The authors thank Mike Crickmore, Dragana Rogulja, and Michelle Frank for comments on the manuscript. Pavel Gorelik provided technical support for manufacturing the behavioral arenas. This work was conducted in Mike Crickmore's lab and is also supported by the Whitehall Foundation (Principal Investigator: Dragana Rogulja). S.X.Z. is a Stuart H.Q. and Victoria Quan Fellow at Harvard Medical School.

NOT: Bu protokol hazırlanması (Bölüm 1-3) açıklar, yürütme (Bölüm 4), ve analiz 2-D tokluk tahlillerin (Bölüm 4). Sonra, bir örnek olarak dopaminerjik stimülasyon kullanarak, Bölüm 5 hiperseksüalite ikna etmek için 2-D tokluk deneyleri ile thermogenetic stimülasyon birleştirmek nasıl gösterir. Bölüm 6 2-D tokluk deneyleri sonuçları doğrulamak için 3 yolları anlatılmaktadır. Son olarak, Bölüm 7 erkek sinekler çiftleşme sürücünün kurtarma ölçmek için nasıl gösterir. 1. 8 ve 32 odası Davranış Arenas Fabricating Not: her davranış Arena dört köşe (Şekil 1A) her birinde altıgen vida ve başparmak somunları ile bir arada tutulan, lazer kesme plastik levhalar birkaç tabakadan oluşur. <ol><li> arena katmanları Üretiyor. Uygun şekline akrilik plastik levha kesmek için lazer kesici kullanarak her katmanı Üretiyor (Şekil 1B, 1C ürünler için bakınız). NOT: Birçok araştırma institutions kendi makine dükkan veya yapıcı alanlarda lazer kesiciler var. Kurum bir lazer kesici erişimi varsa, aşağıdaki adımlarla devam edin. Değilse, o zaman yerine Adım 1.2 yönergeleri izleyin. <ol><li> Her bir katman için, lazer kesicinin yazılımında tasarım deseni açın. NOT: tasarımlar uygun adlandırılmış PDF dosyalarında bulunabilir (örneğin, 8-Chamber Arena - Katman 2 - Doors.pdf) Ltd. Malzeme 1. Bu dosya aynı zamanda plastik türü için açıklamaları içeren kullanılmak üzere (örneğin, 1 / 8 inç (yani 3.175 mm) net akrilik). Her bir katmanın tam kalınlığı kritik değildir. ana şartı odalarında 0.12 inç (3 mm) veya serbest dikey alanı daha fazla olanak sağlamaktır. </li><li> Çeşidi ve plastik kalınlığı lazer ayarları (güç, odak vs.) ayarlama kullanılır. Lazer kesici yatakta plastik yerleştirin ve lazer kesici çalıştırın. NOT: Bu ayarlar yaygın lazer cutte göre değişirr modeli ve lazer gücü. Geçmiş deneyimlere veya hurda plastik test kesikler yaparak göre uygun ayarları bulun. Derin altıgen gravürler altıgen vida başları girinti tasarım dahil edilir. Bu özellik, başparmak fındık tek elle sıkılaştırma sağlar ve arenalar (vida başları çıkıntılı olmadan) bankta düz dinlenmesini sağlar. Bununla birlikte, derin gravürler yaparak sık sık elde etmek zor ve zaman alıcı bir lazer kesici kullanıyor. Bu adım isteğe bağlıdır ve davranışsal sonuçları etkilemeden atlanabilir. </li><li> Kapı çerçevesi (Katman 2, Şekil 1A) keserken, aynı zamanda (Şekil 1B, 1C gibi) tasarıma dahil bölme numaraları oyularak için uygun lazer ayarlarını kullanır. </li></ol></li><li> Bir online lazer kesme fabrikatör bir sipariş. Malzeme tip 8- ve / veya 32 odalı arena tüm PDF tasarım dosyalarını yükleyin ve belirtin (örneğin, 1/8 inç (yani 3.175 mm) Cleadosyaları ek açıklamaları dayalı r akrilik). Sonuçlar Şekil 1B (8 odacıklı arena) ve 1C (32 odacıklı arena) olarak görünecektir. </li><li> Hizalamak ve birlikte plastik tabakaları (Şekil 1A) tutmak için dört altıgen vida ve dört parmak somun kullanarak arenalarda birleştirin. Arenalar Şekil 1D, 1E (8 odacıklı) ve Şekil 1F, 1G (32 odacıklı) olarak görünecektir. Not: (Şekil 1A Katman 4) Gıda duvarı sadece 2-B doyma deneyleri için kullanılır ve kur deneylerinde kullanılan 32 bölmeli sahalarda atlandı. </li></ol> 2-D Satiety Testi için 2. Gıda Hazırlama NOT: 2-D tokluk tahlil 4.5 saat yayılan Çünkü, gıda beslenme ve su sağlamak için arenada kullanılır sinek. Bu protokol kullanmaktadır, ama geleneksel mısır unu-Agar gıda kalkan ile sınırlı değildir. <ol><li> Kısmen Katmanlar 2-D tokluk arena (8 odacıklı) monte 3-6(katman atamaları için Şekil 1A) ve başparmak fındık ve altıgen vida ile sıkın. </li><li> Temiz, mikrodalga güvenli şişeye taze sinek gıda yerleştirin. Şişe (Şekil 2A) alt yüzeyini kaplamak için yeterli miktarda su ilave edilir. </li><li> 45 sn - 30 yüksek mikrodalga yiyecek. Ilerlemeyi kontrol edin ve (Şekil 2B) eriyene kadar her 15 sn karıştırın. DİKKAT! Fly gıda kolayca kaynar. </li><li> Yavaş yavaş ml her odanın (Şekil 2B) içine yiyecek erimiş 1 ~ aktarmak için körelmiş 1000 mcL pipet (Şekil 2C) kullanın. </li><li> Gıda alanını tamamen (Şekil 2F) monte edilmeden önce, 10 dakika (Şekil 2E) + 4 ° C&#39;de yeniden katılaşmasına imkan verin. </li><li> 4 ° C&#39;de tamamlanan deneyler için arena (Bakınız Bölüm 4) ya da mağaza kullanın. </li><li> 4 ° C ve yeniden de artık yiyecek saklamak. </li></ol> 3. Davranış Tahliller için Virgin Females hazırlanması NOT: - standart yöntemler kullanılarak toplamak zordur (tam davranış arenada 160 ~ 120) 2-D tokluk deneyleri bakire kadın sinekler çok sayıda kullanın. Bu bölümde kur deneyleri 25, 29 yılında başarıyla kullanılmaktadır Y kromozomu 28, hs-sakladı transgen kullanarak alternatif bir yaklaşım anlatılmaktadır. Beyaz gözlü bakire kadın oluşturmak için kullanılan stok genotip w1118 (X) / hs-hid (Y) vardır; + / + + / + (Bloomington stok numarası 24638). <ol><li> Kapak kez 20 yeni bir şişe içine uçar - pupa% 50 eclosed var (örneğin Şekil 3A) ve yeterli erkek (5 - 10) vardır stok yaymak için. </li><li> Isı yeterince (Şekil 3B) erkekleri öldürmek için hs-HID aktive 1 saat için 37 ° C sıcak su banyosunda orijinal şişe şok. ısı şokundan sonra, sadece kadın bu şişelerden Eclose ve böylece kadar bakire kalırtahlilleri. NOT: (su hattı için Şekil 3A bakınız) şişenin tüm tarafların eşit ısıtılır emin olun. 1 saat tüm erkekleri euthanize için yeterli değilse, en fazla 2 saat süreyle bu süreyi uzatmak. </li><li> Onlar 25, 29 cinsel alıcı olacak kadar yaşlı olduğundan emin olmak için deneyler önce en az 3 gün toplanan kadın izole edin. NOT: Y-kromozomu-az erkekler bazen bu stoktan ortaya çıkar. Bu erkekler beyaz gözleri var ve onlar hs-sakladı transgen içermemesi nedeniyle ısı şoku etkilenmez. Onlar, 31 kadın 30 reseptiviteyi azaltmak olamaz, bu nedenle sperm üretmek ve olamaz. </li></ol> 4. Gösteri ve 2-D Tokluk Tahliller Puanlama NOT: erkek yaşı ile çiftleşme sürücü değişiklikleri gibi uçar kontrol etmek önemlidir. Bu protokol 3 olan erkek kullanır - 4 d eski 25 </sus&gt;. <ol><li> Istenen sıcaklığa (örn 23 ° standart C RT deneyler) ve nem (&gt;% 30) ile kuluçka ayarlayın. inkübatör bir bardak su bırakarak nem kontrolü olmadan kuvöz için yeterlidir. </li><li> sıcaklık dengelenmesi için ve deney sırasında odalarına yoğunlaşmayı önlemek için ~ için inkübatör 30 dakika bir 2-B tokluk tahlil arena yerleştirin. döner kapıları açık pozisyonda olmalıdır. </li><li> Arena (Şekil 4) her odasına 20 bakire kadın - 15 aspire bir sinek aspiratör 32 kullanın. NOT: Bu kadın ve erkekler deneyi ile aynı günde anestezi değildir önemlidir. Bizim tecrübelerimize göre, bunu yaparken kadın reseptivitede ve erkek çiftleşme davranışı etkileyebilir. </li><li> Her odasına aspire 1 erkek. </li><li> 4.5 saat için standart tüketici kamera (Şekil 5) ve filmin altında inkübatörde yüklenen arena yerleştirin. </li><li> Her erkek başlar sinek ve her çiftleşme (yani çiftleşmeye) sona erdiğinde belirterek videoları puan. Bu adım zaman alıcı ilk başta olabilir. Uygulama ile, bir 5x hızında veya daha yüksek video skor olabilir. NOT: sinekler ~ 23 ° C (yüksek sıcaklıklarda kısa süreli) 29 de ~ 20 dakika dostum bu yana, her biri çiftleşme ilk 15 dakika boyunca gözden geçirebilir. </li><li> Tüm çiftleşme kez yaptıktan sonra, her sinek için çiftleşmelerin sayısını toplamı (temsilci Sonuçları bakınız). </li><li> Bir ethogram oluşturmak için sağlanan kodu kullanın. kod, talimatlar ve örnek veriler için ek Malzeme 2&#39;ye bakınız. </li><li> Onları çıkarmadan önce sinekler uyutmak için CO 2 veya soğuk sıcaklık kullanın. </li></ol> 5. 2-D Satiety Tahliller tokluk Ters Thermogenetic Manipülasyon kullanma NOT: tanımlanmış nöronal nüfusun thermogenetic stimülasyon tokluk üstesinden olup olmadığını Bu protokol testleri. deneysel flies nöronların (UAS-TrpA1) tanımlanmış toplumlarda ısıya duyarlı katyon kanalı TrpA1 ifade eder. Aşağıdaki adımlar, eşleşen tahrik 25 teşvik ettiği gösterilmiştir dopaminerjik nöronlar (TH-Gal4), uyarılması için de geçerlidir. Bu adımlar, eşleşen tahrik teşvik eden başka popülasyonları keşfetmek için diğer nöronal sürücülerle bağlantılı olarak kullanılabilir. <ol><li> Thermogenetically inkübatör sıcaklık artışı, tok sinekler birleşme davranışa yol açma (örneğin, 23 ° C ila 28.5 ° C) tam bir 4.5 saat 2-B doyma deney tamamlandıktan sonra. </li><li> Inkübatör istenen sıcaklığa ulaştıktan sonra, ısı uyarımı devam ve 1 saat (Temsilcisi Sonuçlar bakınız) çiftleşmesi (yani. Çiftleştirerek) erkeklerin puan. Not: hala Robu üretirken nöronların fazla stimüle olmasına engel uygun koşulları gidermek için gerekli olan şekilde uyarım sıcaklık ve uzunluk genotipine bağlı olarak değişiklik gösterebilirst fenotip. </li></ol> 6. tokluk hissini doğrulayın Kur yapma ve hareket Kullanma NOT: Bu bölümde 2-D tokluk deneylerinin sonuçlarını doğrulamak için kullanılabilecek 3 isteğe bağlı yöntemler açıklanır. Her tahlil için gerekli değildir. <ol><li> tokluk doğrulamak için kur deneyleri kullanın. <ol><li> Aspire bir erkek ve bir kur arenada 32 odaların her birine bir bakire kadın. </li><li> Bir standart tüketici video kamera kullanılarak 20 dakika ~ için sinekler filmi. </li><li> Kur 25 ölçmek için kur endeksi (CI) Skoru; Bu kur davranışı gerçekleştirmek geçirdi (vb aşağıdaki şarkı.) zaman ve 5 dk penceresi üzerinde (yani çiftleşmeye) çiftleşme bölümüdür. Bu pencere kur davranışı ilk örneği başlar. Bir erkek sinek ilk 15 dakika içinde kur başlamazsa, onun CI tamamen tok sinek CI b olmalıdır oysa 0. Naif WT sinekler, 0.9 den CI büyük göstermesi gerekir ise0.2 elow. Diğer kur önlemler, 33 23 düşünülebilir. </li></ol></li><li> 2-D tokluk deneyleri Puanlama kur <ol><li> 2-B tokluk deneyinin bir zaman süresi (örneğin, ad, H) üzerinde bir erkek sinek kur harcadığı süreyi puan. Kur ritüel her türlü adımı (vb takiben şarkı) gerçekleştiren erkek olarak tanımlanır. Bölüm 6.1.3 aksine, bu adım erkek çiftleşme harcadığı zamanı içermez. </li><li> Erkek aynı dönemde (yani copulating değil) çiftleşme değil, toplam zaman yukarıdaki kur süresini bölün. (- 20 dakika 60 dakika) = 0,375 erkek ilk saat içinde 20 dakika süre ile, 15 dakika boyunca kortları ve arkadaşları hedefi, örneğin, bu oran 15 dakika / olup. oran Temsilcisi Sonuçlar &quot;kur zaman nonmating bir Kesir&quot; olarak gösterilir. </li></ol></li><li> tükenme değerlendirmek için hareket testi kullanılarak <ol><li> Kısmen 32- arayaTüm parçaları ancak kontrast levha ile bölme arena. </li><li> Bir kur arenada 32 odaların her birine aspire bir erkek sinek (hiçbir kadın sinekler). </li><li> Bir standart tüketici video kamera kullanılarak 10 dakika ~ için sinekler filmi. </li><li> ImageJ (http://valelab.ucsf.edu/~nstuurman/ijplugins/MTrack2.html) &#39;de MTrack2 eklentisi ile sinekler izleyin. </li></ol></li></ol> 2-D Satiety Testi sonra Çiftleşme Drive kurtarma 7. <ol><li> Bölüm 4&#39;te açıklandığı gibi 2-D tokluk tahlil gerçekleştirin, ancak erkek testin sonunda dışarı uçar aspire. </li><li> gün istenen sayıda, 23 ° C&#39;de bir erkek sinekler izole edin. </li><li> Kurtarılan erkek ile bir 2-B tokluk tahlil gerçekleştirin ve sadece 1 saat (Temsilcisi Sonuçlar bakınız) onların çiftleşmesi (yani çiftleştirerek) puan. </li></ol>

<ol>
	<li>Sturtevant, A. H., Bridges, C. B., Morgan, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatial+relations+of+genes.">The spatial relations of genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 5 (5), 168-173 (1919).</li><li>Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).</li><li>Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systems+Approaches+to+Biological+Rhythms+in+Drosophila.">Systems Approaches to Biological Rhythms in Drosophila.</a> Methods in Enzymology. 393, 61-185 (2005).</li><li>Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho+GTPases+in+neuronal+morphogenesis.">Rho GTPases in neuronal morphogenesis.</a> Nature reviews. Neuroscience. 1 (3), 173-180 (2000).</li><li>Schmucker, D., Clemens, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+Dscam+Is+an+Axon+Guidance+Receptor+Exhibiting+Extraordinary+Molecular+Diversity.">Drosophila Dscam Is an Axon Guidance Receptor Exhibiting Extraordinary Molecular Diversity.</a> Cell. 101 (6), 671-684 (2000).</li><li>Jan, Y. N., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLH+proteins,+fly+neurogenesis,+and+vertebrate+myogenesis.">HLH proteins, fly neurogenesis, and vertebrate myogenesis.</a> Cell. 75 (5), 827-830 (1993).</li><li>Stockinger, P., Kvitsiani, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+circuitry+that+governs+Drosophila+male+courtship+behavior.">Neural circuitry that governs Drosophila male courtship behavior.</a> Cell. 121 (5), 795-807 (2005).</li><li>Yu, J. Y., Kanai, M. I., Demir, E., Jefferis, G. S. X. E., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Organization+of+the+Neural+Circuit+that+Drives+Drosophila+Courtship+Behavior.">Cellular Organization of the Neural Circuit that Drives Drosophila Courtship Behavior.</a> Current biology. 20 (18), 1602-1614 (2010).</li><li>Zhou, C., Pan, Y., Robinett, C. C., Meissner, G. W., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+Brain+Neurons+Expressing+doublesex+Regulate+Female+Receptivity+in+Drosophila.">Central Brain Neurons Expressing doublesex Regulate Female Receptivity in Drosophila.</a> Neuron. 83 (1), 149-163 (2014).</li><li>Rideout, E. J., Dornan, A. J., Neville, M. C., Eadie, S., Goodwin, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+sexual+differentiation+and+behavior+by+the+doublesex+gene+in+Drosophila+melanogaster.">Control of sexual differentiation and behavior by the doublesex gene in Drosophila melanogaster.</a> Nature neuroscience. 13 (4), 458-466 (2010).</li><li>Manoli, D. S., Foss, M., Villella, A., Taylor, B. J., Hall, J. C., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male-specific+fruitless+specifies+the+neural+substrates+of+Drosophila+courtship+behaviour.">Male-specific fruitless specifies the neural substrates of Drosophila courtship behaviour.</a> Nature. 436 (7049), 395-400 (2005).</li><li>Kimura, K. I., Ote, M., Tazawa, T., Yamamoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fruitless+specifies+sexually+dimorphic+neural+circuitry+in+the+Drosophila+brain.">Fruitless specifies sexually dimorphic neural circuitry in the Drosophila brain.</a> Nature. 438 (7065), 229-233 (2005).</li><li>Cachero, S., Ostrovsky, A. D., Yu, J. Y., Dickson, B. J., Jefferis, G. S. X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphism+in+the+fly+brain.">Sexual dimorphism in the fly brain.</a> Current biology. 20 (18), 1589-1601 (2010).</li><li>Clowney, E. J., Iguchi, S., Bussell, J. J., Scheer, E., Ruta, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodal+Chemosensory+Circuits+Controlling+Male+Courtship+in+Drosophila.">Multimodal Chemosensory Circuits Controlling Male Courtship in Drosophila.</a> Neuron. 87 (5), 1036-1049 (2015).</li><li>Kallman, B. R., Kim, H., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excitation+and+inhibition+onto+central+courtship+neurons+biases+Drosophila+mate+choice.">Excitation and inhibition onto central courtship neurons biases Drosophila mate choice.</a> eLife. 4, e11188 (2015).</li><li>von Philipsborn, A. C., Liu, T., Yu, J. Y., Masser, C., Bidaye, S. S., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+control+of+Drosophila+courtship+song.">Neuronal control of Drosophila courtship song.</a> Neuron. 69 (3), 509-522 (2011).</li><li>Zhou, C., Franconville, R., Vaughan, A. G., Robinett, C. C., Jayaraman, V., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+neural+circuitry+mediating+courtship+song+perception+in+male+Drosophila.">Central neural circuitry mediating courtship song perception in male Drosophila.</a> eLife. 4, e08477 (2015).</li><li>Kohatsu, S., Koganezawa, M., Yamamoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+contact+activates+male-specific+interneurons+that+trigger+stereotypic+courtship+behavior+in+Drosophila.">Female contact activates male-specific interneurons that trigger stereotypic courtship behavior in Drosophila.</a> Neuron. 69 (3), 498-508 (2011).</li><li>Kohatsu, S., Yamamoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visually+induced+initiation+of+Drosophila+innate+courtship-like+following+pursuit+is+mediated+by+central+excitatory+state.">Visually induced initiation of Drosophila innate courtship-like following pursuit is mediated by central excitatory state.</a> Nature Communications. 6, 6457 (2015).</li><li>Fan, P., Manoli, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+neural+mechanisms+that+inhibit+Drosophila+from+mating+with+other+species.">Genetic and neural mechanisms that inhibit Drosophila from mating with other species.</a> Cell. 154 (1), 89-102 (2013).</li><li>Kurtovic, A., Widmer, A., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+class+of+olfactory+neurons+mediates+behavioural+responses+to+a+Drosophila+sex+pheromone.">A single class of olfactory neurons mediates behavioural responses to a Drosophila sex pheromone.</a> Nature. 446 (7135), 542-546 (2007).</li><li>Ejima, A., Smith, B. P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generalization+of+Courtship+Learning+in+Drosophila+Is+Mediated+by+cis-Vaccenyl+Acetate.">Generalization of Courtship Learning in Drosophila Is Mediated by cis-Vaccenyl Acetate.</a> Current Biology. 17, 599-605 (2007).</li><li>Keleman, K., Vrontou, E., Kr&#252;ttner, S., Yu, J. Y., Kurtovic-Kozaric, A., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+neurons+modulate+pheromone+responses+in+Drosophila+courtship+learning.">Dopamine neurons modulate pheromone responses in Drosophila courtship learning.</a> Nature. 489 (7414), 145-149 (2012).</li><li>Pan, Y., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Identification+and+Separation+of+Innate+and+Experience-Dependent+Courtship+Behaviors+in+Drosophila.">Genetic Identification and Separation of Innate and Experience-Dependent Courtship Behaviors in Drosophila.</a> Cell. 156 (1-2), 236-248 (2014).</li><li>Zhang, S. X., Rogulja, D., Crickmore, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+Circuitry+Underlying+Mating+Drive.">Dopaminergic Circuitry Underlying Mating Drive.</a> Neuron. 91 (1), 168-181 (2016).</li><li>Bowers, M. B., Van Woert, M., Davis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+behavior+during+L-dopa+treatment+for+Parkinsonism.">Sexual behavior during L-dopa treatment for Parkinsonism.</a> The American journal of psychiatry. 127 (12), 1691-1693 (1971).</li><li>Sacks, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Awakenings. , (1999).</li><li>Dietzl, G., Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila.">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li><li>Crickmore, M. A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposing+dopaminergic+and+GABAergic+neurons+control+the+duration+and+persistence+of+copulation+in+Drosophila.">Opposing dopaminergic and GABAergic neurons control the duration and persistence of copulation in Drosophila.</a> Cell. 155 (4), 881-893 (2013).</li><li>Peng, J., Chen, S., Busser, S., Liu, H., Honegger, T., Kubli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gradual+Release+of+Sperm+Bound+Sex-Peptide+Controls+Female+Postmating+Behavior+in+Drosophila.">Gradual Release of Sperm Bound Sex-Peptide Controls Female Postmating Behavior in Drosophila.</a> Current biology. 15 (3), 207-213 (2005).</li><li>Yapici, N., Kim, Y. J., Ribeiro, C., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+receptor+that+mediates+the+post-mating+switch+in+Drosophila+reproductive+behaviour.">A receptor that mediates the post-mating switch in Drosophila reproductive behaviour.</a> Nature. 451 (7174), 33-37 (2008).</li><li>Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Sensillum+Recordings+in+the+Insects+Drosophila+melanogaster+and+Anopheles+gambiae.">Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae.</a> Journal of Visualized Experiments. 36 (36), 1-5 (2010).</li><li>Cook, R., Cook, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Attractiveness+to+males+of+female+Drosophila+melanogaster:+effects+of+mating,+age+and+diet.">The Attractiveness to males of female Drosophila melanogaster: effects of mating, age and diet.</a> Animal behaviour. 23, 521-526 (1975).</li><li>Toates, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Motivational Systems (Problems in the Behavioural Sciences). , (1986).</li><li>Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mating+of+a+fly.">The mating of a fly.</a> Science. 264 (5166), 1702-1714 (1994).</li><li>Simpson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+and+manipulating+neural+circuits+in+the+fly+brain.">Mapping and manipulating neural circuits in the fly brain.</a> Advances in genetics. 65 (9), 79-143 (2009).</li><li>Venken, K. J. T., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Manipulation+of+Genes+and+Cells+in+the+Nervous+System+of+the+Fruit.">Genetic Manipulation of Genes and Cells in the Nervous System of the Fruit.</a> Neuron. 72 (2), 202-230 (2011).</li><li>Klapoetke, N. C., Murata, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+optical+excitation+of+distinct+neural+populations.">Independent optical excitation of distinct neural populations.</a> Nature methods. 11 (3), 338-346 (2014).</li><li>Bellen, H. J., Levis, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BDGP+gene+disruption+project:+single+transposon+insertions+associated+with+40%+of+Drosophila+genes.">The BDGP gene disruption project: single transposon insertions associated with 40% of Drosophila genes.</a> Genetics. 167 (2), 761-781 (2004).</li><li>Spradling, A. C., Stern, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Berkeley+Drosophila+Genome+Project+gene+disruption+project:+Single+P-element+insertions+mutating+25%+of+vital+Drosophila+genes.">The Berkeley Drosophila Genome Project gene disruption project: Single P-element insertions mutating 25% of vital Drosophila genes.</a> Genetics. 153 (1), 135-177 (1999).</li><li>Parks, A. L., Cook, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+generation+of+high-resolution+deletion+coverage+of+the+Drosophila+melanogaster+genome.">Systematic generation of high-resolution deletion coverage of the Drosophila melanogaster genome.</a> Nature genetics. 36 (3), 288-292 (2004).</li><li>Matthews, K. A., Kaufman, T. C., Gelbart, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+resources+for+Drosophila:+the+expanding+universe.">Research resources for Drosophila: the expanding universe.</a> Nature reviews. Genetics. 6 (3), 179-193 (2005).</li><li>Ni, J. Q., Liu, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+resource+of+transgenic+RNAi+lines+for+neurogenetics.">A Drosophila resource of transgenic RNAi lines for neurogenetics.</a> Genetics. 182 (4), 1089-1100 (2009).</li><li>Ni, J. Q., Zhou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-scale+shRNA+resource+for+transgenic+RNAi+in+Drosophila.">A genome-scale shRNA resource for transgenic RNAi in Drosophila.</a> Nature. 8 (5), 405-407 (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Motivasyonel devletler, tok muhafaza ve 34 elde edilebilir. Biz hızlı ve sağlam sinek sürücüyü çiftleşme bu tüm yönleriyle ölçen bir 2-B tokluk test sunuyoruz. Bu deney, bir motive davranış moleküler ve devre elemanlarını okumak için gelişmiş uçucu genetik manipülasyonlar kullanılması olasılığını yaratır. tokluk tahlil erkeğin yeteneği başarıyla mahkemeye ve çiftleşmek ve uygun zamanda çiftleştirerek sonlandırmak için kullanır. az hyposexual sinekler mahkeme, düşük kur sinekler mutlaka hyposexual olmamasına rağmen; onlar, örneğin, sorun tanıma veya kadın 35 izleme olabilir. Bu nedenle, tokluk tahlil test hiperseksualite, naif vahşi tip erkeklerin tokluk tahlil sh 1. hiperseksualite yaklaşan kur endeksleri gösteriyor çünkü güvenilir bir standart kur deneyinde gözlenen edilemez bir fenotip için en uygunyaşına göre kabul edilebilir ould erkek deneyimimiz, eski erkek burada kullanılan 3-gün eski erkek biraz daha sık çiftleşme eğilimi. Bu motivasyon yatan bileşenler araştırmak için bu sistemde kullanılabilir nörogenetik manipülasyonlar örneklemek için dopaminerjik nöronların thermogenetic uyarılması kullanılır. Ayrıca, araştırmacılar da 2-B tokluk tahlil boyunca thermogenetic uyarımı kullanabilir ve tokluğu ulaşmak için yavaş hypersexual erkekler için arayın. Tabii ki, doyma deneyleri, aynı zamanda 38 optogenetics, nöronal susturma araçları 36, 37 ile birleştirilebilir, genetik mutasyonlar 39, 40, 41, RNAi 28, 42, 43, 44, vb demonte </em&gt; Bu kaynaklar diğer sistemlerde şu anda başarılamaz sinek motivasyon kapsamlı bir sorgulama mümkün kılar. tokluk tahlil ekonomik ve ölçeklenebilir. Her arena malzemelerin ~ 10 ABD dolar değerinde için üretilen (artı lazer kesme maliyetleri, varsa) ve Karton kapaklı bir kitap daha az yer kaplar edilebilir. Video Puanlama da nispeten basit bir iştir. 8 erkek ~ 1.5 saat uçar ile eğitimli deneyci bir 4.5 saat Video puanı. Normal sinekler çiftleşme sürücü çok düşük seviyelerde gösterdiğinizde daha yüksek verimli tarama, bir, sadece son 2 saat puanı. Bu ~ 20 dk süren çiftleşmelerin çoğunluğu çekeceği Alternatif olarak, bir, tayinidir her 30 dakikada bir kontrol nokta olabilir. Biz bu sistemi yaygın adapte olacak ve motivasyon sırlarını için güçlü bir sistem olarak Drosophila ortaya çıkmasına katkıda umuyoruz.

Drosophila iş geninin 1. doğası dahil olmak üzere birçok biyolojik olayların derinliklerine ve öncü fikir sağlamıştır, embriyonik gelişim 2, sirkadiyen ritimler 3 ve sinir sistemi 4, 5, 6 gelişmesi ve kablolama ilkeleri. Motivasyon belki de şimdiye kadar çalışılmıştır sistemlerde sınırlamalar, çok daha az iyi bu olayların daha anlaşılamamıştır. sinek Motivasyon öncelikle yağ depolanmasının açık belirtilerini engeller besleme maçın ve exoskeleton başına onların yok denecek kadar az gıda alımı için birçok zorluklarla karşı karşıya açlık bağlamında ele alınmıştır. Sonuç olarak, sinek motivasyon incelemek için kullanılan sistemler genişletmek için bir ihtiyaç vardır. Biz çiftleşme sürücünün çalışmasında bir davranış çerçeveyi tanımlamakDrosophila. Bu sistem, sinek gibi erişilebilirlik 7, 8, 9, 10, 11, 12 ve cinsi olarak dimorfik devresi 8, 13, varsayılan connectome içinde nörogenetik araçlar yararlanır. Buna ek olarak, çok doğal, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ve 22, 23, 24 duyu-motor devre kontrol kur nadir bir fırsat sağlamaktadır ayrıntılı bir şekilde olmuştur öğrenilenmotivasyon çarptığı bunun üzerine tam devre düğümü bulun. Son zamanlarda sinek, insanlarda olduğu gibi, dopamin düzeyleri eşleşen tahrik 25, 26, 27 için merkezi bildirmiştir. Biz burada 25 tarif deneyleri kullanılarak bu korunmuş fenomenin analizi, ilgili dopamin üreten ve sinek nöronlar alma kolaylaştıran detaylı Molecular ve devre düzeyinde genetik erişim kazanmıştır. Bu Zhang ve arkadaşları davranış testleri ekle. Biz 2 boyutlu (2-D) tokluk testi, önceki yöntemlere göre önemli bir iyileşme çağrı, video puanlama, izin verir 25 yeni bir düz davranış arenada. Sonuç olarak, yeni tahlil daha ölçeklenebilir ve ölçülebilir ve motivasyon yer alan genlerin ve nöronların genetik ekranlar için bu nedenle daha uygundur. Bu kur analizleri ve neuroge ile birlikte bu yeni tahlil kullanımımanyetik manipülasyonlar, ölçmek ve sinek çiftleşme sürücüyü değiştirmek için nasıl göstermek için.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1195">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1/16 inch clear acrylic</td>
			<td style="width:119px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">8589K12</td>
			<td style="width:743px;">Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1/8 inch clear acrylic</td>
			<td style="width:119px;">McMaster-Carr</td>
			<td>8589K42</td>
			<td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3/16 inch clear acrylic</td>
			<td style="width:119px;">McMaster-Carr</td>
			<td>8560K219</td>
			<td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1/32 inch black delrin</td>
			<td style="width:119px;">McMaster-Carr</td>
			<td>8575K132</td>
			<td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hex screws, 1 inch long (50x)</td>
			<td style="width:119px;">McMaster-Carr</td>
			<td>92314A115&#160;</td>
			<td>Used to make arenas. Can be replaced by 3/4 inch screws (92314A113, McMaster-Carr) for 32-chamber arenas.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thumb nuts (25x)</td>
			<td style="width:119px;">McMaster-Carr</td>
			<td>92741A100</td>
			<td>Used to make arenas. Can be replaced by regular hex nuts (90480A005, McMaster-Carr).</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Camcorder</td>
			<td style="width:119px;">Canon</td>
			<td>Vixia HF R700</td>
			<td>Can be replaced by any consumer comcorder.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring and altering mating drive in male drosophila melanogaster

soruşturmanın yıllardır rağmen, motivasyon devletlerin nöronal ve moleküler temelleri gizemli kalır. Biz son zamanlarda burada detay metotları olan erkek Drosophila melanogaster (Drosophila) çiftleşme sürücüyü kullanarak motivasyon derinlemesine soruşturulması için bir roman, indirgemeci ve ölçeklenebilir bir sistem geliştirdik. davranışsal paradigma erkek çiftleşme sürücü tekrarlanan çiftleştirerek boyunca doğurganlık yanında azalır ve ~ 3 d üzerinde kurtarır bulgu merkezleri. Bu sistemde, sinek mevcut güçlü neurogenetic araçlar genetik erişilebilirlik ve cinsel davranış için varsayılan bağlantı şemasına ile birleşir. Bu yakınlaşma hızlı izolasyon ve özel motivasyon fonksiyonları ile küçük nöronal popülasyonlarının sorgulama sağlar. Burada detay ölçmek ve erkek sinek kur motivasyonu değiştirmek için kullanılır tokluk testinin tasarımı ve yürütülmesi biz. Kullanımı BuTahlil, biz de düşük erkek çiftleşme sürücü dopaminerjik nöronların uyararak aşılabilir olduğunu göstermektedir. tokluk tahlil genetik arka plan etkilerine basit, hesaplı ve sağlamdır. Biz tokluk tahlil motivasyon devletler nörobiyolojisine içine birçok yeni anlayışlar üretmek için bekliyoruz.

Drosophila eşleşen tahrik karakterize etmek için, 3 günlük bir WT Canton-S erkek 2-B doyma deneyi ile test edildi. tahlil (4.5 saat) boyunca, erkekler 4.8 ± 0.3 ortalama arkadaşı kez (ortalama, SEM ± standart hata demek). Eşleştirmesi, ilk 2 saat boyunca (% 78) (Şekil 6A, 6B) &#39;de daha çok başlatmak ve deneyi (Şekil 6A, 6B) ilerledikçe sıklığı azalır. Bu azalma çiftleşme ortakları eksikliği (% 74 kadın tahlil boyunca unmated kalır) ya da fiziksel yorgunluk (Şekil 6F) bağlı değildir. Aksine, bu etkinin muhtemelen 2.0 ± 0.7% 42,6 ±% 8.0 (ortalama ± SEM) (1 st h) dan, tahlil sırasında erkeğin kur bir azalma ile açıklanabilir (ortalama ± SEM) nonmating zaman (son saat) (Şekil 6C). Kur bu azalma da görülmektedir erkek Yeni dişilerle kur deneylerinde test edildiğinde (Şekil 6D, 6E) </strong&gt;, erkeklerde sonra kurtarır 3 gün kadın (Şekil 6G, 6H) izole edilmiştir. Bu sonuçlar, erkek sinekler dahili tutulan çiftleşme sürücü 2-D tokluk deneyinde tok olabilir ve zamanla kurtarmak olduğunu göstermektedir. 2-B doyma deneyi de kolayca Drosophila nöral manipülasyonlar ile bir araya getirilebilir. Biz son zamanlarda dopaminerjik nöronların thermogenetic uyarılması tok erkek çiftleşme sürücü 25 sinekler tersine bildirdi. 2-B doygunluk deneyleri kullanarak, tokluk, deney sonunda dopaminerjik stimülasyon (TH&gt; TrpA1, 28.5 ° C), hem kur (Şekil 7A, Şekil 7C, kırmızı) ve çiftleşmeye (Şekil 7A, kırmızı 7B) artmış olduğunu görüyoruz. Ters etkileri ebeveyn denetimi genotipleri (- 7C, siyah ve gri Şekil 7A) ile gözlenmez. Bu sonuçların tamamı piyasadaki çalışmada ile tutarlıdır25 ve yardımcı deneyleri (kur ve hareket) ile birlikte 2-B tokluk deneyi, eşleşen tahrik moleküler ve nöronal bileşenleri incelemek için kullanılabilir olduğunu düşündürmektedir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/55291/55291fig1.jpg" /> Şekil 1. Tasarımı ve Montajı Davranış Arenas. (2-B doyma deneyleri için kullanılan), 8 bölmeli Arena parmak fındık ve altıgen vida (A) ile bir arada tutulan 6 tabakadan oluşur. (Kur deneyleri için kullanılan) bir 32 odalı arena benzer üretilmiş, ancak gıda duvarı olmayan (katman 4). Arena parça lazer kesici ile kesilir ve tabakalar 8-bölme ve 32-bölme (C) (B) olarak numaralandırılmıştır. Monte 8 bölmeli arenalar (D) (önden görünüm) ve (E) (numaralı katmanları ile yan görünümü) gösterilmiştir. Benzer bir şekilde bir araya monte edilmiş 32 bölmeli alanları (F,<html> Hiçbir sinek yiyecek kur deneyleri için arenada olduğundan G), ancak Katman 4 (gıda duvar) (G) göz ardı edilir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55291/55291fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/55291/55291fig2.jpg" /> Şekil 2. Gıda ile 2-B Satiety Tahliller hazırlanması. Standart Drosophila, yiyecek, içecek (A), bir mikro-dalga ile güvenli bir kavanoza yerleştirilir. (B) eriyene kadar gıda mikro dalgada. Bir körleşmiş pipet ucu (C ok) kısmen monte davranış arenada (D) odalarına yiyecek aktarmak için kullanılır. Gıda tamamen monte davranışsal arena (F) daha önce 4 ° C&#39;de (S) yeniden katılaştırılır.pg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/55291/55291fig3.jpg" /> Şekil 3: w1118 (X) / hs-hid (Y) Stok gelen Yaratma Virgin Kadın. Onların opaqueness (A) işaret ettiği gibi pupa% 80 uneclosed olan - 50 iken sinek şişe ısı şok olmalıdır. Ilave görüntü uneclosed (üstte) örnekleri ve eclosed (alt) pupa (A) gösterir. Şişeler aşağı tartılır ve şişe tıpa alt bile ısıtma (B) sağlamak için sadece yukarıdaki su seviyesi ile 1 saat boyunca 37 ° C sıcak su banyosu içinde batık. Su hattı için (A) siyah ok bakın. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55291/55291fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt = &quot;Şekil 4&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 55291 / 55291fig4.jpg&quot; /&gt; Şekil 4: Yükleme Bir Davranış Arenaya Sinekler. Yavaşça aspire ve 15 tutun - aspiratör (A) 20 kadın. Pipet dönen kapı (B) açmak için kullanılır, ve sinekler yavaşça odasına (C) salınır. Dönen kapı (D) kapatmak için aspiratör kullanın. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55291/55291fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/55291/55291fig5.jpg" /> Şekil 5: Sahne ve 2-B Satiety Testi kaydedilmesi. (A) (a) bir standart tüketici kamera istenen sıcaklığa ayarlanmış bir kuluçka makinesi içinde tahlil kaydetmek için kullanılır. inkübatör sağlamak için su (B) &#39;nin bir şişeyi ve nem dedektörü (c) içerenUygun nem seviyesi (&gt;% 30). Hazırlanan 2-D tokluk tahlil kameranızın (B) altında çekilmiştir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55291/55291fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/55291/55291fig6.jpg" /> Şekil 6: Doygunluk ve Fy Çiftleşme Drive Kurtarma. 2-B tokluk tahlilde erkek sinekler deneyi (A, B), ilk 2 saat sık çiftleşme, ancak deney ilerledikçe kendi kur (C) ve çiftleşmesi (B) azalır. Erkek 0 saat, ya da 1 saat veya 4.5 saat (D, E) olan bir 2-D doyma deneyi tamamladıktan sonra, yeni dişilerle bir kur tahlilinde transfer edildiğinde kur davranış progresif azalma sağlanır. Kırmızı oklar turuncu ar ise, kur ve çiftleşme davranışları sergileyen erkeklere işaretsatır olmayan çiftleşme olmayan flört sinekler (A, D) işaret eder. Erkek önce ve 2-D tokluk deneyi (F) sonra lokomotor aktivite eşdeğer seviyelerini göstermek gibi cinsel davranışlarda azalma, fiziksel bitkinlik bir sonucu değildir. Erkekler yavaş yavaş kadın izolasyonuna 3 gün boyunca kendi çiftleşme (G) ve kur (H) düzeyleri kurtarmak. Bu şekilde, *** p &lt;0.001, ** p &lt;0.01, t-testi (C, F) ve Tukey post-testi (E, G, H) ile tek yönlü ANOVA için önemli değil ns. Tüm deneyler için, her durum için 16 - n = 15. Hata çubukları, ortalamanın (SEM) standart hatasını temsil eder. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55291/55291fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 7," src="/files/ftp_upload/55291/55291fig7.jpg" /> Şekil 7: Thermogenetic Tokluk<html> Male geri çevrilmesi Sinekler. Standart 2-D tokluk deneyinde olduğu gibi, erkekler bir deney boyunca çiftleşmelerin azalma, ancak dopaminerjik nöronların thermogenetic uyarılması göstermektedir (TH&gt; TrpA1, kırmızı) genotipleri (siyah ve gri), ancak ebeveyn-kontrol, tok erkeklerde (A) sürücüyü çiftleşme geri getiriyor. X-ekseni (A) bozulduğunda Resim çiftleşme puanlanır. Eşleşen tahrik tersine dönmesi geçme numaraları (B) veya kur (Cı) kullanılarak ölçülebilir. (B) ve (C) &#39;de X-ekseni sayılar (A)&#39; da zaman bakın. Turuncu arka plan rengi thermogenetic uyarımı gösterir (A - C). Bu şekilde, *** p &lt;0.001, Bonferroni post-testi (B, C) ile iki yönlü ANOVA genotip ve sıcaklık arasındaki etkileşimleri için önemli değil ns. Her genotip için N = 8 (B, C). Hata çubukları SEM&#39;i temsil etmektedir..jove.com / files / ftp_upload / 55291 / 55291fig7large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. Yan Malzeme 1. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55291/Supplemental_Material_1.zip" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için tıklayınız.</a> Yan Malzeme 2. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55291/Supplemental_Material_2.zip" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster at JoVE.com

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Bu makale melanogaste motivasyon incelemek için r Drosophila erkek çiftleşme sürücüsünü kullanan bir davranış deneyi anlatır. Bu yöntemi kullanarak, araştırmacılar bu motivasyonu altında yatan genetik moleküler ve hücresel mekanizmaları ortaya çıkarmak için ileri sinek neurogenetic teknikler kullanabilirler.

Ölçme ve Male Değiştirme Çiftleşme Sürücü<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

measuring-and-altering-mating-drive-in-male-drosophila-melanogaster

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

11.0K Görüntüleme.  Boston Children’s Hospital.  Bu makale melanogaste motivasyon incelemek için r Drosophila erkek çiftleşme sürücüsünü kullanan bir davranış deneyi anlatır. Bu yöntemi kullanarak, araştırmacılar bu motivasyonu altında yatan genetik moleküler ve hücresel mekanizmaları ortaya çıkarmak için ileri sinek neurogenetic teknikler kullanabilirler. 

Video: Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

Böcekler Tek Sensillum Kayıtlar Drosophila melanogaster Ve Anofel gambiae</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

Nörobilim

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

In this article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the lipophilic fluorescent membrane marker DiI. This method allows the visualization of neuronal cell morphology in great detail. It is possible to label any cell in the CNS: cell bodies of target neurons are visualized under DIC optics or by expression of a fluorescent genetic marker such as GFP. After labeling, the DiI can be transformed into a permanent brown stain by photoconversion to allow visualization of cell morphology with transmitted light and DIC optics. Alternatively, the DiI-labeled cells can be observed directly with confocal microscopy, enabling genetically introduced fluorescent reporter proteins to be colocalised. The technique can be used in any animal, irrespective of genotype, making it possible to analyze mutant phenotypes at single cell resolution.

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

We present a technique for labeling single neurons in the central nervous system (CNS) of Drosophila embryos, which allows the analysis of neuronal morphology by either transmitted light or confocal microscopy.

Merkez Sinir Sistemi Tek Hücreler Etiketleme<em&gt; Drosophila melanogaster</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

A growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive manipulation of the neural activity of specific neurons in Drosophila melanogaster1. Chief among these are optogenetic tools, which enable the activation or silencing of specific neurons in the intact and freely moving animal using bright light. Channelrhodopsin (ChR2) is a light-activated cation channel that, when activated by blue light, causes depolarization of neurons that express it. ChR2 has been effective for identifying neurons critical for specific behaviors, such as CO2 avoidance, proboscis extension and giant-fiber mediated startle response2-4. However, as the intense light sources used to stimulate ChR2 also stimulate photoreceptors, these optogenetic techniques have not previously been used in the visual system. Here, we combine an optogenetic approach with a mutation that impairs phototransduction to demonstrate that activation of a cluster of loom-sensitive neurons in the fly's optic lobe, Foma-1 neurons, can drive an escape behavior used to avoid collision. We used a null allele of a critical component of the phototransduction cascade, phospholipase C-&beta;, encoded by the norpA gene, to render the flies blind and also use the Gal4-UAS transcriptional activator system to drive expression of ChR2 in the Foma-1 neurons. Individual flies are placed on a small platform surrounded by blue LEDs. When the LEDs are illuminated, the flies quickly take-off into flight, in a manner similar to visually driven loom-escape behavior. We believe that this technique can be easily adapted to examine other behaviors in freely moving flies.

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Genetically encoded optogenetic tools enable noninvasive manipulation of specific neurons in the Drosophila brain. Such tools can identify neurons whose activation is sufficient to elicit or suppress particular behaviors. Here we present a method for activating Channelrhodopsin2 that is expressed in targeted neurons in freely walking flies.

Yılında Escape Davranış Optogenetic Uyarım<em&gt; Drosophila melanogaster</em

A  growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive  manipulation of the neural activity of specific neurons in ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such behavior is spontaneous locomotor activity. Here we describe our protocol that utilizes Drosophila population monitors and a tracking system that allows continuous monitoring of the spontaneous locomotor activity of flies for several days at a time. This method is simple, reliable, and objective and can be used to examine the effects of aging, sex, changes in caloric content of food, addition of drugs, or genetic manipulations that mimic human diseases.

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster are useful in studying genetic or environmental manipulations that affect behaviors such as spontaneous locomotor activity.&#160; Here we describe a protocol that utilizes monitors with infrared beams and data analysis software to quantify spontaneous locomotor activity.&#160;

Olarak spontan lokomotor aktivitenin belirlenmesi<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

Sosyal Kaçınma Niceleme için Basit Testi<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy and cheap methods to distinguish between individuals in a trial. A standard technique for this is CO2 anaesthesia and then labelling or wing clipping each fly. However, this is invasive and has been shown to affect behavior. Other techniques have used coloration to identify flies. This article presents a simple and non-invasive method for labelling Drosophila that allows them to be individually identified within experiments, using food coloring. This method is used in trials where two males compete to mate with a female. Dyeing allowed quick and easy identification. There was, however, some difference in the strength of the coloration across the three species tested. Data is presented showing the dye has a lower impact on mating behavior than CO2 in Drosophila melanogaster. The impact of CO2 anaesthesia is shown to depend on the species of Drosophila, with D. pseudoobscura and D. subobscura showing no impact, whereas D. melanogaster males had reduced mating success. The dye method presented is applicable to a wide range of experimental designs.

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

Davranış Tahliller için Boyama Böcekler: anestezi ve Çiftleşme Davranışı<em&gt; Drosophila</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a straightforward manner. As we previously demonstrated 1, in a two-dimensional chamber, we first force the flies to form a tight group, subsequently allowing them to take their preferred distance from each other. After the flies have settled, we measure the distance to the closest neighbor (or social space), processing a static picture with free online software (ImageJ). The analysis of the distance to the closest neighbor allows researchers to determine the effects of genetic and environmental factors on social interaction, while controlling for potential confounding factors. Diverse factors such as climbing ability, time of day, sex, and number of flies, can modify social spacing of flies. We thus propose a series of experimental controls to mitigate these confounding effects. This assay can be used for at least two purposes. First, researchers can determine how their favorite environmental shift (such as isolation, temperature, stress or toxins) will impact social spacing 1,2. Second, researchers can dissect the genetic and neural underpinnings of this basic form of social behavior 1,3. Specifically, we used it as a diagnostic tool to study the role of orthologous genes thought to be involved in social behavior in other organisms, such as candidate genes for autism in humans 4.

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The effect of genes and environment on social space of Drosophila melanogaster can be quantified through a powerful but straightforward analytical paradigm. We show here different factors that can affect this social space, and thus need to be taken into consideration when designing experiments in this paradigm.

Sosyal Space Etkileyen Koşullar<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense organs provide an excellent model system for the study of mechanosensation. This protocol describes a simple touch behavior in fruit flies which can be used to identify mutations that interfere with mechanosensation. The tactile stimulation of a macrochaete bristle on the thorax of flies elicits a grooming reflex from either the first or third leg. Mutations that interfere with mechanotransduction (such as NOMPC), or with other aspects of the reflex arc, can inhibit the grooming response. A traditional screen of adult behaviors would have missed mutants that have essential roles during development. Instead, this protocol combines the touch screen with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) to allow for only limited regions of homozygous mutant cells to be generated and marked by the expression of green fluorescent protein (GFP). By testing MARCM clones for abnormal behavioral responses, it is possible to screen a collection of lethal p-element mutations to search for new genes involved in mechanosensation that would have been missed by more traditional methods.

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

In order to identify novel mutations affecting mechanosensation, we designed an assay that measures the behavioral response to tactile stimulation of fly bristles in mutant clones generated by the MARCM method. The combination of techniques allows for the identification of mechanosensitive mutations that would otherwise be lethal.

Arasında Mechanosensation için bir davranış tahlilinde klonlarda MARCM tabanlı<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral variation. The larval path-length assay was developed to measure individual differences in foraging behavior that were later linked to the foraging gene. Larval path-length is an easily scored trait that facilitates the collection of large sample sizes, at minimal cost, for genetic screens. Here we provide a detailed description of the current protocol for the larval path-length assay first used by Sokolowski. The protocol details how to reproducibly handle test animals, perform the behavioral assay and analyze the data. An example of how the assay can be used to measure behavioral plasticity in response to environmental change, by manipulating feeding environment prior to performing the assay, is also provided. Finally, appropriate test design as well as environmental factors that can modify larval path-length such as food quality, developmental age and day effects are discussed.

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

We provide a detailed protocol for a Drosophila melanogaster foraging path-length assay. We discuss the preparation and handling of test animals, how to perform the assay and analyze the data.

için yiyecek arama yolu uzunluğu Protokolü<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larva

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of the right type and quantity of food therefore has a major influence on quality of life. Research on feeding behavior focuses on the underlying processes that ensure actual feeding and unravels the role of factors regulating internal energy homeostasis and the neuronal bases of decision-making. The model organism Drosophila melanogaster, with its great variety of genetically traceable tools for labeling and manipulating single neurons, allows mapping of neuronal networks and identification of molecular signaling cascades involved in the regulation of food intake. This report demonstrates the CApillary FEeder assay (CAFE) and shows how to measure food intake in a group of flies for time spans ranging from hours to days. This easy-to-use assay consists of glass capillaries filled with liquid food that flies can freely access and feed on. Food consumption in the assay is accurately determined using simple measurement tools. Herein we describe step-by-step the method from setup to successful execution of the CAFE assay, and provide practical examples to analyze the food intake of a group of flies under controlled conditions. The reader is guided through possible limitations of the assay, and advantages and disadvantages of the method compared to other feeding assays in D. melanogaster are evaluated.

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

The CApillary FEeder (CAFE) assay is a simple, budget-friendly, highly reliable method for investigating mechanisms underlying food intake. Used with the highly versatile genetic model organism Drosophila melanogaster, it provides a powerful means of gaining new insights into regulatory mechanisms of food intake.

Kılcal Besleyici Testi Gıda Alımını içinde Tedbirler<em&gt; Drosophila melanogaster</em

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of ...