Name: renal ischaemia reperfusion injury: a mouse model of injury and regeneration
Uploaded: 2014-06-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 27 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration at JoVE.com

The present study was supported by grants from Kidney Research UK (ST4/2011), the Cunningham Trust (CT11/14) and the Mrs EA Hogg's Charitable Trust.

NOT:. Hayvan deneyleri Hayvanlar (Scientific Procedures) Act 1986 dayattığı kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak yapıldı Prosedürleri steril (otoklav) cerrahi aletler ve sarf malzemeleri kullanılarak yapılmıştır. Uygun yaş olmak üzere, 15 hafta - renal IRI murin modeli Burada yer iken, bir 8-haftalık, erkek yeniden üretilebilir, tipik olarak 7 arasında değişen bir cinsiyet ya murin soylarının çeşitli gerçekleştirilebilir Balb / c fare üzerinde gerçekleştirilmiştir 8 hafta. Temsilcisi sonuç bölümünde sunulan veriler, Balb / c ve FVB farelerinin hem de elde edilmiştir. Isıtılmış salin uygulaması nemli bağırsak ve cerrahi alanda tutmak için kullanılır ama dikkatle izlenir ve sıvıların aşırı uygulama olarak, bir minimumda tutulması gereken önemli olan serum veya plazma kreatinin, düşürücü bir suni yol açabilir deneysel okuma. 1.. Hayvan Hazırlama ve Laparotomi &lt;ol&gt; <li> Intraperitonal ketamin hidroklorür (70 mg / kg) ve medetomidin hidroklorür (1 mg / kg) ile anestezi fare ve refleksler, örneğin ayak tutam kaybı ile anestezi derinliğini. Elde edilen anestezi düzleminin süresi 4 saattir. Bu tüm cerrahi prosedürü gerçekleştirmek için yeterli olduğunu ve herhangi bir ek anestezi gereklidir. </li><li> , Kesi alanı çevreleyen saç kaldırmak alan gevşek saç serbest olmasını sağlamak, ve bir seyreltilmiş klorheksidin solüsyonu kullanarak karın cildi dezenfekte. </li><li> Sırtüstü pozisyonda ısıtılmış bir cerrahi pad üzerinde fare yerleştirin ve düşük-tack yapışkan bant kullanarak pad, üst ve alt ekstremite düzeltmek. Üst ekstremiteler akciğer sıkıştırma önlemek için normal bir pozisyonda tutulmasını sağlamak. Prosedür boyunca termal yanıklar için fareyi izlemek. Mümkünse olmayan bir elektrikli ısı kaynağı kullanılması önerilir. </li><li> Analjezik buprenorfin hidroklorür yönetme (0.06 mg / kg)subkutan ve kornea kurumasını önlemek için gözler için göz yağ uygulanır. Analjezikler, ameliyat sonrası iyileşme yardımcı olmak amacıyla önceden işlevsel tatbik edilmektedir. </li><li> Doku makas ayrılması veya bir neşter bıçak kullanarak bir orta hat laparotomi kesi yapmak ve açık açık periton cilt ayırmak. Bu cilt ve periton yara kapanması sırasında ayrı olarak dikilir sağlar. Avasküler linea alba bir kesi periton boşluğuna erişim sağlayarak yapılır. </li><li> Cerrahi alanda net bir görünüm oluşturmak için Retraktörün yerleştirin ve fare asmak. </li></ol> 2.. Üreter Bölümü ve Sağ nefrektomi <ol><li> Yavaşça sağ böbrek ve üreter maruz serum ile nemlendirilmiş otoklava sterilize pamuklu çubuklarla karın boşluğunun sol tarafına doğru bağırsakları itin. Kurumayı önlemek için nemli örtüler ile bağırsakları örtün. </li><li> Açılı forseps ile sağ üreter kaldırın. Iki kez, 6/0 sil kullanarak sağ üreter ligatek-örgülü sütür. Uzun süreli deneyler için, tüm abdominal ameliyatlar için emilebilir dikişlerle kullanın. </li><li> Sütür arasındaki üreter bölün. Vezikoüretral kavşak mesane periton içine sızmasını idrar önlemek gerekir iken üreter uzun süreli deneyler sırasında ameliyat sonrası herhangi bir sızıntıya karşı bir koruma olarak bağlandı. </li><li> Sağ nefrektomi yapılırken kolay erişim sağlamak için, hafifçe nemlendirilmiş bir pamuklu çubuk kullanarak karaciğer yukarı ve sağa doğru itin ve sağ renal arter ve ven maruz nemlendirilmiş gazlı bez kullanılarak yerinde tutun. </li><li> Açık açık kadarıyla sağ renal arter ve ven olarak sağ böbreğin medial boyunca bağ dokusu ve yağ teşrih. </li><li> Dikkatli kan damarlarının altında açılı forseps kaydırarak renal arter ve ven altında bir kanal oluşturun. Uçları kapalı ve yavaşça kanalın oluşumunu kolaylaştırmak amacıyla, açık uçları ile çıkarın ile alt kılavuz forseps.</li><li> Forseps ipuçları sadece renal arter ve ven yukarıda bağ dokuları yoluyla görünene kadar adımı 2.6 tekrarlayın. Bir kez görünür hafifçe aşağı bağ dokusu kırmak için açılı forseps başka bir dizi ipuçları karşı forseps ipuçları ovalayın. </li><li> Renal arter ve ven açıkça erişilebilir ile onlar artık tıkalı olabilir. Dikkatle renal arter altına açılı forseps slayt ve ipuçları kapalı damar. Bir kez yerinde forseps ipuçları açın ve uçları arasındaki hemostatik klip aplikatör rehberlik ve sıkıca renal arter üzerine hemostatik klip uygulamak ve yakın böbrek ven. Alternatif olarak, renal arter ve ven 6/0 örgülü ipek sütür kullanılarak bağlanabilir. </li><li> Şimdi kalan yapışık bağ dokusu ile kaldırılabilir tıkalı renal arter ve böbrek yakın ven, bölün. </li><li> Karaciğer tutun ve pamuklu bağırsakları değiştirmek için kullanılan herhangi bir gazlı bez çıkarın. </li></ol><ol><li> Yavaşça sol böbrek ve üreter maruz ve nemli örtüler ile karşılamak için pamuklu karın boşluğunun sağ tarafına doğru bağırsakları itin. Gerekirse, pankreas daha kolay erişim sağlamak için nemli bir gazlı bez ile saptırılır edilebilir. </li><li> Yavaşça bağ dokuları sol renal arter ve ven anterior ve posterior kırmak için künt diseksiyon kullanın, ve sonra 2.4 Üreter Bölümü ve Sağ Nefrektominin adım tarif edilene benzer bir şekilde gemilerin altında bir kanal oluşturmak. </li><li> Renal arter ve ven üzerine bir mikro serrafine klip uygulayarak sol böbrek iskemi Induce. Başarılı iskemi görsel olarak böbrek kademeli bir muntazam koyulaşması ile teyit edilebilir. Sol renal arter ve ven ek olarak kan damarları bazen böbrek kaynağı olabilir. Eğer varsa, bu ek kan damarları da başarıyla amacıyla mikro serrafine klipleri kullanılarak tıkalı gerekirtüm böbrek iskemi neden olur. </li><li> Bağırsak değiştirin ve dikkatle bağırsak iskemi ödün sonuçlara yol açabilir ani bükülme olmadığından emin olmak. Geçici olarak tek sütür ile periton kapatın. </li><li> Iskemi indüksiyon sonrasında hemen iskemisi gereken süre boyunca 37 ° C &#39;de, vücut ısısını muhafaza edecek bir kontrol birimine bağlı bir rektal direnç ile bir eşit sıcaklık battaniyesi üzerine fare. Böbrek hasarı ve böbrek yetmezliğinin istenen derecede uyarılması için gerekli iskemisi uygun uzunluğu tanımlamak için bir titrasyon, her bir suş ve cerrahi operatör için yapılması önerilir. </li><li> Kısa bir süre iskemik sürenin bitiminden önce periton yeniden açın ve dikkatle kelepçe erişim izin ve böbrek görüntülemek için bağırsakları yerleştirin. Ekartörün yerleştirilmesi, video gösterildiği gibi, gerekli değildir ve sadece sunum amaçlı olarak uygulandı. </li><li> Cl çıkarıniskemi süre sonra amfi sonucuna varmıştır. Hemen çıkarılmasından sonra böbrek hızla başarılı reperfüzyon gösteren sağlıklı bir koyu pembe bir koyu kestane gelen rengi değişecektir. </li><li> Yine bağırsak önceki 6/0 örgü ipek sütür kullanılarak bir battaniye dikiş ile peritonunu kapanış bükülmüş değil emin olun. Sonra metalik deri klipleri kullanarak cilt kapatın. </li><li> , Ameliyat sonrası enfeksiyon riskini en aza indirmek gibi cerrahi bölgeye iyot / alkol çözeltisi gibi bir antiseptik uygulayın. </li></ol> 4. Post-operatif Kurtarma ve Bakım <ol><li> Atipamezol hidroklorür ile kısmen geri anestezi (2 mg / kg) deri altından ve 1 ml lik bir deri altından enjeksiyon ile tatbik sıvıları ameliyattan sonra su kaybını önlemek için tuz ısıtıldı. </li><li> Onlar bilinç iyileşene kadar dikkatlice fareleri izlemek, uyarı görünür ve kendilerini sağa edebiliyoruz. </li><li> Isıtılmış bir kutuya kurtarmak için fareler 29 ° C, loc muhafaza izin ver24 saat boyunca, sessiz bir ortamda ated. Fareler nedeniyle anesteziye thermoregulate için zarar görmüş bir yeteneğine sahip olacak ve bu da etkin bir iyileşme sağlamak için yüksek bir sıcaklıkta muhafaza edilir bu nedenle çok önemlidir. Nemlendirilmiş gıda da sıvı ve besin alımını teşvik sağlanabilir. </li><li> Uzun vadeli kurtarma deneyleri devam eden analjezik sağlamak ve ameliyat sonrasında 7 gün cilt klipleri kaldırmak için. </li></ol> 5.. Fonksiyonel ve Yapısal Böbrek Yaralanma ve Rejenerasyon değerlendirilmesi <ol><li> Kan deney sonunda ötenazi sırasında deneyler sırasında ya da kardiyak ponksiyonu ile kuyruk damarından toplanabilir. Önce 7 açıklandığı gibi bir biyokimyasal santrifüj analizörü bir creatinase tabanlı bir yöntem ve kan üre azotu (BUN) kullanılarak, serum kreatinin böbrek fonksiyonunu ölçün. Normal sağlıklı farelerin renal fonksiyonu, bu böbrek yetmezliği modeli oluşturmak önce tespit edilmesi gerekmektedir dependi ölçüde değişebilirJaffe reaksiyonu ve kreatinin ölçümü için creatinase dayalı yöntemler, örneğin kullanılan analiz metodu üzerinde ng farklı sonuçlar verir. </li><li> Hematoksilen ve Eosin (H &amp; E) veya Periyodik Asit Schiff (PAS) ile boyandı parafin böbrek doku kesitlerinde histopatolojik tarafından böbrek yapısını inceleyelim. Her bir fare için, dış medulla (Osom) dış şerit içinde 200x büyütmede 10 görüntü - 5 arasında yakalar. Bu bölgede bu modelde yaralı gibi hipoksi derece savunmasız olduğundan Osom yaralanma düzeyini değerlendirin. </li><li> Akut tübüler nekroz (ATN) veya rejenerasyon ölçmek için aşağıda ayrıntılı iki skorlama sistemlerinin birini kullanın. Bu sistemlerde kullanılan sınıflandırmaların Örnek morfolojisi, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. </li><li> ATN skoru basit bir ikili sistemi kullanın. Hücresel bütünlük ve morfolojisi işareti temelinde ve canlı (sağlam hücre morfoloji) ya da nekrotik (tehlikeye hücre inte olarak ya tübüller saymakgrity, anormal hücre morfolojisi ve hücre kaybı). <ol><li> Tübül toplam sayısı (nekrotik tübüller%) bir yüzdesi olarak nekrotik tübül sayısını ifade eder. </li></ol></li><li> Hücre bütünlüğü, morfolojisi ve çekirdekler sayısına dayalı bir sistemi kullanılarak rejenerasyon sınıflandırır. Mark ve saymak tübüller gibi, sağlıklı nekrotik, yaralı ya da aşağıdaki adımlarda listelenen kriterlere göre kurtarma. <ol><li> (Adım 5.4 ayrıntılı) ATN skorlama sistemi olduğu gibi tehlikeye hücre bütünlüğünü gösteren tübüllerine iken sağlıklı olarak bozulmamış, normal hücreler ile işareti tübüller, anormal hücre morfolojisi veya aşikar hücre kaybı nekrotik olarak atılır gerekir. </li><li> Yaralı olarak onlar birkaç çekirdek içeren bir inceltilmiş sitoplazmasını varsa tübüllerini sınıflandırır. Bunun aksine, geri kazanılması üzerine daha fazla Normal hücre ile daha fazla çekirdek ihtiva eden tübüller işaret etmektedir. </li><li> Tübül toplam sayısının bir yüzdesi olarak, her borucuk sınıflandırma ifade eder. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Kinsey, G. R., Li, L., Okusa, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+in+acute+kidney+injury.">Inflammation in acute kidney injury.</a> Nephron Exp Nephrol. 109, (2008).</li><li>Wei, Q., Dong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+ischemic+acute+kidney+injury:+technical+notes+and+tricks.">Mouse model of ischemic acute kidney injury: technical notes and tricks.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 303, (2012).</li><li>Ferenbach, D. A., Kluth, D. C., Hughes, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemeoxygenase-1+and+renal+ischaemia-reperfusion+injury.">Hemeoxygenase-1 and renal ischaemia-reperfusion injury.</a> Nephron Exp Nephrol. 115, (2010).</li><li>Ferenbach, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+induction+of+macrophage+hemeoxygenase-1+is+protective+during+acute+kidney+injury+in+aging+mice.">The induction of macrophage hemeoxygenase-1 is protective during acute kidney injury in aging mice.</a> Kidney Int. 79, 966-976 (2011).</li><li>Ferenbach, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage/monocyte+depletion+by+clodronate,+but+not+diphtheria+toxin,+improves+renal+ischemia/reperfusion+injury+in+mice.">Macrophage/monocyte depletion by clodronate, but not diphtheria toxin, improves renal ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Kidney Int. 82, 928-933 (2012).</li><li>Ferenbach, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+expressing+heme+oxygenase-1+improve+renal+function+in+ischemia/reperfusion+injury.">Macrophages expressing heme oxygenase-1 improve renal function in ischemia/reperfusion injury.</a> Mol Ther. 18, 1706-1713 (2010).</li><li>Keppler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+creatinine+determination+in+mice+and+rats:+an+enzymatic+method+compares+favorably+with+a+high-performance+liquid+chromatography+assay.">Plasma creatinine determination in mice and rats: an enzymatic method compares favorably with a high-performance liquid chromatography assay.</a> Kidney Int. 71, 74-78 (2007).</li><li>Vinuesa, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+involvement+in+the+kidney+repair+phase+after+ischaemia/reperfusion+injury.">Macrophage involvement in the kidney repair phase after ischaemia/reperfusion injury.</a> J Pathol. 214, 104-113 (2008).</li><li>Friedewald, J. J., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+cells+in+ischemic+acute+renal+failure.">Inflammatory cells in ischemic acute renal failure.</a> Kidney Int. 66, 486-491 (2004).</li><li>Gandolfo, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxp3++regulatory+T+cells+participate+in+repair+of+ischemic+acute+kidney+injury.">Foxp3+ regulatory T cells participate in repair of ischemic acute kidney injury.</a> Kidney Int. 76, 717-729 (2009).</li><li>Burne, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+CD4++T+cell+as+a+major+pathogenic+factor+in+ischemic+acute+renal+failure.">Identification of the CD4+ T cell as a major pathogenic factor in ischemic acute renal failure.</a> J Clin Invest. , 1283-1290 (2001).</li><li>Burne-Taney, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B+cell+deficiency+confers+protection+from+renal+ischemia+reperfusion+injury.">B cell deficiency confers protection from renal ischemia reperfusion injury.</a> J Immunol. 171, 3210-3215 (2003).</li><li>Kinsey, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+suppress+innate+immunity+in+kidney+ischemia-reperfusion+injury.">Regulatory T cells suppress innate immunity in kidney ischemia-reperfusion injury.</a> J Am Soc Nephrol. 20, 1744-1753 (2009).</li><li>Li, L., Okusa, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages,+dendritic+cells,+and+kidney+ischemia-reperfusion+injury.">Macrophages, dendritic cells, and kidney ischemia-reperfusion injury.</a> Semin Nephrol. 30, 268-277 (2010).</li><li>Lin, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+Wnt7b+is+critical+for+kidney+repair+and+regeneration.">Macrophage Wnt7b is critical for kidney repair and regeneration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 4194-4199 (2010).</li><li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+macrophage+phenotypes+contribute+to+kidney+injury+and+repair.">Distinct macrophage phenotypes contribute to kidney injury and repair.</a> J Am Soc Nephrol. 22, 317-326 (2011).</li><li>Kumar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexamethasone+ameliorates+renal+ischemia-reperfusion+injury.">Dexamethasone ameliorates renal ischemia-reperfusion injury.</a> J Am Soc Nephrol. 20, 2412-2425 (2009).</li><li>Sharples, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+protects+the+kidney+against+the+injury+and+dysfunction+caused+by+ischemia-reperfusion.">Erythropoietin protects the kidney against the injury and dysfunction caused by ischemia-reperfusion.</a> J Am Soc Nephrol. 15, 2115-2124 (2004).</li><li>Gueler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statins+attenuate+ischemia-reperfusion+injury+by+inducing+heme+oxygenase-1+in+infiltrating+macrophages.">Statins attenuate ischemia-reperfusion injury by inducing heme oxygenase-1 in infiltrating macrophages.</a> Am J Pathol. 170, 1192-1199 (2007).</li><li>Delbridge, M. S., Shrestha, B. M., Raftery, A. T., ElNahas, A. M., Haylor, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+body+temperature+in+a+rat+model+of+renal+ischemia-reperfusion+injury.">The effect of body temperature in a rat model of renal ischemia-reperfusion injury.</a> Transplant Proc. 39, 2983-2985 (2007).</li></ol>

The authors have no competing or conflicting interests to disclose.

Böbrek IRI hiçbir spesifik tedavi ile AKI önemli bir nedenidir. Renal IRI deneysel çalışma makrofajlar, dendritik hücreler, lenfositler, düzenleyici T-hücreleri ve aynı zamanda başka hücreler ve akut yaralanma ve faz 5,8 iyileşme her iki indüklenmesinde aracılar rolünü gösteren önceki çalışma ile, son derece bilgilendirici olmuştur - 16. Buna ek olarak, deneysel renal IRI çeşitli terapötik maddelerin 4,17-19 etkisini değerlendirmek için kullanılmıştır. Burada ayrıntılı böbrek IRI modeli sağ nefrektomi yapmak ve kelepçeler kullanarak sol böbrekte iskemi ikna etmek için bir orta hat laparotomi yaklaşım kullanır. Iskemi süresini değiştirerek, temsili sonuçlar ile gösterildiği gibi, yaralanma şiddetini kontrol edebilir. Bu nedenle, bu modeli ortaya deneysel söz gerektirdiği gibi, hafif, orta ya da böbrek hasarı yüksek düzeyde bir indükleme ayarlanabilir. Ancak, bu modelin bir sınırlama olduğunu daUzun süreli böbrek iskemi ile çok şiddetli böbrek hasarı endüksiyonu için uygun değildir. Çıkan şiddetli akut böbrek fonksiyon bozukluğu anlamlı mortaliteye neden olabilir. Öngörülebilir ve tekrarlanabilir böbrek hasarı elde etmek için çok önemli olan bu modelin çeşitli yönleri vardır. Bu model ile değişkenliğin önemli bir kaynak iskemik periyot süresince 20 vücut sıcaklığına kaynaklı olabilir. Bu, vücut ısısı sabit bir seviyede tutulur ve iskemik dönem boyunca izlenir bu nedenle önemlidir. Bu protokolde sıcaklık probları ve homoeothermic battaniye ile bir kontrol birimi, 37 ° C&#39;de oto-regüle vücut sıcaklığı için kullanılmıştır Iskemik yaralanmaya böbreğin duyarlılık vücut sıcaklığının etkisi de tarif edilmektedir. Önceki çalışma vücut ısısı renal IRI 20 ile farelerin vücut sıcaklığında değişim potansiyel bir karıştırıcı olan şiddetini etkilediğini göstermiştirsonuçların yorumlanmasını etkileyebilecek faktör. Diğer bir önemli husus farenin sol böbrek kaynağı ilave kan damarları ile anatomik bir çeşitlilik ortaya olmasıdır. Bu tür ek kan damarları tespit ve sağ nefrektomi yapmak ve sol böbrekte küresel iskemi uyaran zaman tıkalı olması önemlidir. Aksi takdirde böbrek boyunca tutarsız iskemi neden olur. Benzer bir şekilde, sol renal pedikül sol böbrek aşağıdaki sıkma renk değişikliği başlangıçta dikkatli bir şekilde tespit edilmemiş olan ek bir renal arter varlığı genel bir renk değişiklik yokluğu olarak göstermektedir incelenmelidir. Iki taraflı böbrek iskemi kullanmak modellerinin aksine, bu model genlerin ekspresyonunu modüle etmek için ilaçlar ya da diğer ajanlar profilaktik uygulama kullanan araştırmacılar için ilgi çekici olacaktır, protein vs önce renal yaralanması. Teçhizatht nefrektomi doku hem de teyit etmek için kullanılır ve endüktif veya her bir deneysel hayvan içinde, ilgi konusu moleküle inhibisyonu seviyesini ölçmek edilebilir. Akut yaralanma faz belirgin tübüler çoğalması tarafından takip edilir Bu model aynı zamanda böbrek rejenerasyon okuyan araştırmacılar için ilgi olacaktır. Belirgin hastalık sadece farelerin belirli türlerinde indüklenebilir böbrek iltihabı bazı deneysel modellerde sınırlıdır. Bunun aksine, renal IRI modeli, burada açıklanan çok yönlü ve 5 erkek ve dişi fareler 4, farelerin farklı suşları hem de yaşlı farelerde 4 hem de uygulanabilir.

Iskemi reperfüzyon hasarı (IRI) böbrek, kalp ve beyin dahil olmak üzere birden organları için yaralanma yaygın biçimidir. Böbrek IRI hastalarda akut böbrek hasarı (ABH) yol açabilir ve hiçbir spesifik tedavi mevcuttur. IRI sonucu AKI doğal ve adaptif immün yanıtı 1 hem de içeren karmaşık bir patogenezi. Böbrek IRI bir deneysel model anahtar hücreleri ve AKI patogenezinde hem de sonraki günlerde gelişir sonraki böbrek rejenerasyon yer arabulucular incelemek için potansiyel sunmaktadır. Bundan başka hastalık süreçleri üzerine yeni terapötik maddelerin etkisi değerlendirilebilir. Böbrek IRI deneysel modelinin genel amacı burada tarif hem akut fonksiyonel ve yapısal böbrek hasara yol etmektir. Bazı araştırmacılar bilateral IRI 2&#39;nin uyarılmasını içeren bir modeli kullanmışlardır. Bilateral renal IRI modeli, kullanım tek taraflı ren olmasına rağmenal IRI modeli cerrahi anda yapılmakta olan bir sağ nefrektomi avantajına sahiptir. Sağ nefrektomi doku ya da yol açma ya da bir gen ya da proteinin ekspresyonunu bastıran bir ön-muamele aşamasını içeren çalışmalarda olduğu gibi değerli kontrol doku vermektedir. Örneğin, biz 24 saat böbrek IRI 3 önce heme arjinatın önşartlama etkilerini (HA) enjeksiyonu değerlendirmek için bu modeli kullandık. IRI önce HA ile sitokoruyucu enzim heme oksijenaz-1-(HO-1) başarılı bir şekilde indüksiyon doğru nefrektomi kontrol dokusu 4 doğrulanmıştır. HA bir HO-1 bağımlı mekanizma yoluyla kısmen yaşlı farelerde böbrek IRI azalttı. Benzer şekilde, böbrek IRI 5 makrofajların rolünü incelemek için makrofaj tükenmesi çalışmalarda modelini kullandık. Sağ nefrektomi dokusunun immünohistokimyasal analizi, ablasyon metodoloji etkinliğini teyit etmek için kullanılabilir. Sağ nefrektomi doku hem de bu nedenle onaylamak için kullanılan ve seviyesini ölçmek edilebilirnduction ya da her bir deneysel hayvan içinde, ilgi konusu moleküle inhibisyonu. Bu model önce renal IRI indüklenmesine genlerin veya proteinlerin vs ekspresyonunu modüle etmek için ilaçlar veya diğer bileşikler kullanan araştırmacılar, ilgi çekici olacaktır. Diğer çalışmalar böbrekleri erişmek için yan kesiler kullandık. Burada açıklanan model sağ nefrektomi hem gerçekleştirmek ve sol böbrek iskemi reperfüzyon ikna etmek için tek bir orta hat karın ameliyatı kullanır. Bu cerrahi yaklaşım böbrek pedikül sıkılmasına takip böbrek pediküller ve renk değişiklikleri de dahil olmak üzere, cerrahi alanında mükemmel görselleştirme sağlar. Modeli 4-6 ile yayınlanan deneyim fareler hızlı bir şekilde neredeyse% 100 hayatta kalma oranı ile cerrahi kurtarmak olduğunu gösterir. Son olarak, 7 günlük bir süre boyunca, modelin kinetik analizi, bu model, renal fonksiyon ve boru bütünlüğü hem de geri yükleme sergiler gösterir, ileönemli ölçüde boru şeklinde bir hücre çoğalması.

<table><tbody><tr><td>Tissue scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14072 - 10</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Adson forceps (Rat toothed)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11019 - 12</td><td></td></tr><tr><td>S&amp;amp;T JFA-5bTC Forceps - SuperGrip Angled</td><td>Fine Science Tools</td><td>00649-11</td><td></td></tr><tr><td>Colibri retractor</td><td>Fine Science Tools</td><td>17000 - 04</td><td></td></tr><tr><td>Micro clip applicator</td><td>Fine Science Tools</td><td>18057-14</td><td></td></tr><tr><td>Micro serrafines&amp;nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-04</td><td></td></tr><tr><td>Olsen-Hegar needle holder</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002 - 12</td><td></td></tr><tr><td>Hemoclip Plus Ligating Clips Small</td><td>Weck</td><td>533837</td><td></td></tr><tr><td>Autoclip Wound Clip System, 9mm</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PY2 52-3748</td><td></td></tr><tr><td>Silk Black Braided Suture, Size 6-0</td><td>Harvard Apparatus</td><td>723288</td><td></td></tr><tr><td>Standard Heat Matt</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Homeothermic Blanket &amp;amp; Control Unit</td><td>Harvard Apparatus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lacri-Lube</td><td>Allergan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vetasept Chlorhexidine&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>AnimalCare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vetalar : Ketamine hydrochloride</td><td></td><td></td><td>100 mg/ml solution</td></tr><tr><td>Domitor : medetomidine hydrochloride&amp;nbsp;</td><td></td><td></td><td>1 mg/ml</td></tr><tr><td>Vetergesic : Buprenorphine hydrochloride&amp;nbsp;</td><td></td><td></td><td>0.3 mg/ml</td></tr><tr><td>Antisedan : Atipamezole hydrochoride</td><td></td><td></td><td>5 mg/ml</td></tr></tbody></table>

renal ischaemia reperfusion injury: a mouse model of injury and regeneration

Renal iskemi reperfüzyon hasarı (IRI) hastalarda ve böbrek kan akımının tıkanması akut böbrek hasarı (ABH) ortak bir nedenidir böbrek nakli sırasında kaçınılmazdır. , Doğru ve tekrarlanabilir renal IRI özetlemek deneysel modeller AKI patofizyolojisi ve yeni terapötik maddelerin geliştirilmesi diseksiyon çok önemlidir. Tekrarlanabilir AKI sonuçlanan böbrek IRI bir fare modeli burada sundu. Bu bir kesi kontrol dokusu ve sol böbrek iskemi ikna etmek için sol renal pedikül kenetlenmesini sağlayan bir sağ nefrektomi hem izin ile ameliyat için bir orta hat laparotomi yaklaşımı ile elde edilir. Iskemi döneminde kelepçe pozisyonu ve vücut sıcaklığının dikkatli izleyerek bu modeli tekrarlanabilir işlevsel ve yapısal hasarı ulaşır. Fareler, serum veya plazma kreatinin seviyesinin yüksekliği hem de böbrek fonksiyon kaybı gösteren ameliyattan sonra 24 saat kurban yapılarbelirgin akut tübüler nekroz ile sal böbrek hasarı. Böbrek fonksiyonu artırır ve akut doku hasarı bu model böbrek rejenerasyon çalışması için kullanılabilir şekilde böbrek IRI izleyen 7 gün süresince giderir. Renal IRI Bu model, moleküler ve hücresel AKI patofizyolojisi hem de daha sonraki böbrek rejenerasyon analiz incelemek için kullanılmıştır.

Borulu yaralanma ve kurtarma H &amp; E tarafından değerlendirilecek veya böbrek IRI aşağıdaki doku kesitlerinin PAS boyama olabilir. Osom içinde bulunan Tübüller hücre morfolojisi, bütünlük ve çekirdekler numarası (Şekil 1) göre, sağlıklı yaralı, nekrotik veya kurtarma olarak sınıflandırılır. Bu modelde fonksiyonel ve yapısal hasarı, iskemi süresine bağlıdır. Iskemi süresi (Şekil 2), 2 dakika artışlarla arttırılır plazma kreatinin ve BUN ile değerlendirilen renal disfonksiyon şiddetinde bir progresif artış, belirgindir. ATN skoru anlaşıldığı yapısal böbrek hasarının derecesi, daha ağır ATN fazla uzamış iskemi (Şekil 3) eşlik benzer bir trend izlemektedir. Iskemi değişik sürelerde bir başlangıç ​​titrasyonu takiben, böbrek IRI bu model surger aşağıdaki fonksiyonel ve yapısal hem de yaralanma gelişen tüm fareler, neredeyse% 100 başarı oranı elde edilmelidiry. Renal IRI Bu model aynı zamanda hayvanlar (Şekil 2 ve 3) arasında gözlemlenen sınırlı varyasyon ile yaralanma derecesi üzerinde kontrol iyi bir düzeyde sağlar. Iskemi farklı süreli kullanım hasarı şiddeti farklı seviyelerini modüle etme kabiliyetleri açısından incelenmesi gereken tedavi edici müdahaleler sağlar. Örneğin iskemi uzunluğuna dayanarak elde edilen hasarı (22 dakika) veya yüksek (24 dakika), (20 dakika) hafif, orta olarak kabul edilebilir. Erkek Balb / c fareleri, 8 hafta arası ve sadece bilgi olarak dahil edilir için bu değerlerdir. Bu fare zorlanma, yaş, cinsiyet ve böbrek fonksiyonunu değerlendirmek için kullanılan biyokimyasal tahlil göre farklılık gibi Müfettişler kendi deneysel koşulları oluşturmalıdır. Bu model, başarılı bir renal fonksiyon ve yapı hem de takip eden gün boyunca geri kazanılması ile renal IRI aşağıdaki rejenerasyon incelemek için kullanılmıştır. Bir kademeli plazma kreatinin düşüş ve BUN düzeyleri atıl olankazanır &#39;mantığıyla, plazma kreatinin günde 7 (Şekil 4) ile bazal düzeylere geri dönmesi ile. H &amp; E boyanmış doku bölümlerinin bir değerlendirme tübül artan sayıda sağlıklı ya da doku yenilenmesi (Şekil 5) söz konusu olduğu gösteren, 4. günde kıyasla 7. günde iyileşme olarak sınıflandırılır olduğunu gösterir. 5-bromo-2&#39;-deoksiüridin idaresi (BrdU), kesilmeden önce BrdU için böbrek dokusunun immünohistokimyasal ve boru şeklindeki hücre çoğalması sonraki ölçümü kolaylaştırır. Dramatik nükleer BrdU ifade tübül tübül bütünlüğünü ve fonksiyonunu (Şekil 6) geri yüklemek için işaretlenmiş hücre çoğalmasını geçirmekte belirten böbrek IRI aşağıdaki 4 gün görülmektedir. Yapısal iyileştirme ve BrdU immün için böbrek fonksiyon değerlendirme, puanlama kombinasyonu renal IRI Aşağıdaki rejenerasyon çalışması için kullanılacak bu modeli sağlar. Bu terapötik müdahalelerin uzun vadeli etkileri olmasını sağlararaştırılmadıkça. Son olarak, bu modelin programı tüm böbrek global iskemi endüksiyonu bağlıdır ve bu ana sol renal arter ek olarak, böbrek besleyen kan damarlarının varlığı ile işgal edilebilir. Bu ek kaplar kenetlenmiş değildir sonra böbrek parçası iskemik hasarı (Şekil 7) tabi olmayacaktır. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51816/51816fig1highres.jpg" width="500" /> Şekil 1 boru biçimindeki yapı hasarı ve yenilenme Puanlama -.. Sağlıklı Örnek morfolojisi, kurtarma yaralı ve nekrotik tübüller böbrek doku, renal IRI takip eden 4 gün çıkarılır değerlendirilmesi için PAS ile boyanır. Osom içinde bulunan Tübüller göre, sağlıklı yaralı, nekrotik veya kurtarma olarak sınıflandırılırtemsili örneklerle hücre morfolojisi, bütünlük ve çekirdekler numarası vurgulanır. Sağlıklı tübüller normal hücresel morfoloji ile bozulmamış. Nekrotik tübüller belirgin hücre kaybı ve hücre morfolojisi kaybı ile bir tehlikeye tek tabaka gösterirler. Yaralı tübüller, inceltilmiş bir hücresel mono-katman sergiler ve daha az çekirdek içerir. Bunun aksine, geri kazanılması tübülleri sağlıklı tübüller daha normal bir hücre morfolojisi ve çekirdeklerin benzer sayıda sergiler. Büyütme:. 400x <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51816/51816fig1highres.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51816/51816fig2highres.jpg" width="500" /> Şekil 2. Yaralanma -. Renal iskemi böbrek fonksiyonunu bozar Erkek Balb / c fareleri 8 hafta sağ nefrektomi yaşlı ve.Sol böbrek pedikül 20, 22 veya 24 dakika boyunca (her grupta n = 4) için kenetlendi. Fareler renal IRI takip eden 24 saat sonra kurban edilmiştir. Plazma kreatinin ve kan üre azotu artan iskemisi uzunluğu olarak şiddeti giderek artan bir eğilim göstermektedir. Kesikli çizgi, normal kontrol farelerinde bulunan plazma kreatinin ve kan üre azot düzeylerini temsil eder. Ortalama ± SEM olarak sunulan ve tek yönlü ANOVA ile analiz verileri. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51816/51816fig2highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51816/51816fig3highres.jpg" width="500" /> . Şekil 3 Yaralanma - Böbrek iskemi önemli akut tübüler nekroz neden 8 hafta, erkek Balb / c fareleri sağ nefrektomi ve sol renal pedikül cl oldu.20, 22 veya 24 dakika boyunca (grup başına n = 4) için yükseltti. Fareler renal IRI takip eden 24 saat sonra kurban edilmiştir. Temsilci fotomikrografları: kontrolü ve yaralı böbreklerde H &amp; E boyalı böbrek bölümlerde Osom ait (Büyütme 200x) ATN göstermektedir. (Nekrotik tübüller oranı olarak ifade edilir) ATN Formal skorlama iskemi artan süresi yaralanma yüksek düzeyini teyit etmektedir. Veriler ortalama ± SEM olarak sunulur ve tek yönlü ANOVA (**** = P ≤ 0.0001) ile analiz. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51816/51816fig3highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51816/51816fig4highres.jpg" width="500" /> . Şekil 4 Rejenerasyon - Böbrek fonksiyonu böbrek iskemi aşağıdaki kurtarır Erkek FVB fareler ag.ed: 8 - 10 hafta sol böbrek önce iskemi 25 dakika sağ nefrektomi yapıldı. Fareler 4 gün (n = 10) ya da 7 gün (n = 6) renal IRI takiben, 1 gün (n = 10) kurban edilmiştir. Plazma kreatinin ve kan üre azotu hem de giderek plazma kreatinin böbrek fonksiyonlarında bir iyileşme gösteren, bazal düzeylere geri dönmesi ile, 7 gün boyunca düşüş. Veriler ortalama ± SEM olarak sunulur ve tek yönlü ANOVA (*** = P ≤ 0.001, * = P ≤ 0.05) ile analiz. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51816/51816fig4highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51816/51816fig5highres.jpg" width="500" /> Şekil 5 Rejenerasyon -. Renal doku rena aşağıdaki iyileşme belirtileri gösterir<html> . l iskemi Erkek FVB fareler yaşları 8-10 hafta sol böbrek önce iskemi 25 dakika sağ nefrektomi yapıldı. Fareler feda 4 gün (n = 10) ya da 7 gün (n = 6) renal IRI takip edilmiştir. Temsil edici fotomikrografikler: iskemisi indüksiyonundan sonra Osom of (200x büyütme) gösterilmiştir. Yaralı kurtarma sağlıklı sayısı, ya Osom içindeki nekrotik Tübüllerin resmi puanlama PAS boyanmış parafin bölümlerde değerlendirildi. Hala yaralı görünen Osom içindeki tübüllerin büyük bir kısmı böbrek IRI aşağıdaki 4. günde. Ancak 7 gün sağlıklı veya böbrek rejenerasyon göstergesi kurtarma olarak sınıflandırılır tübüllerinin oranında önemli bir artış var. Ortalama ± SEM olarak sunulan veriler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51816/51816fig5highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> lways &quot;&gt; <img alt="Şekil 6," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51816/51816fig6highres.jpg" width="500" /> . Şekil 6 Rejenerasyon - Dram boru şeklinde yayılması böbrek iskemi aşağıdaki bariz 4 gün 8 yaşındaki erkek FVB fareler -. 10. hafta sol böbrek önce iskemi 25 dakika sağ nefrektomi yapıldı. BrdU (50 mg / kg) feda 24 saat önce intraperitonal enjeksiyon ile tatbik edilmiştir. Fareler feda 4 gün (n = 10) ya da 7 gün (n = 6) renal IRI takip edilmiştir. Temsil edici fotomikrografikler: farelerden Osom of (200x büyütme) Gün 4 ve iskemi indüksiyonundan sonra 7. günde kurban gösterilmiştir. Tübüler hücre çoğalması parafin böbrek bölümlerinde BrdU için immünohistokimyasal boyama ile değerlendirildi. Boru hücre proliferasyon artan hücre çoğalmasıyla Osom olarak BrdU pozitif çekirdeklerin sayısını sayarak ölçülmüştür4. günde belirgindir. Veriler ortalama ± SEM sundu ve öğrencilerin t-testi (*** = P ≤ 0.001) tarafından analiz. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51816/51816fig6highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 7" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51816/51816fig7highres.jpg" width="500" /> Şekil 7. Olmayan tıkalı ek böbrek kan damarları ile iskemik böbrek Sol. Böbreği besleyen kan damarlarını tıkamak ek Başarısızlık tutarsız iskemi yol açar. Mikro serrafine klip konumda olduğunda (A) genel böbrek iskemi yokluğu düzgün olmayan bir renk değişimi (beyaz ok) ile gösterilir. (B) mikro serrafine klibin ayrılmasından sonra, ana renal arter ve ven temin ilave damarıyla, birlikte (beyaz ok) görebilirböbrek (siyah ok) orta ve alt kutup. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51816/51816fig7highres.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration at JoVE.com

Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration

The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

Renal İskemi Reperfüzyon Hasarı: Yaralanma Fare Modeli ve Rejenerasyon

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable ...

renal-ischaemia-reperfusion-injury-mouse-model-injury

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

49.6K Görüntüleme.  University of Edinburgh. The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

Video: Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused by whole-body hypoperfusion.5,6 Successful reproduction of whole-body hypoperfusion in rodent models has been fraught with 
difficulty.7-9,9,10 Models which employ focal ischemia have repeatedly demonstrated results which do not translate to the clinical setting, and larger 
animal models which allow for whole body hypoperfusion lack access to the full toolset of genetic manipulation possible in the mouse.11,12 However, in recent 
years a mouse model of cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation has emerged which can be adapted to model AKI.13 This model reliably reproduces 
physiologic, functional, anatomic, and histologic outcomes seen in clinical AKI, is rapidly repeatable, and offers all of the significant advantages of a murine surgical 
model, including access to genetic manipulative techniques, low cost relative to large animals, and ease of use. Our group has developed extensive experience 
with use of this model to assess a number of organ-specific outcomes in AKI.14,15

A powerful model for perioperative and critical care related acute kidney injury is presented. Using whole body hypoperfusion induced by cardiac arrest it is possible to nearly replicate the histologic and functional changes of clinical AKI.

Normotermik Kardiyak Arrest ve Kardiyopulmoner Resusitasyon: İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Tıp

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

Farelerde Akut Böbrek Hasarı ve Post Yaralanma Fibrozis iskemi-reperfüzyon Model

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Bağırsak İskemi-reperfüzyon Hasarı Murin Modeli

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

An Effective Mouse Model of Unilateral Renal Ischemia-Reperfusion Injury

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models are the only available resources that mimic the complexities of the IRI-associated damage encountered in vivo. This paper describes an effective mouse model of unilateral renal IRI that delivers highly reproducible data. Ischemia is induced by occluding the right renal pedicle for 30 min followed by reperfusion. In addition to the surgical procedure, a sequential overview of the expected physiological and histopathological changes following renal IRI will be provided by comparing data from seven different reperfusion times (4 h, 8 h, 16 h, 1 day, 2 days, 4 days, and 7 days). Critical data for planning experiments ahead, such as mean surgical time, average anesthetic consumption, and body weight changes over time, will be shared. This work will help researchers implement a reliable renal IRI model and select the appropriate reperfusion time that aligns with their intended investigative goals.

Renal ischemia-reperfusion injury is associated with high morbidity and mortality in hospitalized patients. Here, we present a simple and effective mouse model of unilateral renal ischemia-reperfusion injury and provide a sequential overview of representative pathological changes observed in the kidney.

Tek Taraflı İskemi-Reperfüzyon Hasarının Etkili Bir Fare Modeli

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models ...

Induction of Myocardial Infarction and Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury in Mice

Acute myocardial infarction is a common cardiovascular disease with high mortality. Myocardial reperfusion injury can counteract the beneficial effects of heart reflow and induce secondary myocardial injury. A simple and reproducible model of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury is a good tool for researchers. Here, a customizable method to create a myocardial infarction (MI) model and MIRI by precision ligation of the left anterior descending coronary artery (LAD) through micromanipulation is described. Accurate and reproducible ligature positioning of the LAD helps obtain consistent results for heart injury. ST-segment changes can help to identify model accuracy. The serum level of cardiac troponin T (cTnT) is used to assess the myocardial injury, cardiac ultrasound is employed to evaluate the myocardial systolic function, and Evans-Blue/triphenyl tetrazolium chloride staining is used to measure infarct size. In general, this protocol reduces procedure duration, ensures controllable infarct size, and improves mouse survival.

Here we describe a simple and reproducible method that can induce myocardial infarction or myocardial ischemia-reperfusion injury in mice by precision ligation of the left anterior descending coronary artery through micromanipulation.

Farelerde Miyokard Enfarktüsü ve Miyokard İskemi-Reperfüzyon Hasarının İndüksiyonu

Acute myocardial infarction is a common cardiovascular disease with high mortality. Myocardial reperfusion injury can counteract the beneficial effects of ...

Technical Refinement of a Bilateral Renal Ischemia-Reperfusion Mouse Model for Acute Kidney Injury Research

Cardiac arrest poses a large public health burden. Acute kidney injury (AKI) is an adverse marker in survivors of cardiac arrest following the return of spontaneous circulation (ROSC) after successful cardiopulmonary resuscitation. Conversely, recovery of kidney function from AKI is a predictor of favorable neurological outcomes and hospital discharge. However, an effective intervention to prevent kidney damage caused by cardiac arrest after ROSC is lacking, suggesting that additional therapeutic strategies are required. Renal hypoperfusion and reperfusion are two pathophysiological mechanisms that cause AKI after cardiac arrest. Animal models of ischemia-reperfusion-induced AKI (IR-AKI) of both kidneys are comparable with patients with AKI following ROSC in a clinical setting. However, IR-AKI of both kidneys is technically challenging to analyze because the model is associated with high mortality and wide variation in kidney damage, which may affect the analysis. Lightweight mice were chosen, placed under general anesthesia with isoflurane, subjected to surgery with a dorsolateral approach, and their body temperature maintained during operation, thereby reducing tissue damage and establishing a reproducible acute renal IR-AKI research protocol.

This study established a protocol focusing on the technical refinement of a mouse model of bilateral renal ischemia-reperfusion for acute kidney injury research.

Akut Böbrek Hasarı Araştırmaları için Bilateral Renal İskemi-Reperfüzyon Fare Modelinin Teknik İyileştirilmesi

Cardiac arrest poses a large public health burden. Acute kidney injury (AKI) is an adverse marker in survivors of cardiac arrest following the return of ...

Developing Murine Acute Kidney Injury Model Using Bilateral Ischemia-Reperfusion

Bilateral Renal Ischemia-Reperfusion Model for Acute Kidney Injury in Mice

Acute kidney injury (AKI) is defined as a rapid decline in renal function, in which persistent kidney dysfunction gradually progresses to chronic kidney disease (CKD) due to the irreversible loss of nephrons and their maladaptive repair. In recent years, the incidence of AKI has been increasing concerning diverse etiologies, including volume depletion, sepsis, nephrotoxicity, muscle injury, and major trauma, in which ischemia-reperfusion injury (IRI)&#160;accounts for most episodes. Development of the IRI model in mice is induced by surgical clamping of the renal pedicles, which provides powerful and controllable tools for preclinical models of AKI. Importantly, the IRI model is deployed at different stages of the AKI development, especially in the processes of AKI to CKD. Despite the IRI model being widely practiced in many laboratories, a series of variables still influence the results of this model. Here, we describe the procedure of IRI model development to provide a repeatable and reliable method for researchers to explore the underlying pathogenesis in the development of AKI and the progression of AKI to CKD.

The ischemia-reperfusion injury (IRI) model can be used at different stages of acute kidney injury (AKI) development, especially during AKI to chronic kidney disease (CKD) progression. Here, we describe the procedure for IRI model development in mice via a trans-abdominal approach, clamping renal pedicles via a vascular clip to induce ischemic injury.

Acute kidney injury (AKI) is defined as a rapid decline in renal function, in which persistent kidney dysfunction gradually progresses to chronic kidney ...

Akciğer İskemi-Reperfüzyon Hasarını İncelemek için Fare Modeli

Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury

Ischemia reperfusion injury (IRI) during lung transplantation is a major risk factor for post-transplant complications, including primary graft dysfunction, acute and chronic rejection, and mortality. Efforts to study the underpinnings of IRI led to the development of a reliable and reproducible mouse model of left lung hilar clamping. This model involves a surgical procedure performed in an anesthetized and intubated mouse. A left thoracotomy is performed, followed by careful lung mobilization and dissection of the left pulmonary hilum. The hilar clamp involves reversible suture ligation of the pulmonary hilum with a slipknot, which stops the arterial inflow, venous outflow, and airflow through the left mainstem bronchus. Reperfusion is initiated by careful removal of the suture. Our laboratory uses 30 min of ischemia and 1 h of reperfusion for the experimental model in the current investigations. However, these time periods can be modified depending on the specific experimental question. Immediately prior to sacrifice, arterial blood gas can be obtained from the left ventricle after a 4 min period of right hilar clamping to ensure that the PaO2 values obtained are attributed to the injured left lung alone. We also describe a method to measure cell extravasation with flow cytometry, which involves intravenous injection of a fluorochrome-labeled antibody specific for the cell(s) to be studied prior to sacrifice. The left lung can then be harvested for flow cytometry, frozen or fixed, paraffin-embedded immunohistochemistry, and quantitative polymerase chain reaction. This hilar clamp technique allows for&#160;detailed study of the cellular and molecular mechanisms underlying IRI. Representative results reveal decreased left lung oxygenation and histologic evidence of lung injury following hilar clamping. This technique can be readily learned and reproduced by personnel with and without microsurgical experience, leading to reliable and consistent results and serving as a widely adoptable model for studying lung IRI.

Yazar Spotlight: İskemi Reperfüzyonunun Akciğer Nakli Üzerindeki Etkisine İlişkin Görüşler

The protocol outlines a feasible, reliable, and reproducible method of left pulmonary hilar clamping that can be used to study lung ischemia-reperfusion injury in mouse models.