Daha önce, kimyasalların arteriyel kontraktilite üzerindeki etkisini incelemek için başlıca yöntem, organ banyolarında ex vivo tel miyografisiydi. Bu tekniğin önemi, kimyasalların ve gen manipülasyonunun bir damarın segmenti üzerindeki etkilerinin in vivo olarak incelenebilmesidir. Bu tekniğin en büyük avantajı, kronik maruziyet ve ilaçların arteriyel kontraktilite ve kan akımı üzerindeki etkisinin uzun süreli değerlendirilmesinin yapılabilmesidir.
Organ banyolarında izole edilmiş damarlarda bu mümkün değildir. Fetüsü dışsallaştırmaya başlamak için, koyunda yeterli anestezi derinliğinde olduğundan emin olun. Göbek deliğinden memenin kraniyal kısmına kadar lineer alba üzerinde 20 numara neşter bıçağı kullanarak 10 santimetrelik standart bir laparotomi insizyonu gerçekleştirin.
Daha sonra cilt kesisinin altındaki vücut duvarının orta hattından küçük bir kesi yapın ve Metzenbaum makası kullanarak karın boşluğunu açın. Fetüsü içeren uterusu karın duvarından dışarı çıkarırken, maternal karnı ile uterus arasına steril cerrahi havlular yerleştirin. Daha sonra fetal pozisyonu ve kaudal girişleri belirlemek için uterusu palpe edin.
Bir koter kullanarak, görünür kan damarlarından ve plasentamlardan kaçınarak, başın dorsumunda büyük bir eğrilik ile uterus duvarından 10 santimetrelik bir kesi yapın. Daha sonra, dört Babcock kelepçesi ile uterus ve plasenta zarlarını sabitleyin ve fetal başı görünür hale getirmek için Babcock kelepçelerini dört zıt köşeden çekin. Bu kesiden fetüsün kafatası yarısını dıştan çıkarın ve solunumun başlamasını önlemek için başınızı 37 santigrat derece sıcaklıkta ılık steril tuzlu su ile doldurulmuş steril lateks olmayan bir eldivenle örtün.
Karotis arter perivasküler kateterinin enstrümantasyonunu gerçekleştirmek için, fetüsün boynu açıktayken, orta bölgede boynun bir tarafında sternokleidomastoid veya SCM kasının ön sınırı boyunca üç ila 3.5 santimetre eğik bir cilt kesisi yapın. Sonra fasyayı sivrisinek forseps ile ayırın. Platizmayı bölün ve SCM kasının medial sınırı boyunca tendonundan üst ve aşağı omohyoid kas seviyesine kadar diseksiyon yapın.
Cildi Babcock kelepçeleriyle geri çekin. Karotis arteri çevreleyen dokudan ve karotis tabakasından kurtarmak için künt bir diseksiyon yapın. Ardından, steril paketten üç milimetrelik bir akış probu alın, destek plakasını sökün ve L braketini ortaya çıkarmak için kaydırarak açın.
Forseps kullanarak, destek plakasını yavaşça kapalı bir konuma kaydırarak akış probu braketini kapatın. Ardından, akış probunun destek vidasını sıkarak akış probu braketini sabitleyin. 3.0 emilemeyen ipek sütür ile akış probunun proksimalindeki karotis arterin yakınına önceden yıkanmış bir perivasküler kateter yerleştirin.
Perivasküler sistemin proksimal ve distal uzunluklarını ve akış probunu yakındaki interstisyel dokuya sabitleyin. Sürekli bir dikiş kullanarak, insizyon bölgesini ve fetal cildi 3.0 emilmeyen bir sütür ile kapatın. Sütürü kateterin etrafına üç kez sararak kateterleri cilde sabitleyin.
Eldiveni çıkardıktan sonra, fetal kafayı uterusa geri yerleştirin. Fetal uzuv kateterizasyonu yapmak için, fetüsün arka bacağını dıştan çıkarın, bacağını tutun ve iç uyluk bölgesini görselleştirmek için yana doğru çevirin. Alanı steril gazlı bezle temizledikten sonra, iki santimetrelik bir kesi yapın ve femoral arteri ortaya çıkarın.
Akış probunu daha önce karotis için gösterildiği gibi yerleştirin ve sabitleyin ve kesiyi kapatın. Daha sonra, tibianın medial yönü boyunca, dizin yaklaşık 0,5 santimetre distalinde iki santimetrelik bir kesi yapın. Kalın duvarlı posterior tibial arteri ve ince duvarlı safen venini ortaya çıkarın.
Polivinil kateterleri yerleştirmek için, standart bir kesme tekniği kullanarak, künt diseksiyon ile ilgilenilen damarı serbest bırakın. Daha sonra damarın distal kısmını 3.0 ipek sütürle ve iğne olmadan, üç atışlı kare bir düğüm kullanarak bağlayın. Damarın proksimal yönüne ikinci bir ipeksiz kravat yerleştirin, ancak bağı açık bırakın.
Castroviejo makası kullanarak, damarda distal ligatüre iki milimetre proksimalde küçük bir enine kesim yapın. Proksimal çözülmemiş dikişi hafifçe yukarı çekerek damar kan akışını kısıtlayın. Daha sonra kateteri steril heparinize salin ile doldurun.
Kateterin eğimli ucunu yerleştirin ve ucu fetal damarın içine 20 santimetre ilerletin. Bir asistan damarı katetere sabitlemek için proksimal ipeksiz kravat sütürünü bağlarken kateteri forseps ile yerinde tutun. Yerleştirme bölgesinden iki milimetre uzakta üç atışla kare düğümler kullanarak damarı takılan kateterin etrafına tamamen bağlayın.
Daha sonra distal ligatürü proksimalden proksimal bağa bağlayın ve damarı katetere sabitleyin. Sürekli bir desen kullanarak 3.0 emilmeyen bir sütür kullanarak cilt kesisini kapatın. Çekildiğinde kan akışını kısıtlamamak için dikişlerin kateterlerin etrafına bağlandığından emin olun.
Rahim içine önceden yıkanmış bir kateter yerleştirin ve 3.0 emilmeyen bir sütür kullanarak bir dikişle fetüse sabitleyin. Fetüsü tekrar uterusa yerleştirin. Sürekli kilitleme desenli 3.0 emilmeyen sütür kullanarak fetal membranları dikin ve ardından 3.0 emilemeyen sütür kullanarak uterus kas tabakasını kapatın.
18 inçlik paslanmaz çelik bir cerrahi çubuğu karın duvarı boyunca parakostal bölgeye kadar deri altından yerleştirin. Kateterleri cerrahi çubuğun distal ucuna takın, bir asistanın kateterleri beslemesine ve çubuğu parakostal açıklıktan tamamen iterek probu kablosunu parakostal çıkış bölgesinden akıtın. Ardından, parakostal insizyon bölgesindeki tüm kateterleri ve akış probu kablolarını sabitleyin.
Su geçirmez bandı yerleştirdikten sonra, kateterleri koyunun derisine dikin. Kateterlerin üzerine koyunun dışına plastik bir ağ kese dikin ve kateterleri saklamak için sondalayın. 1.0 monofilament sentetik emilebilir sütür materyali kullanarak, linea alba'yı sürekli bir desenle sabitleyin ve cilt tabakasını cerrahi zımbalarla sabitleyin.
Kan akışını ölçmek için, perivasküler akış modülü ile fetüse yerleştirilen akış problarını PowerLab'a ve bağlı bir bilgisayara takın. Arteriyel ve amniyotik kateterleri, analogdan dijitale dönüştürücüye bağlı köprü amplifikatörüne takın. Fetüse intravenöz olarak bir mililitre 10 mikromolar fenilefrin bolusu uygulayın ve karotis ve femoral akışı 15 dakika boyunca ölçün.
Ardından 30 dakika veya kan akışı taban çizgisine dönene kadar bekleyin. Daha sonra, perivasküler katetere bir mililitre 10 mikromolar fenilefrin verin ve kan akışını 15 dakika boyunca ölçün. Perivasküler kateterden beş mililitre ılık salin uygulayarak fenilefrini yıkayın.
Ardından 30 dakika veya kan akışı taban çizgisine dönene kadar bekleyin. Bu çalışma, yakın dönem ve erken dönem fetüslerde ve koyunlarda kan akımı manipülasyonunun lokalize etkilerini incelemiştir. Karotis arterin perivasküler boşluğuna bir mililitre 10 mikromolar fenilefrin (bir alfa-1 AR agonisti) uygulandıktan sonra, hem yakın dönem fetal koyunlarda hem de preterm fetüste karotis kan akışında önemli bir azalma gözlendi.
Tersine, fenilefrinin intravenöz olarak uygulanması, karotis kan akışını etkilemeden hem yakın dönem fetal koyunlarda hem de preterm fetüste sistemik kan akışında önemli bir artışa neden oldu. Sonuçlar, preterm fetüslerin fenilefrin aracılı karotis kan akımı regülasyonuna yanıt vermediğini, ancak yanıtın yakın dönem fetüslerde olgun olduğunu ortaya koymuştur. Özellikle, fenilefrinin intravenöz uygulaması, karotis kan akışını sadece erken dönem fetüslerde arttırdı ve kısa süreli fetüslerde önemli bir etkisi olmadı.
Bununla birlikte, fenilefrinin intravenöz uygulaması hem preterm hem de yakın term fetüslerde sistemik kan basıncını yükseltti. Sonuçlar ayrıca fenilefrinin perivasküler kurulumunun sistemik kan basıncını etkilemediğini göstermektedir. Damarları tanımlamak için künt diseksiyon yaparken ve kateterin eğimli ucunu yerleştirmek için çentiklenirken çok dikkatli olunmalıdır.
Çentik küçük olmalı ve tüm kabı kesmekten kaçınmalıdır. Bu yöntem, damar kasılmasını ve herhangi bir damarın kan akışını ölçebilir. Ayrıca, hedeflenecek organ veya dokunun yakınına kimyasallar ve vektörler vermek için de kullanılabilir.
Bu teknik, gelişmekte olan bir fetüste uteroda serebral kan akışı otoregülasyonundaki değişiklikleri belirlemek ve transkripsiyonu yukarı regüle etmek veya susturmak için herhangi bir geni hedeflemek için kullanılabilir.
