="width:109px;">Home Depot</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="32">
			<td height="32" style="height:32px;width:172px;">Temperature/hygrometer</td>
			<td style="width:109px;">Fisher</td>
			<td style="width:153px;">15-077-963</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:172px;"></td>
			<td style="width:109px;"></td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:172px;">Peltier devices</td>
			<td style="width:109px;">TE Technology, Inc.</td>
			<td style="width:153px;">HP-127-1.4-1.15-71P</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:172px;">Thermometer</td>
			<td style="width:109px;">Fluke</td>
			<td style="width:153px;">Fluke 52II</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:172px;">Bench top controller</td>
			<td style="width:109px;">Oven Industries</td>
			<td style="width:153px;">5R6-570-15R and 5R6-570-24R</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="36">
			<td height="36" style="height:36px;width:172px;">Temperature sensor probe</td>
			<td style="width:109px;">Oven Industries</td>
			<td style="width:153px;">TR67-32</td>
			<td style="width:144px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:172px;">Generic 480 Watt ATX power supply</td>
			<td style="width:109px;"></td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:172px;">MCR220-QP-RES Dual 120 mm Radiator with reservoir&#160;</td>
			<td style="width:109px;">Swiftech</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:172px;">MCP350 In-Line 12V DC pump</td>
			<td style="width:109px;">Swiftech</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
		<tr height="49">
			<td height="49" style="height:49px;width:172px;">MCW50 graphics Card liquid cooler</td>
			<td style="width:109px;">Swiftech</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:172px;">Scythe Kaze-Jyuni SY1225SL12SH fan</td>
			<td style="width:109px;">Crazy PC</td>
			<td style="width:153px;"></td>
			<td style="width:144px;">computer cooling system</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

design and analysis of temperature preference behavior and its circadian rhythm in drosophila

Sirkadiyen saat, uyku, lokomotor aktivite ve vücut sıcaklığı (BTR) ritimleri1,2dahil olmak üzere yaşamın birçok yönünü düzenler. Son zamanlarda, sineklerde tercih edilen sıcaklığın gündüz arttığı ve gece boyunca düştüğü sıcaklık tercih ritmi (TPR) adı verilen bir Drosophila sirkadiyen çıktısı belirledik 3. Şaşırtıcı bir şekilde, TPR ve lokomotor aktivitesi farklı sirkadiyen nöronlar3ile kontrol edilir. Drosophila locomotor aktivitesi iyi bilinen bir sirkadiyen davranışsal çıktıdır ve birçok korunmuş memeli sirkadiyen saat genlerinin ve mekanizmalarının keşfine güçlü katkılar sağlamıştır4. Bu nedenle, TPR'yi anlamak bilinmeyen moleküler ve hücresel sirkadiyen mekanizmaların tanımlanmasına yol açacaktır. Burada, TPR testinin nasıl gerçekleştirildiğini ve analizini açıklıyoruz. Bu teknik sadece TPR'nin moleküler ve sinirsel mekanizmalarını parçalamaya izin verir, aynı zamanda farklı çevresel sinyalleri entegre eden ve hayvan davranışlarını düzenleyen beyin fonksiyonlarının temel mekanizmaları hakkında yeni içgörüler sağlar. Ayrıca, son yayınlanan verilerimiz sinek TPR'nin memeli BTR3ile özellikleri paylaştığını göstermektedir. Drosophila, vücut sıcaklığının tipik olarak davranışsal olarak düzenlendiği ektotermlerdir. Bu nedenle, TPR bu sineklerde ritmik bir vücut sıcaklığı oluşturmak için kullanılan bir stratejidir5-8. Drosophila TPR'nin daha fazla araştırılmasının, hayvanlarda vücut ısısı kontrolünün altında bulunan mekanizmaların karakterizeini kolaylaştıracağına inanıyoruz.

Sıcaklık tercih ritminin bir örneği Şekil 5'te gösterilmiştir. Davranış prosedürü başarıyla yapılırsa, sinekler sabahları düşük bir sıcaklık ve akşamları daha yüksek sıcaklık tercih ettikleri bir TPR sergilemelidir. Sıcaklık tercihinde gündüz ~1-1.5 °C artışı, genetik arka plandan bağımsız olarak gün boyunca gözlenmelidir, çünkü w1118, yw ve Canton S sineklerinin gündüz3sırasında benzer bir sıcaklık tercihi s...

Watch this Scientific Journal Video about Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila at JoVE.com

Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

Son zamanlarda, sineklerde tercih edilen sıcaklığın gündüz arttığı ve gece boyunca düştüğü drosophila sirkadiyen çıktısı, sıcaklık tercih ritmi (TPR) adlı bir roman belirledik. TPR, başka bir sirkadiyen çıkış olan lokomotor aktiviteden bağımsız olarak düzenlenir. Burada TPR'nin tasarımını ve analizini drosophila.

Drosophila'da Sıcaklık Tercih Davranışının ve Sirkadiyen Ritminin Tasarımı ve Analizi

The circadian clock regulates many aspects of life, including sleep, locomotor activity, and body temperature (BTR) rhythms1,2. We recently identified a ...

design-analysis-temperature-preference-behavior-its-circadian-rhythm

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

Unit 1

Alternative Signaling Routes in Gene Expression

SCIENTISTS IN ACTION

8.0K Görüntüleme.  Cincinnati Childrens Hospital Medical Center. Son zamanlarda, sineklerde tercih edilen sıcaklığın gündüz arttığı ve gece boyunca düştüğü drosophila sirkadiyen çıktısı, sıcaklık tercih ritmi (TPR) adlı bir roman belirledik. TPR, başka bir sirkadiyen çıkış olan lokomotor aktiviteden bağımsız olarak düzenlenir. Burada TPR'nin tasarımını ve analizini drosophila.

Video: Design and Analysis of Temperature Preference Behavior and its Circadian Rhythm in Drosophila

High-resolution Measurement of Odor-Driven Behavior in Drosophila Larvae

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral paradigm, the experimenter usually assumes that the rapid diffusion of odorant molecules from the source leads to the creation of a stable gradient in the dish. To establish a quantitative correlation between sensory inputs and behavioral responses, it is necessary to achieve a more thorough characterization of the odorant stimulus conditions. In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

Yüksek çözünürlüklü Ölçüm Drosophila Larva Koku-Driven Davranış

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral ...

Biyoloji

Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development can be addressed. The zebrafish is useful for genetic studies due to several advantageous characteristics, including small size, high fecundity, short lifecycle, and ease of care. Lens development occurs rapidly in zebrafish. By 72 hpf, the zebrafish lens is functionally mature [3]. Abundant genetic and molecular resources are available to support research in zebrafish. In addition, the similarity of the zebrafish eye to those of other vertebrates provides basis for its use as an excellent animal model of human defects[4-7]. Several zebrafish mutants exhibit lens abnormalities, including high levels of cell death, which in some cases leads to a complete degeneration of lens tissues [8]. To determine whether lens abnormalities are due to intrinsic causes or to defective interactions with the surrounding tissues, transplantation of a mutant lens into a wild-type eye is performed. Using fire-polished metal needles, mutant or wild-type lenses are carefully dissected from the donor animal, and transferred into the host. To distinguish wild-type and mutant tissues, a transgenic line is used as the donor. This line expresses membrane-bound GFP in all tissues, including the lens. This transplantation technique is an essential tool in the studies of zebrafish lens mutants.

Lens development involves interactions with other tissues. Several zebrafish eye mutants are characterized by an abnormally small lens size. Here we demonstrate a lens transplantation experiment to determine whether this phenotype is due to intrinsic causes or defective interactions with tissues that surround the lens.

Zebra balığı Lens Nakli ve Göz Mutants Analizi Uygulaması

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development ...

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

The spindle assembly checkpoint (SAC) mechanism is an active signal, which monitors the interaction between chromosome kinetochores and spindle microtubules to prevent anaphase onset until the chromosomes are properly connected. Cells use this mechanism to prevent aneuploidy or genomic instability, and hence cancers and other human diseases like birth defects and Alzheimer's1. A number of the SAC components such as Mad1, Mad2, Bub1, BubR1, Bub3, Mps1, Zw10, Rod and Aurora B kinase have been identified and they are all kinetochore dynamic proteins2. Evidence suggests that the kinetochore is where the SAC signal is initiated. The SAC prime regulatory target is Cdc20. Cdc20 is one of the essential APC/C (Anaphase Promoting Complex or Cyclosome) activators3 and is also a kinetochore dynamic protein4-6. When activated, the SAC inhibits the activity of the APC/C to prevent the destruction of two key substrates, cyclin B and securin, thereby preventing the metaphase to anaphase transition7,8. Exactly how the SAC signal is initiated and assembled on the kinetochores and relayed onto the APC/C to inhibit its function still remains elusive.
Drosophila is an extremely tractable experimental system; a much simpler and better-understood organism compared to the human but one that shares fundamental processes in common. It is, perhaps, one of the best organisms to use for bio-imaging studies in living cells, especially for visualization of the mitotic events in space and time, as the early embryo goes through 13 rapid nuclear division cycles synchronously (8-10 minutes for each cycle at 25 &deg;C) and gradually organizes the nuclei in a single monolayer just underneath the cortex9.
Here, I present a bio-imaging method using transgenic Drosophila expressing GFP (Green Fluorescent Protein) or its variant-targeted proteins of interest and a Leica TCS SP2 confocal laser scanning microscope system to study the SAC function in flies, by showing images of GFP fusion proteins of some of the SAC components, Cdc20 and Mad2, as the example.

Studying Mitotic Checkpoint by Illustrating Dynamic Kinetochore Protein Behavior and Chromosome Motion in Living Drosophila Syncytial Embryos

The kinetochore is where the SAC initiates its signal monitoring the mitotic segregation of the sister chromatids. A method is described to visualize the recruitment and turnover of one of the kinetochore proteins and its coordination with the chromosome motion in Drosophila embryos using a Leica laser scanning confocal system.

Living Görselleştirilmesi Dinamik Kinetochore Protein Davranış ve Kromozom Hareket tarafından Mitotik Checkpoint incelenmesi<em&gt; Drosophila</em&gt; Sinsityal Embriyolar

The spindle assembly checkpoint (SAC) mechanism is an active signal, which monitors the interaction between chromosome kinetochores and spindle ...

Extraction and Analysis of Cortisol from Human and Monkey Hair

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and validated a method for CORT extraction and analysis from rhesus monkey hair and subsequently adapted this method for use with human scalp hair. In contrast to CORT &#34;point samples&#34; obtained from plasma or saliva, hair CORT provides an integrated measure of hypothalamic-pituitary-adrenocortical (HPA) system activity, and thus physiological stress, during the period of hormone incorporation. Because human scalp hair grows at an average rate of 1 cm/month, CORT levels obtained from hair segments several cm in length can potentially serve as a biomarker of stress experienced over a number of months.
In our method, each hair sample is first washed twice in isopropanol to remove any CORT from the outside of the hair shaft that has been deposited from sweat or sebum. After drying, the sample is ground to a fine powder to break up the hair&#39;s protein matrix and increase the surface area for extraction. CORT from the interior of the hair shaft is extracted into methanol, the methanol is evaporated, and the extract is reconstituted in assay buffer. Extracted CORT, along with standards and quality controls, is then analyzed by means of a sensitive and specific commercially available enzyme immunoassay (EIA) kit. Readout from the EIA is converted to pg CORT per mg powdered hair weight. This method has been used in our laboratory to analyze hair CORT in humans, several species of macaque monkeys, marmosets, dogs, and polar bears. Many studies both from our lab and from other research groups have demonstrated the broad applicability of hair CORT for assessing chronic stress exposure in natural as well as laboratory settings.

Cortisol (CORT) accumulates in the growing hair shaft of humans and nonhuman primates. We describe methods for extracting and analyzing hair CORT with high precision and sensitivity. Measurement of hair CORT is particularly well-suited for assessing chronic stress over periods of weeks to months.

Ekstraksiyon ve İnsan ve Maymun Saç gelen Kortizol Analizi

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both the female and male germ lines of Drosophila have contributed greatly to the current understanding of meiosis as well as stem cell biology. Excellent protocols are available in the literature for the isolation and imaging of Drosophila ovaries&#160;and testes3-12. Herein, methods for the dissection and preparation of Drosophila testes for microscopic analysis are described with an accompanying video demonstration. A protocol for isolating testes from the abdomen of adult males and preparing slides of live tissue for analysis by phase-contrast microscopy as well as a protocol for fixing and immunostaining testes for analysis by fluorescence microscopy are presented. These techniques can be applied in the characterization of Drosophila mutants that exhibit defects in spermatogenesis as well as in the visualization of subcellular localizations of proteins.

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Methods for isolating and preparing Drosophila testes samples (live and fixed) for imaging by phase-contrast and fluorescence microscopy are described herein.&#160;

Spermatogenez sitolojik analizi: Canlı ve Sabit Hazırlıklar<em&gt; Drosophila</em&gt; Testisler

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Rapid Analysis of Circadian Phenotypes in Arabidopsis Protoplasts Transfected with a Luminescent Clock Reporter

The plant circadian clock allows the anticipation of daily changes to the environment. This anticipation aids the responses to temporally predictable biotic and abiotic stress. Conversely, disruption of circadian timekeeping severely compromises plant health and reduces agricultural crop yields. It is therefore imperative that we understand the intricate regulation of circadian rhythms in plants, including the factors that affect motion of the transcriptional clockwork itself.
Testing circadian defects in the model plant Arabidopsis thaliana (Arabidopsis) traditionally involves crossing specific mutant lines to a line rhythmically expressing firefly luciferase from a circadian clock gene promoter. This approach is laborious, time-consuming, and could be fruitless if a mutant has no circadian phenotype. The methodology presented here allows a rapid initial assessment of circadian phenotypes. Protoplasts derived from mutant and wild-type Arabidopsis are isolated, transfected with a rhythmically expressed luminescent reporter, and imaged under constant light conditions for 5 days. Luminescent traces will directly reveal whether the free-running period of mutant plants is different from wild-type plants. The advantage of the method is that any Arabidopsis line can efficiently be screened, without the need for generating a stably transgenic luminescent clock marker line in that mutant background.

The circadian clock regulates about a third of the Arabidopsis transcriptome, but the percentage of genes that feed back into timekeeping remains unknown. Here we visualize a method to rapidly assess circadian phenotypes in any mutant line of Arabidopsis using luminescent imaging of a circadian reporter transiently expressed in protoplasts.

Bir Lüminesans Saat Reporter ile Arabidopsis Protoplasts transfekte içinde Sirkadiyen fenotipleri Hızlı Analizi

The plant circadian clock allows the anticipation of daily changes to the environment. This anticipation aids the responses to temporally predictable ...

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A method for observing and quantifying the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, was established under a stereomicroscope. To improve the mating efficiency of B. Xylophilus and to increase the chances of mating observation, virgin adults were cultured and used for the investigation. Eggs were obtained by keeping the nematodes in water and allowing the females to lay eggs for 10 min. The second-stage juveniles (J2) were synchronized by incubating the eggs for 24 h at 25 &#176;C in the dark, and the early J4 were obtained by culturing the J2 with grey mold, Botrytis cinerea, for another 52 h. At this time point, most J4 nematodes could be clearly distinguished as being male or female using their genital morphology. The male and female J4 were collected and cultured separately in two different Petri dishes for 24 h to get virgin adult nematodes. A virgin male and a virgin female were paired in a drop of water in the well of a concave slide. The mating behavior was filmed with a video recorder under a stereomicroscope. The whole period of the mating process was 82.8 &#177;3.91 min (mean &#177;SE) and could be divided into 4 different phases: searching, contacting, copulating, and lingering. The mean minutes of duration were 21.8 &#177; 2.0, 28.0 &#177; 1.9, 25.8 &#177; 0.7 and 7.2 &#177; 0.5, respectively. Eleven sub-behaviors were described: cruising, approaching, encountering, touching, hooping, locating, attaching, ejaculating, separating, quiescence, and roaming. Interestingly, obvious intra-sexual competition was observed when one female was grouped with 3 males or one male with 3 females. This protocol is useful and valuable, not only in investigating the mating behavior of B. xylophilus, but also in acting as a reference for ethological studies of other nematodes.

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

Pinewood Nematodu gözlem ve Çiftleşme Davranış miktarının belirlenmesi,<em&gt; Orijinli olanlar</em

A method for observing and quantifying the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, was established under a stereomicroscope. ...

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Plant biologists often need to observe the growth behavior of their chosen species. To this end, the plants need constant environmental and stable light conditions, which are preferably variable in quantity and quality so that studies under different setups can be conducted. These requirements are met by climatic chambers featuring light emitting diodes (LED) lights, which can &#8211; in contrast to fluorescent lights &#8211; be set to different wavelengths. LEDs are energy conserving and emit virtually no heat even at light intensities, which often constitutes a problem with other light sources. The presented protocol provides a step-by-step guidance of how to program a climatic chamber equipped with variable LED lights as well as describing several approaches for in depth analysis of growth phenotypes. Depending on the experimental set-up various characteristics of the growing plants can be observed and analyzed. Here we describe how to determine fresh weight, leaf area, photosynthetic activity, and stomatal density. We demonstrate that in order to obtain reliable data and draw valid conclusions it is mandatory to use a sufficient number of individuals for statistical evaluation. Taking too few plants for this kind of analysis results in high statistical errors and consequently in less clear interpretations of the data.

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Here, we present a protocol for studying plant growth behavior and especially phenotypes in a reproducible manner. We show how to provide variable and at the same time stable light conditions. Proper analyses depend on sufficient sample numbers and valid statistical evaluations.

Farklı ışık nitelikleri Arabidopsis thaliana büyüme davranış analizi

Plant biologists often need to observe the growth behavior of their chosen species. To this end, the plants need constant environmental and stable light ...

Circadian Entrainment of Drosophila Melanogaster

Nearly universal among organisms, circadian rhythms coordinate biological activity to earth&#39;s orbit around the sun. To identify factors creating this rhythm and to understand the resulting outputs, entrainment of model organisms to defined circadian time-points is required. Here we detail a procedure to entrain many Drosophila to a defined circadian rhythm. Furthermore, we detail post-entrainment steps to prepare samples for immunofluorescence, nucleic acid, or protein extraction-based analysis.

Here, we detail how to synchronize Drosophila to a circadian day. This is the first, and most important step necessary for studying biological rhythms and chronobiology.

Drosophila Melanogaster Sirkadiyen Entrainment

Nearly universal among organisms, circadian rhythms coordinate biological activity to earth&#39;s orbit around the sun. To identify factors creating this ...

Dissecting, Fixing, and Visualizing the Drosophila Pupal Notum

The pupae of Drosophila melanogaster are immobile for several days during metamorphosis, during which they develop a new body with a thin transparent adult integument. Their immobility and transparency make them ideal for in vivo live imaging experiments. Many studies have focused on the dorsal epithelial monolayer of the pupal&#160;notum because of its accessibility and relatively large size. In addition to the studies of epithelial mechanics and development, the notum has been an ideal tissue to study wound healing. After an injury, the entire epithelial repair process can be captured by live imaging over 6-12 h. Despite the popularity of the notum for live imaging, very few published studies have utilized fixed notum samples. Fixation and staining are common approaches for nearly all other Drosophila tissues, taking advantage of the large repertoire of simple cellular stains and antibodies. However, the pupal notum is fragile and prone to curling and distortion after removal from the body, making it challenging to complement live imaging. This protocol offers a straightforward method for fixing and staining the pupal notum, both intact and after laser-wounding. With this technique, the ventral side of the pupa is glued down to a coverslip to immobilize the pupa, and the notum is carefully removed, fixed, and stained. The notum epithelium is mounted on a slide or between two coverslips to facilitate imaging from the tissue&#39;s dorsal or ventral side.

Dissecting, Fixing, and Visualizing the Drosophila Pupal Notum

The present protocol details the preparation and visualization of fixed tissue of the Drosophila pupal notum. It can be used for either intact or wounded tissue, and the original architecture of the tissue is preserved. The procedures for dissecting, fixing, and staining are all described in this article.

Drosophila Pupal Notum'un Diseksiyonu, Sabitlenmesi ve Görselleştirilmesi

The pupae of Drosophila melanogaster are immobile for several days during metamorphosis, during which they develop a new body with a thin transparent ...