Supported by NIH award R01 DK093525 (GFG). We greatly appreciate the scientific review and grammatical editing of the manuscript by Dr. Amber Shaffer (University of Pittsburgh) and thank Michael Burcham for assistance in preparation of figures.

참고 :이 프로토콜을 검토하고 피츠버그 기관 동물 관리 및 사용위원회의 대학에 의해 승인되었다. 수정 크렙스 솔루션 및 시험 약물 분취 1. 준비 <ol><li> 117.9의 NaCl, 4.7 KCl을 25의 NaHCO3, 1.3의 NaH 2 PO 4, 황산 1.2, 2.5 CaCl2를 11.1 D 글루코오스, 2 소듐 뷰티 레이트, (20), 아세트산 나트륨 (mm 단위)가 포함 개질 크렙스 용액 6 L 만들기 0.004 니페디핀 (자발적인 근육의 수축을 차단하기 위해), 0.003 인도 메타 신 (indomethacin)은 (내인성 프로스타글란딘의 합성을 차단하기 위해). 각각 조직의 절개 및 단일 섬유 녹음, 얼음처럼 차가운 따뜻한 크렙스 솔루션을 사용합니다. </li><li> 모든 화학 용액을 준비 (예를 들어, IS, 캅사이신, ATP) 원하는 농도로 분액. </li></ol> 대장 직장 - 신경 조직의 2 해부 <ol><li> 마취 및 수컷 마우스 안락사 (6-8주 이전, 20~30g)에서를10 변위 유량 CO 2 실 - 생쥐까지 분당 챔버 체적의 30 %는 가슴 움직임의 부재로 나타내는 바와 같이 호흡 완전히 멈춘다. </li><li> 즉시, 흉부 챔버를 개방 절단 우심방을 천공하고, 얼음처럼 차가운 크렙스의 충분한 볼륨 (~ 500 ml)에 마우스 시체를 침지 안락사,에게서 피를 뽑다 다음 (4 ° C) 솔루션은 carbogen (95 % O 2 버블 5 % CO 2). </li><li> 조심스럽게 모든 내장 그러나 콜론과 골반 장기를 제거합니다. 약간 횡격막 위 T12 척추 분절에 걸쳐 반 마우스 횡단면과 빙냉 함유 해부 챔버에 꼬리 절반을 전송하고, 크렙스 용액을 버블. </li><li> 실체 현미경 아래에서 요도에 자신의 접합에에 병행하여 방광 및 생식 기관을 제거하고 총장 골 동맥으로 분기합니다 때까지 하강 / 복부 대동맥을 제거합니다. PN 또는 surroundin에서 LSN 무료g의 무딘 절개하여 조직과 L6 및 S1 척추 (PN)에 열 또는 T13과 (LSN)에 L1 척추에 자사의 복부 진입 점까지 장골 외부에서 신경을 따릅니다. </li><li> 치골 치골 좌우 비구 관절을 잘라 및 장골 뼈를 제거합니다. 신경이 척추를 입력 어디까지 대장 직장 가까이에서 첨부 된 근육과 결합 조직에서 하나 PN 또는 LSN 조심스럽게 무료. </li><li> 조심스럽게 원위부 대장 직장을 노출 장골 뼈를 절제. 연속체에 부착 된 PN 또는 LSN과 원위부 대장 직장을 해부하다. </li><li> 티슈 챔버의 욕조에 부착 함과 함께 신경 대장 직장 전송. 더 해부 과도한 결합 조직을 제거하고 방지 장간막 국경을 따라 길이 방향으로 대장 직장을 엽니 다. </li><li> 이 위를 향하도록 점막면, chambe의 실리콘베이스에 기록 구획에 인접한 대장 직장의 장간막 가장자리를 고정R 및 힘은 액추에이터에만 연결 후크 긁어 대장 직장의 길이 antimesenteric 부착 (도 1에 도시되고도 2a에 촬영). </li><li> 마우스 홀 및 게이트에 의해 목욕 구획에 연결되는 기록 구획에 PN이나 LSN 연장. 부드럽게에 신경을 준수 할 수있는 친수성 ​​표면을 제공 녹화 실에서 작은 유리 거울에 신경 트렁크를하다. 따뜻한와 목욕 구획 Superfuse (30-32 ° C가), 크렙스 솔루션을 산소와 미네랄 오일과 기록 구획을 입력합니다. </li></ol> 3. 단일 섬유 녹음하고 받아들이는 필드의 현지화 <ol><li> 조심스럽게 높은 배율 (- 60X 50)에 입체 현미경 PN 또는 LSN에서 epineurium (신경초)를 벗겨. ~ 100 ㎛ 두께의 8 신경 다발 - 미세 집게를 사용하여, 5에 신경 트렁크를 애타게. </li><li> 백금 - 이리듐 참조를 배치티슈 챔버 크렙스 용액과 접촉하는 전극. 순차적으로 동일한 재료로 이루어진 기록 전극 상 개별 신경 다발을 배치. </li><li> 부드럽게 쓰다듬어에 의해 대장 표면 아래로 대장 구 심성에서 AP를 보여주고 부드러운 페인트 브러시를 사용합니다. 검출 AP (활동 전위) 녹음을 통해 콜론에 분포 신경 다발 (들)를 찾습니다. 참고 : PN과 LSN은 또한 방광과 골반 장기에 분포. </li><li> 추가로 10 μm의 두께 ~ 미세 필라멘트 다발로 신경 다발을 분할하고, 기록 전극 상 개별 필라멘트를 배치 30 G 바늘 팁의 쌍을 사용한다. </li><li> 전기적 현재 확산의 ~ 2mm 반경을 생산 초과 임계 자극 강도 (10mA 크기, 0.3 Hz에서 @ 0.5 밀리 초 시간)에서 구 심성 엔딩을 자극하는 점막 표면에 수직 라운드 팁 동심 전극을 배치합니다. 체계적 (~ 1.5 mm 단계를 전극 이동) 평평 대장 직장의 길이와 폭을 따라 수용 엔딩 현지화. </li><li> 구 심성 결말이 흥분 할 때, 최소한의 자극 강도 (자극 임계 값)이 필요 활성화 (수용 필드, RF)의 위치를​​ 정확히 파악할 수있는 전극의 위치를​​ 조정합니다. &gt; 3mA (19) 자극 임계 값 엔딩을 폐기하십시오. </li><li> 자극 인공물과 활동 전위의 발병 사이의 전도 속도 1 ~ (CV)) 수용 필드 (RF)에서, 자극 전극 및 상기 기록 위치, 2) 전도 지연 (예를 들어,도 2B의 간격)를 계산 . CV (m / 초) = 거리 (mm) / 전도 지연 (밀리 초). </li></ol> Mechanosensitive 대장 구 심성의 4 기능 분류 <ol><li> 전기 자극에 의​​한 RF를 찾은 후, RF에 다음과 같은 세 가지 기계적인 자극을 적용 <ol><li> CALIBRA의 끝을 눌러 프로빙 자극을 실시테드 프레이 같은 나일론 모노 필라멘트 (0.4 1g의 힘) 수직으로 평탄화 된 대장 직장에서 RF쪽으로. </li><li> 부드럽게 RF에 작은 표면 전단 응력을 생성하는 좋은 나일론 필라멘트 가닥 (10 mg의 힘)으로 대장 점막을 쓰다듬어하여 쓰다듬어 자극을 실시한다. </li><li> 경 스트레칭 력을 얻어 컴퓨터 제어 동력 액츄에이터를 이용하여 원주 연신을 실시 - 단계 2.8에 기재된 후크 퀴 통하여 대장 직장의 항 장간막 가장자리를 따라 원주 방향 (0~5 mN의 / 초에서 170 MN) . </li></ol></li><li> 장막으로, 점막을 (프로빙 둔 만 응답) 구 심성을 분류 근육 (원주 스트레칭에 대응하고 프로빙 둔) 근육 / 점막을 (원주 스트레칭, 점막 쓰다듬어에 대응하고 프로빙 둔), 또는 (쓰다듬어 점막 및 프로빙 둔 응답) MIA (세 기계적 자극의에 반응하지 않음). </li><li> 만에 (장간막 구 심성의 경우어려운 LS​​N의 신경 분포)은 전기 자극에 의​​해 선택적으로 활성화 장간막의 프로빙 / 기계 쓰다듬어하여 수용 엔딩을 찾습니다. </li><li> 스트레칭에 민감한 구 심성 (근육과 근육 점막)의 경우, 경 스트레칭 중 첫 번째 AP를 불러 일으키는 힘으로 정의 된 응답 임계 값을 결정합니다. </li><li> 장막 심성 들면, 컴퓨터 제어 동력 구동되는 액추에이터에 의해 수용 필드의 프로빙 점상의 수준을 상승 그들의 응답을 기록. </li></ol> 받아들이는 엔딩 5. 화학 응용 프로그램 / 변조 <ol><li> 기계적인 자극에 대한 기본 응답을 기록 (즉, 경 스트레칭, 프로빙 반점, 또는 점막 쓰다듬어에 응답). </li><li> 코트 바닥 튜브 (10mm 높고 4 × 4mm 2 정사각형 또는 4 황동 또는 스테인레스 스틸, - 5 mm 직경)의 조각의 가장자리에 바셀린과 대장 직장의 수용 필드 위에 놓습니다. </li><li> 제거화학 물질 (들)을 검사 할 함유하는 용액을 5 분에 170 μL - 크렙스 내부 튜브 용액 및 3에 대해 수용 결말을 노출. </li><li> 화학 응용 프로그램 중 심성의 반응을 모니터 (일부 구 심성은 chemosensitive 있습니다). </li><li> 화학 물질의 작용을 정지하고, 약액 튜브를 제거한다. 내 4 - 6 분, 기준선 응답과 동일한 기계적 자극에 대한 구 심성 응답을 테스트한다. </li><li> 워시 아웃의 충분한 기간 (&gt; 15 분) 후 다시 기계적인 자극을 다시 적용합니다. </li></ol> 6. 녹음 및 차별 AP 스파이크 <ol><li> 20 kHz에서 축삭에서 기록 된 전기 신호를 디지털화하여 컴퓨터에 데이터를 저장한다. 오디오 모니터에 의해 온라인 신호를 모니터링합니다. </li><li> 오프라인 AP 스파이크를 분석하고 개별 스파이크 파형 (25)의 주성분 분석을 기반으로 하나의 단위를 구별. 참고 : 하나의 기록이 일 더 이상 포함되어야합니다두 쉽게 식별 가능한 활성 단위. </li></ol>

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	<li>Naliboff, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+two+distinct+perceptual+alterations+in+irritable+bowel+syndrome.">Evidence for two distinct perceptual alterations in irritable bowel syndrome.</a> Gut. 41, 505-512 (1997).</li><li>Verne, G. N., Robinson, M. E., Vase, L., Price, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+visceral+and+cutaneous+hyperalgesia+by+local+rectal+anesthesia+in+irritable+bowel+syndrome+(IBS)+patients.">Reversal of visceral and cutaneous hyperalgesia by local rectal anesthesia in irritable bowel syndrome (IBS) patients.</a> Pain. 105, 223-230 (2003).</li><li>Verne, G. N., Sen, A., Price, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrarectal+lidocaine+is+an+effective+treatment+for+abdominal+pain+associated+with+diarrhea-predominant+irritable+bowel+syndrome.">Intrarectal lidocaine is an effective treatment for abdominal pain associated with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome.</a> Journal of Pain. 6, 493-496 (2005).</li><li>Chey, W. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linaclotide+for+irritable+bowel+syndrome+with+constipation:+a+26-week,+randomized,+double-blind,+placebo-controlled+trial+to+evaluate+efficacy+and+safety.">Linaclotide for irritable bowel syndrome with constipation: a 26-week, randomized, double-blind, placebo-controlled trial to evaluate efficacy and safety.</a> Am J Gastroenterol. 107, 1702-1712 (2012).</li><li>Rao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+12-week,+randomized,+controlled+trial+with+a+4-week+randomized+withdrawal+period+to+evaluate+the+efficacy+and+safety+of+linaclotide+in+irritable+bowel+syndrome+with+constipation.">A 12-week, randomized, controlled trial with a 4-week randomized withdrawal period to evaluate the efficacy and safety of linaclotide in irritable bowel syndrome with constipation.</a> Am J Gastroenterol. 107, 1714-1724 (2012).</li><li>Busby, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+properties,+metabolism,+and+disposition+of+linaclotide,+a+novel+therapeutic+peptide+approved+for+the+treatment+of+irritable+bowel+syndrome+with+constipation+and+chronic+idiopathic+constipation.">Pharmacologic properties, metabolism, and disposition of linaclotide, a novel therapeutic peptide approved for the treatment of irritable bowel syndrome with constipation and chronic idiopathic constipation.</a> J Pharmacol Exp Ther. 344, 196-206 (2013).</li><li>Mei, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+chemosensitivity.">Intestinal chemosensitivity.</a> Physiol Rev. 65, 211-237 (1985).</li><li>Mei, N., Lucchini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+data+and+ideas+on+digestive+sensitivity.">Current data and ideas on digestive sensitivity.</a> J Auton Nerv Syst. 41, 15-18 (1992).</li><li>Su, X., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanosensitive+pelvic+nerve+afferent+fibers+innervating+the+colon+of+the+rat+are+polymodal+in+character.">Mechanosensitive pelvic nerve afferent fibers innervating the colon of the rat are polymodal in character.</a> J Neurophysiol. 80, 2632-2644 (1998).</li><li>McMahon, S. B., Morrison, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+neurones+with+long+projections+activated+from+the+abdominal+viscera+of+the+cat.">Spinal neurones with long projections activated from the abdominal viscera of the cat.</a> J Physiol. 322, 1-20 (1982).</li><li>Cervero, F., Sann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanically+evoked+responses+of+afferent+fibres+innervating+the+guinea-pig's+ureter:+an+in+vitro+study.">Mechanically evoked responses of afferent fibres innervating the guinea-pig's ureter: an in vitro study.</a> J Physiol. 412, 245-266 (1989).</li><li>Sengupta, J. N., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanosensitive+properties+of+pelvic+nerve+afferent+fibers+innervating+the+urinary+bladder+of+the+rat.">Mechanosensitive properties of pelvic nerve afferent fibers innervating the urinary bladder of the rat.</a> J Neurophysiol. 72, 2420-2430 (1994).</li><li>Sengupta, J. N., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mechanosensitive+pelvic+nerve+afferent+fibers+innervating+the+colon+of+the+rat.">Characterization of mechanosensitive pelvic nerve afferent fibers innervating the colon of the rat.</a> J Neurophysiol. 71, 2046-2060 (1994).</li><li>Habler, H. J., Janig, W., Koltzenburg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+unmyelinated+afferent+fibres+by+mechanical+stimuli+and+inflammation+of+the+urinary+bladder+in+the+cat.">Activation of unmyelinated afferent fibres by mechanical stimuli and inflammation of the urinary bladder in the cat.</a> J Physiol. 425, 545-562 (1990).</li><li>Habler, H. J., Janig, W., Koltzenburg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+type+of+unmyelinated+chemosensitive+nociceptor+in+the+acutely+inflamed+urinary+bladder.">A novel type of unmyelinated chemosensitive nociceptor in the acutely inflamed urinary bladder.</a> Agents Actions. 25, 219-221 (1988).</li><li>Brierley, S. M., Jones, R. C., Gebhart, G. F., Blackshaw, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Splanchnic+and+pelvic+mechanosensory+afferents+signal+different+qualities+of+colonic+stimuli+in+mice.">Splanchnic and pelvic mechanosensory afferents signal different qualities of colonic stimuli in mice.</a> Gastroenterology. 127, 166-178 (2004).</li><li>Meyer, R. A., Davis, K. D., Cohen, R. H., Treede, R. D., Campbell, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanically+insensitive+afferents+(MIAs)+in+cutaneous+nerves+of+monkey.">Mechanically insensitive afferents (MIAs) in cutaneous nerves of monkey.</a> Brain Res. 561, 252-261 (1991).</li><li>Handwerker, H. O., Kilo, S., Reeh, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unresponsive+afferent+nerve+fibres+in+the+sural+nerve+of+the+rat.">Unresponsive afferent nerve fibres in the sural nerve of the rat.</a> J Physiol. 435, 229-242 (1991).</li><li>Feng, B., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+silent+afferents+in+the+pelvic+and+splanchnic+innervations+of+the+mouse+colorectum.">Characterization of silent afferents in the pelvic and splanchnic innervations of the mouse colorectum.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 300, G170-G180 (2011).</li><li>Feng, B., La, J. H., Schwartz, E. S., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irritable+bowel+syndrome:+methods,+mechanisms,+and+pathophysiology.+Neural+and+neuro-immune+mechanisms+of+visceral+hypersensitivity+in+irritable+bowel+syndrome.">Irritable bowel syndrome: methods, mechanisms, and pathophysiology. Neural and neuro-immune mechanisms of visceral hypersensitivity in irritable bowel syndrome.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G1085-G1098 (2012).</li><li>Feng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+sensitization+of+mechanosensitive+and+-insensitive+afferents+in+mice+with+persistent+colorectal+hypersensitivity.">Long-term sensitization of mechanosensitive and -insensitive afferents in mice with persistent colorectal hypersensitivity.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G676-G683 (2012).</li><li>Feng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+colorectal+afferent+function+associated+with+TNBS-induced+visceral+hypersensitivity+in+mice.">Altered colorectal afferent function associated with TNBS-induced visceral hypersensitivity in mice.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G817-G824 (2012).</li><li>Feng, B., Brumovsky, P. R., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+roles+of+stretch-sensitive+pelvic+nerve+afferents+innervating+mouse+distal+colon+and+rectum.">Differential roles of stretch-sensitive pelvic nerve afferents innervating mouse distal colon and rectum.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 298, G402-G409 (2010).</li><li>Feng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+guanylate+cyclase-C+attenuates+stretch+responses+and+sensitization+of+mouse+colorectal+afferents.">Activation of guanylate cyclase-C attenuates stretch responses and sensitization of mouse colorectal afferents.</a> J Neurosci. 33, 9831-9839 (2013).</li><li>Jolliffe, I. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principal component analysis. , (2002).</li><li>La, J. H., Feng, B., Schwartz, E. S., Brumovsky, P. R., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Luminal+hypertonicity+and+acidity+modulate+colorectal+afferents+and+induce+persistent+visceral+hypersensitivity.">Luminal hypertonicity and acidity modulate colorectal afferents and induce persistent visceral hypersensitivity.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G802-G809 (2012).</li><li>Christianson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=plasticity+and+modulation+of+visceral+afferents.">plasticity and modulation of visceral afferents.</a> Brain Research Reviews. 60, 171-186 (2009).</li><li>Kiyatkin, M. E., Feng, B., Schwartz, E. S., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+genetic+and+pharmacological+inhibition+of+TRPV1+and+P2X3+attenuates+colorectal+hypersensitivity+and+afferent+sensitization.">Combined genetic and pharmacological inhibition of TRPV1 and P2X3 attenuates colorectal hypersensitivity and afferent sensitization.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 305, G638-G648 (2013).</li><li>Brumovsky, P. R., Feng, B., Xu, L., McCarthy, C. J., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cystitis+increases+colorectal+afferent+sensitivity+in+the+mouse.">Cystitis increases colorectal afferent sensitivity in the mouse.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 297, G1250-G1258 (2009).</li><li>Shinoda, M., Feng, B., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+and+central+P2X+receptor+contributions+to+colon+mechanosensitivity+and+hypersensitivity+in+the+mouse.">Peripheral and central P2X receptor contributions to colon mechanosensitivity and hypersensitivity in the mouse.</a> Gastroenterology. 137, 2096-2104 (2009).</li><li>Tanaka, T., Shinoda, M., Feng, B., Albers, K. M., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+visceral+hypersensitivity+by+glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor+family+receptor+&#945;-3+in+colorectal+afferents.">Modulation of visceral hypersensitivity by glial cell line-derived neurotrophic factor family receptor &#945;-3 in colorectal afferents.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 300, G418-G424 (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

여기에 설명 된 체외 대장 직장 - 신경 준비는 잘 내장 감각 신경에 다른 비 기능적 접근 방법 (예를 들면, 세포 분자, 조직 학적 연구)를 보완 개별 대장 구 심성 신경의 신경 인코딩 기능 (연구 할 수있는 강력한 방법이 될 입증되었습니다 ) 자세한 내용은 리뷰 27을 참조하십시오. 통각 및 장기 대장의 과민 반응에 기여하는 신경 메커니즘은 밝혀지지하고 약리 조작은 내장 통...

통증 과민 명백 병인 학적 원인이나 조직 손상의 유무에 존재 과민성 대장 증후군 (IBS)을 포함하여 위장 기능 장애로부터 고통받는 환자의 주된 불만이다. 예를 들어, IBS 환자 (복부의 촉진에 즉, 부드러움) 정상적인 장 기능 동안 직장 풍선 팽창 증가 감도 높게 응답을 포함하는 과민 반응,뿐만 아니라 체세포 추천의 과민 반응을 나타내는 일. 의 개선 이해, 대장 구 심성을 대상으로하는 IBS 환자에서 (구 아닐 레이트 사이 클라-C의 효능 linaclotide 4-6 경구 섭취 예를 들어, 국소 마취제 2,3의 내 직장 점안을) 통증과 과민을 완화에 효과적 일 수 있기 때문에 대장 직장의 구 심성 신경 분포가 중요합니다. 대장의 구 심성을 포함하여 내장 구 심성,/ nutrient- 화학적 및 열적 양상 (예를 들면, 7-9)에 응답 할 수있다. 그러나, 기계적 자극 (즉, mechanosensitive 구 심성)에 응답 내장 구 심성이되었습니다 기계적 자극 (예를 들어, 내강 팽만, 스트레칭) 일반적으로 불편과 고통 10-16을 포함하여 의식이 감각에 야기 할 것들이기 때문에 가장 철저하게 연구했다. 또한, 내장은 일반적으로, 기계적으로 문자를 구분 구 심성 (실종자)에 의해 신경 지배를 자동 또는 자고 통각 수용기 (17)이라고합니다. 정상적인 생리 조건에서, 실종자는 기계적인 자극에 응답하거나 매우 높은 응답이 18 임계 값이 있지만 활성화 및 병태 생리 학적 조건에서 mechanosensitivity를 획득 과민 반응에 공헌 할 수 없습니다. 여기에 설명 된 시험 관내 제조 방법 및 프로토콜을 이용하여, 우리는 개발 바다 전기 자극 전략을 채용<html> 대장 직장 (19) 모두 mechanosensitive 및 MIA 엔딩의 편견 식별을 가능하게 수용 엔딩에 대한 RCH. 대장 신경 분포는 요추 내장의 (LSN)과 골반 신경 (PN) 경로에서 파생 다섯 mechanosensitive 클래스 (장막, 점막, 근육, 근육 점막, 장간막) 한 MIA 클래스 (20)으로 분류 할 수있다 대장 구 심성을 포함한다. 이 체외 준비를 사용하여, 우리는 대장 실종자 인수 mechanosensitivity는 LSN 경로에 PN 경로에서 실종자의 71 %와 실종자의 23 %를 증감 염증 수프 (IS), 그들의 수용 필드의 짧은 노출 다음 (민감) 발견 19. 우리는 또한 오래 지속되는 행동 내장 과민 반응의 맥락에서 실종자의 장기 감작 (최대 28 일) 문서화 (모산 (21) 또는 2,4,6- 트리니트로 산으로 결장 내 치료를받은 쥐에서, 즉 (TNBS) 22) . mechanosensitive 구 심성 신경, 근육과 근육 점막 구 심성 중 jove_content은 &quot;&gt; (즉, 스트레칭 구분) 및 유해 대장 팽만 (23, 24)의 인코딩을 보조하다 카나비노이드 대장 직장의 원주 스트레치를 인코딩 할 수있는 유일한 클래스입니다. 컴퓨터 제어를 사용하여 동력 액츄에이터, 우리는 평면화 대장 암 조직의 원주 방향의 표준, 균질하고 재현성 램핑 신축성을인가하고 상기 스트레치 성 구 심성을 낮은 임계치와 높은 임계치 (23)를 분류. 또, 신축성 감작를 시간 경과에 따라 결장 내 모산 21 TNBS (22) 치료 후 과민 구 심성은 내장 통증 및 과민 반응의 스트레칭에 민감한 대장 구 심성의 역할을 제안, 행동 내장 과민 반응의 시작, 지속, 및 / 또는 복구에 해당합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1173">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:291px;">Company</td>
			<td style="width:137px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:372px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica MZ16 stereo microscope&#160;</td>
			<td>Leica Microsystems Inc.</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica IC D camera</td>
			<td>Leica Microsystems Inc.</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Amplifier</td>
			<td>World Precision instruments, Inc.</td>
			<td>SYS-DAM80&#160;</td>
			<td>Low-noise differential amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Two-compartment tissue chamber</td>
			<td style="width:291px;">Custom made</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Power1401</td>
			<td>Cambridge Electronic Design Limited</td>
			<td style="width:137px;">Power1401</td>
			<td>Data acquisition, analog signal input/out</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Spike2 v5.02</td>
			<td>Cambridge Electronic Design Limited</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td>Software package that works with the Power1401</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Audio monitor</td>
			<td>Natus</td>
			<td style="width:137px;">Am 8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Square pulse stimulator</td>
			<td>Natus</td>
			<td style="width:137px;">S48</td>
			<td>To deliver electrical stimuli</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Photoelectric isolation unit</td>
			<td>Natus</td>
			<td style="width:137px;">PSIU6</td>
			<td>Stimulus isolation to reduce noise</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Concentric bipolar microelectrode</td>
			<td style="width:291px;">FHC Inc.</td>
			<td style="width:137px;">CBFFG75</td>
			<td>To deliver electrical stimuli</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dual-mode lever system</td>
			<td>Aurora Scientific Inc.</td>
			<td style="width:137px;">Series 300C&#160;</td>
			<td>To deliver mechanical stimuli</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11252-00</td>
			<td>forceps with fine tips</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro functional characterization of mouse colorectal afferent endings

이 비디오 상세히 마우스 대장 직장 - 신경 제제를 사용하여 시험 관내 전기 생리 단일 섬유 기록 프로토콜을 설명한다. 접근 방식은 편견 식별 및 개별 대장 구 심성의 기능을 특성화 할 수 있습니다. 하나 또는 몇 심성에서 발생하는 전파 활동 전위 (APS)의 세포 외 녹음 (즉, 단일 섬유) 대장 직장에서 수용 필드 (RI의)을 조롱 신경 섬유 다발로 만들어진다. 대장 직장은 골반 (PN) 또는 요추 내장의 (LSN) 신경 부착 길이 방향으로 열 중 하나를 제거한다. 조직 플랫 피닝 및 산소화 크렙스 용액으로 관류, 기록 챔버에 배치된다. 초점 전기 자극은 기능적으로 다섯 mechanosensi에 구 심성을 분류 (프로빙 점막 쓰다듬어 원주 스트레칭을 무디게) 더 세 가지 기계적인 자극에 의​​해 테스트 대장 구 심성 엔딩을 찾는 데 사용됩니다적인 클래스를 제공합니다. 이러한 기계적 자극 없음에 응답 엔딩 기계적으로 문자를 구분 구 심성 (실종자)으로 분류됩니다. 화학 물질에 대한 RI의 지역화 된 노출에 의해 mechanosensitive 및 실종자가 과민 반응 (즉, 향상된 응답 감소 임계 값 및 / 또는 mechanosensitivity의 취득)에 대한 평가 될 수는 모두 (예를 들어, 염증 수프 (IS), 캡사이신, 아데노신 삼인산 (ATP)). 우리는 장비와 대장 직장 - 신경 기록 준비, 부착 PN 또는 LSN, 신경 다발에서 대장 직장, 단일 섬유 녹음에 RI의 식별과 대장 직장의 수확 및 RF에 화학 물질의 지역화 된 응용 프로그램을 설명합니다. 또한, 표준화 된 제조 기계적 자극의 적용 과제도 논의된다.

설치는 그림 1에 예시되어있다. 그것은 실리콘 늘어선 목욕 구획 및 연속 미네랄 오일 충전 실에 첨부 된 신경의 대장 직장을 수용하는 맞춤형 조직 챔버를 포함한다. 두 챔버는 구획 CNC 기계에 의해 아크릴 수지의 고체 블록으로부터 기계 가공 하였다 두 구획의 바닥이어서 결장 조직 다운 핀을 쉽게 허용하도록 기업 실리콘 늘어서 하였다. 조롱 신경 다발에서 세포 외 AP는 공통 모드...

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In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

This video demonstrates a protocol for conducting single-fiber electrophysiological recordings on an in vitro mouse colorectum-nerve preparation.

마우스 대장 수입 성의 엔딩의 생체 기능 특성에

This video demonstrates in detail an in vitro single-fiber electrophysiological recording protocol using a mouse colorectum-nerve preparation. The ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

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