This work was supported by National Institutes of Health grants HL087990 (G.L.).

Etik Beyanı: (330-380 g ağırlığında) Sprague-Dawley sıçanları bu protokolde kullanılmıştır. Bu protokol LSU Sağlık Bilimleri Merkezi-Shreveport Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış ve (sekizinci baskı, Ulusal Bilimler Akademisi, 2011 &#39;Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanımı için Kılavuz&#39; ile uyumlu olduğunu edildi ). Modifiye PE-50 Tube 1. Hazırlık <ol><li> Yavaş yavaş tüp yumuşatmak, El bir gaz ateş üzerinde bir 30 cm uzunluğunda PE-50 tüpü tutmak. Yavaşça tüp germek. </li><li> Bir dijital kumpas (Şekil 1) kullanarak gerilmiş tüp üzerinde bir nokta seçin, işaretlemek ve (dış çapı: 0,30-0,34 mm) 1 cm uzunluğunda ucu 25 cm uzunluğunda segmentine modifiye PE-50 tüp kesti. </li></ol> Homolog kan pıhtılaşması 2. Hazırlık <ol><li> % 70, N 2 O ve% 30 Ç izofluran (indüksiyon için 5%, bakım için 2-3%) olan sıçan anestezisi &lt;kan toplanması öncesinde bir yüz maskesi ile alt&gt; 2. Bir ayak tutam tarafından anestezi onaylayın. </li><li> Yayımlanmış yöntemle 4 ile bir donör sıçan femoral arter kateterizasyonu gerçekleştirin ve 20 cm uzunluğunda PE-50 tüp içine doğrudan femoral arter kan aktarın. Pıhtı kan, oda sıcaklığında 2 saat boyunca Tüp, ve daha sonra 4 ° C&#39;de 22 saat boyunca muhafaza tüpü. Not: sokulmuş adım 3.1 de tarif edildiği gibi, aseptik teknikle gerçekleştirilir. Donör sıçan başka numuneler için elde edilir. </li><li> 50 mm&#39;lik parçalar halinde PE-50 tüpü kesip, normal tuz içeren steril bir Petri kabı içine tüpten pıhtı dışarı floş. </li><li> 60 mm uzunluğunda PE-10 tüpü içine 50 mm uzunluğunda bir pıhtı aktarın ve 23 G iğne ile, normal tuzlu su ihtiva eden 1 ml şırınga bağlı olan bir 20 cm uzunluğunda PE-50 tüpü için PE-10 tüp her biri ucunu (Şekil 2) . </li><li> Kan hücreleri çıkarmak için, hangi 5 dakika boyunca diğer bir şırınga sürekli alternatif hareket ile pıhtı Shiftpıhtı ve fibrin çekirdek bozmadan, ekstravasküler pıhtılaşmış pıhtı kırılgan en aza indirmek. </li><li> 40 mm uzunluğunda segmentine pıhtı kesin ve aseptik koşullar altında adım 1.2 de tarif edildiği gibi bir tadil edilmiş 50-PE kateter yoluyla pıhtı segmentini aktarın. Not: Tüm PE boru etilen oksit ile sterilize edilir. </li></ol> 3. Embolizan Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (Şekil 3A, B) <ol><li> (En az 121 ° C, 15 dakika boyunca 15 PSI) otoklav ile tüm cerrahi aletleri sterilize. % 70 etanol kullanılarak ameliyat masası ve ilişkili cerrahi ekipmanı sterilize. </li><li> Adım 2.1 açıklandığı gibi izofluran ile sıçan anestezisi. Her iki arka ayakları üzerinde bir ayak tutam yaparak anestezi derinliği test ve (pençe çekilmesi) gözlenen herhangi bir hareketi hayvan ameliyatı yapmak için yeterli anestezi olmadığını gösterir. Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için her iki göze de veteriner merhem küçük bir miktar uygulayın. Ventral boyun ve baş re kürk Tıraşelektrik kesme makineleri ile bölgelerini cilt alanları ortaya çıkarmak için. </li><li> Bir ısıtma yastığı yatar pozisyonda sıçan yerleştirin. Bir rektal prob, kontrolü yerleştirin ve bir homotermik battaniye kontrol ünitesi kullanılarak 36.5-37.5 ° C arasında vücut ısısını korumak. </li><li> % 70 etanol ile takip% 10 povidon-iyot ile traş cildi ve çevresindeki kürk dezenfekte edin. </li><li> Bir mikroskop altında boyun üzerinde 2 cm uzunluğunda orta hat kesi olun. Cerrahi alanında ortaya çıkarmak ve sağ karotis arter (CCA), eksternal karotid arter (ECA), internal karotid arter (ICA) ve pterigopalatin arter (KİK) çevresindeki sinirler ve fasya (Şekil 3A) ücretsiz teşrih Ekartörleri kullanın. Not: hiçbir Yardımcısı hayvan hazırlamak için yardımcı olur Ameliyattan önce, steril eldiven değiştirmek. </li><li> (Vagus siniri zarar vermeden) çevreleyen sinirler CCA serbest incelemek ve arterin altında steril 5-0 ipek sütür koyun. Bir kayma düğüm (# 1) kravat ve küçük HEMOS kullanarak dikiş kavramaktat ve vücuda bakan tarafta öğretilen çekin. </li><li> ECA ve onun iki şubesi, oksipital arter (OA) ve superior tiroid arter (STA) ayır. Bir veteriner elektrocerrahi ünitesi kullanılarak iki şubesi coagulate. ECA altında steril 6-0 ipek dikişlerle iki adet yerleştirin. </li><li> Arter, kafasına doğru tek parça (uzak ucu) ve vücuda dönük alt alta yerleştirilmiş iki ipek ayırın. (2 #) başlığına en yakın olan tarafında, küçük bir hemostat olan ipek kavrama ve çekme kafasına doğru öğretilen sıkı bitişik harfleri bağla. Daha sonra kullanmak için başka ipek ile gevşek bir düğüm (# 3) hazırlayın. </li><li> (Vagus siniri zarar vermeden) çevreleyen sinirler ICA ve PPA parçalara ayır. 6-0 sütür (# 4) ile PPA kravat. ICA (# 5) etrafında 6-0 sütür ile bir kayma düğüm yapın. Alternatif olarak, bir mikrovasküler klibi kullanarak ICA klibi. </li><li> Bir Vannas tarzı yaylı makas ile sıkı (# 2) ve gevşek (# 3) ligatures arasındaki ECA içine küçük bir delik (sokmak 1/2) kesin. Modifiye PE-50 küvet yerleştirinCCA çatallanma kesi ve önceden içine kan pıhtısı içeren e. (3 #) yeterli lümen etrafında içinde yaşayan tüp hareketliliğini korumak sağlamak için gevşek ligatürün sıkın. </li><li> Güdük özgür ve ECA ve ICA çatallanma altında güdük konumlandırmak için küçük deliğin yerinde ECA kesti; Bu modifiye tüp kolayca ICA slayt sağlayacaktır. ICA açın ve kateterin ucu MCA kökenini ulaşıncaya kadar yavaşça (~ 17 mm bifurkasyondan) ICA ECA&#39;nın lümeninden tüp önceden. Not: Önce ECA,% 70 etanol ile borunun steril dış yüzeyi borunun ucu yerleştirin ve daha sonra steril fizyolojik tuzlu su ile yıkayın. </li><li> 100 ul Hamilton şırıngası (Şekil 3B) ile 10 saniye boyunca 10 ul tuzlu su ile birlikte modifiye edilmiş PE-50 kateterden pıhtı enjekte edilir. </li><li> 5 dakika sonra ECA kateteri. ECA kravat ve CCA açın. Boyun kesi dikin. </li></ol> 4. İzleme Bölgesel Beyin Kan Akışı (bBKA) <ol><li> Önceki MCA oklüzyon, kafatası kemiği ortaya çıkarmak için kafa derisi 1.2 cm uzunluğunda orta hat kesi yapmak. Bir diş kazıyıcı ve steril pamuk swapları ile kafatası kemik üzerinde dokuları çıkartın. Not: Ameliyattan önce, maruz kafa derisi alanı ve çevresindeki kürk% 70 etanol ile takip% 10 povidon-iyot ile dezenfekte edilir. </li><li> 2 mm posterior ve 0.7 mm&#39;lik bir küresel paslanmaz çelik çapak (Şekil 4) kullanılarak 5 mm bregma yanal yerleştirilmiş bir 1,5 mm çapında bir çapak delik delin. NOT: sağlam dura tutun. </li><li> Prob dura yüzeyinden 0.5 mm yerleştirin. 0 (taban çizgisi) en kan akımında, 5, 15, 30, 60, 90 Monitör, emboli ve sonra 120 dakika devam 5, 15, 30, 45, ve tPA intravenöz uygulanmasından sonra 60 dk. RCBF&#39;nin son ölçümden sonra, kafa derisi kesi dikiş ile kapatılır. Not: boyun kesi öncesinde biz MCA occlus önce taban olarak kan akımında ölçümiyonu temsil etmektedir. Mesaj MCA tıkanıklığı biz boyun kesi dikiş kapatılmasından sonra kan akımında ölçmek. Böylece boyun kesi steril tutulur. </li></ol> 5. Post-operatif Bakım <ol><li> Su kaybını önlemek ve hemen cerrahi ve ağrının giderilmesi için gerektiği kadar 6-12 saat sonra Buprenex (0,05 mg / kg, sc) enjekte etmek için salin solüsyonu, deri altında, 2.5 ml enjekte edilir. </li><li> Izofluran anestezi durdurun. 37 ° C veteriner kurtarma odasında sıçan yerleştirin (hayvan sıcak tutmak) ve gözlem tutmak. Sıçan anestezi kurtarmak için genellikle 10 dakika sürer. Ardından, steril bir kafes içine hayvan koymak kafes içinde bir Petri kabındaki bazı ıslatılmış yemek yerleştirmek, ve hayvan sterilizasyon odasına kafesi dönmek. </li><li> Inme sonrası 24 saat, sodyum pentobarbital (100 mg / kg vücut ağırlığı, IP) aşırı dozda sıçan euthanize. </li></ol> 6. Nörolojik Eksikliği Puan <ol><li> Öncesi ve embolizasyon sonrası 2 saatte Bederson skoru gerçekleştirin. Bir sınıflandırma kullanabilirsiniz s0-3 cale olarak daha önce 5 açıklandığı: kuyruk sıçan yükselterek, 0, zemine hem ön ayakları uzanan ve başka hiçbir açıkları sergileyen hayvan (normal hareket); 1, kuyruk tarafından sıçan yükselterek, kontralateral ön ayakları esnetin; 2, çizerek olmadan yanal itme (ve ön ayakları fleksiyon) karşı dirençte azalma; 3, çizerek ile grade 2 aynı davranış. NOT: embolizasyondan sonra 2 saatte Bederson skoru = 0 (yok açığını) gösteren Sıçanlar daha fazla çalışma dışında tutulmuştur. </li></ol>

<ol>
	<li>Overgaard, K., Sereghy, T., Boysen, G., Pedersen, H., H&#248;yer, S., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+reproducible+cerebral+infarction+using+thrombotic+blood+clot+emboli.">A rat model of reproducible cerebral infarction using thrombotic blood clot emboli.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 12 (3), 484-490 (1992).</li><li>Zhang, R. L., Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q., Ewing, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+focal+embolic+cerebral+ischemia.">A rat model of focal embolic cerebral ischemia.</a> Brain Res. 766 (1-2), 83-92 (1997).</li><li>Dinapoli, V. A., Rosen, C. L., Nagamine, T., Crocco, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+MCA+occlusion:+a+precise+embolic+stroke+model.">Selective MCA occlusion: a precise embolic stroke model.</a> J. Neurosci. Methods. 154 (1-2), 233-238 (2006).</li><li>Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femoral+arterial+and+venous+catheterization+for+blood+sampling,+drug+administration+and+conscious+blood+pressure+and+heart+rate+measurements.">Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements.</a> J Vis Exp. 59 (3496), (2012).</li><li>Bederson, J. B., Pitts, L. H., Tsuji, M., Nishimura, M. C., Davis, R. L., Bartkowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+middle+cerebral+artery+occlusion:+evaluation+of+the+model+and+development+of+a+neurologic+examination.">Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination.</a> Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).</li><li>Henninger, N., Bouley, J., Br&#229;tane, B. T., Bastan, B., Shea, M., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+Doppler+flowmetry+predicts+occlusion+but+not+tPA-mediated+reperfusion+success+after+rat+embolic+stroke.">Laser Doppler flowmetry predicts occlusion but not tPA-mediated reperfusion success after rat embolic stroke.</a> Exp Neurol. 215 (2), 290-297 (2009).</li><li>Zhu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Annexin+A2+combined+with+low-dose+tPA+improves+thrombolytic+therapy+in+a+rat+model+of+focal+embolic+stroke.">Annexin A2 combined with low-dose tPA improves thrombolytic therapy in a rat model of focal embolic stroke.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 30 (6), 1137-1146 (2010).</li><li>Cheng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+protein+C+inhibits+tissue+plasminogen+activator-induced+brain+hemorrhage.">Activated protein C inhibits tissue plasminogen activator-induced brain hemorrhage.</a> Nat Med. 2 (11), 1278-1285 (2006).</li><li>Taniguchi, H., Andreasson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypoxic-ischemic+encephalopathy+model+of+perinatal+ischemia.">The hypoxic-ischemic encephalopathy model of perinatal ischemia.</a> J Vis Exp. 21 (955), (2008).</li><li>Sicard, K. M., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+focal+brain+ischemia.">Animal models of focal brain ischemia.</a> Exp Transl Stroke Med. 1 (7), (2009).</li><li>Florian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia.">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).</li><li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats.">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li><li>Westendorp, W. F., Nederkoorn, P. J., Vermeij, J. D., Dijkgraaf, M. G., van de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-stroke+infection:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Post-stroke infection: a systematic review and meta-analysis.</a> BMC Neurol. 11 (110), (2011).</li></ol>

We do not have any potential conflicting interests to disclose.

Bu çalışmada, MCA kökeni, bir fibrin pıhtısı zengin tarafından kapatılan edildiği sıçan, bir embolik MCAO felç modelinde gerçekleştirmek için standart bir yöntem gösterilmiştir. Bu modelin en büyük avantajı ise: fibrin-zengin kan pıhtısı ile MCA kök tıkanıklığı insanlarda tromboembolik inme benzer, embolik inme modeli fibrinolitik tedavinin klinik öncesi soruşturma yapılması için uygundur, ve bu model geliştirmek olduğunu MCA tarafından sağlanan topraklarında bir tekrarlanabilir ...

A correction was made to <a href="/video/51956">Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats</a>. The institution information was updated.
The institution "Louisiana State University Health Science Center" was changed to "Louisiana State University Health Science Center, Shreveport".

A correction was made to <a href="/video/51956">Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats</a>. The institution information was updated.

Erratum: Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

İnme ABD&#39;de ölüm üçüncü önde gelen nedenidir, ancak akut inme için tedavi seçenekleri sınırlı kalmıştır. Şu anda, kan pıhtıları çözmek için yeniden birleştirici doku plazminojen aktivatörü (tPA) intravenöz infüzyon akut iskemik inmenin en etkili yöntemdir. Bununla birlikte, tPA ve kullanımı bu yakın tedavi açısı ile ve intraserebral kanama riski ile sınırlıdır. Bu nedenle, trombolitik araştırma için uygun inme bir modeli acilen ihtiyaç vardır. Orta serebral arter (OSA) en sık insanlarda inme tıkalı arter olduğunu. Bu arter üzerinde duruldu, iskemik inme birçok hayvan modelleri kurulmuştur. Şu anda, MCA tıkanarak kemirgen fokal iskemi modelleri başlıca iki tip geliştirilmiştir: sütür MCAO modeli ve embolik MCAO modeli. Intraluminal sütür tekniği ile MCAO modeller yaygın mekanizması odaklı inme araştırmalarında kullanılan olmasına rağmen, bu dikiş modelleri yokİnsan strok% 80&#39;ine kadar olan mimik insan felç, tromboz veya embolizmden kaynaklanır. Ancak, kan pıhtıları kullanarak embolik inme modeli yakından insan inme taklit ve trombolitik çalışma için uygun kabul edilir. Bu model, embolik ilk olarak 1992 yılında Overgaard ve ark. 1 ile sıçanlarda geliştirilmiş ve Zhang ve arkadaşları tarafından karakterize edildi. 1997 2 ve Dinapoli ve ark. 2006 3&#39;te. Embolik MCAO artan bir ilgi kaynağı haline gelmiş olmasına rağmen, karşılaşılan sorunlar vardır, birçok laboratuvar. Bu yazıda, MCA topraklarında öngörülebilir bir enfarktüs gelişebilir yetişkin sıçan homolog kan pıhtısı ile embolik MCAO&#39;dan üretilmesi için standart bir yöntem ortaya koymaktadır. Bu makalede sunulan teknikler Araştırmacılar felç araştırma için bu modeli kurulması için teknik sorunların üstesinden gelmek için yardımcı olmalıdır.

<table><tbody><tr><td>rh-tPA</td><td>Chemical</td><td>Genentech</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride</td><td>Chemical</td><td>Sigma</td><td>T8877</td></tr><tr><td>Anesthesia vaporizer</td><td>Equipment</td><td>Soma Technology</td><td>Drager Vapor 19.1&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Rechargeable high speed micro drill</td><td>Equipment</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-17</td></tr><tr><td>Curved scissors</td><td>Equipment</td><td>Fine Science Tools</td><td>14117-14</td></tr><tr><td>Dumont forceps (Medical #7)</td><td>Equipment</td><td>Fine Science Tools</td><td>11270-20</td></tr><tr><td>Dumont forceps (Medical #5)</td><td>Equipment</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td></tr><tr><td>Vannas-style spring scissors</td><td>Equipment</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-03</td></tr><tr><td>Veterinary recovery chamber&amp;nbsp;</td><td>Equipment&amp;nbsp;</td><td>Peco Services&amp;nbsp;</td><td>V1200&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Genie plus syringe pump</td><td>Equipment</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td></td></tr><tr><td>Rat brain matrix</td><td>Equipment</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>RBMA-310C</td></tr><tr><td>Digital caliper&amp;nbsp;</td><td>Equipment</td><td>World Precision Instruments</td><td>501601</td></tr><tr><td>Dissecting microscope</td><td>Equipment</td><td>World Precision Instruments</td><td>PZMTIII-BS-LWD</td></tr><tr><td>Hamilton syringe</td><td>Equipment</td><td>Hamilton</td><td>model 710</td></tr><tr><td>Homeothermic blanket control unit</td><td>Equipment</td><td>Harvard Apparatus</td><td></td></tr><tr><td>Electric clipper</td><td>Equipment</td><td>Braintree Scientific</td><td>CLP-9931</td></tr><tr><td>Veterinary electrosurgical unit</td><td>Equipment</td><td>MACAN Manufacturing Company</td><td>MV-9</td></tr><tr><td>Blood flowmeter</td><td>Equipment</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab 4/30</td><td>Equipment</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>LabChart 7.2</td><td>software</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>1 ml syringe</td><td>Consumable</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>309659</td></tr><tr><td>23 G needle</td><td>Consumable</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305143</td></tr><tr><td>30 G needle</td><td>Consumable</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305106</td></tr><tr><td>PE-50 tubing</td><td>Consumable</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>427517</td></tr><tr><td>PE-10 tubing</td><td>Consumable</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>427400</td></tr><tr><td>6-0 Silk suture</td><td>Consumable</td><td>Harvard apparatus</td><td>723287</td></tr><tr><td>5-0 Silk suture</td><td>Consumable</td><td>Harvard Apparatus</td><td>517607</td></tr></tbody></table>

embolic middle cerebral artery occlusion (mcao) for ischemic stroke with homologous blood clots in rats

Rekombinant doku plazminojen aktivatörü (tPA) kullanımı ile Klinik, trombolitik tedavi akut iskemik inme için en etkili tedavi yöntemidir. Bununla birlikte, tPA ve kullanımı bu yakın tedavi açısı ile ve hemorajik transformasyon riski ile sınırlıdır. Iskemik inme tedavisi için yeni trombolitik ajanlar ve stratejiler incelemek için uygun inme modeller geliştirmek için acil bir ihtiyaç vardır. Intraluminal sütür MCAO&#39;dan ve embolik MCAO&#39;dan: Şu anda, iskemik inme modelleri başlıca iki türü sıçanlar ve farelerde geliştirilmiştir. Intraluminal sütür tekniği ile MCAO modeller yaygın mekanizması odaklı inme araştırmalarında kullanılan rağmen, bu sütür modelleri klinik durumu taklit değil ve trombolitik çalışmalar için uygun değillerdir. Bu modeller arasında, emboli MCAO modeli yakından insan iskemik inme taklit ve trombolitik tedavinin klinik öncesi araştırma için uygundur. Bu emboli modelin ilk Ov tarafından sıçanlarda geliştirilen1992 yılında diğ. 1 ergaard ve ayrıca Zhang ve arkadaşları tarafından karakterize edilir. 1997 2&#39;de. embolik MCAO artan ilgi kazanmış olmasına rağmen, çok sayıda laboratuarlar tarafından karşılaşılan sorunlar vardır. Trombolitik araştırma için artan ihtiyaçlarını karşılamak için, biz MCA topraklarında öngörülebilir bir enfarktüs hacmini geliştirmek sıçan, embolik MCAO&#39;dan son derece tekrarlanabilir model sunuyoruz. Kısaca, bir tadil edilmiş 50-PE tüp hafifçe MCA kökenini ulaşır kateterin ucuna kadar iç karotid arterin (ICA) lümenine dış karotid arter (ECA) ilerletilir. Kateter sayesinde, tek bir homolog kan pıhtısı MCA kökeni yerleştirilir. MCA tıkanıklığının başarısını belirlemek için, bölgesel serebral kan akımı izlendi, nörolojik açıkları ve enfarktüs hacimleri ölçüldü. Bu çalışmada sunulan teknikler inme araştırma için bu modeli kurulması için teknik sorunların üstesinden gelmek için araştırmacılara yardımcı olmalıdır. &lt;/ P&gt;

Lazerli Doppler flowmetri (LDF), serebral iskemi 6,7 indüksiyonu sırasında kan akımında izlemek için kullanıldı. Bizim laboratuvar dahil pek çok laboratuar başarılı MCA tıkanıklığı olan hayvanları tanımlamak için kan akımında kullanarak edilmiştir, ancak bazal eşikleri ölçüm site ile ilgili laboratuarlar arasında değişiyordu. LDF bir prob 2 mm&#39;lik posterior konumlandırılmış ve daha önce 6 açıklandığı gibi 5 mm&#39;lik bregma lateral. CBF, 0 ° C&#39;de iz...

Watch this Scientific Journal Video about Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats at JoVE.com

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Sıçanlar Homolog Kan pıhtısı ile İskemik İnme emboli Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO)

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

embolic-middle-cerebral-artery-occlusion-mcao-for-ischemic-stroke

Research

JoVE Journal

Medicine

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

26.9K Görüntüleme.  Louisiana State University Health Science Center, Shreveport. In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke. 

Video: Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable clinical state; in the development of animal models of focal ischemia, however, achieving reproducibility of experimentally induced infarct volume is essential. The rat is a widely used animal model for stroke due to its relatively low animal husbandry costs and to the similarity of its cranial circulation to that of humans2,3. In humans, the middle cerebral artery (MCA) is most commonly affected in stroke syndromes and multiple methods of MCA occlusion (MCAO) have been described to mimic this clinical syndrome in animal models. Because recanalization commonly occurs following an acute stroke in the human, reperfusion after a period of occlusion has been included in many of these models. In this video, we demonstrate the transient endovascular suture MCAO model in the spontaneously hypertensive rat (SHR). A filament with a silicon tip coating is placed intraluminally at the MCA origin for 60 minutes, followed by reperfusion. Note that the optimal occlusion period may vary in other rat strains, such as Wistar or Sprague-Dawley. Several behavioral indicators of stroke in the rat are shown. Focal ischemia is confirmed using T2-weighted magnetic resonance images and by staining brain sections with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) 24 hours after MCAO.

Surgical induction of ischemic brain damage in the rat is a widely used model for stroke research. Here we demonstrate the induction of focal cerebral ischemia by occlusion of the middle cerebral artery. Visualization of the resulting infarct by histological staining and magnetic resonance imaging is also shown.

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Nörobilim

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Tıp

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

2-Vessel Occlusion/Hypotension: A Rat Model of Global Brain Ischemia

Cardiac arrest followed by resuscitation often results in dramatic brain damage caused by ischemia and subsequent reperfusion of the brain. Global brain ischemia produces damage to specific brain regions shown to be highly sensitive to ischemia 1. Hippocampal neurons have higher sensitivity to ischemic insults compared to other cell populations, and specifically, the CA1 region of the hippocampus is particularly vulnerable to ischemia/reperfusion 2.
The design of therapeutic interventions, or study of mechanisms involved in cerebral damage, requires a model that produces damage similar to the clinical condition and in a reproducible manner. Bilateral carotid vessel occlusion with hypotension (2VOH) is a model that produces reversible forebrain ischemia, emulating the cerebral events that can occur during cardiac arrest and resuscitation. We describe a model modified from Smith et al. (1984) 2, as first presented in its current form in Sanderson, et al. (2008) 3, which produces reproducible injury to selectively vulnerable brain regions 3-6. The reliability of this model is dictated by precise control of systemic blood pressure during applied hypotension, the duration of ischemia, close temperature control, a specific anesthesia regimen, and diligent post-operative care. An 8-minute ischemic insult produces cell death of CA1 hippocampal neurons that progresses over the course of 6 to 24 hr of reperfusion, while less vulnerable brain regions are spared. This progressive cell death is easily quantified after 7-14 days of reperfusion, as a near complete loss of CA1 neurons is evident at this time.
In addition to this brain injury model, we present a method for CA1 damage quantification using a simple, yet thorough, methodology. Importantly, quantification can be accomplished using a simple camera-mounted microscope, and a free ImageJ (NIH) software plugin, obviating the need for cost-prohibitive stereology software programs and a motorized microscopic stage for damage assessment.

Bilateral carotid occlusion coupled with systemic hypotension produces global brain ischemia in the rat, resulting in damage to the hippocampus with reproducible severity. Animal subjects are impaired with predictable patterns of brain damage, they recover expediently, and mortality rates are comparatively low.

2-Gemi Tıkanıklığı / Hipotansiyon: Küresel Beyin İskemi Rat Modeli

Cardiac arrest followed by resuscitation often results in dramatic brain damage caused by ischemia and subsequent reperfusion of the brain. Global brain ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow (ischemia) 1. Middle cerebral artery (MCA) delivers a great majority of blood to the lateral surface of the cortex 2, is the most common site of human stroke 3, and ischemia within its territory can result in extensive dysfunction or death 1,4,5. Survivors of ischemic stroke often suffer loss or disruption of motor capabilities, sensory deficits, and infarct. In an effort to capture these key characteristics of stroke, and thereby develop effective treatment, a great deal of emphasis is placed upon animal models of ischemia in MCA.
Here we present a method of permanently occluding a cortical surface blood vessel. We will present this method using an example of a relevant vessel occlusion that models the most common type, location, and outcome of human stroke, permanent middle cerebral artery occlusion (pMCAO). In this model, we surgically expose MCA in the adult rat and subsequently occlude via double ligature and transection of the vessel. This pMCAO blocks the proximal cortical branch of MCA, causing ischemia in all of MCA cortical territory, a large portion of the cortex. This method of occlusion can also be used to occlude more distal portions of cortical vessels in order to achieve more focal ischemia targeting a smaller region of cortex. The primary disadvantages of pMCAO are that the surgical procedure is somewhat invasive as a small craniotomy is required to access MCA, though this results in minimal tissue damage. The primary advantages of this model, however, are: the site of occlusion is well defined, the degree of blood flow reduction is consistent, functional and neurological impairment occurs rapidly, infarct size is consistent, and the high rate of survival allows for long-term chronic assessment.

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

We describe a highly reproducible method for the permanent occlusion of a rodent major cerebral blood vessel. This technique can be accomplished with very little peripheral damage, minimal blood loss, a high rate of long-term survival, and consistent infarct volume commensurate with the human clinical population.

Kalıcı Serebral Gemi Tıkanıklığı<em&gt; Ile</em&gt; Çift Ligature ve transeksiyonu

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

Yaşlı Sıçanlarda Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı ile Kalıcı Distal Orta Serebral Sahne Kortikal İskemi Sürekli Engelli Eğitim için

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

Middle Cerebral Artery Occlusion Allowing Reperfusion via Common Carotid Artery Repair in Mice

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue plasminogen activator (tPA) as an approved drug treatment to target ischemic strokes. Current research in the field of ischemic stroke focuses on better understanding the pathophysiology of stroke, to develop and investigate novel pharmaceutical targets. Reliable experimental stroke models are crucial for the progression of potential treatments. The middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is clinically relevant and the most frequently used surgical model of ischemic stroke in rodents. However, the outcomes of this model, such as lesion volume, are associated with high levels of variability, particularly in mice. The alternative MCAO model described here allows the reperfusion of the common carotid artery (CCA) and the increased perfusion of the middle cerebral artery (MCA) territory, using a tissue pad with fibrinogen-based sealant to repair the vessel, and the improved welfare of the mice by avoiding external carotid artery (ECA) ligation. This reduces the reliance on the Circle of Willis, which is known to be highly anatomically variable in mice. Representative data show that using this alternative surgical approach decreases the variability in lesion volumes between the traditional MCAO approach and the alternative approach described here.

Intraluminal filament occlusion of the middle cerebral artery is the most frequently used in vivo model of experimental stroke in rodents. An alternative surgical approach to allow common carotid artery repair is performed here, which allows the reperfusion of the common carotid artery and a full reperfusion to the middle cerebral artery territory.

Orta serebral arter tıkanıklığı ortak karotid arter onarım ile reperfüzyon farelerde izin

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue ...

Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats with Preserved Vascular Anatomy

A Rat Model of Middle Cerebral Artery Occlusion/Reperfusion Without Damaging the Anatomical Structure of Cerebral Vessels

Ischemic stroke stands as the primary cause of long-term disability and mortality among adults worldwide. Animal models of ischemic stroke have significantly contributed to our understanding of its pathological mechanisms and the development of potential treatments. Presently, there are two common methods involving filament (endovascular suture) techniques to induce animal models of cerebral ischemia. However, these methods have inherent limitations, such as reduced blood perfusion to the brain, damage to the external carotid artery system, impaired food and/or water intake, and sensory dysfunction of the face. This article introduces a new method for inducing a rat ischemic stroke model without compromising the cerebral vascular anatomy. In this study, the common carotid artery (CCA) of Sprague-Dawley rats was exposed, and an incision was made. A filament was then inserted through the incision into the internal carotid artery to occlude the middle cerebral artery. After 1.5 h of induced ischemia, the occluding filament was fully removed from both the internal carotid artery and the CCA. The incision in the CCA was subsequently sutured using 11-0 microsurgical sutures under a microscope (magnification 4x). Through the utilization of microsurgical techniques to repair the CCA, this study successfully developed a unique method to induce an ischemic stroke model in rats while preserving the anatomical integrity of cerebral blood vessels.

The current protocol describes a rat model of middle cerebral artery occlusion/reperfusion that preserves the anatomical structure of cerebral vessels without causing damage.

Ischemic stroke stands as the primary cause of long-term disability and mortality among adults worldwide. Animal models of ischemic stroke have ...

<meta charset="utf8"></head><body>Sıçan MCAO İnme Modellerinde Hücre Ölümünü İncelemek İçin İmmünofloresan Boyama

Evaluating Cell Death Signaling by Immunofluorescence in a Rat Model of Ischemic Stroke

Stroke is a leading cause of death and disability worldwide. Most cases of stroke are ischemic and result from the occlusion of the middle cerebral artery (MCA). Current pharmacological approaches for the treatment of ischemic stroke are limited; therefore, novel therapies providing effective neuroprotection against ischemic injury following stroke are urgently needed. In the brain tissue following ischemic stroke, the area of the ischemic penumbra is salvageable but at risk of progressing to irreversible damage. The penumbral area surrounding the infarcted core is a conceptual target for neuroprotection. Since the blood flow is partially maintained in the penumbral area, neuronal and non-neuronal cells in this area transiently survive after stroke, and these cells that are still viable may be rescued by appropriate medical interventions. Understanding the pathophysiology of the penumbra is important in the development of neuroprotective therapies because the cell death pathways activated in the ischemic penumbra may indicate therapeutic targets, such as RUNX1 and cathepsins. These protein targets functioning as mediators of programmed cell death can be further exploited in translational research. With moderate size and similarity to the human brain, the in vivo rat model of MCA occlusion (MCAO) mimics the human ischemic stroke and offers an applicable tool to investigate the penumbral pathology, examine the cell death signaling, and evaluate the effects of potential targets in the context of MCAO. Here, we describe how to induce MCAO in rats and how to perform immunofluorescence staining for the detection of cell death signaling in the rat brain following MCAO.

<meta charset="utf8"></head><body>İskemik İnmenin Sıçan Modelinde İmmünofloresan ile Hücre Ölümü Sinyalinin Değerlendirilmesi

Rat in vivo models are indispensable tools to investigate the pathological mechanisms and therapeutic targets for ischemic stroke. This work will describe performing immunofluorescence staining in infarcted brain slices following middle cerebral artery occlusion (MCAO) in rats.

İskemik İnmenin Sıçan Modelinde İmmünofloresan ile Hücre Ölümü Sinyalinin Değerlendirilmesi

Stroke is a leading cause of death and disability worldwide. Most cases of stroke are ischemic and result from the occlusion of the middle cerebral artery ...