Supported by NIH award R01 DK093525 (GFG). We greatly appreciate the scientific review and grammatical editing of the manuscript by Dr. Amber Shaffer (University of Pittsburgh) and thank Michael Burcham for assistance in preparation of figures.

NOT: Bu protokol gözden ve Pittsburgh Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu Üniversitesi tarafından onaylanmıştır. Modifiye Krebs Çözüm ve Test İlaç Alikot 1. Hazırlık <ol><li> 117,9 NaCl, 4,7 KCİ, 25 NaHCO 3, 1.3, NaH 2 PO 4, MgSO 4 1.2, 2.5 CaCl2, 11.1, D-glukoz, 2 sodyum bütirat, 20 sodyum asetat (mM olarak) içeren değiştirilmiş bir Krebs çözeltisi içinde 6 L yapmak 0.004 nifedipin (spontan kas kasılmaları bloke etmek için), ve 0.003 indometasin (endojen prostaglandin sentezini bloke etmek için). Sırasıyla doku diseksiyonu ve tek lif kayıt için buz-soğuk ve sıcak Krebs çözümleri kullanın. </li><li> Herhangi bir kimyasal çözümleri hazırlayın (örn, IS, kapsaisin, ATP) istenen konsantrasyonlarda alikotlarda. </li></ol> Kolorektumun-sinir Doku 2. Diseksiyon <ol><li> Uyutmak ve erkek fareler euthanize (6 - 8 haftalık, 20-30 g)10 yerine geçen bir akış oranında bir CO2 odası - farelerde kadar dakika başına bölme hacminin% 30 göğüs hareketinin olmaması ile gösterildiği gibi tamamen nefes durdurun. </li><li> Hemen sonra, torasik bölme kesmenin sağ atriyum delme ve buz soğukluğunda Krebs geniş bir hacmi (~ 500 mi) fare karkas içine daldırarak ötenazi, asıl bulbus olfaktoryusları aşağıdaki gibidir (4 ° C) bir karbojen (% 95 O2 ile kabarcıklar halinde % 5 CO2). </li><li> Dikkatle tüm iç organları ama kolon ve pelvik organları çıkarın. Biraz göğüs diyafram üzerinde T12 spinal segment boyunca yarısında fare transect ve buz soğuk içeren bir diseksiyon odasına kuyruk yarısını aktarmak, Krebs solüsyonu kabarmış. </li><li> Steromikroskopla, üretraya kavşaklarda transecting ile mesane ve üreme organları kaldırmak ve ortak iliak arterlere üzere iki kola ayrılır kadar inen / abdominal aorta çıkarın. PN veya surroundin gelen LSN Freeg künt diseksiyon ile dokular ve L6 ve S1 vertebra (PN için) sütun veya T13 ve (LSN) L1 vertebra sütuna ventral giriş noktasına kadar iliak dışından sinir izleyin. </li><li> Pubis eklemi ve sağ ve sol asetabuler eklemleri kesin ve iliyak kemiği kaldırmak. Sinir vertebra sütun girdiği yere kadar kolorektal yakın ekli kas ve bağ dokusundan ya PN veya LSN dikkatlice ücretsiz. </li><li> Dikkatle uzak kolorektal maruz iliak kemik rezeksiyonu. Sürekliliğinde bağlı PN veya LSN distal kolorektal parçalara ayır. </li><li> Doku odasının banyo bölmesine bağlı sinir kolorektal aktarın. Daha fazla diseksiyon ile aşırı bağ dokusu çıkarın, ve anti-mezenterik sınırı boyunca uzunlamasına kolorektal açın. </li><li> Yukarı bakacak şekilde mukozal tarafı, Chambe silikon üssü haline kayıt bölmesine bitişik kolorektumun mezenterik kenarını pinR ve bir zorlamalı tahrik düzenine bağlı kanca kesintiye kolorektal antimezenterik uzunluğu bağlamak (Şekil 1 &#39;de gösterilen ve Şekil 2A&#39;da fotoğraflandı). </li><li> Bir fare deliği ve kapısı banyo bölmesi bağlanır kayıt bölmesine, içine PN veya LSN uzatın. Yavaşça sinir uymak için bir hidrofil yüzey sağlar kayıt bölmesi, bir küçük cam ayna üzerine sinir gövde yatıyordu. Sıcak ile banyo bölmesini Superfuse (30-32 ° C), Krebs solüsyonu oksijenli ve mineral yağ ile kayıt bölmesini doldurun. </li></ol> 3. Tek-lif Kayıt ve Alıcı Field lokalizasyonu <ol><li> Dikkatle yüksek büyütme (- 60X 50) de stereomicroscope altında PN veya LSN&#39;den epinöriyuma (sinir kılıfı) geri soyma. ~ 100 mikron kalınlığında 8 sinir demetleri - ince forseps kullanarak, 5 içine sinir gövde alay. </li><li> Platin-iridyum başvuru yerleştirindoku bölmesi içinde Krebs çözeltisi ile temas halindeki elektrot. Sıralı aynı malzemeden yapılmış kayıt elektrot üzerine bireysel sinir demetleri yerleştirin. </li><li> Yavaşça yukarı okşayarak tarafından ve kolorektal yüzeye aşağı kolorektal afferentleri gelen AP uyandırmak için yumuşak bir boya fırçası kullanın. Saptanabilir AP (aksiyon potansiyeli) kayıtları ile kolon innerve sinir demeti (ler) bulun. NOT: PN ve SSN da idrar kesesi ve diğer pelvik organlar innerve. </li><li> Ayrıca 10 mikron kalınlığında ~ ince fasikül filamentler içine sinir demeti bölmek ve kayıt elektrot üzerine bireysel bir filamanın yerleştirmek için 30 G iğne uçları bir çift kullanın. </li><li> Elektriksel akım yayılması ~ 2 mm çapındaki üreten suprathreshold uyaran yoğunluğu (10 mA büyüklüğü, 0,3 Hz @ 0,5 msn süre), en afferent sonlar heyecanlandırmak için mukozal yüzeye dik yuvarlak uçlu eş elektrot yerleştirin. Sistematik (~ 1.5 mm adımlarını elektrot Taşı) Düzleşmiş kolorektumun uzunluğu ve genişliği boyunca açık sonlar yerelleştirilmesine. </li><li> Bir afferent biten heyecanlı olduğunda, asgari uyaran yoğunluğunu (uyaran eşik) gerektirir aktivasyon (açık alan, RF) siteyi kesin olarak belirlemek için elektrot konumunu ayarlamak. &gt; 3 mA 19 bir uyarıcı eşik sonlar atın. </li><li> Uyaran parazit ve aksiyon potansiyeli başlangıcı arasındaki iletim hızı 1 (CV)) alıcı alan (RF) en uyarıcı elektrot ve kayıt sitesi ve 2) iletim gecikmesi (örneğin, Şekil 2B arasındaki mesafe) hesaplayın . Özgeçmiş (m / sn) = uzaklık (mm) / iletim gecikmesi (msn). </li></ol> Mechanosensitive Kolorektal afferentlerin 4. Fonksiyonel Sınıflandırılması <ol><li> Elektriksel stimülasyon ile bir RF bulduktan sonra, RF aşağıdaki üç mekanik uyaranlara geçerlidir: <ol><li> Bir Calibra ucu basarak tarama uyaran Davranışted von Frey gibi naylon monofilament (0.4 ve 1 gr gücü) dik düzleştirilmiş kolorektumun üzerinde RF doğru. </li><li> Yavaşça RF küçük bir yüzey kayma gerilmesi oluşturmak için ince bir naylon iplik telinin (10 mg kuvveti) ile kolorektal mukozayı okşayarak tarafından okşayarak uyaran Davranış. </li><li> Rampalı bir germe kuvveti sağlayan bir bilgisayar kontrollü kuvvet aktüatörü kullanılarak çevresel streç Davranış - aşama 2.8 &#39;de tarif edilen kanca tırmık ile kolorektal anti-mezenterik kenarı boyunca çevresel yönde (0 5 mN / sn 170 mN) . </li></ol></li><li> Serozal olarak, mukozal (sondalama künt sadece cevap) afferentler sınıflandırır kas (çevresel streç cevap ve sondalama künt) kas / mukozal (çevresel streç, mukozal okşayarak cevap ve sondalama künt), ya da, (okşayarak mukoza ve sondalama künt cevap) MIA (üç mekanik uyarıcılara herhangi birine yanıt yok). </li><li> Sadece (mezenterik afferentleri içinZor LSN innervasyon), elektrik stimülasyonu ile seçici aktive mezenter sondalama / mekanik okşayarak kendi alıcı sonlar bulmak için. </li><li> Streç duyarlı afferentleri (kas ve kas-mukozal) için, rampalı streç sırasında ilk AP çağrıştırıyor kuvvet olarak tanımlanan tepki eşiğini belirlemek. </li><li> Serozal afferentlerin için, bilgisayar kontrollü kuvvet aktüatör tarafından yönlendirilen açık alan tarama punktat düzeylerini artan onların yanıtlarını kaydedin. </li></ol> Alıcı Endings 5. Kimyasal Uygulama / Modülasyon <ol><li> Mekanik uyarana bir temel yanıtı kaydedin (yani, rampalı streç, sondalama punktat veya mukozal okşayarak yanıt). </li><li> Coat alt boru (10 mm yüksekliğinde ve 4 x 4 mm 2 kare veya 4 pirinç veya paslanmaz çelikten, - 5 mm çapında) bir parçasının kenar vazelin ve kolorektal üzerinde açık alana üzerine yerleştirin. </li><li> KaldırKimyasal (lar), test edilecek içeren çözeltinin 5 dakika 170 ul - Krebs boru içine çözeltisi ve 3 için açık bir son maruz kalmaktadır. </li><li> Kimyasal uygulama sırasında aferentinin yanıtı Monitör (bazı afferentler kemosensitif vardır). </li><li> Kimyasal işlem sona erdirmek için kimyasal çözeltisi ve boru çıkarın. 4 içinde - 6 dakika, bazal yanıt aynı mekanik uyarana afferent cevabı test. </li><li> Yıkama-out yeterli bir süre (&gt; 15 dk) sonra yeniden mekanik uyaran yeniden uygulayın. </li></ol> 6. Kayıt ve Ayırıcı AP sivri <ol><li> 20 kHz akson kaydedilen elektrik sinyallerini dijital ortama aktarmak ve bir bilgisayara verileri kaydetmek. Bir ses monitör ile on-line sinyali izleyin. </li><li> Off-line AP ani analiz ve bireysel başak dalga formları 25 temel bileşen analizi dayalı tek birimleri ayırt. NOT: Bir rekor inci artık içermelidirbir, iki, kolayca discriminable aktif birimleri. </li></ol>

<ol>
	<li>Naliboff, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+two+distinct+perceptual+alterations+in+irritable+bowel+syndrome.">Evidence for two distinct perceptual alterations in irritable bowel syndrome.</a> Gut. 41, 505-512 (1997).</li><li>Verne, G. N., Robinson, M. E., Vase, L., Price, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+visceral+and+cutaneous+hyperalgesia+by+local+rectal+anesthesia+in+irritable+bowel+syndrome+(IBS)+patients.">Reversal of visceral and cutaneous hyperalgesia by local rectal anesthesia in irritable bowel syndrome (IBS) patients.</a> Pain. 105, 223-230 (2003).</li><li>Verne, G. N., Sen, A., Price, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrarectal+lidocaine+is+an+effective+treatment+for+abdominal+pain+associated+with+diarrhea-predominant+irritable+bowel+syndrome.">Intrarectal lidocaine is an effective treatment for abdominal pain associated with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome.</a> Journal of Pain. 6, 493-496 (2005).</li><li>Chey, W. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linaclotide+for+irritable+bowel+syndrome+with+constipation:+a+26-week,+randomized,+double-blind,+placebo-controlled+trial+to+evaluate+efficacy+and+safety.">Linaclotide for irritable bowel syndrome with constipation: a 26-week, randomized, double-blind, placebo-controlled trial to evaluate efficacy and safety.</a> Am J Gastroenterol. 107, 1702-1712 (2012).</li><li>Rao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+12-week,+randomized,+controlled+trial+with+a+4-week+randomized+withdrawal+period+to+evaluate+the+efficacy+and+safety+of+linaclotide+in+irritable+bowel+syndrome+with+constipation.">A 12-week, randomized, controlled trial with a 4-week randomized withdrawal period to evaluate the efficacy and safety of linaclotide in irritable bowel syndrome with constipation.</a> Am J Gastroenterol. 107, 1714-1724 (2012).</li><li>Busby, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+properties,+metabolism,+and+disposition+of+linaclotide,+a+novel+therapeutic+peptide+approved+for+the+treatment+of+irritable+bowel+syndrome+with+constipation+and+chronic+idiopathic+constipation.">Pharmacologic properties, metabolism, and disposition of linaclotide, a novel therapeutic peptide approved for the treatment of irritable bowel syndrome with constipation and chronic idiopathic constipation.</a> J Pharmacol Exp Ther. 344, 196-206 (2013).</li><li>Mei, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+chemosensitivity.">Intestinal chemosensitivity.</a> Physiol Rev. 65, 211-237 (1985).</li><li>Mei, N., Lucchini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+data+and+ideas+on+digestive+sensitivity.">Current data and ideas on digestive sensitivity.</a> J Auton Nerv Syst. 41, 15-18 (1992).</li><li>Su, X., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanosensitive+pelvic+nerve+afferent+fibers+innervating+the+colon+of+the+rat+are+polymodal+in+character.">Mechanosensitive pelvic nerve afferent fibers innervating the colon of the rat are polymodal in character.</a> J Neurophysiol. 80, 2632-2644 (1998).</li><li>McMahon, S. B., Morrison, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+neurones+with+long+projections+activated+from+the+abdominal+viscera+of+the+cat.">Spinal neurones with long projections activated from the abdominal viscera of the cat.</a> J Physiol. 322, 1-20 (1982).</li><li>Cervero, F., Sann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanically+evoked+responses+of+afferent+fibres+innervating+the+guinea-pig's+ureter:+an+in+vitro+study.">Mechanically evoked responses of afferent fibres innervating the guinea-pig's ureter: an in vitro study.</a> J Physiol. 412, 245-266 (1989).</li><li>Sengupta, J. N., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanosensitive+properties+of+pelvic+nerve+afferent+fibers+innervating+the+urinary+bladder+of+the+rat.">Mechanosensitive properties of pelvic nerve afferent fibers innervating the urinary bladder of the rat.</a> J Neurophysiol. 72, 2420-2430 (1994).</li><li>Sengupta, J. N., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mechanosensitive+pelvic+nerve+afferent+fibers+innervating+the+colon+of+the+rat.">Characterization of mechanosensitive pelvic nerve afferent fibers innervating the colon of the rat.</a> J Neurophysiol. 71, 2046-2060 (1994).</li><li>Habler, H. J., Janig, W., Koltzenburg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+unmyelinated+afferent+fibres+by+mechanical+stimuli+and+inflammation+of+the+urinary+bladder+in+the+cat.">Activation of unmyelinated afferent fibres by mechanical stimuli and inflammation of the urinary bladder in the cat.</a> J Physiol. 425, 545-562 (1990).</li><li>Habler, H. J., Janig, W., Koltzenburg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+type+of+unmyelinated+chemosensitive+nociceptor+in+the+acutely+inflamed+urinary+bladder.">A novel type of unmyelinated chemosensitive nociceptor in the acutely inflamed urinary bladder.</a> Agents Actions. 25, 219-221 (1988).</li><li>Brierley, S. M., Jones, R. C., Gebhart, G. F., Blackshaw, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Splanchnic+and+pelvic+mechanosensory+afferents+signal+different+qualities+of+colonic+stimuli+in+mice.">Splanchnic and pelvic mechanosensory afferents signal different qualities of colonic stimuli in mice.</a> Gastroenterology. 127, 166-178 (2004).</li><li>Meyer, R. A., Davis, K. D., Cohen, R. H., Treede, R. D., Campbell, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanically+insensitive+afferents+(MIAs)+in+cutaneous+nerves+of+monkey.">Mechanically insensitive afferents (MIAs) in cutaneous nerves of monkey.</a> Brain Res. 561, 252-261 (1991).</li><li>Handwerker, H. O., Kilo, S., Reeh, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unresponsive+afferent+nerve+fibres+in+the+sural+nerve+of+the+rat.">Unresponsive afferent nerve fibres in the sural nerve of the rat.</a> J Physiol. 435, 229-242 (1991).</li><li>Feng, B., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+silent+afferents+in+the+pelvic+and+splanchnic+innervations+of+the+mouse+colorectum.">Characterization of silent afferents in the pelvic and splanchnic innervations of the mouse colorectum.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 300, G170-G180 (2011).</li><li>Feng, B., La, J. H., Schwartz, E. S., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irritable+bowel+syndrome:+methods,+mechanisms,+and+pathophysiology.+Neural+and+neuro-immune+mechanisms+of+visceral+hypersensitivity+in+irritable+bowel+syndrome.">Irritable bowel syndrome: methods, mechanisms, and pathophysiology. Neural and neuro-immune mechanisms of visceral hypersensitivity in irritable bowel syndrome.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G1085-G1098 (2012).</li><li>Feng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+sensitization+of+mechanosensitive+and+-insensitive+afferents+in+mice+with+persistent+colorectal+hypersensitivity.">Long-term sensitization of mechanosensitive and -insensitive afferents in mice with persistent colorectal hypersensitivity.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G676-G683 (2012).</li><li>Feng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+colorectal+afferent+function+associated+with+TNBS-induced+visceral+hypersensitivity+in+mice.">Altered colorectal afferent function associated with TNBS-induced visceral hypersensitivity in mice.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G817-G824 (2012).</li><li>Feng, B., Brumovsky, P. R., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+roles+of+stretch-sensitive+pelvic+nerve+afferents+innervating+mouse+distal+colon+and+rectum.">Differential roles of stretch-sensitive pelvic nerve afferents innervating mouse distal colon and rectum.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 298, G402-G409 (2010).</li><li>Feng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+guanylate+cyclase-C+attenuates+stretch+responses+and+sensitization+of+mouse+colorectal+afferents.">Activation of guanylate cyclase-C attenuates stretch responses and sensitization of mouse colorectal afferents.</a> J Neurosci. 33, 9831-9839 (2013).</li><li>Jolliffe, I. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principal component analysis. , (2002).</li><li>La, J. H., Feng, B., Schwartz, E. S., Brumovsky, P. R., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Luminal+hypertonicity+and+acidity+modulate+colorectal+afferents+and+induce+persistent+visceral+hypersensitivity.">Luminal hypertonicity and acidity modulate colorectal afferents and induce persistent visceral hypersensitivity.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G802-G809 (2012).</li><li>Christianson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=plasticity+and+modulation+of+visceral+afferents.">plasticity and modulation of visceral afferents.</a> Brain Research Reviews. 60, 171-186 (2009).</li><li>Kiyatkin, M. E., Feng, B., Schwartz, E. S., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+genetic+and+pharmacological+inhibition+of+TRPV1+and+P2X3+attenuates+colorectal+hypersensitivity+and+afferent+sensitization.">Combined genetic and pharmacological inhibition of TRPV1 and P2X3 attenuates colorectal hypersensitivity and afferent sensitization.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 305, G638-G648 (2013).</li><li>Brumovsky, P. R., Feng, B., Xu, L., McCarthy, C. J., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cystitis+increases+colorectal+afferent+sensitivity+in+the+mouse.">Cystitis increases colorectal afferent sensitivity in the mouse.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 297, G1250-G1258 (2009).</li><li>Shinoda, M., Feng, B., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+and+central+P2X+receptor+contributions+to+colon+mechanosensitivity+and+hypersensitivity+in+the+mouse.">Peripheral and central P2X receptor contributions to colon mechanosensitivity and hypersensitivity in the mouse.</a> Gastroenterology. 137, 2096-2104 (2009).</li><li>Tanaka, T., Shinoda, M., Feng, B., Albers, K. M., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+visceral+hypersensitivity+by+glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor+family+receptor+&#945;-3+in+colorectal+afferents.">Modulation of visceral hypersensitivity by glial cell line-derived neurotrophic factor family receptor &#945;-3 in colorectal afferents.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 300, G418-G424 (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Burada tarif edilen in vitro kolorektum-sinir hazırlık güzel visseral duyusal nöronlar diğer fonksiyonel olmayan yaklaşımlar (örn, hücresel, moleküler ve histolojik çalışmalar) tamamlar bireysel kolorektal aferentlerin, nöral kodlama işlevlerini (çalışmak için güçlü bir yaklaşım olduğu kanıtlanmıştır ) Detaylar için gözden 27. bkz. Nosisepsiyon ve uzun vadeli kolorektal aşırı duyarlılık katkıda Nöronal mekanizmalar ortaya konmuştur ve farmakolojik manip...

Ağrı ve aşırı duyarlılık belirgin biyopatolojik neden veya doku hasarının olmaması durumunda, irritabl bağırsak sendromu (IBS) gibi mide-bağırsak işlev bozuklukları, mustarip hastalarda baskın şikayetleri bulunmaktadır. Örneğin, IBS hastaları (karın alan palpasyonla yani, hassasiyet) normal bağırsak fonksiyonu sırasında rektal balon şişkinlik ve artan duyarlılığı artan tepkiler de dahil olmak üzere aşırı duyarlılık, yanı sıra somatik sevk aşırı duyarlılık gösterirler 1. Arasında, daha iyi anlaşılması, kolorektal ileticileri hedefleme IBS hastalarında (guanilat siklaza Cı agonisti linaclotide 4-6 oral yoldan, örneğin, lokal anestezik 2,3 intra-rektal instilasyon) ağrı ve aşırı duyarlılık azaltmada etkili olduğu kanıtlanmıştır çünkü kolorektumun afferent innervasyon önemlidir. Kolorektal afferentlerin dahil viseral afferentleri,/ Kimyasal besleyici- ve termal modaliteleri (örneğin, 7-9) yanıt yeteneğine sahiptir. Ancak, mekanik uyaranlara (yani, mechanosensitive afferentleri) yanıt visseral afferentlerin olmuştur mekanik uyaranlara (örn, lümen distansiyonu, streç), genellikle rahatsızlık ve ağrı 10-16 olmak üzere bilinçli duyumlar, yol olanlardır çünkü çoğu iyice okudu. Buna ek olarak, organlar da yaygın, mekanik duyarsız afferentleri (MIAS) tarafından innerve sessiz ya da uyku nosiseptörleri 17 adlandırılır. Normal fizyolojik şartlar altında, MIAS mekanik uyarıya yanıt ya da çok yüksek bir tepki 18 eşikleri, ancak aktif hale gelir ve patofizyolojik koşullarda mechanosensitivity kazanmak ve aşırı duyarlılık katkıda bulunabilir yoktur. Burada tarif edilen in vitro hazırlık ve protokolü kullanarak, biz geliştirdik ve denize bir elektrik uyaran stratejisi istihdam<html> kolorektal 19 hem mechanosensitive ve MIA sonlar tarafsız kimlik izin alıcı sonlar için rch. kolorektal innervasyon lomber splanknik (SSN) ve pelvik sinir (PN) yollar türetilen ve beş mechanosensitive sınıflar (serozal, mukozal, kas, kas-mukozal, mezenterik) ve bir MIA sınıfına 20 olarak kategorize edilebilir kolorektal afferentler içerir. Bu in vitro hazırlanmasını kullanarak, kolorektal MIAS elde edilen mechanosensitivity LSN yolunun PN yolunda MIAS% 71 ve MIAS% 23 duyarlı enflamatuar bir çorba (IS), kendi açık alanları arasında kısa maruz kaldıktan sonra (duyarlı) bulundu 19. Ayrıca, uzun süreli davranış viseral aşırı duyarlılık bağlamında MIAS uzun süreli hassasiyet (en fazla 28 gün) belgelenmiştir (zimosan 21 ya da 2,4,6-trinitrobenzen sülfonik asit içinin tedavi uygulanan farelerde, örneğin, (TNBS) 22) . mechanosensitive afferentlerin, kas ve kas-mukozal afferentleri arasında jove_content &quot;&gt; (yani, streç duyarlı) ve zararlı kolorektal distansiyon 23,24 kodlamasını işine yaramak tonik kolorektumun çevresel streç kodlamak tek sınıflardır. Bir bilgisayar-kontrollü kullanma Zorlamalı tahrik düzeni, biz düzleştirilmiş kolorektal doku çevresel yönde bir standart, homojen ve yeniden üretilebilir bir rampalı streç uygulanan ve streç duyarlı ileticilerin, düşük eşik değeri ve yüksek eşik 23 kategorize. Buna ek olarak, germe sensitizasyon zaman sürecini intrakolonik zimosan 21 veya TNBS 22 tedavisinden sonra -duyarlı afferentleri visseral ağrı ve aşırı duyarlılık streç duyarlı kolorektal aferentlerin bir rolü olduğunu düşündürmektedir, davranışsal visseral aşırı duyarlılık başlangıcı, sebat ve / veya kurtarma karşılık gelir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1173">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:291px;">Company</td>
			<td style="width:137px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:372px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica MZ16 stereo microscope&#160;</td>
			<td>Leica Microsystems Inc.</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica IC D camera</td>
			<td>Leica Microsystems Inc.</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Amplifier</td>
			<td>World Precision instruments, Inc.</td>
			<td>SYS-DAM80&#160;</td>
			<td>Low-noise differential amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Two-compartment tissue chamber</td>
			<td style="width:291px;">Custom made</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Power1401</td>
			<td>Cambridge Electronic Design Limited</td>
			<td style="width:137px;">Power1401</td>
			<td>Data acquisition, analog signal input/out</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Spike2 v5.02</td>
			<td>Cambridge Electronic Design Limited</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td>Software package that works with the Power1401</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Audio monitor</td>
			<td>Natus</td>
			<td style="width:137px;">Am 8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Square pulse stimulator</td>
			<td>Natus</td>
			<td style="width:137px;">S48</td>
			<td>To deliver electrical stimuli</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Photoelectric isolation unit</td>
			<td>Natus</td>
			<td style="width:137px;">PSIU6</td>
			<td>Stimulus isolation to reduce noise</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Concentric bipolar microelectrode</td>
			<td style="width:291px;">FHC Inc.</td>
			<td style="width:137px;">CBFFG75</td>
			<td>To deliver electrical stimuli</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dual-mode lever system</td>
			<td>Aurora Scientific Inc.</td>
			<td style="width:137px;">Series 300C&#160;</td>
			<td>To deliver mechanical stimuli</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11252-00</td>
			<td>forceps with fine tips</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro functional characterization of mouse colorectal afferent endings

Bu video ayrıntılı olarak, bir fare kolorektum sinir preparatı kullanılarak bir in vitro tek lif elektrofizyolojik kayıt protokolünü gösterir. yaklaşımı tarafsız kimlik ve bireysel kolorektal afferentlerin fonksiyonel karakterizasyonu sağlar. Bir veya birkaç afferent kaynaklanan yayılan aksiyon potansiyeli (AP) dışı kayıtları (yani, tek-lif) kolorektumda alıcı alanlar (RFS) alay sinir lifi fasiküller yapılır. kolorektum pelvis (PN) veya bel splanknik (LSN) sinir bağlı ve boylamasına açılmıştır ya çıkarılır. Doku düz tutturulmuş ve oksijene edilmiş Krebs çözeltisi ile perfüze, bir kayıt bölümü içinde yer almaktadır. Odak elektriksel stimülasyon işlevsel beş mechanosensi içine afferentler kategorize (sondalama mukozal okşayarak ve çevresel streç künt) ayrıca üç farklı mekanik uyaranlarla test edilmektedir kolorektal afferent sonlar, bulmak için kullanılırtive sınıflar. Bu mekanik uyaranlara hiçbiri yanıt sonlar mekanik duyarsız afferentleri (MIAS) olarak kategorize edilir. Kimyasallara RFS lokalize maruz mechanosensitive ve MIAS sensitizasyon (yani, gelişmiş yanıt, azaltılmış eşik, ve / veya mechanosensitivity edinimi) için değerlendirilebilir Hem (örneğin, iltihabi çorba (IS), kapsaisin, adenozin trifosfat (ATP)). Biz ekipman ve kolorektum-sinir kayıt hazırlık, ekli PN veya LSN, sinir liflerinin gelen kolorektum, tek-lif kayıt RFS belirlenmesi ile kolorektumun hasat ve RF kimyasalların lokalize uygulamasını açıklar. Buna ek olarak, hazırlık ve standart mekanik uyarım uygulama zorlukları da tartışılmıştır.

Kurulum, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Bu, bir silikon-kaplı banyo bölmesi ve bitişik bir mineral yağ ile doldurulmuş bölmesine bağlı sinir kolorektal barındıran bir ölçüye doku odasını kapsamaktadır. İki bölmeli odası CNC makinesi ile akrilik plastik bir katı blok işlenmiş edildi; Her iki bölmelerin alt sonradan kolorektal doku aşağı kolay pimini izin firma silikon ile kaplı. Alay sinir liflerinin hücre dışı AP yüksek ortak mod reddetme oranı (CMRR ~ 60 dB) ile dü...

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings at JoVE.com

In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

This video demonstrates a protocol for conducting single-fiber electrophysiological recordings on an in vitro mouse colorectum-nerve preparation.

Fare Kolorektal Afferent Endings in vitro Fonksiyonel Karakterizasyonu içinde

This video demonstrates in detail an in vitro single-fiber electrophysiological recording protocol using a mouse colorectum-nerve preparation. The ...

in-vitro-functional-characterization-mouse-colorectal-afferent

Research

JoVE Journal

Medicine

In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

9.5K Görüntüleme.  University of Pittsburgh. This video demonstrates a protocol for conducting single-fiber electrophysiological recordings on an in vitro mouse colorectum-nerve preparation. 