This work was supported by Grants-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (26461185 and 25460137).

NOT: Bu çalışma, uygun Etik Komiteleri tarafından onaylandı. İnsan Akciğer Fibroblastları 1. İlköğretim Kültürü <ol><li> Akciğer dokusunun Koleksiyon: <ol><li> Doğrudan cerrahi ameliyathane insan akciğer doku örnekleri edinin. Olabildiğince uzak olarak tümör toplanan kanserli olmayan numune ile, kanserli ve kanserli olmayan akciğer dokusundan yaklaşık 1 cm 3 blok toplayın. </li><li> Dulbecco değiştirilmiş Eagle ortamı, 100 birim / ml penisilin, 100 ug / ml streptomisin ve 0.25 ug / ml amfoterisin B (serumsuz ortam) ile takviye edilmiş (DMEM) içinde örnekleri askıya alındı. Steril 50 ml tüpler içinde asılı örnekleri koruyun ve laboratuvara transfer. Not: Fibroblastlar yüksek göçmen ve epitel, endotel ve düz kas hücreleri gibi diğer hücre tipleri ile karşılaştırıldığında, proliferatif. sonucudur yöntemi fibroblastların bu özelliklerinden yararlanmak ve outgro alırdoku kesitlerinden kanat hücreleri fibroblastlar bol miktarda bulunmaktadır. Çeşitli hücre geçiş sonrası, diğer hücre tipleri saflaştırılmış fibroblast hücre kültürlerinde elde edilen hayatta ve% 10 cenin sığır serumu (FBS) ile birlikte DMEM yaymak için başarısız olur. hücrelerin, birincil kültür, aşağıdaki 3-7 geçişleri kullanılabilir. </li></ol></li><li> Hücre akıbet için eksplant kültürü ve iklimlendirme: <ol><li> Modifikasyonlar 5 ile önceden bildirilen protokolü kullanarak fibroblast primer kültürünü gerçekleştirin. </li><li> Laboratuarda, kültür ortamında 10 cm uzunluğunda bir doku kültür tabağına, doku numuneyi ve küçük bölümler halinde kesilir ~ steril forseps ve bir neşter kullanılarak boyut olarak 2-3 mm arasındadır. Bu süreçte, aksi halde hücre akıbet verimliliği bozulur, bölüm kuru yapmamak. </li></ol></li><li> Epitel hücre tabakası ve bağ dokusu Ayrılması: <ol><li> 4 ° C &#39;de 16 saat süre ile kültür 2000 poliüretan / ml dispaz I içeren ortamda ve kültür kesme doku bölümleri bekletin. &lt;/ Li&gt; <li> Bir çanak için doku bölümleri transfer ve bitişik bağ dokusundan epitel hücre katmanı ayırınız. Mikroorganizmaların kirlenmesini önlemek için temiz bir tezgah bölümleri işleyin. Not: epitel hücrelerinin ana bir kültürü gerekirse, adım 1.3 gerçekleştirin. Sadece fibroblastlar izole edilmesi ise daha sonra eksplant kültürü ve hücre geçişleri saflaştırılmış fibroblast popülasyonları elde epitel hücreleri için elverişsiz olması nedeniyle, adım 1.3 sayın. </li></ol></li><li> Doku kesitlerinin Ek: <ol><li> İki neşter kullanılarak 1 mm&#39;lik parçalar halinde dokuları kıyma. Adet kadar küçük değilse, bunlar çanak daha kolay ayırmak ve hücreler çanak yüzeyinde büyümek için başarısız olur. </li><li> Her parça çevreleyen boş bir alana korumak için birbirinden küçük akciğer dokusu bölümleri yerleştirin. Doku bölümlerinin bağlanmasını kolaylaştırmak için bir bisturi bıçağını kullanarak doku kültürü çanağı yüzeyinde çizikler yapın. NOT: TaraklıAyrıca hücrelerin göç hangi boyunca kesitler sunmak, hücre büyümesini kolaylaştırmak için görünür. <ol><li> Seçenek olarak ise, ayrı ayrı, bir 6-yuvalı plakanın her oyuğuna kıyılmış doku parçaları yerleştirmek ve bir kayar kapak ile kapak. Silikon gres kullanılarak plaka yüzeyine kapak kayma takın. </li><li> Her iyi steril bir iğne kullanarak 1.5 cm arayla iki noktada silikon gres yerleştirin. Doku parçaları Kapsama çeşitli pasajlar aşağıdaki hücre akıbet ve hücre yayılımı etkinliğini artırır. </li></ol></li></ol></li><li> Müteakip eksplant kültürü: <ol><li> Numuneler kurumaya eğer etkin hücre akıbet çoğunlukla kaybolur gibi doku bölümleri, kurumasına önce hafifçe çanak kültür ortamı ekleyin. Çok hızlı doku bölümleri ayırmak gibi orta dökmeyin. </li><li> % 10 FBS&#39;li DMEM içinde kültür hücreleri. Ek yüzdürme gelen dekolmanı teşvik gibi, yüzen sağlar ki çok sadece doku karşılamak için yeterli ortamı kullanın, ancakçanak. </li></ol></li><li> Hücre geçişi: <ol><li> Kültür çanağı tekrar hareket doku bölümlerinin ayrılması yol gibi her zaman dikkatli bir kültür ortamı kullanın. </li><li> 5-7 gün boyunca 37 ° C&#39;de bir kuluçka makinesi içinde kültür kaplarına yerleştirin. Her gün orta Refresh, orta değişiklikleri sırasında minimal kültür yemekleri anlaştım. Fibroblastlar önümüzdeki birkaç hafta içinde doku kesitlerinin kenarından büyümek. Not: ~ 2-3 hafta sonra, üzerinde büyüme fibroblastlar neredeyse yüzey alanının miktarına bağlı olarak, kaynaşmaya eriştikten. </li><li> 1x hücrelerin PBS ile yıkayın ve plakasına tripsin 1 ml. </li><li> Tripsinizasyondan sonra,% 10 FBS ile takviye edilmiş DMEM 9 ml kullanarak hücreleri ayırmak. Doku kesitleri ile birlikte bir 10 ml tüp içinde ortam içinde süspansiyon haline getirilmiş hücreler toplanır. Hücre topakları oluşturmak üzere santrifüjden sonra, yeni bir ortam içinde elde edilen pelet yeniden süspanse edin. </li><li> Yeni bir cul üzerine hücreleri ve doku bölümleri TohumTure çanak, hangi noktada doku hücreleri yapışır ve büyürken çanak eklemek başarısız. Ertesi gün, aspirasyon ile yüzen doku parçaları kaldırmak ve orta değiştirin. Ekli fibroblastlar sonraki kültürlerle yaymak. </li></ol></li></ol> İnsan akciğer fibroblastlan ve Kanser Hücreleri 2. Üç boyutlu Co-kültür <ol><li> Hücre ve reaktiflerin hazırlanması: <ol><li> Yaklaşık 2 x 10 5 epitel hücreleri ve kuyu başına 2.5 x 10 5 fibroblastlar kullanın. (3 mg / ml, pH 3) FBS (% 100), yeniden oluşturma tamponu (50 mM NaOH, 260 mM NaHCO 3, 200 mM HEPES), 5x DMEM DMEM fibroblast kültürü için% 10 FBS ile takviye edilmiş kolajen tip IA hazırlanması ve 3D ko-kültür ortamı (1: kanser hücreleri fibroblast kültür ortamı ve kültür ortamına 1 karışımı). </li><li> Kültür A549 akciğer adenokarsinoma hücreleri, fibroblastlar ve DMEM A549 3D ko-kültür,% 10 FBS ile takviye edilmiştir. </li></ol></li><li> Kollajen jel formation: <ol><li> 1x PBS ile 10 cm çanak kültüre fibroblast yıkayın, ve ben plakasına tripsin 1 ml ekleyin. 37 ° C&#39;de ~ 5 dakika boyunca tripsinizasyondan sonra,% 10 FBS ile takviye edilmiş, 9 ml DMEM kullanılarak hücreleri ayırmak. 10 ml&#39;lik bir tüp içinde bir ortam içinde süspansiyon haline hücreleri toplamak, ve hücre topakları oluşturmak üzere 200-300 xg&#39;de santrifüj. </li><li> 5 x 10 5 / ml&#39;lik bir yoğunlukta% 100 FBS içinde elde edilen pelet yeniden süspanse. </li><li> Buz üzerinde kolajen jel hazırlayın. Aşağıdaki prosedüre önce bir soğutucuda reaktifler, pipet ve tüpler soğutun. Hatta, buz üzerinde, karışım bir ölçüde katılaştığı ve toplam hacim, tüm bileşenlerin toplamından daha azdır. </li><li> Her bir oyuğa olarak, FBS fibroblast süspansiyonu (2.5 x 10 5 hücre), 0.5 mi, 2.3 mi türü IA kollajen, 670 ul 5x DMEM ve 330 ul sulandırma tamponu karıştırılarak kollajen jel hazırlamak. Jeller oda sıcaklığında kolayca ayarlamanıza olanak verir. <ol><li> Şiddetle homojen bir mil sağlamak için pipetsoğutun. Pipetleme işlemi sırasında hava kabarcıkları oluşturarak kaçının. </li></ol></li><li> 6 gözlü bir plakanın her bir oyuğuna karışım (3 mi) ilave edilir ve 30-60 dakika boyunca bozukluğu olmadan 37 ° C&#39;de inkübatör içinde jelatinleştirilmesi için izin verir. </li></ol></li><li> Kollajen jel üzerinde Kanser hücre kültürü: <ol><li> 6 değişiklikler ile daha önce rapor protokol kullanılarak, üç boyutlu bir ko-kültür yapın. </li><li> 1 x 10 5 / ml&#39;lik bir yoğunlukta 3D ko-kültür ortamı içinde (ya da A549 hücrelerinin durumunda,% 10 FBS&#39;li DMEM içinde) yeniden süspanse edin, kanser hücreleri. </li><li> Her jel yüzeyi üzerine yeniden süspanse hücre çözeltisi (2 x 10 5 hücre) 2 ml dökün. Deney koşullarına bağlı olarak ko-kültür kanser hücreleri ya da fibroblastlarının hücre sayısını değiştirir. </li></ol></li><li> Jel daralma: <ol><li> Kanser hücreleri kolajen jel ile uygun böylece 37 ° C&#39;de gece boyunca jeller inkübe edin. Her jel ayırın ve o her iyi bir &#39;yüzen kültürü&#39; oluşturmak6-çukurlu plaka f. NOT: Bir yüzen kültürü kullanarak, jelin, boyutu çeşitli değişiklikler birlikte kültüre kanser hücreleri ve fibroblastlar arasındaki hücresel etkileşim aracılık eder mekanik gerilim ve kolajen degradasyonu ile uyarılmaktadır. </li><li> Kuyunun kenarına her jel ayırmak için açılı 21 G iğne veya küçük spatula kullanın. Her 2-3 günde bir, 3 boyutlu ortak-kültür ortamı içinde 2 ml ile kuyu yenileyin. 5 gün boyunca her gün, her jelin boyutu ölçülür. </li></ol></li><li> Kolajen jellerin analiz: <ol><li> Böyle Sircol tahlili gibi kollajen kantitasyon yöntemleri kullanarak her jel kollajen içeriğini ölçün. Jeller 5 RNA topladıktan sonra Transkriptomik analiz veya kantitatif RT-PCR gerçekleştirin. </li></ol></li></ol> 3. Hava-sıvı Arayüz Kültür ve Invasion Testi <ol><li> 5 gün boyunca 37 ° C &#39;de, kolajen jel kültürlendikten sonra yeni 6- bir ağ örgü üzerinde (70 um gözenek boyutu) yerleştirerek hava almasına jeller maruzhavuzlu plakalar hazırlanmıştır. Akış sitometrisi için kullanılan ticari olarak temin edilebilen hücre süzgeçler mesh olun. </li><li> Yavaşça 3D ko-kültür ortamı 11 ml her bir doldurun. </li><li> Steril bir kaşık kullanarak örgü üzerine jeller yerleştirin ve jeller kalan orta kaldırmak. Havaya jel üst yüzeyini açığa ederken bu durum üzerinde, orta jeller daldırın. Hava-sıvı arayüzü olarak bu kültürün durumu tanımlayın. Not: kuluçka makinesi içinde 37 ° C &#39;de hava-sıvı arayüzü kültür muhafaza 5-7 gün sonra, invazif kanser hücrelerinin jel içine göç ederler. Hücre tipine ve hücresel etkileşimler sonucu olarak, kanser hücrelerinde hücre morfolojik değişim değişik derecelerde hava-sıvı arayüzü kültürü ile uyarılmaktadır. </li><li> Histolojik değerlendirme için, oda sıcaklığında bir gece boyunca formalin jel saptamak ve parafin içine gömmek. Hematoksilen ve eosin (H &amp; E) ile dikey bölümleri (4 mikron) Leke. Immünohistokimyasal analiz o gerçekleştirinn bölümler 4. </li></ol>

<ol>
	<li>Strell, C., Rundqvist, H., Ostman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts-a+key+host+cell+type+in+tumor+initiation,+progression,+and+metastasis.">Fibroblasts-a key host cell type in tumor initiation, progression, and metastasis.</a> Ups. J. Med. Sci. 117 (2), 187-195 (2012).</li><li>Augsten, M., H&#228;ggl&#246;f, C., Pe&#241;a, C., Ostman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+digest+on+the+role+of+the+tumor+microenvironment+in+gastrointestinal+cancers.">A digest on the role of the tumor microenvironment in gastrointestinal cancers.</a> Cancer Microenviron. 3 (1), 167-176 (2010).</li><li>Augsten, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer-Associated+Fibroblasts+as+Another+Polarized+Cell+Type+of+the+Tumor+Microenvironment.">Cancer-Associated Fibroblasts as Another Polarized Cell Type of the Tumor Microenvironment.</a> Front. Oncol. 4, 62 (2014).</li><li>Horie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+lung+cancer-associated+fibroblasts+in+three-dimensional+in+vitro+co-culture+model.">Characterization of human lung cancer-associated fibroblasts in three-dimensional in vitro co-culture model.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 423 (1), 158-163 (2012).</li><li>Ohshima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-&#946;+signaling+in+gingival+fibroblast-epithelial+interaction.">TGF-&#946; signaling in gingival fibroblast-epithelial interaction.</a> J. Dent. Res. 89 (11), 1315-1321 (2010).</li><li>Ikebe, D., Wang, B., Suzuki, H., Kato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+keratinocyte+stratification+by+a+dominant+negative+JunB+mutant+without+blocking+cell+proliferation.">Suppression of keratinocyte stratification by a dominant negative JunB mutant without blocking cell proliferation.</a> Genes Cells. 12 (2), 197-207 (2007).</li><li>Orimo, A., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+fibroblasts+in+cancer:+a+novel+tumor-promoting+cell+type.">Stromal fibroblasts in cancer: a novel tumor-promoting cell type.</a> Cell Cycle. 5 (15), 1597-1601 (2006).</li><li>Paulsson, J., Micke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+relevance+of+cancer-associated+fibroblasts+in+human+cancer.">Prognostic relevance of cancer-associated fibroblasts in human cancer.</a> Semin. Cancer Biol. 25, 61-68 (2014).</li><li>Navab, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+gene-expression+signature+of+carcinoma-associated+fibroblasts+in+non-small+cell+lung+cancer.">Prognostic gene-expression signature of carcinoma-associated fibroblasts in non-small cell lung cancer.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 108 (17), 7160-7165 (2011).</li><li>Herrera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+heterogeneity+of+cancer-associated+fibroblasts+from+human+colon+tumors+shows+specific+prognostic+gene+expression+signature.">Functional heterogeneity of cancer-associated fibroblasts from human colon tumors shows specific prognostic gene expression signature.</a> Clin. Cancer Res. 19 (21), 5914-5926 (2013).</li><li>H&#228;ggl&#246;f, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+PDGFRbeta+expression+in+prostate+tumors+and+non-malignant+prostate+tissue+predicts+prostate+cancer+survival.">Stromal PDGFRbeta expression in prostate tumors and non-malignant prostate tissue predicts prostate cancer survival.</a> PLoS One. 5 (5), e10747 (2010).</li><li>Saito, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forkhead+box+F1+regulates+tumor-promoting+properties+of+cancer-associated+fibroblasts+in+lung+cancer.">Forkhead box F1 regulates tumor-promoting properties of cancer-associated fibroblasts in lung cancer.</a> Cancer Res. 70 (7), 2644-2654 (2010).</li><li>Kalluri, R., Zeisberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+in+cancer.">Fibroblasts in cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 6 (5), 392-401 (2006).</li><li>Calvo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanotransduction+and+YAP-dependent+matrix+remodelling+is+required+for+the+generation+and+maintenance+of+cancer-associated+fibroblasts.">Mechanotransduction and YAP-dependent matrix remodelling is required for the generation and maintenance of cancer-associated fibroblasts.</a> Nat. Cell Biol. 15 (6), 637-646 (2013).</li><li>Horie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histamine+induces+human+lung+fibroblast-mediated+collagen+gel+contraction+via+histamine+H1+receptor.">Histamine induces human lung fibroblast-mediated collagen gel contraction via histamine H1 receptor.</a> Exp. Lung Res. 40 (5), 222-236 (2014).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Cafs kanser hücrelerini çevreleyen ECM&#39;nin bir bileşenini oluşturmaktadır ve tek tümör için bir iskele sağlar, ancak aynı zamanda aktif tümör gelişiminde 7 katılmaz. Biriken deliller CAF-aracılı tümör ilerlemesi 8 kritik rolleri vurgulayarak, nihai prognozu cafs veya ilgili moleküllerin etkisini unravels. Bir önceki çalışmada, akciğer cafs 4 izole etmek sonucudur yöntem kullandı. Bu deneyde, bulaşık yüzeyi üzerine doku kesiti...

Cancer tissue can be perceived as a type of organ, which evolves through close interactions between the cancer and the tumor stromal microenvironment, composed of cancer-associated fibroblasts (CAFs), immune cells, tumor vessels and the extracellular matrix (ECM). CAFs are the major source of soluble factors (cytokines, growth factors and chemokines) that exert mitogenic, pro-migratory and pro-invasive effects on cancer cells. They also stimulate tumor vessel formation and recruit precursor cells, such as bone marrow-derived cells (BMDC). Activated CAFs are involved in the production and remodeling of the ECM, thereby promoting the growth and spread of cancer cells1. CAFs also provide a niche that facilitates tumor cell colonization and metastasis and are capable of conferring stem cell phenotypes onto neighboring cancer cells. Pathological observations suggest that stromal reactions or fibrotic changes in cancer tissues are indicative of a poor prognosis. Recent studies have also demonstrated that tumor stromal features, such as the gene signature, can predict patient prognosis. Furthermore, CAF-derived factors can modulate sensitivity to chemotherapy, highlighting the role of CAFs in determining drug sensitivity and resistance2.
As CAFs play a multifaceted role in the promotion of tumor progression through signaling pathways that mediate interactions between CAFs and different cell types within the tumor microenvironment, they have attracted increasing attention as novel targets for cancer therapies. The heterogeneity of the cell populations within the cancer microenvironment presents an obstacle for targeting CAFs. Several markers for CAFs have been proposed, such as &#945;-smooth muscle actin (&#945;-SMA), fibroblast activation protein (FAP), and fibroblast specific proten-1 (FSP-1: also called S100A4); however, these molecular markers are not specific for distinguishing CAFs from other cells present in non-cancerous tissues3. Therefore, further studies are needed to obtain more knowledge about the specific properties of CAFs. To this end, it is informative to characterize primary cultured CAFs compared with patient-matched normal fibroblasts.
Recently, analyses on patient-derived CAFs have been reported in several cancer types, revealing unique gene expression patterns and cell behaviors compared with fibroblasts derived from non-cancerous tissues. Using isolated CAFs from human lung cancer tissues, we developed a three-dimensional co-culture method, enabling us to evaluate the properties of lung CAFs. In this model, we investigated the effects of the CAFs on lung cancer cell invasion, proliferation and collagen gel contraction, which experimentally recapitulated the tumor-promoting roles of lung CAFs4.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1035">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:267px;">Name</td>
			<td style="width:297px;">Company</td>
			<td style="width:471px;">Catalog Number</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">DMEM</td>
			<td style="width:297px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:471px;">D5796</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">FBS</td>
			<td style="width:297px;">GIBCO</td>
			<td style="width:471px;">10437</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Collagen type IA</td>
			<td style="width:297px;">Nitta gelatin Inc.</td>
			<td style="width:471px;">CELL-1A</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Reconstitution buffer</td>
			<td style="width:297px;">Nitta gelatin Inc.</td>
			<td style="width:471px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Cover slip</td>
			<td style="width:297px;">NUNC</td>
			<td style="width:471px;">174934</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Silicone grease</td>
			<td style="width:297px;">Dow Corning Toray</td>
			<td style="width:471px;">High vacuum grease</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Dispase I</td>
			<td style="width:297px;">WAKO</td>
			<td style="width:471px;">386-02271</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">6-well plate</td>
			<td style="width:297px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:471px;">353046</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Cell strainer (70 &#956;m)</td>
			<td style="width:297px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:471px;">352350</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional co-culture model for tumor-stromal interaction

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal cells. The tumor microenvironment is comprised of a variety of cell types, such as fibroblasts, immune cells, vascular endothelial cells, pericytes and bone-marrow-derived cells, embedded in the extracellular matrix (ECM). Cancer-associated fibroblasts (CAFs) have a pro-tumorigenic role through the secretion of soluble factors, angiogenesis and ECM remodeling. The experimental models for cancer cell survival, proliferation, migration, and invasion have mostly relied on two-dimensional monocellular and monolayer tissue cultures or Boyden chamber assays. However, these experiments do not precisely reflect the physiological or pathological conditions in a diseased organ. To gain a better understanding of tumor stromal or tumor matrix interactions, multicellular and three-dimensional cultures provide more powerful tools for investigating intercellular communication and ECM-dependent modulation of cancer cell behavior. As a platform for this type of study, we present an experimental model in which cancer cells are cultured on collagen gels embedded with primary cultures of CAFs.

Bu ko-kültür yöntemi, tümör mikro taklit, kollajen jeller gömülü kanser hücreleri ve fibroblastlar arasındaki etkileşimleri araştırmak için bir araçtır. Kolajen jel kasılması, kanser hücresi yayılımını tamamen ve morfolojik değişim önceki çalışmada, üç parametre, bu deneysel modelinde değerlendirildi. Kanser hücre çoğalması da Ki67 immün 4 kullanılarak tahmin edilmiştir. Akciğer doku örnekleri bir rezeksiyon akciğer lobu (Şekil 1A) kanserli ve kanser...

Watch this Scientific Journal Video about Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction at JoVE.com

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Here we present a protocol to co-culture in three-dimensions, which is useful for investigating multicellular interactions and extracellular matrix-dependent modulation of cancer cell behavior. In this experimental model, cancer cells are cultured on collagen gels embedded with human cancer-associated fibroblasts.

Tümör-stromal Etkileşim için üç boyutlu Co-kültür Modeli

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

three-dimensional-co-culture-model-for-tumor-stromal-interaction

Research

JoVE Journal

Medicine

17.2K Görüntüleme.  The University of Tokyo. Here we present a protocol to co-culture in three-dimensions, which is useful for investigating multicellular interactions and extracellular matrix-dependent modulation of cancer cell behavior. In this experimental model, cancer cells are cultured on collagen gels embedded with human cancer-associated fibroblasts.