Bu metodoloji ve oda tasarımlarını test etme ve tesis etme konusunda erken çalışmalar yapmak için Brian Shepherd, Tat Udomritthiruj, Aaron Willey, Ruby Froom, Elise Pitmon ve Rose Hedreen&#39;e teşekkür etmek istiyoruz. Yazıyı okumak ve düzenlemek için Kelly Tellez ve Graham Buchan&#39;a teşekkür ediyoruz. Andrew Toeds ve Julie Simpson&#39;a öncü çalışmaları ve Brilliant Yellow Dye (Sigma) kullanımını önermek için verdikleri tavsiye ve destekleri nedeniyle teşekkür ediyoruz. Bu çalışma kısmen Mary E. Groff Cerrahi ve Tıbbi Araştırma ve Eğitim Yardım Kuruluşu Güvenliği, Bronfman Bilim Merkezi ve Hellman Fellows Programı tarafından desteklenmektedir.

1. Hazırlık <ol><li> Canlı Drosophila&#39;yı kültür şişesinden damat odasına taşımak için bir aspiratör hazırlayın. Aspiratörler, anestezinin sonraki davranışsal gözlemi etkilememesini sağlamak için bilinçli hayvanların davranış odasına transfer edilmesine izin verir. <ol><li> Makas kullanarak, 1 fitlik tek kullanımlık mikropipet ucunun ucundan en az 1 inç uzakta, 1.5 fit tigon borusu ID 1/8 kes. Kesme ucu üzerine 1 cm&#39;lik kare mesh (açıklık 0.196 inç) tutun. NOT: Çoğu 1mL ipucu, tipin paket kutusuna oturduğu, genellikle o satıra kesilen bir derecelendirme çizgisine sahiptir. </li><li> Örgü / kesme ucu üzerine taze 1 mL&#39;lik bir mikropipet ucu yerleştirin. Örgü şeklini iki ipucu arasında sıkı bir engel oluşturarak izleyin. Yeni ucun içi sinekler için bir tutma odası oluşturur. </li><li> Tek bir sineğin geçişini sağlayacak kadar genişliği açmak için yeni mikropipet ucunun ucunu kesin. KulübeYakıt deposunun deliğine yaklaşık olarak uyacaktır (yaklaşık 1.5-2 mm çapında). </li><li> İç içe geçmiş ipuçlarını tygon hortumunun ucuna tam olarak oturtun. Vakum basıncına izin vermek için sıkı bir şekilde oturmasını sağlamak için uçları borunun içine doğru itin. </li><li> Borunun diğer ucunda 200 μL&#39;lik bir mikropipet ucunun ucunu kesin ve borunun içine dar kesim ucunu yerleştirin. Bu aspiratörün &quot;ağız&quot; tarafıdır. </li></ol></li><li> Toz alikot tüpleri hazırlayın. Katranlı tartı kağıdına yaklaşık 5 mg Parlak Sarı boya tartın. Tozu 0.6 mL&#39;lik bir mikrosantrifüj tüpüne boşaltın ve kapağı sıkıca kapatın. NOT: Bazı lateks eldivenleri boya geçirgen olduğu için, kısımların hazırlanması sırasında nitril eldiven kullanmanızı öneririz. </li><li> Denemedeki tüm numuneler için (her odadaki her sinek için bir tane) adım 1.2&#39;yi tekrarlayın. </li><li> Etanol (EtOH) tüpleri hazırlayın: 1 mL% 100 EtOH, 1.5 mL mikrosantrifüj tüplerine pipetleyin. Genotipler veya koşullar için etiket tüpleri. &lt;/ Li&gt; <li> Denemedeki tüm numuneler için (her odadaki her sinek için bir tane) adım 1.4&#39;ü tekrarlayın. Bakım testinin tamamlanması için EtOH tüplerini kapatın ve kaydedin. Negatif kontroller için sadece bir sinek olmadan sadece 1 mL EtOH olacak en az bir &quot;Boş&quot; numune de ekleyin. </li><li> Her damat haznesini, kayan üst plakayı (daha küçük deliklerle) vidalayın, ancak alt plakayı (daha büyük deliklerle birlikte) toz eklenmesi için çıkartarak bir araya getirin. </li><li> Her gerekli bakım odasını üst kısmı aşağı bakacak şekilde masanın üzerine koyun. Sinek giriş tarafı yüzü aşağı bakar. </li><li> Tüp, istenen kuyunun üstündeki haznenin yüzeyine dokunarak her bölmeye 5 mg Brilliant Yellow boya alikuotu yükleyin. Tüm tozların kafesden üst plakaya düşmesini sağlamak için odacığa masanın üzerine dokunun. </li><li> Alt plakayı, konik deliklerin daha geniş uçları dışarıya bakacak ve delikler oyukların üzerine oturmayacak şekilde her hazneye vidalayın. Botu güvende tutunPlakayı sıkıca kapatın, böylece kaymaz ve boya bırakmaz. </li><li> Odanın üstünü çevirin ve bir masaya birkaç kez vurarak toz alt plakaya dayanıncaya kadar düşer. </li><li> Küçük deliklerin, on beş kuyuya hizalanması için odanın üst plakasını &quot;açık pozisyon&quot; a kaydırın, böylelikle tek tek kuyulara sineklerin girmesine izin verin. </li></ol> 2. Uçucu tozlama ve bakım <ol><li> Bir saman kullanıyormuş gibi aspiratörün bir ucundan hafifçe emerek ağız aspiratörüne bir sinek yükleyin. Hafifçe üfleme ve ağzı hedefe yönlendirerek sinekleri yatırın. </li><li> Deney için kullanılan her oyuğa bir sinek havalandırın. Bir kuyu yüklendikten sonra üst plakayı kaydırın, böylece sinek oda içine sıkıştırabilir ve diğer kuyuları yüklerken sineğin kaçışını önlemek için odanın tamamı yüklenirken bandın üzerine iyi yerleştirilir. Birden fazla sinek bir şarkının içine asılırsaE, yalnızca bir sinek kalana kadar açıklığı bırakın. </li><li> Gerekli oyukların hepsi sineklerle doldurulduktan sonra, odanın alt plakasının yukarıya gelecek şekilde çevirin; böylece toz, sineklerin ağdan düşerek katını tutma potansiyeline sahiptir. </li><li> Vidaları sıkarak üst ve alt plakları sıkıca sabitleyin ve 4 saniye süreyle sinekleri süpürerek odayı vorteksleyin. </li><li> Boyayı diğer tarafa düştüğü şekilde odacığı (üst plaka aşağı bakacak şekilde) bir masaya iki kez vurun. Ardından, boyayı, üst bölmede tutulan sinekten uzaktaki alt bölmenin zeminde yerleştiğinden emin olmak için bölmeyi çevirin (üst plaka yukarı bakınız) ve bölmeyi iki kez vurun. </li><li> Sinirlenmeye izin verilmeyen kontrol sinekleri için, hemen protokolün 3. Adımına geçin. Testi tamamlayacak sinekler için Adım 2.7&#39;ye geçin. </li><li> Sineklerin damat olmasını sağlamak için odayı bir masa veya tezgah üzerinde, üst plaka ile yukarı doğru otuz dakika yukarıya doğru yatırın. Bölmeyi yerleştirinTüm tımar etme deneyleri (aydınlatma seviyeleri, nem ve sıcaklık) için ortamınızı sabit tutmak için bir gürültüye ve titreşimsiz yere yerleştirin. Oda sıcaklığında veya 25 ° C&#39;de nem kontrollü bir masa üstü kuluçka makinesi idealdir. </li></ol> 3. Numunelerin Hazırlanması ve Absorpsiyon Analizi <ol><li> Üst tabla ile hazne seviyesini yukarı tutarak, yavaşça taban plakasını sökün ve boyayı kaybetmemeye özenerek bölmeden çıkarın. </li><li> Odaları, sinekler anestezi edilinceye kadar düşük hava akımı ile bir Fly CO 2 pedine yerleştirin. </li><li> Bölmeden üst plakayı çıkarın. Bir bacak kapmak için dikkatli bir şekilde forseps kullanın ve her bir odadan bir toz püskürtün ve EtOH içeren 1.5 mL mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin. Her biri bir sinek içeren 15 odacık için transfer süresi yaklaşık 3-5 dakikadır. Deneycilerin, deneylerin verimli bir şekilde hazırlanmasını sağlamak için, birden fazla odayla deneyleri şaşırttığında / aktarma sürelerini dikkate almaları gerekir. </li&gt; <li> Her mikro santrifüj tüpüne 1 sinek bulunduğunda kapağı kapatın ve tüpü çalkalamak için üç kez ters çevirin ve boya ve etanol çözeltisini karıştırın. </li><li> Çözünürlüktaki sinekten boyanın tamamen çıkarılmasını sağlamak için etanol ve sinekler içeren tüpleri oda sıcaklığında 5 saat inkübe edin. 5 saat sonra, sineklerden boyanın temizlenmesini sağlamak için her tüpü (2 saniye) vorteksleyin. </li><li> Plakada bulunan her numunenin yerini not edin, mümkünse, 96 oyuklu bir plakanın bir oyuğuna 50 uL deneysel 1.5 mL tüp ekleyin. Numuneyi 5 kat seyreltmek için 200 μL EtOH ekleyin. Seyreltme, aşırı tozlanmış sineklerin tavan etkilerini veya büyük tımar kusurlarını önler. </li><li> Her numuneyi 397 nm&#39;de analiz etmek için bir plaka okuyucu kullanın. Alternatif olarak, plaka okuyucu yoksa, görünür spektrumdaki standart bir spektrofotometre üzerinde tek tek numuneler ve boşluklar için absorbansı ölçün. </li><li> Numuneyi plak okuyucu ile okuyun ve kaydedin ve elektronik tabloyu recorde ile kaydedinD numuneleri alıyor. </li></ol> 4. Sonuçların Nicelleştirilmesi <ol><li> Tüm örnekler için sonuçları derleyin ve her bir genotip veya durum için varyansı ölçün. NOT: 0 dakika ve 30 dakika sonra Boya birikimi, tek yönlü ANOVA ve Bonferroni düzeltme veya çoklu paralel karşılaştırmalar için diğer düzeltmeler ile istatistiksel analiz kullanılarak ayrı koşullar olarak kabul edilir. </li><li> Aşağıdaki denklemi kullanarak her genotipli / durum için tımar yüzdesi farkını hesaplayın: [(zaman 0&#39;daki boya birikim ortalama değeri - 30&#39;da boya birikim ortalama değeri] / boya biriktirme ortalama değeri 0] x 100. </li><li> Çubuk grafiklerdeki her bir genotip ve durum yüzdesini ifade edin ve genotipler ve koşulları karşılaştırın. </li></ol>

<ol>
	<li>Szebenyi, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleaning+Behaviour+in+Drosophila-Melanogaster.">Cleaning Behaviour in Drosophila-Melanogaster.</a> Animal. Behaviour. 17, (1969).</li><li>Corfas, G., Dudai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Habituation+and+dishabituation+of+a+cleaning+reflex+in+normal+and+mutant+Drosophila.">Habituation and dishabituation of a cleaning reflex in normal and mutant Drosophila.</a> J Neurosci. 9 (1), 56-62 (1989).</li><li>Yanagawa, A., Guigue, A. M. A., Marion-Poll, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hygienic+grooming+is+induced+by+contact+chemicals+in+Drosophila+melanogaster.">Hygienic grooming is induced by contact chemicals in Drosophila melanogaster.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, (2014).</li><li>Dawkins, R., Dawkins, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hierarchical+Organization+and+Postural+Facilitation+-+Rules+for+Grooming+in+Flies.">Hierarchical Organization and Postural Facilitation - Rules for Grooming in Flies.</a> Animal Behaviour. 24 (Nov), 739-755 (1976).</li><li>Seeds, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+suppression+hierarchy+among+competing+motor+programs+drives+sequential+grooming+in+Drosophila.">A suppression hierarchy among competing motor programs drives sequential grooming in Drosophila.</a> Elife. 3, e02951 (2014).</li><li>King, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofibromin+Loss+of+Function+Drives+Excessive+Grooming+in+Drosophila.">Neurofibromin Loss of Function Drives Excessive Grooming in Drosophila.</a> G3-Genes Genomes Genetics. 6 (4), 1083-1093 (2016).</li><li>Tauber, J. M., Vanlandingham, P. A., Zhang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+Levels+of+the+Vesicular+Monoamine+Transporter+and+a+Novel+Repetitive+Behavior+in+the+Drosophila+Model+of+Fragile+X+Syndrome.">Elevated Levels of the Vesicular Monoamine Transporter and a Novel Repetitive Behavior in the Drosophila Model of Fragile X Syndrome.</a> Plos One. 6 (11), e27100 (2011).</li><li>Kaur, K., Simon, A. F., Chauhan, V., Chauhan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+bisphenol+A+on+Drosophila+melanogaster+behavior--a+new+model+for+the+studies+on+neurodevelopmental+disorders.">Effect of bisphenol A on Drosophila melanogaster behavior--a new model for the studies on neurodevelopmental disorders.</a> Behav Brain Res. 284, 77-84 (2015).</li><li>Chang, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+Drosophila+vesicular+monoamine+transporter+increases+motor+activity+and+courtship+but+decreases+the+behavioral+response+to+cocaine.">Overexpression of the Drosophila vesicular monoamine transporter increases motor activity and courtship but decreases the behavioral response to cocaine.</a> Molecular Psychiatry. 11 (1), 99-113 (2006).</li><li>Yellman, C., Tao, H., He, B., Hirsh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+and+sexually+dimorphic+behavioral+responses+to+biogenic+amines+in+decapitated+Drosophila.">Conserved and sexually dimorphic behavioral responses to biogenic amines in decapitated Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 94 (8), 4131-4136 (1997).</li><li>Feng, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+functional+characterization+of+a+novel+dopamine+receptor+from+Drosophila+melanogaster.">Cloning and functional characterization of a novel dopamine receptor from Drosophila melanogaster.</a> Journal of Neuroscience. 16 (12), 3925-3933 (1996).</li><li>Gotzes, F., Balfanz, S., Baumann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Structure+and+Functional-Characterization+of+a+Drosophila+Dopamine-Receptor+with+High+Homology+to+Human+D(1/5).">Primary Structure and Functional-Characterization of a Drosophila Dopamine-Receptor with High Homology to Human D(1/5).</a> Receptors. Receptors &amp; Channels. 2 (2), 131-141 (1994).</li><li>Han, K. A., Millar, N. S., Grotewiel, M. S., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DAMB,+a+novel+dopamine+receptor+expressed+specifically+in+Drosophila+mushroom+bodies.">DAMB, a novel dopamine receptor expressed specifically in Drosophila mushroom bodies.</a> Neuron. 16 (6), 1127-1135 (1996).</li><li>Sugamori, K. S., Demchyshyn, L. L., Mcconkey, F., Forte, M. A., Niznik, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Primordial+Dopamine+D1-Like+Adenylyl+Cyclase-Linked+Receptor+from+Drosophila-Melanogaster+Displaying+Poor+Affinity+for+Benzazepines.">A Primordial Dopamine D1-Like Adenylyl Cyclase-Linked Receptor from Drosophila-Melanogaster Displaying Poor Affinity for Benzazepines.</a> Febs Letters. 362 (2), 131-138 (1995).</li><li>Pitmon, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+D1+family+dopamine+receptor,+DopR,+potentiates+hind+leg+grooming+behavior+in+Drosophila.">The D1 family dopamine receptor, DopR, potentiates hind leg grooming behavior in Drosophila.</a> Genes Brain and Behavior. 15 (3), 327-334 (2016).</li><li>Phillis, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mutations+affecting+neural+circuitry+required+for+grooming+behavior+in+Drosophila+melanogaster.">Isolation of mutations affecting neural circuitry required for grooming behavior in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 133 (3), 581-592 (1993).</li><li>Hampel, S., Franconville, R., Simpson, J. H., Seeds, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+neural+command+circuit+for+grooming+movement+control.">A neural command circuit for grooming movement control.</a> Elife. 4, e08758 (2015).</li><li>Kays, I., Cvetkovska, V., Chen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+analysis+of+single+neurons+to+correlate+synaptic+connectivity+with+grooming+behavior.">Structural and functional analysis of single neurons to correlate synaptic connectivity with grooming behavior.</a> Nature Protocols. 9 (1), 1-10 (2014).</li></ol>

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan eder.

Bakım testi nispeten basittir, ancak deneyanları aşağıdaki hususlara özel dikkat etmeye özen göstereceğiz. Sinekler ve boyayı taktıktan sonra üst ve alt plakalardaki vidaları sıkarak sıkı bir sızdırmazlık korumak tekrarlanabilir sonuçlar için gereklidir. Parlak Sarı boya çok ince ve gevşek derzler odanın kenarlarından boya kaybına izin verecek. Her kuyu için boya içeriğindeki düzensizlik, tımar halindeki olaylar için varyasyon ve sahte pozitif oranları artıracak düzensiz tozlama gibi ...

Drosophila melanogaster ( D. melanogaster ) &#39;de tımarlama , birden fazla bağımsız motor programının koordinasyonunu içeren sağlam bir doğuştan gelen davranıştır 1 . Meyve, toz, mikrop ve diğer patojenler vücutlarını temizler; bu da, görme ve uçuş gibi normal fizyolojik fonksiyonları engelleyebilir veya önemli bağışıklık sorunlarına yol açabilir. Hem mekanik 2 hem de bağışıklık aktivasyonunu 3 algılar ve yanıt verirken, sinekler yeterli derecede temizleninceye ve vücudun bir başka bölümüne doğru ilerleyinceye kadar bacaklarını birlikte ya da hedeflenen bir vücut bölgesine tekrar ovarlar. Sinekler, kalıplaşmış desenler 1 , 4&#39;te büyük oranda ortaya çıkan belirgin vuruşlarda tımar etme hareketleri gerçekleştirirler. Davranışsal bir hiyerarşi, tımar sinyalleri önceliklendirildiğinde ortaya çıkar. Etkinlik devreleri ve kalıpları;hiyerarşinin en üstünde tımar programlar sonradan 5 bakımlı vücut bölgelerinden paralel sinyallerini ilk oluşur ve bastırmak fa modeli. Başa en yüksek öncelik verilir, daha sonra karın, kanatlar ve nihayetinde toraks 5 verilir . D. melanogaster&#39;ın tımar programı, sinirsel devreleri, modüle edici moleküler sinyaller ve nörotransmitterleri incelemek için ideal bir sistemdir. Örneğin, nörofibromin fonksiyonunun 6 uzlaşılması, Drosophila kırılgan X zihinsel gerilik proteininin ( dfmrl ) 7 kaybı ve bisfenol A (BPA) 8&#39;e maruz kalma, aşırı nevrofibromatozis , kırılgan X semptomlarına benzeyen aşırı bakımı ve diğer davranışlara neden olur Sendromu ve otistik spektrum bozukluklarının ve Dikkat Eksikliği Hiperaktivite Bozukluğunun (DEHB) yönlerini içerir. Bakım davranışı aynı zamanda habitua da olabilirBu motor programını davranışsal plastisite çalışmaları için ödünç alan mutant suşlar 2 boyunca farklı şekilde ölçülmüştür. Drosophila tarafından modellenebilen nörolojik olayların genişliği, sineklerin kendilerini damatlama yeteneğini ölçmek için yeni bir karşılaştırmalı yaklaşım gerektirir. Vesiküler monoamin taşıyıcılarının ve vücudun içindeki diğer dopamin ve diğer biyojenik aminlerin bol miktarda biraraya getirilmesinin, meyve sineği tımar etme davranışına aracılık ettiği gösterildi 9 , 10 . Tiramin, oktopamin bir öncüsü, aynı zamanda daha az bir oranda 7 bakım tetikler oktopamin ve dopamin, başları sinekler karşılaştırılabilir Arka bacak bakım aktivitesini uyarır. D. melanogaster 11 , 12 , 13 , 14&#39;te dört dopamin reseptörü tanımlanmıştır </sup&gt;. Bu protokol açıklanan tımar tahlil yöntemi kullanarak, davranış 15 tımar Tip I ailesi Dopamin Reseptör DopR (dilsiz DopR, dDA1) Arka bacak içinde bir rol belirlendi. Bakım dolaylı olarak, bir hayvanın tüm vücudu bir işaretleyici boya veya flüoresan tozu 5 , 16 ile tozladıktan sonra tamamen damat olabileceği temizlik derecesine bakarak nicelleştirilebilir. Vücutta kalan tozun geri kalanı genel davranış için göreceli bir işaretleyici olarak kullanılabilir. Damlamaya yetecek vakit verildikten sonra tozlu sinekler tımar davranışında belirgin bir eksikliği gösterebilirler. Tımar araştırmalar daha geniş olmak gibi, protokoller boyun bağ sinirler 10 üzerine farmakolojik tedaviler ekleme kafaları kesilmek gibi uygulamalar dahil olması, bakım yanıtı 2 ortaya çıkarmak için, kılların dokunsal uyarılmasıVe davranış video kaydı 15 . Tımar doğrudan gözlenmesi, kolaylıkla görsel gözlem ile ve elle belirli bakım etkinlikleri 4 süresini ve sıklığını kaydedilmesiyle incelenebilir. Bir 3B yazıcı veya lazer kesici ile yapılabilecek on beş kuyu bakım odasını tasarladık ve üretim planı tasarımları üreme için hazırdır 15 . Tasarım, sırasıyla sinek ve / veya boya yüklü, örgü ve iki ek kayar üst ve alt plaka ile birbirine uyan açıklıklar olan iki birleştirilmiş merkezi plakalar kullanıyor. Toz haline getirilmiş sinekler damat kılmaya izin verdikten sonra, onları boya çözündürmek ve bu solüsyonun emiciliğini boyanın dalga boyunda ölçmek için etanolde bırakırız. Birden fazla paralel numune için bir plaka okuyucu kullanılabilir veya tekli numuneler için tekli okunur bir spektrofotometre kullanılabilir. Bu yöntem kullanım ve harekete geçirme hatalarını en aza indirir.Daha düşük, daha düşük maliyetli bir ölçekte yapılacak tımar testleri için düşükler. Bu yöntem, elde edilen ve sıcaklığa duyarlı devre manipülasyonlar için 5 ısıtma elemanları ile daha büyük bir bakım odaları kullanımı Julie Simpson ve Andrew tohumları, öncülük metotlardan modifiye edilmiştir. Aşağıdaki protokol, vücudun her bölümünde boya birikiminin nicelleştirilmesi için alternatif yöntemlerin yanı sıra, tüm vücut bakımlarının sayısallaştırılmasını gösterir. Ayrıca, WT ve DopR mutantları arasında örnek karşılaştırma verisinin yanı sıra bakım davranışı için basit bir performans indeksinin hesaplanması için yöntemler sunuyoruz .

<table><tbody><tr><td>High-Flex Tygon PVC Clear Tubing</td><td>McMaster-Carr</td><td>5229K54</td><td>ID 1/8&quot;, OD 1/4&quot;, used with micropipettor tips and mesh to construct mouth aspirators</td></tr><tr><td>Micropipette tips (1 mL and 200 &amp;#956;L)</td><td>Genesee Scientific</td><td>24-165, 24-150R</td><td></td></tr><tr><td>Nylon Mesh Screen, 2 x 2.6&quot;</td><td>McMaster-Carr</td><td>9318T44</td><td>Used to construct grooming chamber and mouth aspirators</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps</td><td>Roboz Surgical Instrument</td><td>RS-5050</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Yellow Dye</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>201375-25G</td><td>we recommend use of nitrile gloves while handling this product</td></tr><tr><td>Vortexer</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-812</td><td>set to &quot;touch&quot;</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>86-1282</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td><td>VWR International</td><td>10025-726</td><td></td></tr><tr><td>0.65 mL microcentrifuge tubes</td><td>VWR International</td><td>20170-293</td><td>tubes can be reused with successive assays</td></tr><tr><td>UV 96-well plate</td><td>Corning</td><td>26014017</td><td></td></tr><tr><td>BioTek Synergy HTX Platereader</td><td>BioTek</td><td>need to download catalog to access product number</td><td>http://www.biotek.com/products/microplate_detection/synergy_htx_multimode_microplate_reader.html?tab=overview</td></tr><tr><td>Gen5 Microplate Reader and Imager Software</td><td>BioTek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td>https://www.microsoftstore.com/store/msusa/en_US/pdp/Excel-2016/productID.323021400?tduid=(65d098c0e83b86c952bdff5b0719c83f)(256380)(2459594)(SRi0yYDlqd0-LI..ql4M2LoZBEhcBljvIA)()</td></tr><tr><td>Drosophila Incubator</td><td>Tritech</td><td>DT2-CIRC-TK</td><td></td></tr><tr><td>1/4&quot; acrylic plastic</td><td>McMaster-Carr</td><td>8473K341</td><td></td></tr><tr><td>8 - 32 nuts</td><td>McMaster-Carr</td><td>90257A009</td><td></td></tr><tr><td>8 - 32 x 1&quot; hex cap screws</td><td>McMaster-Carr</td><td>92185A199</td><td>the bottom plate needs to be tapped for this size screw</td></tr><tr><td>8 - 32 x 1/2&quot; hex cap screws</td><td>McMaster-Carr</td><td>92185A194</td><td>the second plate from the top needs to be tapped</td></tr><tr><td>2 - 56 3/8&quot; flat head phillips machine screws</td><td>McMaster-Carr</td><td>91500A088</td><td>these hold the two middle plates together</td></tr><tr><td>0.175&quot; ID, 1/4&quot; OD, 0.34&quot; aluminum pipe</td><td>McMaster-Carr</td><td>92510A044</td><td>Manufactured in-house; product listed is approximately the same dimensions and should work for size 8 screws.&amp;nbsp; These act as sheaths for the 1&quot; screws and set the hex cap up slightly from the surface of the top plate</td></tr></tbody></table>

quantification of drosophila grooming behavior

Drosophila tımar etme davranışı hem ön hem arka kıskaçların koordine hareketini gerektiren karmaşık, çok adımlı bir lokomotif programdır. Burada, damlama deneyi protokolünü ve Drosophila damatlaştırma konusundaki küçük ölçekli veya büyük ölçekli araştırmalar için uygun maliyetli ve ölçeklendirilebilir yeni oda tasarımı sunuyoruz. Sinekler Brilliant Yellow boya ile vücudun her tarafına tozlanır ve boya oda içindeki bedenlerinden uzaklaştırılması için zaman verilir. Sinekler daha sonra, boya çözündürmek için belirli bir hacimde etanol içine çöker. Dezenilmemiş hayvanlara kıyasla bakımsız hayvanlar için boya etanol numunelerinin göreceli spektral absorbansı ölçülür ve kaydedilir. Protokol, tek tek sinekler için boya birikiminin niceliksel verilerini verir; bunlar kolaylıkla ortalanabilir ve örnekler arasında karşılaştırılabilir. Bu, deneysel tasarımların mutant hayvan çalışmaları veya devre manipülasyonları için damat yeteneğini kolayca değerlendirmesini sağlar. Bu verimli prosedür çok yönlü ve ölçeklenebilir. WOrk akışını ve Drosophila tip I Dopamin Reseptörü ( DopR ) için WT hayvanları ve mutant hayvanlar arasındaki karşılaştırma verileri.

Damatlık tahlilinde, ayarlama için belirlenen bir süre boyunca (30 dakika) sineklerin bedenlerinde kalan biriken boyanın göreli geri kalanına dayanılarak davranış performansını değerlendirmek için niceliksel veriler elde edilir. Sürgülü damat odası tasarımının örnek görüntüleri ve tahlilin ana adımları Şekil 1&#39;de vurgulanmaktadır. Sinekler, boya varlığında vorteks yaparak hemen tozlanma olayından önemli miktarda boya toplarlar ( <stro...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Drosophila Grooming Behavior at JoVE.com

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

Bu protokol, bakım davranışı ölçmek için sağlam, nicel veri üreten, Drosophila&#39;daki ölçeklendirilebilir bireysel bakım tezgah tekniğini tanımlamaktadır. Yöntem, bakımsız ve bakımlı hayvanlar arasındaki boya birikimindeki farkın belirli bir süre boyunca karşılaştırılmasına dayanmaktadır.

Drosophila Bakım Davranışının Nicelleştirilmesi

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...

quantification-of-drosophila-grooming-behavior

Research

JoVE Journal

Neuroscience

9.0K Görüntüleme.  Williams College.  Bu protokol, bakım davranışı ölçmek için sağlam, nicel veri üreten, Drosophila'daki ölçeklendirilebilir bireysel bakım tezgah tekniğini tanımlamaktadır. Yöntem, bakımsız ve bakımlı hayvanlar arasındaki boya birikimindeki farkın belirli bir süre boyunca karşılaştırılmasına dayanmaktadır. 

Video: Quantification of Drosophila Grooming Behavior

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Nörobilim

Drosophila Passive Avoidance Behavior as a New Paradigm to Study Associative Aversive Learning

This protocol describes a new paradigm for analyzing aversive associative learning in adult flies (Drosophila melanogaster). The paradigm is analogous to passive avoidance behavior in laboratory rodents in which animals learn to avoid a compartment where they have previously received an electric shock. The assay takes advantage of negative geotaxis in flies, which manifests as an urge to climb up when they are placed on a vertical surface. The setup consists of vertically oriented upper and lower compartments. On the first trial, a fly is placed into a lower compartment from where it usually exits&#160;within 3-15 s, and steps into the upper compartment where it receives an electric shock. During the second trial, 24 h later, the latency is significantly increased. At the same time, the number of shocks is decreased compared to the first trial, indicating that flies formed long-term memory about the upper compartment. The recordings of latencies and number of shocks could be performed with a tally counter and a stopwatch or with an Arduino-based simple device. To illustrate how the assay can be used, the passive avoidance behavior of D. melanogaster and D. simulans male and female were characterized here. Comparison of latencies and number of shocks revealed that both D. melanogaster and D. simulans flies efficiently learned the passive avoidance behavior. No statistical differences were observed between male and female flies. However, males were a little faster while entering the upper compartment on the first trial, while females received a slightly higher number of shocks in every retention trial. The Western diet (WD) significantly impaired learning and memory in male flies while flight exercise counterbalanced this effect. Taken together, the passive avoidance behavior in flies offers a simple and reproducible assay that could be used for studying basic mechanisms of learning and memory.

Drosophila Passive Avoidance Behavior as a New Paradigm to Study Associative Aversive Learning

This work describes a simple behavioral paradigm that allows the analysis of aversive associative learning in adult fruit flies. The method is based on suppressing the innate negative geotaxis behavior due to the association formed between a specific environmental context and an electric shock.

Drosophila İlişkisel Aversive Öğrenmeyi İncelemek İçin Yeni Bir Paradigma Olarak Pasif Kaçınma Davranışı

This protocol describes a new paradigm for analyzing aversive associative learning in adult flies (Drosophila melanogaster). The paradigm is analogous to ...

Davranış

Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

Drosophila melanogaster is a powerful experimental model system for studying the function of the nervous system. Gene mutations that cause dysfunction of the nervous system often produce viable larvae and adults that have locomotion defective phenotypes that are difficult to adequately describe with text or completely represent with a single photographic image. Current modes of scientific publishing, however, support the submission of digital video media as supplemental material to accompany a manuscript. Here we describe a simple and widely accessible microscopy technique for acquiring high-quality digital video of both Drosophila larval and adult phenotypes from a lateral perspective. Video of larval and adult locomotion from a side-view is advantageous because it allows the observation and analysis of subtle distinctions and variations in aberrant locomotive behaviors. We have successfully used the technique to visualize and quantify aberrant crawling behaviors in third instar larvae, in addition to adult mutant phenotypes and behaviors including grooming.

Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

Here we describe a simple and widely accessible microscopy technique to acquire high-quality digital video of Drosophila adult and larval mutant phenotypes from a lateral perspective.

Yüksek-Kalite Dijital Video Edinme<em&gt; Drosophila</em&gt; Bir Yanal Perspektifinden Larva ve Yetişkin Davranışları

Drosophila melanogaster is a powerful experimental model system for studying the function of the nervous system. Gene mutations that cause dysfunction of ...

<meta charset="utf8"></head><body>Fare Modellerinde Otizm Spektrum Bozukluğu için Davranışsal Deneyler

Strategies for Assessing Autistic-Like Behaviors in Mice

Autism spectrum disorder (ASD) is a neurobiologically complex condition with a heterogeneous genetic etiology. Clinically, ASD is diagnosed by social communication impairments and restrictive or repetitive behaviors, such as hand flapping or lining up objects. These behavioral patterns can be reliably observed in mouse models with ASD-linked genetic mutations, making them highly useful tools for studying the underlying cellular and molecular mechanisms in ASD. Understanding how genetic changes affect the neurobiology and behaviors observed in ASD will facilitate the development of novel targeted therapeutic compounds to ameliorate core behavioral impairments. Our lab has employed several protocols encompassing well-described training and testing procedures that reflect a wide range of behavioral deficits related to ASD. Here, we detail two assays to study the core features of ASD in mouse models: self-grooming (a measure of repetitive behavior) and the three-chamber social interaction test (a measure of social interaction approach and preference for social novelty).

<meta charset="utf8"></head><body>Farelerde Otistik Benzeri Davranışları Değerlendirme Stratejileri

Rodent models are valuable tools for studying core behaviors related to autism spectrum disorder (ASD). In this article, we expound on two behavioral tests for modeling the core features of ASD in mice: self-grooming, which assesses repetitive behavior, and the three-chamber social interaction test, which documents social impairments.

Farelerde Otistik Benzeri Davranışları Değerlendirme Stratejileri

Autism spectrum disorder (ASD) is a neurobiologically complex condition with a heterogeneous genetic etiology. Clinically, ASD is diagnosed by social ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To complicate matters even further, the odors detected by the insect nervous system usually are not single compounds but mixtures whose composition and concentration ratios vary. This leads to an almost infinite amount of different olfactory stimuli which have to be evaluated by the nervous system.
To understand which aspects of an odor stimulus determine its evaluation by the fly, it is therefore desirable to efficiently examine odor-guided behavior towards many odorants and odor mixtures. To directly correlate behavior to neuronal activity, behavior should be quantified in a comparable time frame and under identical stimulus conditions as in neurophysiological experiments. However, many currently used olfactory bioassays in Drosophila neuroethology are rather specialized either towards efficiency or towards resolution.
Flywalk, an automated odor delivery and tracking system, bridges the gap between efficiency and resolution. It allows the determination of exactly when an odor packet stimulated a freely walking fly, and to determine the animal&#180;s dynamic behavioral reaction.

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

The automated tracking system Flywalk is used for high-resolution quantification of odor-guided behavior in Drosophila melanogaster.

Koku kılavuzluğunda Davranış Yüksek çözünürlüklü Niceleme<em&gt; Drosophila melanogaster</emKullanma&gt;<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigma

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

Arasında Mechanosensation için bir davranış tahlilinde klonlarda MARCM tabanlı<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model organisms such as the fruit fly, Drosophila melanogaster. Drosophila is useful for understanding the basic neurobiology underlying cognitive deficits resulting from mutations in genes associated with human cognitive disorders, such as intellectual disability (ID) and autism. This work describes a methodology for testing learning and memory using a classic paradigm in Drosophila known as courtship conditioning. Male flies court females using a distinct pattern of easily recognizable behaviors. Premated females are not receptive to mating and will reject the male&#39;s copulation attempts. In response to this rejection, male flies reduce their courtship behavior. This learned reduction in courtship behavior is measured over time, serving as an indicator of learning and memory. The basic numerical output of this assay is the courtship index (CI), which is defined as the percentage of time that a male spends courting during a 10 min interval. The learning index (LI) is the relative reduction of CI in flies that have been exposed to a premated female compared to na&#239;ve flies with no previous social encounters. For the statistical comparison of LIs between genotypes, a randomization test with bootstrapping is used. To illustrate how the assay can be used to address the role of a gene relating to learning and memory, the pan-neuronal knockdown of Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase (Dhap-at) was characterized here. The human ortholog of Dhap-at, glyceronephosphate O-acyltransferase (GNPT), is involved in rhizomelic chondrodysplasia punctata type 2, an autosomal-recessive syndrome characterized by severe ID. Using the courtship conditioning assay, it was determined that Dhap-at is required for long-term memory, but not for short-term memory. This result serves as a basis for further investigation of the underlying molecular mechanisms.

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

This protocol describes a Drosophila learning and memory assay called courtship conditioning. This classic assay is based on a reduction of male courtship behavior after sexual rejection by a non-receptive premated female. This natural form of behavioral plasticity can be used to test learning, short-term memory, and long-term memory.

Öğrenme ve Bellek Tedrisi Olan Drosophila Kurbanlığı İklimlendirme

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model ...

Drosophila Otizm Spektrum Bozukluğunun Genetik ve Davranışsal Özelliklerine İlişkin Modeller

Paradigms for Behavioral Assessment in Drosophila Model of Autism Spectrum Disorder

Autism Spectrum Disorder (ASD) encompasses a heterogeneous group of neurodevelopmental disorders with common behavioral symptoms including deficits in social interaction and ability for communication, enhanced restricted or repetitive behaviors, and also, in some cases, learning disability and motor deficit. Drosophila has served as an unparalleled model organism for modeling a great number of human diseases. As many genes have been implicated in ASD, fruit flies have emerged as a powerful and efficient way to test the genes putatively involved with the disorder. As hundreds of genes, with varied functional roles, are implicated in ASD, a single genetic fly model of ASD is unfeasible; instead, individual genetic mutants, gene knockdowns, or overexpression-based studies of the fly homologs of ASD-associated genes are the common means for gaining insight regarding molecular pathways underlying these gene products. A host of behavioral techniques are available in Drosophila which provide easy readout of deficits in specific behavioral components. Social space assay and aggression and courtship assays in flies have been shown to be useful in assessing defects in social interaction or communication. Grooming behavior in flies is an excellent readout of repetitive behavior. Habituation assay is used in flies to estimate the ability for habituation learning, which is found to be affected in some ASD patients. A combination of these behavioral paradigms can be utilized to make a thorough assessment of the human ASD-like disease state in flies. Using Fmr1 mutant flies, recapitulating Fragile-X syndrome in humans, and POGZ-homolog row knockdown in fly neurons, we have shown quantifiable deficits in social spacing, aggression, courtship behavior, grooming behavior, and habituation. These behavioral paradigms are demonstrated here in their simplest and straightforward forms with an assumption that it would facilitate their widespread use for research on ASD and other neurodevelopmental disorders in fly models.

Yazar Spotlight: Meyve Sineklerinde Otizm Spektrum Bozukluğu Belirtilerini Keşfetmek — Genetik Modeller ve Davranışsal Testler

Autism Spectrum Disorder (ASD) is associated with impaired social and communicative behavior and the emergence of repetitive behavior. For studying the interrelation between ASD genes and behavioral deficits in the Drosophila model, five behavioral paradigms are described in this paper for assaying social spacing, aggression, courtship, grooming, and habituation behavior.

Otizm Spektrum Bozukluğunun Drosophila Modelinde Davranışsal Değerlendirme Paradigmaları

Autism Spectrum Disorder (ASD) encompasses a heterogeneous group of neurodevelopmental disorders with common behavioral symptoms including deficits in ...

Drosophila Bakım Davranışının Nicelleştirilmesi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Drosophila İlişkisel Aversive Öğrenmeyi İncelemek İçin Yeni Bir Paradigma Olarak Pasif Kaçınma Davranışı

Yüksek-Kalite Dijital Video Edinme

Farelerde Otistik Benzeri Davranışları Değerlendirme Stratejileri

Farelerde Otistik Benzeri Davranışları Değerlendirme Stratejileri

Farelerde Otistik Benzeri Davranışları Değerlendirme Stratejileri

Koku kılavuzluğunda Davranış Yüksek çözünürlüklü Niceleme

Arasında Mechanosensation için bir davranış tahlilinde klonlarda MARCM tabanlı

Öğrenme ve Bellek Tedrisi Olan Drosophila Kurbanlığı İklimlendirme

Otizm Spektrum Bozukluğunun Drosophila Modelinde Davranışsal Değerlendirme Paradigmaları