authors gratefully acknowledge funding support from the Molly Towell Perinatal Research Foundation, Canadian Institutes of Health Research (CIHR), and Fonds de Recherche du Qu&#233;bec &#8211; Sant&#233; (FRQS) (to MGF) and CIHR-Quebec Training Network in Perinatal Research (QTNPR) (to LDD).
The authors wish to thank Esther Simard, Marco Bosa, Carl Bernard and Carmen Movila for technical assistance.

Hayvan bakım Hayvan Bakımı Kanada Konseyi ve Hayvan Bakım Université de Montréal Konseyi (protokol # 10 Rech-1560) tarafından onay kuralları izledi. Maddeler ve kullanılan yöntemler ile ilgili detaylı bilgiler, Tablo 1 &#39;de verilmektedir. 1. Anestezi <ol><li> Bir şah damarına bir tek lümen kateter yerleştirin. </li><li> Oturaklı dişi kullanılarak asepromazin (Atravet 10 mg / ml), 2 mg intravenöz yaklaşık 30 dakika da kortizol seviyelerini azaltır prosedürü ile ilişkili stres azaltmak için anestezi verilmeden önce. </li><li> Diazepam yönetme (diazepam 5 mg / mL), 20 mg, ketamin (Ketalar 100 mg / ml) 4-5 mg / kg propofol (propofol 10 mg / ml) 0,5 ila 1 mg / kg iv, genel anestezi sağlamak. </li><li> Wisconsin tipi bıçak ile bir laringoskop kullanılarak trakea içine bir havayolu değişim kateteri takın entübasyon ile yardım etmek (Ekstra uzun 350 mm Bıçak Sol-El). Havayolu değişim kateter kapalı ve trakea içine silikon endotrakeal tüpün (9 ila 12 mm İç Çap) kaydırın. Bu teknik entübasyon işlemini kolaylaştırır. Trakea basıncı kaynaklı ülserasyon önlemek ve koyunların başına tüp sabitleşmek dikkatle endotrakeal tüpün şişirin. </li><li> Anestezi makinesinin solunum devresine endotrakeal tüp bağlayın ve hemen mekanik ventilasyon başlar. 35 ila 45 mmHg normal sınırlar içinde bir P CO 2 korumak için ventilatör ayarlarını yapın. </li><li> (; In 1.16 için [0.9 x 25 mm] [1.1 x 30 mm] 1 ile 22 G 20) ve doğrudan arteriyel kan basıncını izlemek için uyumlu olmayan boru bağlamak aurikular artere bir kateter yerleştirin. </li><li> Elektrokardiyogram, direkt arter kan basıncı, oksijen doygunluğunu (SpO2), kapnografi kaydetmek için bir çok parametre fizyolojik monitörü kullanın (P ET CO 2) ve sıcaklık her 5 dk. Tüm ph aktarınmerkezi fizyolojik veri toplama bilgisayara bir seri kablo aracılığıyla ysiologic verileri. Bir dolaşan su battaniye kullanarak normal vücut ısısını korumak. </li><li> Genel anestezinin ilk bir saat için 10 mL / kg&#39;lık bir dengeli bir poli-iyonik çözelti yönetme ve daha sonra 5 ml / kg / saat azaltır. </li><li> Hemen önce antibiyotik profilaksisi gibi cilt kesi ewe için trimetoprim-sulfadoksin 5 mg / kg IV yönetin. </li><li> Koyun ve fetüsün tüm cerrahi manipülasyonlar standart aseptik teknikler kullanın. </li><li> Bariyer hemşire her zaman koyunların. Bu aynı zamanda cerrahi olmayan personeli kapsar. Bu. Örneğin, Coxiella burnetii için enzootic potansiyelini en aza indirmek her zaman eldiven ve maske (N-95 tipi) kullanın olacak. </li></ol> Cerrahi Usul 2. Genel Bakış <ol><li> Karın kas hasarı en aza indirmek için linea alba yoluyla memeye hemen kranial alt karın duvarından bir 20 cm orta hat kesi olun. <ol><li> Rcranially büyük omentum etract ve rahim boynuzları elle palpe edilir. Fetus ve kendi büyüklüğü sayısını fark boynuz ucu rahim gövdesi her boynuz palpe. Birden fazla fetus varsa, elle baş boyutu ve yörüngeleri arasında genişliği değerlendirerek büyük fetus seçin. </li><li> Sıkıca kısmen batın rahim içinden seçilen fetusun baş tutun. Metzenbaum makas ile büyük eğrilik üzerinde 10 cm&#39;lik histerotomi gerçekleştirin. Başının üzerine hemen bir el sanki steril tuzlu su ile doldurulmuş bir lateks olmayan steril cerrahi eldiven koyun. Alternatif olarak, nemli fetal kafa tutmak için nemlendirilmiş 4x4s kullanın. Karın duvarına rahim sabitleyin. <ol><li> Sağ ve sol göğüs uzuvları exteriorize ve xiphoid sürecine rahim kadar dışarı yavaşça cenini çekin. </li></ol></li><li> Standart bir cut-down tekniği kullanılarak polivinil sağ ve sol brakiyal ven içine kateter ve arterleri yerleştirin. Anoth eklemefetusun sternum onun &#39;ucu fikse Amniyotik boşluğuna er polivinil kateter. <ol><li> Steril kateterleri kullanınız. Biz standart tesiste gaz sterilizasyonu tavsiye ediyoruz. Daha sonra kan örneklemesi veya basınç izleme sağlamak için bir çift vana bir iğne her kateter ve iğne takın. </li></ol></li><li> Manubrium, kılıç şeklinde bir süreç ve elektrokardiyogram izlemek için omuz (EKG) her noktasına, paslanmaz çelik elektrodlar dikin. </li><li> Rahme fetus dönün. Soldan küçük bir kesi yoluyla tüm kateterler ve elektrotlar çıkın. </li><li> Üç katmanlı kapatma kullanarak laparotomi insizyon kapatın. Basit sürekli bir şekilde emilebilir sentetik bir ameliyat dikiş ipliği monofilaman USP 2 karın duvarı dikin. Basit sürekli bir şekilde emilebilir sentetik bir ameliyat dikiş ipliğinin saç örgü USP 0 subkutan alan kapatın. Cilt insizyonu kapatmak için cerrahi paslanmaz çelik zımba kullanın. </li></ol></li><li&gt; cerrahi ayrıntılı açıklaması <ol><li> % 4 klorheksidin glukonat ve 3 dakika boyunca yumuşak bir fırça ile iyice ardından bıçak # 40 Temiz ile her tarafta kanadın kat meme bezinin ve birlikte ventral karın xiphoid süreci tıraş yün çıkarın. <ol><li> Klorheksidin glukonat% 4 karın merkezinden itibaren ve 3 dakika boyunca santrifüj tarzda ilerleyen bir standart, steril bir kese gerçekleştirin. Dezenfektan sabun kaldırmak için karın steril tuzlu dökün. Cerrahi hazırlık son adım için, Klorheksidin glukonat çözeltisi 2% ve izopropil alkol% 70, üç alternatif pasajlar gerçekleştirin. </li></ol></li><li> Anestezi derinliği insizyon öncesi yeterli olduğundan emin olun. Karın kas hasarı en aza indirmek için linea alba yoluyla memeye sadece kafatası umbilikustan standart bir laparotomi kesi yapmak. </li><li> Sol karın duvarı yukarı boyunca karın uzun sünger forseps yerleştirinparacostal bölgede kateter için planlanan çıkış sitesine. <ol><li> Onu bulmak ve uygun siteyi teyit edebiliriz asistan kadar duvara forseps ipuçları itin. Biraz (1 cm) açın forseps çene ve yardımcısı, 2 cm tam kat bıçak kesisi yapalım. </li><li> , Kesiden forseps ipuçları exteriorize tekrar açın ve yavaşça nihayet ventral karın kesiden karın dışına çekilir forseps ile kateterler kavramak. Unutmayın ki, bazı gruplar kateter implantasyonu ve sonra onları exteriorize. Bu intrasurgical fetal EKG izleme mümkün değildir gibi bir sakıncası vardır. </li></ol></li><li> Fetal pozisyon ve numaralarını belirlemek için rahim palpe. Arası işitsel mesafeyi kullanarak büyük fetus belirleyin. Kotiledonlar kaçınarak, başının sırtında üzerinden büyük eğrilik üzerinde rahim duvarına İnsizyon. <ol><li> Bir am elde etmek plasental zarlar yoluyla künt uçlu kanül takınkanama ücretsiz niotic sıvısı örneği. Makas kullanarak plasental membranlar İnsizyon. </li></ol></li><li> Bu kesiden fetusun beyin yarısını exteriorize. Normotermi korumaya yardımcı olmak için fetus başının üzerinde 37 ° C&#39;de steril tuzlu su ile doldurulmuş, steril olmayan bir lateks cerrahi eldiven yerleştirin. <ol><li> Rahim Fetal üst vücut çıkarılması sırasında, asistan amniyotik sıvı kaybını önlemek için Babcock doldu tutun var. Ardından, tekrar Babcock forseps kullanarak, amniyon sıvısı ile karın kirlenmesini önlemek için cilde fetal membranlar ve rahim duvarına tutturun. </li><li> Enstrümante ve rahim içinde kalan parçaları tutmak ya sırasıyla, (37 ° C) nemli ve sıcak steril bezler kapsamına gereken fetal vücudun sadece bölümlerini Açığa. </li></ol></li><li> Brakiyal arterin maruziyeti kolaylaştırmak ve ikili damar hem göğüs bacaklarda kaçırmaya. Antebrachium ve bakımı hem medial boyunca İnsizyonTamamen brakiyal arter ve ven çevresinde teşrih. </li><li> Sağ ve sol brakiyal arter ve standart cut-down tekniği kullanılarak damar sol brakiyal içine polivinil kateterler yerleştirin. <ol><li> Gemi Free 1 cm&#39;nin üzerinde komşu dokudan kateterize edilecek. Örgülü sentetik emilebilir USP 2-0 sütür ile damarın distal kısmını Arter. Geminin proksimal yönü bir bitişik harfleri Preplace ama çözdü tutun. <ol><li> Castroviejo makas kullanarak, çapı yaklaşık% 30 enine gemi kesti. Kısmen proksimal sütür çekerek kan akışını durdurun. Vücuda yakın bir yönde sonda yerleştirin. </li></ol></li><li> 8 cm proksimale veya direnç tespit ve sonra hafifçe geri çekin kadar polivinil kateter kadar yerleştirin. Geçici olarak bir damar kelepçe kullanarak kateterin proksimal yönü sabitleyin. Proksimal ve kateterin distal yönü hem etrafında başka dikiş yerleştirin. Bir asistan sürekli aspirating ve kateterin açıklığı sağlamak için kateter yıkama. </li><li> Sürekli dikiş deseni ile, USP 2-0 örgülü sentetik emilebilir sütür kullanarak fetal cilt kapatın. </li></ol></li><li> Sağ ve sol omuz, manubrium ve xiphoid süreci, fetal EKG izlenmesini kolaylaştırmak için yalıtılmış paslanmaz çelik elektrot sabitleşmek. </li><li> Sternum amniyotik basıncı ve örnekleme kateteri dikin. Bu kateter onun ucunda fenestre edilir. </li><li> USP 2-0 örgülü sentetik emilebilir sütür materyali kullanılarak fetusun sırtında tüm kateterler sabitleyin. </li><li> Geri rahim içine fetusun değiştirilmesi önce hipotansiyon önlemek ve rahim rahatlama sağlamak için yavaş yavaş 15 dakika boyunca Clenbuterol 30 ug IV yönetmek. </li><li> Sürekli desenli USP 4-0 örgülü sentetik emilebilir sütür materyali kullanarak fetal membranlar sütür. Pa içine bir seferde sadece tek bir kateter ya da elektrot birleştirinure sıkı kapanmasını sağlamak. USP 0 örgülü sentetik emilebilir sütür materyali kullanarak rahim kas tabakası kapatmak için Halsted ilkelerine saygı bir çift katmanlı Cushing deseni kullanın. Dikkatle cerrahi knot Bury. </li><li> Onlar sol paracostal kesi çıkmak gibi bir purse-string sütür desen kullanarak, tüm kateterler ve EKG kabloları sabitleyin. </li><li> USP 2 monofilament sentetik emilebilir sütür materyali kullanarak sürekli bir deseni ile linea alba sabitleyin. USP 2-0 sürekli bir deseni ile sentetik emilebilir sütür materyali örgülü kullanarak deri altı dokuları kapatın. Cerrahi zımba ile cilt tabakasını sabitleyin. </li><li> Amniyon boşluğuna amniyotik kateter yoluyla intravenöz tekrar ampisilin 250 mg yönetin. Ilık serum fizyolojik ile kayıp amniyotik sıvı değiştirin. </li><li> Kısırlık korumak için bir yer torbaya tüm batın kateterler ve EKG elektrotları yerleştirin. Tüm kateterler güvenli koyunların bir gövde etrafında bir stockinette yerleştirinKoyun gövdesi d elektrotlar. </li><li> Genel anestezi durdurun ve laringeal refleksler normale döndü bir kez koyunum ekstübe. </li><li> O genel anestezi aşağıdaki istikrarlı bir kez metabolik kafes koyunum dönün. Dişi deney süresince metabolik kafeste bulunacağı. Koyun, standı aşağı yalan ve anne sakinleştirici olmadan olmayan anestezi fetus izlerken libitum reklam yemek gerekir. </li><li> Aşağıdaki üç gün boyunca profilaktik ewe (Trimetoprim sulfadoksin 5 mg / kg) ve fetüsün (amniyotik kateter yoluyla intravenöz tekrar ampisilin 250 mg) antibiyotik yönetmek. </li><li> Koyun ve fetüs hem gaz analizleri kanını kullanarak metabolik durumunu değerlendirir. </li><li> Olası heparinli serum fizyolojik asgari hacmi ile tüm kateterler yıkayın. Dikkat - fetusa izin heparin ve sıvıların günlük dozu aşmayınız. Sıvı fetus aşırı mümkündür. Gömme yavaş yavaş kezantibiyotik profilaksisi sonra satır başına günde ~ 5 ml NaCl. </li></ol></li><li> Veri kayıt ve analiz <ol><li> Ameliyat sırasında, isteğe bağlı olarak maternal ve fetal EKG ve kalp hızı yanısıra anne arteriyel kan basıncı ve hava yolu basıncı (Paw) sürekli olarak (Şekil 1) kaydeder. EKG dışındaki tüm anne veri elde etmek Hayat Penceresi Monitor kullanın. Fetal ve maternal EKG sinyalleri ile birlikte analog-dijital dönüştürücü bu verileri Yem; 1901 öncesi amplifikatör ilk maternal ve fetal EKG geçmektedir. Tutanak üreticinin yazılım tüm verileri görüntülemek ve. </li><li> (Hemen ilk arteriyel kateter taktıktan sonra) ve rahim kapattıktan sonra fetal cerrahi başlayacak arteriyel kan gazı analizi, laktat, glukoz için koyun ve fetus aynı anda 1 ml arteriyel örneği alın ve (plazmada) aşırı belirlenmesini temel . </li><li> Ameliyat sonrası iyileşme sırasında, IL-6 ve TNF-α Inflamm ölçmek için 3 ml fetal kan örneği almakatory profilleri. Santrifüj 4 ° C &#39;de, plazma (4 dakika, 4000 x g), süzün ve daha sonra ELISA testleri için -80 ° C&#39; de plazma saklayın. Not: bildirilen temsili sonuçlar amacıyla, altı gün sonra, hayvanlar 20 cerrahi mL sodyum pentobarbital intravenöz enjeksiyonu ile kurban edilmiştir. Fetal büyüme beden, beyin, karaciğer ve anne ağırlıkları ile değerlendirildi. Deney süresinin uzunluğu besbelli belirli bir araştırma sorusu için seçilen tasarıma bağlı olarak değişir ve ~ 6 hafta ulaşabilirsiniz. </li></ol></li><li> Sitokin analizleri (opsiyonel adım) <ol><li> Bir koyun özgü sandviç ELISA kullanılarak plazma sitokin konsantrasyonları (IL-6, TNF-α) belirler. Bir konsantrasyonda ön-kaplama fare anti-koyun monoklonal antikorları (yakalama antikoru, IL-6) ya da fare anti-sığır monoklonal antikor (TNF-α) O / N 4 ° C&#39;de ELISA levhası üzerine 4 ug / ml, 3 kez sonra Yıkama tamponu (PBS içerisinde% 0.05 Tween 20, PBST) ile yıkayın. </li><li>PBST içinde% 1 BSA ile 1 saat boyunca levhalar bloke eder. Yıkama tamponu ile 3 kez plakaları yıkayın. </li><li> Bir seri seyreltileri, standart 7 31,25 pg / ml standart 1 2000 ng / ml arasında değişir hazırlamak ELISA standart olarak rekombinant koyun proteinleri (IL-6, TNF-α) kullanın. </li><li> Yük 50 seri seyreltilmiş Protein standartlarının ve oyuk başına örneklerin ul, oda sıcaklığında 2 saat süreyle inkübe plakaları 3 kez yıkayın. Nüsha olarak tüm standartları ve örnekleri çalıştırın. </li><li> 1 bir seyreltmede tavşan anti-koyun poliklonal antikorlarının 50 ul (tespit antikoru, IL-6) ya da tavşan anti-sığır poliklonal antikoru (TNF-α) uygulayın: kuyularda 250 ve oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edilir. Yıkama tamponu ile 5 kez yıkayın plakaları. </li><li> 30 dakika boyunca IgG-HRP ile konjüge edilmiş keçi anti-tavşan (5000 sulandırma 1) 50 ul ekle. </li><li> Oyuk başına TMB substrat çözeltisi 50 ul kuluçkalayın. </li><li> 2 N sülfürik asit 25 ul istenilen zamanda Renk geliştirme reaksiyonunu durdurun. </li><li> Pl OkuBir 570 nm dalga boyu düzeltmesi ile 450 nm&#39;de ELISA plaka okuyucusu üzerinde Ateş. Not: deneylerimizde, IL-6, ELISA hassasiyeti 16 pg / ml arasında, ve duyarlılığı TNF-a ELISA, sırasıyla 13.9 pg / ml idi. Tüm deneyler için, varyans içi deneyi ve inter-analiz katsayıları sırasıyla &lt;5 ve% &lt;% 10 idi. </li></ol></li><li> İstatistiksel analizler Not: Tam istatistiksel yöntemler araştırma sorusu bağlıdır. Burada Tablo 2&#39;de kan gazları herhangi bir anlamlı farklılık test etmek için kullanılan yöntem sunulmaktadır. <ol><li> Uygun şekilde çoklu karşılaştırmalar için ayarlı parametrik veya non-parametrik testlerden ardından Kolmogorov-Smirnov testi kullanılarak normal veri dağılımı, test edin. </li><li> Kullanım ilgili pO 2 ve O 2 Sat değerlerini kendiliğinden hipoksik olduğu kohort fetusların belirlemek ve tespit etmek küme analizi K-ortalamaları (pO 2 &lt;20 mmHg düşünün veya beyaz peynir olarak O 2 Sat &lt;% 55l hipoksi). 44-48 </li><li> Analizler için SPSS gibi istatistik yazılımı kullanın. </li><li> Anlamlı kabul p &lt;0.05 istatistiksel farklılıklar ortalama ± SD olarak mevcut veriler. </li></ol></li></ol>

No disclosures have been made.

Kronik aletli olmayan anestezi fetal koyun: anestezi ve cerrahi girişimler, fetal fizyolojisi ve patofizyolojisi çalışmak için bir hayvan modeli kurulması için gerekli olduğunu sunulmuştur. Protokolü içinde dört kritik adımlar vurgulanmalıdır. Birincisi, anne kanadını yoluyla kateterler ve elektrotlar geçen: Bu herhangi bir iç organ yaralanmaları önlemek için bir defada yapılır önemlidir. İkincisi, fetüsü exteriorizing önce uterotomy işletim sitesini güvence: B...

Hayvan modellerinde çeşitli laboratuar kemirgenler, insan olmayan primatlar ve yerli geviş getirenler da dahil olmak üzere normal ve tehlikeye gebeliklerin hem de çalışma için mevcuttur. 1,2,3,4,5 Kronik olarak gebe koyunun 50 yıl olarak için yaygın olarak kullanılmaktadır lipopolisakkaritler gibi patofizyolojik uyaranlar (LPS) insan fetal gelişim ve yanıtları bir modeldir. 6-10 LPS maruziyeti aşağıdaki lezyonlar nedeniyle her iki türün de benzer bir olgunlaşma profiline olan periventriküler lökomalazi ile erken doğan bebeklerde görülen tam olarak ne taklit. 11, 12 Diğer gebelik komplikasyonları ayrıca doğum öncesi glukokortikoidler akciğer gelişimini 13-15 ve fetus 16,17 üzerinde intrauterin büyüme geriliği (IUGR) etkisinin anlaşılması teşvik olduğunu keşif gibi büyük detaylı incelenmiştir. Fetal koyun modelinde geniş kullanımı uniq nedeniyletekrarlayan kan örneklemesi, biyoelektrik aktivitesinin kaydedilmesi, elektrik stimülasyonu ve in vivo beyin görüntüleme uygulaması sağlayan cerrahi yerleştirme ve kateter ve elektrotların bakımı olmayan anestezi fetal koyun vi amenability. daha az sıklıkla kullanılan rağmen 18 Telemetri de mümkündür henüz daha sofistike nedeniyle ilk ve bakım maliyeti yanı sıra kurmak. 19 Enstrümantasyon birçok varyasyonu ilgi önlemlere bağlı olarak mümkün olduğu Dahası, fetal koyun modeli çok yönlüdür. Örneğin, hafta gün içinde kaydetmek mümkündür böyle fetal solunum hareketlerinin, elektriksel beyin aktivitesi, kardiyovasküler tepkiler, elektrokardiyogram, organların bir dizi bölgesel kan akımı akış sondaları veya mikroküreler, vb Teşekkür kullanarak gerçek zamanlı olarak çok değişkenli sinyaller Bu çok yönlülük, çalışmaların geniş bir yelpazede Cardi geliştirilmesi dahil olmak üzere yapılmıştırovascular sistemi 20,21, hipotalamus-hipofiz-adrenal (HPA) eksen 22, özellikle de 24 yılında beyin gelişimi 23 ve uyku durumları geliştirme, hipoksi etkisi / asfiksi 25, terapötik hipotermi 26, inflamasyon 6-11, hem 27 kombinasyonu, glukokortikoidler 28,29 anti-depresanlar 30, bronko-pulmoner displazi (BPD) 31,32, önceki ve doğum sırasında adı ancak fetal programlama 33,34,35,36,37,38,39 veya yeni fetal izleme yöntemlerinin geliştirilmesi Soruşturmanın birkaç alanları. 40,41,42,43 Sunulan yöntemin genel amacı bu çok yönlü modelin temel uygulanmasını göstermektir. Bu hücresel bütünleştirici, organ ve moleküler düzeylerde fetal fizyolojisi ve patofizyolojisi okuyan akut ve kronik deneysel protokollerin geniş bir yelpazede kurulması sağlar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ACE Light source</td>
			<td>Schott-Fostec</td>
			<td>A20500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060 - 11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angled dissecting scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15006 - 09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003 - 12</td>
			<td>alternating dissecting tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved scalpel blades #12</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10012 - 00</td>
			<td>alternating dissecting tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>16044 - 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S &#38; T suture tying forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>00272 - 13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont SS forceps - angled</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11203 - 25&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braided silk suture size 6-0</td>
			<td>Teleflex Medical</td>
			<td>07 - 30&#160; - 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Tape</td>
			<td>transpore</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride 100 mg/ml</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409 - 2051 - 05</td>
			<td>Final Does is 80 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tranqui Ved Injection (xylazine 100 mg/ml)</td>
			<td>Vecdo</td>
			<td>NDC 50989 - 234 - 11</td>
			<td>Final Does is 10 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reactive orange 14</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>R - 8254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringers Solution Components</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Solution is gas equilibrated with 95% O2 and 5% Co2, final pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Final Concentration: 118 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P217 - 3</td>
			<td>Final Concentration: 4.7 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C79 - 500</td>
			<td>Final Concentration: 2.5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P -285</td>
			<td>Final Concentration: 1.2 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>Jan-00</td>
			<td>Final Concentration: 0.57 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid (HEPES)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP 310 - 500</td>
			<td>Final Concentration: 5.95 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma - Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td>Final Concentration: 5.5 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LifeWindow</td>
			<td>Digicare Biomedical Technology</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CED bioamplifier and ADC units</td>
			<td>Cambridge Electronic Design Limited, 
			Unit 4, Science Park, 
			Milton Road, 
			Cambridge CB4 0FE 
			ENGLAND.</td>
			<td>Bioamp: 1902; ADC: micro1401; Data acquisition software: Spike 2, V7.13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurolog analog signal bioamplifier</td>
			<td>Digitimer Ltd 
			37 Hydeway 
			Welwyn Garden City 
			Hertfordshire, AL7 3BE, England</td>
			<td>NL108A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABL800Flex</td>
			<td>Radiometer Canada; 200 Aberdeen Dr, London, ON N5V 4N2</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf 5804R</td>
			<td>Eppendorf Canada; 2810 Argentia Road, #2 
			Mississauga, Ontario, L5N 8L2</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arrow Jugular Catheterization Set</td>
			<td>Arrow International, Inc., 2400 Bernville Road, Reading, PA 19605 USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atravet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diazepam</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>5mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Ketalar</td>
			<td></td>
			<td>100 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propofol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SurgiVeT</td>
			<td>Endotracheal Tubes; Smiths Medical ASD, Inc. St. Paul, MN 55112, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cook Airway Exchange Catheter with RAPI-FIT Adapters</td>
			<td>Cook Critical Care 750, Bloomington IN 47402-0489 USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispomed Ventilator</td>
			<td>Dispomed Ltd., 745 Nazaire-Laurin, Joliette, Quebec J6E 0L6</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insyte-W</td>
			<td>Becton Dickinson, Infusion Therapy Systems Inc., 9450 S State St, Sandy Utah 84070 USA</td>
			<td></td>
			<td>22 to 20 G; 1 in [0.9 x 25 mm] to 1.16 in [1.1 x 30 mm]</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Edwards Lifesciences Ref: PX272 Pressure monitoring kit with TruWave Disposable Pressure</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LifeWindow LW6000</td>
			<td>Digicare Biomedical Technology 107 Commerce Road, Boynton Beach, FL 33426-9365 USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymar</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Babcock</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyvinyl catheters</td>
			<td>SCI (Scientific Commodities Inc.)</td>
			<td></td>
			<td>2 meters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Vicryl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrocardiogram (ECG)</td>
			<td>LIFYY, Metrofunk Kabel-Union, Berlin, Germany</td>
			<td></td>
			<td>four copper electrodes in single sheath, 2 meters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-O Vicryl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-0 Vicryl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II USP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimethoprim sulfadoxine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopcock</td>
			<td>Argon Medical, Cat&#160;041220001A</td>
			<td></td>
			<td>Double 4-way Stopcock with male luer lock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>Tyco Healthcare 8881202389</td>
			<td></td>
			<td>Monoject aluminum hub blunt needles, 22Gx, 0.7mmx 38.1mm: for fetal arterial and venous catheters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>Tyco Healthcare 8881202322</td>
			<td></td>
			<td>Monoject aluminum hub blunt needles, 16Gx, 1.6mmx38.1mm: for amniotic catheters</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

instrumentation of near-term fetal sheep for multivariate chronic non-anesthetized recordings

The chronically instrumented pregnant sheep has been used as a model of human fetal development and responses to pathophysiologic stimuli such as endotoxins, bacteria, umbilical cord occlusions, hypoxia and various pharmacological treatments. The life-saving clinical practices of glucocorticoid treatment in fetuses at risk of premature birth and the therapeutic hypothermia have been developed in this model. This is due to the unique amenability of the non-anesthetized fetal sheep to the surgical placement and maintenance of catheters and electrodes, allowing repetitive blood sampling, substance injection, recording of bioelectrical activity, application of electric stimulation and in vivo organ imaging. Here we describe the surgical instrumentation procedure required to achieve a stable chronically instrumented non-anesthetized fetal sheep model including characterization of the post-operative recovery from blood gas, metabolic and inflammation standpoints.

38 gebe zaman tarihli koyunların gebelik 128 ± 2 günde Enstrümante edildi (DGA ~ 0.88 gebelik, terim 145 dGA) arteriyel, venöz ve amniyotik kateter ve elektrokardiyogram (EKG), steril genel anestezi altında tekniği (ewe hem de fetus elektrotlar ile ). Ikiz gebelik durumunda fetus büyük palpe ve dönemlerarası çapı tahmin dayalı seçildi; alternatif Araçlı edilecek fetus herhangi bir potansiyel önyargı önlemek için rastgele seçilmiş olabilir veya her iki fetusun instrumented olabilir. Prosedürün to...

Watch this Scientific Journal Video about Instrumentation of Near-term Fetal Sheep for Multivariate Chronic Non-anesthetized Recordings at JoVE.com

Instrumentation of Near-term Fetal Sheep for Multivariate Chronic Non-anesthetized Recordings

Cerrahi yerleştirme ve kateter ve elektrotlar, tekrarlayan kan örneklemesi, madde enjeksiyonu, biyoelektrik aktivitesinin kaydedilmesi bakım ve in vivo görüntüleme izni nedeniyle kronik instrumented olmayan anestezi fetal koyun modeli, sağlık ve hastalık insan fetal gelişimini incelemek için kullanılır. Biz bu modeli kurmak için gerekli prosedürler açıklanmaktadır.

Çok değişkenli Kronik Non-anestezi Kayıtlar için Yakın dönem Fetal Koyun enstrümantasyon

The chronically instrumented pregnant sheep has been used as a model of human fetal development and responses to pathophysiologic stimuli such as ...

instrumentation-near-term-fetal-sheep-for-multivariate-chronic-non

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

9.4K Görüntüleme.  CHUV, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC.  Cerrahi yerleştirme ve kateter ve elektrotlar, tekrarlayan kan örneklemesi, madde enjeksiyonu, biyoelektrik aktivitesinin kaydedilmesi bakım ve in vivo görüntüleme izni nedeniyle kronik instrumented olmayan anestezi fetal koyun modeli, sağlık ve hastalık insan fetal gelişimini incelemek için kullanılır. Biz bu modeli kurmak için gerekli prosedürler açıklanmaktadır. 

Video: Instrumentation of Near-term Fetal Sheep for Multivariate Chronic Non-anesthetized Recordings

Preparation and Culture of Myogenic Precursor Cells/Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult and Aged Humans

Skeletal muscle homeostasis depends on muscle growth (hypertrophy), atrophy and regeneration. During ageing and in several diseases, muscle wasting occurs. Loss of muscle mass and function is associated with muscle fiber type atrophy, fiber type switching, defective muscle regeneration associated with dysfunction of satellite cells, muscle stem cells, and other pathophysiological processes. These changes are associated with changes in intracellular as well as local and systemic niches. In addition to most commonly used rodent models of muscle ageing, there is a need to study muscle homeostasis and wasting using human models, which due to ethical implications, consist predominantly of in vitro cultures. Despite the wide use of human Myogenic Progenitor Cells (MPCs) and primary myoblasts in myogenesis, there is limited data on using human primary myoblast and myotube cultures to study molecular mechanisms regulating different aspects of age-associated muscle wasting, aiding in the validation of mechanisms of ageing proposed in rodent muscle. The use of human MPCs, primary myoblasts and myotubes isolated from adult and aged people, provides a physiologically relevant model of molecular mechanisms of processes associated with muscle growth, atrophy and regeneration. Here we describe in detail a robust, inexpensive, reproducible and efficient protocol for the isolation and maintenance of human MPCs&#160;and their progeny&#160;&#8212; myoblasts and myotubes from human muscle samples using enzymatic digestion. Furthermore, we have determined the passage number at which primary myoblasts from adult and aged people undergo senescence in an in vitro culture. Finally, we show the ability to transfect these myoblasts and the ability to characterize their proliferative and differentiation capacity and propose their suitability for performing functional studies of molecular mechanisms of myogenesis and muscle wasting in vitro.

This protocol describes a robust, reproducible and simple method of isolation and culture of myoblast progenitor cells from the skeletal muscle of adult and aged people. The muscles used here include foot and leg muscles. This approach enables the isolation of an enriched population of primary myoblasts for functional studies.

Yetişkin ve Yaşlı İnsanların İskelet Kası miyojenik Öncü Hücreler / İlköğretim miyoblastların hazırlanması ve Kültür

Skeletal muscle homeostasis depends on muscle growth (hypertrophy), atrophy and regeneration. During ageing and in several diseases, muscle wasting ...

Gelişim Biyolojisi

Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly gained attention because they do not pose any ethical or moral concerns. Current methods to isolate MSCs from UC yield low amounts of cells with variable proliferation potentials. Since UC is an anatomically-complex organ, differences in MSC properties may be due to the differences in the anatomical regions of their isolation. In this study, we first dissected the cord/placenta samples into three discrete anatomical regions: UC, cord-placenta junction (CPJ), and fetal placenta (FP). Second, two distinct zones, cord lining (CL) and Wharton&#39;s jelly (WJ), were separated. The explant culture technique was then used to isolate cells from the four sources. The time required for the primary culture of cells from the explants varied depending on the source of the tissue. Outgrowth of the cells occurred within 3 - 4 days of the CPJ explants, whereas growth was observed after 7 - 10 days and 11 - 14 days from CL/WJ and FP explants, respectively. The isolated cells were adherent to plastic and displayed fibroblastoid morphology and surface markers, such as CD29, CD44, CD73, CD90, and CD105, similarly to bone marrow (BM)-derived MSCs. However, the colony-forming efficiency of the cells varied, with CPJ-MSCs and WJ-MSCs showing higher efficiency than BM-MSCs. MSCs from all four sources differentiated into adipogenic, chondrogenic, and osteogenic lineages, indicating that they were multipotent. CPJ-MSCs differentiated more efficiently in comparison to other MSC sources. These results suggest that the CPJ is the most potent anatomical region and yields a higher number of cells, with greater proliferation and self-renewal capacities in vitro. In conclusion, the comparative analysis of the MSCs from the four sources indicated that CPJ is a more promising source of MSCs for cell therapy, regenerative medicine, and tissue engineering.

Here, we present a protocol for the dissection of human umbilical cord (UC) and fetal placenta sample into cord lining (CL), Wharton&#39;s jelly (WJ), cord-placenta junction (CPJ), and fetal placenta (FP) for the isolation and characterization of mesenchymal stromal cells (MSCs) using the explant culture technique.

İnsan göbek bağı ve fetal plasentadan Mezenkimal Stromal Hücre İzolasyonu ve Vasıflandırılması

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings of Isolated Primary Epithelial Cells from the Epididymis

The epididymis is an essential organ for sperm maturation and reproductive health. The epididymal epithelium consists of intricately connected cell types that are distinct not only in molecular and morphological features but also in physiological properties. These differences reflect their diverse functions, which together establish the necessary microenvironment for the post-testicular sperm development in the epididymal lumen. The understanding of the biophysical properties of the epididymal epithelial cells is critical for revealing their functions in sperm and reproductive health, under both physiological and pathophysiological conditions. While their functional properties have yet to be fully elucidated, the epididymal epithelial cells can be studied using the patch-clamp technique, a tool for measuring the cellular events and the membrane properties of single cells. Here, we describe the methods of cell isolation and whole-cell patch-clamp recording to measure the electrical properties of primary dissociated epithelial cells from the rat cauda epididymides.

We present a protocol that combines cell isolation and whole-cell patch-clamp recording to measure the electrical properties of the primary dissociated epithelial cells from the rat cauda epididymides. This protocol allows for investigation of the functional properties of primary epididymal epithelial cells to further elucidate the physiological role of the epididymis.

Epididimden İzole Edilmiş Primer Epitelyal Hücrelerin Tüm Hücreli Yama-Kelepçesi Kayıtları

The epididymis is an essential organ for sperm maturation and reproductive health. The epididymal epithelium consists of intricately connected cell types ...

Zika Virus Infection of Cultured Human Fetal Brain Neural Stem Cells for Immunocytochemical Analysis

Human fetal brain neural stem cells are a unique non-genetically modified model system to study the impact of various stimuli on human developmental neurobiology. Rather than use an animal model or genetically modified induced pluripotent cells, human neural stem cells provide an effective in vitro system to examine the effects of treatments, screen drugs, or examine individual differences. Here, we provide the detailed protocols for methods used to expand human fetal brain neural stem cells in culture with serum-free media, to differentiate them into various neuronal subtypes and astrocytes via different priming procedures, and to freeze and recover these cells. Furthermore, we describe a procedure of using human fetal brain neural stem cells to study Zika virus infection.

This article details the methods that are used to expand human fetal brain neural stem cells in culture, as well as how to differentiate them into various neuronal subtypes and astrocytes, with an emphasis on the use of neural stem cells to study Zika virus infection.

Kültürlü insan Fetal beyin sinir kök hücreleri Zika virüs enfeksiyonu Immunocytochemical analiz için

Human fetal brain neural stem cells are a unique non-genetically modified model system to study the impact of various stimuli on human developmental ...

Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model

In utero transplantation (IUT) is a unique and versatile mode of therapy that can be used to introduce stem cells, viral vectors, or any other substances early in the gestation. The rationale behind IUT for therapeutic purposes is based on the small size of the fetus, the fetal immunologic immaturity, the accessibility and proliferative nature of the fetal stem or progenitor cells, and the potential to treat a disease or the onset of symptoms prior to birth. Taking advantage of these normal developmental properties of the fetus, the delivery of hematopoietic stem cells (HSC) via an IUT has the potential to treat congenital hematologic disorders such as sickle cell disease, without the required myeloablative or immunosuppressive conditioning required for postnatal HSC transplants. Similarly, the accessibility of progenitor cells in multiple organs during development potentially allows for a more efficient targeting of stem/progenitor cells following an IUT of viral vectors for gene therapy or genome editing. Additionally, IUT can be used to study normal developmental processes including, but not limited to, the development of immunologic tolerance. The murine model provides a valuable and affordable means to understanding the potential and limitations of IUT prior to pre-clinical large animal studies and an eventual clinical application. Here, we describe a protocol for performing an IUT in the murine fetus through intravenous and intra-amniotic routes. This protocol has been used successfully to elucidate the necessary conditions and mechanisms behind in utero hematopoietic stem cell transplantation, tolerance induction, and in utero gene therapy.

Intravenous and Intra-amniotic In Utero Transplantation in the Murine Model

We describe a protocol for performing an in utero transplantation (IUT) through intravenous and intra-amniotic routes of injection in the murine model. This protocol can be used to introduce cells, viral vectors, and other substances into the unique immune-tolerant fetal environment.

İntravenöz ve içi amniyotik rahim içinde nakli fare modeli

In utero transplantation (IUT) is a unique and versatile mode of therapy that can be used to introduce stem cells, viral vectors, or any other substances ...

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and painless, and the application is easy, fast, and can be done anywhere, even with mobile devices. During pregnancy, ultrasound imaging is standardly used to closely monitor fetal development. The technique is important to assess intrauterine growth restriction (IUGR), a pregnancy complication with short- and long-term health consequences for both the mother and fetus. Understanding the process of IUGR is indispensable for developing effective therapeutic strategies. 
The ultrasound system used in this manuscript is an ultrasound device produced for the analysis of small animals and can be used in various research fields, including pregnancy research. Here we describe the usage of the system for in vivo analysis of fetuses from natural killer (NK) cell/mast cell (MC)-deficient mothers that give birth to growth-restricted pups. The protocol includes preparation of the system, handling of the mice before and during measurements, and the usage of the B-mode, color doppler mode, and pulse-wave doppler mode. Fetal size, placental size, and blood supply to the fetus were analyzed. We found reduced implantation sizes and smaller placentas in NK/MC-deficient mice from mid-gestation onwards. In addition, MC/NK-deficiency was associated with absent and reversed end diastolic flow in the fetal Arteria umbilicalis(UmA) and an elevated resistance index. The methods described in the protocol can easily be used for related and non-related research topics.

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Here we describe the technique of high frequency ultrasound for in vivo analysis of fetuses in mice. This method allows the follow-up of fetuses and the analysis of placental parameters as well as maternal and fetal blood flow throughout pregnancy.

Yüksek frekans ultrason Fetal ve plasental geliştirme Vivo içinde analizi için

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and ...

Culturing and Measuring Fetal and Newborn Murine Long Bones

Long bones are complex and dynamic structures, which arise from endochondral ossification via a cartilage intermediate. The limited access to healthy human bones makes particularly valuable the use of mammalian models, such as mouse and rat, to look into different aspects of bone growth and homeostasis. Additionally, the development of sophisticated genetic tools in mice allows more complex studies of long bone growth and asks for an expansion of techniques used to study bone growth. Here, we present a detailed protocol for ex vivo murine bone culture, which allows the study of bone and cartilage in a tightly controlled manner while recapitulating most of the in vivo process. The method described allows the culture of a range of bones, including tibia, femur, and metatarsal bones, but we have focused mainly on tibial culture here. Moreover, it can be used in combination with other techniques, such as time-lapse live imaging or drug treatment.

Here, we present a method for ex vivo culture of long murine bones at both fetal and newborn stages, suitable for analyzing bone and cartilage development and homeostasis in controlled conditions while recapitulating the in vivo process.

Kültür ve ölçme fetal ve yenidoğan Murine uzun kemikler

Long bones are complex and dynamic structures, which arise from endochondral ossification via a cartilage intermediate. The limited access to healthy ...

Recapitulating Suckling-to-Weaning Transition In Vitro using Fetal Intestinal Organoids

At the end of the suckling period, many mammalian species undergo major changes in the intestinal epithelium that are associated with the capability to digest solid food. This process is termed suckling-to-weaning transition and results in the replacement of neonatal epithelium with adult epithelium which goes hand in hand with metabolic and morphological adjustments. These complex developmental changes are the result of a genetic program that is intrinsic to the intestinal epithelial cells but can, to some extent, be modulated by extrinsic factors. Prolonged culture of mouse primary intestinal epithelial cells from late fetal period, recapitulates suckling-to-weaning transition in vitro. Here, we describe a detailed protocol for mouse fetal intestinal organoid culture best suited to model this process in vitro. We describe several useful assays designed to monitor the change of intestinal functions associated with suckling-to-weaning transition over time. Additionally, we include an example of an extrinsic factor that is capable to affect suckling-to-weaning transition in vivo, as a representation of modulating the timing of suckling-to-weaning transition in vitro. This in vitro approach can be used to study molecular mechanisms of the suckling-to-weaning transition as well as modulators of this process. Importantly, with respect to animal ethics in research, replacing in vivo models by this in vitro model contributes to refinement of animal experiments and possibly to a reduction in the use of animals to study gut maturation processes.

This protocol describes how to mimic suckling-to-weaning transition in vitro using mouse late fetal intestinal organoids cultured for 30 days.

Fetal Intestinal Organoidler Kullanılarak Tüp Bebek Teyidi--Weaning Geçiş

At the end of the suckling period, many mammalian species undergo major changes in the intestinal epithelium that are associated with the capability to ...

Transuterine Fetal Tracheal Occlusion Model in Mice

Fetal tracheal occlusion (TO), an established treatment modality, promotes fetal lung growth and survival in severe congenital diaphragmatic hernia (CDH). Following TO, retention of the secreted epithelial fluid increases luminal pressure and induces lung growth. Various animal models have been defined to understand the pathophysiology of CDH and TO. All have their own advantages and disadvantages such as the difficulty of the technique, the size of the animal, cost, high mortality rates, and the availability of genetic tools. Herein, a novel transuterine model of murine fetal TO is described. Pregnant mice were anesthetized, and the uterus exposed via a midline laparotomy. The trachea of selected fetuses were ligated with a single transuterine suture placed behind the trachea, one carotid artery, and one jugular vein. The dam was closed and allowed to recover. Fetuses were collected just before parturition. Lung to body weight ratio in TO fetuses was higher than that in control fetuses. This model provides researchers with a new tool to study the impact of both TO and increased luminal pressure on lung development.

Various animal models of congenital diaphragmatic hernia and fetal tracheal occlusion present advantages and disadvantages regarding ethical issues, cost, surgical difficulty, size, survival rates, and availability of genetic tools. This model provides a new tool to study the impact of both tracheal occlusion and increased luminal pressure on lung development.

Farelerde Transuterin Fetal Trakeal Oklüzyon Modeli

Fetal tracheal occlusion (TO), an established treatment modality, promotes fetal lung growth and survival in severe congenital diaphragmatic hernia (CDH). ...

Vitrification of In Vitro Matured Oocytes Collected from Adult and Prepubertal Ovaries in Sheep

In livestock, in vitro embryo production systems can be developed and sustained thanks to the large number of ovaries and oocytes that can be easily obtained from a slaughterhouse. Adult ovaries always bear several antral follicles, while in pre-pubertal donors the maximal numbers of oocytes are available at 4 weeks of age, when ovaries bear peak numbers of antral follicles. Thus, 4 weeks old lambs are considered good donors, even if the developmental competence of prepubertal oocytes is lower compared to their adult counterpart. 
Basic research and commercial applications would be boosted by the possibility of successfully cryopreserving vitrified oocytes obtained from both adult and prepubertal donors. The vitrification of oocyte collected from prepubertal donors would also allow shortening the generation interval and thus increasing the genetic gain in breeding programs. However, the loss of developmental potential after cryopreservation makes mammalian oocytes probably one of the most difficult cell types to cryopreserve. Among the available cryopreservation techniques, vitrification is widely applied to animal and human oocytes. Despite recent advancements in the technique, exposures to high concentrations of cryoprotective agents as well as chilling injury and osmotic stress still induce several structural and molecular alterations and reduce the developmental potential of mammalian oocytes. Here, we describe a protocol for the vitrification of sheep oocytes collected from juvenile and adult donors and matured in vitro prior to cryopreservation. The protocol includes all the procedures from oocyte in vitro maturation to vitrification, warming and post-warming incubation period. Oocytes vitrified at the MII stage can indeed be fertilized following warming, but they need extra time prior to fertilization to restore damage due to cryopreservation procedures and to increase their developmental potential. Thus, post-warming culture conditions and timing are crucial steps for the restoration of oocyte developmental potential, especially when oocyte are collected from juvenile donors.

The protocol aims at providing a standard method for the vitrification of adult and juvenile sheep oocytes. It includes all the steps from the preparation of the in vitro maturation media to the post-warming culture. Oocytes are vitrified at the MII stage using Cryotop to ensure the minimum essential volume.

Koyunlarda Erişkin ve Prepubertal Yumurtalıklardan Toplanan In Vitro Olgunlaşmış Oositlerin Vitrifikasyonu

In livestock, in vitro embryo production systems can be developed and sustained thanks to the large number of ovaries and oocytes that can be easily ...