The present study was supported by grants from Kidney Research UK (ST4/2011), the Cunningham Trust (CT11/14) and the Mrs EA Hogg's Charitable Trust.

NOTA:. Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti in conformità con le linee guida e regolamenti imposti dalle Animals (Scientific Procedures) Act 1986 le procedure sono state condotte utilizzando (autoclave), strumenti e materiali di consumo chirurgici sterili. Mentre il modello murino di renale IRI presentato qui è stato eseguito su un 8 settimane di età maschio topo BALB / c può essere riproducibile eseguita su una varietà di ceppi murini di qualsiasi genere tipicamente di età compresa tra 7 - 15 settimane con l&#39;essere età ottimale 8 settimane. I dati presentati nella sezione dei risultati rappresentante è stato ottenuto sia da Balb / c e topi FVB. L&#39;applicazione della soluzione salina riscaldata viene utilizzata per mantenere l&#39;intestino e zona chirurgica umido ma deve essere attentamente monitorata e mantenuta al minimo in quanto l&#39;eccessiva applicazione di fluidi può portare ad un abbassamento del artefatta siero o plasma livelli di creatinina, che è un importante lettura sperimentale. 1. Preparazione degli animali e laparotomia &lt;ol&gt; <li> Anestetizzare il mouse con ketamina cloridrato (70 mg / kg) e cloridrato medetomidina (1 mg / kg) per via intraperitoneale e confermare la profondità di anestesia da perdita dei riflessi es pizzico piedi. La durata del piano anestetico risultante è di 4 ore. Questo è sufficiente per eseguire l&#39;intera procedura chirurgica e non è richiesta anestesia supplementare. </li><li> Rimuovere i capelli che circonda la zona di incisione, assicurarsi che l&#39;area è priva di capelli sciolti, e disinfettare la cute addominale utilizzando una soluzione diluita di clorexidina. </li><li> Posizionare il mouse su un tappetino riscaldato chirurgico in posizione supina e fissare gli arti superiori e inferiori al pad con bassa aderenza del nastro adesivo. Assicurarsi che le estremità superiori sono mantenuti in una posizione atta ad impedire la compressione del polmone. Durante tutta la procedura di monitorare il mouse per ustioni termiche. Se possibile, si consiglia di utilizzare una fonte di calore non elettrica. </li><li> Amministrare il cloridrato analgesico buprenorfina (0,06 mg / kg)sottocutanea e applicare lubrificante occhio agli occhi per evitare l&#39;essiccazione della cornea. Gli analgesici vengono somministrati pre-operatorio, al fine di aiutare il recupero post-chirurgico. </li><li> Utilizzo di tessuto che separa le forbici o una lama da bisturi fare una incisione mediana laparotomia e senza mezzi termini separare la pelle dal peritoneo. Questo permette alla pelle e peritoneo essere suturato separatamente durante la chiusura della ferita. Un&#39;incisione della linea alba avascolare è fatto che dà accesso alla cavità peritoneale. </li><li> Per creare una visione chiara della zona chirurgica inserire un divaricatore e drappo con il mouse. </li></ol> 2. Divisione uretere destro e nefrectomia <ol><li> Spingere delicatamente l&#39;intestino verso il lato sinistro della cavità addominale mediante tamponi di cotone sterilizzati in autoclave inumiditi con soluzione salina per esporre il rene destro e uretere. Coprire l&#39;intestino con tende inumiditi per evitare l&#39;essiccazione. </li><li> Sollevare l&#39;uretere destro con pinze ad angolo. Legare l&#39;uretere destro due volte con 6/0 silsutura k-treccia. Per gli esperimenti a lungo termine, utilizzare suture assorbibili per tutti gli interventi chirurgici addominali. </li><li> Dividere l&#39;uretere tra le suture. Mentre la giunzione vescico-ureterale dovrebbe impedire la fuoriuscita di urina nel peritoneo dalla vescica l&#39;uretere è legatura come una salvaguardia contro eventuali perdite post-operatorio durante gli esperimenti a lungo termine. </li><li> Per consentire un più facile accesso quando si esegue la nefrectomia destra, spingere delicatamente il fegato e verso destra con un batuffolo di cotone inumidito e tenere in posizione con una garza inumidita per esporre l&#39;arteria renale destra e la vena. </li><li> Senza mezzi termini sezionare il tessuto connettivo ed il grasso lungo la faccia mediale del rene destro per quanto riguarda l&#39;arteria renale destra e la vena. </li><li> Creare un canale sotto l&#39;arteria e la vena renale facendo scorrere attentamente le pinze angolate sotto i vasi sanguigni. Guidare la pinza sotto con le punte chiuse e rimuovere delicatamente con le punte aperte per facilitare la formazione del canale.</li><li> Ripetere passo 2.6 fino a quando le punte della pinza sono visibili attraverso i tessuti connettivi appena sopra l&#39;arteria e la vena renale. Una volta visibile strofinare delicatamente le punte della pinza contro le punte di un altro set di pinze ad angolo per rompere delicatamente il tessuto connettivo. </li><li> Con l&#39;arteria renale e la vena chiaramente accessibili possono ora essere occluse. Far scorrere delicatamente pinze ad angolo sotto l&#39;arteria renale e la vena con le punte chiuse. Una volta sul posto aprire le punte della pinza e guidare l&#39;applicatore di clip emostatica tra le punte e saldamente applica una clip emostatica sulla arteria renale e la vena vicino al rene. In alternativa, l&#39;arteria renale e la vena possono essere ligati con 6/0 intrecciata seta sutura. </li><li> Dividere l&#39;arteria renale e la vena occlusa vicino al rene, che ora può essere rimosso con ogni residuo di tessuto connettivo aderente. </li><li> Rimuovere eventuali garza usata per contenere il fegato e sostituire gli intestini con tamponi di cotone. </li></ol><ol><li> Spingere delicatamente l&#39;intestino verso il lato destro della cavità addominale con tamponi di cotone per esporre il rene sinistro e uretere e coprire con teli inumiditi. Se necessario, il pancreas possono essere deviati con una garza inumidita per consentire un più facile accesso. </li><li> Utilizzare scollamento rompere delicatamente i tessuti connettivi anteriore e posteriore per l&#39;arteria renale sinistra e la vena, e quindi creare un canale sotto i vasi in un modo simile a quello descritto in uretere divisione e destro nefrectomia passo 2.4. </li><li> Indurre ischemia del rene sinistro applicando una clip serrafine micro sulla arteria e la vena renale. Ischemia successo può essere confermata visivamente da un oscuramento graduale uniforme del rene. I vasi sanguigni in aggiunta alla arteria renale sinistra e la vena possono occasionalmente fornire il rene. Se presenti, dovranno anche essere occluso utilizzando micro clip serrafine per successo questi vasi sanguigni supplementariindurre ischemia dell&#39;intero rene. </li><li> Sostituire l&#39;intestino e con attenzione in modo che non ci siano colpi di scena improvvisi che possono portare a ischemia intestinale risultati compromettenti. Temporaneamente chiudere il peritoneo con una sola sutura. </li><li> Dopo l&#39;induzione ischemia posizionare immediatamente il mouse su una coperta omeotermale con un termistore rettale collegato ad un&#39;unità di controllo che manterrà la temperatura corporea a 37 ° C per la durata necessaria della ischemia. Per definire la lunghezza appropriata di ischemia necessari per indurre il grado desiderato di danno renale e insufficienza renale si raccomanda una titolazione essere eseguita per ogni ceppo ed esercente chirurgica. </li><li> Poco prima della fine del periodo ischemico riaprire il peritoneo e posizionare accuratamente gli intestini per consentire l&#39;accesso alla pinza e visualizzare il rene. Inserimento del riavvolgitore, come mostrato nel video, non è necessario e è stata effettuata unicamente per scopi di presentazione. </li><li> Rimuovere la clamp dopo il periodo di ischemia ha concluso. Subito dopo la rimozione del rene rapidamente cambia colore da marrone scuro a un sano rosa scuro indica riperfusione successo. </li><li> Ancora garantire che l&#39;intestino non siano attorcigliate prima di chiudere il peritoneo con un punto coperta con 6/0 sutura di seta intrecciata. Quindi chiudere la pelle con clip pelle metallica. </li><li> Per minimizzare il rischio di infezioni post-operatorie, applicare un antisettico come soluzione di iodio / alcol alla zona chirurgica. </li></ol> 4. Recupero post-operatorio e cura <ol><li> Anestesia parzialmente inversa con atipamezolo cloridrato (2 mg / kg) per via sottocutanea e somministrare fluidi con una iniezione sottocutanea di 1 ml di soluzione salina riscaldato per prevenire la disidratazione dopo l&#39;intervento. </li><li> Monitorare attentamente i topi fino a quando non hanno recuperato la coscienza, appare vigile e sono in grado di destra se stessi. </li><li> Consenti topi per recuperare in una scatola riscaldata mantenuti a 29 ° C, located in un ambiente tranquillo, per 24 ore. Topi hanno una ridotta capacità di termoregolazione a causa della anestesia ed è quindi essenziale che siano alloggiati ad una temperatura elevata per consentire il ripristino efficace. Cibo umido può essere fornita anche per incoraggiare fluido e apporto nutrizionale. </li><li> Per gli esperimenti di recupero a lungo termine forniscono analgesici in corso e rimuovere le clip di pelle 7 giorni dopo l&#39;intervento. </li></ol> 5. Valutare funzionali e strutturali danno renale e rigenerazione <ol><li> Il sangue può essere raccolto dalla vena caudale durante esperimenti o mediante puntura cardiaca al momento della eutanasia alla fine dell&#39;esperimento. Misurare la funzione renale da creatinina sierica, utilizzando un metodo basato creatinase e azoto ureico nel sangue (BUN) su un analizzatore centrifugo biochimico come descritto in precedenza 7. La funzione renale dei normali topi sani deve essere determinata prima di stabilire un modello di insufficienza renale in quanto questo può variare notevolmente depending sul metodo di analisi utilizzato ad esempio la reazione Jaffe e metodi creatinase base per la misurazione della creatinina dare risultati diversi. </li><li> Esaminare la struttura renale mediante esame istopatologico in paraffina sezioni di tessuto di rene colorate con Ematossilina ed eosina (H &amp; E) o Periodic Acid Schiff (PAS). Cattura tra 5-10 immagini a 200x di ingrandimento all&#39;interno la striscia esterna del midollo esterno (OSOM) per ogni mouse. Valutare il livello di pregiudizio nel OSOM come questa regione si è infortunato in questo modello perché è altamente vulnerabile a ipossia. </li><li> Utilizzare uno dei due sistemi di punteggio di seguito dettagliate per misurare necrosi tubulare acuta (ATN) o rigenerazione. Morfologia Rappresentante delle classificazioni utilizzate in questi sistemi è illustrato in Figura 1. </li><li> Utilizzare un semplice sistema binario a segnare ATN. Sulla base di integrità cellulare e il marchio morfologia e contare tubuli sia come valida (morfologia cellulare intatta) o necrotico (compromesso inte cellularegrity, morfologia cellulare anormale o perdita di cellule). <ol><li> Esprimere il numero di tubuli necrotiche come percentuale del numero totale di tubuli (necrotico tubuli%). </li></ol></li><li> Classificare rigenerazione utilizzando un altro sistema basato su integrità delle cellule, la morfologia e il numero di nuclei. Mark e contare tubuli sano, necrotico, feriti o recupero secondo i criteri indicati nei passaggi seguenti. <ol><li> Come per il sistema di punteggio ATN (descritto nel passo 5.4) tubuli marchio con le cellule normali intatte come sani, mentre tubuli che mostrano l&#39;integrità delle cellule compromessa, la morfologia delle cellule anormali o perdita di cellule conclamata dovrebbero essere segnati come necrotico. </li><li> Classificare tubuli come feriti se hanno un citoplasma assottigliata contenente alcuni nuclei. Al contrario, designare tubuli contenenti più nuclei con più morfologia cellulare normale come recupero. </li><li> Esprimere ciascuna classificazione tubulo come percentuale del numero totale tubulo. </li></ol></li></ol>

<ol>
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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage/monocyte+depletion+by+clodronate,+but+not+diphtheria+toxin,+improves+renal+ischemia/reperfusion+injury+in+mice.">Macrophage/monocyte depletion by clodronate, but not diphtheria toxin, improves renal ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Kidney Int. 82, 928-933 (2012).</li><li>Ferenbach, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+expressing+heme+oxygenase-1+improve+renal+function+in+ischemia/reperfusion+injury.">Macrophages expressing heme oxygenase-1 improve renal function in ischemia/reperfusion injury.</a> Mol Ther. 18, 1706-1713 (2010).</li><li>Keppler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+creatinine+determination+in+mice+and+rats:+an+enzymatic+method+compares+favorably+with+a+high-performance+liquid+chromatography+assay.">Plasma creatinine determination in mice and rats: an enzymatic method compares favorably with a high-performance liquid chromatography assay.</a> Kidney Int. 71, 74-78 (2007).</li><li>Vinuesa, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+involvement+in+the+kidney+repair+phase+after+ischaemia/reperfusion+injury.">Macrophage involvement in the kidney repair phase after ischaemia/reperfusion injury.</a> J Pathol. 214, 104-113 (2008).</li><li>Friedewald, J. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+Wnt7b+is+critical+for+kidney+repair+and+regeneration.">Macrophage Wnt7b is critical for kidney repair and regeneration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 4194-4199 (2010).</li><li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+macrophage+phenotypes+contribute+to+kidney+injury+and+repair.">Distinct macrophage phenotypes contribute to kidney injury and repair.</a> J Am Soc Nephrol. 22, 317-326 (2011).</li><li>Kumar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexamethasone+ameliorates+renal+ischemia-reperfusion+injury.">Dexamethasone ameliorates renal ischemia-reperfusion injury.</a> J Am Soc Nephrol. 20, 2412-2425 (2009).</li><li>Sharples, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+protects+the+kidney+against+the+injury+and+dysfunction+caused+by+ischemia-reperfusion.">Erythropoietin protects the kidney against the injury and dysfunction caused by ischemia-reperfusion.</a> J Am Soc Nephrol. 15, 2115-2124 (2004).</li><li>Gueler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statins+attenuate+ischemia-reperfusion+injury+by+inducing+heme+oxygenase-1+in+infiltrating+macrophages.">Statins attenuate ischemia-reperfusion injury by inducing heme oxygenase-1 in infiltrating macrophages.</a> Am J Pathol. 170, 1192-1199 (2007).</li><li>Delbridge, M. S., Shrestha, B. M., Raftery, A. T., ElNahas, A. M., Haylor, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+body+temperature+in+a+rat+model+of+renal+ischemia-reperfusion+injury.">The effect of body temperature in a rat model of renal ischemia-reperfusion injury.</a> Transplant Proc. 39, 2983-2985 (2007).</li></ol>

The authors have no competing or conflicting interests to disclose.

Renale IRI è una causa importante di AKI senza alcun trattamento specifico. Lo studio sperimentale renale IRI è altamente informativo con il lavoro precedente e dimostrano il ruolo dei macrofagi, cellule dendritiche, linfociti, cellule T regolatorie nonché altre cellule e mediatori nell&#39;induzione sia della lesione acuta e guarigione fase 5,8 - 16. Inoltre, sperimentale IRI renale è stato utilizzato per valutare l&#39;effetto di vari agenti terapeutici 4,17-19. I...

Ischemia riperfusione (IRI) è un modo comune di lesioni per più organi, tra cui il rene, cuore e cervello. Renale IRI può portare a insufficienza renale acuta (AKI) nei pazienti e nessun trattamento specifico è disponibile. AKI come risultato di IRI ha una patogenesi complessa che coinvolge sia la risposta immunitaria innata e 1. Un modello sperimentale di renale IRI offre il potenziale per sezionare le celle chiave e mediatori coinvolti nella patogenesi di AKI nonché la rigenerazione renale conseguenti che ne consegue nei giorni successivi. Inoltre, gli effetti dei nuovi agenti terapeutici su processi patologici possono essere valutati. L&#39;obiettivo generale del modello sperimentale di insufficienza renale IRI qui descritto è quello di indurre sia acuti che danno renale funzionale e strutturale. Alcuni ricercatori hanno utilizzato un modello che comporta l&#39;induzione di IRI bilaterale 2. Anche se il modello renale bilaterale IRI è di utilizzo, il ren unilateraleal modello IRI ha il vantaggio di una nefrectomia destra intraprese al momento dell&#39;intervento chirurgico. Il tessuto nefrectomia destra serve tessuto di controllo prezioso in studi che coinvolge una fase di pretrattamento che o induce o sopprime l&#39;espressione di un gene o una proteina. Ad esempio, abbiamo utilizzato questo modello per valutare gli effetti di precondizionamento di eme arginato (HA) di iniezione di 24 ore prima renale IRI 3. L&#39;induzione di successo del citoprotettiva enzima eme-ossigenasi-1 (HO-1) HA prima IRI è stata confermata nel giusto tessuto di controllo nefrectomia 4. HA ridotto renale IRI in età compresa tra i topi in parte tramite un HO-1 meccanismo dipendente. Allo stesso modo, abbiamo utilizzato il modello in studi sulla deplezione dei macrofagi per esaminare il ruolo dei macrofagi nella renale IRI 5. Analisi immunoistochimica del tessuto nefrectomia destra può essere utilizzato per confermare l&#39;efficacia della metodologia di ablazione. Il tessuto nefrectomia destra può quindi essere utilizzato sia per confermare e quantificare il livello di induction o inibizione della molecola di interesse in ogni singolo animale sperimentale. Questo modello sarà di interesse per i ricercatori che utilizzano farmaci o altri composti di modulare l&#39;espressione di geni o proteine, ecc prima della induzione di renale IRI. Altri studi hanno utilizzato incisioni fianco per accedere ai reni. Il modello qui descritto utilizza un unico intervento chirurgico addominale mediana effettuare sia la nefrectomia destra e indurre ischemia riperfusione del rene sinistro. Questo approccio chirurgico fornisce un&#39;eccellente visualizzazione del campo operatorio compresi i peduncoli renali e cambiamenti di colore che seguono peduncolo renale bloccaggio. La nostra esperienza pubblicata con il modello 4-6 indica che i topi recuperare rapidamente da un intervento chirurgico con un tasso vicino al 100% di sopravvivenza. Infine, l&#39;analisi cinetica del modello su un periodo di 7 giorni indica che questo modello presenta ripristino della funzione renale sia e integrità tubolare, consignificativa proliferazione cellulare tubolare.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="676">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:125px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Tissue scissors</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>14072 - 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Micro-Adson forceps (Rat toothed)</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11019 - 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">S&#38;T JFA-5bTC Forceps - SuperGrip Angled</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>00649-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Colibri retractor</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>17000 - 04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Micro clip applicator</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>18057-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Micro serrafines&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>18055-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Olsen-Hegar needle holder</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>12002 - 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Hemoclip Plus Ligating Clips Small</td>
			<td style="width:125px;">Weck</td>
			<td style="width:119px;">533837</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:265px;">Autoclip Wound Clip System, 9mm</td>
			<td style="width:125px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">PY2 52-3748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:265px;">Silk Black Braided Suture, Size 6-0</td>
			<td style="width:125px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">723288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Standard Heat Matt</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:265px;">Homeothermic Blanket &#38; Control Unit</td>
			<td style="width:125px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Lacri-Lube</td>
			<td style="width:125px;">Allergan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Vetasept Chlorhexidine&#160;&#160;</td>
			<td style="width:125px;">AnimalCare</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vetalar : Ketamine hydrochloride</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>100mg/ml solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Domitor : medetomidine hydrochloride&#160;</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>1mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;">Vetergesic : Buprenorphine hydrochloride&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>0.3mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antisedan : Atipamezole hydrochoride</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>5mg/ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

renal ischaemia reperfusion injury: a mouse model of injury and regeneration

Renale lesioni ischemia riperfusione (IRI) è una causa comune di danno renale acuto (AKI) nei pazienti e occlusione del flusso ematico renale è inevitabile durante il trapianto renale. Modelli sperimentali che accurato e riproducibile ricapitolano renale IRI sono fondamentali per sezionare la fisiopatologia di AKI e lo sviluppo di nuovi agenti terapeutici. Presentato ecco un modello murino di insufficienza renale IRI che si traduce in riproducibile AKI. Ciò è ottenuto mediante un approccio mediano laparotomia per la chirurgia con una incisione che consente sia una nefrectomia destra che fornisce tessuto di controllo e bloccaggio del peduncolo renale sinistra per indurre ischemia del rene sinistro. Con un attento monitoraggio della posizione di arresto e la temperatura corporea durante il periodo di ischemia questo modello raggiunge pregiudizio funzionale e strutturale riproducibile. I topi sacrificati 24 ore dopo l&#39;intervento chirurgico dimostrare la perdita della funzione renale con elevazione del siero o livello di creatinina plasmatica e strutturadanno renale turale con evidente tubulare acuta necrosi. La funzione renale migliora e il danno tissutale acuto si risolve nel corso di 7 giorni IRI renali tale che questo modello può essere utilizzato per studiare la rigenerazione renale. Questo modello di renali IRI è stato utilizzato per studiare la fisiopatologia molecolare e cellulare di AKI così come l&#39;analisi della successiva rigenerazione renale.

Danno tubulare e di recupero possono essere valutati da H &amp; E o PAS colorazione di sezioni di tessuto seguenti renale IRI. Tubuli ubicati nella OSOM sono classificati come sani, feriti, necrotico o di recupero secondo la morfologia cellulare, l&#39;integrità e il numero di nuclei (Figura 1). La lesione funzionale e strutturale in questo modello dipende dalla durata di ischemia. Un progressivo aumento della gravità della disfunzione renale, valutata mediante creatininemia e BUN, è evidente come la...

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Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration

The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

Renale ischemia riperfusione: un modello murino di infortuni e rigenerazione

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable ...

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JoVE Journal

Medicine

49.5K Views.  University of Edinburgh. The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

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Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused by whole-body hypoperfusion.5,6 Successful reproduction of whole-body hypoperfusion in rodent models has been fraught with 
difficulty.7-9,9,10 Models which employ focal ischemia have repeatedly demonstrated results which do not translate to the clinical setting, and larger 
animal models which allow for whole body hypoperfusion lack access to the full toolset of genetic manipulation possible in the mouse.11,12 However, in recent 
years a mouse model of cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation has emerged which can be adapted to model AKI.13 This model reliably reproduces 
physiologic, functional, anatomic, and histologic outcomes seen in clinical AKI, is rapidly repeatable, and offers all of the significant advantages of a murine surgical 
model, including access to genetic manipulative techniques, low cost relative to large animals, and ease of use. Our group has developed extensive experience 
with use of this model to assess a number of organ-specific outcomes in AKI.14,15

A powerful model for perioperative and critical care related acute kidney injury is presented. Using whole body hypoperfusion induced by cardiac arrest it is possible to nearly replicate the histologic and functional changes of clinical AKI.

Normotermico arresto cardiaco e rianimazione cardiopolmonare: un modello murino di ischemia-riperfusione

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

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Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

Ischemia-riperfusione Modello di danno renale acuta e post Infortunio fibrosi nei topi

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal cord. A major current area of research is focused on the mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous or induced functional recovery following SCI. Spontaneous functional recovery is reported to be greater early in life, raising interesting questions about how adaptive plasticity changes as the spinal cord develops. To facilitate investigation of this dynamic, we have developed a SCI model in the neonatal mouse. The model has relevance for pediatric SCI, which is too little studied. Because neural plasticity in the adult involves some of the same mechanisms as neural plasticity in early life1, this model may potentially have some relevance also for adult SCI. Here we describe the entire procedure for generating a reproducible spinal cord compression (SCC) injury in the neonatal mouse as early as postnatal (P) day 1. SCC is achieved by performing a laminectomy at a given spinal level (here described at thoracic levels 9-11) and then using a modified Yasargil aneurysm mini-clip to rapidly compress and decompress the spinal cord. As previously described, the injured neonatal mice can be tested for behavioral deficits or sacrificed for ex vivo physiological analysis of synaptic connectivity using electrophysiological and high-throughput optical recording techniques1. Earlier and ongoing studies using behavioral and physiological assessment have demonstrated a dramatic, acute impairment of hindlimb motility followed by a complete functional recovery within 2 weeks, and the first evidence of changes in functional circuitry at the level of identified descending synaptic connections1.

This article describes a method for generating a reproducible spinal cord compression injury (SCI) in the neonatal mouse. The model provides an advantageous platform for studying mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous functional recovery.

Un neonatale mouse Spinal Cord Injury compressione Modello

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Modello murino di ischemia-riperfusione intestinale Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, diabetic retinopathy, and retinal vascular occlusions. Rodent models of I/R injury are providing significant insights into mechanisms and treatment strategies for human I/R injury, especially with regard to neurodegenerative damage in the retinal neurovascular unit. Presented here is a protocol for inducing retinal I/R injury in mice through elevation of intraocular pressure (IOP). In this protocol, the ocular anterior chamber is cannulated with a needle, through which flows the drip of an elevated saline reservoir. Using this drip to raise IOP above systolic arterial blood pressure, a practitioner temporarily halts inner retinal blood flow (ischemia). When circulation is reinstated (reperfusion) by removal of the cannula, severe cellular damage ensues, resulting ultimately in retinal neurodegeneration. Recent studies demonstrate inflammation, vascular permeability, and capillary degeneration as additional elements of this model. Compared to alternative retinal I/R methodologies, such as retinal arterial ligation, retinal I/R injury by elevated IOP offers advantages in its&#160;anatomical specificity, experimental tractability, and technical accessibility, presenting itself as a valuable tool for examining neuronal pathogenesis and therapy in the retinal neurovascular unit.

This article describes a procedure for inducing retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure in mice. Retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure serves to model human pathologies characterized by compromised oxygen and nutrient delivery in the retina, enabling researchers to examine potential cellular mechanisms and treatments for human diseases of the retinal neurovascular unit.

Un modello murino di retina ischemia-riperfusione lesioni a causa di aumento della pressione intraoculare

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

A Mouse Model of Single and Repetitive Mild Traumatic Brain Injury

Mild Traumatic Brain Injury (mTBI) can result in the acute loss of brain function, including a period of confusion, a loss of consciousness (LOC), focal neurological deficits and even amnesia. Athletes participating in contact sports are at high risk of exposure to large number of mTBIs. In terms of the level of injury in a sporting athlete, a mTBI is defined as a mild injury that does not cause gross pathological changes, but does cause short-term neurological deficits that are spontaneously resolved. Despite previous attempts to model mTBI in mice and rats, many have reported gross adverse effects including skull fractures, intracerebral bleeding, axonal injury and neuronal cell death. Herein, we describe our highly reproducible animal model of mTBI that reproduces clinically relevant symptoms. This model uses a custom made pneumatic impactor device to deliver a closed-head trauma. This impact is made under precise velocity and deformation parameters, creating a reliable and reproducible model to examine the mechanisms that contribute to effects of single or repetitive concussive mTBI.

Athletes absorb several hundred mild traumatic brain injuries (mTBI)/concussions every year; however, the consequence of these on the brain is poorly understood. Therefore, an animal model of single and repetitive mTBI that consistently replicates clinically relevant symptoms provides the means to advance the study of mTBI and concussion.

Un modello di mouse del singolo e ripetitivo dolore cerebrale traumatico lieve

Mild Traumatic Brain Injury (mTBI) can result in the acute loss of brain function, including a period of confusion, a loss of consciousness (LOC), focal ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via recanalization of the coronary artery is the most effective strategy for reducing the size of ischemic myocardium. The coronary microvasculature cannot be visualized and imaged&#160;in vivo, but there are several invasive and noninvasive techniques that can be used to assess parameters which depend directly on coronary microvascular function. The endothelial function after ischemia reperfusion can be assessed also at the level of the coronary circulation via the coronary flow reserve (CFR).&#160;In this study, peak velocity of left anterior descending (LAD) coronary arteries was measured in rats in vivo via Transthoracic Doppler Echocardiography during resting and stress challenge (induced by Dobutamine). A normal heart can increase its coronary blood flow up to four times above the resting values during stress induction. Following ischemia reperfusion, we found a significantly diminished CFR, which can be used as a marker of coronary microvascular dysfunction. CFR has opened a window on the importance of microvascular dysfunction and has been shown to predict cardiovascular risk independent of whether the severe obstructive disease is present.

Coronary flow reserve (CFR), is defined as the ratio of maximal coronary blood flow to the resting coronary blood flow. We present a protocol for evaluating CFR in rats via ultrasound, which offers the opportunity to predict cardiovascular risk factors in the absence of obstructive coronary disease.

Valutazione della riserva del flusso coronario dopo la miaocardia Ischemia Reperfusione nei ratti

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

Un modello di ratto preclinico per lo studio delle lesioni ischemia-reperfusione in microchirurgia ricostruttiva

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, cardiac stem cell therapy is studied by delivering SCs concurrently with the induction of myocardial injury. However, this approach presents two significant limitations: the early hostile pro-inflammatory ischemic environment may affect the survival of transplanted SCs, and it does not represent the subacute infarction scenario where SCs will likely be used. Here we describe a two-part series of surgical procedures for the induction of ischemia-reperfusion injury and delivery of mesenchymal stem cells (MSCs). This method of stem cell administration may allow for the longer viability and retention around damaged tissue by circumventing the initial immune response. A model of ischemia reperfusion injury was induced in mice accompanied by the delivery of mesenchymal stem cells (3.0 x 105), stably expressing the reporter gene firefly luciferase under the constitutively expressed CMV promoter, intramyocardially 7 days later. The animals were imaged via ultrasound and bioluminescent imaging for confirmation of injury and injection of cells, respectively. Importantly, there was no added complication rate when performing this two-procedure approach for SC delivery. This method of stem cell administration, collectively with the utilization of state-of-the-art reporter genes, may allow for the in vivo study of viability and retention of transplanted SCs in a situation of chronic ischemia commonly seen clinically, while also circumventing the initial pro-inflammatory response. In summary, we established a protocol for the delayed delivery of stem cells into the myocardium, which can be used as a potential new approach in promoting regeneration of the damaged tissue.

Stems cells are continuously investigated as potential treatments for individuals with myocardial damage, however, their decreased viability and retention within injured tissue can impact their long-term efficacy. In this manuscript we describe an alternative method for stem cell delivery in a murine model of ischemia reperfusion injury.

Consegna intramiocardica ritardata di cellule staminali dopo l'infortunio di ricottamento ischemia in un modello Murine

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods for choosing appropriate cuff sizes for the pulmonary vein (PV), pulmonary artery (PA), or bronchus (Br) are varied, thus making the determination of proper cuff size during rat lung transplantation an exercise of trial and error. By standardizing the cuffing technique to use the smallest effective cuff appropriate for the size of the vessel or bronchus, one can make the transplantation procedure safer, faster, and more successful. Since diameters of the PV, PA, and Br are related to the body weight of the rat, we present a strategy to choosing an appropriate size using a weight-based guide. Since lung volume is also related to body weight, we recommend that this relationship should also be considered when choosing the proper volume of air for donor lung inflation during warm ischemia as well as for the proper volume of PBS to be instilled during bronchoalveolar lavage (BAL) fluid collection. We also describe methods for 4th intercostal space dissection, wound closure, and sample collection from both the native and transplanted lobes.

Here, we present optimizations to a rat lung transplantation model that serve to improve outcomes. We provide a size guide for cuffs based on body weight, a measurement strategy to ascertain the 4th intercostal space, and methods of wound closure and BAL (bronchoalveolar lavage) fluid and tissue collection.

Un modello di trapianto di polmone di ratto di ischemia calda / danno da riperfusione: ottimizzazioni per migliorare i risultati

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...