Najie Zhu ve Liqun Bai, bu çalışmaya eşit katkıda bulundu. Bu eser mali Kamu Refah Orman Bilimsel Araştırma Fonu Özel (201204501) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (31170604, 31270688 ve 31570638) tarafından desteklenmiştir. Biz İngilizce yazılı onların yararlı öneriler Dr. Holighaus Gerrit ve Dr Danielle Hickford teşekkür ederim.

Virgin Yetişkin Nematodlar 1. kazanılması <ol><li> Pinewood nematod izolatı ve kültür koşulları B. xylophilus&#39;un Nxy61 aslen Çin&#39;de Zhejiang eyaletinin Ningbo alanında hastalıklı Pinus massoniana elde edildi izole: NOT. <ol><li> (PDA Malzemelerin Tablo bakınız) Patates Dekstroz Agar hazırlayın Botrytis cinerea yetiştirmek için plakaları. </li><li> Aşılaması için, B. cinerea mat 10 mm çaplı mantar mat bir parça zımba ve yeni bir PDA plakanın ortasına koydu. Kültür karanlıkta 25 ° C&#39;de 5 gün boyunca B. cinerea. </li><li> Kültür karanlıkta 25 ° C &#39;de B. cinerea içeren hazırlanmış bir petri çam nematodları. </li></ol></li><li> B. xylophilus&#39;un yumurta kazanılması <ol><li> bir huni altında kenetlenmiş kauçuk tüp yerleştirin ve montajı rafa hazırlanan huni tutunBaermann huni cihazı. huni ağzına filtre kağıdı yerine gazlı bez iki kat yerleştirin. </li><li> huni kurulum mantar kültürleri aktarın ve mantar mat batırılır kadar su ekleyin. 2 saat bekleyin ve nematod, mantar kültürü çıkıp filtre kağıdı çapraz ve Baermann huninin en alt kısmında yerleşmek olacaktır. </li><li> 15 ml tüp içine tüpün tabanından su damlaları ilk çift toplamak ve yavaş tüp kelepçe bırakarak nematodları toplar. </li><li> Oda sıcaklığında 2 dakika boyunca 3000 x g&#39;de yukarıda koleksiyonları santrifüjleyin. </li><li> Bir pipet ile suyun üst tabaka uzaklaştırılır ve çift damıtılmış steril (dd), 1 mL H2O ile yeniden süspanse </li><li> Bir pipet ile, yeni bir cam Petri kabı (6 cm çapında) Yukarıdaki tabanda aktarın. Nematod özgürce yüzmek mümkün olduğundan emin olmak için Petri kabı steril dd H2O 3 mL ekleyin. </li><li> glas nematod tutunKaranlıkta 25 ° C &#39;de 10 dakika süre ile Petri kabı s. Yumurta hamile kadın tarafından döşenecek. Çünkü onların glikoprotein yüzeyinin, yumurta cam Petri kabı altına sopa olacak. </li><li> Yumurta bozmadan dikkatlice su ve solucanları temizler. Kurumasını yumurta önlemek için hemen cam Petri kabı steril dd H2O 3 mL ekleyin. </li><li> Adımı tekrarlayın 1.2.8 3x tüm larvaları ve yetişkin kaldırmak ve saf yumurta elde etmek. Petri kabı steril dd, H2O ilave 2 mL (toplam 5 mL) ilave edilir. </li></ol></li><li> Dördüncü aşama gençlerin kazanılması (J4 larva) <ol><li> Hatch 25 ° C&#39;de karanlıkta, 24 saat boyunca toplanan yumurtalar J2 larva elde edildi. </li><li> 2 dakika boyunca 3000 x g&#39;de 15 ml tüp, santrifüj bir pipet ile J2 larvaları transferi ve suyun üst tabakayı kaldırmak. </li><li> Steril dd, H2O 200 uL J2 larvaları yeniden süspanse ve aktarmakB. cinerea içeren PDA plakası. </li><li> Kültür karanlıkta 25 ° C &#39;de 52 saat boyunca J2 larva. Bu zaman noktasında, en J2 larva J4 larvaların erken aşamada haline olacaktır. </li></ol></li><li> Bakire yetişkin nematod kazanılması <ol><li> bir alkol brülör üzerine ısıtıldıktan sonra bir cam kılcal çizerek nematod toplamak için bir iğne hazırlayın. NOT: Bu kılcal iğne ucu, genellikle tek bir nematodu alınması için bir araç olarak kullanılabilir ve böylece, çapı 50 mikron, yetişkin bir nematod kabaca gövde genişliği olmalıdır. </li><li> Bir Baermann hunisi monte ve adımları 1.2.1&#39;de tarif edildiği gibi 2 saat boyunca mantar kültürlerinden nematod çıkarmak - 1.2.3. </li><li> Temiz bir Petri kabı içine su ile J4 aktarın. </li><li> Bir stereomikroskop altında nematod gözlemlemek ve Mamiya ve Kiyohara 8 (Şekil 1 tarafından açıklandığı gibi, genital morfoloji kadınlar ve erkekler arasında ayrım </strong&gt;). Hazırlanan kılcal iğne ile istenilen seks nematod Pick up ve erkeklerde veya kadınlarda uygun fungal kültür plaka transfer. NOT: erkeklerden daha fazla kadın 60 kadın yüzdesi ile vardır -% 70. kadın vulva erkek spicule Açıkçası farklıdır. yetişkin ile karşılaştırıldığında, erken evre J4 içinde spicule veya vulva küçük, ama yine de kolayca görülebilir ve ayırt edilebilir. nematod her zaman, bazen kadın ve erkeklerin ayırt zorluk artar, su, hareket ediyor. </li><li> Kültür karanlıkta 25 ° C &#39;de 24 saat daha J4 larva. NOT: Tüm nematod yetişkinler haline, ama onlar unmated olduğundan, bunlar bakire yetişkin olarak kabul edilmektedir. </li><li> Baermann hunileri iki birleştirin ve adımları 1.2.1 açıklandığı gibi, 2 saat boyunca mantar kültürlerden bakire yetişkin ayıklamak - 1.2.3 ve iki ayrı, temiz Petri kapları içine bakire yetişkin erkek ve kadın aktarın. </li></ol&gt; </li></ol> 2. Gözlem ve çiftleşme Davranış Video Kayıt <ol><li> Birkaç içbükey slaytlar hazırlamak ve onların kuyuların her steril dd H2O 200 mcL ekleyin. </li><li> Bir kılcal iğne ile hazırlanan bakire yetişkin erkek veya kadın ve Pick up ve her içbükey slayt suya sadece bir nematod koydu. </li><li> onlara yeni sulu ortama uyum sağlamak için 1 saat boyunca hazne içinde bakire yetişkin tutun. </li><li> Bir pipet kullanarak başka iyi birinden bunlardan biri aktararak bakire erkek ve dişi çifti. </li><li> Bir stereomikroskop altında içbükey slayt 1♀ + 1♂ kombinasyonunun çiftleşme davranışları gözlemlemek. </li><li> bakire yetişkinlerin çiftleşme etkinliğini analiz etmek, onların çiftleşme başarı oranını (R) hesaplar ve rastgele seçilen yetişkin çifti ile karşılaştırın. birleşme çalışılan çoğaltır sayısına kıyasla görülmüştür ki çoğaltır yüzdesi olarak R hesaplayın. </li><li&gt; Çiftleşme seçimi ve intrasexual rekabet, grup araştırmak ve iki farklı kombinasyonlar bakire nematod gözlemlemek için: 1♀ + 3♂ ve + 1♂ 3♀. </li><li> kalitatif ve kantitatif analiz için veri toplamak amacıyla, Video mikroskopi kullanılarak çiftleşme davranışı filme. Normal olarak, birleşme sonrası birbirinden ayrıldığı zaman nematod an içbükey sürgünün çukuruna yerleştirilir zaman bütün birleşme işlemi, 2 saat içinde tamamlandı. Bu nedenle, bir tekrar en az 2 saat boyunca sürekli olarak birleşme işlemi kaydedilir. en az 30 Komple her kombinasyon için toplam çoğaltır. Not: kayıt işlemi sırasında buharlaşma için oyuğuna daha steril GG S, her 0.5 H2O (genellikle 50 uL) eklenir. </li></ol> 3. Veri Toplama <ol><li> Bir bilgisayar ekranında dikkatlice videoları görüntülemek ve niteliksel alt davranışları karakterize. </li><li> çiftleşme kullanarak th süresini ölçmekvideo kaydedici, e kare-kare fonksiyonu. El ile bitiş noktası başlayarak zaman çıkarın. </li><li> 1♀ + 1♂ kombinasyonu için, her video kaydını analiz etmek ve aşağıdaki olaylardan süresini ölçmek: <ol><li> Arama süresini ölçmek (yani, kadın ve erkek karşılaştıkları an içbükey slayt kuyuya tanıtıldı ve birbirine temas edildiğinde geçen süre). </li><li> Temas süresini ölçmek (yani, erkek tam ilk çiftleşme için dişinin vulva konumlandırılmış an ilk temas süresi). </li><li> Copulating süresini ölçmek (yani, o boşalma sonra yerde kadın vücudundan kayarak kadar erkek tam dişinin vulva konumlandırılmış tarihten itibaren zaman). Not: Bazı nematod 2 saat içinde birkaç kez copulate edebilirsiniz. Bu gibi durumlarda, LAS sonunda ilk çiftlerin çiftleşme süresinin ölçülmesiarasındaki zaman dahil olmak üzere, t, bir,. </li><li> Kalan süresinin ölçülmesi (yani, birleşme sonrası dönem erkek ve dişi yüzmek birbirinden uzağa daha fazla nematodlar vücut uzunluğundan daha bir mesafe ile ayrılır kadar (genellikle, 1 mm)). </li></ol></li><li> Çiftleşme frekansı ve her birleşme süresi ve farklı kombinasyonlarının her biri için 2 saat tüm çiftleştirerek ortalama süreyi saymak (yani, 1♀ + 1♂, 3♀ + 1♂ ve 1♀ + 3♂). </li><li> derhal ve hiç ara vermeden yapılan ilk temas, sonra çiftleşme başarı oranı gibi farklı kombinasyonlar için ilk temas (P) çiftleşme başarı oranını hesaplayın. temas aşamasında, çeşitli temas gerçek birleşme öncesi gözlenen olabilir. <ol><li> iki kişi arasındaki mesafe vücut uzunluğundan daha fazla olduğu zaman, bitecek bir kişiyi düşünün. bir tekrarında, kayıt P 100% olarak çiftleşme is ara vermeden, ilk temastan hemen sonra görülen veya 0.00% no çiftleşme gözlendi ya da eğer çiftleşme ancak iki ya da daha fazla temas sonra varsa. NOT: Burada anlatılan her kombinasyon için 30 suret vardı. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Tokushige, Y., Kiyohara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bursaphelenchus+sp.+in+the+wood+of+dead+pine+trees%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Jap.+For.+Soc%22%5BJournal%5D)">Bursaphelenchus sp. in the wood of dead pine trees.</a> J. Jap. For. Soc. 51, 193-195 (1969).</li>
<li>Sun, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bursaphelenchus+xylophilus+was+discovered+in+Sun+Yet-sen%27s+mausoleum+in+Nanjing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Jiangsu+Fore.+Sci.+Tech.+%28in+Chinese%29%22%5BJournal%5D)">Bursaphelenchus xylophilus was discovered in Sun Yet-sen's mausoleum in Nanjing.</a> J. Jiangsu Fore. Sci. Tech. (in Chinese). 4, 47(1982).</li>
<li>Mota, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+report+of+Bursaphelenchus+xylophilus+in+Portugal+and+in+Europe%5BTitle%5D)+AND+%22Nematology%22%5BJournal%5D)">First report of Bursaphelenchus xylophilus in Portugal and in Europe.</a> Nematology. 1, 727-734 (1999).</li>
<li>Robertson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+the+pine+wood+nematode+Bursaphelenchus+xylophlius+Steiner+%26+Buhrer%2C+1934+%28Nickle%2C+1970%29+in+Spain%5BTitle%5D)+AND+%22Nematology%22%5BJournal%5D)">Incidence of the pine wood nematode Bursaphelenchus xylophlius Steiner & Buhrer, 1934 (Nickle, 1970) in Spain.</a> Nematology. 13, 755-757 (2011).</li>
<li>Vicente, C., Espada, M., Vieira, P., Mota, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pine+wilt+disease%3A+a+threat+to+European+forestry%5BTitle%5D)+AND+%22Euro.+J.+Plant+Path%22%5BJournal%5D)">Pine wilt disease: a threat to European forestry.</a> Euro. J. Plant Path. 133, 89-99 (2012).</li>
<li>Jones, J. T., Moens, M., Mota, M., Li, H., Kikuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bursaphelenchus+xylophilus%3A+opportunities+in+comparative+genomics+and+molecular+host-parasite+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Plant.+Path%22%5BJournal%5D)">Bursaphelenchus xylophilus: opportunities in comparative genomics and molecular host-parasite interactions.</a> Mol. Plant. Path. 9, 357-368 (2008).</li>
<li>Mamiya, Y., Furukawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fecundity+and+reproduction+of+Bursaphelenchus+lignicolus%5BTitle%5D)+AND+%22Jap.+J.+Nemat%22%5BJournal%5D)">Fecundity and reproduction of Bursaphelenchus lignicolus.</a> Jap. J. Nemat. 7, 6-9 (1977).</li>
<li>Mamiya, Y., Kiyohara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Description+of+Bursaphelenchus+lignicolus.+n.+sp.+%28Nematoda%3A+Aphelenchoididae%29+from+pine+wood+and+histophathology+of+nematode-infested+trees%5BTitle%5D)+AND+%22Nematologica%22%5BJournal%5D)">Description of Bursaphelenchus lignicolus. n. sp. (Nematoda: Aphelenchoididae) from pine wood and histophathology of nematode-infested trees.</a> Nematologica. 18, 120-124 (1972).</li>
<li>Liu, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+features+of+Bursaphelenchus+xylophilus+in+the+mating+process%5BTitle%5D)+AND+%22Nematology%22%5BJournal%5D)">Behavioural features of Bursaphelenchus xylophilus in the mating process.</a> Nematology. 16, 895-902 (2014).</li>
<li>Simon, J. M., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+a+mate+finding+cue+in+the+hermaphrodite+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Evidence of a mate finding cue in the hermaphrodite nematode Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 1598-1603 (2002).</li>
<li>Barr, M. M., Garcia, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+mating+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22The+C.+elegans+Research+Community+Wormbook%22%5BJournal%5D)">Male mating behaviour.</a> The C. elegans Research Community Wormbook. , (2006).</li>
<li>Shinya, R., Chen, A., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+attraction+and+mating+in+Bursaphelenchus+okinawaensis+and+B.+xylophilus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nematol%22%5BJournal%5D)">Sex attraction and mating in Bursaphelenchus okinawaensis and B. xylophilus.</a> J. Nematol. 47 (3), 176-183 (2015).</li>
</ol>

The authors have nothing to disclose.

Davranış testleri, kimyasal ekoloji, nörobiyoloji, moleküler biyoloji ve genetik bir temel yönü vardır. Nematodlar, ve özellikle de C. elegans, yoğun bu alanda araştırmalar için kullanılmaktadır. C. elegans &#39;çiftleşme davranışı, daha önce 10-11 araştırılmıştır. Bununla birlikte, B xylophilus&#39;un gonochoristic ve hermafrodit C. elegans farklıdır, ve birleşme işlemi farklı davranış özellikleri 9 sahiptir. Son zamanlarda, <em...

The pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle, is one of the most destructive invasive species, causing the wilting and eventual death of pine trees. This pathogenic nematode is believed to be native to the USA, but it was transported to several countries, including China, Japan, South Korea, and Portugal. Recently, it has also been reported in Spain, killing millions of pine trees at huge economic losses and threatening forest production and ecological stability1-5.
Once a host pine tree is infected by pinewood nematodes, thousands of millions of offspring are propagated rapidly within the trunk. This causes xylem dysfunction, resulting in wilting and eventually in the death of the host tree6. However, there is currently no efficient way to control this disease. Mating behavior might play an important role in the high fecundity of this nematode7. We therefore investigated the mating behavior of B. xylophilus in the laboratory, trying to find an effective way of disturbing its mating and decreasing its fecundity. 
This protocol is intended to introduce the detailed methods of how to obtain the virgin adults of B. xylophilus and how to observe and analyze the mating behavior using a video recorder and a stereomicroscope. This protocol can also be used as a reference for behavioral studies of other nematodes.

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;B. xylophilus&lt;/em&gt; isolate &lt;em&gt;Nxy61&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td>Extracted from &lt;em&gt;Pinus massoniana&lt;/em&gt; in Ningbo area of China</td></tr><tr><td>Grey mold strain</td><td></td><td></td><td>Obtained from Forestry Academy of China</td></tr><tr><td>Baermann funnels</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>falcon tubes</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>centrifuge</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pipette</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>sterile dd H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td></td><td></td><td>Sterilized by high pressure of steam at 121 &amp;deg;C for 30 min.</td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDA medium</td><td>Huankai Bio.</td><td>021050</td><td></td></tr><tr><td>incubator</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar flow</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>glass capillary</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td>Leica</td><td>LED5000 RL</td><td></td></tr><tr><td>inverted stereo microscope</td><td>Zeiss</td><td>A1</td><td></td></tr><tr><td>concave slides</td><td>Sengong</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

observation and quantification of mating behavior in the pinewood nematode, bursaphelenchus xylophilus

Gözlemlemek ve çam nematod, orijinli olanlar çiftleşme davranışı ölçülmesi için bir yöntem olup, bir stereo mikroskop altında kurulmuştur. B. xylophilus&#39;un çiftleşme verimliliğini artırmak ve çiftleşme gözlem şansını artırmak için, bakire yetişkinler kültür ve soruşturma için kullanılır. Yumurta suda nematod tutmak ve dişiler 10 dakika boyunca yumurtalarını bırakmak için izin vererek elde edilmiştir. Ikinci aşama yavru (J2) karanlıkta 25 ° C&#39;de 24 saat boyunca inkübe edilerek yumurta senkronize edildi ve erken J4 bir 52 saat daha, gri küfe, Botrytis cinerea ile J2 kültürlenmesiyle elde edilmiştir. Bu sefer noktada, çoğu J4 nematod genital morfolojisi kullanarak erkek ya da kadın olarak açıkça ayırt olabilir. erkek ve dişi J4 toplandı ve bakir yetişkin nematod için 24 saat boyunca, iki farklı Petri kapları ayrı ayrı kültürlenmiştir. Bir bakire erkek ve bakire kadın wat bir damla eşleştirilmişiçbükey sürgünün oyuk er. çiftleşme davranışı bir stereo mikroskop altında bir video kaydedici ile çekildi. çiftleşme sürecinin tüm dönem 82.8 ± 3.91 dakika (ortalama ± SH) ve 4 farklı aşamalarında bölünmüş olabilir: arama, temas çiftleşen ve kalıcı. süresi ortalama dakika sırasıyla 21.8 ± 2.0, ± 1.9 28.0, 25.8 ± 0.7 ve 7.2 ± 0.5 idi. Onbir alt davranışlar tarif edildi: seyir yaklaşıyor, karşılaşmadan, boğmaca, dokunmadan, yerini, bağlama, ejaculating, sessizliğini ayıran ve dolaşım. bir kadın 3 erkek veya 3 kadın ile bir erkek ile gruplandırılmış zaman İlginçtir, bariz içi cinsel rekabet gözlendi. Bu protokol, B. xylophilus&#39;un çiftleşme davranışı araştırırken, aynı zamanda diğer nematodların etiyolojik çalışmalar için bir referans olarak hareket sadece, kullanışlı ve değerlidir.

Bakire yetişkinlerin çiftleşme başarı oranı (R) rastgele seçilmiş yetişkinlerin önemli ölçüde daha yüksek olduğu, ortalama 86,67% oldu: 13.33 ± 4.65% (F = 1301,71, df = 1, p = 0.0001) (Şekil 2). Bu bulgu B. xylophilus&#39;un rastgele seçilen yetişkinlere göre daha bakir yetişkinlerle çiftleşme davranışlarını gözlemlemek için daha kolay olduğunu göstermektedir. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-pa...

Watch this Scientific Journal Video about Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus at JoVE.com

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

Pinewood Nematodu gözlem ve Çiftleşme Davranış miktarının belirlenmesi,<em&gt; Orijinli olanlar</em

A method for observing and quantifying the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, was established under a stereomicroscope. ...

observation-quantification-mating-behavior-pinewood-nematode

Research

JoVE Journal

Biology

Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

9.4K Görüntüleme.  Zhejiang Agricultural & Forestry University. A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.

Video: Observation and Quantification of Mating Behavior in the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus

Technique for Studying Arthropod and Microbial Communities within Tree Tissues

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms. Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear young, feed, or hide from natural enemies or harsh environmental conditions outside of the tree. Organisms that persist within the phloem habitat are difficult to observe given their location under bark. We provide a technique to preserve intact phloem and prepare it for experimentation with invertebrates and microorganisms. The apparatus is called a &#8216;phloem sandwich&#8217; and allows for the introduction and observation of arthropods, microbes, and other organisms. This technique has resulted in a better understanding of the feeding behaviors, life-history traits, reproduction, development, and interactions of organisms within tree phloem. The strengths of this technique include the use of inexpensive materials, variability in sandwich size, flexibility to re-open the sandwich or introduce multiple organisms through drilled holes, and the preservation and maintenance of phloem integrity. The phloem sandwich is an excellent educational tool for scientific discovery in both K-12 science courses and university research laboratories.

We provide a technique to preserve intact tree phloem and prepare it for observation. We create an apparatus called a phloem sandwich that allows for the introduction and observation of arthropods, microbes, and other organisms that inhabit phloem tissues.

Ağaç Dokuların içinde eklembacaklı ve Mikrobiyal Toplulukları incelenmesi için Tekniği

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms.  Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear ...

Çevre

Assaying Predatory Feeding Behaviors in Pristionchus and Other Nematodes

This protocol provides multiple methods for the analysis and quantification of predatory feeding behaviors in nematodes. Many nematode species including Pristionchus pacificus display complex behaviors, the most striking of which is the predation of other nematode larvae. However, as these behaviors are absent in the model organism Caenorhabditis elegans, they have thus far only recently been described in detail along with the development of reliable behavioral assays 1. These predatory behaviors are dependent upon phenotypically plastic but fixed mouth morphs making the correct identification and categorization of these animals essential. In P. pacificus there are two mouth types, the stenostomatous and eurystomatous morphs 2, with only the wide mouthed eurystomatous containing an extra tooth and being capable of killing other nematode larvae. Through the isolation of an abundance of size matched prey larvae and subsequent exposure to predatory nematodes, assays including both "corpse assays" and "bite assays" on correctly identified mouth morph nematodes are possible. These assays provide a means to rapidly quantify predation success rates and provide a detailed behavioral analysis of individual nematodes engaged in predatory feeding activities. In addition, with the use of a high-speed camera, visualization of changes in pharyngeal activity including tooth and pumping dynamics are also possible.

Assaying Predatory Feeding Behaviors in Pristionchus and Other Nematodes

Behavioral assays provide powerful tools for understanding neuronal function. Here we present several protocols for quantifying predatory feeding behavior found in the model nematode Pristionchus pacificus and its relatives. Additionally, we provide methods for analyzing predatory feeding adaptations including mouth structures and teeth.

içinde Yırtıcı Beslenme Davranışları tahlil<em&gt; Pristionchus</em&gt; Ve Diğer Nematodlar

This protocol provides multiple methods for the analysis and quantification of predatory feeding behaviors in nematodes. Many nematode species including ...

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model organism. However, little is known about the sex-determination mechanisms found in other non-model hymenopteran taxa, such as ants. Because of the complex nature of the life cycles that have evolved in hymenopteran species, it is difficult to maintain and conduct experimental crosses between these organisms in the laboratory. Here, we describe the methods for conducting inbreeding crosses and for evaluating the success of those crosses in ant Vollenhovia emeryi. Inducing inbreeding in the laboratory using V. emeryi, is relatively simple because of the unique biology of the species. Specifically, this species produces androgenetic males, and female reproductives exhibit wing polymorphism, which simplifies identification of the phenotypes in genetic crosses. In addition, evaluating the success of inbreeding is straightforward as males can be produced continuously by inbreeding crosses, while normal males only appear during a well-defined reproductive season in the field. Our protocol allow for using V. emeryi as a model to investigate the genetic and molecular basis of the sex determination system in ant species.

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

In this protocol, methods for conducting inbreeding crosses, and for evaluating the success of those crosses, are described for the ant Vollenhovia emeryi. These protocols are important for experiments aimed at understanding the genetic basis of sex determination systems in Hymenoptera.

İndüksiyon ve karınca, Vollenhovia Emeryi kullanarak akraba evliliği haçlar değerlendirilmesi

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model ...

Genetik

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

Çevresel İpuçlarının Eklem Davranışı Üzerine Etkisini Test Etmek İçin Bir Yöntem<em&gt; Drosophila melanogaster</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

Davranış

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a potential mate to form a pair. While this phenomenon has attracted interest of researchers, methods for its analysis have not been well described. Here we describe procedures for: 1) individual culturing and staging of Tigriopus juveniles and adults, and 2) video-based analysis of their mate-guarding behavior. The culturing method enables experimental control of paring experience of animals as well as the ability to track their development before behavioral tests. The analysis method allows quantitative evaluation of several aspects of the mate-guarding behavior, including capturing attempts by males and swimming trajectory of mate-guarding pairs. Although these methods were originally established for ethological studies on Tigriopus, with proper modifications they can also be applied to studies of other zooplankton in different research fields, such as physiology, toxicology, and ecological genetics.

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Mate-guarding behavior plays an important role in reproduction of intertidal copepods of the genus Tigriopus. However, methods for studying this behavior have not been well described. Here we describe methods for: 1) individual culture of virgin Tigriopus animals, and 2) quantitative analysis of their mate-guarding behavior.

Bireysel Tigriopus kopepodların ve kantitatif analiz dostum koruyan davranışlarının kültür

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a ...

Rapid Isolation of Wild Nematodes by Baermann Funnel

Beyond being robust experimental model organisms, Caenorhabditis elegans and its relatives are also real animals that live in nature. Studies of wild nematodes in their natural environments are valuable for understanding many aspects of biology, including the selective regimes in which distinctive genomic and phenotypic characters evolve, the genetic basis for complex trait variation, and the natural genetic diversity fundamental to all animal populations. This manuscript describes a simple and efficient method for extracting nematodes from their natural substrates, including rotting fruits, flowers, fungi, leaf litter, and soil. The Baermann funnel method, a classical nematology technique, selectively isolates active nematodes from their substrates. Because it recovers nearly all active worms from the sample, the Baermann funnel technique allows for the recovery of rare and slow-growing genotypes that co-occur with abundant and fast-growing genotypes, which might be missed in extraction methods that involve multiple generations of reproduction. The technique is also well suited to addressing metagenetic, population-genetic, and ecological questions. It captures the entire population in a sample simultaneously, allowing an unbiased view of the natural distribution of ages, sexes, and genotypes. The protocol allows for deployment at scale in the field, rapidly converting substrates into worm plates, and the authors have validated it through fieldwork on multiple continents.

This protocol outlines a method for efficiently extracting live nematodes from natural substrates in the field.

Baermann Huni tarafından Vahşi Nematodların Hızlı İzolasyonu

Beyond being robust experimental model organisms, Caenorhabditis elegans and its relatives are also real animals that live in nature. Studies of wild ...

<meta charset="utf8"></head><body>C. elegans'ta Uçucu Seks Feromon Yanıtlarının Ekstraksiyonu ve Miktarının Belirlenmesi

Volatile Sex Pheromone Extraction and Chemoattraction Assay in Caenorhabditis elegans

Chemical communication is vital in organismal health, reproduction, and overall well-being. Understanding the molecular pathways, neural processes, and computations governing these signals remains an active area of research. The nematode Caenorhabditis elegans provides a powerful model for studying these processes as it produces a volatile sex pheromone. This pheromone is synthesized by virgin females or sperm-depleted hermaphrodites and serves as an attractant for males.
This protocol describes a detailed method for isolating the volatile sex pheromone from several C. elegans strains (WT strain N2, daf-22, and fog-2) and C. remanei. We also provide a protocol for quantifying the male chemotaxis response to the volatile sex pheromone. Our analysis utilizes measurements such as chemotaxis index (C.I.), arrival time (A.T.), and a trajectory plot to compare male responses under various conditions accurately. This method allows for robust comparisons between males of different genetic backgrounds or developmental stages. Furthermore, the experimental setup outlined here is adaptable to investigating other chemoattraction chemicals.

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Spotlight: Erkek C. elegans Davranışı Üzerindeki Uçucu Seks Feromon Etkisinin İncelenmesi

This protocol establishes methods for extracting and quantifying responses to the volatile sex pheromone in C. elegans, providing tools to study chemical communication and navigation trajectory.

Caenorhabditis elegans'ta Uçucu Seks Feromon Ekstraksiyonu ve Kemocazibe Testi

Chemical communication is vital in organismal health, reproduction, and overall well-being. Understanding the molecular pathways, neural processes, and ...

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, reductionist, and scalable system for in-depth investigation of motivation using the mating drive of male Drosophila&#160;melanogaster (Drosophila), the methods for which we detail here. The behavioral paradigm centers on the finding that male mating drive decreases alongside fertility over the course of repeated copulations and recovers over ~3 d. In this system, the powerful neurogenetic tools available in the fly converge with the genetic accessibility and putative wiring diagram available for sexual behavior. This convergence allows rapid isolation and interrogation of small neuronal populations with specific motivational functions. Here we detail the design and execution of the satiety assay that is used to measure and alter courtship motivation in the male fly. Using this assay, we also demonstrate that low male mating drive can be overcome by stimulating dopaminergic neurons. The satiety assay is simple, affordable, and robust to influences of genetic background. We expect the satiety assay to generate many new insights into the neurobiology of motivational states.

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

This article describes a behavioral assay that uses male mating drive in Drosophila melanogaster to study motivation. Using this method, researchers can utilize advanced fly neurogenetic techniques to uncover the genetic, molecular, and cellular mechanisms that underlie this motivation.

Pinewood Nematodu gözlem ve Çiftleşme Davranış miktarının belirlenmesi,

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Ağaç Dokuların içinde eklembacaklı ve Mikrobiyal Toplulukları incelenmesi için Tekniği

içinde Yırtıcı Beslenme Davranışları tahlil

İndüksiyon ve karınca, Vollenhovia Emeryi kullanarak akraba evliliği haçlar değerlendirilmesi

Çevresel İpuçlarının Eklem Davranışı Üzerine Etkisini Test Etmek İçin Bir Yöntem

Bireysel Tigriopus kopepodların ve kantitatif analiz dostum koruyan davranışlarının kültür

Baermann Huni tarafından Vahşi Nematodların Hızlı İzolasyonu

Caenorhabditis elegans'ta Uçucu Seks Feromon Ekstraksiyonu ve Kemocazibe Testi

Caenorhabditis elegans'ta Uçucu Seks Feromon Ekstraksiyonu ve Kemocazibe Testi

Caenorhabditis elegans'ta Uçucu Seks Feromon Ekstraksiyonu ve Kemocazibe Testi

Ölçme ve Male Değiştirme Çiftleşme Sürücü