Bu çalışma Programı Cure Sands Aile Vakfı ve Discovery tarafından, NIH hibe RO1CA118678 ve RO1CA127913 tarafından desteklenmiştir.

Yale Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi açıklanan tüm in vivo çalışmalarını onaylamak. Numune toplama hasta rızası ile gerçekleştirilmiştir ve Yale Üniversitesi Tıp Fakültesi İnsan Araştırmaları Komitesi tarafından onaylandı. İnsan Yumurtalık Kanseri Hücrelerinin hazırlanması 1. <ol><li> Hazırlanması önce hücreler, aşağıda tarif edilen rahim içi enjeksiyon için gerekli tüm malzeme hazır ve erişimi kolay olduğundan emin olun. Hazır olduğunda en kısa sürede hücre süspansiyonu enjekte edilir. <ol><li> Kültürde-floresan etiketli kanser hücreleri büyümek. Biz daha önce böyle tümörgenezine, kemoterapi ve tümör onarım 14-19 yüksek kapasite olarak stemness özelliklerini barındırması gösterilen insan CD44 + / MyD88 + over kanseri hücrelerinin, bir F2 nesil kullanın. Bu hücreler, kararlı bir şekilde MCherry floresan ifade etmek için üretilmiştir (F2-MCherry, Şek. 1) lentivirüs polietilenimin elde kullanılarak(PEI) protokolü 20,21. </li><li> Enjeksiyon gününde, tripsinizasyon ile hücrelerin hasat ve fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile bir kez yıkanır. </li><li> Hücre sayısını belirlemek ve 3 x 10 6 hücre / uygun büyüme ortamı 50 ul hücreleri askıya. Yumurtalık kanseri hücreleri için bize% 10 FBS ile RPMI 160 kullanımı. Enjekte hazır olana kadar inkübatör hücreleri tutun ama uzun 15 dakika tutmuyorum. Bu, bir fare enjeksiyon için yeterlidir. </li></ol></li></ol> Atimik çıplak farelerde insan yumurtalık kanser hücrelerinin 2. intra-uterin Enjeksiyon Aşağıdaki yordam, ikinci bir kişiden yardım gerektirdiğini unutmayın. Bu hayatta kalma ameliyat olduğundan Ayrıca, steril cerrahi aletler kullanmayın. Bu hayatta kalma cerrahi işlemdir yaklaşık 10 ila 15 dakika sürer. <ol><li> % 2 izofluran kullanılarak fare anestezisi. 7- ila 8 haftalık atimik çıplak farelere genellikle kullanılır. </li><li> Hayvan Komplet olduğundan emin olunely parmaklarını veya forseps kullanarak ayak pedi kısma anesteziye. Hayvan ameliyatı başlamadan önce ağrı tamamen non-duyarlı olmalıdır. </li><li> Uzakta araştırmacıdan kafa ile steril bir gazlı bez anestezi fare ventral yüzü yukarı yerleştirin. </li><li> Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için bir pamuk uçlu aplikatör ile gözlerinize merhem sürün. </li><li> Hemen izofluran buharlaştırıcı (Şek. 2A) bağlı bir burun konisi sisteminde sokulur. Bu, cerrahi prosedür boyunca anestezi sağlar. </li><li> Sonra cerrahi sitesi üzerinden steril cerrahi örtü koyun sol dezenfekte (veya sağ) iyot ardından karın kullanarak alkol pedleri (Şekil. 2B) yan. </li><li> Kullanımı steril cerrahi makas ve forseps fare (Res. 2C) sol alt kadranda 1-2 cm&#39;lik cilt kesi yapmak. </li><li> Kas kaldırın ve periton ulaşmak için bir kesi yapmak. </li> &lt;li&gt; karın boşluğuna maruz eğik kas ayır. </li><li> Bulun ve sol uterin boynuz (Şekil. 2B) tanımlamak. </li><li> Steril hemostatın kullanarak, boynuz (Şekil. 2E) her iki anterior ve posterior taraftan kelepçe. Sağ fallop tüpünün altında ön kelepçesini ve sağ serviks yukarıda arka kelepçe yerleştirin. </li><li> İkinci kişi, hücre süspansiyonu enjekte var. Boynuz (Şekil. 2F) dik 45 ° açıyla hücreleri içeren iğne, yerleştirin. Çok yavaş uterin boynuzu lümenine hücre süspansiyonu 50 ul enjekte edilir. </li><li> İğneyi çıkarın ve ön kelepçesini. </li><li> Posterior kelepçesini karın boşluğunda uterus boynuzu değiştirin. </li><li> Bir sentetik emilebilir sütür kullanılarak periton kapatın ve bir doku yapıştırıcı kullanılarak cilt kapatın. </li><li> Burun konisi gelen fareyi çıkarın ve kafesine geri koyun. Eğer gerekli ise, bir temizleme sağlamak için yatak takımları değiştirmekAmeliyattan sonra n kafes. Tüm hayvanlar bırakıp gitmeden önce uyanık ve aktif olduğundan emin olun. </li><li> İlk 48 saat sonra ameliyat için içme suyu ve 0.11 mg / ml&#39;de İbuprofen sağlar. Daha sonra, düzenli içme suyu ile değiştirin. <ol><li> Not: atimik çıplak fareler kullanılır ve deri, dikiş yerine doku yapışkan kullanarak kapalı ise, ameliyattan sonra fareler ayırmak gerekli değildir. SCID fareleri, daha agresif ve ayrılabilir gerekebilir. </li></ol></li><li> Yakından bağlı açık yara olası enfeksiyon için kesi sitesini izlemek. </li></ol> Canlı İn Vivo Görüntüleme Erken Evre İçi periton Yumurtalık Kanseri 3. Algılama In vivo görüntüleme canlı intra-peritoneal IP hastalık varlığını belirlemek. Bir Modlu Hayvan Rotasyon Sistemi (MARS) Bu protokolde kullanılır. <ol><li> MI yazılım içinde MARS yakalama yazılımına erişmek. Bu modül sağlargörüntüleme sisteminin yakalama ve analiz yetenekleri yararlanarak iken MARS koordineli denetim ayarlarını yakalamak. Adım 3.4 rotasyon protokolü geliştirmek için önce bir tek bakış görüntüleme kullanarak her yöntemi için ayrı çekim ayarlarını optimize eder. </li><li> Giriş yakalama değerleri önceden belirlenmiş. 550 nm, em: 600 nm filtre yakalama ayar floresan yakalamak için, 10 sn pozlama, 2 x 2 binning kullanın, 2.8, FOV 120 mm, eski f-stop. X-ışını çekimi için, bir 10 sn pozlama kullanmak, 2 x 2 binning, 2.8, FOV 120 mm, 35 kVp, 0.4 mm Al filtre yakalama ayarını f-stop. </li><li> Tek oturum dosyaları olarak adım 3.2 parametreleri kaydedin. </li><li> Sistemi arabirimi edinmekte penceresinden Oluştur / Düzenle Protokoller düğmesini seçerek bir rotasyon sıra protokol oluşturmak. </li><li> Önceden kaydedilmiş bir floresan oturumu dosyayı seçin ve Adım Bir olarak kaydedin. Sonra, gelen X-ışını oturum dosyasını seçin ve Adım iki olarak kaydedin. </li><li> Adım Bir seçeneği seçildiğinde, Set Rotasyon kullanınÖnce Görüntü Yakalama açılır menüden Serisi özelliklerin sorunsuz görünüm için sağlamak için istenen başlangıç ​​açısı, aralık ve artışını ayarlamak için. Özgül değerler -180 derecelik bir başlangıç ​​açısı 375 derece aralığında ve 15 derece kadar bir artış bulunmaktadır. </li><li> Protokolü kaydedin ve MARS başlatmak ve açı artışlarla her birine karşılık gelen step motor pozisyonları eşleştirmek için Bitti düğmesini tıklatın. </li><li> Yazılım protokolü tarafından kullanılmak üzere dönüş belirli bir derece ile hayvan desteği yerleştirilmiş, belirli bir hayvan için ventral, dorsal ve lateral incelemeler hizalamak için aşağıda tarif edildiği gibi nihai bir kalibrasyon yapın. </li><li> 2 L / dakikalık bir akış hızında tıbbi hava ve% 2 izofluran ile bir karışımını kullanarak fare anestezisi. </li><li> Rotator sekmesini getirmek için Edinme menüsü içinden Önizleme düğmesini seçerek uyum başlayın. Multiwavelength ya da X-ra yerine yansıtıcı ışık modalitesini kullanıny modaliteleri süreci hızlandırmak için. </li><li> Yük Fare seçeneğini seçin ve konumlandırma menülerin dizi devam edin. </li><li> Katlanabilir roket ucu konisi ve tubed sonu roket ucu konisi tatilde emin olun ve roket ucu konisi onun kafası eğilimli yönde fareyi yerleştirin. </li><li> Aşağı bakacak şekilde hayvanın ventral tarafı ile 0 derece pozisyonunda kalibrasyon başlayın. Önizleme penceresinde merkezli görünür, böylece hayvan konumlandırmak için rotasyon sistemi üzerinde iki düğmeyi kullanın. </li><li> 90, 90, ve 180 derece pozisyonları ve Bitti düğmesini tıklatın - -180 için istendiğinde, bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Ana edinmekte penceresinden Protokol düğmesini Yürüt tıklayarak önceden kaydedilmiş protokolünü yürütün. Protokolün yürütülmesi sırasında, Güncel Yakalama, Pozlama Süresi ve genel Protokol adım için gerçek zamanlı durum güncellemelerini sağlayan bir durum penceresi gözlemlemek. </li><li> Kullanarak bir film formatında içine tek tek görüntüleri birleştirinRotasyon yazılım. Parlaklık / kontrast, şeffaflığı ayarlamak için, ve floresan sinyali için ekran rengini ayarlamak için Ekran Kontrolleri kullanın. </li><li> Sunum için * .AVI dosyası formatındaki resimlerin nihai diziyi aktarmak. </li></ol> 1. ve 2 nci Yuvarlak Kemoterapi 4. İdaresi <ol><li> MARS tarafından ip tümör tespiti takiben, standart iki boyutlu konumlandırma kullanarak faiz (ROI) ilk tümör yükü bölgeyi belirler. Bu ilk YG belirlendikten sonra, 12 mg / kg paklitaksel ip 4 doz her üç günde bir uygulanması, Bölüm 5&#39;te aşağıda tarif edildiği gibi görüntüleme sistemi içinde yerleştirilmiş bir saydam bir hayvan tepsi üzerinde gerçekleştirilir. Paklitaksel vasıta olarak Cremaphor ile hazır-go formülasyonda Hospira Inc.&#39;den elde edilir. Daha önce, bu tedavi rejimi, araç kontrolü ile karşılaştırıldığında ksenograft modeli karşı kayda değer bir anti-tümör aktivitesine sahip olduğu gösterilmiştir ve tespit t tamamen ortadan kaldırılması indüklerumor yükü 20. Tedavi 20 sona erdikten sonra Fakat, hastalığın doğasına, ip Tümörlerin birkaç gün tekrarlar. </li><li> Standart iki boyutlu konumlandırma kullanarak her 3 günde bir görüntüleme ile tedaviye yanıtın izlenmesi. </li><li> Paklitaksel dördüncü dozdan sonra, (başlangıç ​​ROI% 50 kadar bir artış tam yanıt (İB az 2000), kısmi yanıt (adım 4.1, stabil hastalık elde edilen ilk ROI% 35&#39;e kadar azalma sahip olarak farelerin sınıflandırmak ) veya gözlenen floresan sinyali esasına dayanan bir tedavi (temel YG fazla% 50 artış) ile ilerlemesi. </li><li> Tam yanıt fareler için, her 3 günde bir görüntüleme ile nüks izlemek. Nüks (Adım 4.1 ROI başlangıç ​​ROI =) gözlenir sonra 4.1&#39;de açıklandığı gibi Paklitaksele ikinci turda yeniden başlatmak. </li><li> Kısmi hastalığı, stabil hastalık veya tedavi ile ilerleme olanlar ile farelerde, 3 gün 4. dozdan sonra Paklitaksele ikinci turda yeniden başlatmakPaklitaksele. Benzer şekilde, görüntü bu üç günde. </li></ol> Standart İki boyutlu Konumlandırma Kullanılması Tedavi 5. İzleme Tepki <ol><li> Fareler anestezi 2 L / dakikalık bir akış hızında tıbbi hava ve% 2 izofluran ile bir karışım kullanılarak, görüntülenecek. </li><li> Görüntüleme odasının (Res. 3) içinde şeffaf hayvan tepsiye tek tek nosecones yılında anestezi farelerin başını yerleştirin. </li><li> Giriş floresan için önceden belirlenmiş maruz kalma parametreleri (10 sn pozlama, 2 x 2 binning, FOV 120 mm, eski 2.8 f-stop:, em 550 nm: 600 nm), 2 x 2 binning ve X-ray (20 sn pozlama, 2.8, FOV 120 mm, 35 kVp, 0.4 mm Al filtresi) f-stop. </li><li> Dizisi hem görüntü yakalamak için Açığa tıklayın. </li><li> Görsel denetim ve faiz analiz bölge için Bruker MI yazılımında görüntüleri açın. </li></ol> 6. Görüntü Bindirme ve Analizi Bo için geçerli bir karşılaştırma sağlamakTüm plan ve arka plan görüntüleri benzer süre ders görüntü dizisi sürecinin inci görsel ve kantitatif analizi. <ol><li> Yazılım ön planda görüntü (yani floresan) ve arka plan görüntüleme hem açın ve üst (Res. 4A) de Pencere menüsünden kiremit işlevi seçin. </li><li> Ön görüntüyü işlemek için; üst bar (Res. 4A, kırmızı ok) Görüntü Ekranı sekmesini açın ve sırasıyla 260 ve 5,000 için min / max değerlerini ayarlamak (Res. 4A, mavi ok) Not: Resim Görüntüleme aralık görüntüleri yakalanan floresan sinyal yoğunluğu bağlı olarak çalışmadan çalışmaya farklıdır. Görüntüler tümör kitleleri göstermek, henüz hayvanın otofloresansı arkaplan göstermeyecektir bir min / max ile tezat olmalıdır. </li><li> Soldaki Navigasyon Paneli (Res. 4B, kırmızı ok) Sonraki açık Auto-ROI Tab ve menüden Yeni ROI Set seçin (Şekil. 4C, kırmızı birrrow). 630 gri tonlama düzeyde Eşik algoritmasını kullanmak için ayarları yapın ve en kaydedilir tüm potansiyel ROI (Res. 4C) sağlamak için boyutu Max kısıtlayın kaldırın. Not: Eşik ayarları görüntülerde yakalanan floresan sinyal yoğunluğu bağlı olarak çalışmadan çalışmaya farklılık gösterebilir. Görüntüler henüz tümör kitlelerinin sinyali quantitate hayvanın otofloresansı arka fonda sinyali ölçmek değil eşiklenir. </li><li> Görüntü Display Window içinde Maskesi işlevini seçin. Şimdi eşit değerleri veya 630 gri tonlama düzeyleri eşik değerini aşan sahip piksel karşılık sadece alan görüntülenir. </li><li> Kantitatif sonuçlar üst menü çubuğu ve seçme ekran sekmesi (Şekil. 4D, kırmızı oklar) Analiz sekmesini seçin görüntülemek için. </li><li> Görüntü menüsünde Seri Numarası, Sum, ortalama, ve Alan onay kutularını seçin ve Tamam &#39;ı tıklatın. </li><li> Değerler eski olabilir bu yüzden görüntü kaydetmebirlikte taşıdık kez tüm floresan görüntüler işlenir. </li><li> Sonra, X-ray görüntü vurgulayın ve tekrar üst menü çubuğundan Image Display açın. Fare iskeletin iyi görsel temsilini vermek için dakika, max ve gama değerlerini ayarlayın. Not: niceleme zaman dizisinden her X-ışını görüntü işlenebilir X-ışını görüntü üzerinde gerçekleştirilir yana (örneğin min, maks ve gama değerleri) veri kümesinin en iyi ve en ideal bir numunesi elde etmek için. </li><li> Yine X-ray görüntü ile Overlay onay kutusunu seçin ve menüden (Şekil. 4E) açılan gelen floresan görüntü dosyası adı seçin vurgulanır. </li><li> Yerleştirilmiştir çıkışı ayıklamak için, soldaki Gezinti menüsü (Şekil. 4B, mavi ok) Açıklamalar sekmesini seçin. Floresan yoğunluğu verileri hızlı bir şekilde im tespit edilebilir, böylece herhangi bir ek veri veya metin eklemek ve nihayet şiddeti ölçek çubuğu eklemek için uygun sekmeleri seçinyaş. </li><li> Açıklamalar vurguyu ekran için tüm Açıklamalar sayfasında nesneler ve üst Düzen menüsünden seçin kopyalama ve uygun dosyasına Bindirme görüntü verilerini yapıştırmak (örneğin Word, PowerPoint, ve / veya Photoshop) tamamlandıktan sonra. </li><li> Tekrar adımları 6.1- sırayla floresans ve X-ışını görüntü çiftleri için tekrarlanır 6.11. Onları kapatmadan önce güvenli tüm görüntülere emin olun. </li><li> Son kantitatif için aynı anda tüm floresan görüntüleri açın ve üstündeki Pencere menüsünden Tile seçin. </li><li> Sonraki verilerini görüntülemek için İhracat Tüm Açık Belgeler seçeneğini seçin. Not: Excel programının yokluğunda, sekmesini kaldırın. MI bir sekme ayrılmış metin daha fazla analiz için uygun bir bilgisayara aktarılabilir (yani .txt) dosyası oluşturur. </li></ol>

<ol>
	<li>Cho, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+cancer+update:+lessons+from+morphology,+molecules,+and+mice.">Ovarian cancer update: lessons from morphology, molecules, and mice.</a> Archives of pathology &amp; laboratory medicine. 133, 1775-1781 (2009).</li><li>Jong, M., Maina, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+humans:+are+they+the+same?--Implications+in+cancer+translational+research.">Of mice and humans: are they the same?--Implications in cancer translational research.</a> Journal of nuclear medicine : official publication, Society of Nuclear Medicine. 51, 501-504 (2010).</li><li>Langdon, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+modeling+of+cancer+pathology+and+studying+tumor+response+to+therapy.">Animal modeling of cancer pathology and studying tumor response to therapy.</a> Current drug targets. 13, 1535-1547 (2012).</li><li>Mullany, L. K., Richards, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minireview:+animal+models+and+mechanisms+of+ovarian+cancer+development.">Minireview: animal models and mechanisms of ovarian cancer development.</a> Endocrinology. 153, 1585-1592 (2012).</li><li>Ricci, F., Broggini, M., Damia, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+ovarian+cancer+preclinical+models:+implications+for+a+better+management+of+the+disease.">Revisiting ovarian cancer preclinical models: implications for a better management of the disease.</a> Cancer treatment reviews. 39, 561-568 (2013).</li><li>Pizzonia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodality+animal+rotation+imaging+system+(Mars)+for+in+vivo+detection+of+intraperitoneal+tumors.">Multimodality animal rotation imaging system (Mars) for in vivo detection of intraperitoneal tumors.</a> Am J Reprod Immunol. 67, 84-90 (2012).</li><li>House, C. D., Hernandez, L., Annunziata, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+Technological+Advances+in+Using+Mouse+Models+to+Study+Ovarian+Cancer.">Recent Technological Advances in Using Mouse Models to Study Ovarian Cancer.</a> Frontiers in oncology. 4, 26 (2014).</li><li>Rao, J., Dragulescu-Andrasi, A., Yao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+imaging+in+vivo:+recent+advances.">Fluorescence imaging in vivo: recent advances.</a> Current opinion in biotechnology. 18, 17-25 (2007).</li><li>Manegold-Brauer, G., Bellin, A. K., Tercanli, S., Lapaire, O., Heinzelmann-Schwarz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+special+role+of+ultrasound+for+screening,+staging+and+surveillance+of+malignant+ovarian+tumors:+distinction+from+other+methods+of+diagnostic+imaging.">The special role of ultrasound for screening, staging and surveillance of malignant ovarian tumors: distinction from other methods of diagnostic imaging.</a> Archives of gynecology and obstetrics. 289, 491-498 (2014).</li><li>Zinn, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+bioluminescence+imaging+in+small+animals.">Noninvasive bioluminescence imaging in small animals.</a> ILAR journal / National Research Council, Institute of Laboratory Animal Resources. 49, 103-115 (2008).</li><li>Rockall, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeatability+of+Quantitative+FDG-PET/CT+and+Contrast-Enhanced+CT+in+Recurrent+Ovarian+Carcinoma:+Test-Retest+Measurements+for+Tumor+FDG+Uptake,+Diameter,+and+Volume.">Repeatability of Quantitative FDG-PET/CT and Contrast-Enhanced CT in Recurrent Ovarian Carcinoma: Test-Retest Measurements for Tumor FDG Uptake, Diameter, and Volume.</a> Clin Cancer Res. 20, 2751-2760 (2014).</li><li>Hickson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+optical+imaging:+preclinical+applications+and+considerations.">In vivo optical imaging: preclinical applications and considerations.</a> Urologic oncology. 27, 295-297 (2009).</li><li>Contag, C. H., Bachmann, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+in+vivo+bioluminescence+imaging+of+gene+expression.">Advances in in vivo bioluminescence imaging of gene expression.</a> Annual review of biomedical engineering. 4, 235-260 (2002).</li><li>Alvero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+phenotyping+of+human+ovarian+cancer+stem+cells+unravels+the+mechanisms+for+repair+and+chemoresistance.">Molecular phenotyping of human ovarian cancer stem cells unravels the mechanisms for repair and chemoresistance.</a> Cell Cycle. 8, 158-166 (2009).</li><li>Alvero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem-like+ovarian+cancer+cells+can+serve+as+tumor+vascular+progenitors.">Stem-like ovarian cancer cells can serve as tumor vascular progenitors.</a> Stem Cells. 27, 2405-2413 (2009).</li><li>Alvero, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NV-128,+a+novel+isoflavone+derivative,+induces+caspase-independent+cell+death+through+the+Akt/mammalian+target+of+rapamycin+pathway.">NV-128, a novel isoflavone derivative, induces caspase-independent cell death through the Akt/mammalian target of rapamycin pathway.</a> Cancer. , (2009).</li><li>Chefetz, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TLR2+enhances+ovarian+cancer+stem+cell+self-renewal+and+promotes+tumor+repair+and+recurrence.">TLR2 enhances ovarian cancer stem cell self-renewal and promotes tumor repair and recurrence.</a> Cell Cycle. 12, 511-521 (2013).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+frequency+of+putative+ovarian+cancer+stem+cells+with+CD44/CK19+coexpression+is+associated+with+decreased+progression-free+intervals+in+patients+with+recurrent+epithelial+ovarian+cancer.">High frequency of putative ovarian cancer stem cells with CD44/CK19 coexpression is associated with decreased progression-free intervals in patients with recurrent epithelial ovarian cancer.</a> Reprod Sci. 20, 605-615 (2013).</li><li>Steffensen, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+epithelial+ovarian+cancer+stem+cells+correlates+with+recurrence+in+early-stage+ovarian+cancer.">Prevalence of epithelial ovarian cancer stem cells correlates with recurrence in early-stage ovarian cancer.</a> J Oncol. 2011, 620523 (2011).</li><li>Craveiro, V., Yang-Hartwich, Y., Holmberg, J., Sumi, N., Pizzonia, J., Griffin, B., Gill, S., Silasi, D., Azodi, M., Rutherford, T., Alvero, A. B., Mor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+Modifications+in+Ovarian+Cancer+Stem+Cells+Following+Paclitaxel+Treatment.">Phenotypic Modifications in Ovarian Cancer Stem Cells Following Paclitaxel Treatment.</a> Cancer Medicine. , (2013).</li><li>Kuroda, H., Marino, M. P., Kutner, R. H., Reiser, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+lentiviral+vectors+in+protein-free+media.">Production of lentiviral vectors in protein-free media.</a> Current protocols in cell biology / editorial board, Juan S. Bonifacino..[etal.]. 26, (2011).</li><li>Yin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constitutive+proteasomal+degradation+of+TWIST-1+in+epithelial-ovarian+cancer+stem+cells+impacts+differentiation+and+metastatic+potential.">Constitutive proteasomal degradation of TWIST-1 in epithelial-ovarian cancer stem cells impacts differentiation and metastatic potential.</a> Oncogene. 32, 39-49 (2013).</li><li>Vassileva, V., Allen, C. J., Piquette-Miller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sustained+and+intermittent+paclitaxel+therapy+on+tumor+repopulation+in+ovarian+cancer.">Effects of sustained and intermittent paclitaxel therapy on tumor repopulation in ovarian cancer.</a> Mol Cancer Ther. 7, 630-637 (2008).</li></ol>

Bu yazı için yayın ücreti kısmen Bruker Corporation tarafından sponsor edildi.

Biz hastalarda gözlenen klinik profilini taklit eden bir ip insan yumurtalık kanseri hayvan modeli oluşturmak için bir protokol açıklar. Buna ek olarak, 2 boyutlu görüntüleme duyarlılığı sınırlama olarak ele alan bir hayvan dönüş cihazının kullanılmasını tarif eder. Birlikte ele alındığında, bu teknikler Kemoterapiye tekrarlayan yumurtalık kanseri hedefleyebilir yeni bileşikler keşfetmek için platform olarak hizmet edebilir. Buna ek olarak, model kanser nüksü ve progresyon biyolojisini anlamak için kullanılabilir. Nedeniyle retroperitoneal konumu, erken evre ip yumurtalık kanseri ksenograftları fiziksel fareyi inceleyerek tespit etmek neredeyse imkansız. Çoğu durumda, hastalık hissedilebilecek bir kez, bir tümör zaten önemli bir oranda ve bu nedenle tedavi etkinliğinin değerlendirilmesini sınırlar. Floresan etiketli hücrelerin kullanımı gerçek zamanlı ve buna bağlı olarak t başlamak için uygun zamanı tanımlayan IP tümör kurulmasını değerlendirmek için olanak verenreatment. Benzer bir şekilde, floresan-etiketli ksenogrefleri tedaviye yanıt izlenmesini mümkün kılar. Bu işaret-out gerektiğini ancak bu ip daha derine 1 cm bakılmaksızın muhabiri sistemin tipik bir şekilde saptanabilir değildir tümörleri. Insan yumurtalık kanseri kök hücre 14,15,17,22 kullanılması hastada klinik profilini taklit ksenograftları oluşturur. Birincil bir hastalık olarak, bu model Paklitaksel&#39;e cevap verir, fakat tedavinin kesilmesi sonunda Kemoterapiye tekrarlayan hastalığına yol açar. Protokol bölümünde belirtilen yoğunlukta rahim boynuzları aracılığıyla hücrelerini Tanıtımı genellikle bu nedenle birkaç peritoneal implantları, mimikler ve erken evre hastalık ile 10 gün içinde yumurtalık tümörlerinde sonuçlanır. Floresan işaretli hücrelerin kullanımı, gerçek zamanlı olarak ve dolayısıyla tedaviye başlamak için en uygun zamanı belirleme ip tümörün kurulmasını değerlendirmek için bize izin verir. Benzer bir şekilde, floresan-etiketli ksenogrefleri izleme o sağlartedaviye F yanıtı. Kanser hücre çizgilerinin diğer tür yumurtalık, kullanılan ya da başka şekilde, bu profili gözlenememiştir olanaklıdır. SKOV3 örneğin, kullanıldığı zaman, bu, ilk ip tümörler önceden 23 dirençli olduğu bildirilmiştir. Örneğin floresan, IP gibi bir raportör ile etiketlenir Ancak buna rağmen, hastalık gerçek zamanlı olarak takip edilebilir. Diğer floresan haberci kullanıldığı takdirde, bu, bir kontrol (tümör), bir hayvan ile ilk görüntüleme gerçekleştirmek için önemlidir. Bu görüntüleme protokolün optimizasyonu oranını sinyal en iyi arka plan elde etmek için izin verir. GFP Satın alma ayarlarını kullanarak görüntülü zaman bizim deneyim, çıplak fareler genellikle yüksek bir arka plan var. Bu hücreler, uterus tümör kurulmasını önlemek için tek bir süspansiyon içinde intra-uterin, enjeksiyon önemlidir. Ayrıca, kanser hücresinin naklini kolaylaştırır rahim epitel tabakası, çizilmesini önlemek için de önemlidirrahim s, böylece bir rahim içi tümör yerine IP hastalığı üretilir. Buna ek olarak, veri analizi sırasında, o bu görüntülerin yoğunluğu doğrusal ve görüntülerin karşılaştırılmasını sağlar insures 1. gama değeri ayarlamak için önemlidir. MARS görüntülerin elde edilmesi sırasında, katlanabilir roket ucu konisi olan tüplere aktarılmıştır ucu roket ucu konisi girinti içinde olduğundan emin olmak için önemlidir. Roket ucu konisi fare için bir irtibat noktası olarak hizmet vermektedir ve bu nedenle hassas bir şekilde kalibre açıları elde etmek için gereklidir. Uzun görüntüleme protokolleri (yani daha uzun 1 saat), dehidratasyon önlemek için steril serum fizyolojik subkutan enjekte 100 ul. Hayvan vücut sıcaklığı, yaklaşık 37 ° C sistemi aracılığıyla akan sıcak hava ile muhafaza edilmelidir. MARS sisteminin bir sınırlaması, sadece bir hayvan, hayvan başına yaklaşık 1 saat bir toplam çalışma süresi olan bir zamanda görüntülü edilebilmesidir. Sonuç olarak, biz est tarifyakından yumurtalık kanseri, hem primer hem de nüks taklit eden bir hayvan modelinin ablishment. Bu model, yeni teşhise yönelik veya terapötik yöntemlerinin etkinliğinin değerlendirilmesi için kullanılabilir.

Hayvan modelleri yaşam bilim araştırma vazgeçilmez araçlardır. Kanserinde, özellikle hayvan çalışmalarından elde edilen veriler insanlarda 1-3 yeni teşhise yönelik veya terapötik uygulamaları test başlatmak için gerekli olan bilgi sağlar. Bu hayvanlar kurban gerek kalmadan tedavi etkinliğini tümör yükünü ölçmek ve değerlendirmek için kolay bir yol sağlar gibi katı kanserler için hayvan modelleri klasik deri altına kurulur. Nitekim, intra-peritoneal (ip) modelleri hayvanlar tespit ve tümör büyümesinde herhangi bir değişiklik ölçmek için kurban gerektirir. Ancak, IP kanser, yumurtalık kanseri için ortotrop modelleri bunun kendi uygun ortamı 4-6 hastalık okuyan bir avantaj sunmaktadır. Bu tür bir model, anti-tümör aktivitesinin değerlendirilmesinde yararlı olması için, invazif olmayan görüntüleme yöntemleri canlı farelerde IP tümör yükü kantifikasyonuna izin veren bu geliştirilmesi gerekmektedir. Önemli zorlukIP hayvan modellerinin kullanımı kesin fiziksel muayene ile tümör yükü miktarının zorluktur. Ip tümörlerin doğru ölçümü genellikle diseksiyon için feda edilecek fareler gerektirir. Bu yaklaşım, farklı zaman noktalarında feda edilecek hayvanların çok yüksek sayıda, kullanımını gerektirir. Maliyetine ek olarak, bağlı her bir hayvanda doğal varyasyon için yüksek veri çeşitliliklerin. Vivo optik görüntüleme non-invaziv canlı farelerde ip tümör yükünü izlemek için daha uygun bir yaklaşım sağlar. Invazif olmayan birkaç görüntüleme yöntemleri şu anda, tümör büyümesi ve terapötik tepkilerin izlenmesi için klinik öncesi araştırmalarda kullanılır. Bunlar floresan ve biyolüminesensin 7-12 olarak bilgisayarlı tomografi (BT), ultrason (US), manyetik rezonans görüntüleme (MRG), pozitron emisyon tomografisi (PET) ve optik görüntüleme sayılabilir. CT X-ray ve Comput birleştiren bir iletim görüntüleme sürecier teknoloji. Farklı hız ile gövdeden geçer, yüksek enerjili foton, bir tespit kirişleri enine kesit görüntü üretir. ABD yüksek frekanslı farklı hız doku yoğunluğuna bağlı olarak ve görsel görüntü üretmek için bilgisayar tarafından tanınan yansıtılmıştır vücut yaratmak ses dalgaları sesleri gönderir yansıma görüntü, bir türüdür. MR ve PET görüntü üretmek için sırasıyla, manyetik enerji ve nükleer parçacıkları kullanabilirsiniz emisyon görüntüleme yöntemleridir. PET idare etiketli 2-fluorodeoxy-D-glikoz 7,9,11 radyoaktivite tespit duyarlı bir kamera gerekir iken MRG bir görüntü oluşturmak için kullanılan kendi radyo frekanslarını üretmek için hücreleri uyarmaktadır güçlü bir manyetik alan oluşturur. Son olarak, optik görüntüleme biyolojik olarak ışık veren veya floresanlı bir muhabir veya sonda 9,12 emisyon ışığın saptanmasına dayanır. Bu raporda, sağlamadığı, floresan kullanımını tarif edergörüntüleme yöntemlerinin diğer türleri üzerinde birkaç avantajları. Floresan görüntüleme ile, hücreler sürekli olarak sırasıyla biyoluminesans ve manyetik rezonans görüntüleme için gerekli olan, bir alt-tabaka ya da bağlanmanın dayalı sondalar, eklenmesini gerektirmeden floresan proteinleri ifade etmek için genetik olarak tasarlanmış olabilir. Floresan muhabir ayrıca tipik olarak, böylece, daha az hassas bir algılama yöntemi 8,12 kullanımına olanak sağlayan daha parlak bir sinyali ifade eder. Buna ek olarak, flüoresan görüntüleme ile, bu BT 7-9 elde edilmesi mümkün olmayan bir 1 cm, daha küçük tümörleri tespit etmek mümkündür. Son olarak, biyolüminesans aksine, floresans sinyali aerobik bir ortam gerekli değildir ve bu nedenle, genellikle sinyal, büyük tümörlerde 13 çekirdeklerinde olarak oluşan hipoksik ortamda, sınırlı değildir. Ancak, herhangi bir başka bir teknoloji olarak, flüoresan bazlı görüntüleme yöntemleri de dezavantajları vardır. Biri machi yetersizlikNE-üretilen düşük enerjili fotonlar yeterli bir derinliğe kadar nüfuz. Böylece hayvanlar, farklı açılarda görüntülü olmalıdır dağıtılmış doku fotonların miktarını en aza indirmek için. Biz çıplak farelerde bir ip yumurtalık kanseri ve rotasyonu yoluyla bütün hayvan görüntüleme sağlar ip tümör takibi için bir yaklaşım kurmak için bir protokol açıklar. Döndürücü, genellikle, ışık kaynağı ve detektör arasındaki meydana gelen doku girişimi azaltmak özel ve tekrarlanabilir konumlara fare açılar oluştururlar. Bu aksi cevapsız olabilir küçük tümörlerin görselleştirme optimize eder.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="705">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:203px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RPMI 1640 media</td>
			<td style="width:203px;">GIBCO, by Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">23400-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">fetal bovine serum</td>
			<td style="width:203px;">Gemini Bioproducts</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">T75 cell culture flasks</td>
			<td style="width:203px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">430641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PBS</td>
			<td style="width:203px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trypsin</td>
			<td style="width:203px;">GIBCO, by Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">25300-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:203px;">Butler Schein</td>
			<td style="width:119px;">NDC 11695-6776-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Alcohol pads</td>
			<td style="width:203px;">Fischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">06-669-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 ml syringe</td>
			<td style="width:203px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">309602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">25 gauge needle</td>
			<td style="width:203px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">synthetic absorbable suture</td>
			<td style="width:203px;">Covidien</td>
			<td style="width:119px;">SL-636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">tissue adhesive</td>
			<td style="width:203px;">Vetbond</td>
			<td style="width:119px;">1469SB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">surgical scissors</td>
			<td style="width:203px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82027-584</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">surgical forceps</td>
			<td style="width:203px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82027-386</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">hemostat</td>
			<td style="width:203px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82027-422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Paclitaxel</td>
			<td style="width:203px;">Hospira, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">NDC 61703-345-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ibuprofen</td>
			<td style="width:203px;">Walgreens</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Children&#39;s Ibuprofen 100 (100 mg/5ml)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Puralube Vet ointment</td>
			<td style="width:203px;">Pharmaderm</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">In vivo MS FX PRO</td>
			<td style="width:203px;">Bruker Corporation</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MI software</td>
			<td style="width:203px;">Bruker Corporation</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">athymic nude mice</td>
			<td style="width:203px;">Harlan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine model for non-invasive imaging to detect and monitor ovarian cancer recurrence

Epitelyal over kanseri ABD&#39;de en ölümcül jinekolojik kanseridir. Hastalar başlangıçta tümör rezeksiyon cerrahisi sonrasında platin ve taksan bileşiklerinden oluşan kombinasyon kemoterapi oluşan bakım mevcut standart yanıt vermekle birlikte, hastaların neredeyse% 90&#39;ı birkaç yıl içinde tekrarlar. Bu hastalarda Kemoterapiye hastalığının gelişimi mevcut kemoterapi maddelerinin etkinliğini sınırlar ve dolayısıyla, yüksek ölüm katkıda bulunur. Nüks hedefleyebilir yeni bir tedavi seçeneklerini keşfetmek için, yakından tekrarlayan yumurtalık kanseri olan hastaların klinik profilini taklit uygun hayvan modelleri gereklidir. Intra-peritoneal (ip) olarak hastalığının izlenmesi karşılaşılan zorluk IP modelleri ve bu nedenle en çok ksenogrefleri kurulan deri altından kullanımını sınırlamaktadır. Biz algılama ve ip tümör kitlesinin anatomik yerini sağlayan bir hassas optik görüntüleme platformu geliştirdi. Platform u içerir2-boyutlu X-ışını ko-kayıt ile birlikte moleküler sinyallerin anatomik konumu sağlayabilir yakın kızılötesi, görünür ışık aralığında, uzanan optik gazetecilere se. Algılama önemli ölçüde tek bir oryantasyonda görünmez tümörlerin tanımlanmasına izin veren, 360 derece görüntüleme için çok sayıda açısal konumlara hayvan sağlayan bir dönme sistemi sayesinde geliştirilmiştir. Bu platform, invasiv olmayan bir monitör tümör büyümesi için benzersiz bir modeli sağlar ve önlenmesi veya tekrarlayan yumurtalık kanseri tedavisi için yeni tedavilerin etkisini değerlendirmek.

Non-invaziv canlı görüntüleme süresi sayesinde aynı farelerden ip tümör ilerlemesinin izlenmesine olanak sağlar. Açıklanan protokol kullanılarak MCherry etiketli F2 yumurtalık kanseri hücrelerinin intra-uterin enjeksiyon günde 32 gün 5 ve karsinomatoz görünür IP tümörleri oluşturur (Şek. 5). Şekil 6 fareler telef edildikten sonra gözlemlenen karsinomatozise elde edilen görüntülerin bir korelasyon olduğunu göstermektedir . MARS kullanarak görüntüleme görüntü sadece tek bir düzlemde elde edilir, aksi takdirde özlenecek ip tümörlerin algılanmasını sağlar. 7 (üst panel) Şekil açısına bağlı olarak bile önemli tümör yükü ile kontrol farelerde tümör boyutu hafife alınabileceğini göstermektedir görüntü alınmıştır. Hayvanlar ya tam cevap olarak kategorize edildiğinde tümör kitlesi cevapsız veya hafife olmadığından emin olmak için yetenek 1. yuvarlak kemoterapi bitiminde daha da önemlidirer, kısmi cevap, ya da olmayan cevap (Res. 7 orta panel). Benzer şekilde, idame tedavisi sırasında düzgün progresyonsuz bir aralık (Res. 7 orta panel) tanımlayan, nüks için gün tayin etmek çok küçük tekrarlayan tümörlerin tespit etmek büyük önem taşımaktadır. Tümör yükünün kantitatif değerlendirilmesi hayvan rotasyonu yoluyla optimize edilmiştir. Derinlik uyarma en aza indirmek ve emisyon ışık tümör hücrelerinin sayısı ve dolayısıyla tümör yükü göstergesi olan floresan, foton en doğru yakalama sağlayacak dolaşır olacaktır açıları hayvanın dönmesi. Bu nedenle, miktar tayini rotasyon dizisi içinde konumuna bağlı olarak hayvanın belirli tümörler için optimize edilmiştir. Dönme veri setleri görüntü sunarken, bu visu için izin verirken, etkili tüm tümör kitleleri görüntüler min / max görüntü kontrast aralığını görüntüleri atamak için önemlidir<html> Bireysel tümör kitlelerinin al tarif. Bu çalışma için, ideal bir kontrast aralığı 50 sayıları minimum ve 1200 sayıları maksimum olduğu bulunmuştur. Bu değerler, diğer çalışmalar için bir rehber olarak görülebilir, ancak, optimum kontrast aralıkları tümör yükü düzeyi, hücrelerde floresan peptid ifade düzeyleri, görüntüleme sistemi konfigürasyonu ve yakalama ayarlarına bağlı olarak çalışmadan çalışmaya farklı olacaktır. <img alt="Şekil 1," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig1highres.jpg" width="600" /> Şekil 1: F2 yumurtalık kanseri hücreleri stabil MCherry floresan ifade eder. (A) Faz görüntü; (B) floresan görüntü; A ve B (C) katlamalı hücrelerin% 100 flüoresan raportör ifade unutmayın. s.jpg &quot;width =&quot; 600 &quot;/&gt; Şekil 2: yumurtalık kanseri hücrelerinin intra-uterin enjeksiyonu. (A), anestezi sürekli bir burun hunisi yoluyla tatbik edilir; Cilt bulmak ve uterin boynuz kelepçe kesilir (BE); (F), kanser hücrelerinin rahim lümeni içine yavaş yavaş enjekte edildi. <img alt="Şekil 3," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig3highres.jpg" width="600" /> Şekil 3: sıcaklık kontrollü ve kapalı devre görüntüleme odasının içinde şeffaf hayvan tepsisini havalandırmalı (A) 2D görüntüleme; (B, C) ​​tepsi anestezi sunmak ve beş farelere kadar tutabilir burun konileri ile donatılmıştır. <img alt="Şekil 4," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig4highres.jpg" width="600" /> &lt;strong&gt; Şekil 4: analiz yazılımı alınan Temsilcisi pencere panelleri veri analizinde yardımcı olmak. Açıklama için metne bakınız lütfen. <img alt="Şekil 5," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig5highres.jpg" width="600" /> Şekil 5: MCherry floresan tespiti boyuna görüntüleme sırası X-ray ile co-lokalize. Ip tümörü olan üç fare ip tümör ilerlemesini değerlendirmek için zaman içinde takip edilmektedir. Tümör ilerlemesi değişebilir unutmayın. Şekil farklı tümör ilerlemesi oranları ve dolayısıyla zaman içinde tümör yükünü değişen 3 farelerin temsilcisi resimdir. <img alt="Şekil 6," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig6highres.jpg" width="600" /> Şekil 6: ip tümör yükü (üst panel) ve floresan / X-ışını bindirme ima arasındaki korelasyonge (alt panel). Yaklaşık 32 gün 2D-görüntüleme yapıldı ve fareler elde edilen görüntünün ile gerçek tümör yükünü ilişkilendirmek için kurban edilir, F2-MCherry yumurtalık kanseri hücrelerinin enjeksiyonu sonrası. Kırmızı oklar tümör yükü işaret. <img alt="Şekil 7," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig7highres.jpg" width="600" /> Şekil 7: Çok açılı görüntüleme ve tümörlerin tespit Kontrolü (üst panel) Paklitaksel&#39;e tedavi (orta panel) ve tekrarlayan fareler (alt panel) izin Rotasyon veri setleri. Bu MARS sistemi kullanılarak döndürülür Şekil panelin başına tek bir fare görüntüsünü gösterir. Daha belirgin bir tümör yükü ile kontrol farelerde, tümör boyutu görüntü alınmıştır açısına bağlı olarak göz ardı edilebilir unutmayın.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence at JoVE.com

Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

We describe a non-invasive animal imaging platform that allows the detection, quantification, and monitoring of ovarian cancer growth and recurrence. This intra-peritoneal xenograft model mimics the clinical profile of patients with ovarian cancer.

Non-invaziv Görüntüleme için fare modeli Algılama ve Monitör Yumurtalık Kanseri nüks için

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

murine-model-for-non-invasive-imaging-to-detect-monitor-ovarian

Research

JoVE Journal

Medicine

12.0K Görüntüleme.  Yale University School of Medicine. We describe a non-invasive animal imaging platform that allows the detection, quantification, and monitoring of ovarian cancer growth and recurrence. This intra-peritoneal xenograft model mimics the clinical profile of patients with ovarian cancer. 

Video: Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

Murin Mesane Kanseri bir Ortotopik Model

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Tıp

An in vivo Rodent Model of Contraction-induced Injury and Non-invasive Monitoring of Recovery

Muscle strains are one of the most common complaints treated by physicians. A muscle injury is typically diagnosed from the patient history and physical exam alone, however the clinical presentation can vary greatly depending on the extent of injury, the patient's pain tolerance, etc. In patients with muscle injury or muscle disease, assessment of muscle damage is typically limited to clinical signs, such as tenderness, strength, range of motion, and more recently, imaging studies. Biological markers, such as serum creatine kinase levels, are typically elevated with muscle injury, but their levels do not always correlate with the loss of force production. This is even true of histological findings from animals, which provide a "direct measure" of damage, but do not account for all the loss of function. Some have argued that the most comprehensive measure of the overall health of the muscle in contractile force. Because muscle injury is a random event that occurs under a variety of biomechanical conditions, it is difficult to study. Here, we describe an in vivo animal model to measure torque and to produce a reliable muscle injury. We also describe our model for measurement of force from an isolated muscle in situ. Furthermore, we describe our small animal MRI procedure.

An in vivo Rodent Model of Contraction-induced Injury and Non-invasive Monitoring of Recovery

An in vivo animal model of injury is described. The method takes advantage of the subcutaneous position of the fibular nerve. Velocity, timing of muscle activation, and arc of motion are all pre-determined and synchronized using commercial software. Post injury changes are monitored in vivo using MR imaging/spectroscopy.

Bir In vivo</emDaralma indüklenen Sakatlık ve Kurtarma Non-invaziv İzleme> Kemirgen Model

Muscle strains are one of the most  common complaints treated by physicians. A muscle injury is typically diagnosed from the patient history and  physical ...

Non-invasive Imaging of Acute Allograft Rejection after Rat Renal Transplantation Using 18F-FDG PET

The number of patients with end-stage renal disease, and the number of kidney allograft recipients continuously increases. Episodes of acute cellular allograft rejection (AR) are a negative prognostic factor for long-term allograft survival, and its timely diagnosis is crucial for allograft function 1. At present, AR can only be definitely diagnosed by core-needle biopsy, which, as an invasive method, bares significant risk of graft injury or even loss. Moreover, biopsies are not feasible in patients taking anticoagulant drugs and the limited sampling site of this technique may result in false negative results if the AR is focal or patchy. As a consequence, this gave rise to an ongoing search for new AR detection methods, which often has to be done in animals including the use of various transplantation models.
Since the early 60s rat renal transplantation is a well-established experimental method for the examination and analysis of AR 2. We herein present in addition small animal positron emission tomography (PET) using 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) to assess AR in an allogeneic uninephrectomized rat renal transplantation model and propose graft FDG-PET imaging as a new option for a non-invasive, specific and early diagnosis of AR also for the human situation 3. Further, this method can be applied for follow-up to improve monitoring of transplant rejection 4.

Non-invasive Imaging of Acute Allograft Rejection after Rat Renal Transplantation Using 18F-FDG PET

We herein present a rat renal transplantation model to non-invasively assess acute allograft rejection using positron emission tomography with 18F-fluorodeoxyglucose.

Sıçan Böbrek Nakli sonra Akut Allogreft Reddi non-invaziv Görüntüleme Kullanımı<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG PET

The number of patients with end-stage renal  disease, and the number of kidney allograft recipients continuously increases.  Episodes of acute cellular ...

Non-invasive Optical Measurement of Cerebral Metabolism and Hemodynamics in Infants

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can accurately screen for brain injury, monitor injury evolution, or assess response to therapy. The energy used by neurons is derived largely from tissue oxidative metabolism, and neural hyperactivity and cell death are reflected by corresponding changes in cerebral oxygen metabolism (CMRO2). Thus, measures of CMRO2 are reflective of neuronal viability and provide critical diagnostic information, making CMRO2 an ideal target for bedside measurement of brain health.
Brain-imaging techniques such as positron emission tomography (PET) and single-photon emission computed tomography (SPECT) yield measures of cerebral glucose and oxygen metabolism, but these techniques require the administration of radionucleotides, so they are used in only the most acute cases.
Continuous-wave near-infrared spectroscopy (CWNIRS) provides non-invasive and non-ionizing radiation measures of hemoglobin oxygen saturation (SO2) as a surrogate for cerebral oxygen consumption. However, SO2 is less than ideal as a surrogate for cerebral oxygen metabolism as it is influenced by both oxygen delivery and consumption. Furthermore, measurements of SO2 are not sensitive enough to detect brain injury hours after the insult 1,2, because oxygen consumption and delivery reach equilibrium after acute transients 3. We investigated the possibility of using more sophisticated NIRS optical methods to quantify cerebral oxygen metabolism at the bedside in healthy and brain-injured newborns. More specifically, we combined the frequency-domain NIRS (FDNIRS) measure of SO2 with the diffuse correlation spectroscopy (DCS) measure of blood flow index (CBFi) to yield an index of CMRO2 (CMRO2i) 4,5.
With the combined FDNIRS/DCS system we are able to quantify cerebral metabolism and hemodynamics. This represents an improvement over CWNIRS for detecting brain health, brain development, and response to therapy in neonates. Moreover, this method adheres to all neonatal intensive care unit (NICU) policies on infection control and institutional policies on laser safety. Future work will seek to integrate the two instruments to reduce acquisition time at the bedside and to implement real-time feedback on data quality to reduce the rate of data rejection.

We combined frequency-domain near-infrared spectroscopy measures of cerebral hemoglobin oxygenation with diffuse correlation spectroscopy measures of cerebral blood flow index to estimate an index of oxygen metabolism. We tested the utility of this measure as a bedside screening tool to evaluate the health and development of the newborn brain.

Bebeklerde Serebral Metabolizma ve Hemodinamiğin Noninvaziv Optik Ölçüm

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality  and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can  accurately ...

Non-invasive Assessment of Microvascular and Endothelial Function

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of cardiovascular disease. Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. Percent capillary recruitment is assessed by dividing the increase in capillary density induced by postocclusive reactive hyperemia (postocclusive reactive hyperemia capillary density minus baseline capillary density), by the maximal capillary density (observed during passive venous occlusion). Percent perfused capillaries represents the proportion of all capillaries present that are perfused (functionally active), and is calculated by dividing postocclusive reactive hyperemia capillary density by the maximal capillary density. Both percent capillary recruitment and percent perfused capillaries reflect the number of functional capillaries. The forearm blood flow (FBF) technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function: The ratio FBFmax/FBFbase is computed as an estimate of vasodilation, by dividing the mean of the four FBFmax values by the mean of the four FBFbase values. Forearm vascular resistance at maximal vasodilation (FVRmax) is calculated as the mean arterial pressure (MAP) divided by FBFmax. Both the capillaroscopy and forearm techniques are readily acceptable to patients and can be learned quickly.
The microvascular and endothelial function measures obtained using the methodologies described in this paper may have future utility in clinical patient cardiovascular risk-reduction strategies. As we have published reports demonstrating that microvascular and endothelial dysfunction are found in initial stages of hypertension including prehypertension, microvascular and endothelial function measures may eventually aid in early identification, risk-stratification and prevention of end-stage vascular pathology, with its potentially fatal consequences.

Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. The forearm blood flow technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function.

Mikrovasküler ve Endotel Fonksiyonu Noninvaziv Değerlendirilmesi

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of ...

Protocols for Assessing Radiofrequency Interactions with Gold Nanoparticles and Biological Systems for Non-invasive Hyperthermia Cancer Therapy

Cancer therapies which are less toxic and invasive than their existing counterparts are highly desirable. The use of RF electric-fields that penetrate deep into the body, causing minimal toxicity, are currently being studied as a viable means of non-invasive cancer therapy. It is envisioned that the interactions of RF energy with internalized nanoparticles (NPs) can liberate heat which can then cause overheating (hyperthermia) of the cell, ultimately ending in cell necrosis.
In the case of non-biological systems, we present detailed protocols relating to quantifying the heat liberated by highly-concentrated NP colloids. For biological systems, in the case of in vitro experiments, we describe the techniques and conditions which must be adhered to in order to effectively expose cancer cells to RF energy without bulk media heating artifacts significantly obscuring the data. Finally, we give a detailed methodology for in vivo mouse models with ectopic hepatic cancer tumors.

We describe the protocols used to investigate the interactions of 13.56 MHz radiofrequency (RF) electric-fields with gold nanoparticle colloids in both non-biological and biological systems (in vitro/vivo). These interactions are being investigated for applications in cancer therapy.

Non-invaziv Hipertermi Kanser Tedavisi için Altın Nanoparçacıklannm ve Biyolojik Sistemleri ile Radyofrekans Etkileşimleri değerlendirilmesi için Protokoller

Cancer therapies  which are less toxic and invasive than their existing counterparts are highly  desirable. The use of RF electric-fields that penetrate ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to return to normal in a large majority of patients2, which is mainly due to current lack of clinical treatment for acute stroke. This necessitates understanding the physiological effects of cerebral ischemia on brain tissue over time and is a major area of active research. Towards this end, experimental progress has been made using rats as a preclinical model for stroke, particularly, using non-invasive methods such as 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) coupled with Positron Emission Tomography (PET) imaging3,10,17. Here we present a strategy for inducing cerebral ischemia in rats by middle cerebral artery occlusion (MCAO) that mimics focal cerebral ischemia in humans, and imaging its effects over 24 hr using FDG-PET coupled with X-ray computed tomography (CT) with an Albira PET-CT instrument. A VOI template atlas was subsequently fused to the cerebral rat data to enable a unbiased analysis of the brain and its sub-regions4. In addition, a method for 3D visualization of the FDG-PET-CT time course is presented. In summary, we present a detailed protocol for initiating, quantifying, and visualizing an induced ischemic stroke event in a living Sprague-Dawley rat in three dimensions using FDG-PET.

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Brain damage resulting from cerebral ischemia may be non-invasively imaged and studied in rats using pre-clinical positron emission tomography coupled with the injectable radioactive probe, 18F-fluorodeoxyglucose. Further, the use of modern software tools that include volume of interest (VOI) brain templates dramatically increase the quantitative information gleaned from these studies.

Pozitron Emisyon Tomografi ile kullanma Non-invaziv Görüntüleme ve Serebral iskemi Analizi Yaşam Sıçanlarda<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a valuable tool for understanding ovarian cancer, their use has many limitations. These include the lack of heterogeneity and the plethora of genetic alterations associated with extended in vitro passaging.&#160;Here we describe a method that allows for rapid establishment of primary ovarian cancer cells form solid clinical specimens collected at the time of surgery. The method consists of subjecting clinical specimens to enzymatic digestion for 30 min. The isolated cell suspension is allowed to grow and can be used for downstream application including drug screening. The advantage of primary ovarian cancer cell lines over established ovarian cancer cell lines is that they are representative of the original specific clinical specimens they are derived from and can be derived from different sites whether primary or metastatic ovarian cancer.

This study describes a detailed method for isolation and characterization of primary ovarian cancer cells from solid clinical specimens. Ovarian cancer clinical specimens are subjected to enzymatic digestion to obtain viable, fibroblast-free epithelial ovarian cancer (EOC) cells highly suitable for downstream applications.

Katı Örneklerinin From İlköğretim Yumurtalık Kanseri Hücreleri alma için yöntem

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

A Methodological Approach to Non-invasive Assessments of Vascular Function and Morphology

The endothelium is the innermost lining of the vasculature and is involved in the maintenance of vascular homeostasis. Damage to the endothelium may predispose the vessel to atherosclerosis and increase the risk for cardiovascular disease. Assessments of peripheral endothelial function are good indicators of early abnormalities in the vascular wall and correlate well with assessments of coronary endothelial function. The present manuscript details the important methodological steps necessary for the assessment of microvascular endothelial function using laser Doppler imaging with iontophoresis, large vessel endothelial function using flow-mediated dilatation, and carotid atherosclerosis using carotid artery ultrasound. A discussion on the methodological considerations for each of the techniques is also presented, and recommendations are made for future research.

The present article describes the methodological considerations for several non-invasive assessments of vascular function and morphology that are commonly used in medical research to assess different stages of atherosclerosis.

Vasküler Fonksiyon ve Morfoloji Non-invaziv Değerlendirmelerine Bir Metodolojik Yaklaşım

The endothelium is the innermost lining of the vasculature and is involved in the maintenance of vascular homeostasis.  Damage to the endothelium may ...