Name: demonstration of the rat ischemic skin wound model
Uploaded: 2015-04-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model at JoVE.com

The authors would like to acknowledge funding support from the University of South Florida, Department of Surgery (Mack Wu, MD, PhD).

NOT: Aşağıda sunulan tüm hayvan prosedürleri için onay Güney Florida&#39;nın Hayvan Bakım Komitesi (IACUC) Üniversitesi elde ve Hayvan Refahı Yasası ve Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu için tüm gereksinimleri uymak edildi. Silikon Levha ve Cerrahi Aletler 1. Hazırlık <ol><li> Hazır kesilmiş şeritler ve (10.5 cm x 3.0 cm) 0.01 kalınlığında, tıbbi silikon çarşaf olmayan takviyeli ve bir otoklav kullanarak sterilize. </li><li> Temizleyin ve (ameliyat sırasında steril bir alan oluşturmak için makas, forseps ve perdeler veya havlu) uygun cerrahi aletler sterilize. </li></ol> 2. Deney Hayvanları <ol><li> Yetişkin erkek veya ticari bir yetiştiriciden edilen 250-350 g aralığında ağırlığındaki dişi farelerin kullanın. Yaşlı sıçan kullanıldı, bunlar daha iyi hayatta kalma ameliyat sonrasında olmak üzere ≥350 gram olması gerekmektedir. Herhangi bir deney başlamadan önce en az seyahati hayvanlar alışmalarıYemek ve su ad libitum ile 12 saatlik bir ışık-karanlık döngüsü standart koşullar altında 7 gün. </li></ol> 3. Anestezi, preoperatif Analjezi ve Operatif Hazırlık <ol><li> Indüksiyon odasında aracılığıyla% 3 -4% izofluran ile genel anestezi øndükle ve cilt hazırlığı ve ameliyat sırasında O 2 ile% 1 (bir burun konisi kullanımı yoluyla) -2% korumak. Oranı ve solunum, interdijital tutam veya palpebral kırpma refleksinin derinliği gözlem yoluyla anestezi derinliği izleyin. NOT: Şu anda, bir veteriner merhem hayvan anestezi altında iken kuruluğu önlemek için göze yerleştirilebilir. </li><li> Steril cerrahi alanında bir konum uzak, yüzüstü pozisyonda sıçan yerleştirin ve aşağı boyun yaklaşık 11 cm tabanından kesme makineleri ile dorsumuna tıraş. Kalıcı bir kalem ile Stencil, 3,0 cm x 10,5 cm flep için anahat (Şekil 1A bakınız). </li><li> Temiz, belirlenen Surgica sıçan taşıonaylanmış bir ısıtma yastığı ve steril cerrahi örtüler ya da havlu ile donatılmış l alanı. Ağrı yönetimi için ilk cerrahi kesiler 5 mg / kg Ketoprofen deri önce enjekte. Gerektiğinde ek sıvıların (tuzlu su), deri altından (5 cc) verilebilir. </li><li> Steril bir alan oluşturmak için steril örtüler uygulamak, sonra,% 70 izopropil alkol ve% 0.2 klorheksidin ile ikinci ilk sürüntü daha da cildi hazırlayın. % 10 povidon-iyodin (Betadinede) de kullanılabilir. NOT: antibiyotik (15 mg / kg ampisilin) ​​deri altından tatbik edilebilir, ama iyi aseptik teknikler kullanılır ise, bu gerekli değildir. </li></ol> 4. Hastaya yaralar ve bipediküllü Kanatçığını oluşturma <ol><li> Steril, tek kullanımlık 6 mm biyopsi yumruk aracını kullanarak, belirlenen flep alanı (Şekil 1B) merkezinde iki dairesel &quot;iskemik&quot; yaraları oluşturun. Yaranın derinliği (değil aracılığıyla) panniculus Carno altında yatan fasya olmalıdırsus kas (Şekil 1B ek). </li><li> Forseps punch biyopsi tarafından oluşturulan yara anahat ortasında cilt kaldırın ve daha sonra (panniculus carnosus kas dahil) doku dairesel parça çıkarılması için (kavisli ipuçları) iris makas kullanın. Sonuç yara üs olarak fasya ile yara tam kalınlıkta olacak. Not: eksize edilen doku (yara fişler) sıvı azot içinde dondurulmuş ya da kontrol olarak, daha sonra işlemci, normal bir cilt için 10% tamponlu formalin O / N sabit ek bileşeni olabilir. </li><li> Ayrı uzunluğu 10,5 cm ve 3.0 cm önceden çizgilerle (Şekil 1C) boyunca iskemik yaraların her bir yanı üzerinde, steril bir bisturi ile insizyon yaparak bipediküllü kanatçık oluşturur. kesiler derinliği aşağı paraspinöz kaslara olmalıdır. Iris makas kullanarak, (6 mm yumruklar &quot;üs&quot; olarak sağlam fasya tutmak için dikkatli olmak, paraspinöz kaslarının F panniculus carnosus fasya ayrıigure 1D). </li><li> 1 steril önceden kesilmiş silikon levha alın ve panniculus carnosus fasya ve levha toka veya kat etmediğini sağlanması paraspinöz kasların (Şekil 1E) arasına yerleştirmek. Siyah, emilemeyen sütürler (boyut 4.0) kullanılarak flep (Şekil 1F ve 1G) uzunluğu boyunca, her iki tarafta en az 8 kesintiye dikiş ile cilt silikon tabakanın demirleme her iki kesiler kapatın. </li><li> Steril, tek kullanımlık biyopsi yumruk aracını kullanarak, 1 cm flep (Şekil 1G) her iki tarafında iskemik yaralara yanal (panniculus carnosus kasının ön fasya aşağı) iki iç kontrol &quot;non-iskemik&quot; yaraları oluşturun. </li><li> Yaralar altında bir cetvel yerleştirin ve yara ölçüm amaçları (Şekil 3A bakınız) dijital fotoğraf çekmek. Bu zamanda, kan akışı (perfüzyon) lazer Doppler ya da yapılan diğer manipülasyonlar (topikal ilaç yerleştirme) kullanılması ile izlenir.</li><li> Kranial ve kaudal yaralara ve nemli ve (steril) temiz yara ortamı tutmak için soyunma şeffaf bir film hem de onaylı bir sıvı yapıştırıcı uygulayın. Ek soyunma en kaudal sütür kaldırmasını hayvan önlemek için flep kaudal ucunda yerleştirilebilir. </li></ol> 5. Post-operatif Prosedürleri <ol><li> Besleyici karşı sürtünme gelen cerrahi siteyi önleyecek şekilde sığ besleyiciler ile donatılmış kafeslere (tek başına ev sahipliği) hayvanları yerleştirin. Hayvanlar katılımsız sol ya da sternum yatma korumak ve maksatlı hareket sergilemek için yeterli bilince yeniden kadar diğer hayvanların şirkete iade edilmemelidir. Isıtma paspaslar kurtarma sırasında en fazla 2 gün kafesin yarısı altına alınmalıdır. </li><li> Operasyon sonrası ağrı yönetmek için, en fazla 48 saat sonrası ameliyat için ertesi sabah ve günde 1x hayvanlara deri altından Ketoprofen (5 mg / kg) yönetmek. Hayvanlar ayrıca, her gün izlenmelidirağrı, kilo kaybı veya cerrahi alan infeksiyonlarının uzun işaretler. </li></ol> 6. sonraki Yara Ölçümleri ve Soyunma Değişiklikler <ol><li> Indüksiyon odasında aracılığıyla% 3 izofluran kullanarak genel anestezi altında sık sık -4% iskemik ve non-iskemik yaraları ölçün ve adım 3.1 gibi O 2 ile% 1 -2% (a burun konisi yoluyla) yapılmaktadır. </li><li> Yapıştırıcıyı deriden çekmeyin olarak yavaşça soyunma çıkarın. Ek dijital fotoğraf yara ölçümleri için alınan bu anda, topikal tedaviler yeniden uygulanan lazer Doppler görüntüleme (LDI) veya araştırmacının ihtiyaçlarını karşılamak üzere yapılan diğer manipülasyonlar. </li><li> Yapışkan ve temiz bir pansuman uygulayın ve hayvan adım 5.1 olarak kurtarmak için izin verir. </li></ol> 7. Yara Toplama ve Ötenazi <ol><li> Hayvan bir ind üzerinden% 3 -4% izofluran kullanarak genel anestezi altında iken Hasat iskemik ve non-iskemik yaralar (günlerde araştırmacı uygun gördüğü)uction bölmesi ve adım 3.1 olarak O 2 ile% 1-% 2 (a burun konisi ile) korunur. </li><li> Bir neşter kullanarak, yaranın etrafındaki sağlıklı dokuların dahil yaranın etrafında bir kare şekilli eksizyon yapmak. 1.5 ml eksizyon yerleştirin başlıklı bir tüp içerisinde ek ve gelecekteki moleküler analiz için (-80 ° C&#39;de saklayın) sıvı azot içinde dondurularak bileşenini veya histolojik inceleme için oda sıcaklığında% 10 tamponlu formalin O&#39;da / N inkübe edin. NOT: yara eksizyon da analiz için daha fazla örnek sağlamak için yarıya olabilir. </li><li> Yara doku çıkarıldıktan sonra, CO 2 inhalasyon onaylanmış yöntemi kullanarak hayvan euthanize. </li></ol>

<ol>
	<li>Ansell, D. M., Holden, K. A., Hardman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+wound+repair:+Are+they+cutting+it.">Animal models of wound repair: Are they cutting it.</a> Experimental dermatology. 21 (8), 581-585 (2012).</li><li>Dorsett-Martin, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+models+of+skin+wound+healing:+a+review.">Rat models of skin wound healing: a review.</a> Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 12 (6), 591-599 (2003).</li><li>Davidson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+wound+repair.">Animal models for wound repair.</a> Arch Dermatol Res. 290 (S1-11), (1998).</li><li>Finn, G., Magnus, S. A., Tonny, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+for+use+in+wound+healing+research:+A+survey+focusing+on+in+vitro+and+in+vivo+adult+soft+tissue).">Models for use in wound healing research: A survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue).</a> Wound Repair and Regeneration. 8, (2000).</li><li>Gould, L. J., Leong, M., Sonstein, J., Wilson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+and+validation+of+an+ischemic+wound+model.">Optimization and validation of an ischemic wound model.</a> Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 13 (6), 576-582 (2004).</li><li>Loots, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+cellular+infiltrate+and+extracellular+matrix+of+chronic+diabetic+and+venous+ulcers+versus+acute+wounds.">Differences in cellular infiltrate and extracellular matrix of chronic diabetic and venous ulcers versus acute wounds.</a> The Journal of investigative dermatology. 111 (5), 850-857 (1998).</li><li>Schwartz, D. A., Lindblad, W. J., Rees, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+collagen+metabolism+and+delayed+healing+in+a+novel+model+of+ischemic+wounds.">Altered collagen metabolism and delayed healing in a novel model of ischemic wounds.</a> Wound Repair Regen. 3 (2), 204-212 (1995).</li><li>Chen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+mechanistic+validation+of+delayed+healing+rat+wounds+as+a+model+for+human+chronic+wounds.">Molecular and mechanistic validation of delayed healing rat wounds as a model for human chronic wounds.</a> Wound Repair and Regeneration. 7, (1999).</li><li>Zhang, Q., Chang, Q., Cox, R. A., Gong, X., Gould, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperbaric+oxygen+attenuates+apoptosis+and+decreases+inflammation+in+an+ischemic+wound+model.">Hyperbaric oxygen attenuates apoptosis and decreases inflammation in an ischemic wound model.</a> The Journal of investigative dermatology. 128 (8), 2102-2112 (2008).</li><li>Zhang, Q., Gould, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperbaric+oxygen+reduces+matrix+metalloproteinases+in+ischemic+wounds+through+a+redox-dependent+mechanism.">Hyperbaric oxygen reduces matrix metalloproteinases in ischemic wounds through a redox-dependent mechanism.</a> The Journal of investigative dermatology. 134 (1), 237-246 (2013).</li><li>Moor, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consequences+of+age+on+ischemic+wound+healing+in+rats:+altered+antioxidant+activity+and+delayed+wound+closure.">Consequences of age on ischemic wound healing in rats: altered antioxidant activity and delayed wound closure.</a> Age (Dordrecht, Netherlands). 36 (2), 733-748 (2014).</li><li>Roy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+preclinical+model+of+chronic+ischemic+wound).">Characterization of a preclinical model of chronic ischemic wound).</a> Physiological genomics. 37 (3), 211-224 (2009).</li><li>Biswas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+inducible+microRNA+210+attenuates+keratinocyte+proliferation+and+impairs+closure+in+a+murine+model+of+ischemic+wounds.">Hypoxia inducible microRNA 210 attenuates keratinocyte proliferation and impairs closure in a murine model of ischemic wounds.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (15), 6976-6981 (2010).</li><li>Winocour, S., Vorstenbosch, J., Trzeciak, A., Lessard, L., Philip, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD109,+a+novel+TGF-beta+antagonist,+decreases+fibrotic+responses+in+a+hypoxic+wound+model.">CD109, a novel TGF-beta antagonist, decreases fibrotic responses in a hypoxic wound model.</a> Exp Dermatol. 23 (7), 475-479 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

<html> Sıçanlarda yara iyileşmesi nedeniyle genellikle enfekte yaralar ve interanimal değişkenlik 5 yüksek oranda iyileşmek için kendi yeteneklerine tartışma konusu olmuştur. Gelişimi sırasında modelin orijinal hedeflerinden biri bu varyasyonu azaltmak oldu. Belirli yerleştirme ile yaraların sayısını azaltarak kanadın genişliği Değişiklikler, silikon levha ve giriş (tutarlı kranyokaudal konumu ile kapağın merkezli) Bu hedefe gerçekleştirmiştir. Daralma Yara iyileşmesi de insanla...

Etkili ilaç geliştirme ve diğer yara iyileştirici terapötik insan tedavilere 1 hayvan modellerinde bulguları çevirisinde bilinen sorunlara rağmen, in vivo modellerde uygun gerektirir. Aşağıda mekanizmaları patolojik yara iyileşmesi daha anlayış araştırmak için iskemik deri yara iyileşmesi bir sıçan modelinde kullanımı için detaylı bir protokol bir açıklama. fare türleri, genellikle geniş kullanılabilirliği, boyuta bağlı olarak kullanılan ve kesik ve eksizyon yaralama, görüntüleme ve doku toplanması 2 için uygun bir deri alanı sağlamak için yeterince büyük olduğu uysal yapısı yara iyileşmesi çalışmaları için kullanılır. Ancak sıçanlar, gevşek derili hayvanlar ifade edilen ile, fare ve insan cilt anatomik farklı dikkatli dikkate alınmalıdır. Bu farklı karakteristik sıçan derisi kapanış w ölçüde katkıda yerine epitelizasyona çok yara kasılması sağlarbileşiklerdir 2. Buna ek olarak, sıçanlarda deri altından istemsiz kas carnosus varlığı, hem de daralma ve kolajen oluşumunda 3,4 ile iyileşmeye katkıda bulunur. Bunlar çok önemli anatomik farklar sıçan iskemik deri yara modelinin geliştirilmesi dikkate alınmıştır ve belirli değişiklikler yara daralma azaltmak ve panniculus carnosus kas 5 etkisini azaltmak için uygulanmıştır. Diyabetik ayak ülserleri, venöz bacak ülseri ve basınç ülserlerinde, şifa gecikir ve bu yaralar, kronik olarak kabul edilir. yaralar yara onarımı 6 sonraki aşamalarında dönüşmesini engeller yara aşırı enflamasyon ile karakterize edilir. Kronik yara gelişiminde en önemli faktörlerden biri iltihabı temizlemek için yetersizlik katkıda lokalize doku iskemisi (düşük kan akışı) 5&#39;tir. Bu model, 2003-4 yılında (geliştirilmiş ve valide ediliyordu sırasında zaman), Yara yatağında, normal yara iyileşmesi sırasında önemli bir aşama ve bu modeli 5 geliştirilmesi için motivasyon anjiyogenez indüksiyonu test etmek için yeterli doku sağlayabilir standart bir hayvan modelleri vardı. Burada sunulan modeli Chen ve arkadaşları tarafından değiştirilmiş bir biçimde kullanılan orijinal Schwartz ve diğerleri., 7 ve daha sonra tarif edilen iskemik yara modeli bir değişiklik, adı geçen. 8 Modifiye iskemik yara modelinde değişiklikler yerine epitelizasyona daha kasılması ile şifa yol sıçan yukarıda belirtilen anatomik özelliklerini aşmak için yapılmıştır: (1) İki tam kalınlıkta eksizyonel yaralar bir bipediküllü dorsal deri flebi ve içinde oluşturulan panniculus carnosus kas sadece kas fasya üzerinde diseksiyon ile yara yatağı çıkarılır. (2) kapağı kendisi t orta noktasında yer alan daha dar bir kan temini rastgele sağlamak boyutları ve yaralar vardırO flep iskemik bulunmaktadır. (3) silikon tabaka, alt dokularla kanadın readherence ve reperfüzyon önlenmesi, dalgalanmanın altına sokulur. Yara daralma ankraj veya silikon tabaka 5 kapağı dikilerek (elimine değil) sınırlıdır. Model son zamanlarda yaşlı sıçanlarda 11 karşı genç iskemik yara iyileşmesi için 9,10 şifa iskemik yara üzerinde hiperbarik oksijen etkileri arasında değişen çalışmalarda kullanılmıştır ve uzun süreli doku iskemi güvenilir bir model olarak kanıtlanmıştır. bipediküllü flep boyutları da domuz 12 ve fareler olmak üzere ve diğer türler, (3,0-3,5 cm genişliğinde 10.5 cm uzunluğunda) ve F344 sıçanlarda (2 cm genişliğinde 11 cm uzunluğunda) Sprague Dawley sıçan dahil olmak üzere farklı suşları, adapte edilmiş 13,14. Bu video iskemik deri yara modeli gösteriye F344 doğuştan sıçan gerginlik kullanır. Aşağıda sunulan tüm hayvan prosedürleri için onay almak olduGüney Florida Hayvan Bakım Komitesi (IACUC) Üniversitesi ed ve Hayvan Refahı Yasası ve Bakım Kılavuzu ve Laboratuvar Hayvanları Kullanım tüm gereksinimleri uymak.

<table><tbody><tr><td>Sil-Tec medical grade sheeting</td><td>Technical Products Inc.</td><td>500-3</td><td>nonreinforced, 0.01 inches in thickness</td></tr><tr><td>Mini Iris scissors, 8 cm, curved, SS</td><td>World Precision Instruments</td><td>#503671</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon Nylon Sutures</td><td>Ethicon</td><td>1964G</td><td>black, size 4.0, PC-3 16&amp;nbsp;mm needles (3/8 circle)</td></tr><tr><td>Laser Doppler Imager</td><td>Moor Instruments</td><td>moorLDI2-IR</td><td>Standard blood flow imager: http://us.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td>free download</td><td>http://rsb.info.nih.gov/ij/</td></tr><tr><td>Mastisol</td><td>Henry Schein</td><td>Cat # 7289210</td><td>Fisher Scientific NC9774929</td></tr><tr><td>Tegaderm</td><td>Medical Specialties&amp;nbsp;</td><td>3M1624W</td><td>Fisher Scientific NC9922128</td></tr></tbody></table>

demonstration of the rat ischemic skin wound model

İnsanlarda kronik yaralar için eğilimi gibi bağlı hareketsizlik diyabet ve bozulmuş kardiyovasküler fonksiyonu, ve bası gibi yaşlanma, hastalık durumlarında artar. Hayvan modelleri, kronik yaraların karmaşıklığı anlayışını ileri götürmek amacıyla bu koşulları taklit etmek için bu girişimi geliştirilmiştir. Burada açıklanan model, iskemik hale gelir ve kronik yara fenotipi (indirgenmiş vaskülarizasyon, artmış enflamasyon ve gecikmiş yara kapatma) benzer yaralarda elde edilen kan akımının uzun bir azalma sağlayan bir fare iskemik flep modelidir. Bu kontroller olarak flep ile yanal merkezi olarak yerleştirilmiş 2 iskemik yara ve 2 iskemik olmayan yaralar bir bipediküllü dorsal flep oluşur. Bu iskemik deri flep modeli bir roman ilave bir bariyer ve revaskülarizasyon önlemek ve yaralar iyileşecek gibi daralmayı azaltmak için bir atel olarak işlev flep altına silikon tabakanın yerleştirilmesidir. Rağmennedeniyle insanlara kıyasla oldukça farklı anatomik ve fizyolojik farklılıklar çalışmalar yara iyileşmesi için sıçanları kullanarak tartışma (yani, bir panniculus carnosus kas, kısa ömrü varlığı, saç köklerinin sayısı artmış, ve enfekte yaralar iyileşecek onların yeteneği) Bu modelde kullanılan modifikasyonlar daha önce geliştirilen iskemik flep modelleri için değerli bir alternatif yapmak.

verimli yapıldığı takdirde sıçan iskemik yara iyileşmesi modeli protokol hayvan başına yaklaşık 20 dakika sürer. Önce bir Şekil 1G temsil gibi görünmelidir modeli soyunma uygulanması. Bu bipediküllü flep ve yaralar içinde iskemik olduğunu doğrulamak için önemli olacaktır. Yaraların düzeyinde Subkutan oksijen basıncı (PSCO 2) iki iskemik yaralarda arasındaki deri altı dokuda bir polarografik elektrot yerleştirerek bu modelin 5 doğrulama sırasında ?...

Watch this Scientific Journal Video about Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model at JoVE.com

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

sıçan nedeniyle onun büyüklüğü, kullanılabilirlik ve oldukça uysal davranış, yıllardır bir araştırma modeli olarak kullanılmıştır. Bu protokolün amacı, kronik yaraların patofizyolojisi değerli bilgiler sağlamak için bir iskemik deri yara iyileşmesi modeli olarak sıçan kullanmaktır.

Sıçan İskemik Cilt Yara Modeli Gösteri

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

demonstration-of-the-rat-ischemic-skin-wound-model

Research

JoVE Journal

Medicine

21.2K Görüntüleme.  University of South Florida.  sıçan nedeniyle onun büyüklüğü, kullanılabilirlik ve oldukça uysal davranış, yıllardır bir araştırma modeli olarak kullanılmıştır. Bu protokolün amacı, kronik yaraların patofizyolojisi değerli bilgiler sağlamak için bir iskemik deri yara iyileşmesi modeli olarak sıçan kullanmaktır. 

Video: Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work well in non-ischemic wounds may not work in human diabetic wounds because vasculopathy is one major factor that hinders healing of these wounds. We published an article in 2007 describing a rabbit ear ischemic wound model created by a minimally invasive surgical technique. Since then, we have further simplified the procedure for easier operation. On one ear, three small skin incisions were made on the vascular pedicles, 1-2 cm from the ear base. The central artery was ligated and cut along with the nerve. The whole cranial bundle was cut and ligated, leaving only the caudal branch intact. A circumferential subcutaneous tunnel was made through the incisions, to cut subcutaneous tissues, muscles, nerves, and small vessels. The other ear was used as a non-ischemic control. Four wounds were made on the ventral side of each ear. This technique produces 4 ischemic wounds and 4 non-ischemic wounds in one animal for paired comparisons. After surgery, the ischemic ear was cool and cyanotic, and showed reduced movement and a lack of pulse in the ear artery. Skin temperature of the ischemic ear was 1-10 &deg;C lower than that on the normal ear and this difference was maintained for more than one month. Ear tissue high-energy phosphate contents were lower in the ischemic ear than the control ear. Wound healing times were longer in the ischemic ear than in the non-ischemic ear when the same treatment was used. The technique has now been used on more than 80 rabbits in which 23 were diabetic (diabetes time ranging from 2 weeks to 2 years). No single rabbit has developed any surgical complications such as bleeding, infection, or rupture in the skin incisions. The model has many advantages, such as little skin disruption, longer ischemic time, and higher success rate, when compared to many other models. It can be safely used in animals with reduced resistance, and can also be modified to meet different testing requirements.

We have developed a minimally invasive technique to create a rabbit ischemic ear wound model by dividing the central artery and nerve and the cranial neurovascular bundle. A subcutaneous tunnel then cuts all subcutaneous tissues. This procedure causes minimal skin disruption and can be safely used in diabetic animals.

Bir İskemik Yara Model üretmek için Basitleştirilmiş Tekniği

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Tıp

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ischemia and reperfusion. Immune response includes cytokine expression and release or secretion of endogenous ligands of innate immune receptors. Activation of innate immunity can potentially modulate infarct size. We have modified an existing murine closed-chest model using hanging weights which could be useful for studying myocardial pre- and postconditioning and the role of innate immunity in myocardial ischemia and reperfusion. This model allows animals to recover from surgical trauma before onset of myocardial ischemia.
Volatile anesthetics have been intensely studied and their preconditioning effect for the ischemic heart is well known. However, this protective effect precludes its use in open chest models of coronary artery ligation. Thus, another advantage could be the use of the well controllable volatile anesthetics for instrumentation in a chronic closed-chest model, since their preconditioning effect lasts up to 72 hours. Chronic heart diseases with intermittent ischemia and multiple hit models are other possible applications of this model.
For the chronic closed-chest model, intubated and ventilated mice undergo a lateral blunt thoracotomy via the 4th intercostal space. Following identification of the left anterior descending a ligature is passed underneath the vessel and both suture ends are threaded through an occluder. Then, both suture ends are passed through the chest wall, knotted to form a loop and left in the subcutaneous tissue. After chest closure and recovery for 5 days, mice are anesthetized again, chest skin is reopened and hanging weights are hooked up to the loop under ECG control.
At the end of the ischemia/reperfusion protocol, hearts can be stained with TTC for infarct size assessment or undergo perfusion fixation to allow morphometric studies in addition to histology and immunohistochemistry.

Surgical trauma induces an inflammatory response. Cytokines and endogenous ligands are known to modulate myocardial infarct size following ischemia and reperfusion. We present a modified closed-chest model of murine ischemia and reperfusion using hanging weights to minimize effects of thoracotomy.

Miyokard İskemi ve Reperfüzyon bir Mürin Kapalı göğüs Modeli

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

Murin Model Hindlimb İskemi

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Biyoloji

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite tissue. Ischemia reperfusion injury (IRI) is a known cause of partial free flap failure and has no effective treatment. Establishing a laboratory model of this injury can prove costly both financially as larger mammals are conventionally used and in the expertise required by the technical difficulty of these procedures typically requires employing an experienced microsurgeon. This publication and video demonstrate the effective use of a model of IRI in rats which does not require microsurgical expertise. This procedure is an in situ model of a transverse abdominis myocutaneous (TRAM) flap where atraumatic clamps are utilized to reproduce the ischemia-reperfusion injury associated with this surgery. A laser Doppler Imaging (LDI) scanner is employed to assess flap perfusion and the image processing software, Image J to assess percentage area skin survival as a primary outcome measure of injury.

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Free tissue transfer is widely employed in reconstructive surgery to restore form and function following oncological resection and trauma. Preconditioning this tissue prior to surgery may improve outcome. This article describes an in situ transverse rectus abdominis myocutaneous flap (TRAM) in rats as a means for testing preconditioning strategies.

Miyokutanöz İskemi Reperfüzyon Hasarı Rat Modeli: in situ Enine Rektus abdominis kas deri Flap

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are still occurring, particularly in reconstructive flap surgery. Multiple experimental flap models have been developed to analyze underlying causes and mechanisms and to investigate treatment strategies to prevent ischemic complications. The limiting factor of most models is the lacking possibility to directly and repetitively visualize microvascular architecture and hemodynamics. The goal of the protocol was to present a well-established mouse model affiliating these before mentioned lacking elements. Harder et al. have developed a model of a musculocutaneous flap with a random perfusion pattern that undergoes acute persistent ischemia and results in ~50% necrosis after 10 days if kept untreated. With the aid of intravital epi-fluorescence microscopy, this chamber model allows repetitive visualization of morphology and hemodynamics in different regions of interest over time. Associated processes such as apoptosis, inflammation, microvascular leakage and angiogenesis can be investigated and correlated to immunohistochemical and molecular protein assays. To date, the model has proven feasibility and reproducibility in several published experimental studies investigating the effect of pre-, peri- and postconditioning of ischemically challenged tissue.

The window of the murine dorsal skinfold chamber presented visualizes a zone of acute persistent ischemia of a musculocutaneous flap. Intravital epi-fluorescence microscopy permits for direct and repetitive assessment of the microvasculature and quantification of hemodynamics. Morphologic and hemodynamic results can further be correlated with histological and molecular analyses.

Mouse Dorsal Skinfold Odası&#39;nda İskemik Doku Yaralanması: Bir Cilt Flap Model Akut Kalıcı iskemisi Araştırma

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for myocardial infarction and cardiac complications of thoracic surgery. The ability of certain drugs to precondition the myocardium against ischemia reperfusion injury has led to multiple clinical trials, with little success. The isolated heart model allows acute observation of the functional effects of ischemia reperfusion injury in real time, including the effects of various pharmacological interventions administered at any time-point before or within the ischemia-reperfusion injury window. Since brief periods of ischemia can precondition the heart against ischemic injury, in situ aortic cannulation is performed to allow for functional assessment of non-preconditioned myocardium. A saline filled balloon is placed into the left ventricle to allow for real-time measurement of pressure generation. Ischemic injury is simulated by the cessation of perfusion buffer flow, followed by reperfusion. The duration of both ischemia and reperfusion can be modulated to examine biochemical events at any given time-point. Although the Langendorff isolated heart model does not allow for the consideration of systemic events affecting ischemia and reperfusion, it is an excellent model for the examination of acute functional and biochemical events within the window of ischemia reperfusion injury as well as the effect of pharmacological intervention on cardiac pre- and postconditioning. The goal of this protocol is to demonstrate how to perform in situ aortic cannulation and heart excision followed by ischemia/reperfusion injury in the Langendorff model.

The isolated rat heart is an enduring model for ischemia reperfusion injury. Here, we describe the process of harvesting the beating heart from a rat via in situ aortic cannulation, Langendorff perfusion of the heart, simulated ischemia-reperfusion injury, and infarct staining to confirm the extent of ischemic insult.

Langendorff-perfüze sıçan Hearts indüksiyon ve İskemi-reperfüzyon Hasarı Değerlendirilmesi

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

Rekonstrüktif Mikrocerrahide İskemi-Reperfüzyon Hasarı Nın İnceleştirilmesinde Klinik Öncesi Sıçan Modeli

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence suggests that thrombolytic therapy or primary percutaneous coronary intervention (PPCI) does not prevent reperfusion injury. There is still no ideal animal model for MIRI. This study aims to improve the MIRI model in rats to make surgery easier and more feasible. A unique method for establishing MIRI is developed by using a soft tube during a key step of the ischemic period. To explore this method, thirty rats were randomly divided into three groups: sham group (n = 10); experimental model group (n = 10); and existing model group (n = 10). Findings of triphenyltetrazolium chloride staining, electrocardiography, and percent survival are compared to determine the accuracies and survival rates of the operations. Based on the study results, it has been concluded that the improved surgery method is associated with a higher survival rate, elevated ST-T segment, and larger infarct size, which is expected to mimic the pathology of MIRI better.

Myocardial ischemia-reperfusion model of rat heart is improved by using a self-made retractor, polyvinyl chloride tube, and a unique knotting method. Electrocardiogram, triphenyltetrazolium chloride and histological staining, and percent survival analysis results showed that the improved model group has higher success and survival rates than the already existing model group.

Miyokard İskemisi ve Reperfüzyon Hasarının Geliştirilmiş Kemirgen Modeli

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...

Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats with Preserved Vascular Anatomy

A Rat Model of Middle Cerebral Artery Occlusion/Reperfusion Without Damaging the Anatomical Structure of Cerebral Vessels

Ischemic stroke stands as the primary cause of long-term disability and mortality among adults worldwide. Animal models of ischemic stroke have significantly contributed to our understanding of its pathological mechanisms and the development of potential treatments. Presently, there are two common methods involving filament (endovascular suture) techniques to induce animal models of cerebral ischemia. However, these methods have inherent limitations, such as reduced blood perfusion to the brain, damage to the external carotid artery system, impaired food and/or water intake, and sensory dysfunction of the face. This article introduces a new method for inducing a rat ischemic stroke model without compromising the cerebral vascular anatomy. In this study, the common carotid artery (CCA) of Sprague-Dawley rats was exposed, and an incision was made. A filament was then inserted through the incision into the internal carotid artery to occlude the middle cerebral artery. After 1.5 h of induced ischemia, the occluding filament was fully removed from both the internal carotid artery and the CCA. The incision in the CCA was subsequently sutured using 11-0 microsurgical sutures under a microscope (magnification 4x). Through the utilization of microsurgical techniques to repair the CCA, this study successfully developed a unique method to induce an ischemic stroke model in rats while preserving the anatomical integrity of cerebral blood vessels.

The current protocol describes a rat model of middle cerebral artery occlusion/reperfusion that preserves the anatomical structure of cerebral vessels without causing damage.

Ischemic stroke stands as the primary cause of long-term disability and mortality among adults worldwide. Animal models of ischemic stroke have ...

Nörobilim

Model of Ischemia and Reperfusion Injury in Rabbits

The protocol here provides a simple, highly replicable methodology to induce in situ acute regional myocardial ischemia in the rabbit for non-survival and survival experiments. New Zealand White adult rabbit is sedated with atropine, acepromazine, butorphanol, and isoflurane. The animal is intubated and placed on mechanical ventilation. An intravenous catheter is inserted into the marginal ear vein for the infusion of medications. The animal is pre-medicated with heparin, lidocaine, and lactated Ringer&#39;s solution. A carotid cut-down is performed to obtain arterial line access for blood pressure monitoring. Select physiologic and mechanical parameters are monitored and recorded by continuous real-time analysis.
With the animal sedated and fully anesthetized, either a fourth intercostal space small left thoracotomy (survival) or midline sternotomy (non-survival) is performed. The pericardium is opened, and the left anterior descending (LAD) artery is located.
A polypropylene suture is passed around the second or third diagonal branch of the LAD artery, and the polypropylene filament is threaded through a small vinyl tube, forming a snare. The animal is subjected to 30 min of regional ischemia, achieved by occluding the LAD by tightening the snare. Myocardial ischemia is confirmed visually by regional cyanosis of the epicardium. Following regional ischemia, the ligature is loosened, and the heart is allowed to re-perfuse.
For both survival and non-survival experiments, the myocardial function can be assessed via an echocardiography (ECHO) measurement of the fractional shortening. For non-survival studies, data from sonomicrometry collected using three digital piezoelectric ultrasonic probes implanted within the ischemic area and the left ventricle developed pressure (LVDP) using an apically inserted left ventricle (LV) catheter can be continuously acquired for evaluating the regional and global myocardial function, respectively.
For survival studies, the incision is closed, a left needle thoracentesis is performed for pleural air evacuation, and postoperative pain control is achieved.

The present study demonstrates a highly reproducible animal model of acute regional myocardial ischemia and reperfusion injury in rabbits using a left mini-thoracotomy for survival cases or a midline sternotomy for non-survival cases.

Tavşanlarda İskemi ve Reperfüzyon Hasarı Modeli

The protocol here provides a simple, highly replicable methodology to induce in situ acute regional myocardial ischemia in the rabbit for non-survival and ...