Thanks to Ben D. Tall, Yi Chen, and Thomas Hammak from the U.S. Food and Drug Administration (FDA), Center for Food Safety and Applied Nutrition (CFSAN) for critically reviewing the manuscript. The authors also thank Hannah Lee (research internship program, Joint Institute for Food Safety and Applied Nutrition (JIFSAN), University of Maryland) for laboratory assistance and David Weingaertner (FDA, CFSAN) for preparing the figure of the schematic overview shown in the video.

Sinek 1. Koleksiyonu <ol><li> Steril entomolojik süpürme ağları kullanarak bireysel sinekler toplayın. Bir soğutucu ağları koyun ve laboratuara aktarabilirsiniz. </li></ol> Sineklerin 2. Diseksiyon <ol><li> 7 dakika - 5 -20 ° C sıcaklıkta tekrar yerleştirilmesi, aseptik bir toplanan sinekler hareketsiz. </li><li> Önceden ısıtılmış (37 ° C) tamponlu pepton su (BPW) 1 ml içeren steril 2 ml tüp steril forseps yerde bir sinek kullanma. 2 dakika için ters çevirme ile tüp hafifçe karıştırın. Bu anında vücut yüzey (S) üzerinde bulunan mikrobiyota BPW (BPW-G) aktarılır ve böylece fermuar kısmının tüm vücut ortam ile temas halinde olması esastır. Sinek sayısı ve gövde parçası (yani, 1 S) ile tüp etiketleyin. NOT: Bu protokolde belirtilen maddeleri ve ayrıntılı bir açıklama için özel Reaktifler / Ekipman Tablosuna bakınız. </li><li> Steril forseps kullanarak BPW-S medya ve transfer sinek kaldırmakBoş ve temiz 2 ml&#39;lik bir tüp bu sinek dezenfekte yüzeye. Dezenfeksiyon ve diseksiyon protokolü yaparken 37 ° C&#39;de BPW-S medya içeren tüp inkübe. <ol><li> Taze hazırlanmış% 0.05 (h / h) ağartıcı çözeltisi, 1 ml içinde daldırarak önce steril damıtılmış su ile bir durulama aşaması ve ardından, 1 dakika boyunca% 70 etanol içinde 1 ml içinde daldırarak sinek Yüzey dezenfekte. Steril damıtılmış su ile 3 kez yıkayın. Bir otoklavlanmış 2 ml tüp son durulama suyu aktarın. NOT: 1000 ul mikropipet kullanılarak ya, tüp tersini sinek tüp içinde kaldığından emin yaparak sıvı her zaman atın. Yüzey dezenfeksiyon işleminin her adımında çevirerek yavaşça karıştırın. </li><li> , Dezenfeksiyon işleminin etkinliğini değerlendirmek bir triptik soya agar (TSA) plakaya son durulama suyu 100 ul aktarmak ve steril bir L şeklinde tek serpme kullanarak yaymak için. 24 saat boyunca 37 ° C&#39;de plaka inkübe edin. Sonrasıcubation, herhangi bir bakteri kolonilerinin varlığı kayıt. NOT: TSA plakaları üzerinde bakteri kolonilerinin varlığı verimsiz yüzey dezenfeksiyon işlemi gösterir. Bu durum ortaya çıkarsa vücut yüzeyi ve sindirim kanalı arasında çapraz-bulaşma göz ardı edilemez, çünkü gıda kaynaklı patojenlerin varlığı sadece sinek vücut yüzeyinde rapor edilmelidir. </li></ol></li><li> Sinek yüzey dezenfekte sonra, steril 60 mm&#39;lik tek Petri kabı daha sonra fazla su ve kaldırmak için otoklava kağıt havlu parçası transfer. </li><li> Diseksiyon kapsamında Petri kabı yerleştirin ve dipteran aileleri 20,21 için dikotom tuşlarını kullanarak tür düzeyinde sinek belirlemek. </li><li> Yavaşça aseptik sinek dışarı anüs ve tüm sindirim kanalı (A) çekin ve otoklavlanmıştır ince uçlu forseps kullanarak 0,5 mm zirkonya / silika ile önceden ısıtılmış (37 ° C) BPW 1 ml içeren başka bir steril 2 ml tüp transfer Boncuklar (BPW-A). Etiket inciBireysel sinek ve sinek (yani, 1A) vücut bölümü için seçilen aynı sayıda e tüp. </li><li> Bir hücre Topu kullanarak 10 dakika - 5 için iyice BPW-A içeren tüp karıştırın. Protokol geri kalanını yaparken 36 ± 1 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Voucher ve / veya uzun vadede numune saklamak, temiz bir 2 ml tüp içinde sinek kalanını yerleştirin ve 1 eklemek için -% 95 etanol 2 ml. </li></ol> 3. Birincil ve İkincil zenginleştirilmesi <ol><li> Örnek numarası ve sinek vücut kısmına göre medya içeren tüm birincil ve ikincil zenginleştirme tüplerini etiketleyin. </li><li> Steril bir kaput altında, aşağıdaki ortamları içeren 2 ml&#39;lik tüpler steril alanlar BPW-S (yüzey) 300 ul transferi: <ol><li> Salmonella için, önceden ısıtılmış (42 ° C), BPW 1 ml kullanılır. - 24 saat 22 42.5 ° C &#39;de, bir devri daim banyosu içinde inkübe edin. İkincil zenginleşme için, 400 &amp; # zenginleştirilmiş BPW 100 ul transferi181; daha önce steril bir küme borular içine yerleştirilir, önceden ısıtılmış (37 ° C), beyin kalp infüzyon (BHI) et l. 3 saat 37 ° C&#39;de inkübe edilir. </li><li> Cronobacter için, novobiosinin ile önceden ısıtılmış (37 ° C), BPW 1 ml (; Wallace, M., kişisel iletişim, 10 mg / L) kullanın. Alternatif olarak, birincil zenginlik olarak ek (vankomisin ve sefsulodin) ile R &amp; F Enterobacter sakazakii zenginleştirme suyu 1 ml kullanın. 26 saat - 22 ve 37 ° C&#39;de inkübe edilir. İkinci zenginleştirme, daha önce steril bir küme borular içine yerleştirilir, önceden ısıtılmış (37 ° C), BHI et suyu 400 ul, novobiosinin zenginleştirilmiş BPW 100 ul aktarın. 3 saat 37 ° C&#39;de inkübe edilir. </li><li> L. monocytogenes, seçici takviyesi ile taze hazırlanmış RT 24 Listeria zenginleştirme suyu (24 LEB) 1 ml kullanın. 44 ± 5 ​​saat boyunca 37 ° C&#39;de inkübe edilir. Sekonder bir zenginleştirme L. tespiti için gerekli olan monocytogenes. </li&gt; <li> BPW-A olarak etiketlenmiş tüp kullanarak yukarıdaki 3.2.3 - Tekrar 3.2.1 adımları. </li></ol></li></ol> Hedef Gıda Kaynaklı Patojen büyütülmesi ve Algılama için PCR-Tabanlı Sistemi 4. Hazırlık 4-8 Salmonella (Salmonella 2, standart bir test kiti), Cronobacter türleri (E. sakazakii standart tahlil kiti) ve Listeria monocytogenes taranması için ticari bir PCR döngü / detektör sistemi, bir bilgisayar, iş istasyonu ve hazır kullanımlı kitleri adımlar (L. 24E deney kiti monocytogenes). Standart testler PCR uç nokta algılama kullanın. Her kit çift kollu DNA&#39;ya bağlanma sırasında bir floresan sinyalini yayan bir araya eklenen boyanın PCR hazır tabletler içerir. Sinyal pozitif veya negatif olarak yazılım tarafından yorumlanır erime eğrisi oluşturma, PCR sistemi programın algılama aşamasında yakalanır. <ol><li> Üreticilerinin tarafından belirtilen reaktifler ve donanımları hazırlayınHer hedef gıda kaynaklı patojen başına RER&#39;ye protokol. Not: Salmonella ve Cronobacter tespit edilmesi için protokoller L. tespit edilmesi için protokol ise tek-aşamalı bir parçalama işlemine tabi tutulması gerekir monocytogenes iki aşamalı bir parçalama işlemi (sırasıyla bölümleri 5 ve 6 ya bakınız) gerektirir. </li><li> Hedef patojen için özel bir program seçerek otomatik ısıtma bloğu açın. (- Adım 6.2 L liziz parçası 2 monocytogenes için) ısıtma ve blok kılavuzu, alternatif olarak, (. Salmonella, Cronobacter spp ve L. monocytogenes) 37 ° C ya da 55 ± 2 ° C sıcaklığa ayarlanmış 95 ± 3 ° C. </li><li> En az 2 saat 8 ° C - Aksi 2 onları soğuk, soğutma blokları O / N buzdolabında edilmiş olduğundan emin olun. </li><li> PCR bazlı tespit sistemi bilgisayar yazılımı kullanılarak, imalatçının talimatları izlenerek bir raf dosyası oluşturmak. </li><li> Etiket ve küme düzenlemektüpler raf dosyasına göre, rafa parçalama reaktifi içeren. </li><li> PCR-tabanlı algılama sistemi cihazı başlatılamıyor. </li></ol> 5. Salmonella ve Cronobacter tespiti için lizizini gerçekleştirin <ol><li> Liziz tamponu, bir 12 ml şişe proteazın 150 ul ekleyerek liziz reaktifi hazırlayın. </li><li> Daha önceden işaretlenmiş küme tüplerin her birine, liziz reaktif maddesi 200 ul aktarın. Not: - en fazla 2 hafta boyunca 8 ° C&#39;de liziz reaktifi ihtiva eden Cluster tüplerine 2 saklanabilir. </li><li> İkincil zenginleştirilmiş numunelerin 20 ul, uzun pipet uçları giriş transfer kullanma parçalama reaktifi 200 ul içeren küme tüpleri karşılık gelen (adımları 3.2.1 ve 3.2.2 bakınız). Her numune için, yeni pipet uçları kullanın. NOT: PCR pozitif / negatif örneklerin ileri onay analizi için RT (Cronobacter) buzdolabı (Salmonella) ya da birincil ve ikincil zenginleşme tüpleri tutun. </li&gt; <li> Parçalama reaktifi 200 ul içeren küme tüplere steril BHI medya 20 ul ekleyerek negatif kontrolleri hazırlayın. </li><li> Liziz reaktifi 200 ul ihtiva eden grup tüplerine herhangi bir bilinen Salmonella veya Cronobacter soyunun (BHI yetiştirilen) O / N bakteri kültürleri 20 ul eklenmesi ile pozitif kontrol hazırlayın. </li><li> Cap küme tüpleri sıkıca kapatma aracını kullanarak sabitleyin ve. </li><li> Hedef patojen için özel bir program seçtikten sonra otomatik ısıtma bloğu küme tüplerin raf yerleştirin. Seçenek olarak ise, 10 dakika boyunca 95 ± 3 ° C &#39;de inkübasyon, ardından 20 dakika boyunca 37 ± 2 ° C&#39;de, kümelenme tüpleri inkübe edin. 5 dakika boyunca - (8 ° C&#39;de 2) Son olarak, blok soğutma küme tüpleri aktarın. Not: lizat içeren Cluster tüplerine 2 hafta boyunca -20 ° C&#39;de muhafaza edilebilir. </li></ol> 6. L. tespiti için lizizini gerçekleştirin monocytogenes <ol><li> Bölümünü bir gerçekleştirinaşağıdaki gibi liziz: <ol><li> Tamamen çözülmüş yokedici maddenin 1 şişeye steril deiyonize su, 1.8 ml ilave edilir. NOT: Mağaza 2 de ajan 1 yokedici - Kullanıma hazır olana kadar 8 ° C. En fazla 6 ay süreyle - 30 ° C (20), oda sıcaklığında açma ve sulandırma, depolama sonrası. </li><li> 1 oranında (seyreltilmiş yokedici madde, 1 40 ul ve her bir örnek başına 2 madde yokedici 10 ul), bir 4 Maddeleri 1 ve 2 yokedici birleştirin. Kombine parçalama ajanların Transferi 50 ul tüpleri küme. 4 saat içerisinde karışımı kullanılır. </li><li> Birincil zenginleştirilmiş numune 500 ul ekle Birleştirilen eritici maddeler 50 ul ihtiva eden küme tüpüne (adım 3.2.3 bakınız). </li><li> Birleştirilen eritici maddeler, 50 ul steril 24 kolluk 500 ul ilave edilerek bir negatif kontrol hazırlayın. </li><li> / K L, O 500 ul ilave edilerek bir pozitif kontrol hazırlanması monocytogenes, kültür kombine eritici maddeler, 50 ul 24 kolluk içinde büyütülür. </li><li> , Küme tüpleri Cap hafifçe karıştırın ve yer30 dakika süreyle 37 ± 1 ° C &#39;de ısıtma bloğu. NOT: PCR pozitif / negatif örneklerin ileri onay analizi için buzdolabında birincil zenginleştirme tüpleri tutun. </li></ol></li><li> Aşağıdaki gibi lizis bölümünü 2 gerçekleştirin: <ol><li> Adımlar 5.1 ve 5.2 belirtildiği gibi parçalama reaktifi hazırlayın. </li><li> Kullanarak uzun pipet uçları parçalama reaktifi 200 ul içeren küme tüplerine parçası bir lizatın 20 ul transfer. Her numune için, yeni pipet uçları kullanın. </li><li> Cap küme tüpleri sıkıca kapatma aracını kullanarak sabitleyin ve. </li><li> L. için özel bir program seçerek otomatik ısıtma bloğu yerleştirin küme tüpler monocytogenes. Seçenek olarak ise, 10 dakika boyunca 95 ± 3 ° C &#39;de inkübasyon, ardından 30 dakika boyunca 55 ± 2 ° C&#39;de, kümelenme tüpleri inkübe edin. 5 dakika boyunca - (8 ° C&#39;de 2) Son olarak, blok soğutma küme tüpleri aktarın. Not: lizat içeren Cluster tüplerine 2 hafta boyunca -20 ° C&#39;de muhafaza edilebilir. </li></ol></li></ol> 7. Hidrat PCR Hazır Tabletler <ol><li> Soğutulmuş (4 ° C), PCR soğutma bloğu seçip ekin üzerinde bir PCR tüpü raf yerleştirin. </li><li> Raf dosyasına göre, tutucu hedef gıda kaynaklı patojen için (her kit ile birlikte), PCR-hazır tablet içeren PCR tüpleri gelen yerleştirin. </li><li> Dekapaj aracını kullanarak, dikkatle PCR tüpleri kapakları çıkarın. Kapaklar atın ve her tüp bir tablet içerdiğini doğrulayın. </li><li> Transferi (Salmonella ve Cronobacter için) 50 ul veya spesifik PCR tüplerine lizatın (L. monocytogenes için) 30 ul. Yeni optik kapaklar kullanın ve kapaklama aracını kullanarak PCR tüpleri sıkıca sabitleyin. Not: - PCR bazlı tespit sistemi yüklenen kadar 8 ° C PCR hazır tabletlere lisat ilave edildikten sonra, numuneler 2 soğutulmaktadır kalmalıdır. PCR tüpleri tam birim alt t olduğundan emin olmak için, bir kaç saniye için 2500 x g hızında santrifüj edilebilirO tüp. </li><li> Alet çekmecesini açarak PCR döngü / algılama sistemi aracı haline PCR tüpleri yükleyin. </li><li> Çekmecede kuyulara PCR tüplerinin raf yerleştirin ve tüpler doğru yerleştirildiğinden emin olun. </li><li> Çekmece kapatın ve üreticinin protokolü tarafından tarif edildiği gibi bir program başlatır. NOT: PCR tabanlı enstrüman her gıda kaynaklı patojen için bisiklet parametrelerini önceden etti. </li><li> PCR bisiklet durum çubuğu programının amplifikasyon kısmı çalıştığını belirten mavi bir çubuk görüntüler doğrulayın. NOT: - tamamlamak için 3.5 saat standart PCR deneyleri için, tam bir program (amplifikasyon ve algılama) işlem süresi yaklaşık 3 sürer. </li></ol> 8. İnceleme Sonuçları <ol><li> Işleme tamamlandıktan sonra, ekran örnekleri ve inceleme sonuçlarını ortadan kaldırmak için PCR-tabanlı sistem aracından ister izleyin. </li><li> Hedef gıda kaynaklı patojeni (ya da numune içerisinde mevcut olması halindeYüzey veya sinek sindirim kanalı) de bir &#39;artı&#39; işareti (pozitif) ile kırmızı. Patojen yoksa, iyi bir &#39;eksi&#39; işareti (negatif) ile yeşil. </li><li> Kuyu merkezi boyunca kırmızı bar ile sarı ise, bir sinyal hatası gösterir. </li></ol> PCR pozitif Sonuçlarından Bakteriyel Patojenler 9. izolasyonu <ol><li> (L. monositogenlerini) birincil veya ikincil PCR-pozitif bu numuneler zenginleştirilmesi (Salmonella ve Cronobacter için) Belirli borular. Aşağıdaki gibidir: PCR-negatif örneklerin% 5 ve devam - Ayrıca, rastgele 3 seçin </li><li> Salmonella için: <ol><li> 10 Rappaport-Vassiliadis (RV) orta ml tetratiyonat 1 ml (TT) suyu sekonder zenginleştirme ortamı 100 ul ekle. 24 saat - 22 devirdaim su banyosunda 42.5 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Her RV An inkübasyonundan çizgi 3 mm halka dolusu (10 ul), sonrabizmut sülfit (BS) ağar, ksiloz lizin desoksikolat (XLD) agar d TT medya ve Hektoen enterik (HE) ağar. 24 saat - 22 35 ± 1 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> İnkübasyondan sonra, her bir ortam tipik Salmonella kolonilerin mevcudiyetinde için tabak inceliyoruz. Hiçbir izole koloniler birkaç alt-kültürleme adımlardan sonra elde edilebilir ise, negatif olarak örnek düşünün ve PCR tabanlı sistem için bir yanlış pozitif olarak rapor. NOT: Tipik Salmonella kolonilerinin için belirli bir ortam 22 görmüyorum. Beş olası tipik Salmonella kolonileri seçin ve BS, XLD bunları altkültürü, ya HE izole / tek kolonilerin saf kültürleri elde edilinceye kadar. </li><li> Bir saf koloni seçin ve, örneğin VITEK 2 kimlik kartı veya API biyokimyasal tanımlama sistemi olarak biyokimyasal ticari testler kullanılarak üreticinin yönergelerini izleyerek olası Salmonella tespit. </li></ol></li><li> Cronobacter için: &lt;ol&gt; <li> Şerit örneğin R &amp; F Enterobacter sakazakii&#39;nin (Cronobacter) kromojenik kaplama orta ve / veya chromID sakazakii Agar gibi kromojenik kültür ortamı iki levha üzerindeki orta zenginleştirme ortamı 3 mm halka dolusu (10 ul). 24 saat - 22 için 35 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Inkübasyondan sonra, (mavi-gri, mavi-siyah), tipik Cronobacter kolonilerinin varlığı için plakaları inceleyin. 5 varsayımsal Cronobacter koloniler seçin ve izole / tek kolonilerin saf kültürleri elde edilinceye kadar R &amp; F Enterobacter sakazakii&#39;nin (Cronobacter) kromojenik kaplama ortamı, chromID sakazakii Agar veya TSA üzerine onları altkültürü. NOT: Hiçbir izole koloniler birkaç alt-kültürleme adımlardan sonra elde edilebilir ise, negatif olarak örnek düşünün ve PCR-tabanlı algılama sistemi için bir yanlış pozitif olarak rapor. </li><li> Bir saf koloni seçin ve biyokimyasal ticari ürünler kullanarak olası Cronobacter tanımlamaküreticinin talimatlarına aşağıdaki gibi VITEK 2 kimlik kartı veya API 20E biyokimyasal tanımlama sistemi gibi sal testler,. </li></ol></li><li> L. monocytogenes: <ol><li> Şerit Parlaklık Lısterıa agar iki plakası (BLA) birincil zenginleştirme ortamı 3 mm halka dolusu (10 ul). 26 saat - 22 36 ± 1 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> İnkübasyondan sonra, olası L. varlığı plakaları incelemek monocytogenes (mavi-yeşil) koloniler. Seçin 5 olası L. monocytogenes koloniler ve izole / tek kolonilerin saf kültürleri elde edilene kadar BLA onları altkültürü. 26 saat - ek 22 için 36 ± 1 ° C&#39;de olumsuz plakaları inkübe Yeniden. </li><li> Bir saf koloni seçin ve olası L. tanımlamak Üreticinin i takip gibi VITEK 2 kimlik kartı veya API Listeria biyokimyasal tanımlama sistemi gibi ticari biyokimyasal testler kullanılarak monocytogenesnstructions. </li></ol></li><li> Böcekler izole olası gıda kaynaklı patojenler daha teyit ve bir referans laboratuvarında serotiplendirme edilmelidir. </li></ol>

<ol>
	<li>Zurek, L., Gorham, J. R., Voeller, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Wiley Handbook of Science and Technology for Homeland Security. , 1-16 (2008).</li><li>Olsen, A. R., Gecan, J. S., Ziobro, G. C., Bryce, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+action+criteria+for+filth+and+other+extraneous+materials+V.+Strategy+for+evaluating+hazardous+and+nonhazardous+filth.">Regulatory action criteria for filth and other extraneous materials V. Strategy for evaluating hazardous and nonhazardous filth.</a> Regulatory Toxicology and Pharmacology. 33 (3), 363-392 (2001).</li><li>Hald, B., Skovg&#229;rd, H., Pedersen, K., Bunkenborg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influxed+insects+as+vectors+for+Campylobacter+jejuni+and+Campylobacter+coli+in+Danish+broiler+houses.">Influxed insects as vectors for Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in Danish broiler houses.</a> Poultry Science. 87 (7), 1428-1434 (2008).</li><li>Kobayashi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Houseflies:+Not+simple+mechanical+vectors+of+enterohemorrhagic+Escherichia+coli+O157:H7.">Houseflies: Not simple mechanical vectors of enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7.</a> American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 61 (4), 625-629 (1999).</li><li>Pava-Ripoll, M., Pearson, R. E. G., Miller, A. K., Ziobro, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+relative+risk+of+Cronobacter+spp.,+Salmonella+spp.,+and+Listeria+monocytogenes+associated+with+the+body+surfaces+and+guts+of+individual+filth+flies.">Prevalence and relative risk of Cronobacter spp., Salmonella spp., and Listeria monocytogenes associated with the body surfaces and guts of individual filth flies.</a> Applied and Environmental Microbiology. 78 (22), 7891-7902 (2012).</li><li>Hewitt, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Houseflies and how they spread disease. , (1912).</li><li>Rochon, K., Lysyk, T. J., Selinger, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retention+of+Escherichia+coli+by+house+fly+and+stable+fly+(Diptera:Muscidae)+during+pupal+metamorphosis+and+eclosion.">Retention of Escherichia coli by house fly and stable fly (Diptera:Muscidae) during pupal metamorphosis and eclosion.</a> Journal of Medical Entomology. 42 (3), 397-403 (2005).</li><li>Greenberg, B., Kowalski, J. A., Klowden, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+the+transmission+of+Salmonella+by+flies:+natural+resistance+to+colonization+and+bacterial+interference.">Factors affecting the transmission of Salmonella by flies: natural resistance to colonization and bacterial interference.</a> Infection and Immunity. 2 (6), 800-809 (1970).</li><li>Mramba, F., Broce, A. B., Zurek, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector+competence+of+stable+flies,+Stomoxys+calcitrans+L.+(Diptera:Muscidae),+for+Enterobacter+sakazakii.">Vector competence of stable flies, Stomoxys calcitrans L. (Diptera:Muscidae), for Enterobacter sakazakii.</a> Journal of Vector Ecology. 32 (1), 134-139 (2007).</li><li>Ekdahl, K., Normann, B., Andersson, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Could+flies+explain+the+elusive+epidemiology+of+campylobacteriosis.">Could flies explain the elusive epidemiology of campylobacteriosis.</a> Bmc Infectious Diseases. 5 (11), 11 (2005).</li><li>Nayduch, D., Noblet, G. P., Stutzenberger, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector+potential+of+houseflies+for+the+bacterium+Aeromonas+caviae.">Vector potential of houseflies for the bacterium Aeromonas caviae.</a> Medical and Veterinary Entomology. 16 (2), 193-198 (2002).</li><li>Sievert, K., Messler, S., Klimpel, S., Feffer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+study+on+the+occurrence+and+distribution+of+pathogenic+microorganisms+carried+by+synanthropic+flies+caught+at+different+rural+locations+in+Germany.">Comprehensive study on the occurrence and distribution of pathogenic microorganisms carried by synanthropic flies caught at different rural locations in Germany.</a> Journal of Medical Entomology. 46 (5), 1164-1166 (2009).</li><li>Hern&#225;ndez-Escare&#241;o, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presence+of+Enterobacteriaceae,+Listeria+spp.,+Vibrio+spp.+and+Staphylococcus+spp.+in+house+fly+(Musca+domestica+L.),+collected+and+macerated+from+different+sites+in+contact+with+a+few+animals+species.">Presence of Enterobacteriaceae, Listeria spp., Vibrio spp. and Staphylococcus spp. in house fly (Musca domestica L.), collected and macerated from different sites in contact with a few animals species.</a> Revista Cientifica-Facultad De Ciencias Veterinarias. 22 (2), 128-134 (2012).</li><li>Mian, L. S., Maag, H., Tacal, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Salmonella+from+muscoid+flies+at+commercial+animal+establishments+in+San+Bernardino+county,+California.">Isolation of Salmonella from muscoid flies at commercial animal establishments in San Bernardino county, California.</a> Journal of Vector Ecology. 27 (1), 82-85 (2002).</li><li>Olsen, A. R., Hammack, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Salmonella+spp.+from+the+housefly,+Musca+domestica+L.,+and+the+dump+fly,+Hydrotaea+aenescens+(Wiedemann)+(Diptera:Muscidae),+at+caged-layer+houses.">Isolation of Salmonella spp. from the housefly, Musca domestica L., and the dump fly, Hydrotaea aenescens (Wiedemann) (Diptera:Muscidae), at caged-layer houses.</a> Journal of Food Protection. 63 (7), 958-960 (2000).</li><li>Holt, P. S., Geden, C. J., Moore, R. W., Gast, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Salmonella+enterica+serovar+Enteritidis+from+houseflies+(Musca+domestica)+found+in+rooms+containing+Salmonella+serovar+Enteritidis-challenged+hens.">Isolation of Salmonella enterica serovar Enteritidis from houseflies (Musca domestica) found in rooms containing Salmonella serovar Enteritidis-challenged hens.</a> Applied and Environmental Microbiology. 73 (19), 6030-6035 (2007).</li><li>Mramba, F., Broce, A., Zurek, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Enterobacter+sakazakii+from+stable+flies,+Stomoxys+calcitrans+L.+(Diptera:Muscidae).">Isolation of Enterobacter sakazakii from stable flies, Stomoxys calcitrans L. (Diptera:Muscidae).</a> Journal of Food Protection. 69 (3), 671-673 (2006).</li><li>Koyuncu, S., Andersson, M. G., Haggblom, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+and+Sensitivity+of+Commercial+PCR-Based+Methods+for+Detection+of+Salmonella+enterica+in+Feed.">Accuracy and Sensitivity of Commercial PCR-Based Methods for Detection of Salmonella enterica in Feed.</a> Applied and Environmental Microbiology. 76 (9), 2815-2822 (2010).</li><li>Gagn&#233;, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+and+mite+pests+in+food,+an+illustrated.">Insect and mite pests in food, an illustrated.</a> 1, 269-296 (1991).</li><li>Greenberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Flies and disease, Vol I. Ecology, classification and biotic associations. , (1971).</li><li>Barro, N., Aly, S., Tidiane, O. C. A., Sababenedjo, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carriage+of+bacteria+by+proboscises,+legs,+and+feces+of+two+species+of+flies+in+street+food+vending+sites+in+Ouagadougou,+Burkina+Faso.">Carriage of bacteria by proboscises, legs, and feces of two species of flies in street food vending sites in Ouagadougou, Burkina Faso.</a> Journal of Food Protection. 69 (8), 2007-2010 (2006).</li><li>Ugbogu, O. C., Nwachukwu, N. C., Ogbuagu, U. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Salmonella+and+Shigella+species+from+house+flies+(Musca+domestica+L.)+in+Uturu,+Nigeria.">Isolation of Salmonella and Shigella species from house flies (Musca domestica L.) in Uturu, Nigeria.</a> African Journal of Biotechnology. 5 (11), 1090-1091 (2006).</li><li>Brownlie, J. C., Johnson, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symbiont-mediated+protection+in+insect+hosts.">Symbiont-mediated protection in insect hosts.</a> Trends in Microbiology. 17 (8), 348-354 (2009).</li><li>Feldhaar, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+symbionts+as+mediators+of+ecologically+important+traits+of+insect+hosts.">Bacterial symbionts as mediators of ecologically important traits of insect hosts.</a> Ecological Entomology. 36 (5), 533-543 (2011).</li><li>Wright, A. P., Gould, L. H., Mahon, B., Sotir, M. J., Tauxe, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+of+the+Impact+of+Epidemic-Assistance+Investigations+of+Foodborne+and+Other+Enteric+Disease+Outbreaks,+1946-2005.">Overview of the Impact of Epidemic-Assistance Investigations of Foodborne and Other Enteric Disease Outbreaks, 1946-2005.</a> American Journal of Epidemiology. 174, S23-S35 (2011).</li></ol>

The use of specified instrumentation is not an endorsement by the U.S. Food and Drug Administration. The authors certify that there is no conflict of interest with any financial organization regarding the material discussed in this article.

Doğru gıdalar veya gıda ile ilgili ortamlarda 13,15 tek sinek varlığı gıda ile ilgili riski değerlendirmek için gerekli bilgileri içerir olmayabilir protokolleri büyük bir çeşitlilik kullanmış yabani böceklerin gıda kaynaklı patojenlerin tespit ettik Önceki çalışmalar, 23,24. Burada, bu standart protokol kullanılarak, tespit ve Cronobacter spp mümkün olduğunu göstermiştir. S. enterica ve L. vücut yüzeyi ve vahşi yakalanmış tek sinek sindirim kanalına monocytogenes. Böcekler hedef gıda kaynaklı patojen düşük numaraları ve diğer yerli Mikrobiyota 25,26 yüksek sayıda taşıyabilir, çünkü bu protokol hedef gıda kaynaklı patojen tespit hassasiyetini artırmak için belirli bir kültür ortamında örneklerin birincil (ve bazen ikincil) zenginleştirme gerektirir . PCR bazlı tespit sistemi ile ilgili sonuçlar deterjanları için (yaklaşık olarak 30 saat içinde elde edildiCronobacter spp ölü m. ve S. enterica) ve ilk olarak numune işleme sonrası L. monocytogenes) saptanması için 48 st (. Böylece, bu protokol, güvenilir hem hızlı ve gıda ile taşınan patojenlerin varlığı için bir sinek taranması için yeterince hassastır. Canlı bakteri PCR pozitif sonuçların doğrulanması ve izolasyon bir çok laboratuarda standart dışı çalışma prosedürün bir parçasıdır. Buna ek olarak, epidemiyolojisi amacıyla PCR-pozitif numunelerinin saf bakteri kültürleri daha onaylamak ve biyokimyasal, bağışıklık veya genetik yöntemlerle gıda kaynaklı patojen serotipine gerekmektedir. Hiçbir yanlış pozitif gözlenmiş olmasına rağmen S. tespit ettiğinde enterica ve L. Tek vahşi yakalanmış sinekler vücut bölgelerinden monocytogenes, bu protokolü kullanarak, biz Cronobacter spp yanlış pozitif% 50 oranına kadar buldum. Bu durum, cins Cronobact için PCR bazlı tespit sistemier sinekler tarafından taşınan son derece karmaşık Mikrobiyota arasında mevcut diğer Enterobacteriaceae ile çapraz-reaksiyona girebilir. Böylece, izolasyon ve PCR-pozitif örneklerden cins Cronobacter saf kolonilerin arıtma değerlendirilen diğer patojenlerin daha seçici kaplama gerektirir. Bu protokol, öncelikle Cronobacter spp varlığı için bireysel vahşi yakalanmış sinekler taramak için standardize edilmiştir. S. enterica ve L. ticari bir PCR bazlı tespit sistemi kullanılarak monocytogenes. H7 (ya E. coli O157 kullanarak: H7 MP standart deney seti veya E. coli Ancak, bu protokol de kolayca enterohemorrhagic E. coli O157 gibi diğer gıda kaynaklı patojenlerin varlığı için tek sinek vücut parçaları taramak için uyarlandı O157: Gerçek zamanlı tahlil kiti H7) ve shiga-toksijenik E. yayından coli (STEC) grubu (gerçek-zamanlı STEC paketi kullanarak), elde duyarlılıkları&gt;% 80 (ed verileri). Ayrıca, bu protokol potansiyel hastalıklar (hamamböceği ve karıncalar) vektörler bilinen diğer böceklerden gıda kaynaklı patojenlerin tespit etmek için adapte edilebilir, ancak bu alanda daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır. Gıda kaynaklı hastalık salgını soruşturma çok dinamik ve özel durum ve yerel olmak ortam 12,27 araştırıldı göre değişebilir bir çok adım süreci içermektedir. Gelecek hastalıkların önlenmesi ile anında halk sağlığı koruma sağlamak çünkü bu araştırmalar önemlidir. Ayrıca, bu araştırmalar gıda kaynaklı mikroorganizmalar yayılır hangi yeni mekanizmaları aydınlatmak ve araştırma 28 için yeni alanlara yol önemli soruları gündeme olabilir. Soruşturma teknikleri yanı sıra, standart, hızlı ve hassas protokoller bireysel böceklerden gıda kaynaklı patojenlerin tespiti için gereklidir. Bu standart bir protokol w, aseptik sinek gibi böcekler toplamak için fırsat açarhich bir çevre örnekleme programının bir parçası olarak, gıda kaynaklı patojen bakteri vektör olabilir. Bu elde edilebilir epidemiyolojik bilgiler böcekler tarafından gıda kaynaklı patojenlerin bulaşma mekanizmaları doğru bir resim yapımında kullanılmak olacaktır (yani, pozlama süresi: açılış sinekler karşı iniş tuvaletimi ve regurgitating bir sinek). Hayır sadece uygun sistemi yoluyla Son olarak, burada açıklanan ticari PCR-tabanlı algılama sistemi kullanmak için pratik ve PCR ve cins düzeyinde amplikonunu görselleştirme kolaylaştırır olsa, öyle. zenginleştirilmiş örneklerden lizat alternatif olarak kamuya açık olabildiği için, türe özgü primer çiftleri kullanılarak gıda kaynaklı Patojenlere taranması için kullanılabilir. Bununla birlikte, algılama hassasiyeti, kullanmadan önce gösterilmelidir.

Onlar yiyecek veya gıda ile temas eden yüzeyleri ve eşyaları 1 patojenleri yayılabilir, çünkü böcekler yiyecek-ilişkili hastalıkların bulaşmasında önemli rol oynar. Böcekler arasında, sinekler hamamböceği ve karıncalar gıda kaynaklı patojenlerin yayılmasını tercih davranışlar sergilerler. Bu davranışlar çöp ve dışkı, endophily (giren binalar), ve synanthropy (insanlar ile birlikte yaşayan), çürüyen madde ile bir ilişki bulunmaktadır 2. .. Salmonella spp gibi gıda kaynaklı patojenler, Listeria monocytogenes, Campylobacter spp Escherichia coli O157: H7, ve cins Cronobacter (eski Enterobacter sakazakii&#39;nin) üyeleri böcekler 3-5 iletilecek bildirilmiştir. Synanthropic pislik mekanik onların kontamine vücut yüzeylerinden patojenleri aktararak gıda kaynaklı bakteri yayılır sinekler. Bununla birlikte, sinekler, sindirim borusu içinde gıda ile taşınan patojenlerin varlığı ile üç kez kadar olabilirvücut yüzeyleri (vücut, baş, bacaklar ve kanatlar) 5 gözlenen daha büyük. Gıda kaynaklı patojenler de vücut yüzeyi 6,7 ziyade ve bazı durumlarda süre daha uzun süreyle sineğin sindirim kanalında kalabilir, bunlar sineğin sindirim yolu 4,8,9 kolonize, çarpma edebiliyoruz. Onlar daha dışkılama ve regürjitasyon 10,11 ile gıda kaynaklı patojenler yayılabilir çünkü bu sinekler vektör potansiyelini arttırır. Günümüzde, daha hızlı gıda kaynaklı hastalık salgınları tespit edebiliyoruz gözetim sistemleri var geliştirilmiştir. Gıda kaynaklı salgın soruşturma yapılırken, kamu sağlığı yetkilileri enfeksiyon kaynağı (ler) veya araç (lar) olabilir gıda için bakmak. Araştırmacılar ayrıca, gıda kirlenmiş öğrenmek için ilgili tesis (veya tesislerin) bir çevresel değerlendirme yapabilir ve soruşturma 12 kapsamında örnekleri toplamak olabilir. DespBilimsel literatürde, gıda kaynaklı patojenlerin taşıyıcıları olarak böceklerle ilgili belirli bir gıda kaynaklı hastalık salgını zorlu olmuştur neden olan patojen vektörleri gibi böcekler bağlayan büyük miktarda ite. Böcekler aseptik gıda kaynaklı salgın soruşturmalar sırasında çevre örnekleme programlarının bir parçası olarak tahsil edilmemesi Bunun başlıca nedeni olduğunu. Böcekler, çevre örnekleme prosedürü, bir tek böcek yerde olması gerekir gelen gıda kaynaklı patojenlerin tespit etmek için bir standart hızlı, hassas ve güvenilir bir protokol kapsamında, gıda kaynaklı patojenlerin yayılmasını lehine davranışlar sergilediği özellikle de dahil etmek. Böceklerden gıda kaynaklı patojenlerin saptanması için geleneksel kaplama teknikleri zahmetli ve böceğin doğal ortakçı mikrobiyota hızlı büyümesini üstesinden gelmek için, farklı kültür ortamı içinde, hedef bakteri rekabetçi büyüme bağlıdır. Ba ile böcekleri ilişkili çalışmaların çoğucterial patojenler birlikte birkaç böcekler havuzu ziyade bireysel bazda başına patojenlerin varlığı tespit ederek yöntemin duyarlılığını artırmıştır. Böylece, bu çalışmalar patojenler 13-18 bulundu böceğin vücut parçası ayırt etmedi. Bu epidemiyolojik etkileri olabilir ve farklı azaltma stratejileri yol açabilir gibi gıda kaynaklı patojenler vücut yüzeyinde veya bireysel böceğin sindirim kanalında bulunan olup olmadığını belirlemek için yeteneği önemlidir. Mekanik vektörleri olarak, sadece enfeksiyonun potansiyel olarak daha yüksek seviyelerde aktarma patojenlerin olasılığını arttırmak akmak bu sinekler ise, vücut yüzeyinden bakteri düşük seviyelerde transferi ve gıda dışkılama olabilir kısa bir süre için gıda araziyi uçar. Sonuç olarak, bir birey böcek başına bir gıda kaynaklı patojen prevalansını tahmin etmek ve bu böcek bakteriyel p vücut parçası ayırt etmek önemlidir<html> athogen bulunmaktadır. Gıda kaynaklı patojenleri saptamak için kültür-bağımsız yöntemlerin kullanılması giderek yürütülmektedir olsa, onlar ticari bir tek böcek gıda kaynaklı patojenlerin tespit etmek için kullanılan değil. Şu anda, ticari, sanayi ve düzenleyici kurumlar tarafından kullanılmakta olan gıdalardan gıda kaynaklı patojenlerin hızlı tespiti için kullanılabilir moleküler protokolleri var doğrulanır. Bu yöntemler, gıda örnekleri çeşitli patojenlerin saptanması için DNA bazlı sistemler yer alır. Moleküler protokoller, geleneksel kaplama yöntemlerine göre daha hızlı olsa da, örnek zenginleştirilmesi hala polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) &#39;de gerekli olan bakteriyel patojen 10 2 koloni oluşturan birim (CFU) tabanlı yöntemler 19 duyarlılık seviyesinin elde edilmesi için gereklidir. Buna ek olarak, PCR pozitif numuneler saf bakteri kolonilerinin izolasyon uygun yöntemler kullanılarak patojen teyit etmek için gereklidir. İçerik &quot;&gt; Bu protokolün amacı, vücut yüzeyinden gıda kaynaklı bakterilerin tespiti ve tek sinek sindirim kanalına gıda ve çevresel örneklerden patojenleri tespit etmek ve daha fazla olanlar izole etmek için kullanılan bir piyasada mevcut PCR tabanlı bir sistemin standardize etmek Burada tarif edilen protokol samples.The hassasiyeti patojenlerin ilk deneysel her bir bakteri patojeninin seri seyreltileri ile beslenen hayvanlar lab-destekli yetişkin ev sinekleri (Musca domestica) ile kalibre edilmiştir. standart bir protokol, daha sonra incelemek için kullanılmıştır 100 vahşi yakalanmış vücut yüzeyleri ve / veya sindirim kanallarından gıda kaynaklı patojenlerin varlığı için uçar. Bu standart bir protokol halk sağlığı laboratuarları gıda kaynaklı yaparken çevresel örnekleme programının bir parçası olarak toplama imkanı sağlayarak, böcekler tarafından yöneltilen sağlık tehditleri tespit sağlayacak salgın incelemeleri.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bismuth sulfite (BS) agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>R452402</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain heart infusion (BHI) broth</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>299070</td>
			<td>*Pre-warmed to 37&#176;C. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliance Listeria agar (BLA)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>CM1080B</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffered peptone water (BPW)</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>212367</td>
			<td>*Pre-warmed to 37&#176;C or 42&#176;C. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliance Cronobacter agar (Druggan-Forsythe-Iversen formulation/DFI)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>CM1055B</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chromID Sakazakii Agar</td>
			<td>bioM&#233;rieux</td>
			<td>43741</td>
			<td>*Call for information: 800.682.2666</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R &#38; F Enterobacter sakazakii (Cronobacter) Chromogenic Plating Medium</td>
			<td>R &#38; F Laboratories</td>
			<td>Various</td>
			<td>*Call for information: +1.630.969.530</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R &#38; F Enterobacter sakazakiii Enrichment Broth and supplement</td>
			<td>R &#38; F Laboratories</td>
			<td>Various</td>
			<td>*Call for information: +1.630.969.530</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hektoen enteric (HE) agar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>OXCM0419B</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Listeria enrichment broth (24LEB)</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>CM1107</td>
			<td>*Freshly prepared at room-temperature. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Listeria selective enrichment supplement</td>
			<td>Oxoid</td>
			<td>SR0243</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novobiocin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>OXSR0181E</td>
			<td>*Multiple suppliers. Store at 2-8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vancomycin hydrochloride hydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>861987</td>
			<td>Store at 2-8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefsulodin sodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C8145</td>
			<td>Store at 2-8 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rappaport-Vassiliadis (RV) medium</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>CM0669B</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrathionate (TT) Broth</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>249120</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypticase soy agar (TSA)</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>236930</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylose lysine desoxycholate (XLD) agar</td>
			<td>Becton, Dickson and Company</td>
			<td>221284</td>
			<td>*Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>API Biochemical identification system</td>
			<td>bioM&#233;rieux</td>
			<td>Various</td>
			<td>*Call for information: +1.800.682.2666</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VITEK 2: Product Safety</td>
			<td>bioM&#233;rieux</td>
			<td>Various</td>
			<td>*Call for information: +1.800.682.2667</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BAX System Q7</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BAX E. sakazakii Standard assay kit</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>D11801836</td>
			<td>*</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BAX L. monocytogenes 24E assay kit</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>D13608125</td>
			<td>*</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BAX Salmonella 2 Standard assay kit</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>D14368501</td>
			<td>*</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capping tool</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>D11677028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Decapping tool</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>D11134095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR tube rack/holder</td>
			<td>DuPont</td>
			<td>D12701663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Featherweight forceps, wide tip</td>
			<td>BioQuip</td>
			<td>4750</td>
			<td>Sterilize before use. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine point, straight tip forceps</td>
			<td>BioQuip</td>
			<td>4731</td>
			<td>Sterilize before use. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zirconia/silica beads, 0.5 mm</td>
			<td>Bio Spec Products, Inc.</td>
			<td>11079105z</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes - 60X15mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772B</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable inoculating loops, 10&#181;L</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-606</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-shaped cell spreaders</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-665-230</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes, 2 ml</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Various</td>
			<td>Sterilize before use when needed. Secure lid is preferred. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cluster tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-500-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cluster tubes caps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-500-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hypochlorite (Liquid chlorine bleach)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>*Dilute to 0.05% with water. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile deionized water</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile distilled water</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl alcohol 190 proof</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>*Dilute to 70% with water when needed. Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genie cell disruptor, 120V - for 1.5ml and 2.0ml microtubes</td>
			<td>Scientific Industries, Inc.</td>
			<td>SI-D238</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating block</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cooling block</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recirculating water bath</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Multiple suppliers.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of foodborne bacterial pathogens from individual filth flies

There is unanimous consensus that insects are important vectors of foodborne pathogens. However, linking insects as vectors of the pathogen causing a particular foodborne illness outbreak has been challenging. This is because insects are not being aseptically collected as part of an environmental sampling program during foodborne outbreak investigations and because there is not a standardized method to detect foodborne bacteria from individual insects. To take a step towards solving this problem, we adapted a protocol from a commercially available PCR-based system that detects foodborne pathogens from food and environmental samples, to detect foodborne pathogens from individual flies.Using this standardized protocol, we surveyed 100 wild-caught flies for the presence of Cronobacter spp., Salmonella enterica, and Listeria monocytogenes and demonstrated that it was possible to detect and further isolate these pathogens from the body surface and the alimentary canal of a single fly. Twenty-two percent of the alimentary canals and 8% of the body surfaces from collected wild flies were positive for at least one of the three foodborne pathogens. The prevalence of Cronobacter spp. on either body part of the flies was statistically higher (19%) than the prevalence of S. enterica (7%) and L.monocytogenes (4%). No false positives were observed when detecting S. enterica and L. monocytogenes using this PCR-based system because pure bacterial cultures were obtained from all PCR-positive results. However, pure Cronobacter colonies were not obtained from about 50% of PCR-positive samples, suggesting that the PCR-based detection system for this pathogen cross-reacts with other Enterobacteriaceae present among the highly complex microbiota carried by wild flies. The standardized protocol presented here will allow laboratories to detect bacterial foodborne pathogens from aseptically collected insects, thereby giving public health officials another line of evidence to find out how the food was contaminated when performing foodborne outbreak investigations.

C - Bu protokol, önce deneysel sıvı uçucu gıda (% 2 süt tozu) ihtiva eden bir seri seyreltmeleri (10 8 CFU / mL 10 2) ile, 24 saat süre ile beslenen hayvanlar lab-destekli karasineklerin bir dizi kalibre edilmiştir sakazakii S. enterica L. monocytogenes, ya da C jejuni (n = 21 her bakteriyel patojenin). PCR tabanlı sistem vücut yüzeyi ve deneysel beslenen bir tek sindirim kanalından bakteri düşük seviyelerde (10 2 CFU / ml) tespit başardı kadar Zenginleştirme medya yanı sıra kuluçka süreleri ve sıcaklıkları her gıda kaynaklı patojen için ayarlandı sinek. Protokol bölümünde açıklanan zenginleştirme ortamı ve koşulları kullanarak, PCR bazlı sistem C tespit sakazakii S. enterica ve L. bakteriyel aşı kısmı&gt; 10 3 cfu / ml (Şekil 1A) ile beslenen sinek% 100 vücut yüzeyinden monocytogenes. Sinekler 10 ile beslenen edildiğinde2 CFU / mL, C saptama yüzdesi sakazakii S. enterica ve L. vücut yüzeyinden monocytogenes% 100,% 66 ve% 33, sırasıyla, (Şekil 1A) idi. PCR bazlı sistem, aynı zamanda yüzde ≥33% (Şekil 1B) tüm bakteri konsantrasyonları ile beslenen sinek beslenme kanalı bu üç gıda kaynaklı patojenlerin tespit edildi. Bununla birlikte, C algılama lab-destekli sinekler deneysel sıvı gıda yüksek bakteriyel inokulum (10 8 CFU / mL) içeren beslendiğinde jejuni sadece elde edildi. Bu nedenle, C jejuni Bu PCR bazlı tespit sistemi kullanılarak sinekler tek synanthropic pislik test edilebilir gıda ile taşınan patojenlerin grubu çıkarıldı. Bu standart protokol ile, Cronobacter spp yaygınlığını belirlemek başardık., S. enterica, ve L. vücut yüzeyinde ve / veya tarihleri ​​arasında monocytogenesbireysel ve aseptik vardı M. de dahil olmak üzere, en az altı türün temsilcisi olan 5 Toplanan pislik sinekler Washington, DC metropolitan alanda bulunan on kentsel restoranlar çöplüğü alanından yakalandı 100 yaban sinekler e sindirim kanalı domestica (% 47), Lucilia cuprina (% 33), L. sericata (% 14), Cochliomyia macellaria (% 2), Sarcophaga haemorrhoidalis (% 2) ve Ophyra leucostoma (% 1). Bir sinek sadece aile düzeyinde tespit edilmiştir (Anthomyiidae;% 1). yüzey dezenfeksiyon protokolü hiçbir bakteri üremesi her anında son dezenfeksiyon durulama su için TSA plakaları gözlendi çünkü sineğin vücut parçaları arasında çapraz bulaşmayı önlemek etkili oldu. Bu durumda, bir ayrım her anında vücut parçaları üzerinde mevcut olan gıda kaynaklı bakteriler arasında yapılabilir. Hiçbir yanlış pozitif vücut yüzeyinin örneklerinin ve sindirim kanalından tespit edildiBireysel sinekler S. tespiti için bu ticari PCR-temelli bir sistem kullanırken enterica ve L. monocytogenes ve agar plakaları üzerinde canlı patojenlerin onay PCR pozitif sonuçlar ile anlaşmaya vardı. Bununla birlikte, Cronobacter spp saf kültürleri izole etmek mümkün değildi. Tüm PCR pozitif örneklerden. Bu nedenle, bu patojenin PCR tabanlı (; 18/09% 50) ve sindirim kanalı (% 48; 16/33) Tek vahşi yakalanmış sinekler sistem vücut yüzeyinden yanlış pozitif gösterdi. Özel bir ortam üzerinde plakalanmıştır rastgele seçilen PCR-negatif numuneler, gıda ile taşınan patojenlerin olmadığını göstermektedir. Cronobacter spp algılamak için bu ticari PCR tabanlı sistemi kullanarak nedenle, hiçbir yanlış negatif numunelerin herhangi birinden tespit edilmiştir. S. enterica veya L monocytogenes. Sadece patojen izole ve teyit edildi o PCR pozitif örnekler pozitif kabul edildive istatistiksel analiz dahil. vahşi yakalanmış pislik sineklerin sindirim kanalında gıda kaynaklı patojenlerin genel varlığı (df = 1, p = 0.0087 χ 2 = 6,8772) vücut yüzeyinde anlamlı olarak daha yüksek idi. Sindirim kanallarından% 22 ve toplanan yabani sineklerin vücut yüzeyleri% 8 üç gıda ile taşınan patojenlerin en az biri için (Şekil 2) pozitif çıkmıştır. Genel olarak, Cronobacter spp sıklığı. S. prevalansı daha vücut yüzeyleri veya toplanan sinekler sindirim kanallar ya da üzerinde (Fisher kesin testi p = 0.0165% 19) istatistiksel olarak daha yüksekti enterica (% 7) ve L. monositogenleri (% 4). Her bakteriyel patojen (Şekil 3 sineklerin vücut parçaları arasındaki ikili karşılaştırmalar yaparken Ancak, istatistiksel fark gözlenmemiştir; Cronobacter için Fisher&#39;in kesin testi p = 0,1464, p = 0,1184, p = 0,6212spp., S. enterica ve L. monocytogenes, sırasıyla). Sinekler hiçbiri değerlendirilen her üç patojenler için pozitif idi. Ancak, sinekler (iki L. cuprina ve bir L. sericata) taşınan Salmonella spp üç. ve L. yüzeyde veya sindirim borusu içinde monocytogenes. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52372/52372fig1.jpg" /> (A) &#39;vücut yüzeyi ve (B) farklı bakteriyel inokulum ihtiva eden sıvı gıda ile beslenen ayrı hayvanlar lab-destekli karasineklerin sindirim kanalına Cronobacter sakazakii&#39;nin Salmonella enterica, Listeria monocytogenes, ve Campylobacter jejuni Şekil 1 tespit seviyeleri (n = Her bir bakteriyel patojen 21, n, her bir bakteri konsantrasyonu başına = 3). <img alt="Şekil 2,"src = &quot;/ files / ftp_upload / 52.372 / 52372fig2.jpg&quot; /&gt; Vücut yüzeyleri ve bireysel sineklerin sindirim kanalların Şekil 2. yüzdesi hedef gıda kaynaklı patojenlerin herhangi pozitif bulundu. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52372/52372fig3.jpg" /> Cronobacter spp Şekil 3. prevalansı., Salmonella enterica ve vücut yüzeyinden Listeria monocytogenes ve synanthropic vahşi yakalanmış sinekler sindirim kanalı. rapor p değerleri vücut yüzeyi ve her bakteriyel patojen için sindirim kanalına arasındaki ikili karşılaştırmalar vardır (Fisher testi, p değeri &lt;0.05 istatistiksel anlamlılık göstermektedir). Copyright © Amerikan Mikrobiyoloji Derneği, Uygulamalı Dergisi ve Çevresel Mikrobiyoloji 78 (22): 7891-902, 2012. doi: 10,1128 / AEM.02195-12.

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Foodborne Bacterial Pathogens from Individual Filth Flies at JoVE.com

Detection of Foodborne Bacterial Pathogens from Individual Filth Flies

A PCR-based protocol was adapted to detect Cronobacter spp., Salmonella enterica, and Listeria monocytogenes from body surfaces and alimentary canals of individual wild-caught flies. The goal of this protocol is to detect and isolate bacterial pathogens from individual insects collected as part of an environmental sampling program during foodborne outbreak investigations.

Bireysel Filth Sinekler gelen Gıda Kaynaklı Bakteriyel Patojenler Algılama

There is unanimous consensus that insects are important vectors of foodborne pathogens. However, linking insects as vectors of the pathogen causing a ...

detection-of-foodborne-bacterial-pathogens-from-individual-filth-flies

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Statistics

Environment

Unit 1

Biostatistics

SCIENTISTS IN ACTION

18.1K Görüntüleme.  U.S. Food and Drug Administration. A PCR-based protocol was adapted to detect Cronobacter spp., Salmonella enterica, and Listeria monocytogenes from body surfaces and alimentary canals of individual wild-caught flies. The goal of this protocol is to detect and isolate bacterial pathogens from individual insects collected as part of an environmental sampling program during foodborne outbreak investigations.

Video: Detection of Foodborne Bacterial Pathogens from Individual Filth Flies

Colorimetric Paper-based Detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from Large Volumes of Agricultural Water

This protocol describes rapid colorimetric detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from large volumes (10 L) of agricultural waters. Here, water is filtered through sterile Modified Moore Swabs (MMS), which consist&#160;of a simple gauze filter enclosed in a plastic cartridge, to concentrate bacteria. Following filtration, non-selective or selective enrichments for the target bacteria are performed in the MMS. For colorimetric detection of the target bacteria, the enrichments are then assayed using paper-based analytical devices (&#181;PADs) embedded with bacteria-indicative substrates. Each substrate reacts with target-indicative bacterial enzymes, generating colored products that can be detected visually (qualitative detection) on the &#181;PAD. Alternatively, digital images of the reacted &#181;PADs can be generated with common scanning or photographic devices and analyzed using ImageJ software, allowing for more objective and standardized interpretation of results. Although the biochemical screening procedures are designed to identify the aforementioned bacterial pathogens, in some cases enzymes produced by background microbiota or the degradation of the colorimetric substrates may produce a false positive. Therefore, confirmation using a more discriminatory diagnostic is needed. Nonetheless, this bacterial concentration and detection platform is inexpensive, sensitive (0.1 CFU/ml detection limit), easy to perform, and rapid (concentration, enrichment, and detection are performed within approximately 24&#160;hr), justifying its use as an initial screening method for the microbiological quality of agricultural water.

Colorimetric Paper-based Detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from Large Volumes of Agricultural Water

A protocol involving integrated concentration, enrichment, and end-point colorimetric detection of foodborne pathogens in large volumes of agricultural water is presented here. Water is filtered through Modified Moore Swabs (MMS), enriched with selective or non-selective media, and detection is performed using paper-based analytical devices (&#181;PAD) imbedded with bacterial-indicative colorimetric substrates.

Kolorimetrik Algılama Paper-based<em&gt; Escherichia coli</em&gt;<em&gt; Salmonella</em&gt; Spp. Ve<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Tarım Su geniş hacimli

This protocol describes rapid colorimetric detection of Escherichia coli, Salmonella spp., and Listeria monocytogenes from large volumes (10 L) of ...

Çevre

Building Double-decker Traps for Early Detection of Emerald Ash Borer

Emerald ash borer (EAB) (Agrilus planipennis Fairmaire), the most destructive forest insect to have invaded North America, has killed hundreds of millions of forest and landscape ash (Fraxinus spp.) trees. Several artificial trap designs to attract and capture EAB beetles have been developed to detect, delineate, and monitor infestations. Double-decker (DD) traps consist of two corrugated plastic prisms, one green and one purple, attached to a 3 m tall polyvinyl chloride (PVC) pipe supported by a t-post. The green prism at the top of the PVC pipe is baited with cis-3-hexenol, a compound produced by ash foliage. Surfaces of both prisms are coated with sticky insect glue to capture adult EAB beetles. Double-decker traps should be placed near ash trees but in open areas, exposed to sun. Double-decker trap construction and placement are presented here, along with a summary of field experiments demonstrating the efficacy of DD traps in capturing EAB beetles. In a recent study in sites with relatively low EAB densities, double-decker traps captured significantly more EAB than green or purple prism traps or green funnel traps, all of which are designed to be suspended from a branch in the canopy of ash trees. A greater percentage of double decker traps were positive, i.e., captured at least one EAB, than the prism traps or funnel traps that were hung in ash tree canopies.

Effective traps to attract and capture the emerald ash borer (EAB) are a key element of detecting and managing this invasive pest. Double-decker traps, placed in full sun near ash trees, incorporate visual and olfactory cues and were more likely to capture EAB than other trap designs in field trials.

Çift katlı tuzakları zümrüt kül matkap erken teşhis için bina

Emerald ash borer (EAB) (Agrilus planipennis Fairmaire), the most destructive forest insect to have invaded North America, has killed hundreds of millions ...

Evaluating the Effect of Environmental Chemicals on Honey Bee Development from the Individual to Colony Level

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be brought back to the beehive after the bees have foraged on flowers that have been sprayed with pesticides. Pesticide contaminated food can be exchanged between workers which then feed larvae and therefore can potentially affect the development of honey bees. Thus, residual pesticides in the environment can become a chronic damaging factor to honey bee populations and gradually lead to colony collapse. In the presented protocol, honey bee feeding methods are described and applied to either an individual honey bee or to a colony. Here, the insect growth regulator (IGR) pyriproxyfen (PPN), which is widely used to control pest insects and is harmful to the development of honey bee larvae and pupae, is used as the pesticide. The presenting procedure can be applied to other potentially harmful chemicals or honeybee pathogens for further studies.

Herein we present a method to feed pesticide contaminated food to both an individual honey bee and a beehive colony. The procedure evaluates the pesticide effect on individual honey bees by in vivo feeding of basic larval diet and also on the natural condition of beehive colony.

Koloni Düzeyde Bireysel olan Bal Arısı Kalkınma Çevre Kimyasalların Etkisinin Değerlendirilmesi

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be ...

Fluorescent Paper Strips for the Detection of Diesel Adulteration with Smartphone Read-out

Three fluorescent molecular rotors of 4-dimethylamino-4-nitrostilbene (4-DNS) were investigated for their potential use as viscosity probes to indicate the content of kerosene in diesel/kerosene blends, a wide-spread activity to adulterate fuel. In solvents with low viscosity, the dyes rapidly deactivate via a so-called twisted intramolecular charge transfer state, efficiently quenching the fluorescence. Measurements of diesel/kerosene blends revealed a good linear correlation between the decrease in fluorescence and the increase of the fraction of the less viscous kerosene in diesel/kerosene blends. Immobilization of the hydroxy derivative 4-DNS-OH in cellulose paper yielded test strips that preserve the fluorescent indicator&#39;s behavior. Combination of the strips with a reader based on a smartphone and a controlling app allowed to create a simple field test. The method can reliably detect the presence of kerosene in diesel from 7 to 100%, outperforming present standard methods for diesel adulteration.

Here, we present a protocol to detect the adulteration of diesel with kerosene using test strips coated with a fluorescent viscosity probe together with a smartphone-based analysis system.

Floresan kağıt şeritler dizel katıştırma Smartphone okuma ile tespiti için

Three fluorescent molecular rotors of 4-dimethylamino-4-nitrostilbene (4-DNS) were investigated for their potential use as viscosity probes to indicate ...

Detection of Viruses from Bioaerosols Using Anion Exchange Resin

This protocol demonstrates a customized bioaerosol sampling method for viruses. In this system, anion exchange resin is coupled with liquid impingement-based air sampling devices for efficacious concentration of negatively-charged viruses from bioaerosols. Thus, the resin serves as an additional concentration step in the bioaerosol sampling workflow. Nucleic acid extraction of the viral particles is then performed directly from the anion exchange resin, with the resulting sample suitable for molecular analyses. Further, this protocol describes a custom-built bioaerosol chamber capable of generating virus-laden bioaerosols under a variety of environmental conditions and allowing for continuous monitoring of environmental variables such as temperature, humidity, wind speed, and aerosol mass concentration. The main advantage of using this protocol is increased sensitivity of viral detection, as assessed via direct comparison to an unmodified conventional liquid impinger. Other advantages include the potential to concentrate diverse negatively-charged viruses, the low cost of anion exchange resin (~$0.14 per sample), and ease of use. Disadvantages include the inability of this protocol to assess infectivity of resin-adsorbed viral particles, and potentially the need for the optimization of the liquid sampling buffer used within the impinger.

An anion exchange resin-based method, adapted to liquid impingement-based bioaerosol sampling of viruses is demonstrated. When coupled with downstream molecular detection, the method allows for facile and sensitive detection of viruses from bioaerosols.

Anyon Exchange reçine kullanma Bioaerosols--dan virüs tespiti

This protocol demonstrates a customized bioaerosol sampling method for viruses. In this system, anion exchange resin is coupled with liquid ...

An Anaerobic Biosensor Assay for the Detection of Mercury and Cadmium

Mercury (Hg) bioavailability to microbes is a key step to toxic Hg biomagnification in food webs. Cadmium (Cd) transformations and bioavailability to bacteria control the amount that will accumulate in staple food crops. The bioavailability of these metals is dependent on their speciation in solution, but more particularly under anoxic conditions where Hg is methylated to toxic monomethylmercury (MeHg) and Cd persists in the rhizosphere. Whole-cell microbial biosensors give a quantifiable signal when a metal enters the cytosol and therefore are useful tools to assess metal bioavailability. Unfortunately, most biosensing efforts have so far been constrained to oxic environments due to the limited ability of existing reporter proteins to function in the absence of oxygen. In this study, we present our effort to develop and optimize a whole-cell biosensor assay capable of functioning anaerobically that can detect metals under anoxic condition in quasi-real time and within hours. We describe how the biosensor can help assess how chemical variables relevant to the environmental cycling of metals affect their bioavailability. The following protocol includes methods to (1) prepare Hg and Cd standards under anoxic conditions, (2) prepare the biosensor in the absence of oxygen, (3) design and execute an experiment to determine how a series of variable affects Hg or Cd bioavailability, and (4) to quantify and interpret biosensor data. We show the linear ranges of the biosensors and provide examples showing the method's ability to distinguish between metal bioavailability and toxicity by utilizing both metal-inducible and constitutive strains.

Here, we present a protocol to use an anaerobic whole-cell microbial biosensor to evaluate how different environmental variables affect the bioavailability of Hg and Cd to bacteria in anoxic environments.

Bir anaerobik biyoalgılayıcı tahlil civa ve kadmiyum tespiti için

Mercury (Hg) bioavailability to microbes is a key step to toxic Hg biomagnification in food webs. Cadmium (Cd) transformations and bioavailability to ...

A Precise and Autonomous System for the Detection of Insect Emergence Patterns

Existing systems to measure insect emergence patterns have limitations; they are only partially automated and are limited in the maximum number of emerging insects they can detect. In order to obtain precise measurement of insect emergence, it is necessary for systems to be semi-automated and able to measure large numbers of emerging insects. We addressed these issues by designing and building a system that is automated and can measure emergence of up to 1200 insects. We modified the existing &#34;falling-ball&#34; system using Arduino microcontrollers to automate data collection and expand the sample size through multiple data channels. Multiple data channels enable the user to not only increase their sample size, but also allows for multiple treatments to be run simultaneously in a single experiment. Furthermore, we created an R script to automatically visualize the data as a bubble plot, while also calculating the median day and time of emergence. The current system was designed using 3D printing so the user can modify the system to be adjusted for different species of insects. The goal of this protocol is to investigate important questions in chronobiology and stress physiology, using this precise and automated system to measure insect emergence patterns.

Measurement of insect emergence patterns requires precision. Existing systems are only semi-automated and sample size is limited. We addressed these issues by designing a system using microcontrollers to precisely measure the time of emergence of large numbers of emerging insects.

Böcek ortaya çıkışı desenler tespiti için hassas ve özerk bir sistem

Existing systems to measure insect emergence patterns have limitations; they are only partially automated and are limited in the maximum number of ...

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a potential mate to form a pair. While this phenomenon has attracted interest of researchers, methods for its analysis have not been well described. Here we describe procedures for: 1) individual culturing and staging of Tigriopus juveniles and adults, and 2) video-based analysis of their mate-guarding behavior. The culturing method enables experimental control of paring experience of animals as well as the ability to track their development before behavioral tests. The analysis method allows quantitative evaluation of several aspects of the mate-guarding behavior, including capturing attempts by males and swimming trajectory of mate-guarding pairs. Although these methods were originally established for ethological studies on Tigriopus, with proper modifications they can also be applied to studies of other zooplankton in different research fields, such as physiology, toxicology, and ecological genetics.

Individual Culturing of Tigriopus Copepods and Quantitative Analysis of Their Mate-guarding Behavior

Mate-guarding behavior plays an important role in reproduction of intertidal copepods of the genus Tigriopus. However, methods for studying this behavior have not been well described. Here we describe methods for: 1) individual culture of virgin Tigriopus animals, and 2) quantitative analysis of their mate-guarding behavior.

Bireysel Tigriopus kopepodların ve kantitatif analiz dostum koruyan davranışlarının kültür

Copepods of the genus Tigriopus, which are common zooplankton in rocky tide pools, show precopulatory mate-guarding behavior where a male clasps a ...

Reproducible dsRNA Microinjection and Oviposition Bioassay in Mosquitoes and House Flies

Synthetic dsRNAs, used to induce RNA interference, may have dose dependent phenotypic effects. These effects are difficult to define if the dsRNAs are delivered using a non-quantitative method. Accurate delivery of known quantities of nucleic acids or other chemicals is critical to measure the efficacy of the compound being tested and to allow reliable comparison between compounds.
Here we provide a reproducible, quantitative microinjection protocol that ensures accurate delivery of specific doses of dsRNA, reducing the mortality typically induced by injection injury. These modifications include the addition of Rhodamine B, a graduated injection needle, and an improved recovery method borrowed from Isoe and Collins. This method allows calculation of dose responses and facilitates comparisons between compounds. Versions of this method have been successfully used on three genera of mosquitoes as well as house flies to assess the reduction in fecundity resulting from gene silencing of ribosomal RNA transcripts.
This protocol provides strategies to reduce several challenges of small insect microinjection. Together, mechanical delivery of dsRNAs accompanied by visual verification, identification of effective locations for delivery, and inclusion of a post-injection recovery period ensure accurate dosing and low injury mortality. This protocol also describes an oviposition bioassay for uniform determination of effects on fecundity.

This protocol describes a microinjection methodology that we have standardized and used for several years to deliver specific quantities of nucleic acids directly to the hemolymph of mosquitoes and house flies. This protocol results in minimal injection mortality and allows dose correlated measurements of fecundity.

Tekrarlanabilir dsRNA mikroenjeksiyon ve Oviposition Bioassay sivrisinekler ve evi sinekler

Synthetic dsRNAs, used to induce RNA interference, may have dose dependent phenotypic effects. These effects are difficult to define if the dsRNAs are ...

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized into five different toxinotypes, A through E, based on the carriage of four major toxin genes. The prevalence and distribution of these various toxinotypes is understudied, especially their pervasiveness in American retail food. Of particular interest to us are the type B and D strains, which produce epsilon toxin, an extremely lethal toxin suggested to be the environmental trigger of multiple sclerosis in humans. To evaluate the presence of different C. perfringens toxinotypes in various food samples, we developed an easy method to selectively culture these bacteria without the use of an anaerobic container system only involving three culturing steps. Food is purchased from local grocery stores and transported to the laboratory under ambient conditions. Samples are minced and inoculated into modified rapid perfringens media (RPM) and incubated overnight at 37 &#176;C in a sealed, airtight conical tube. Overnight cultures are inoculated onto a bottom layer of solid Tryptose Sulfite Cycloserine (TSC) agar, and then overlaid with a top layer of molten TSC agar, creating a &#34;sandwiched&#34;, anaerobic environment. Agar plates are incubated overnight at 37 &#176;C and then evaluated for appearance of black, sulfite-reducing colonies. C. perfringens-suspected colonies are removed from the TSC agar using sterile eye droppers, and inoculated into RPM and sub-cultured overnight at 37 &#176;C in an airtight conical tube. DNA is extracted from the RPM subculture, and then analyzed for the presence of C. perfringens toxin genes via polymerase chain reaction (PCR). Depending on the type of food sampled, typically 15&#8211;20% of samples test positive for C. perfringens.

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

The objective of this protocol is to detect different Clostridium perfringens toxinotypes in locally purchased foods, particularly epsilon toxin producing strain types B and D, without the use of anaerobic chambers.

Perakende Gıda Numunelerinde Clostridium Perfringens Toxinotypes Zenginleştirme ve Algılama

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized ...