Biz görüntü düzenleme Katharina HABERLAND teşekkür ederiz. Finansman: kıdemli yazar, yeni bir araştırma laboratuvarı kurmak için Technische Universität München bir KKF Grant aldı.

NOT: Ön sunulan modelin uygulanması, ilgili hayvan koruma yasaları danışılması gerekir ve izin yerel yönetimler alınmalıdır. Bu çalışmada, tüm deneyler araştırma içeren hayvanlar için yol gösterici ilkeler ve hayvanların korunması konusunda Alman mevzuatına uygun olarak yapılmıştır. Deneyler yerel hayvan bakım komitesi tarafından onaylandı. 1. Hayvan Hazırlama ve Kanatçığının Cerrahi Yükseklik <ol style="margin-left: 40px;"><li> 22-24 ° C, oda sıcaklığında ve 12 saat gündüz-ve gece çevrimi ile% 60-65 bir görece nemde bir kafes hayvanları tutun. Içme suyu ve standart laboratuar yiyeceği fareler ücretsiz erişime izin ver. Her zaman hayatta kalma ameliyat sırasında steril koşulların muhafaza. </li><li> 90 mg / kg vücut ağırlığı kadar ketamin hidroklorid ve 25 mg / ihtiva eden, 10 g vücut ağırlığı başına 0.1 mi tuzlu su çözeltisinin intraperitonal ile fare anestezisi (ip) enjeksiyonukg vücut ağırlığı dihydroxylidinothiazine hidroklorür. Anestezi hayvan hazırlanması, cerrahi ve daha sonra mikroskopi için gereklidir. Bir ağrılı uyaranlara yanıt kontrol edilerek uygun Anesthetization onaylayın. Anestezi süresi boyunca, kuruluğunu önlemek için gözlerin veteriner merhem uygulayın. </li><li> Yeterli anestezi indüksiyonu sonrası, bir elektrikli tıraş makinesi ile arka tüylerini. Bundan sonra, kalan saç kaldırmak için traş bölgeye epilasyon krem ​​uygulayın. </li><li> 7-10 dk&#39;lık Depilasyon kremi kalış süresi sırasında, cilt forseps ve mikro forseps, makas ve mikro makas, dikiş materyali ve bir işaretleyici kalem gibi araçları hazırlamak. Dezenfekte ve bölmenin üssünde somun ile iki vidayı uygulayarak ve kamara sisteminin sıkılığını garanti sanığa muadili penceresinin etrafında kendinden yapışkanlı köpük (Res. 1 AC) sabitleyerek titanyum odası hazırlamak. </li><li> Yıkanarak arkasındaki tüm epilasyon kremi kaldırılık su ile kapalı. Daha sonra, kuru ve bir alkol ihtiva eden bir çözelti ile cilt dezenfekte. </li><li> Yüzükoyun fare ve arka orta hat tanımlar. Merkezi cilt kavramak ve bir kat (Şekil. 2A) oluşturmak için yukarı doğru kaldırın. Işık kaynağı her türlü kullanarak trans-aydınlatma ile, provisorily titanyum çerçeve (Şekil. 2B) yerleştirmek için nereye karar. Emin olun kraniyale yanal torasik arter (LTA) ve sanığa penceresinin merkezi aracılığıyla kaudale ders derin sirkumfleks iliak arter (DCIA) uzak dalları (Şekil. 2B-D). Odasının konumlandırılması yapıldıktan sonra, titanyum çerçeve, daha sonra tespit için kıvrımın en altındaki cildin her iki katmanın delikli. Şimdi, titanyum çerçevesini kaldırma yüzükoyun fare ve gerektiğinde arka orta hat yeniden tanımlar. </li><li> Omurga 15 x 1 bir genişlik-boy oranı ile orta hatta başlangıç ​​dik kanadı Planı1 mm&#39;lik bir yanal göre ve rastgele perfüze kanadın sonuçlanır. Daha sonra, karşı tarafa uzanan 2 mm&#39;lik bir ek deri alan belirtin (Şek. 2C, d). Bu alan, forseps ile toplandı ve daha sonra görünür kanat alanı ile müdahale etmeden titanyum çerçeveye dikilir. </li><li> Işaretleme son ardından, flep kesilirken. Bunu yaparken, LTA&#39;ya ve DCIA hem transect ve kapağını (Şekil. 2E) yükseltmek. Nakledilmiş damarların pıhtılaşması ya da bağlanması için herhangi bir gerek yoktur. </li><li> Önceden yapılmış deri deliklerinin (Res. 2F) üzerinden bölmenin vidayı yerleştirin ve sanığa çerçevesinin delik ve bir 5-0 kullanarak çerçevenin arka kısmına yükseltilmiş flep bölmenin çerçevesi içinde hem anterior ve posteriorda skinfold sabitleşmek kesintiye dikişler (Res. 2G). </li><li> (5-0 sütür ile deriye geri kanadın dikey bacaklarda sütüre <stronG&gt; Şek. 2H, J). </li><li> Kapağın damar sistemini gözlemlemek için kapağın diğer tarafında, yani 2 mm&#39;lik küçük bir deri şerit deri yanal bir yarı-dairesel bir alanı eksize edin. Bu 90 mm ​​2 arasında bir yüzeye sahiptir, bölmenin gözlem penceresi üzerinden doğrudan olarak bakma olanağı tanır. </li><li> Mikroskopi sırasında görüntü kalitesini iyileştirmek amacıyla mikrocerrahi aletleri ve optik büyütücü lens veya mikroskop kullanılarak çizgili kas jelatin benzeri gevşek areolar doku çıkarın. Kas doku katmanları içinde damarlarının zarar değil deneyin. </li><li> Son olarak, topikal bisbenzimid ve tuzlu su (Şek. 2J) ile kanat çiy taneleriyle ıslatmak, kraniyal ve arkaya doğru, önceden öne köpük kendinden yapışkan şeritleriyle endued edilmiş çerçevenin karşıt montaj odacığı mühür. Bundan sonra, bir çırpıda halkayı kullanarak cam kapak ile gözlem penceresi uygulayın. Cam altında herhangi bir hava kabarcıklarına tuzağa çalışın (Res. 2K L). Cilt yapışma güçleri tarafından cam kapak uyacaktır. </li></ol> 2. Intravital Epifloresans Mikroskopi <ol style="margin-left: 40px;"><li> İdeal optik kalite için ilk mikroskopik analiz için cerrahi hazırlık 24 saat sonra bekleyin. Bu analiz, mikroskopi taban çizgisini temsil eder ve ameliyat sonrasında günde 3, 5, 7 ve 10 tekrar edilir. Adım 1.2 açıklandığı gibi her zaman, fare uyutmak. Ismarlama bir pleksiglas bir taşıyıcı üzerinde bir yanal dekübital pozisyonda hayvan yerleştirin. Bu şekilde, cam kapak yapışan flep kas doku tabakaları yukarı-koğuşta karşı karşıya. </li><li> Bir kuyruk damarından ya da retrobulbar venöz pleksus içinde% 5 yeşil floresan dekstran (molekül ağırlığı 150,000) ve 0.05 ml% 1 yüksek seviyede florasan Rodamin ailesi boya 0.05 ml enjekte edilir. Yeşil fluoresan dekstran intravenöz uygulanması halinde, kanın hücresel olmayan bileşenler leke (IV). Dist olabilir floresan Rodamin lekeleri lökosit ve trombositdiğer hücresel ve hücresel olmayan bileşenleri inguished. Son olarak, yoğunlaşma durumuna göre daha az ya da flüoresan yayan çekirdek bileşenlerinin bisbenzimid boyar. </li><li> Daha sonra, mikroskop altında fare yerleştirin. Mikroskop bir LED sistemi içerir olun - 470 ve 425 nm, 365 ve 490 nm ve 540 ve 580 nm LED ışın kombinasyonları gibi gelen filtre setleri (62 HE BPP / GFP / HcRed, aralık 1: 350-390 nm , 460-488 nm 495 nm / 500-557 nm bölünmüş; aralığı 3: aralık 2; uyarma dalga boyu, 395 nm / 402-448 nm bölünmüş 567-602 nm, sonsuz için 610 nm / 615 nm bölmek 20 Rodamin, aralık. : 540-552 nm) emisyon 575-640 nm, 560 nm bölünmüş. </li><li> Fotoğraf ve şarj çiftli cihaz video kamera kullanarak hareket görüntü kaydedebilir ve daha fazla off-line analiz için bir bilgisayar sabit diske kaydedebilirsiniz. </li><li> Farklı hedefleri (2.5X, NA (sayısal açıklık) = odasının panorama görünümleri için 0,06 kullanın, 5X,NA = 0.16; 10X, NA 0.32 =; 20X, NA 0.50 =; Ilgi bölgelerin kayıtları için 50X, NA = 0.55). </li><li> Hemen hemen eşit yükseklikte, yani bir proksimal, merkezi ve en uzak damar girişi (Res. 3F) bir distal alanın üç bölüme bölmenin penceresinden görünür kanat yüzeyini bölün. Görüntü elde etmek için, her bir gözlem zaman noktasında şu şekilde devam edin: <ol><li> 5X objektif kullanarak uzağa yakınsaldan bölmenin penceresi içinde görüntü ile doku görüntüyü tarayın. </li><li> Flep her alanda kolayca tanımlanabilen dallanma desenleri ile ikinci veya üçüncü dereceden arteriyolleri ve beraberindeki venüllerinde seçin. 5X, 10X ya da 20X objektif kullanarak, kolayca bütün gözlem süresi boyunca paketlerini yeniden lokalize etmek için arteriolovenular demetlerinin çıktı olun. </li><li> 20X objektif ve 50X objektif, daha fazla kayıt 5-6 kılcal alanları ve &quot;apoptotik ileSırasıyla flep alanı başına &quot;alanlar. 10X ve 20X hedefleri ile kaydedilen tüm görüntüler yeşil ışık (Rodamin) filtresi, oysa, 5X ve 50X objektif kullanımı mavi ışık (floresan dekstran) ve beyaz ışık (bisbenzimid) filtresi ile kaydedilen görüntüler sırasıyla mavi ışık (floresan dekstran) ve kullanımı . </li></ol></li></ol> Kaydedilen Verilerin 3. Analiz Not: 29, aşağıdaki gibi, bir bilgisayar destekli görüntü analiz sisteminin kullanımı off-line Tüm kaydedilen parametrelerin ölçülmesi ile. <ol style="margin-left: 40px;"><li> Alanının ölçülmesi perfüze olmayan sırasıyla nekrotik doku (mm2). <ol><li> (2.6.1 itibaren) 5X amacı ile kaydedilen tam taranan odası penceresi görüntü ve non-perfüze sırasıyla nekrotik doku ölçmek için floresan dekstran kullanın. Perfüze olmayan alan Border ve m alan hesaplamak: perfüze olmayan karanlık alanı ölçmek için &quot;AreaBo&quot; işlevini kullanınYazılımın Alan ölçümü algoritmalar kullanarak m 2. </li></ol></li><li> Arterioller, kılcal damarların ve venüllerden (mikron) mikrovasküler çapı ölçümü. <ol><li> Kaydedilen AV-demetleri veya yazılım içine kılcal alanlardan yük video ve resimler. En iyi sonuçlar, en yüksek büyütme ile fotoğraf veya videoları kullanmak için geminin kesin sınırları açıkça görünür olduğu yere. </li><li> Ölçümler geminin duvarına dik gerçekleştirildiğinden emin olmak için yazılımın &quot;DiamPe&quot; işlevini kullanın. Bunu yapmak için geminin dik çapı geminin duvar ve üçüncü tıklama işareti ile iki noktalarını işaretleyin. Yazılım um ölçümü yapacak. </li><li> Aynı yerde tüm kayıtları için aynı damarlar üzerindeki ölçümleri tekrarlayın. Ortalama çapa birikmesine çok kılcal ölçün. </li></ol></li><li> Arteriyollerde kırmızı kan hücresi (RBC) hızının analizi, kılcalnd venülleri (mm / sn). <ol><li> Arteriolar kırmızı kan hücresi (RBC) hız için (mm / s) ölçümleri yazılımın &quot;VeloLSD&quot; fonksiyonunu kullanmak ve çapları ölçülmüş olan floresan dekstran penceresinde aynı damarları seçin. </li><li> Süresi (san) içinde tek bir damar içi gri seviye Desenin kayması (mm) ölçümü temelinde olduğu satır kaydırma yöntemi kullanılarak bilgisayar destekli görüntü analiz sistemi ile analiz edin. </li></ol></li><li> Damarlarda hacim kan akışı (ul / sn) ölçümü. <ol><li> RBC hız ve damar kesit alanından arteriyoller, venüller ve kılcal hacim kan akımı (ul / sn) hesaplayın (π * r2) Gross ve Aroesty, yani S = V * π * r, 2 aşağıdaki denkleme göre , silindirik bir kap şekil 30 varsayılmıştır. </li></ol></li><li> RBC perfüze kılcal fonksiyonel kılcal yoğunluk ölçümü (besleyici perfüzyon: cm / cm <sup&gt; 2). <ol><li> Yazılımın içine 20X objektif büyütme ile kaydedilmiş floresan kılcal alanını yükleyin. RBC-perfüze mikrodamarlar fonksiyonel kılcal yoğunluğunu ölçmek için &quot;DensLA&quot; işlevini kullanın. </li><li> Imleç ile perfüze kılcal damarları Trace ve perfüze damarları işaretleyin. Işaretlemek yok kılcal damarlar, arteriyolleri veya venüllerinde perfüze olmayan. Yazılım cm / cm 2 perfüze kılcal damarların fonksiyonel kılcal yoğunluğunu ölçmek olacaktır. Diğer kaydedilen kılcal alanlar için adımları tekrarlayın. </li></ol></li><li> Mikrodamarlar (mikrovasküler remodeling) gibi tomurcuk ve filiz-oluşumu ve yeni oluşan mikrodamarlar olarak anjiyojenisinin erken belirtileri kıvrımlarında ölçümü. <ol><li> Yük yazılımı içine videoları veya floresan kılcal alanların kareleri kaydedildi. Gyrose damarlarını tanımlamak ve yazılımın &quot;TorqIx&quot; işlevini kullanın. Ders ile kesin damar akışını izlemek ve bir sağ tıklama ile biter. Yazılım olacakdoğrudan yol düz bir çizgi çizin ve takip yolu ile ilgili olarak ayarlamak. NOT: Genellikle önceden varolan kılcal dik olarak yayılan bu tür tomurcukları, filizleri ve yeni oluşan kılcal olarak anjiyogenez belirtileri, dikkat edin. Aşama 3.5 de tarif edildiği gibi bu, yeni oluşan damarların yoğunluğu ölçülür. </li></ol></li><li> Nükleer yoğunlaşma, parçalanma ve / veya marjinalleşmesi (hücre / mm 2) olarak apoptotik hücre ölümü için özellikleri, belirlenmesi. <ol><li> Yazılımın içine bisbenzimid-kaydedilmiş videoları (50X objektif) yükleyin. &quot;DenseNA&quot; işlevini kullanın. Böyle bir sol tıklama ile nükleer yoğunlaşması, parçalanma ve marjinalleşmesi olarak belirtilen özelliklerine göre apoptotik hücreleri işaretlemek. </li><li> Video boyunca tüm karakteristik hücreleri işaretleme sonra, otomatik olarak tüm işaretli hücrelerin sayısı ve alanı boyunca onu böler, hangi yazılım &quot;N / A&quot; seçeneğini tıklatın. Sonuç apoptotik olacakhücre / mm2. </li></ol></li><li> Inflamasyon temsil vasküler endotelyuma lökosit yapışması analizi. Lökositlerin Aralıklı bağlılık (lökositler haddeleme; bağlılık &lt;30 sn: silindirlerin sayısı / mm 2 endotelyal yüzey) ve lökositlerin firma bağlılık (lökositler yapışmasını; bağlılık&gt; 30 sn: çıkartmalar / mm 2 endotel yüzey sayısı). <ol><li> Rodamin sayısını sayarak enflamatuvar yanıtı analiz eder (&lt;30 saniye &quot;silindirler&quot;) ≥30 saniye arasındaki bir zaman periyodu (&quot;etiketleri&quot;), post-kılcal venüllerin endotelinde yapıştırılmış lökositler ve aralıklı olarak yapışan lökositlerin etiketli . Venüler lökosit yapışmasını mm2 endotel yüzeyi başına hücre olarak ifade edilir. </li></ol></li><li> Mikrovasküler sızıntısı (makro-moleküler fışkırma e = E1 / E2) için bir parametre olarak damar içi ve interstisyel gri seviyelerinin ölçülmesi. <ol><li> Makromoleküler l değerlendirinbir fluoresan dekstran iv enjeksiyonundan sonra, mikrovasküler geçirgenliğin bir parametre olarak eakage. Densitometrik olarak doğrudan bir kapiller damar duvarı (E1) bitişik, hem de kabın (E2) marjinal hücresiz plazma dokuda çoklu gri seviyesini belirlemektedir. Daha sonra E1 / E2 31 oranı olarak damardan makromoleküler fışkırmaya (E) hesaplar. </li></ol></li></ol> 4. Ameliyat Sonrası Bakım <ol style="margin-left: 40px;"><li> Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirket önlemek için ayrı bir kafes içinde hayvan dönün. Bu sternal yatma korumak için yeterli bilince kavuşana kadar sahipsiz bir hayvan bırakmayın. Kanama, lokal ve sistemik enfeksiyon işaretleri ve bölmenin konumu için günlük olarak hayvanlar izleyin. </li><li> Pansuman ve otomatik kurcalanmaları motor aktivite, vücut ağırlığı, ağrı belirtileri, tolerans gözlemleyerek hayvanın genel durumunu değerlendirin. </li><li> Mutu önlemek için bir kafes için fareler bir tutunodasının al manipülasyon. Ağrının herhangi bir işareti de, 8 saat aralıklarla deri altından, 0.05-0.1 mg / kg vücut ağırlığı bir dozda buprenorfin geçerlidir. </li></ol> 5. Ötanazi ve Skinfold Odası Eksplantasyonu <ol style="margin-left: 40px;"><li> 10. günde, bir anestetik ilaç (150mg / kg kadar pentobarbital) bir doz aşımı ile hayvanlar kurban. </li><li> Odasını kaldırmak ve immünohistokimyasal ve moleküler protein deneyleri için flep doku örnek. Geleneksel histoloji (formalin) ve ölçülebilir protein tayini (sıvı azot veya kuru buz) için örnek dokular. </li></ol>

<ol>
	<li>McFarlane, R., De Young, G., Henry, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+design+of+a+pedicle+flap+in+the+rat+to+study+necrosis+and+its+prevention.">The design of a pedicle flap in the rat to study necrosis and its prevention.</a> Plast Reconstr Surg. 35, 177-182 (1965).</li><li>Finseth, F., Cutting, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+neurovascular+island+skin+flap+for+the+study+of+the+delay+phenomenon.">An experimental neurovascular island skin flap for the study of the delay phenomenon.</a> Plast Reconstr Surg. 61, 412-420 (1978).</li><li>Petry, J. J., Wortham, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anatomy+of+the+epigastric+flap+in+the+experimental+rat.">The anatomy of the epigastric flap in the experimental rat.</a> Plast Reconstr Surg. 74, 410-413 (1984).</li><li>Achauer, B. M., Black, K. S., Litke, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcutaneous+PO2+in+flaps:+a+new+method+of+survival+prediction.">Transcutaneous PO2 in flaps: a new method of survival prediction.</a> Plast Reconstr Surg. 65, 45-45 (1980).</li><li>Vollmar, B., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+microvascular+oxygen+supply+and+tissue+oxygenation+in+hepatic+ischemia/reperfusion.">Assessment of microvascular oxygen supply and tissue oxygenation in hepatic ischemia/reperfusion.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 428, 403-408 (1997).</li><li>Menger, M. D., Barker, J. H., Messmer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+blood+perfusion+during+postischemic+reperfusion+in+striated+muscle.">Capillary blood perfusion during postischemic reperfusion in striated muscle.</a> Plast Reconstr Surg. 89, 1104-1114 (1992).</li><li>Uhl, E., R&#246;sken, F., Curri, S. B., Menger, M. D., Messmer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+skin+flap+necrosis+by+transdermal+application+of+buflomedil+bound+to+liposomes.">Reduction of skin flap necrosis by transdermal application of buflomedil bound to liposomes.</a> Plast Reconstr Surg. 102, 1598-1604 (1998).</li><li>Pang, C. Y., Neligan, P., Nakatsuka, T., Sasaki, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+the+fluorescein+dye+test+for+prediction+of+skin+flap+viability+in+pigs.">Assessment of the fluorescein dye test for prediction of skin flap viability in pigs.</a> J Surg Res. 41, 173-181 (1986).</li><li>Hjortdal, V. E., Hansen, E. S., Henriksen, T. B., Kjolseth, D., Soballe, K., Djurhuus, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microcirculation+of+myocutaneous+island+flaps+in+pigs+studied+with+radioactive+blood+volume+tracers+and+microspheres+of+different+sizes.">The microcirculation of myocutaneous island flaps in pigs studied with radioactive blood volume tracers and microspheres of different sizes.</a> Plast Reconstr Surg. 89, 116-122 (1992).</li><li>Pang, C. Y., Neligan, P., Nakatsuka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+microsphere+technique+for+measurement+of+capillary+blood+flow+in+random+skin+flaps+in+pigs.">Assessment of microsphere technique for measurement of capillary blood flow in random skin flaps in pigs.</a> Plast Reconstr Surg. 74, 513-521 (1984).</li><li>Sandison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+microscopic+study+of+living+growing+tissues+by+the+introduction+of+a+transparent+chamber+in+the+rabbit's+ear.">A new method for the microscopic study of living growing tissues by the introduction of a transparent chamber in the rabbit's ear.</a> The Anatomical Record. 28, 281-287 (1924).</li><li>Algire, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Adaptation+of+the+Transparent-Chamber+Technique+to+the+Mouse.">An Adaptation of the Transparent-Chamber Technique to the Mouse.</a> Journal of the National Cancer Institute. 4, 1-11 (1943).</li><li>Lehr, H. A., Leunig, M., Menger, M. D., Nolte, D., Messmer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+skinfold+chamber+technique+for+intravital+microscopy+in+nude+mice.">Dorsal skinfold chamber technique for intravital microscopy in nude mice.</a> Am J Pathol. 4, 1055-1062 (1993).</li><li>Barker, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+animal+model+to+study+microcirculatory+changes+associated+with+vascular+delay.">An animal model to study microcirculatory changes associated with vascular delay.</a> Br J Plast Surg. 52, 133-142 (1999).</li><li>Erni, D., Sakai, H., Banic, A., Tschopp, H. M., Intaglietta, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+microhemodynamics+in+ischemic+skin+flap+tissue+by+intravital+microscopy.">Quantitative assessment of microhemodynamics in ischemic skin flap tissue by intravital microscopy.</a> Ann Plast Surg. 43, 405-414 (1999).</li><li>Roesken, F., Sch&#228;fer, T., Spitzer, W. J., Vollmar, B., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+the+microcirculation+of+osteomyocutaneous+flaps+using+fluorescence+microscopy.">In vivo analysis of the microcirculation of osteomyocutaneous flaps using fluorescence microscopy.</a> Br J Plast Surg. 52, 644-652 (1999).</li><li>Harder, Y., Amon, M., Erni, D., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+ischemic+tissue+injury+in+a+random+pattern+flap:+a+new+mouse+model+using+intravital+microscopy.">Evolution of ischemic tissue injury in a random pattern flap: a new mouse model using intravital microscopy.</a> J Surg Res. 121, 197-205 (2004).</li><li>Harder, Y., Contaldo, C., Klenk, J., Banic, A., Jakob, S. M., Erni, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preconditioning+with+monophosphoryl+lipid+A+improves+survival+of+critically+ischemic+tissue.">Preconditioning with monophosphoryl lipid A improves survival of critically ischemic tissue.</a> Anesth Analg. 100, 1786-1792 (2005).</li><li>Rezaeian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoieton+protects+critically+perfused+flap+tissue.">Erythropoieton protects critically perfused flap tissue.</a> Ann Surg. 248, 919-929 (2008).</li><li>Harder, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+reduces+necrosis+in+critically+ischemic+myocutaneous+tissue+by+protecting+nutritive+perfusion+in+a+dose-dependent+manner.">Erythropoietin reduces necrosis in critically ischemic myocutaneous tissue by protecting nutritive perfusion in a dose-dependent manner.</a> Surgery. 145, 10-1016 (2009).</li><li>Rezaeian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin-induced+upregulation+of+endothelial+nitric+oxide+synthase+but+not+vascular+endothelial+growth+factor+prevents+musculocutaneous+tissue+from+ischemic+damage.">Erythropoietin-induced upregulation of endothelial nitric oxide synthase but not vascular endothelial growth factor prevents musculocutaneous tissue from ischemic damage.</a> Lab Invest. 90, 40-51 (2010).</li><li>Rezaeian, F., Ong, M. F., Harder, Y., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-acetylcysteine+attenuates+leukocytic+inflammation+and+microvascular+perfusion+failure+in+critically+ischemic+random+pattern+flaps.">N-acetylcysteine attenuates leukocytic inflammation and microvascular perfusion failure in critically ischemic random pattern flaps.</a> Microvasc Res. 82, 28-34 (2011).</li><li>Rezaeian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ghrelin+protects+musculocutaneous+tissue+from+ischemic+necrosis+by+improving+microvascular+perfusion.">Ghrelin protects musculocutaneous tissue from ischemic necrosis by improving microvascular perfusion.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 302, 603-610 (2012).</li><li>Rezaeian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+preconditioning+with+Erythropoietin+reduces+ischemia-induced+skin+necrosis.">Long-term preconditioning with Erythropoietin reduces ischemia-induced skin necrosis.</a> Microcirculation. , (2013).</li><li>Harder, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+preconditioning+reduces+ischemic+tissue+necrosis+by+heat+shock+protein+(HSP)-32-mediated+improvement+of+the+microcirculation+rather+than+induction+of+ischemic+tolerance.">Heat shock preconditioning reduces ischemic tissue necrosis by heat shock protein (HSP)-32-mediated improvement of the microcirculation rather than induction of ischemic tolerance.</a> Ann Surg. 242, 869-878 (2005).</li><li>Tobalem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+shockwave-induced+capillary+recruitment+improves+survival+of+musculocutaneous+flaps.">Local shockwave-induced capillary recruitment improves survival of musculocutaneous flaps.</a> J Surg Res. 184, 1196-1204 (2013).</li><li>Lindenblatt, N., Calcagni, M., Contaldo, C., Menger, M. D., Giovanoli, P., Vollmar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+for+studying+the+revascularization+of+skin+grafts+in+vivo:+the+role+of+angiogenesis.">A new model for studying the revascularization of skin grafts in vivo: the role of angiogenesis.</a> Plast Reconstr Surg. 122, 169-1680 (2008).</li><li>Schweizer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphology+and+hemodynamics+during+vascular+regeneration+in+critically+ischemic+murine+skin+studied+by+intravital+microscopy+techniques.">Morphology and hemodynamics during vascular regeneration in critically ischemic murine skin studied by intravital microscopy techniques.</a> Eur Surg Res. 47, 222-230 (2011).</li><li>Klyscz, T., J&#252;nger, M., Jung, F., Zeintl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cap+image&#8212;a+new+kind+of+computer-assisted+video+image+analysis+system+for+dynamic+capillary+microscopy.">Cap image&#8212;a new kind of computer-assisted video image analysis system for dynamic capillary microscopy.</a> Biomed. Tech. 42, 168-1675 (1997).</li><li>Gross, J. F., Aroesty, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mathematical+models+of+capillary+flow:+a+critical+review.">Mathematical models of capillary flow: a critical review.</a> Biorheology. 9, 225-264 (1972).</li><li>Menger, M. D., Pelikan, S., Steiner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+ischemiareperfusion+injury+in+striated+muscle:+significance+of+&#8216;reflow+paradox.">Microvascular ischemiareperfusion injury in striated muscle: significance of &#8216;reflow paradox.</a> Am J Physiol. 263 (6 part 2), 1901-1906 (1992).</li></ol>

Klinik sonucu iskemik komplikasyonları azaltmak ve böylece iyileştirmek için, eleştirel perfüze flep dokusunda patofizyolojik süreçlerin daha detaylı bilgisi gereklidir. Akut kalıcı iskemi taklit yeni hayvan modellerinin geliştirilmesi, bu nedenle zorunludur. Buna göre, örneklenmiş kanat dokusunun immünohistokimyasal ve moleküler analiz ile ilişkili olabilir kas ve deri damarsal çeşitli parametrelerin tekrarlayan, morfolojik, dinamik ve fonksiyonel gerçek zamanlı değerlendirilmesini sağlayan bir ...

Rekonstrüktif cerrahi maruz tendon kemik implant materyalin kapsamı kanatların kullanımına dayanır. Bir flep arteriyel giriş ve venöz çıkışı garanti kendi vasküler pedikül üzerinde aktarılan doku bloktur. Geniş uzmanlık ve transfer edilecek kapakların çeşitli varlığına rağmen, toplam doku kaybı yara arıza değişen iskemi kaynaklı komplikasyonlar hala rastlanmaktadır. Sekonder konservatif tedavi ve iyileşme minör doku nekrozu sonrasında beklenen Oysa, önemli flep nekroz genellikle cerrahi, yara klima ve ikincil yeniden yapılanma dahil cerrahi revizyon gerektirir. Bu, morbidite artar hastanede kalış süresini uzatır ve dolayısıyla artan sağlık maliyetleri yol açar. Arteriyel girişi gelen en uzak distal bölgesinde bir damar tanımlanmamış desen veya rastgele perfüze alanları ile Flaps iskemik hasara yatkındır. Acco<html> rdingly, çok sayıda deneysel ve klinik çalışmalar hem de nekroz gelişimini değerlendiren, eksenel model flepler (tanımlanmış kanlanma) ve rasgele model flepler (tanımlanmamış kan temini) 1-3. Ana bulgular yaygın nekrotik alanın büyüklüğü makroskopik değerlendirilmesi dayanmaktadır. Nedenleri ve doku nekrozu mekanizmalarını değerlendirmek üzere daha ayrıntılı olarak, çeşitli çalışmalar mikrodolaşımında analizi üzerinde duruldu. Farklı teknikler polarografik elektrotlar 4-5 ile doku oksijen geriliminin analizi, hem de lazer Doppler flowmetri 6-7, boya difüzyonu 8 ve mikrosferler 10/9 kullanarak kan akışının ölçümü de dahil olmak üzere, doku perfüzyonunu ölçmek için kullanılmıştır. Bu teknikler, ancak, sadece doku perfüzyonunun dolaylı parametreleri ölçmek için izin ve bir flep ilgi bireysel alanda microhemodynamic işlemlerin herhangi bir morfolojik analizine imkan yok. t &quot;&gt; Sandison diye tavşanlarda 11 gerçekleştirilen in vivo çalışmalarda, uzun süreli için şeffaf bir odasını kullandı kim birinci olmak bilinen 1943 yılında -. ​​Yaklaşık 20 yıl sonra - Algire uygulanabilir olması için böyle bir şeffaf odasına adapte ilk Tümör hücrelerinin 12 mikro-implantların davranışlarını incelemek amacıyla farelerde. Nedeniyle fareler gevşek cilt hayvanları sözde ve sonraki yıllarda üzerinde bazı teknik iyileştirmelerden sonra, Lehr ve co-işçi gibi adapte başardık aslında Daha küçük ve hafif bir titanyum bölmeyi üreten bir sırt deri altı bölme. Bu bölme, intravital floresan mikroskobu, morfolojik ve mikro-özelliklerden sayısı ve farklı fizyolojik ve patofizyolojik koşullar altında zaman içinde değişikliklerin doğrudan ve tekrarlayan görüntülenmesi için bir teknik, bu tür kullanılarak değerlendirilmesini mümkün kılmıştır iskemi-reperfüzyon hasarı 13 olarak. Pe soruşturmanormal ve patolojik şartlar altında cilt, kas ve kemik flep rfusion iki eğilim oluştu: Birincisi, böyle bir fare 14 pediküllü kulak kepçesi gibi dorsal Deri kıvrım odasını kullanmayın &quot;akut&quot; flep modelleri, yanal merkezli ada flep hamster 15 ve sıçanlarda 16 pedikül bileşik flep. İkinci olarak, dorsal deri kıvrım odası izinleri tekrarlayan mikrosirkülatuar ile bir flep kombinasyonu intravital floresan mikroskobu ile birkaç gün boyunca analiz &quot;kronik&quot; flap modeli. Bu fare 17&#39;nin deri altı bölmesi içinde entegre edilmiş bir rasgele perfüze muskülokutan kanat oluşur. Genişliği-uzunluk oranı, akut kalıcı iskemi durum sürekli olarak 10-14 gün kanat yüksekliği sonra,% 50 kanat doku nekrozu ~ sonuçlanan şekilde seçilmiştir. Doku nekrozu Bu tekrarlanabilir ölçüde, koruyucu (yani gelişimi les hem daha değerlendirilmesine olanaks nekrozu) ve zararlı etmenler (yani, kapak patofizyolojisi daha nekroz gelişimi). Son yıllarda, farklı peri öncesi ve doku koruyucu maddelerin 18-24 idaresi ve ısı 25 ve shockwaves 26 gibi fizyolojik stres yerel uygulama da dahil olmak üzere son şartlandırma prosedürleri, etkisini gösteren çok sayıda deneysel yayınlar, ortaya çıkmıştır. Nekroz, mikrovasküler morfolojisi ve mikrosirkülatuar parametrelerin kantitatif analizleri, immünohistokimyasal analizler ve protein deneyleri korele edilebilir. Vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), nitrik oksit sentaz (NOS) Nükleer Faktör kappa B (NF-KB) ve ısı şoku proteinlerinin (HSP-32 de dahil olmak üzere farklı proteinler ve molekül: heme oksijenaz 1 (HO-1) ve HSP- 70) doku korumada bir rol oynadığı gösterilmiştir. Bu bölme flep modeline dayanarak, iki modifikasyonlar accueillante geliştirilmiştirr eksenel desen perfüzyon ile 28 pediküllü flep deri grefti iyileşmesi 27 ve Anjiyojenik gelişmeler sırasında neovaskülarizasyonunu mikrodolaşımın analiz etmek. Biz fare Deri kıvrım odasında bir kansızlığın meydan muskülokutan kanadı içeren bir güvenilir ve tekrarlanabilir bir model sunuyoruz. Bu model Intravital epi-floresan mikroskop ile mikrodolaşımında ve hemodinami görselleştirme ve kantifizasyonunu.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1611">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"><a name="RANGE!A1:D55">Name of Reagent/ Equipment</a></td>
			<td style="width:244px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:931px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">C57Bl/6 mice 6-8w 20-22g</td>
			<td style="width:244px;">Charles River</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">depilation cream</td>
			<td style="width:244px;">Veet</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>any depilation cream</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">titanium chamber</td>
			<td style="width:244px;">Irola</td>
			<td align="right" style="width:119px;">160001</td>
			<td>Halteblech M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">slotted cheese head screw</td>
			<td style="width:244px;">Screws and More</td>
			<td align="right">842210</td>
			<td>DIN84 M2x10</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">hexagon full nut</td>
			<td style="width:244px;">Screws and More</td>
			<td align="right">93422</td>
			<td>DIN934 M2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">snap ring</td>
			<td style="width:244px;">Schaefer-Peters</td>
			<td align="right">472212</td>
			<td>DIN472 J12x1,0</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">cover glass</td>
			<td style="width:244px;">Volab</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>custom-made cover glass 11,8mm in diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">fixing foam</td>
			<td style="width:244px;">tesamoll</td>
			<td>05559-100</td>
			<td>tesamoll Standard I-Profile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">ketamine hydrochloride</td>
			<td style="width:244px;">Parke Davis</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Ketavet&#174;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">dihydroxylidinothiazine hydrochloride</td>
			<td style="width:244px;">Bayer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Rompun&#174;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Buprenorphin</td>
			<td style="width:244px;">Essex Pharma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Temgesic&#174;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Saline 0,9%</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">desinfection alcohol</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Vicryl 5-0</td>
			<td style="width:244px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">V 490 H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Ethilon 5-0</td>
			<td style="width:244px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">EH 7823 H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">1ml syringes</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">surgical skin marker with flexible ruler</td>
			<td style="width:244px;">Purple surgical</td>
			<td>PS3151</td>
			<td>any surgical skin marker and flexible ruler</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">pointed scissors</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Micro-Scissors</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">normal scissors</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">2 clamps</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">fine anatomic forceps</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">micro-forceps</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">hex nuter driver</td>
			<td style="width:244px;">wiha</td>
			<td>1018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">screwdriver</td>
			<td style="width:244px;">wiha</td>
			<td style="width:119px;">685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">snap ring plier</td>
			<td style="width:244px;">Knipex</td>
			<td style="width:119px;">4411J1</td>
			<td>12-25mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">wire cutter</td>
			<td style="width:244px;">Knipex</td>
			<td style="width:119px;">70 02 160</td>
			<td>Wire cutter is used to cut screws short; 160mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">trans-illumination light</td>
			<td style="width:244px;">IKEA</td>
			<td>501.632.02</td>
			<td>LED light Jansj&#246;; any light&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">magnification glasses</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">intravital microscope</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>490035-0001-000</td>
			<td>Scope.A1.Axiotech</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">LED system</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>423052-9501-000</td>
			<td>Colibri.2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">LED module 365nm</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>423052-9011-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">LED module 470nm</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>423052-9052-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">LED module 540-580nm</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>423052-9121-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Filter set 62 62 HE BFP + GFP + HcRed</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>489062-9901-000</td>
			<td>range 1: 350-390nm excitation wavelength split 395 / 402-448nm; range 2: 460-488nm, split 495nm / 500-557nm; range 3: 567-602nm, split 610nm / 615-infinite</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Filter set 20 Rhodamine</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>485020-0000-000</td>
			<td>540-552nm, split 560, emission 575-640nm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">2,5x objective NA=0,06</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>421020-9900-000</td>
			<td>A-Plan 2,5x/0.06</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">5x objective NA=0,16</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>420330-9901-000</td>
			<td>EC Plan-Neofluar 5x/0.16 M27</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">10x objetive NA=0,30</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>420340-9901-000</td>
			<td>EC Plan-Neofluar 10x/0.30 M27</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">20x objective NA=0.50</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>420350-9900-000</td>
			<td>EC Plan-Neofluar 20x/0.50 M27</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">50x objective NA=0,55</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td>422472-9960-000</td>
			<td>LD Epiplan-Neofluar 50x/0.55 DIC 27</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">ZEN imaging software</td>
			<td style="width:244px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>ZenPro 2012</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">CapImage</td>
			<td style="width:244px;">Dr. Zeintl</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fluorescein isothiocyanate-dextran</td>
			<td style="width:244px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">45946</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">bisBenzimide H 33342 trihydrochloride</td>
			<td style="width:244px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">B2261</td>
			<td>harmful if swallowed; causes severe skin burns and eye damage, may cause repiratory irritat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Rhodamine 6G chloride</td>
			<td style="width:244px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">R634</td>
			<td>harmful if swallowed; may cause genetic defects; may cause cancer; may damage fertility or the unborn child</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:319px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Pentobarbital</td>
			<td style="width:244px;">Merial</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Narcoren&#174;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ischemic tissue injury in the dorsal skinfold chamber of the mouse: a skin flap model to investigate acute persistent ischemia

Derin uzmanlık ve ileri cerrahi tekniklere rağmen, geniş doku nekrozuna yara arıza değişen iskemi kaynaklı komplikasyonlar hala özellikle rekonstrüktif flep cerrahisi, yaşanıyor. Çoklu deneysel flep modelleri altında yatan nedenleri ve mekanizmalarını analiz etmek ve iskemik komplikasyonları önlemek için tedavi stratejileri araştırmak için geliştirilmiştir. En modelleri sınırlayıcı faktör, doğrudan ve tekrar tekrar mikrovasküler mimarisi ve hemodinamikleri görselleştirmek için eksik olasılığıdır. Protokolün amacı bu daha önce belirtilen eksik unsurları affiliating köklü bir fare modeli sunmaktır. Harder ve ark. Tedavi edilmeyen muhafaza edilmesi durumunda 10 gün sonra% 50 nekroz ~ akut kalıcı iskemi ve sonuçları uğrar rastgele bir perfüzyon desenli bir kas deri flebi modeli geliştirmiştir. Intravital epi-floresan mikroskop yardımı ile, bu odacık model tekrarlayan görselleştirme sağlarmorfolojisi ve zamanla farklı ilgi bölgelerinde hemodinamik. Böyle apoptoz, inflamasyon, mikrovasküler sızıntı ve anjiyogenez gibi ilişkili süreçler incelenmiş ve immünhistokimyasal ve moleküler protein deneyleri korele edilebilir. Bugüne kadar, model, kansızlığın meydan doku pre, peri etkisi ve postconditioning araştıran yayımlanmış birkaç deneysel çalışmalarda yapılabilirliğini ve tekrarlanabilirlik kanıtlamıştır.

Nekroz Bu model, temel nokta - doku nekrozu, aşağıdaki kanat yüksekliği (örneğin akut iskemi, kalıcı indüksiyonu) - tekrar tekrar ölçülür ve 10 günlük bir süre boyunca, Şekil 3 &#39;de gösterildiği gibi makroskopik olarak gösterilen. Flep nekroz nihai sınır çizimi genellikle ameliyattan 5 gün sonra ve 7 arasında meydana ve Şek. 3D-F (proksimal hayati ve flep distal nekrotik bölge arasında gelişen vazodi...

Watch this Scientific Journal Video about Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia at JoVE.com

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Sunulan murin dorsal Deri kıvrım odasının penceresi kas deri flebi akut kalıcı iskemi bir bölge görüntüler. Mikrovasküler ve hemodinaminin miktarının doğrudan ve tekrarlayan değerlendirmesi için Intravital epi-floresan mikroskopi izin verir. Morfolojik ve hemodinamik sonuçlar daha histolojik ve moleküler analizler ile ilişkili olabilir.

Mouse Dorsal Skinfold Odası&#39;nda İskemik Doku Yaralanması: Bir Cilt Flap Model Akut Kalıcı iskemisi Araştırma

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

ischemic-tissue-injury-dorsal-skinfold-chamber-mouse-skin-flap-model

Research

JoVE Journal

Medicine

16.6K Görüntüleme.  Technische Universität München.  Sunulan murin dorsal Deri kıvrım odasının penceresi kas deri flebi akut kalıcı iskemi bir bölge görüntüler. Mikrovasküler ve hemodinaminin miktarının doğrudan ve tekrarlayan değerlendirmesi için Intravital epi-floresan mikroskopi izin verir. Morfolojik ve hemodinamik sonuçlar daha histolojik ve moleküler analizler ile ilişkili olabilir. 

Video: Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite tissue. Ischemia reperfusion injury (IRI) is a known cause of partial free flap failure and has no effective treatment. Establishing a laboratory model of this injury can prove costly both financially as larger mammals are conventionally used and in the expertise required by the technical difficulty of these procedures typically requires employing an experienced microsurgeon. This publication and video demonstrate the effective use of a model of IRI in rats which does not require microsurgical expertise. This procedure is an in situ model of a transverse abdominis myocutaneous (TRAM) flap where atraumatic clamps are utilized to reproduce the ischemia-reperfusion injury associated with this surgery. A laser Doppler Imaging (LDI) scanner is employed to assess flap perfusion and the image processing software, Image J to assess percentage area skin survival as a primary outcome measure of injury.

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Free tissue transfer is widely employed in reconstructive surgery to restore form and function following oncological resection and trauma. Preconditioning this tissue prior to surgery may improve outcome. This article describes an in situ transverse rectus abdominis myocutaneous flap (TRAM) in rats as a means for testing preconditioning strategies.

Miyokutanöz İskemi Reperfüzyon Hasarı Rat Modeli: in situ Enine Rektus abdominis kas deri Flap

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

Tıp

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

Farelerde Akut Böbrek Hasarı ve Post Yaralanma Fibrozis iskemi-reperfüzyon Model

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and unrelieved pressure due to immobility. Animal models have been developed that attempt to mimic these conditions for the purpose of furthering our understanding of the complexity of chronic wounds. The model described herein is a rat ischemic skin flap model that permits a prolonged reduction of blood flow resulting in wounds that become ischemic and resemble a chronic wound phenotype (reduced vascularization, increased inflammation and delayed wound closure). It consists of a bipedicled dorsal flap with 2 ischemic wounds placed centrally and 2 non-ischemic wounds lateral to the flap as controls. A novel addition to this ischemic skin flap model is the placement of a silicone sheet beneath the flap that functions as a barrier and a splint to prevent revascularization and reduce contraction as the wounds heal. Despite the debate of using rats for wound healing studies due to their quite distinct anatomic and physiologic differences compared to humans (i.e., the presence of a panniculus carnosus muscle, short life-span, increased number of hair follicles, and their ability to heal infected wounds) the modifications employed in this model make it a valuable alternative to previously developed ischemic skin flap models.

The rat, due to its size, availability, and rather docile behavior, has been utilized as a research model for many years. The goal of this protocol is to utilize the rat as an ischemic skin wound healing model to provide valuable insight into the pathophysiology of chronic wounds.

Sıçan İskemik Cilt Yara Modeli Gösteri

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

Diffuse Optical Spectroscopy for the Quantitative Assessment of Acute Ionizing Radiation Induced Skin Toxicity Using a Mouse Model

Acute skin toxicities from ionizing radiation (IR) are a common side effect from therapeutic courses of external beam radiation therapy (RT) and negatively impact patient quality of life and long term survival. Advances in the understanding of the biological pathways associated with normal tissue toxicities have allowed for the development of interventional drugs, however, current response studies are limited by a lack of quantitative metrics for assessing the severity of skin reactions. Here we present a diffuse optical spectroscopic (DOS) approach that provides quantitative optical biomarkers of skin response to radiation. We describe the instrumentation design of the DOS system as well as the inversion algorithm for extracting the optical parameters. Finally, to demonstrate clinical utility, we present representative data from a pre-clinical mouse model of radiation induced erythema and compare the results with a commonly employed visual scoring. The described DOS method offers an objective, high through-put evaluation of skin toxicity via functional response that is translatable to the clinical setting.

We present a diffuse optical spectroscopic (DOS) approach that provides quantitative optical biomarkers of skin response to radiation. We describe DOS instrumentation design, optical parameters extraction algorithms and the animal handling procedures required to yield representative data from a pre-clinical mouse model of radiation induced erythema.

Bir fare Modeli Kullanılarak Akut Radyasyondan Bağlı Cilt zehirlilik Kantitatif Değerlendirme optik tayf Diffüz

Acute skin toxicities from ionizing radiation (IR) are a common side effect from therapeutic courses of external beam radiation therapy (RT) and ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

Akut Akciğer Hasarı Açık Trakeostomi Gastrik Asit Aspirasyon Fare Modeli Maksimal Akut Ölümcül olmayan Akciğer Hasarı Sonuçlar

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent re-oxygenation of the tissues (reperfusion). In the skin, ischemia-reperfusion (IR) is the main contributing factor to the pathophysiology of pressure ulcers. While the cascade of events leading up to the inflammatory response has been well studied, the spatial and temporal responses of the different subsets of immune cells to an IR injury are not well understood. Existing models of IR using the clamping technique on the skin flank are highly invasive and unsuitable for studying immune responses to injury, while similar non-invasive magnet clamping studies in the skin flank are less-than-ideal for intravital imaging studies. In this protocol, we describe a robust model of non-invasive IR developed on mouse ear skin, where we aim to visualize in real-time the cellular response of immune cells after reperfusion via multiphoton intravital imaging (MP-IVM).

This protocol describes the induction of an ischemia-reperfusion (IR) model on mouse ear skin using magnet clamping. Using a custom-built intravital imaging model, we study in vivo inflammatory responses post-reperfusion. The rationale behind the development of this technique is to extend the understanding of how leukocytes respond to skin IR injury.

Bağışıklık Yanıtları intravital multiphoton Görüntüleme Fare Kulak Skin uyaran İskemi-reperfüzyon yaralanması

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

A Model of Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Free Flap

Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects resulting from tumor extirpation, trauma, infections, malformations or burns. Free flaps are particularly useful for reconstructing highly complex anatomical regions, like those of the head and neck, the hand, the foot and the perineum. Moreover, basic and translational research in the area of free tissue transfer is of great clinical potential. Notwithstanding, surgical trainees and researchers are frequently deterred from using microsurgical models of tissue transfer, due to lack of information regarding the technical aspects involved in the operative procedures. The aim of this paper is to present the steps required to transfer a fasciocutaneous epigastric free flap to the neck in the rat.
This flap is based on the superficial epigastric artery and vein, which originates from and drain into the femoral artery and vein, respectively. On average the caliber of the superficial epigastric vein is 0.6 to 0.8 mm, contrasting with the 0.3 to 0.5 mm of the superficial epigastric artery. Histologically, the flap is a composite block of tissues, containing skin (epidermis and dermis), a layer of fat tissue (panniculus adiposus), a layer of striated muscle (panniculus carnosus), and a layer of loose areolar tissue.
Succinctly, the epigastric flap is raised on its pedicle vessels that are then anastomosed to the external jugular vein and to the carotid artery on the ventral surface of the rat's neck. According to our experience, this model guarantees the complete survival of approximately 70 to 80% of epigastric flaps transferred to the neck region. The flap can be evaluated whenever needed by visual inspection. Hence, the authors believe this is a good experimental model for microsurgical research and training.

This paper describes the steps required to raise a fasciocutaneous epigastric free flap and transfer it to the neck in the rat.

Ücretsiz Doku Transferi Modeli: Sıçan Epigastrik Serbest Flep

Free tissue transfer has been increasingly used in clinical practice since the 1970s, allowing reconstruction of complex and otherwise untreatable defects ...

Modified Heterotopic Hindlimb Osteomyocutaneous Flap Model in the Rat for Translational Vascularized Composite Allotransplantation Research

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand and face transplants and, more recently, abdominal wall, uterus, and urogenital transplants. Functional outcomes have exceeded initial expectations, and most recipients enjoy an improved quality of life. However, as clinical experience accumulates, chronic rejection and complications from the immunosuppression must be addressed. In many cases where grafts have failed, the causative pathology has been ischemic vasculopathy. <span style="font-size: 11pt; line-height: 115%; font-family: Arial, sans-serif; color: rgb(41, 43, 49); background-image: initial; background-position: initial; background-size: initial; background-repeat: initial; background-attachment: initial; background-origin: initial; background-clip: initial;">The biological mechanisms of the acute and chronic rejection associated with VCA, especially ischemic vasculopathy, are important areas of research. However, due to the very small number of VCA patients, the evaluation of proposed mechanisms is better addressed in an experimental model. Multiple groups have used animal models to address some of the relevant unsolved questions in VCA rejection and vasculopathy. Several model designs involving a variety of species are described in the literature. Here we present a reproducible model of VCA heterotopic hindlimb osteomyocutaneous flap in the rat that can be utilized for translational VCA research. This model allows for the serial evaluation of the graft, including biopsies and different imaging modalities, while maintaining a low level of morbidity.

Vascularized composite allograft offers life-altering benefits to transplant recipients, but the biological causes of graft rejection and vasculopathy remain poorly understood. The rodent surgical model presented here offers a reproducible, clinically relevant model of transplantation, allowing researchers to evaluate rejection events and potential therapeutic strategies to prevent their occurrence.

Translasyonel vaskülarize kompozit allotransplantasyon araştırmaları için Rat 'ta değiştirilmiş heterotopik Hindekstremite Osteomokutanöz Flap modeli

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand ...

Scratch Migration Assay and Dorsal Skinfold Chamber for In Vitro and In Vivo Analysis of Wound Healing

Impaired cutaneous wound healing is a major concern for patients suffering from diabetes and for elderly people, and there is a need for an effective treatment. Appropriate in vitro and in vivo approaches are essential for the identification of new target molecules for drug treatments to improve the skin wound healing process. We identified the &#946;3 subunit of voltage-gated calcium channels (Cav&#946;3) as a potential target molecule to influence the wound healing in two independent assays, i.e., the in vitro scratch migration assay and the in vivo dorsal skinfold chamber model. Primary mouse embryonic fibroblasts (MEFs) acutely isolated from wild-type (WT) and Cav&#946;3-deficient mice (Cav&#946;3 KO) or fibroblasts acutely isolated from WT mice treated with siRNA to down-regulate the expression of the Cacnb3 gene, encoding Cav&#946;3, were used. A scratch was applied on a confluent cell monolayer and the gap closure was followed by taking microscopic images at defined time points until complete repopulation of the gap by the migrating cells. These images were analyzed, and the cell migration rate was determined for each condition. In an in vivo assay, we implanted a dorsal skinfold chamber on WT and Cav&#946;3 KO mice, applied a defined circular wound of 2 mm diameter, covered the wound with a glass coverslip to protect it from infections and desiccation, and monitored the macroscopic wound closure over time. Wound closure was significantly faster in Cacnb3-gene-deficient mice. Because the results of the in vivo and the in vitro assays correlate well, the in vitro assay may be useful for the high-throughput screening before validating the in vitro hits by the in vivo wound healing model. What we have shown here for wild-type and Cav&#946;3-deficient mice or cells might also be applicable for specific molecules other than Cav&#946;3.

Here, we present a protocol for an in vitro scratch assay using primary fibroblasts and for an in vivo skin wound healing assay in mice. Both assays are straightforward methods to assess in vitro and in vivo wound healing.

In Vitro ve In Vivo In Vivo Analizi Yara İyileşmesi için Scratch Migration Tahlil ve Dorsal Skinfold Odası

Impaired cutaneous wound healing is a major concern for patients suffering from diabetes and for elderly people, and there is a need for an effective ...