Biz çiftleşme denemeleri ile yardım için Alex Hitchen ve Meg Booth teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma TP H015604 / 1 / Merkezi tarafından hibe KD tarafından desteklenmiştir.

Gıda Boyama ile Fly Gıda 1. Hazırlık <ol><li> Alt gıda yaklaşık 20 ml (Şekil 1) ile standart bir Drosophila şişeyi al. Kaynar su 1 L kullanan gıda karışımı aşağıdaki tarifi kullanın: agar, 10 g dekstroz, 85 g mısır unu 60 g, maya, 40 g ve kaynayan 5 dakika boyunca karıştırın. Karışım, 75 ° C&#39;ye soğuduktan sonra% 10 nipagen 25 ml ilave edilir. </li><li> Gıda soğutuldu ve iki damla katılaşmasından sonra, - yiyecek en mavi gıda boyası (yaklaşık 0.5 ila 1 mi) ve şişenin bütün yüzeyi üzerine yayılmış olan (Şekil 1). Tercih eğer farklı bir renk boya kullanın. </li><li> Boya gıda üst tabakası tarafından emilir, böylece buzdolabında iki gün süre ile gıda boş; Bu olgunlaşma döneminde sinekler zarar aşırı nemi önler. Aşırı nem hala o sonradan ekstra nem ve yukarı örtecek bir sorun olup olmadığını kağıt mendil küçük bir parça ekleonu kaldır. </li><li> Transferi tek tek veya gruplar halinde gıda üzerine uçar. Not: Sinekler gıda konuyor 1 gün içinde bağırsak boyama kazanacaktır. Alternatif olarak, tamamen önceden deney (gıda boyasına maruz kalma gözlenmemiştir olgunlaşma döneminde artmış mortalite) ile boyanmış gıda sinekler olgun. </li><li> Boyalı sinekler olmayan boyalı sinekler kolayca ayırt edilebilir olmadığını kontrol edin. Boyanın yüksek bir konsantrasyonda ya da farklı boya kullanılarak 1.4 - bunlar ayırt edilemez ise, tekrar 1.1 yineleyin. </li></ol> Gıda Boyama kullanma 2. İki Erkek Çiftleşme Denemeler <ol><li> Döl üreten için, kadın ve erkek sineklerin çiftleri içeren çoklu şişeleri (erkek ve kadın küçük gruplar larva kalabalığı önlemek için özen rağmen, aynı zamanda uygundur) kurdu. 7 gün - kadın yumurtalarını ve her 5 yeni şişelere sinekler taşımak için izin verin. Sahip türler için uygun bir sıcaklıkta muhafaza edin şişeler (22 ° C, fveya D pseudoobscura ve D subobscura ve D 25 ° C melanogaster). </li><li> Pseudoobscura 25 ° C, D 6 saat - - toplama deneysel sinekler erkek ve kadın toplamak önce belirli bir süre toplama şişeleri tüm sinekler çıkarmadan önce onlar bakireler (D. melanogaster olacak sağlamak için 18 saat 22 ° C&#39;de ve D. subobscura - 22 ° C &#39;de 24 saat). Not: Sinekler bakire değilse bu irade önyargı çiftleşme çalışmalarda 15 davranışları. <ol><li> Mağaza ve bireysel standart 75 x 20 mm plastik şişelerde olgun erkek (gıda ~ 20 ml içeren). Erkek gruplarında 16 tutulur Bu erkek çiftleşme davranışı ve bazı türlerde görülen fitness olumsuz etkileri önler. </li><li> İstediğiniz tedaviye erkeklerin yarısı Açığa (CO Bu durumda 2 anestezi). CO 2 mat kullanın veya gerekli süre sinekler ortaya çıkarmak için dokunun. Mal Mağaza yarısıes çiftleşme kadar renkli gıda her bir işlem yer alır. Bu çiftleşme denemeleri sırasında onları görsel olarak ayırt yapacaktır. </li><li> Transfer için sinekler bir aspiratör 17 kullanın. Tedavi ve erkek renk durumunu hem tanımlamak için her şişeyi etiketleyin. Burada, dört tedaviler kullanmak (anestezi, olmayan renkli = G-NC, anestezi, renkli = GC, hiçbir anestezi, renkli olmayan, NG-NC, ve hiçbir anestezi, renkli, NG-C). </li></ol></li><li> 10 grupları olarak olgun taze gıda şişeleri içine yeni ortaya kadın aktarın. </li><li> 3 gün, D. pseudoobscura - - 5 gün, D subobscura -. D (örneğin, 22 ° C üzerinde çalışılan 18 mağazası türler için uygun bir sıcaklıkta uçan 7 gün sinekler eş yaşı (Drosophila melanogaster olgun izin ver . pseudoobscura ve D subobscura ve 25 ° C Drosophila melanogaster için). </li><li> Devamı (tek tek vialler için kadın taşıGıda ~ 20 ml) çiftleşme flakon alışmaları için çiftleşme deneme 1 gün önce, geri kalan. Şişeler ayırt edilebilir, böylece, bu şişeleri etiketleyin. Nötr etiketleme kullanarak deney kör dikkatli olun (yani, 1-150) bu yüzden herhangi bir şişe içinde sinekler kimliğini tahmin etmek mümkün değildir. Not: Her şişenin içine sinekler yerleştirir kişi, lekeli hangi tedavinin not gibi her şişeye yerleştirilir sinekler kimliğini bilmeniz gerekir. Ancak, çiftleşme saatler gözlemci kimliklerini bilmek gerekir. Bu en az iki deneyci gerekli olacak kurmak ve biri gözlemlemek için yapmak. </li><li> 10 arasında çiftleşme denemeleri başlayın - 12:00, ya da hafif sinekler (sinekler için &quot;şafak&quot;) maruz kalan ışık / karanlık döngüsünde geliyor çakışan bir anda. Bir aspiratör kullanarak (bir tek kadın sinek içeren) her çiftleşme şişesine iki erkek sinekler ekleyin. İki erkek (farklı tedaviler anestezi olduğundan emin olun veyakontrol) ve bu bir mümkün birbirinden ayırt bunları yapmak, ve lekeli hangi erkek not bağırsak boyama vardır. </li><li> (- Renkli renkli veya non) çiftleşme oluşursa, arkadaşları erkek durumunu kaydedin. 2 saat boyunca son çalışmalar, kabul edersek kadın arkadaşı olmaz. 2 saat bu türler için uygun olmakla birlikte, diğer Drosophila fazla ya da daha az süre gerekebilir: edin. </li></ol> 3. Tek Erkek Çiftleşme Denemeler <ol><li> Tek erkek denemeler için, iki değişikliklerle Protokolü 2 tekrarlayın: <ol><li> Adım 2.3 renkli gıda erkek tutmayın. </li><li> Aşama 2.7, her şişe için, yalnızca tek bir erkek ekleyin. </li></ol></li><li> Adım 2.8, sinek flakon, çiftleşme bitmiş çiftleşme başlar ve zaman kayıt altına alınmalıdır zaman eklenir zamanı kaydetmek. Bu değerlerden, başarı, gecikme ve süresini çiftleşme hesaplamak. </li></ol> 4. Veri Analizi <ol><li> Ana için uygun istatistik paket kullanınlisis. Veri normal ve sadece iki tedaviler t-testleri veya eşdeğer Genelleştirilmiş Lineer Model (GLM) kullanın. İki erkek deneyler için, binom testler veya herhangi bir temel istatistik paketinde mevcut bir binom GLM kullanın. Not: Örnek verileri için tüm analizler, R, sürüm 3.0.3 19 içinde gerçekleştirilmiştir. </li><li> Her tedavi 20 gecikme ve süresi frekans histogramlar komplo, ve Shapiro-Wilk normallik gibi bir testi kullanılarak, normallik için çiftleşme gecikme ve çiftleşme süresi verilerini kontrol edin. Normal değilse, onu dönüştürmek, ya da parametrik olmayan eşdeğer istatistiklerini 20 kullanın. Not: Tek erkek deneyler örnek verileri log için dönüşüm normallik ve eşit sapmaların gereksinimlerini bir araya geldi. </li><li> Veri normalize olabilir Eğer iki tedaviler 21 kullanırken, kullanım t-testi, tek erkek çiftleşme çalışmalarda çiftleşme gecikmesi ve süresi arasındaki farklılıkları incelemek için. Birden tedaviler kullanılırsa,Varyans Analizi Bir ​​(ANOVA) 20 deneyin. Veri normalize mümkün değilse, eşdeğer parametrik olmayan testler 21 deneyin. </li><li> Rekabet erkeklerde 20 birleşme başarı gıda boyası veya CO2 anestezi ya da bir etkisini test etmek için binom testleri kullanın. Örnek veriler ile olduğu gibi çoklu tedaviler, kullanıldığı takdirde, binom hata yapısı 21 olan bir GLM kullanın. </li><li> Örnek verileri iki erkek denemeler için, binom hata yapıları ile GLMS kullanın. Bir GLM bir yanıt değişkeni (0 = gazlı ve-gassed değil CO 2 incelendiğinde açıklayıcı variables.One GLM olarak takılmış bir yanıt değişkeni (renkli = 0 ve renkli olmayan = 1) türler ile, gaz durumu, ve gaz tedavisi gibi renk muayene = 1) monte türler, renkli durum ve gaz tedavisi ile. Her durumda, maksimal modeli üretmek ve AIC 20 dayalı bir model basitleştirilmesi gerçekleştirin. </li></ol>

<ol>
	<li>Parker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+competition+and+its+consequences+in+insects.">Sperm competition and its consequences in insects.</a> Biological Reviews. 45, 525-567 (1970).</li><li>Hosken, D. J., Stockley, P., Tregenza, T., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monogamy+and+the+battle+of+the+sexes.">Monogamy and the battle of the sexes.</a> Annual Review of Entomology. 54, 361-378 (2009).</li><li>Chapman, T., Liddle, L., John, K., Wolfner, M., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+cost+of+mating+caused+by+males+accessory+gland+fluids.">Female cost of mating caused by males accessory gland fluids.</a> Nature. 373, 241-244 (1995).</li><li>Avent, T. D., Price, T. A. R., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-based+female+preference+in+the+fruit+fly+Drosophila+pseudoobscura.">Age-based female preference in the fruit fly Drosophila pseudoobscura.</a> Animal Behaviour. 75, 1413-1421 (2008).</li><li>Barron, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anaesthetising+Drosophila.+for+behavioural+studies.">Anaesthetising Drosophila. for behavioural studies.</a> Journal of Insect Physiology. 46, 439-442 (2000).</li><li>Moeers, A. O., Rundle, H. D., Whitlock, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+selection+and+bottlenecks+on+male+mating+success+in+peripheral+isolates.">The effects of selection and bottlenecks on male mating success in peripheral isolates.</a> The American Naturalist. 153, 437-444 (1999).</li><li>Ashburner, M., Thompson, J. N., Ashburner, M., Wright, T. R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+laboratory+culture+of+Drosophila.">The laboratory culture of Drosophila.</a> The Genetics and Biology of Drosophila. 2a, 1-109 (1978).</li><li>Powell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Progress and Prospects in Evolutionary Biology: The Drosophila Model. , (1997).</li><li>Moore, A. J., Moore, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Balancing+sexual+selection+through+opposing+mate+choice+and+male+competition.">Balancing sexual selection through opposing mate choice and male competition.</a> Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 266, 711-716 (1999).</li><li>Hollocher, H., Ting, C., Pollack, F., Wu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incipient+speciation+by+sexual+isolation+in+Drosophila+melanogaster.:+Variation+in+Mating+preference+and+Correlation+between+sexes.">Incipient speciation by sexual isolation in Drosophila melanogaster.: Variation in Mating preference and Correlation between sexes.</a> Evolution. 51, 1175-1181 (1997).</li><li>Perron, J. M., Huot, L., Corrivault, G. W., Chawla, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+carbon+dioxide+anaesthesia+on+Drosophila+melanogaster.">Effects of carbon dioxide anaesthesia on Drosophila melanogaster.</a> Journal of Insect Physiology. 18, 1869-1874 (1972).</li><li>Wu, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+isolation+in+Drosophila+melanogaster+:+A+possible+case+of+incipient+speciation.">Sexual isolation in Drosophila melanogaster : A possible case of incipient speciation.</a> Proceedings of the National academy of sciences. 92, 2519-2523 (1995).</li><li>Melcher, C., Pankratz, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candidate+gustatory+interneurons+modulating+feeding+behaviour+in+the+Drosophila+brain.">Candidate gustatory interneurons modulating feeding behaviour in the Drosophila brain.</a> PLoS Biology. 3, e305 (2005).</li><li>Kalaw, V., Drapeau, M. D., Long, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+food+coloring+on+longevity+and+viability+of+Drosophila+melanogaster.">Effects of food coloring on longevity and viability of Drosophila melanogaster.</a> Dros. Inf. Serv. 85, 128-129 (2002).</li><li>Friberg, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+perception+of+female+mating+status:+its+effect+on+copulation+duration,+sperm+defence+and+female+fitness.">Male perception of female mating status: its effect on copulation duration, sperm defence and female fitness.</a> Animal Behaviour. 72, 1259-1268 (2006).</li><li>Liz&#233;, A., Price, T. A. R., Heys, C., Lewis, Z., Hurst, G. D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extreme+cost+of+rivalry+in+a+monandrous+species+male+&#8722;+male+interactions+result+in+failure+to+acquire+mates+and+reduced+longevity.">Extreme cost of rivalry in a monandrous species male &#8722; male interactions result in failure to acquire mates and reduced longevity.</a> Proceedings of the Royal Society of London, series B-Biological Sciences. 281, 20140631 (2014).</li><li>Yeh, S. -. D., Chan, C., Ranz, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+differences+in+sperm+competitive+ability+in+Drosophila.">Assessing differences in sperm competitive ability in Drosophila.</a> Journal of Visualized Experiments. (78), e50547 (2013).</li><li>Holman, L., Freckleton, R. P., Snook, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+use+is+an+infertile+sperm?+A+comparative+study+of+sperm-heteromorphic+Drosophila.">What use is an infertile sperm? A comparative study of sperm-heteromorphic Drosophila.</a> Evolution. 62, 374-385 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> R: A Language and Environment for Statistical Computing. , (2011).</li><li>Crawley, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Statistics: An introduction using R. , (2005).</li><li>Dytham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Choosing and Using Statistics: A Biologist's Guide. , (2010).</li><li>Kaiser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+anaesthesia+by+carbon+dioxide+on+hatching+time+and+weight+at+eclosion+in+Drosophila+melanogaster.">Influence of anaesthesia by carbon dioxide on hatching time and weight at eclosion in Drosophila melanogaster.</a> Drosophila Information Service. 76, 92-93 (1995).</li><li>Rera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+longevity+and+tissue+homeostasis+by+the+Drosophila.+PGC-1+homolog.">Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila. PGC-1 homolog.</a> Cell Metabolism. 14, 623-634 (2011).</li><li>Crumpacker, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+micronized+fluorescent+dusts+to+mark+adult+Drosophila+pseudoobscura.">The use of micronized fluorescent dusts to mark adult Drosophila pseudoobscura.</a> American Midland Naturalist. 91, 118-129 (1974).</li><li>Jallon, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+few+chemical+words+exchanged+by+Drosophila+during+courtship+and+mating.">A few chemical words exchanged by Drosophila during courtship and mating.</a> Behaviour genetics. 14, 441-478 (1984).</li><li>Liimatainen, J. O., Jallon, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+cuticular+hydrocarbons+and+their+effect+on+courtship+in+Drosophila+virilis+and+D.+lummei.">Genetic analysis of cuticular hydrocarbons and their effect on courtship in Drosophila virilis and D. lummei.</a> Behaviour Genetics. 37, 713-725 (2007).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını olduğunu beyan ederim.

Bu veriler, CO2 anestezi etkisinin az etkisini gösteren iki ya da üç türe, türler arasında tutarlı olduğunu göstermektedir. Bizim sonuçlar gıda boyası ile etiketleme 2 anestezi D için CO daha erkek çiftleşme başarısı daha düşük etkiye sahip önermek melanogaster. Bu deneyler, gıda boyaları, kolayca ve ucuz bir şekilde birden çok erkek içeren birleşme deneyleri için etiket sinekleri için kullanılabileceğini göstermektedir. Üç modeli Drosophila türlerinin yalnızca D., incelenen melanogaster, rekabetçi bir durumda birleşme performansına CO2 anestezi etkisi göstermiştir. Bunun aksine, türlerin yok D için önceki sonuçlara aksine birleşme gecikme bakımından tek birleşme deneylerinde gaz toplama bir etki gösterdi melanogaster 5. rekabetin etkisi bu nedenle sadece saptanabilir CO 2 anestezi daha ince spor etkileri, vurgulama olabilirdurumlar altında erkek-erkek rekabet olduğu yerde. Erken toplama ve bir gün Pozlama deneme öncesinde D. erkeklerin yeteneği üzerinde olumsuz bir etkisi var Bir çiftleşme kazanmak için melanogasterin. İki gün önce deneme maruz kalma, ancak herhangi bir etkisi görülmemiştir. D. Hem pseudoobscura ve D subobscura çalışmaların hiçbirinde gazına maruz herhangi bir etki göstermemiştir. Bir açıklama olduğunu D. erkek bakire olmasını sağlamak için diğer türlere göre daha - (6 saat eski 0) daha önce hayatında toplanan gerekir, çünkü melanogaster CO 2 erken maruz savunmasız oldu. Dolayısıyla erkek D. sineğin manikür hala sertleşmesine kendi manikür için uzun oldu, diğer türlere oranla, sertleşme gibi bu çağın melanogaster daha duyarlı olabilir. Genel olarak, bu CO 2 anestezi etkileri belirli türleri ve uygun hedef türlerin etkisini test etmelidir araştırmacılar olduğu fikrini desteklemektedir. Currently CO2 anestezinin etkisi üzerinde çalışma çoğunluğu diğer ilgili türlerin uygulamak için uygun olmayabilir, bu nedenle Drosophila melanogaster 5,11,22 ile yapılmıştır edilmiştir. sinekler ayırt etmek için sunulan alternatif non-invaziv bir yöntem gıda boyası olduğunu. Sonuçlar Bu tedavi tüm türler incelendiğinde genelinde hiçbir etkisi yoktu öneririz. Kullanımı bireyler arasında ayrım yapmak için, ucuz ve kolay bir şekilde görünür bir marker sağlaması başarılı oldu Bununla birlikte, bu boya D. ayırt kolay olduğu unutulmamalıdır pseudoobscura ve D D. daha subobscura melanogaster. Önceki yazarlar 4,6 (yeşil ve mavi kırmızı) birkaç renk kullandık. Biz, D. bütün türlerde ayırt etmek kolay, özellikle olmaya mavi boyama bulundu pseudoobscura ve D subobscura. Potansiyel birçok bireysel işaretlenmiş Flie ile daha karmaşık deneyler sağlayacak birkaç renk kullanmas. Bazı gıda boyaları tüketildiği zaman muhtemelen sindirilmiş olan, sinekler renk başarısız Ancak, farklı boyaların ön testler, esastır. Diğer boyalar) toksik etkilere sahip ve sineklerin yaşam azaltmak ve 14 kaçınılmalıdır olabilir. Daha pahalı boyalar kullanılarak alternatif gıda boyası yöntemleri de D. bağırsak bütünlüğünü incelenmesi için kullanılmıştır 23 melanogaster. Bunlar bir alternatif sağlayabilir, her ne kadar daha pahalı, boyama yöntemi 23. sinekler koleksiyonundan boyalı gıda saklanabilir gibi boya yöntemi CO 2 kanat kırpma gibi hızlı. Gıda alımı, (~ 3 saat), hızlı, yani diğer çalışmalar 6 da kullanılan renkli gıda depolama O / N da sinekler işaretlemek için yeterli olacaktır. (- 12 gün 10) 24 işaretleme kanat (daimi) kırpma veya floresan tozu ile karşılaştırıldığında - (5 saat ~ 4) Bununla beraber, boyama süresi oldukça kısadır. Drosophila türlerinin olarakgörünümü değişir, farklı boyalar daha az ya da farklı türler için geçerli olacaktır, ve bazı suşlar olarak (örneğin, knock-out mutantlar) diyet değişikliklerine savunmasız olabilir, boyanın herhangi bir şekilde kullanılması etkinliğinin bir ön test, özellikle uzun eğer gerektirir boyalara süreli maruz kalma 14 toksik olabilir. Kalaw ve diğ., 14 çalışmasının tersine olarak, D, renkli gıdalar birden fazla gün depolandıktan sonra belirgin bir ölüm oranı olduğunu bulmuştur melanogaster (3 gün), D. pseudoobscura (5 gün) veya D subobscura (7 gün), muhtemelen boyada farkı için kullanılır. boya tekniği başarılı kullanımı için kritik adım seçilen boya türleri ve gerilme kullanılan iyi çalıştığını doğrulayarak, adım 1.5 olduğunu. Alternatif bir teknik alan deneyleri 24 kullanımdan önce sinek dışında renkli toz uygulanmasını kapsar. Bu yöntem alan nedeniyle t bireyleri izlemek için kullanılır olmuşturo işaretleme süresi ve işaretleme kitle kolaylığı 24 uçar. Biz açıkça çiftleşme çalışmalarda bu yöntemi test olmasına rağmen, bu toz, özellikle Drosophila 25, 26, çiftleşme önemli duyulara sahip olabilir, herhangi etkilerini incelemek için önemli olacaktır. Türler ise, bağırsak boyama mümkün olmadığı durumlarda, Bu yöntemler, uygun olabilir. Sonuç olarak test edilen üç türün (D. pseudoobscura ve D. subobscura) iki CO 2 anestezi veya erkeklerin çiftleşme yeteneği gıda boyası ya bulunamadı etkisi olduğunu öğrendim. D. için tespit edildi CO 2 anestezi olumsuz bir etkisi melanogaster, ancak gıda boyası, bu türün başarılı çiftleşme etkilemedi. Genel olarak, boya yöntemi eşdeğer veya CO 2 anestezi gerektiren yöntemlere göre daha iyi olduğunu tek tek Drosophila belirlenmesi için basit ve ucuz bir non-invaziv bir yöntem sağlar. Obüyük olasılıkla bu yöntem türlerinin aralığında çalışacak olan.

Son birkaç yıldır orada evrim 1,2 tarihinde nasıl cinsel seçimi ve rekabet erkekler arasındaki etkisi ilgi artmaktadır. Çiftleşme davranışı üzerinde deneyler geliştirilmesi ve cinsel seçimi 3,4 teorileri test önemli bir rol oynamıştır. Cinsi Drosophila özellikle, araştırma kullanarak türlerde, cinsel seçimi ve davranış anlaşılmasına büyük katkıda bulunmuştur. Ancak, yaygın olarak kullanılan teknikler standart çiftleşme deneyler 5,6 sonuçlarını yapay önyargı olup olmadığını araştırmak önemlidir. Anestezi genellikle deneylerde 7 kullanım ve tanımlanması için kullanılır. Örneğin, sinekler genellikle çiftleşme öncesi toplanır, ya da (CO 2) anestezik karbondioksit kullanarak genotipleri veya deneysel tedaviler halinde sıralanır. Çoğunlukla, ayırt edilmesi gereken deneylerde, fl anastetize yaygın bir uygulamadırler ve kanat off klip parçası, her birey ya da tedavi grubunu 5,8 tanımlamak için. Ancak, CO 2 tedavi davranışını nasıl etkilediğini anlamak için, hayati önem taşımaktadır. CO 2 anestezi etkisi Drosophila melanogaster incelenmiştir edildiği 2 çiftleşmek için uzun anlamlı aldı ve genel olmayan anestezi erkek veya erkeklerden daha düşük çiftleşme başarı vardı, soğuk 5 maruz kullanılarak anestezi CO maruz erkek çocukların. Bu etki gözlenmiştir uygun anestezi deney gününde uygulanır ve zaman sinekler kurtarmak için bir gün verildiğinde. Ancak, bu çalışma bir tek erkek, her kadın 5 sunuldu yalnızca inceleyen çalışmalarda sınırlı kalmıştır. Bir kadın yüzünden anestezi erkek uygunluk daha ince kayıpların tespitine olanak olabilecek erkekler arasındaki rekabeti sağlayan, birden fazla erkek 9,10 karşılaşmaya için daha gerçekçi bir senaryo. CO 2 anestezi kullanımı da olacak ettitr yetişkin D. doğurganlığını ve uzun ömürlü azaltmak bulundu Onlar eclosion kısa bir süre sonra maruz kaldığında bakire toplama 11 uçar zaman yaygın olarak, melanogasterin. 2 anestezi CO bir alternatif onları boya 4,6,10,12,13 ile renkli gıda beslenerek sinekler işaretlemek için. Bu boya renkli sinekler renksiz sinekler, ya da farklı bir renk ile etiketlenmiş sinekler ayırt edilmesi için izin, sineğin bağırsak girer ve karın içinden görünür. Boyalı ek maya hamur 6 üzerinden, ya da yeni bir boyalı gıda alt tabakaya 13 maruziyeti üzerinden, gıda 12 doğrudan eklenen: Yöntem nasıl bu uygulanabilir farklıdır. Bu işaretleme teknikleri çiftleşme performansı 4,6 üzerinde hiçbir etkisi göstermeye görünür. Ancak, kağıt doğrudan yetişkin D aynı gıda boyası etkilerini inceleyen melanogaster ömrü 14 güçlü azalma bulundu. Önceki çalışmalar da alm odaklanmıştırost tamamen D. üzerinde melanogaster, hem CO 2 anestezi 5,11 ve gıda boyası 14 yöntemleri etkileri ile ilgili. Şu anda, CO 2 anestezi veya bağırsak boyama kullanımı diğer Drosophila çiftleşme davranışı nasıl etkilediğini çok az bilgi vardır. Aşağıdaki inceleme, Drosophila üç türün (D. melanogaster, D. pseudoobscura ve D subobscura) çiftleşme davranışı üzerinde CO2 anestezi etkisi değerlendirilmektedir. CO 2 sinekler toplama etkisi tek ve iki erkek çiftleşme denemeleri hem de incelenmiştir. CO2 etkisi de D. değişir bulunmuştur melanogaster 5 ve CO 2 maruz kalma ve çiftleşme arasındaki çok farklı gecikme süreleri test edildi. Anestezi ve kanat kırpma yöntemi işaretleme alternatif: sinekler leke gıda boyaların kullanımı da değerlendirilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Plastic tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>TWT-200-061G</td>
			<td>Other tubing may be suitable however it must fit within a 1ml pipette tip.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine mesh</td>
			<td>Any haberdashery</td>
			<td>-</td>
			<td>Fine curtain mesh is suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml pipette tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83007-376</td>
			<td>Various brands of pipette tips would be suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Vials</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>58.49</td>
			<td>Larger vials or bottles could also be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Balls</td>
			<td>Lewis Medical Solutions</td>
			<td>28170</td>
			<td>The size of cotton will vary depending on the size of vials used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue Food colouring</td>
			<td>Thesugarcraftcompany</td>
			<td>-</td>
			<td>Other dye colours and brands can have variable results.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Tank</td>
			<td>BOC</td>
			<td>BOC 40VK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharpie Markers</td>
			<td>Steadtler</td>
			<td>Lumocolor 313 S</td>
			<td>Various colours can be used, but Lumocolor S give an excellent combination of durability and fineness</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td>Salter</td>
			<td>SL3920</td>
			<td>Any stopwatch with a good digital display would be fine</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dyeing insects for behavioral assays: the mating behavior of anesthetized drosophila

Drosophila kullanarak Çiftleşme deneyleri cinsel seçimi ve davranış anlaşılmasına büyük katkıda bulunmuştur. Deneyler genellikle deneme bireyler arasında ayrım basit, kolay ve ucuz yöntemler gerektirir. Bunun için standart bir yöntem, her sinek kırpma CO 2 anestezi ve ardından etiketleyerek veya kanat. Bununla birlikte, bu invaziv ve davranışını etkilemek için gösterilmiştir. Diğer teknikler sinekleri tanımlamak için renklenme kullandık. Bu makalede, gıda boyası kullanarak, onları ayrı ayrı deneylerde içinde tespit edilmesini sağlar etiketleme Drosophila için basit ve non-invaziv bir yöntem sunar. Bu yöntem, iki erkek bir kadın çiftleşmek için rekabet çalışmalarda kullanılmaktadır. Boyama hızlı ve kolay tanımlanmasını sağladı. Test edilen üç tür arasında renk mukavemetinde bir fark ise, oldu. Veri boya gösteren sunulmuştur Drosophila Melano CO 2 den çiftleşme davranışı üzerinde bir alt etkiye sahiptirgaster. CO2 anestezi etkisi D ile, Drosophila türleri bağlıdır gösterilmiştir pseudoobscura ve D subobscura, D. ise hiçbir etkisi gösteren melanogaster erkek çiftleşme başarısını düşürmüştü. sunulan boya yöntemi deney tasarımları geniş bir aralığına uygulanabilirdir.

İki erkek çiftleşme denemeleri - 2 anestezi çiftleşme davranışı CO etkisi CO 2 anestezi etkisi varyasyonu açıklamak için bulunan en iyi modeli bir faktör olarak (D. pseudoobscura ve D. subobscura birbirlerine arasında hiçbir farklılık gösterdi kaynaşmış olan) türlerin içeriyordu. D. pseudoobscura ve D subobscura iki erkek çalışmalarda (Z 1.589 = 0.087, p = 0,931) çiftleşme başarısı CO 2 anestezi anlamlı etkisi yoktu. D. için melanogaster, 2 anestezi CO maruz erkek önemli ölçüde daha düşük birleşme başarı (Z1,589 = 2.467, p = 0.014) vardı. Daha büyük bir etkiye sahip türler ve tedavi (χ 2 = 1.589 6.83 = 0.009 P) arasında anlamlı bir etkileşim D. zaman görülüyor oldu melanogaster koleksiyonu gaza maruz veya 1 günlük deneme (Tablo 1) önce bulundu. Ancak buradaner, D. melanogaster erkek CO 2 bir etkisi görülmemiştir 2 iki gün deneysel duruşmadan önce CO maruz. İki erkek çiftleşme denemeleri - çiftleşme davranışı üzerinde bağırsak boyama etkisi Model basitleştirme gıda boyası anlamlı etkisi üç türün (&gt; 0.1 P) herhangi bulundu varlık gösterdi. Tedavi veya gaz durum analizine dahil edildiğinde bu (P&gt; 0.1) da anlamlı değildi. tedavilerde renkli sinekler başarılı eşleştirmesi oranlan Tablo 2&#39;de gösterilmiştir. sinekler arasında renk farkı renkli ve renksiz gıda Şekil 1 &#39;de görülebilir. bağırsak gıda boyası yoğunluğu D daha fazla idi tutulur pseudoobscura ve D D. daha subobscura melanogaster. Tek çiftleşme denemeleri - CO m 2 anestezi etkisiating davranış CO 2 anestezi son zamanlarda toplamak yetişkin ortaya için kullanıldığında, üç türün herhangi çiftleşme gecikme fark yoktu. Bir etki D. geçme süresi için bulunmuştur subobscura 2 iki gün çiftleşme denemeleri (; Tablo 2 Şekil 2 ve 3) öncesinde CO maruz zaman. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52645/52645fig1.jpg" /> Şekil 1. RENKLİ ve Non Renkli Fly Gıda (A) küçük şişeler gösteren Fotoğraf ve Erkek D. Bağırsak boyamada Gücü Subobscura (B). <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52645/52645fig2.jpg" /> Erkeklerde Anesteziyoloji olsaydı, Tek Erkek Denemeler İncelenen üç Türlerinin için Çiftleşme Gecikme için Şekil 2. ortalama ve% 95 güven aralıklarıd (ışık çubukları) ya da değil Anestezi (koyu çubuklar) olduğunda Cinsel Olgunluk önce Bakireler olarak Toplanan. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52645/52645fig3.jpg" /> Cinsel Olgunluk önce Bakireler olarak Toplanan zaman Erkekler (koyu çubuklar) Anestezi (ışık çubukları) Anestezi ya da değil edildi Şekil 3. ortalama ve Tek Erkek Denemeler İncelenen üç Türlerinin için Çiftleşme Süresi% 95 Güven Aralıkları. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Tedavi </td><td> Tür </td><td> Hayır denemeleri </td><td> Hayır sinekler renkli evlendirilen ki </td><td> p değeri </td><td> Hayır sinekler gassed evlendirilen ki </td><td> p değeri </td></tr><tr><td rowspan="3"> CO 2 üzerinde Koleksiyonu </td><td> D. Mel </td><td> 73 </td><td> 36 </td><td> 1 </td><td> 27 </td><td> 0,0344 </td></tr><tr><td> D. pse </td><td>79 </td><td> 41 </td><td> 0,8221 </td><td> 44 </td><td> 0,3682 </td></tr><tr><td> D. alt </td><td> 71 </td><td> 40 </td><td> 0,3425 </td><td> 33 </td><td> 0,6353 </td></tr><tr><td rowspan="3"> 2 18 saat CO Exposed önce </td><td> D. Mel </td><td> 57 </td><td> 28 </td><td> 1 </td><td> 19 </td><td> 0,0163 </td></tr><tr><td> D. pse </td><td> 65 </td><td> 32 </td><td> 1 </td><td> 31 </td><td> 0,8043 </td></tr><tr><td> D. alt </td><td> 68 </td><td> 38 </td><td> 0,3961 </td><td> 35 </td><td> 0,9036 </td></tr><tr><td rowspan="3"> 2 2days CO Exposed. </td><td> D. Mel </td><td> 56 </td><td> 19 </td><td> 0,0222 </td><td> 32 </td><td> 0,3497 </td></tr><tr><td> D. pse </td><td> 70 </td><td> 32 </td><td> 0,5504 </td><td> 33 </td><td> 0,7202 </td></tr><tr><td> D. alt </td><td> 56 </td><td> 29 </td><td> 0,8939 </td><td> 26 </td><td> 0,6889 &lt;/ Td&gt; </tr></tbody></table> Tablo İncelendiğinde Tüm Türlerin ve Tedaviler karşısında iki erkek Choice Experiments 1. Sonuçları. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Tür </td><td> Özellik </td><td> df </td><td> t değeri </td><td> p değeri </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. melanogaster </td><td> Gecikme </td><td> 58 </td><td> 1,379 </td><td> 0.174 </td></tr><tr><td> Süre </td><td> 58 </td><td> 1.243 </td><td> 0.221 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. pseudoobscura </td><td> Gecikme </td><td> 109 </td><td> 0.419 </td><td> 0.676 </td></tr><tr><td> Süre </td><td> 109 </td><td> 0.436 </td><td> 0.664 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. subobscura </td><td> Gecikme </td><td> 83 </td><td> 0.098 </td><td> 0.922 </td></tr><tr><td> Süre </td><td> 83 </td><td> 1,767 </td><td> 0.081 </td></tr></tbody></table> Tek Çiftleşme Çiftleşme Gecikme CO 2 Anestezi Toplanması Etkisini incelenmesi Deney ve Süre gelen Tablo 2. Bulgular. Testler Drosophila üç türün (D. melanogaster, D. pseudoobscura ve D. subobscura) üzerinde gerçekleştirilmiştir.

Watch this Scientific Journal Video about Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila at JoVE.com

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

Davranış Tahliller için Boyama Böcekler: anestezi ve Çiftleşme Davranışı<em&gt; Drosophila</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

dyeing-insects-for-behavioral-assays-mating-behavior-anesthetized

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

9.7K Görüntüleme.  University of Liverpool. This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

Video: Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

Böcekler Tek Sensillum Kayıtlar Drosophila melanogaster Ve Anofel gambiae</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

Nörobilim

Studying the Neural Basis of Adaptive Locomotor Behavior in Insects

Studying the neural basis of walking behavior, one often faces the problem that it is hard to separate the neuronally produced stepping output from those leg movements that result from passive forces and interactions with other legs through the common contact with the substrate. If we want to understand, which part of a given movement is produced by nervous system motor output, kinematic analysis of stepping movements, therefore, needs to be complemented with electrophysiological recordings of motor activity. The recording of neuronal or muscular activity in a behaving animal is often limited by the electrophysiological equipment which can constrain the animal in its ability to move with as many degrees of freedom as possible. This can either be avoided by using implantable electrodes and then having the animal move on a long tether (i.e. Clarac et al., 1987; Duch &amp; Pfl&uuml;ger, 1995; B&ouml;hm et al., 1997; Gruhn &amp; Rathmayer, 2002) or by transmitting the data using telemetric devices (Kutsch et al, 1993; Fischer et al., 1996; Tsuchida et al. 2004; Hama et al., 2007; Wang et al., 2008). Both of these elegant methods, which are successfully used in larger arthropods, often prove difficult to apply in smaller walking insects which either easily get entangled in the long tether or are hindered by the weight of the telemetric device and its batteries. In addition, in all these cases, it is still impossible to distinguish between the purely neuronal basis of locomotion and the effects exerted by mechanical coupling between the walking legs through the substrate. One solution for this problem is to conduct the experiments in a tethered animal that is free to walk in place and that is locally suspended, for example over a slippery surface, which effectively removes most ground contact mechanics. This has been used to study escape responses (Camhi and Nolen, 1981; Camhi and Levy, 1988), turning (Tryba and Ritzman, 2000a,b; Gruhn et al., 2009a), backward walking (Graham and Epstein, 1985) or changes in velocity (Gruhn et al., 2009b) and it allows the experimenter easily to combine intra- and extracellular physiology with kinematic analyses (Gruhn et al., 2006).
We use a slippery surface setup to investigate the timing of leg muscles in the behaving stick insect with respect to touch-down and lift-off under different behavioral paradigms such as straight forward and curved walking in intact and reduced preparations.

We describe a method to record motor activity, timed to the electrically recorded tarsal contact signal in a tethered insect, walking on a slippery surface. This is used to study the neural basis of adaptive behavior under reduced influence of mechanical interaction between legs through the substrate.

Böcekler Adaptif Lokomotor Davranış Sinir Dayanak incelenmesi

Studying the neural basis of walking behavior, one often faces the problem that it is hard to separate the neuronally produced stepping output from those ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi<em&gt; Drosophila</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution has been a long sought tool for neuroscientists in the systems-level search for the neural circuitry governing complex behavioral states. Optogenetics is a cutting-edge tool that is revolutionizing the field of neuroscience and represents one of the first systematic approaches to enable causal testing regarding the relation between neural signaling events and behavior. By combining optical and genetic approaches, neural signaling can be bi-directionally controlled through expression of light-sensitive ion channels (opsins) in mammalian cells. The current protocol describes delivery of specific wavelengths of light to opsin-expressing cells in deep brain structures of awake, freely-moving rodents for neural circuit modulation. Theoretical principles of light transmission as an experimental consideration are discussed in the context of performing in vivo optogenetic stimulation. The protocol details the design and construction of both simple and complex laser configurations and describes tethering strategies to permit simultaneous stimulation of multiple animals for high-throughput behavioral testing.

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

Optogenetics has become a powerful tool for use in behavioral neuroscience experiments. This protocol offers a step-by-step guide to the design and set-up of laser systems, and provides a full protocol for carrying out multiple and simultaneous in vivo optogenetic stimulations compatible with most rodent behavioral testing paradigms.

Kemirgen Santral Sinir Sistemi vivo optogenetic Stimülasyon içinde

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To complicate matters even further, the odors detected by the insect nervous system usually are not single compounds but mixtures whose composition and concentration ratios vary. This leads to an almost infinite amount of different olfactory stimuli which have to be evaluated by the nervous system.
To understand which aspects of an odor stimulus determine its evaluation by the fly, it is therefore desirable to efficiently examine odor-guided behavior towards many odorants and odor mixtures. To directly correlate behavior to neuronal activity, behavior should be quantified in a comparable time frame and under identical stimulus conditions as in neurophysiological experiments. However, many currently used olfactory bioassays in Drosophila neuroethology are rather specialized either towards efficiency or towards resolution.
Flywalk, an automated odor delivery and tracking system, bridges the gap between efficiency and resolution. It allows the determination of exactly when an odor packet stimulated a freely walking fly, and to determine the animal&#180;s dynamic behavioral reaction.

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

The automated tracking system Flywalk is used for high-resolution quantification of odor-guided behavior in Drosophila melanogaster.

Koku kılavuzluğunda Davranış Yüksek çözünürlüklü Niceleme<em&gt; Drosophila melanogaster</emKullanma&gt;<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigma

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

Arasında Mechanosensation için bir davranış tahlilinde klonlarda MARCM tabanlı<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their worlds when trying to understand their behavior and ecology. Sensitivity to the ultraviolet spectrum (UV; 300 - 400 nm) is found across multiple genera of birds, fish, reptiles, amphibians, and even mammals. This protocol describes a technique for examining organisms for the presence of UV-reflecting structures and a method for testing whether these cues are used as social signals in the context of mate choice. A spectrophotometer is used to detect the presence of UV reflectance and variation in reflective intensity between individuals and sexes. An example of this technique is presented in which a dichotomous mate choice test exposes sexually receptive individuals to opposite sex individuals whose visual appearance can be manipulated by filters that either transmit full spectrum or block UV wavelengths. This system allowed for the determination that female, but not male, sailfin mollies (Poecilia latipinna) were using UV markings as part of their mating decisions. These types of studies serve to expand our knowledge of the range of organisms that utilize UV and provide insight into how UV plays a role in their lives.

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

This protocol outlines the use of spectrophotometry to detect ultraviolet-reflecting structures on organisms (in this example, the sailfin molly Poecilia latipinna) and describes dichotomous choice tests for fish that allow inferences to be made on the role of ultraviolet cues during mate selection.

Tahliller UV yansıtan Yapıları Algılama ve Sailfin Molly kullanarak Mate Tercihi kendi Önemi belirleme<em&gt; Poecilia latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

Kullanımı Ödül arayan davranış değişiklikleri Tedbir Basit Yolu<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a grooming assay protocol and novel chamber design that is cost-efficient and scalable for either small or large-scale studies of Drosophila grooming. Flies are dusted all over their body with Brilliant Yellow dye and given time to remove the dye from their bodies within the chamber. Flies are then deposited in a set volume of ethanol to solubilize the dye. The relative spectral absorbance of dye-ethanol samples for groomed versus ungroomed animals are measured and recorded. The protocol yields quantitative data of dye accumulation for individual flies, which can be easily averaged and compared across samples. This allows experimental designs to easily evaluate grooming ability for mutant animal studies or circuit manipulations. This efficient procedure is both versatile and scalable. We show work-flow of the protocol and comparative data between WT animals and mutant animals for the Drosophila type I Dopamine Receptor (DopR).

This protocol describes a scalable individual grooming assay technique in Drosophila that yields robust, quantitative data to measure grooming behavior. The method is based on comparing the difference in dye accumulation on the bodies of un-groomed versus groomed animals over a set period of time.

Drosophila Bakım Davranışının Nicelleştirilmesi

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...