Yazarlar eleştirel yazının gözden geçirmez ve düzenleme için Jayden Smith teşekkür ederim. Bu çalışma Ulusal Multipl Skleroz Derneği (NMSS, kısmi hibe RG-4001-A1) destek aldı, İtalyan Multipl Skleroz Derneği (AISM, 2010/R/31 hibe), İtalyan Sağlık Bakanlığı (GR08-7), Hayat, Banca Agricola Popolare di Ragusa (BAPR), Avrupa Araştırma Konseyi (ERC) ERC-2010-StG Hibe sözleşmesi altında herhangi 260511-SEM_SEM ve Avrupa Topluluğu (AT) 7. Çerçeve Programı (FP7/2007-2013) için Wings Hibe Anlaşması n * C altında; 280772 - Ione.

<ol>
	<li>Ben-Hur, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplanted+multipotential+neural+precursor+cells+migrate+into+the+inflamed+white+matter+in+response+to+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Transplanted multipotential neural precursor cells migrate into the inflamed white matter in response to experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Glia. 41, 73-80 (2003).</li><li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injection+of+adult+neurospheres+induces+recovery+in+a+chronic+model+of+multiple+sclerosis.">Injection of adult neurospheres induces recovery in a chronic model of multiple sclerosis.</a> Nature. 422, 688-694 (2003).</li><li>Chu, K., Kim, M., Jeong, S. W., Kim, S. U., Yoon, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+neural+stem+cells+can+migrate,+differentiate,+and+integrate+after+intravenous+transplantation+in+adult+rats+with+transient+forebrain+ischemia.">Human neural stem cells can migrate, differentiate, and integrate after intravenous transplantation in adult rats with transient forebrain ischemia.</a> Neurosci. Lett. 343, 129-133 (2003).</li><li>Bottai, D., Madaschi, L., Di Giulio, A. M., Gorio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viability-dependent+promoting+action+of+adult+neural+precursors+in+spinal+cord+injury.">Viability-dependent promoting action of adult neural precursors in spinal cord injury.</a> Mol. Med. 14, 634-644 (2008).</li><li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosphere-derived+multipotent+precursors+promote+neuroprotection+by+an+immunomodulatory+mechanism.">Neurosphere-derived multipotent precursors promote neuroprotection by an immunomodulatory mechanism.</a> Nature. 436, 266-271 (2005).</li><li>Einstein, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraventricular+transplantation+of+neural+precursor+cell+spheres+attenuates+acute+experimental+allergic+encephalomyelitis.">Intraventricular transplantation of neural precursor cell spheres attenuates acute experimental allergic encephalomyelitis.</a> Mol. Cell Neurosci. 24, 1074-1082 (2003).</li><li>Chu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+neural+stem+cell+transplantation+reduces+spontaneous+recurrent+seizures+following+pilocarpine-induced+status+epilepticus+in+adult+rats.">Human neural stem cell transplantation reduces spontaneous recurrent seizures following pilocarpine-induced status epilepticus in adult rats.</a> Brain Res. 1023, 213-221 (2004).</li><li>Jeong, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+neural+stem+cell+transplantation+promotes+functional+recovery+in+rats+with+experimental+intracerebral+hemorrhage.">Human neural stem cell transplantation promotes functional recovery in rats with experimental intracerebral hemorrhage.</a> Stroke. 34, 2258-2263 (2003).</li><li>Aboody, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+display+extensive+tropism+for+pathology+in+adult+brain:+evidence+from+intracranial+gliomas.">Neural stem cells display extensive tropism for pathology in adult brain: evidence from intracranial gliomas.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 12846-12851 (2000).</li><li>Muller, F. J., Snyder, E. Y., Loring, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy:+can+neural+stem+cells+deliver.">Gene therapy: can neural stem cells deliver.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 75-84 (2006).</li><li>Martino, G., Pluchino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+therapeutic+potential+of+neural+stem+cells.">The therapeutic potential of neural stem cells.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 395-406 (2006).</li><li>Deckert-Schluter, M., Schluter, D., Hof, H., Wiestler, O. D., Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+ICAM-1,+VCAM-1+and+their+ligands+LFA-1,+Mac-1,+CD43,+VLA-4,+and+MHC+class+II+antigens+in+murine+Toxoplasma+encephalitis:+a+light+microscopic+and+ultrastructural+immunohistochemical+study.">Differential expression of ICAM-1, VCAM-1 and their ligands LFA-1, Mac-1, CD43, VLA-4, and MHC class II antigens in murine Toxoplasma encephalitis: a light microscopic and ultrastructural immunohistochemical study.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 53, 457-468 (1994).</li><li>Hemmer, B., Archelos, J. J., Hartung, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+concepts+in+the+immunopathogenesis+of+multiple+sclerosis.">New concepts in the immunopathogenesis of multiple sclerosis.</a> Nat. Rev. Neurosci. 3, 291-301 (2002).</li><li>Butcher, E. C., Picker, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+homing+and+homeostasis.">Lymphocyte homing and homeostasis.</a> Science. 272, 60-66 (1996).</li><li>Rampon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanism+of+systemic+delivery+of+neural+precursor+cells+to+the+brain:+assembly+of+brain+endothelial+apical+cups+and+control+of+transmigration+by+CD44.">Molecular mechanism of systemic delivery of neural precursor cells to the brain: assembly of brain endothelial apical cups and control of transmigration by CD44.</a> Stem Cells. 26, 1673-1682 (2008).</li><li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+neural+stem+cells+ameliorate+autoimmune+encephalomyelitis+in+non-human+primates.">Human neural stem cells ameliorate autoimmune encephalomyelitis in non-human primates.</a> Ann. Neurol. 66, 343-354 (2009).</li><li>Martino, G., Pluchino, S., Bonfanti, L., Schwartz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+regeneration+in+physiology+and+pathology:+the+immune+signature+driving+therapeutic+plasticity+of+neural+stem+cells.">Brain regeneration in physiology and pathology: the immune signature driving therapeutic plasticity of neural stem cells.</a> Physiol. Rev. 91, 1281-1304 (2011).</li><li>Aharonowiz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effect+of+transplanted+human+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursors+in+an+animal+model+of+multiple+sclerosis.">Neuroprotective effect of transplanted human embryonic stem cell-derived neural precursors in an animal model of multiple sclerosis.</a> PLoS ONE. 3, e3145 (2008).</li><li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+regulatory+neural+stem/precursor+cells+protect+from+central+nervous+system+autoimmunity+by+restraining+dendritic+cell+function.">Immune regulatory neural stem/precursor cells protect from central nervous system autoimmunity by restraining dendritic cell function.</a> PLoS One. 4, (2009).</li><li>Einstein, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+precursors+attenuate+autoimmune+encephalomyelitis+by+peripheral+immunosuppression.">Neural precursors attenuate autoimmune encephalomyelitis by peripheral immunosuppression.</a> Ann. Neurol. 61, 209-218 (2007).</li><li>Gritti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotential+stem+cells+from+the+adult+mouse+brain+proliferate+and+self-renew+in+response+to+basic+fibroblast+growth+factor.">Multipotential stem cells from the adult mouse brain proliferate and self-renew in response to basic fibroblast growth factor.</a> J. Neurosci. 16, 1091-1100 (1996).</li><li>Furlan, R., Pluchino, S., Marconi, P. C., Martino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+gene+delivery+into+the+central+nervous+system+using+intrathecally+injected+nonreplicative+viral+vectors.">Cytokine gene delivery into the central nervous system using intrathecally injected nonreplicative viral vectors.</a> Methods Mol. Biol. 215, 279-289 (2003).</li><li>Constantin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+analysis+of+adhesive+events+in+brain+microvessels+by+using+intravital+microscopy.">Visualization and analysis of adhesive events in brain microvessels by using intravital microscopy.</a> Methods Mol. Biol. 239, 189-198 (2004).</li><li>Politi, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic-resonance-based+tracking+and+quantification+of+intravenously+injected+neural+stem+cell+accumulation+in+the+brains+of+mice+with+experimental+multiple+sclerosis.">Magnetic-resonance-based tracking and quantification of intravenously injected neural stem cell accumulation in the brains of mice with experimental multiple sclerosis.</a> Stem Cells. 25, 2583-2592 (2007).</li><li>Melzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-graft+of+allogeneic+immune+regulatory+neural+stem+cells+(NPC)+and+pancreatic+islets+mediates+tolerance,+while+inducing+NPC-derived+tumors+in+mice.">Co-graft of allogeneic immune regulatory neural stem cells (NPC) and pancreatic islets mediates tolerance, while inducing NPC-derived tumors in mice.</a> PLoS One. 5, (2010).</li><li>Amariglio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-derived+brain+tumor+following+neural+stem+cell+transplantation+in+an+ataxia+telangiectasia+patient.">Donor-derived brain tumor following neural stem cell transplantation in an ataxia telangiectasia patient.</a> PLoS Med. 6, (2009).</li><li>Ben-Hur, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+proinflammatory+cytokines+on+the+growth,+fate,+and+motility+of+multipotential+neural+precursor+cells.">Effects of proinflammatory cytokines on the growth, fate, and motility of multipotential neural precursor cells.</a> Mol. Cell Neurosci. 24, 623-631 (2003).</li><li>Giusto, E., Donega, M., Cossetti, C., Pluchino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuro-immune+interactions+of+neural+stem+cell+transplants:+From+animal+disease+models+to+human+trials.">Neuro-immune interactions of neural stem cell transplants: From animal disease models to human trials.</a> Exp. Neurol. , (2013).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Somatik kök hücre bazlı terapiler gibi MS2 11 gibi kronik iltihaplı CNS bozuklukları tedavi etmek için en ümit verici yöntemlerinden biri olarak ortaya çıkmaktadır. Terapötik etkilerini sürdürme mekanizmaları hala tam olarak aydınlatılamamıştır gerekir iken, nörodejeneratif hastalıkların farklı deneysel modellerde NPC naklinin önemli bir etkisi hücreler yakında insan çalışmalar içine uygulanabilir kök biraz kışkırtıcı inanç doğurmuştur. Ancak, bazı önemli sorunları yüz ve bu tür (multipotent vs allojenik, pluripotent vs otolog) transplantasyon için ideal bir kök hücre kaynağı tespiti ve en iyi yol olarak bazı cevaplanmamış sorular, ele almak gerekir gibi yenilikçi tedavilerin herhangi bir potansiyel insan uygulamalarını öngören önce yönetim. Nörodejeneratif hastalıklar, örneğin bir uzamsal olarak (kapalı olmak üzere, kendi patofizyolojiler farklıdır. In omurilikJüri, inme) diğer bir mekansal zamansal yayılması (örneğin MS) ile karakterize olurken. Bu beyin hasarı birden sitelerinin varlığı aşılması gereken ek bir sorun teşkil etmektedir ikincisi, yetersiz ya da sadece olanaksız olabilirken (kök) hücrelerinin odak enjeksiyon, eski için uygun bir tedavi olabileceğini gelmektedir. Tutarlı kanıtlar intravenöz dağıtım ortamı duygusu ve özellikle ev hasar yer (ler) doğru kök hücrelerin iç yeteneği ile desteklenen hücre uygulama için geçerli bir (ve düşük invaziv) protokolünü temsil edebilir göstermiştir. Bununla birlikte, klinik olarak NPC sistemik terapiler için sabit ya da siteleri olmayabilir periferal olmayan CNS organlardaki nakledilen hücrelerin olası birikimi (örneğin, akciğer, dalak, lenf düğümleri ve böbrekler) gibi birkaç sınırlamalar ile engellenmektedir in vivo olarak, yerel enflamatuar tepkiler. Iken bu nonspesifik accumHedef MSS dışarı enjekte NPC ulation hızla kronik EAE2 ile farelerde temizlenir, uzun süreli kalıcılık NPC (veya bazı durumlarda özel hedefleme) kanıtı ikincil lenfoid organlara (örneğin. lenf düğümleri ve dalak) düzeyinde var EAE5 19,20 nükseden ile farelerde sistemik enjeksiyonundan sonra. Nakledilen NPC önemli sayıda olmayan CNS organlara doğru sirküle olması kaçınılmaz CNS&#39;de NPC mutlak sayısını azaltarak, bir seyreltme etkisi yaratır. İlginçtir, sistemik CNS 19,20 üzerinden münhasıran biriken bile NPC (bağışıklık düzenleyici eylemler yoluyla örneğin) terapötik etkili enjekte. Ve merkezi sinir sistemini hedef enjekte NPC genel terapötik etkisi sadece 5 veya lenf düğümleri sadece 19 karşılaştırılabilir. Bu, surroundin moleküler bileşenlerine farklı tepki hücrelerin bir iç plastisitesi, kısmen olabilirg mikroçevresinin. Özellikle, bir yandan nakledilmiş NPC enflamatuar sitokinlerin varlığı hissedebilir ve immün modülatör mekanizmaları 16 yoluyla terapötik bir etki gösterirler, diğer yandan, sonuç olarak tümör 25,26 oluşumuna yol açan düşman mikroçevrelerde ile temas halinde olabilir. Bu nedenlerle, tercih edilen seçenek, CNS enjekte NPC konsantre mevcut yer almaktadır. Bu nedenle, (a lumbar veya sisternal yoldan) intratekal halen klinik araştırmalarda uygulama en çok kabul gören muhtemel yoldur. Ancak, multifokalite ve MS lezyonlarının patolojik heterojen böyle bir yaklaşımın etkinliğini sınırlayabilir. Burada sistemik (iv ve icv her ikisi de), kronik EAE, en stu biri tarafından etkilenmiş farelerde NPC&#39;ler nasıl enjekte arda yetişkin SVZ&#39;unda ve gelen fare sinir atalarıdır, izole korumak ve karakterize etmek için verimli bir protokol açıklarMS modelleri öldü. Nispeten basit ve anlaşılır, bu protokoller dikkate alınması gereken bazı kritik adımlar mevcut olsa. İlk başta, bir stabil genişletilebilir ve sağlıklı hücre hazırlık elde etmek zorunludur. Protokol boyunca tarif edildiği gibi, hücrelerin stabilitesi dolaylı büyüme oranına bakılarak tahmin edilebilir. İdeal olarak, her 4-5 neurospheres DIV ve geçişleri üzerine hücre ölüm oranı (en az% 10), çok düşük olmalıdır 150-200 um bir çapa ulaşmalıdır. Ayrıca, neurospheres mikroskop bir kompakt ve düzenli yuvarlak şeklini sunmak zorundadırlar. Lentivirüsler ile enfeksiyon hücrelerin hayatta kalma ve istikrar ile müdahale edebilir. Optimal bir enfeksiyon elde etmek için, 3 x 10 6 TU / ml elde etmek için yeterli, ilgi konusu virüs bir titrasyonunu elde etmek üzere zorunludur. Bir yandan virüs düşük miktarda enfekte olmuş hücrelerin küçük bir yüzdesi yol olur ise Gerçekten de, diğer taraftan yüksek miktarda kullanılmasıdır would muhtemelen (enfekte edilecek genin sıkı bir şekilde bağlıdır) bir toksisite etkiye yol açar. NPC entegre virüs birden çok kez enfekte olabilir, olmalıdır transgen pozitif canlı hücrelerin düşük yüzdeye ilk transdüksiyon kurşun sonucu. Bu, nontransduced vahşi tip, kararlılık ve canlılık parametreler içi deneysel karşılaştırma olması her zaman iyi bir uygulamadır NPC kontrol eder. Kronik EAE indüksiyonu için olduğu gibi, en sorunlu kısmı emülsiyonun hazırlanması ile temsil edilmektedir. Açıklandığı gibi, cam ve buz her zaman kullanımı olmalıdır. Emülsiyonun hazırlanması 30-45 dakika sürer ve bu su üzerinde ayrıştırılarak bu dağıtmak etmez sadece enjekte edilecek hazır olarak kabul edilebilir. Emülsiyonu su tüketilir ise, bu henüz hazır değil ve daha fazla karıştırma gerektirir demektir. Hücre tatbikat zamanında iv enjeksiyon işlemi sırasında iyi bir hassasiyeti önemlidir. Birincisi, o kadar olması son derece önemlidirtoplanan hücrelerin enjeksiyonu gibi ingle hücre süspansiyonu, enjekte edilen fare damarları engellemek ve hemen ölüme yol açabilir. Damar içine iğne doğru konumlandırılmasını sağlamak için, kan şırınga birkaç mikrolitre ile aspire iyi bir uygulamadır. Doğru yer bulunana kadar şırıngaya gelen hiç kan durumunda, operatör yavaş ileri ya da geri iğneyi hareket etmelidir. Ancak bu noktada hücre süspansiyonu yavaş yavaş enjekte edilebilir. Önemli olarak, operatörü tipik haliyle, sıvı kolayca damar akış gerektiği için şırınga üzerinde herhangi bir baskı uygulamak için gerekli olmamalıdır. Uygunsuz bir enjeksiyon kaçınılmaz olarak enjeksiyon yerinde tekabül eden bir deri altı şişmesine neden olacaktır. Bu çok yakın bir gelecekte sistemik NPCs2, 27, genetiği değiştirilmiş ya da değil, kendileri bir tedavi seçeneği yanı sıra, bağışıklık m sunmak için önemli bir araç temin edebilir enjekte fazlalaştıdirekt olarak CNS 28 içine odulatory ve / veya nöro-koruyucu ilaçlar ve ön remyelinating ajanlar. Bu nedenle, NPC sistemik verilmesine ilişkin bazı kısıtlamalar iki iv mevcut iken. ve intraserebroventriküler. yolları sonuçta hücrelerin fokal enjeksiyon tedavisinde altın standart protokolü teşkil olmayabilir hastalıklarda geçerli bir alternatif tedavi yaklaşımı temsil edebilir.

Güçlü kanıtlar CNS bozukluklarının 1-8 hayvan modellerinde, somatik sinir kök / öncü hücreler (NPC) transplantasyonunda terapötik etkinliği doğrulayan vivo çalışmalarda doğmuştur. Bu deneysel sonuçlar, klinik uygulamalara tercüme edilebilir önce Bununla birlikte, konak içine kök hücrelerin teslimi ile ilgili bir takım konularda dikkatli bir değerlendirme gerektirir. Multifokal, kronik inflamatuar beyin hastalıkları için (hematopoetik olmayan) restoratif kök hücre tedavilerinin geliştirilmesine yönelik özellikle önemli bir engel NPC enjeksiyon ideal bir rota tanımlanmasıdır. Hedeflenen hastalığın patofizyolojisi bir firma anlayışı (fokal veya multifokal; primer inflamatuar veya primer dejeneratif), ve dağıtım teknikleri ile ilgili fizibilite ve risk konularında ihtiyatlı analiz kök hücre teslimat için optimum protokolünü belirlemek bulunmaktadır. Birlikte odak ( <em&gt; Örneğin. sinir sistemi parankimi içine) kök hücre nakli hasarının uzamsal kapalı alanlara karakterize CNS hastalıklarının tedavisi için mantıklı bir yaklaşım (örneğin, Parkinson ve Huntington hastalığı, beyin ve omurilik travmatik yaralanmalar ve inme), aynı yaklaşım olduğu kanıtlanabilir Böyle bir multifokal kronik ve mekansal olarak yaygın sinir sistemi hasarı zamanla biriken MS, gibi durumlarda pratik olarak mümkün olmadığı için. Bu son durumda, bireysel lezyonların fokal hücre enjeksiyonları hedeflemesi de böylece daha az invazif NPC nakli ile hedef MSS alternatif, daha uygun yöntemlerin belirlenmesini isteyen, CNS parankimi içinde uzun mesafelerde göç nakledilen NPC kapasitesi sınırlı tarafından engellendiği . CNS9 dışında damardan enjekte edildiğinde büyük vaadi farelerde NPC intrakranial tümör (örn.. Glioma) hedef gözlemlerden ortaya çıktı. Bu seminal ardındankök hücre pathotrophism 10 in vivo kanıt, geniş veri, deneysel otoimmün ensefalomyelit (EAE) ile laboratuvar hayvanlarında fizibilite ve NPC sistemik nakli terapötik etkinliğine ilişkin birikmiş olan intravenöz ya yoluyla inflamatuvar MSS hasar bir model olarak (iv) veya intraserebrovantriküler (icv.) NPC enjeksiyon 1,2,5,6,8 .. Biz ilk olarak bu hedef ve girmek iltihaplı MSS ve sonradan birden hücrelerarası meşgul nakledilen NPC yeteneği bağlı olduğunu göstermiştir 11, in vivo olarak belirli bir mikro ortamlar içinde iletişim programları. Özel olarak MSS hedef için, NPC beyin omurilik sıvısı (CSF) icv enjeksiyon ile dolaşım, veya iv enjeksiyon yoluyla kan akışına doğrudan verilir. Bir kez kan dolaşımına veya CSF girilerek, nakledilen NPC aktif etkileşimkan beyin (BBB) ​​veya kan beyin omurilik sıvısı (BCSFB) engeller ve CNS parankimi girin. NPC greft ile BBB (veya BCSFB) arasındaki bu etkileşim, NPC yüzey hücre yapışma molekülleri (CAMlar) spesifik grubu ile düzenlenir ve aktive edilmiş endotel / ependimal hücreler 12-14 CAM kontra-ligandları yüksek seviyelerinin ifadesi ile kolaylaştırılır. Bu CAM&#39;lar örnekleri hiyalüronat için reseptörü, CD44, ve hücreler arası yapışma molekülü (ICAM) -1 ligand çok geç antijen (VLA) -4 5,15,16 (yani, lökositler de, aktive edilmiş ependim ile etkileşim sorumludur içerir ve endotel hücreleri), ve daha düşük bir ölçüde Lenfosit fonksiyonu ile ilişkili antijen (LFA)-1 ve p-selektin glikoprotein ligandı (PSGL) -1. NPC da CCR1, CCR2, CCR5, CXCR3, CXCR4 ve şunları içeren çeşitli kemokin alıcılarının, geniş bir yelpazede belirtir (ama CCR3&#39;ü ve CCR7 ifade yoktur), in vitro ve in vivo 5,16 hem de işlevsel açıdan aktif olan,. Bu nedenle, systemically enjekte NPC iltihaplı merkezi sinir sisteminin seviyesinde birikir, G-protein kenetli reseptör (GPCR) ile birlikte, bu CAM&#39;lar kullanın. Tersine, NPC vasküler veya beyin omurilik sıvısı alan yolları 2 üzerinden MSS girmeyin sağlıklı farelere içine sistemik enjekte. Kimyasal olarak bağlı ensefalit, bir model olarak ya da sistemik sitokin lypopolisaccharide (LPS) enjeksiyonu takip CNS enflamasyonu, veya endotelyal / ependim hücre aktivasyonu, beyin ve omurilik 2 içine sistemik olarak enjekte NPC birikimi için gereklidir. Bu nedenle, sistemik tedavileri ile NPC CNS başarılı bir şekilde hedefleme, beyin ve omurilik ortam birikimi ve NPC transendoteliyal taşınması için elverişli olduğu bir fırsat (WoO) bir hastalığa özgü pencerenin tanımlanmasına bağlıdır. Bu tür durumlar, genellikle erken ve geç inflamasyon 17 bağlamında ortaya çıkmaktadır. Bir kez farklılaşmamış NPCleri nakledilen, CNS&#39;yi girmiş olanFarelerin klinik-patolojik özelliklerin yanı sıra daha büyük EAE, insan olmayan primatlar iyileştirilmesi için gösterilmiştir. Bu da karşılık olarak hücre yer değiştirmesi üzerinde çok az 2 olan ve olmayan sinir sistemi iltihaplı bölgelerde 19,20 (örneğin, lenf düğümleri) vs perivasküler CNS 2,5,6,18 olan bağışıklık düzenleyici ve nöro-koruyucu parakrin faktörler dikkate değer salgılanması bağımlı olduğu tarif edilmiştir enflamatuar hücre sinyal bağışıklık hücreleri 5 süzülmesiyle ortaya çıkarmıştır. Bu yazıda kronik EAE bir fare modeli içine somatik NPC sistemik enjeksiyon kilit metodolojik yönlerini açıklar. Daha spesifik olarak, biz genişletmek ve yetişkin C57BL / 6 farelerin subventricular bölgesi (SVZ) den nakli somatik NPC hazırlamak, biz (i) kurduk protokolleri türeterek tanımlamak; (Ii) bu tür farelerde kronik EAE neden ve (iii) terapötik olarak etkili sistemik (iv veya icv) NPC nakli gerçekleştirmek iNto EAE fareler.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1474">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:753px;">Cell culture</td>
			<td style="width:300px;"></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">EBSS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E2888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">L-Cystein</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH CO LTD</td>
			<td>C7352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Papain</td>
			<td>WORTHINGTON</td>
			<td>30H11965</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">EDTA</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>D/0700/50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mouse NeuroCult basal medium</td>
			<td>Stem Cell technologies</td>
			<td>05700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NeuroCult proliferation supplements</td>
			<td>Stem Cell technologies</td>
			<td>05701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Heparin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3393</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Basic fibroblast growth factor</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-18B-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Epidermal growth factor</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pen/Strep</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>1514012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Matrigel (coating solution)</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td>354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NeuroCult&#174; Differentiation Kit (Mouse)</td>
			<td>Stem cell technologies</td>
			<td>05704</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Accumax</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>00-4666-56</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dulbecco&#39;s PBS (DPBS) (10x) without Ca&#38; Mg</td>
			<td>PAA LABORATORIES LTD</td>
			<td>H15-011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Myco trace</td>
			<td>PAA LABORATORIES LTD</td>
			<td>Q052-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">immunofluorescence</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Normal goat serum</td>
			<td>PAA LABORATORIES LTD</td>
			<td>B11-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Polyethylene glycol p-(1,1,3,3-tetramethylbutyl)-phenyl ether</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH CO LTD</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mouse anti Nestin</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab11306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Rabbit anti GFAP</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>203344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mouse anti Histone H3 (phospho S10)&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab14955</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Rabbit anti MAP-2</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab32454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Rat anti MBP</td>
			<td>AbD SEROTEC</td>
			<td>MCA409S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-O4 Antibody, clone 81 | MAB345</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB345</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mounting solution</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">EAE</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Freund&#39;s Adjuvant Incomplete</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH CO LTD</td>
			<td>F5506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mycobacterium tuberculosis&#160;</td>
			<td>DIFCO</td>
			<td>H37Ra</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">MOG(35&#8211;55)&#160;</td>
			<td>Espikem</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pertussis toxin</td>
			<td>List Biological Laboratories</td>
			<td>181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tissue processing</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Iris scissor straight</td>
			<td>Fine Sciences Tolls</td>
			<td>14060-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Blunt/bended forceps</td>
			<td>Fine Sciences Tolls</td>
			<td>11080-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Brain slicer</td>
			<td>Zivic instruments</td>
			<td>BSMAS005-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical blades</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">P200, P1000 pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ketamine (Vetalar)</td>
			<td style="width:300px;">Boehringer Ingelheim</td>
			<td>01LC0030&#160;&#160;</td>
			<td style="width:272px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Xylazine (Rompun)</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>32371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Stereotaxic frame</td>
			<td>KOPF</td>
			<td>Model 900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7762-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">VECTASTAIN Elite ABC Kit</td>
			<td>vector laboratories</td>
			<td>PK-6100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

systemic injection of neural stem/progenitor cells in mice with chronic eae

Nöral kök / öncül hücreler (NPC) rejeneratif nöroloji, beyin onarım veya restorasyon amaçlayan nakli yaklaşımlar için umut verici bir kök hücre kaynağıdır. Bu yönerge beyin onarım nörolojik hastalıklar, çeşitli klinik öncesi modellerde, fokal ya da sistemik olarak NPC nakli sonrasında elde edilir, geniş kanıtlar doğmuştur. Bu deneysel veriler acil değerlendirmeyi gerektirir beyin hastalıkları için restoratif kök hücre tedavilerinin önemli engellerden biri olarak hücre teslim rota belirledik. İntraparenkimal kök hücre aşılama gibi omurilik yaralanmaları ve Parkinson hastalığı gibi izole edilmiş ve erişilebilir beyin lezyonları ile karakterize olan patolojiler için mantıklı bir yaklaşımı temsil etmektedir. Ne yazık ki, bu ilke, multipl skleroz (MS) gibi a, multifokal enflamatuar ve (zaman ve mekan hem de) yaygın doğası ile karakterize edilen koşullara kötü uygulanabilir. Gibi, beyin Sist tarafından hedef olarakemik NPC teslim beyin ve merkezi sinir sistemi (CNS) Deneysel kronik inflamatuar zarar etkilenen kemirgen ve insan olmayan primatların omurilik hücreleri sağlamak için düşük bir invaziv ve terapötik açıdan etkili bir protokol haline gelmiştir. Hücre teslimat Bu alternatif yöntem, NPC pathotropism (i) fonksiyonel hücre yapışma molekülleri ve enflamatuar sitokin ve kemokin reseptörleri üzerinden çevreye anlamda özel olarak doğuştan gelen bir kapasiteye dayanır; (Ii) sızıntı anatomik intravenöz sonra bariyerleri (. Iv) veya intraserebrovantriküler (icv) enjeksiyonu çapraz; (Iii) de iltihabik beyin ve omurilik hasarı çok perivasküler yer (ler) seviyesinde birikir; ve (iv) in vivo olarak farklı konakçı hedef hücrelerin üzerine kayda değer bir doku trofik ve bağışıklık düzenleyici etkilerini uygularlar. Burada biz iv için geliştirilmiş olan yöntemler açıklanmaktadır. ve &lt;em&gt; icv kronik CNS inflamatuar demiyelinasyon bir model olarak, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) ile farelerde singeneik NPC teslim, ve rejeneratif nörolojide iltihaplı beyin seçici hedeflemesi için değerli bir teknik olarak sistemik kök hücre teslim öngörmektedir.

NPC türetme ve karakterizasyonu SVZ diseksiyonlar mekanik ve enzimatik ayrışma (Şekil 1A) vasıtası ile 6-8 haftalık C57BL / 6 farelerinin (n = 5-7 farenin / havuz) havuzları üzerinde gerçekleştirilir. CGM kültürlemenin bir kaç gün sonra, serbest yüzen neurospheres (Şekil 1A ve 1B) oluşturulması başlar. Birincil küreler alınır ve mekanik olarak her 4-5 DIV pasajlanır. Pasajlayarak sonra canlı ve ölü hücre sayıları tespit ve kümülatif hücre sayıları bir büyüme eğrisi (Şekil 1C) oluşturmak için çizilmiştir. Bu, böylece NPC preparatın genel stabilitesini değerlendirmek için dolaylı bir parametre temin yayılma oranının bir göstergesini vermektedir. Ve farklılaşmamış sinir hücrelerinin (örneğin Nestin) (Şekil 2A); neurospheres olarak çoğalan zaman, NPC mitotik aktivite belirteçleri (5 ug / ml, fosfo-histon H3, PHH3) ifade etmektedir. Terapötik e olması olan ayrım NPCEAE de fficacious nakli sonrası CD44 (5 ug / ml), VLA-4 (10 ng / ml) içinde α4 alt birimi (Şekil 2F) gibi hücre yüzeyi yapışma moleküllerini ifade etmelidir. Uygun türev koşullar altında kaplama olduğunda, NPC gibi astroglial işaretleyici GFAP (Şekil 2C) halinde üç sinir soylar, (Şekil 2B), tipik markörlerini ifade nöronal mikrotübül markör protein-2 (MAP-2 bağlantılı; / ml 5 ug ) (Şekil 2B) ve oligodendroglial işaretleri O4 (5 ug / ml) ve miyelin bazik protein (MBP, 10 ug / ml) (Şekil 2E), böylece NPC üç ana sinir soy doğru multipotent olduğunu kanıtlar. In vivo olarak nakledilen hücrelerin belirlenmesini kolaylaştırmak için, NPC GFP gibi kararlı bir şekilde ifade raportör genler için tasarlanmış lentivirüsler ile iletilir. Transdüksiyona NPC (neurospheres çoğalan olarak Şekil 3A ve 3 hem de GFP ifadeC) yanı sıra büyüme faktörü çekilmesi (Şekil 3B) üzerinde in vitro farklılaşan zaman. Transdüksiyon verimliliğini doğrulamak için, GFP ekspresyon (yani yeterince zaman, protein düzeyinde ortaya transjenin ifade sağlam olması için izin veriyor) gibi erken hücre transdüksiyonu sonra 3 geçişleri başlamak üzere, akış sitometrisi ile analiz edilir. In vitro NCPlerle üçüncü nesil lentivirüsler uygularken, sürekli proliferasyonunda belirgin toksisite veya değişiklikler de olan, birden çok bağımsız deneyin (Şekil 3C) üzerinde GFP&#39;nin yüksek seviyede gösteren hücrelerin&gt;% 90 gözlemlemek, vahşi tip büyüme eğrileri ve karşılaştırırken lenti-GFP kalıt NPC (Şekil 3D). Kronik EAE indüksiyon MS&#39;in patolojik ve klinik olayların en özetlediği beri EAE, MS iyi karakterize modellerinden biridir. Developmen için MOG35-55 yol ile C57BL / 6 farelerinin bağışıklaştırılmasıEAE kronik bir forma t. Indüksiyon fazında (klinik öncesi) döneminde hastalık başlangıcını (11.3 ± 1.8 dpi) yaklaşırken, MOG fareler ağırlığı (Şekil 4A) kaybetme başlar bağışıklı. Efektör / işgali fazın başlangıcında (pik klinik; 16.8 ± 3.2 dpi) EAE fareler (3,5 ± 0,7 puan) hastalığın zirveye ulaşır ve kısa bir süre zirve yaptıktan sonra nihayet kronik sırasında stabilize ilerleyici ve kısmi iyileşme gösteriyor itibaren yaklaşık 30 dpi dan faz (stabil klinik) (2.8 ± 0.9 puan) (Şekil 4B). In vivo doku patolojisi ile eşleştirilmiş intravital mikroskopi 23 veya manyetik rezonans görüntüleme 24 ya göre bazı soruşturma EAE, dahil olmak üzere çok sayıda çalışmalar, efektör / işgali faz (16-22 dpi) fırsat ideal bir pencere (woo) zirve belirledik kronik iltihaplı EAE CNS girmek ve ikincil d korumak için tasarlanmıştır kök hücreleri ile sistemik deneysel tedavileri gerçekleştirmek için hangiermeden. NPC enjeksiyon Singeneik NPC beyin (Şekil 5A) ve omurilik (Şekiller 5B-D) hem de (Şekil 6) merkezi sinir sistemi hasar perivasküler alanlarında hemen hemen sadece bulunan EAE farelerde sistemik olarak enjekte edilmiş, 45 güne kadar, transplantasyonu (DPT) yayınlamak tarif edileceği gibi 5. iv. Birkaç NPC neun (Şekil 5D) ifade perivasküler alanın dışına taşırken NPC tercihen, bir olgunlaşmamış, Nestin + (Şekil 5C) fenotip korumak enjekte. Notun, NPC sağlıklı kontrollerden içine iv enjekte damar rotası (Şekil 5E) yoluyla MSS girmek için başarısız. Iv NPC enjeksiyonundan sonra, enjeksiyon NPC&#39;nin önemli sayıda erken DPT 10 (Şekil 5F) gibi, karaciğer, bağırsak, dalak, akciğer, böbrek, ancak kalp olmayan CNS organlar seviyesinde bulunurlar. MSS dışı biriken NPC tamamen thes üzerinden temizlenir<html> 30 dpt (Şekil 5G) e periferik organlar. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51154/51154fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51154/51154fig1.jpg" /> Şekil 1.. Yetişkin farelerin SVZ&#39;unda gelen NPC İzolasyon ve stabil genişletilebilir NPC hatları nesil. A, şematik stabil genişletilebilir bir nesil ana kritik adımların gösterimi, ve enjekte fare NPC hazırlanması. B, in vitro Neurospheres. C neurospheres her 4-5 gün geçişli olarak, NPC kültürlenmiştir. Canlı ve ölü hücreleri sayıları toplanarak kümülatif hücre sayıları bir büyüme eğrisini oluşturmak için çizilmiştir. B ölçek çubuğu 200 mikron. C ± SD veri hücre ortalama toplam sayısı (n = 3). Güre 2 &quot;fo: İçerik-width =&quot;: / files/ftp_upload/51154/51154fig2highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/51154/51154fig2.jpg &quot;/&gt;&quot; src = fo &quot;5in Şekil 2.. NPC karakterizasyonu. A, farklılaşma koşullarında 6 DIV sonra, NPC astrogliyal (GAFP doğru multipotent vardır, çoğalan fare neurospheres PHH3 çekirdek histon proteini (yeşil) ifade ve tip VI orta lif, protein Nestin (kırmızı). BE C kırmızı), nöronal (MAP-2, D yeşil) ve oligodendroglial (O4, E yeşile) ve MBP, E kırmızı soy. Niceleme GFAP-, MAP-2-ve 6 DIV da O4-ifade eden hücreler, in vitro NPC farklılaşma B&#39;de gösterilmektedir sonra. B veriler ± SD olarak ortalama% (n = 3). CE Ölçek çubukları leukocy düzenleyen temel hücre yüzey adezyon moleküllerinin ekspresyonunun sitometri analizi 50 um. F, Flowte ekstravazasyon fare neurospheres içinde. Şekil 2F Pluchino ark çoğaltılamaz. 2 <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51154/51154fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51154/51154fig3.jpg" /> Lentivirüsler muhabir genler (örneğin, GFP. A ve B, bir 3. nesil lenti-GFP vektör ile transdük oylandı neurospheres (A) ve ayırt NPC (B) Faz kontrastlı görüntüler. Flow sitometri analizi ifade ile NPC Şekil 3. İletimi A. C NPC, Yabani tip (transdüksiyonlu değil) ve neurospheres her 4-5 gün pasajlanır gibi lenti-GFP transdük NPC yetiştirilir., canlı ve ölü hücre sayıları toplanır ve kümülatif hücre sayıları bir büyüme eğrisini oluşturmak için çizilen. ölçek çubuğuA ve B 200 mikron. C ± SD veri hücre ortalama toplam sayısı (n = 3). <img alt="Şekil 4," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51154/51154fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51154/51154fig4.jpg" /> Şekil 4. Kronik EAE fonksiyonel karakterizasyonu. Üzerinden toplam MOG-ve CFA-bağışıklı C57BI / 6 farelerde izleme A, Günlük kilo 40 dpi takip. B, üzerinden toplam MOG-ve CFA-bağışıklı C57BI / 6 farelerde günlük EAE puanı izleme 40 dpi takip . Veri ± SD olarak ortalama sayı (n = 10 fare / grup) ifade edilmiştir. <img alt="Şekil 5," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51154/51154fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51154/51154fig5.jpg" /> Şekil 5. Sistemik NPC Migr enjekteEAE farelerin parankimi yedi. AE, vibratome-kesim (70 um), beyin (A) ve omurilik (B) X-gal lekeleme EAE farelerden alınan doku kesitleri nakledilen β-gal + hücreleri, gösterilen sinjeneik NPC ile iv enjekte edilmiş ( perivasküler CNS alanlarda kalıcı klinik sonuna kadar perivasküler CNS alanlarında süregelen mavi hücreler) (106 dpi) takip. C, β-gal + iv. enjekte NPC (mavi), bir Nestin + (kahverengi) fenotip korumak. D , Kaç göç NPC sürece perivasküler alanın dışına taşımak gibi neun + (kahverengi) ifade. E, bir plasebo uygulanan EAE fare temsili bir omurilik bölümünde X-gal boyama. .. Ölçek çubukları, 20 um FG, merkezi sinir sistemi dışındaki dokularda analizi ic göstermektedir - iv. Enjekte NPC (mavi hücreleri) hemen hemen tüm organ ulaşmak ya da (. Örneğin, akciğer, karaciğer, dalak, kalp, bağırsak, böbrek) zekâhin 10 DPT (F), ancak 30 dpt (G) ile aynı organlardan silinir. Şekiller 5F-G Pluchino ark çoğaltılamaz ise 5A-E, kaynak 5 çoğaltılamaz Rakamlar. 2 <img alt="Şekil 6," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51154/51154fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51154/51154fig6.jpg" /> .. EAE ile farelerde NPC sistemik enjeksiyonu EAE ana kritik adımlarla farelerde NPC sistemik enjeksiyon için protokol Şekil 6 şematik olarak gösterilmesi: enjekte edilebilir CAM hazırlanması tek bir hücre ifade eden ikinci NPC ayrışmış hücre kültür odası (A) , hedef olan enjekte NPC in vivo tespiti amacıyla efektör / istila hastalığı faz (B) zirvesinde EAE farelerin kuyruk damarı içine enjeksiyonCNS (C), enjekte NPC (D) terapötik plastisite mekanizmalarının çalışmasını sağlayan in vivo doku patolojik çalışmalar. D&#39;de yeşil hücreler oligodendrosit, koyu mavi hücreler aksonlar olan, açık mavi hücreler NPC transplante edilir, turuncu hücrelerin astrosit olduğu, ve kırmızı hücreler endotelyal hücrelerdir. <table><tbody><tr><td> Skor </td><td> Lokomotor Tepkiler </td></tr><tr><td> 0 </td><td> Normal fare. Hastalığın belirtileri herhangi bir açık </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Gevşek kuyruk: kuyruk tam gevşeklik ve bir fare alınır kuyruk ucunda kıvırma yokluğu </td></tr><tr><td> 1.5 </td><td> Arka bacak zayıflığı: Bir waddling yürüyüşünde yürürken fare sıra ve kısa süreli devinimleri gösterir </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Limp kuyruk ve arka bacak zayıflığı: sırtında yerleştirildiğinde, fare normal konumuna açamıyorum </td></tr><tr> &lt;td&gt; 2.5 </td><td> Kısmi arka bacak felci: fare artık kıç duruş korumak veya yürümek için arka bacaklarda kullanabilirsiniz, ancak yine de bir ölçüde bir veya her iki arka ayakların hareket edebilir, ön ayakları bundan etkilenmez </td></tr><tr><td> 3 </td><td> Komple arka bacak paralizi: arka ayaklarında hareket toplam kaybı. Farenizin yalnızca etkilenmeden kalması yönündeki ön ayakları, kendini sürükler. Bu aşamada fareler kafes katında, uzun sipper tüpler ve su kaybını önlemek için nemlendirici çözümlerin günlük deri altı enjeksiyon gıda verilir. Fareler yaralar ya da tedavi ile iyileşeceğine yok deri lezyonları ortaya çıkarsa, onlar telef olacak </td></tr><tr><td> 3.5 </td><td> Ön ayakları zayıflığı: dikey ızgara üzerinde yer, fare tırmanmak mümkün değil ve yavaş yavaş düşüyor </td></tr><tr><td> 4 </td><td> Can çekişen devlet </td></tr><tr><td> 5 </td><td> Fare insancıl uç noktaları göre ölü bulundu veya itlaf </td></tr></tbody></table> TaTablo 1. klinik belirti ve EAE farelerde artan felç Beş sahne ölçek.

Watch this Scientific Journal Video about Systemic Injection of Neural Stem/Progenitor Cells in Mice with Chronic EAE at JoVE.com

Systemic Injection of Neural Stem/Progenitor Cells in Mice with Chronic EAE

Nöral kök / progenitör hücreler (NPC) nakli rejeneratif nöroloji büyük vaatlerde tutar. NPC sistemik teslimi, beyin ve merkezi sinir sistemi hasarı deney kronik enflamatuar etkilenen kemirgen ve insan olmayan primatların omurilikteki kök hücrelerini sunmak için etkili invazif düşük, ve terapötik açıdan etkili, çok protokol dönüşmüştür.

Kronik EAE ile Fare nöral kök / progenitör hücrelerinin sistemik enjeksiyonundan

Neural stem/precursor cells (NPCs) are a promising stem cell source for transplantation approaches aiming at brain repair or restoration in regenerative ...

systemic-injection-neural-stemprogenitor-cells-mice-with-chronic

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

17.6K Görüntüleme.  University of Cambridge, UK.  Nöral kök / progenitör hücreler (NPC) nakli rejeneratif nöroloji büyük vaatlerde tutar. NPC sistemik teslimi, beyin ve merkezi sinir sistemi hasarı deney kronik enflamatuar etkilenen kemirgen ve insan olmayan primatların omurilikteki kök hücrelerini sunmak için etkili invazif düşük, ve terapötik açıdan etkili, çok protokol dönüşmüştür. 

Video: Systemic Injection of Neural Stem/Progenitor Cells in Mice with Chronic EAE

Identifying DNA Mutations in Purified Hematopoietic Stem/Progenitor Cells

In recent years, it has become apparent that genomic instability is tightly related to many developmental disorders, cancers, and aging. Given that stem cells are responsible for ensuring tissue homeostasis and repair throughout life, it is reasonable to hypothesize that the stem cell population is critical for preserving genomic integrity of tissues. Therefore, significant interest has arisen in assessing the impact of endogenous and environmental factors on genomic integrity in stem cells and their progeny, aiming to understand the etiology of stem-cell based diseases.
LacI transgenic mice carry a recoverable &#955;&#160;phage vector encoding the LacI reporter system, in which the LacI gene serves as the mutation reporter. The result of a mutated LacI gene is the production of &#946;-galactosidase that cleaves a chromogenic substrate, turning it blue. The LacI reporter system is carried in all cells, including stem/progenitor cells and can easily be recovered and used to subsequently infect E. coli. After incubating infected E. coli on agarose that contains the correct substrate, plaques can be scored; blue plaques indicate a mutant LacI gene, while clear plaques harbor wild-type. The frequency of blue (among clear) plaques indicates the mutant frequency in the original cell population the DNA was extracted from. Sequencing the mutant LacI gene will show the location of the mutations in the gene and the type of mutation.
The LacI transgenic mouse model is well-established as an in vivo mutagenesis assay. Moreover, the mice and the reagents for the assay are commercially available. Here we describe in detail how this model can be adapted to measure the frequency of spontaneously occurring DNA mutants in stem cell-enriched Lin-IL7R-Sca-1+cKit++(LSK) cells and other subpopulations of the hematopoietic system.

Here we describe an in vivo mutagenesis assay for small numbers of purified hematopoietic cells using the LacI transgenic mouse model.&#160;The LacI gene can be isolated to determine the frequency, location, and type of DNA mutants&#160;spontaneously arisen or after exposure to genotoxins.

Saf Hematopoetik kök / progenitör hücrelerin DNA mutasyonları belirlenmesi

In recent years, it has become apparent that genomic instability is tightly related to many developmental disorders, cancers, and aging. Given that stem ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model itself. Early phases of inflammation and infection have been widely studied by using the Pseudomonas aeruginosa agar-beads mouse model, while only few reports have focused on the long-term chronic infection in vivo. The main challenge for long term chronic infection remains the low bacterial burden by P. aeruginosa and the low percentage of infected mice weeks after challenge, indicating that bacterial cells are progressively cleared by the host.
This paper presents a method for obtaining efficient long-term chronic infection in mice. This method is based on the embedding of the P. aeruginosa clinical strains in the agar-beads in vitro, followed by intratracheal instillation in C57Bl/6NCrl mice. Bilateral lung infection is associated with several measurable read-outs including weight loss, mortality, chronic infection, and inflammatory response. The P. aeruginosa RP73 clinical strain was preferred over the PAO1 reference laboratory strain since it resulted in a comparatively lower mortality, more severe lesions, and higher chronic infection. P. aeruginosa colonization may persist in the lung for over three months. Murine lung pathology resembles that of CF patients with advanced chronic pulmonary disease.
This murine model most closely mimics the course of the human disease and can be used both for studies on the pathogenesis and for the evaluation of novel therapies.

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

We describe the agar-beads method to establish persistent long-term chronic Pseudomonas aeruginosa airway infection in the mouse model.

Uzun Vadeli Kronik<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</emFarelerde&gt; Havayolu Enfeksiyon

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While the exact etiology of the disease is yet unclear, autoreactive T lymphocytes are thought to play a central role in its pathophysiology. MS therapy is only partially effective so far and research efforts continue to expand our knowledge on the pathophysiology of the disease and to develop novel treatment strategies. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model for MS sharing many clinical and pathophysiological features. There is a broad diversity of EAE models which reflect different clinical, immunological and histological aspects of human MS. Actively-induced EAE in mice is the easiest inducible model with robust and replicable results. It is especially suited for investigating the effects of drugs or of particular genes by using transgenic mice challenged by autoimmune neuroinflammation. Therefore, mice are immunized with CNS homogenates or peptides of myelin proteins. Due to the low immunogenic potential of these peptides, strong adjuvants are used. EAE susceptibility and phenotype depends on the chosen antigen and rodent strain. C57BL/6 mice are the commonly used strain for transgenic mouse construction and respond among others to myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG). The immunogenic epitope MOG35-55 is suspended in complete Freund's adjuvant (CFA) prior to immunization and pertussis toxin is applied on the day of immunization and two days later. Mice develop a "classic" self-limited monophasic EAE with ascending flaccid paralysis within 9-14 days after immunization. Mice are evaluated daily using a clinical scoring system for 25-50 days. Special considerations for care taking of animals with EAE as well as potential applications and limitations of this model are discussed.

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an established animal model of multiple sclerosis. C57BL/6 mice are immunized with myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) peptide 35-55 (MOG35-55), resulting in an ascending flaccid paralysis caused by autoreactive immune cells in the central nervous system. Protocols for disease induction and monitoring will be discussed.

Miyelin Oligodendrosit Glikoprotein (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) C57BL / 6 Farelerde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit (EAE) Bağlı

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including neoplastic, autoimmune, and chronic inflammatory diseases. Emerging evidence implicates pathogen-induced chronic inflammation in the development and progression of chronic diseases with a wide variety of clinical manifestations. Due to the complex and multifactorial etiology of chronic disease, designing experiments for proof of causality and the establishment of mechanistic links is nearly impossible in humans. An advantage of using animal models is that both genetic and environmental factors that may influence the course of a particular disease can be controlled. Thus, designing relevant animal models of infection represents a key step in identifying host and pathogen specific mechanisms that contribute to chronic inflammation.
Here we describe a mouse model of pathogen-induced chronic inflammation at local and systemic sites following infection with the oral pathogen Porphyromonas gingivalis, a bacterium closely associated with human periodontal disease. Oral infection of specific-pathogen free mice induces a local inflammatory response resulting in destruction of tooth supporting alveolar bone, a hallmark of periodontal disease. In an established mouse model of atherosclerosis, infection with P. gingivalis accelerates inflammatory plaque deposition within the aortic sinus and innominate artery, accompanied by activation of the vascular endothelium, an increased immune cell infiltrate, and elevated expression of inflammatory mediators within lesions. We detail methodologies for the assessment of inflammation at local and systemic sites. The use of transgenic mice and defined bacterial mutants makes this model particularly suitable for identifying both host and microbial factors involved in the initiation, progression, and outcome of disease. Additionally, the model can be used to screen for novel therapeutic strategies, including vaccination and pharmacological intervention.

Animal models have proven to be invaluable tools in defining host and pathogen specific mechanisms that contribute to the development of chronic inflammation. Here we describe a mouse model of oral infection with the human pathogen Porphyromonas gingivalis and detail methodologies to assess the progression of inflammation at local and systemic sites.

Lokal ve sistemik Yer de patojen kaynaklı kronik enflamasyon Fare Modeli

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Phenotypic and Functional Analysis of Activated Regulatory T Cells Isolated from Chronic Lymphocytic Choriomeningitis Virus-infected Mice

Regulatory T (Treg) cells, which express Foxp3 as a transcription factor, are subsets of CD4+ T cells. Treg cells play crucial roles in immune tolerance and homeostasis maintenance by regulating the immune response. The primary role of Treg cells is to suppress the proliferation of effector T (Teff) cells and the production of cytokines such as IFN-&#947;, TNF-&#945;, and IL-2. It has been demonstrated that Treg cells&#39; ability to inhibit the function of Teff cells is enhanced during persistent pathogen infection and cancer development. To clarify the function of Treg cells under resting or inflamed conditions, a variety of in vitro suppression assays using mouse or human Treg cells have been devised. The main aim of this study is to develop a method to compare the differences in phenotype and suppressive function between resting and activated Treg cells. To isolate activated Treg cells, mice were infected with lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV) clone 13 (CL13), a chronic strain of LCMV. Treg cells isolated from the spleen of LCMV CL13-infected mice exhibited both the activated phenotype and enhanced suppressive activity compared with resting Treg cells isolated from na&#239;ve mice. Here, we describe the basic protocol for ex vivo phenotype analysis to distinguish activated Treg cells from resting Treg cells. Furthermore, we describe a protocol for the measurement of the suppressive activity of fully activated Treg cells.

Here, we describe a protocol to analyze the phenotype of regulatory T (Treg) cells isolated from na&#239;ve and chronic lymphocytic choriomeningitis virus-infected mice. In addition, we provide a process to evaluate the suppressive activity of the Treg cells.

Fenotipik ve Kronik Lenfositik koryomenenjit Virüs ile enfekte Fare İzole Aktif Düzenleyici T hücrelerinin Fonksiyonel Analiz

Regulatory T (Treg) cells, which express Foxp3 as a transcription factor, are subsets of CD4+ T cells. Treg cells play crucial roles in immune tolerance ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte extravasation might result in pathophysiological changes in the CNS. Thus, investigation of lymphocyte migration into the CNS is important to understand inflammatory CNS diseases and to develop new therapy approaches. Here we present an in vitro model of the human blood-brain barrier to study lymphocyte extravasation. Human brain microvascular endothelial cells (HBMEC) are confluently grown on a porous polyethylene terephthalate transwell insert to mimic the endothelium of the blood-brain barrier. Barrier function is validated by zonula occludens immunohistochemistry, transendothelial electrical resistance (TEER) measurements as well as analysis of evans blue permeation. This model allows investigation of the diapedesis of rare lymphocyte subsets such as CD56brightCD16dim/- NK cells. Furthermore, the effects of other cells, cytokines and chemokines, disease-related alterations, and distinct treatment regimens on the migratory capacity of lymphocytes can be studied. Finally, the impact of inflammatory stimuli as well as different treatment regimens on the endothelial barrier can be analyzed.

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Here, we describe a human blood-brain barrier model enabling to investigate lymphocyte transmigration into the central nervous system in vitro.

Bir kullanma Lenfosit Ekstravazasyonunun analizi<em&gt; İn Vitro</em&gt; İnsan Kan-beyin bariyeri Model

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

A Chronic Autoimmune Dry Eye Rat Model with Increase in Effector Memory T Cells in Eyeball Tissue

Dry eye disease is a very common condition that causes morbidity and healthcare burden and decreases the quality of life. There is a need for a suitable dry eye animal model to test novel therapeutics to treat autoimmune dry eye conditions. This protocol describes a chronic autoimmune dry eye rat model. Lewis rats were immunized with an emulsion containing lacrimal gland extract, ovalbumin, and complete Freund&#39;s adjuvant. A second immunization with the same antigens in incomplete Freund&#39;s adjuvant was administered two weeks later. These immunizations were administered subcutaneously at the base of the tail. To boost the immune response at the ocular surface and lacrimal glands, lacrimal gland extract and ovalbumin were injected into the forniceal subconjunctiva and lacrimal glands 6 weeks after the first immunization. The rats developed dry eye features, including reduced tear production, decreased tear stability, and increased corneal damage. Immune profiling by flow cytometry showed a preponderance of CD3+ effector memory T cells in the eyeball.

This report describes a method to induce chronic experimental autoimmune dry eye in Lewis rats through immunization with an emulsion of rat lacrimal gland extract, ovalbumin, and complete Freund's adjuvant, followed by the injection of lacrimal gland extract and ovalbumin into the forniceal subconjunctiva and lacrimal glands six weeks later.

Eyeball Dokusunda Efektif Hafıza T Hücrelerini Artıran Kronik Otoimmün Kuru Göz Fare Modeli

Dry eye disease is a very common condition that causes morbidity and healthcare burden and decreases the quality of life. There is a need for a suitable ...

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by fluorescence or bioluminescence. We utilize BlaC, an enzyme expressed constitutively by all M. tuberculosis strains. REF allows rapid quantification of bacteria in lungs of infected mice. The same group of mice can be imaged at many time points, greatly reducing costs, enumerating bacteria more quickly, allowing novel observations in host-pathogen interactions, and increasing statistical power, since more animals per group are readily maintained. REF is extremely sensitive due to the catalytic nature of the BlaC enzymatic reporter and specific due to the custom flourescence resonance energy transfer (FRET) or fluorogenic substrates used. REF does not require recombinant strains, ensuring normal host-pathogen interactions. We describe the imaging of M. tuberculosis infection using a FRET substrate with maximal emission at 800 nm. The wavelength of the substrate allows sensitive deep tissue imaging in mammals. We will outline aerosol infection of mice with M. tuberculosis, anesthesia of mice, administration of the REF substrate, and optical imaging. This method has been successfully applied to evaluating host-pathogen interactions and efficacy of antibiotics targeting M. tuberculosis.

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

We describe the optical imaging of mice infected with Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) using reporter enzyme fluorescence (REF). This protocol facilitates the sensitive and specific detection of M. tuberculosis in pre-clinical animal models for pathogenesis, therapeutics and vaccine research.

Mycobacterium tüberküloz ile muhabir enzim Floresans farelerde görüntüleme

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by ...

Application of Consistent Massage-Like Perturbations on Mouse Calves and Monitoring the Resulting Intramuscular Pressure Changes

Massage is generally recognized to be beneficial for relieving pain and inflammation. Although previous studies have reported anti-inflammatory effects of massage on skeletal muscles, the molecular mechanisms behind are poorly understood. We have recently developed a simple device to apply local cyclical compression (LCC), which can generate intramuscular pressure waves with varying amplitudes. Using this device, we have demonstrated that LCC modulates inflammatory responses of macrophages in situ and alleviates immobilization-induced muscle atrophy. Here, we describe protocols for the optimization and application of LCC as a massage-like intervention against immobilization-induced inflammation and atrophy of skeletal muscles of mouse hindlimbs. The protocol that we have developed can be useful for investigating the mechanism underlying beneficial effects of physical exercise and massage. Our experimental system provides a prototype of the analytical approach to elucidate the mechanical regulation of muscle homeostasis, although further development needs to be made for more comprehensive studies.

Here we describe the protocols for applying defined mechanical loads to mouse calves and for monitoring the concomitant intramuscular pressure changes. The experimental systems that we have developed can be useful for investigating the mechanism behind the beneficial effects of physical exercise and massage.

Fare Buzağılarına Tutarlı Masaj Benzeri Pertürbasyonların Uygulanması ve Bunun Sonucu Kas içi Basınç Değişikliklerinin İzlenmesi

Massage is generally recognized to be beneficial for relieving pain and inflammation. Although previous studies have reported anti-inflammatory effects of ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T (iNKT) cells. Patients with active RA present fewer iNKT cells, defective cell function, and excessive polarization of Th1. In this study, an RA animal model was established using a mixture of hGPI325-339 and hGPI469-483 peptides. The iNKT cells were obtained by in vivo induction and in vitro purification, followed by infusion into RA mice for adoptive immunotherapy. The in vivo imaging system (IVIS) tracking revealed that iNKT cells were mainly distributed in the spleen and liver. On day 12 after cell therapy, the disease progression slowed down significantly, the clinical symptoms were alleviated, the abundance of iNKT cells in the thymus increased, the proportion of iNKT1 in the thymus decreased, and the levels of TNF-&#945;, IFN-&#947;, and IL-6 in the serum decreased. Adoptive immunotherapy of iNKT cells restored the balance of immune cells and corrected the excessive inflammation of the body.

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

This protocol uses G6PI mixed peptides to construct rheumatoid arthritis models that are closer to that of human rheumatoid arthritis in CD4+ T cells and cytokines. High purity invariant natural killer T cells (mainly iNKT2) with specific phenotypes and functions were obtained by in vivo induction and in vitro purification for adoptive immunotherapy.

Glukoz-6-Fosfat İzomazlarında (G6PI)-Indüklenen RA Farelerde iNKT Hücrelerinin Benimseyici İmmünoterapisi

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...