Name: measuring and altering mating drive in male drosophila melanogaster
Uploaded: 2017-02-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster at JoVE.com

The authors thank Mike Crickmore, Dragana Rogulja, and Michelle Frank for comments on the manuscript. Pavel Gorelik provided technical support for manufacturing the behavioral arenas. This work was conducted in Mike Crickmore's lab and is also supported by the Whitehall Foundation (Principal Investigator: Dragana Rogulja). S.X.Z. is a Stuart H.Q. and Victoria Quan Fellow at Harvard Medical School.

NOT: Bu protokol hazırlanması (Bölüm 1-3) açıklar, yürütme (Bölüm 4), ve analiz 2-D tokluk tahlillerin (Bölüm 4). Sonra, bir örnek olarak dopaminerjik stimülasyon kullanarak, Bölüm 5 hiperseksüalite ikna etmek için 2-D tokluk deneyleri ile thermogenetic stimülasyon birleştirmek nasıl gösterir. Bölüm 6 2-D tokluk deneyleri sonuçları doğrulamak için 3 yolları anlatılmaktadır. Son olarak, Bölüm 7 erkek sinekler çiftleşme sürücünün kurtarma ölçmek için nasıl gösterir. 1. 8 ve 32 odası Davranış Arenas Fabricating Not: her davranış Arena dört köşe (Şekil 1A) her birinde altıgen vida ve başparmak somunları ile bir arada tutulan, lazer kesme plastik levhalar birkaç tabakadan oluşur. <ol><li> arena katmanları Üretiyor. Uygun şekline akrilik plastik levha kesmek için lazer kesici kullanarak her katmanı Üretiyor (Şekil 1B, 1C ürünler için bakınız). NOT: Birçok araştırma institutions kendi makine dükkan veya yapıcı alanlarda lazer kesiciler var. Kurum bir lazer kesici erişimi varsa, aşağıdaki adımlarla devam edin. Değilse, o zaman yerine Adım 1.2 yönergeleri izleyin. <ol><li> Her bir katman için, lazer kesicinin yazılımında tasarım deseni açın. NOT: tasarımlar uygun adlandırılmış PDF dosyalarında bulunabilir (örneğin, 8-Chamber Arena - Katman 2 - Doors.pdf) Ltd. Malzeme 1. Bu dosya aynı zamanda plastik türü için açıklamaları içeren kullanılmak üzere (örneğin, 1 / 8 inç (yani 3.175 mm) net akrilik). Her bir katmanın tam kalınlığı kritik değildir. ana şartı odalarında 0.12 inç (3 mm) veya serbest dikey alanı daha fazla olanak sağlamaktır. </li><li> Çeşidi ve plastik kalınlığı lazer ayarları (güç, odak vs.) ayarlama kullanılır. Lazer kesici yatakta plastik yerleştirin ve lazer kesici çalıştırın. NOT: Bu ayarlar yaygın lazer cutte göre değişirr modeli ve lazer gücü. Geçmiş deneyimlere veya hurda plastik test kesikler yaparak göre uygun ayarları bulun. Derin altıgen gravürler altıgen vida başları girinti tasarım dahil edilir. Bu özellik, başparmak fındık tek elle sıkılaştırma sağlar ve arenalar (vida başları çıkıntılı olmadan) bankta düz dinlenmesini sağlar. Bununla birlikte, derin gravürler yaparak sık sık elde etmek zor ve zaman alıcı bir lazer kesici kullanıyor. Bu adım isteğe bağlıdır ve davranışsal sonuçları etkilemeden atlanabilir. </li><li> Kapı çerçevesi (Katman 2, Şekil 1A) keserken, aynı zamanda (Şekil 1B, 1C gibi) tasarıma dahil bölme numaraları oyularak için uygun lazer ayarlarını kullanır. </li></ol></li><li> Bir online lazer kesme fabrikatör bir sipariş. Malzeme tip 8- ve / veya 32 odalı arena tüm PDF tasarım dosyalarını yükleyin ve belirtin (örneğin, 1/8 inç (yani 3.175 mm) Cleadosyaları ek açıklamaları dayalı r akrilik). Sonuçlar Şekil 1B (8 odacıklı arena) ve 1C (32 odacıklı arena) olarak görünecektir. </li><li> Hizalamak ve birlikte plastik tabakaları (Şekil 1A) tutmak için dört altıgen vida ve dört parmak somun kullanarak arenalarda birleştirin. Arenalar Şekil 1D, 1E (8 odacıklı) ve Şekil 1F, 1G (32 odacıklı) olarak görünecektir. Not: (Şekil 1A Katman 4) Gıda duvarı sadece 2-B doyma deneyleri için kullanılır ve kur deneylerinde kullanılan 32 bölmeli sahalarda atlandı. </li></ol> 2-D Satiety Testi için 2. Gıda Hazırlama NOT: 2-D tokluk tahlil 4.5 saat yayılan Çünkü, gıda beslenme ve su sağlamak için arenada kullanılır sinek. Bu protokol kullanmaktadır, ama geleneksel mısır unu-Agar gıda kalkan ile sınırlı değildir. <ol><li> Kısmen Katmanlar 2-D tokluk arena (8 odacıklı) monte 3-6(katman atamaları için Şekil 1A) ve başparmak fındık ve altıgen vida ile sıkın. </li><li> Temiz, mikrodalga güvenli şişeye taze sinek gıda yerleştirin. Şişe (Şekil 2A) alt yüzeyini kaplamak için yeterli miktarda su ilave edilir. </li><li> 45 sn - 30 yüksek mikrodalga yiyecek. Ilerlemeyi kontrol edin ve (Şekil 2B) eriyene kadar her 15 sn karıştırın. DİKKAT! Fly gıda kolayca kaynar. </li><li> Yavaş yavaş ml her odanın (Şekil 2B) içine yiyecek erimiş 1 ~ aktarmak için körelmiş 1000 mcL pipet (Şekil 2C) kullanın. </li><li> Gıda alanını tamamen (Şekil 2F) monte edilmeden önce, 10 dakika (Şekil 2E) + 4 ° C&#39;de yeniden katılaşmasına imkan verin. </li><li> 4 ° C&#39;de tamamlanan deneyler için arena (Bakınız Bölüm 4) ya da mağaza kullanın. </li><li> 4 ° C ve yeniden de artık yiyecek saklamak. </li></ol> 3. Davranış Tahliller için Virgin Females hazırlanması NOT: - standart yöntemler kullanılarak toplamak zordur (tam davranış arenada 160 ~ 120) 2-D tokluk deneyleri bakire kadın sinekler çok sayıda kullanın. Bu bölümde kur deneyleri 25, 29 yılında başarıyla kullanılmaktadır Y kromozomu 28, hs-sakladı transgen kullanarak alternatif bir yaklaşım anlatılmaktadır. Beyaz gözlü bakire kadın oluşturmak için kullanılan stok genotip w1118 (X) / hs-hid (Y) vardır; + / + + / + (Bloomington stok numarası 24638). <ol><li> Kapak kez 20 yeni bir şişe içine uçar - pupa% 50 eclosed var (örneğin Şekil 3A) ve yeterli erkek (5 - 10) vardır stok yaymak için. </li><li> Isı yeterince (Şekil 3B) erkekleri öldürmek için hs-HID aktive 1 saat için 37 ° C sıcak su banyosunda orijinal şişe şok. ısı şokundan sonra, sadece kadın bu şişelerden Eclose ve böylece kadar bakire kalırtahlilleri. NOT: (su hattı için Şekil 3A bakınız) şişenin tüm tarafların eşit ısıtılır emin olun. 1 saat tüm erkekleri euthanize için yeterli değilse, en fazla 2 saat süreyle bu süreyi uzatmak. </li><li> Onlar 25, 29 cinsel alıcı olacak kadar yaşlı olduğundan emin olmak için deneyler önce en az 3 gün toplanan kadın izole edin. NOT: Y-kromozomu-az erkekler bazen bu stoktan ortaya çıkar. Bu erkekler beyaz gözleri var ve onlar hs-sakladı transgen içermemesi nedeniyle ısı şoku etkilenmez. Onlar, 31 kadın 30 reseptiviteyi azaltmak olamaz, bu nedenle sperm üretmek ve olamaz. </li></ol> 4. Gösteri ve 2-D Tokluk Tahliller Puanlama NOT: erkek yaşı ile çiftleşme sürücü değişiklikleri gibi uçar kontrol etmek önemlidir. Bu protokol 3 olan erkek kullanır - 4 d eski 25 </sus&gt;. <ol><li> Istenen sıcaklığa (örn 23 ° standart C RT deneyler) ve nem (&gt;% 30) ile kuluçka ayarlayın. inkübatör bir bardak su bırakarak nem kontrolü olmadan kuvöz için yeterlidir. </li><li> sıcaklık dengelenmesi için ve deney sırasında odalarına yoğunlaşmayı önlemek için ~ için inkübatör 30 dakika bir 2-B tokluk tahlil arena yerleştirin. döner kapıları açık pozisyonda olmalıdır. </li><li> Arena (Şekil 4) her odasına 20 bakire kadın - 15 aspire bir sinek aspiratör 32 kullanın. NOT: Bu kadın ve erkekler deneyi ile aynı günde anestezi değildir önemlidir. Bizim tecrübelerimize göre, bunu yaparken kadın reseptivitede ve erkek çiftleşme davranışı etkileyebilir. </li><li> Her odasına aspire 1 erkek. </li><li> 4.5 saat için standart tüketici kamera (Şekil 5) ve filmin altında inkübatörde yüklenen arena yerleştirin. </li><li> Her erkek başlar sinek ve her çiftleşme (yani çiftleşmeye) sona erdiğinde belirterek videoları puan. Bu adım zaman alıcı ilk başta olabilir. Uygulama ile, bir 5x hızında veya daha yüksek video skor olabilir. NOT: sinekler ~ 23 ° C (yüksek sıcaklıklarda kısa süreli) 29 de ~ 20 dakika dostum bu yana, her biri çiftleşme ilk 15 dakika boyunca gözden geçirebilir. </li><li> Tüm çiftleşme kez yaptıktan sonra, her sinek için çiftleşmelerin sayısını toplamı (temsilci Sonuçları bakınız). </li><li> Bir ethogram oluşturmak için sağlanan kodu kullanın. kod, talimatlar ve örnek veriler için ek Malzeme 2&#39;ye bakınız. </li><li> Onları çıkarmadan önce sinekler uyutmak için CO 2 veya soğuk sıcaklık kullanın. </li></ol> 5. 2-D Satiety Tahliller tokluk Ters Thermogenetic Manipülasyon kullanma NOT: tanımlanmış nöronal nüfusun thermogenetic stimülasyon tokluk üstesinden olup olmadığını Bu protokol testleri. deneysel flies nöronların (UAS-TrpA1) tanımlanmış toplumlarda ısıya duyarlı katyon kanalı TrpA1 ifade eder. Aşağıdaki adımlar, eşleşen tahrik 25 teşvik ettiği gösterilmiştir dopaminerjik nöronlar (TH-Gal4), uyarılması için de geçerlidir. Bu adımlar, eşleşen tahrik teşvik eden başka popülasyonları keşfetmek için diğer nöronal sürücülerle bağlantılı olarak kullanılabilir. <ol><li> Thermogenetically inkübatör sıcaklık artışı, tok sinekler birleşme davranışa yol açma (örneğin, 23 ° C ila 28.5 ° C) tam bir 4.5 saat 2-B doyma deney tamamlandıktan sonra. </li><li> Inkübatör istenen sıcaklığa ulaştıktan sonra, ısı uyarımı devam ve 1 saat (Temsilcisi Sonuçlar bakınız) çiftleşmesi (yani. Çiftleştirerek) erkeklerin puan. Not: hala Robu üretirken nöronların fazla stimüle olmasına engel uygun koşulları gidermek için gerekli olan şekilde uyarım sıcaklık ve uzunluk genotipine bağlı olarak değişiklik gösterebilirst fenotip. </li></ol> 6. tokluk hissini doğrulayın Kur yapma ve hareket Kullanma NOT: Bu bölümde 2-D tokluk deneylerinin sonuçlarını doğrulamak için kullanılabilecek 3 isteğe bağlı yöntemler açıklanır. Her tahlil için gerekli değildir. <ol><li> tokluk doğrulamak için kur deneyleri kullanın. <ol><li> Aspire bir erkek ve bir kur arenada 32 odaların her birine bir bakire kadın. </li><li> Bir standart tüketici video kamera kullanılarak 20 dakika ~ için sinekler filmi. </li><li> Kur 25 ölçmek için kur endeksi (CI) Skoru; Bu kur davranışı gerçekleştirmek geçirdi (vb aşağıdaki şarkı.) zaman ve 5 dk penceresi üzerinde (yani çiftleşmeye) çiftleşme bölümüdür. Bu pencere kur davranışı ilk örneği başlar. Bir erkek sinek ilk 15 dakika içinde kur başlamazsa, onun CI tamamen tok sinek CI b olmalıdır oysa 0. Naif WT sinekler, 0.9 den CI büyük göstermesi gerekir ise0.2 elow. Diğer kur önlemler, 33 23 düşünülebilir. </li></ol></li><li> 2-D tokluk deneyleri Puanlama kur <ol><li> 2-B tokluk deneyinin bir zaman süresi (örneğin, ad, H) üzerinde bir erkek sinek kur harcadığı süreyi puan. Kur ritüel her türlü adımı (vb takiben şarkı) gerçekleştiren erkek olarak tanımlanır. Bölüm 6.1.3 aksine, bu adım erkek çiftleşme harcadığı zamanı içermez. </li><li> Erkek aynı dönemde (yani copulating değil) çiftleşme değil, toplam zaman yukarıdaki kur süresini bölün. (- 20 dakika 60 dakika) = 0,375 erkek ilk saat içinde 20 dakika süre ile, 15 dakika boyunca kortları ve arkadaşları hedefi, örneğin, bu oran 15 dakika / olup. oran Temsilcisi Sonuçlar &quot;kur zaman nonmating bir Kesir&quot; olarak gösterilir. </li></ol></li><li> tükenme değerlendirmek için hareket testi kullanılarak <ol><li> Kısmen 32- arayaTüm parçaları ancak kontrast levha ile bölme arena. </li><li> Bir kur arenada 32 odaların her birine aspire bir erkek sinek (hiçbir kadın sinekler). </li><li> Bir standart tüketici video kamera kullanılarak 10 dakika ~ için sinekler filmi. </li><li> ImageJ (http://valelab.ucsf.edu/~nstuurman/ijplugins/MTrack2.html) &#39;de MTrack2 eklentisi ile sinekler izleyin. </li></ol></li></ol> 2-D Satiety Testi sonra Çiftleşme Drive kurtarma 7. <ol><li> Bölüm 4&#39;te açıklandığı gibi 2-D tokluk tahlil gerçekleştirin, ancak erkek testin sonunda dışarı uçar aspire. </li><li> gün istenen sayıda, 23 ° C&#39;de bir erkek sinekler izole edin. </li><li> Kurtarılan erkek ile bir 2-B tokluk tahlil gerçekleştirin ve sadece 1 saat (Temsilcisi Sonuçlar bakınız) onların çiftleşmesi (yani çiftleştirerek) puan. </li></ol>

<ol>
	<li>Sturtevant, A. H., Bridges, C. B., Morgan, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatial+relations+of+genes.">The spatial relations of genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 5 (5), 168-173 (1919).</li><li>Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , (1985).</li><li>Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systems+Approaches+to+Biological+Rhythms+in+Drosophila.">Systems Approaches to Biological Rhythms in Drosophila.</a> Methods in Enzymology. 393, 61-185 (2005).</li><li>Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho+GTPases+in+neuronal+morphogenesis.">Rho GTPases in neuronal morphogenesis.</a> Nature reviews. Neuroscience. 1 (3), 173-180 (2000).</li><li>Schmucker, D., Clemens, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+Dscam+Is+an+Axon+Guidance+Receptor+Exhibiting+Extraordinary+Molecular+Diversity.">Drosophila Dscam Is an Axon Guidance Receptor Exhibiting Extraordinary Molecular Diversity.</a> Cell. 101 (6), 671-684 (2000).</li><li>Jan, Y. N., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLH+proteins,+fly+neurogenesis,+and+vertebrate+myogenesis.">HLH proteins, fly neurogenesis, and vertebrate myogenesis.</a> Cell. 75 (5), 827-830 (1993).</li><li>Stockinger, P., Kvitsiani, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+circuitry+that+governs+Drosophila+male+courtship+behavior.">Neural circuitry that governs Drosophila male courtship behavior.</a> Cell. 121 (5), 795-807 (2005).</li><li>Yu, J. Y., Kanai, M. I., Demir, E., Jefferis, G. S. X. E., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Organization+of+the+Neural+Circuit+that+Drives+Drosophila+Courtship+Behavior.">Cellular Organization of the Neural Circuit that Drives Drosophila Courtship Behavior.</a> Current biology. 20 (18), 1602-1614 (2010).</li><li>Zhou, C., Pan, Y., Robinett, C. C., Meissner, G. W., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+Brain+Neurons+Expressing+doublesex+Regulate+Female+Receptivity+in+Drosophila.">Central Brain Neurons Expressing doublesex Regulate Female Receptivity in Drosophila.</a> Neuron. 83 (1), 149-163 (2014).</li><li>Rideout, E. J., Dornan, A. J., Neville, M. C., Eadie, S., Goodwin, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+sexual+differentiation+and+behavior+by+the+doublesex+gene+in+Drosophila+melanogaster.">Control of sexual differentiation and behavior by the doublesex gene in Drosophila melanogaster.</a> Nature neuroscience. 13 (4), 458-466 (2010).</li><li>Manoli, D. S., Foss, M., Villella, A., Taylor, B. J., Hall, J. C., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male-specific+fruitless+specifies+the+neural+substrates+of+Drosophila+courtship+behaviour.">Male-specific fruitless specifies the neural substrates of Drosophila courtship behaviour.</a> Nature. 436 (7049), 395-400 (2005).</li><li>Kimura, K. I., Ote, M., Tazawa, T., Yamamoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fruitless+specifies+sexually+dimorphic+neural+circuitry+in+the+Drosophila+brain.">Fruitless specifies sexually dimorphic neural circuitry in the Drosophila brain.</a> Nature. 438 (7065), 229-233 (2005).</li><li>Cachero, S., Ostrovsky, A. D., Yu, J. Y., Dickson, B. J., Jefferis, G. S. X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+dimorphism+in+the+fly+brain.">Sexual dimorphism in the fly brain.</a> Current biology. 20 (18), 1589-1601 (2010).</li><li>Clowney, E. J., Iguchi, S., Bussell, J. J., Scheer, E., Ruta, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodal+Chemosensory+Circuits+Controlling+Male+Courtship+in+Drosophila.">Multimodal Chemosensory Circuits Controlling Male Courtship in Drosophila.</a> Neuron. 87 (5), 1036-1049 (2015).</li><li>Kallman, B. R., Kim, H., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excitation+and+inhibition+onto+central+courtship+neurons+biases+Drosophila+mate+choice.">Excitation and inhibition onto central courtship neurons biases Drosophila mate choice.</a> eLife. 4, e11188 (2015).</li><li>von Philipsborn, A. C., Liu, T., Yu, J. Y., Masser, C., Bidaye, S. S., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+control+of+Drosophila+courtship+song.">Neuronal control of Drosophila courtship song.</a> Neuron. 69 (3), 509-522 (2011).</li><li>Zhou, C., Franconville, R., Vaughan, A. G., Robinett, C. C., Jayaraman, V., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+neural+circuitry+mediating+courtship+song+perception+in+male+Drosophila.">Central neural circuitry mediating courtship song perception in male Drosophila.</a> eLife. 4, e08477 (2015).</li><li>Kohatsu, S., Koganezawa, M., Yamamoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+contact+activates+male-specific+interneurons+that+trigger+stereotypic+courtship+behavior+in+Drosophila.">Female contact activates male-specific interneurons that trigger stereotypic courtship behavior in Drosophila.</a> Neuron. 69 (3), 498-508 (2011).</li><li>Kohatsu, S., Yamamoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visually+induced+initiation+of+Drosophila+innate+courtship-like+following+pursuit+is+mediated+by+central+excitatory+state.">Visually induced initiation of Drosophila innate courtship-like following pursuit is mediated by central excitatory state.</a> Nature Communications. 6, 6457 (2015).</li><li>Fan, P., Manoli, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+neural+mechanisms+that+inhibit+Drosophila+from+mating+with+other+species.">Genetic and neural mechanisms that inhibit Drosophila from mating with other species.</a> Cell. 154 (1), 89-102 (2013).</li><li>Kurtovic, A., Widmer, A., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+class+of+olfactory+neurons+mediates+behavioural+responses+to+a+Drosophila+sex+pheromone.">A single class of olfactory neurons mediates behavioural responses to a Drosophila sex pheromone.</a> Nature. 446 (7135), 542-546 (2007).</li><li>Ejima, A., Smith, B. P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generalization+of+Courtship+Learning+in+Drosophila+Is+Mediated+by+cis-Vaccenyl+Acetate.">Generalization of Courtship Learning in Drosophila Is Mediated by cis-Vaccenyl Acetate.</a> Current Biology. 17, 599-605 (2007).</li><li>Keleman, K., Vrontou, E., Kr&#252;ttner, S., Yu, J. Y., Kurtovic-Kozaric, A., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+neurons+modulate+pheromone+responses+in+Drosophila+courtship+learning.">Dopamine neurons modulate pheromone responses in Drosophila courtship learning.</a> Nature. 489 (7414), 145-149 (2012).</li><li>Pan, Y., Baker, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Identification+and+Separation+of+Innate+and+Experience-Dependent+Courtship+Behaviors+in+Drosophila.">Genetic Identification and Separation of Innate and Experience-Dependent Courtship Behaviors in Drosophila.</a> Cell. 156 (1-2), 236-248 (2014).</li><li>Zhang, S. X., Rogulja, D., Crickmore, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+Circuitry+Underlying+Mating+Drive.">Dopaminergic Circuitry Underlying Mating Drive.</a> Neuron. 91 (1), 168-181 (2016).</li><li>Bowers, M. B., Van Woert, M., Davis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sexual+behavior+during+L-dopa+treatment+for+Parkinsonism.">Sexual behavior during L-dopa treatment for Parkinsonism.</a> The American journal of psychiatry. 127 (12), 1691-1693 (1971).</li><li>Sacks, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Awakenings. , (1999).</li><li>Dietzl, G., Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila.">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li><li>Crickmore, M. A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposing+dopaminergic+and+GABAergic+neurons+control+the+duration+and+persistence+of+copulation+in+Drosophila.">Opposing dopaminergic and GABAergic neurons control the duration and persistence of copulation in Drosophila.</a> Cell. 155 (4), 881-893 (2013).</li><li>Peng, J., Chen, S., Busser, S., Liu, H., Honegger, T., Kubli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gradual+Release+of+Sperm+Bound+Sex-Peptide+Controls+Female+Postmating+Behavior+in+Drosophila.">Gradual Release of Sperm Bound Sex-Peptide Controls Female Postmating Behavior in Drosophila.</a> Current biology. 15 (3), 207-213 (2005).</li><li>Yapici, N., Kim, Y. J., Ribeiro, C., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+receptor+that+mediates+the+post-mating+switch+in+Drosophila+reproductive+behaviour.">A receptor that mediates the post-mating switch in Drosophila reproductive behaviour.</a> Nature. 451 (7174), 33-37 (2008).</li><li>Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Sensillum+Recordings+in+the+Insects+Drosophila+melanogaster+and+Anopheles+gambiae.">Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae.</a> Journal of Visualized Experiments. 36 (36), 1-5 (2010).</li><li>Cook, R., Cook, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Attractiveness+to+males+of+female+Drosophila+melanogaster:+effects+of+mating,+age+and+diet.">The Attractiveness to males of female Drosophila melanogaster: effects of mating, age and diet.</a> Animal behaviour. 23, 521-526 (1975).</li><li>Toates, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Motivational Systems (Problems in the Behavioural Sciences). , (1986).</li><li>Hall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mating+of+a+fly.">The mating of a fly.</a> Science. 264 (5166), 1702-1714 (1994).</li><li>Simpson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+and+manipulating+neural+circuits+in+the+fly+brain.">Mapping and manipulating neural circuits in the fly brain.</a> Advances in genetics. 65 (9), 79-143 (2009).</li><li>Venken, K. J. T., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+Manipulation+of+Genes+and+Cells+in+the+Nervous+System+of+the+Fruit.">Genetic Manipulation of Genes and Cells in the Nervous System of the Fruit.</a> Neuron. 72 (2), 202-230 (2011).</li><li>Klapoetke, N. C., Murata, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+optical+excitation+of+distinct+neural+populations.">Independent optical excitation of distinct neural populations.</a> Nature methods. 11 (3), 338-346 (2014).</li><li>Bellen, H. J., Levis, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BDGP+gene+disruption+project:+single+transposon+insertions+associated+with+40%+of+Drosophila+genes.">The BDGP gene disruption project: single transposon insertions associated with 40% of Drosophila genes.</a> Genetics. 167 (2), 761-781 (2004).</li><li>Spradling, A. C., Stern, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Berkeley+Drosophila+Genome+Project+gene+disruption+project:+Single+P-element+insertions+mutating+25%+of+vital+Drosophila+genes.">The Berkeley Drosophila Genome Project gene disruption project: Single P-element insertions mutating 25% of vital Drosophila genes.</a> Genetics. 153 (1), 135-177 (1999).</li><li>Parks, A. L., Cook, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+generation+of+high-resolution+deletion+coverage+of+the+Drosophila+melanogaster+genome.">Systematic generation of high-resolution deletion coverage of the Drosophila melanogaster genome.</a> Nature genetics. 36 (3), 288-292 (2004).</li><li>Matthews, K. A., Kaufman, T. C., Gelbart, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+resources+for+Drosophila:+the+expanding+universe.">Research resources for Drosophila: the expanding universe.</a> Nature reviews. Genetics. 6 (3), 179-193 (2005).</li><li>Ni, J. Q., Liu, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+resource+of+transgenic+RNAi+lines+for+neurogenetics.">A Drosophila resource of transgenic RNAi lines for neurogenetics.</a> Genetics. 182 (4), 1089-1100 (2009).</li><li>Ni, J. Q., Zhou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-scale+shRNA+resource+for+transgenic+RNAi+in+Drosophila.">A genome-scale shRNA resource for transgenic RNAi in Drosophila.</a> Nature. 8 (5), 405-407 (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Motivasyonel devletler, tok muhafaza ve 34 elde edilebilir. Biz hızlı ve sağlam sinek sürücüyü çiftleşme bu tüm yönleriyle ölçen bir 2-B tokluk test sunuyoruz. Bu deney, bir motive davranış moleküler ve devre elemanlarını okumak için gelişmiş uçucu genetik manipülasyonlar kullanılması olasılığını yaratır. tokluk tahlil erkeğin yeteneği başarıyla mahkemeye ve çiftleşmek ve uygun zamanda çiftleştirerek sonlandırmak için kullanır...

Drosophila iş geninin 1. doğası dahil olmak üzere birçok biyolojik olayların derinliklerine ve öncü fikir sağlamıştır, embriyonik gelişim 2, sirkadiyen ritimler 3 ve sinir sistemi 4, 5, 6 gelişmesi ve kablolama ilkeleri. Motivasyon belki de şimdiye kadar çalışılmıştır sistemlerde sınırlamalar, çok daha az iyi bu olayların daha anlaşılamamıştır. sinek Motivasyon öncelikle yağ depolanmasının açık belirtilerini engeller besleme maçın ve exoskeleton başına onların yok denecek kadar az gıda alımı için birçok zorluklarla karşı karşıya açlık bağlamında ele alınmıştır. Sonuç olarak, sinek motivasyon incelemek için kullanılan sistemler genişletmek için bir ihtiyaç vardır. Biz çiftleşme sürücünün çalışmasında bir davranış çerçeveyi tanımlamakDrosophila. Bu sistem, sinek gibi erişilebilirlik 7, 8, 9, 10, 11, 12 ve cinsi olarak dimorfik devresi 8, 13, varsayılan connectome içinde nörogenetik araçlar yararlanır. Buna ek olarak, çok doğal, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ve 22, 23, 24 duyu-motor devre kontrol kur nadir bir fırsat sağlamaktadır ayrıntılı bir şekilde olmuştur öğrenilenmotivasyon çarptığı bunun üzerine tam devre düğümü bulun. Son zamanlarda sinek, insanlarda olduğu gibi, dopamin düzeyleri eşleşen tahrik 25, 26, 27 için merkezi bildirmiştir. Biz burada 25 tarif deneyleri kullanılarak bu korunmuş fenomenin analizi, ilgili dopamin üreten ve sinek nöronlar alma kolaylaştıran detaylı Molecular ve devre düzeyinde genetik erişim kazanmıştır. Bu Zhang ve arkadaşları davranış testleri ekle. Biz 2 boyutlu (2-D) tokluk testi, önceki yöntemlere göre önemli bir iyileşme çağrı, video puanlama, izin verir 25 yeni bir düz davranış arenada. Sonuç olarak, yeni tahlil daha ölçeklenebilir ve ölçülebilir ve motivasyon yer alan genlerin ve nöronların genetik ekranlar için bu nedenle daha uygundur. Bu kur analizleri ve neuroge ile birlikte bu yeni tahlil kullanımımanyetik manipülasyonlar, ölçmek ve sinek çiftleşme sürücüyü değiştirmek için nasıl göstermek için.

<table><tbody><tr><td>1/16 inch clear acrylic</td><td>McMaster-Carr</td><td>8589K12</td><td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td></tr><tr><td>1/8 inch clear acrylic</td><td>McMaster-Carr</td><td>8589K42</td><td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td></tr><tr><td>3/16 inch clear acrylic</td><td>McMaster-Carr</td><td>8560K219</td><td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td></tr><tr><td>1/32 inch black delrin</td><td>McMaster-Carr</td><td>8575K132</td><td>Used to make arenas; see Supplemental Material 1 for designs.</td></tr><tr><td>Hex screws, 1 inch long (50x)</td><td>McMaster-Carr</td><td>92314A115&amp;nbsp;</td><td>Used to make arenas. Can be replaced by 3/4 inch screws (92314A113, McMaster-Carr) for 32-chamber arenas.</td></tr><tr><td>Thumb nuts (25x)</td><td>McMaster-Carr</td><td>92741A100</td><td>Used to make arenas. Can be replaced by regular hex nuts (90480A005, McMaster-Carr).</td></tr><tr><td>Camcorder</td><td>Canon</td><td>Vixia HF R700</td><td>Can be replaced by any consumer comcorder.</td></tr></tbody></table>

measuring and altering mating drive in male drosophila melanogaster

soruşturmanın yıllardır rağmen, motivasyon devletlerin nöronal ve moleküler temelleri gizemli kalır. Biz son zamanlarda burada detay metotları olan erkek Drosophila melanogaster (Drosophila) çiftleşme sürücüyü kullanarak motivasyon derinlemesine soruşturulması için bir roman, indirgemeci ve ölçeklenebilir bir sistem geliştirdik. davranışsal paradigma erkek çiftleşme sürücü tekrarlanan çiftleştirerek boyunca doğurganlık yanında azalır ve ~ 3 d üzerinde kurtarır bulgu merkezleri. Bu sistemde, sinek mevcut güçlü neurogenetic araçlar genetik erişilebilirlik ve cinsel davranış için varsayılan bağlantı şemasına ile birleşir. Bu yakınlaşma hızlı izolasyon ve özel motivasyon fonksiyonları ile küçük nöronal popülasyonlarının sorgulama sağlar. Burada detay ölçmek ve erkek sinek kur motivasyonu değiştirmek için kullanılır tokluk testinin tasarımı ve yürütülmesi biz. Kullanımı BuTahlil, biz de düşük erkek çiftleşme sürücü dopaminerjik nöronların uyararak aşılabilir olduğunu göstermektedir. tokluk tahlil genetik arka plan etkilerine basit, hesaplı ve sağlamdır. Biz tokluk tahlil motivasyon devletler nörobiyolojisine içine birçok yeni anlayışlar üretmek için bekliyoruz.

Drosophila eşleşen tahrik karakterize etmek için, 3 günlük bir WT Canton-S erkek 2-B doyma deneyi ile test edildi. tahlil (4.5 saat) boyunca, erkekler 4.8 ± 0.3 ortalama arkadaşı kez (ortalama, SEM ± standart hata demek). Eşleştirmesi, ilk 2 saat boyunca (% 78) (Şekil 6A, 6B) &#39;de daha çok başlatmak ve deneyi (Şekil 6A, 6B) ilerledikçe sıklığı azalır. Bu azalma çiftleşme ortakları eksikliği (% 74 kadın tahlil boyunca...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster at JoVE.com

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Bu makale melanogaste motivasyon incelemek için r Drosophila erkek çiftleşme sürücüsünü kullanan bir davranış deneyi anlatır. Bu yöntemi kullanarak, araştırmacılar bu motivasyonu altında yatan genetik moleküler ve hücresel mekanizmaları ortaya çıkarmak için ileri sinek neurogenetic teknikler kullanabilirler.

Ölçme ve Male Değiştirme Çiftleşme Sürücü<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

measuring-and-altering-mating-drive-in-male-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

11.0K Görüntüleme.  Boston Children’s Hospital.  Bu makale melanogaste motivasyon incelemek için r Drosophila erkek çiftleşme sürücüsünü kullanan bir davranış deneyi anlatır. Bu yöntemi kullanarak, araştırmacılar bu motivasyonu altında yatan genetik moleküler ve hücresel mekanizmaları ortaya çıkarmak için ileri sinek neurogenetic teknikler kullanabilirler. 

Video: Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

With an estimated 6000 species worldwide, hoverflies are ecologically important as alternative pollinators to domesticated honeybees. However, they are also a useful scientific model to study motion vision and flight dynamics in a controlled laboratory setting. As the larvae develop in organically polluted water, they are useful models for investigating investment in microbial immunity. While large scale commercial breeding for agriculture already occurs, there are no standardized protocols for maintaining captive populations for scientific studies. This is important as commercial captive breeding programs focusing on mass output during peak pollination periods may fail to provide a population that is consistent, stable and robust throughout the year, as is often needed for other research purposes. Therefore, a method to establish, maintain and refresh a captive research population is required. Here, we describe the utilization of an artificial hibernation cycle, in addition to the nutritional and housing requirements, for long term maintenance of Eristalis tenax. Using these methods, we have significantly increased the health and longevity of captive populations of E. tenax compared to previous reports. We furthermore discuss small scale rearing methods and options for optimizing yields and manipulating population demographics.

Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

The overall goal of these procedures is to establish, maintain and refresh a captive population of Eristalis tenax in a research setting.

Yetiştirme ve araştırma çalışmaları için Eristalis tenax Hoverflies uzun vadeli bakım

With an estimated 6000 species worldwide, hoverflies are ecologically important as alternative pollinators to domesticated honeybees. However, they are ...

Çevre

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors remains poorly understood. In Drosophila melanogaster, environmental cues, such as food availability, affect mating activity offering a tractable system to investigate the mechanisms modulating sexual behavior. In D. melanogaster, environmental cues are often sensed via the chemosensory gustatory and olfactory systems. Here, we present a method to test the effect of environmental chemical cues on mating behavior. The assay consists of a small mating arena containing food medium and a mating couple. The mating frequency for each couple is continuously monitored for 24 h. Here we present the applicability of this assay to test environmental compounds from an external source through a pressurized air system as well as manipulation of the environmental components directly in the mating arena. The use of a pressurized air system is especially useful to test the effect of very volatile compounds, while manipulating components directly in the mating arena can be of value to ascertain a compound's presence. This assay can be adapted to answer questions about the influence of genetic and environmental cues on mating behavior and fecundity as well as other male and female reproductive behaviors.

A Method to Test the Effect of Environmental Cues on Mating Behavior in Drosophila melanogaster

We demonstrate an assay to analyze the environmental and genetic cues that influence mating behavior in the fruit fly Drosophila melanogaster.

Çevresel İpuçlarının Eklem Davranışı Üzerine Etkisini Test Etmek İçin Bir Yöntem<em&gt; Drosophila melanogaster</em

An individual's sexual drive is influenced by genotype, experience and environmental conditions. How these factors interact to modulate sexual behaviors ...

Davranış

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular disease and various neurological diseases1. We have optimized simple and robust behavioral assays for determining larval locomotion, adult climbing ability (RING assay), and courtship behaviors of Drosophila. These behavioral assays are widely applicable for studying the role of genetic and environmental factors on fly behavior. Larval crawling ability can be reliably used for determining early stage changes in the crawling abilities of Drosophila larvae and also for examining effect of drugs or human disease genes (in transgenic flies) on their locomotion. The larval crawling assay becomes more applicable if expression or abolition of a gene causes lethality in pupal or adult stages, as these flies do not survive to adulthood where they otherwise could be assessed. This basic assay can also be used in conjunction with bright light or stress to examine additional behavioral responses in Drosophila larvae. Courtship behavior has been widely used to investigate genetic basis of sexual behavior, and can also be used to examine activity and coordination, as well as learning and memory. Drosophila courtship behavior involves the exchange of various sensory stimuli including visual, auditory, and chemosensory signals between males and females that lead to a complex series of well characterized motor behaviors culminating in successful copulation. Traditional adult climbing assays (negative geotaxis) are tedious, labor intensive, and time consuming, with significant variation between different trials2-4. The rapid iterative negative geotaxis (RING) assay5 has many advantages over more widely employed protocols, providing a reproducible, sensitive, and high throughput approach to quantify adult locomotor and negative geotaxis behaviors. In the RING assay, several genotypes or drug treatments can be tested simultaneously using large number of animals, with the high-throughput approach making it more amenable for screening experiments.

Methods to Assay Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster is a genetically and behaviorally tractable model system that has been used to understand the molecular and cellular basis of many important biological processes for over a century 1. Drosophila has been well exploited to gain insights into the genetic basis of fly behavior.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Nörobilim

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by stressed conspecifics due to an odorant released during stress known as the Drosophila stress odorant (dSO). Through the use of the T-maze apparatus, one can quantify the avoidance of the dSO by responder flies in a very affordable and robust assay. Conditions necessary to obtain a strong performance are presented here. A stressful experience is necessary for the flies to emit dSO, as well as enough emitter flies to cause a robust avoidance response to the presence of dSO. Genetic background, but not their group size, strongly altered the avoidance of the dSO by the responder flies. Canton-S and Elwood display a higher performance in avoiding the dSO than Oregon and Samarkand strains. This behavioral assay will allow identification of mechanisms underlying this social behavior, and the assessment of the influence of genes and environmental conditions on both emission and avoidance of the dSO. Such an assay can be included in batteries of simple diagnostic tests used to identify social deficiencies of mutants or environmental conditions of interest.

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Here, we present a protocol to quantify the avoidance of stressed individuals. This paradigm is powerful yet user-friendly and can be used to assess the influence of genes and environment on one kind of social interaction in Drosophila melanogaster.

Sosyal Kaçınma Niceleme için Basit Testi<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy and cheap methods to distinguish between individuals in a trial. A standard technique for this is CO2 anaesthesia and then labelling or wing clipping each fly. However, this is invasive and has been shown to affect behavior. Other techniques have used coloration to identify flies. This article presents a simple and non-invasive method for labelling Drosophila that allows them to be individually identified within experiments, using food coloring. This method is used in trials where two males compete to mate with a female. Dyeing allowed quick and easy identification. There was, however, some difference in the strength of the coloration across the three species tested. Data is presented showing the dye has a lower impact on mating behavior than CO2 in Drosophila melanogaster. The impact of CO2 anaesthesia is shown to depend on the species of Drosophila, with D. pseudoobscura and D. subobscura showing no impact, whereas D. melanogaster males had reduced mating success. The dye method presented is applicable to a wide range of experimental designs.

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

This protocol describes a simple, cost effective way to individually identify Drosophila or other insects. Demonstration data investigating mating success across three species of Drosophila show that this method is comparable or better than the use of CO2 anaesthesia.

Davranış Tahliller için Boyama Böcekler: anestezi ve Çiftleşme Davranışı<em&gt; Drosophila</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a straightforward manner. As we previously demonstrated 1, in a two-dimensional chamber, we first force the flies to form a tight group, subsequently allowing them to take their preferred distance from each other. After the flies have settled, we measure the distance to the closest neighbor (or social space), processing a static picture with free online software (ImageJ). The analysis of the distance to the closest neighbor allows researchers to determine the effects of genetic and environmental factors on social interaction, while controlling for potential confounding factors. Diverse factors such as climbing ability, time of day, sex, and number of flies, can modify social spacing of flies. We thus propose a series of experimental controls to mitigate these confounding effects. This assay can be used for at least two purposes. First, researchers can determine how their favorite environmental shift (such as isolation, temperature, stress or toxins) will impact social spacing 1,2. Second, researchers can dissect the genetic and neural underpinnings of this basic form of social behavior 1,3. Specifically, we used it as a diagnostic tool to study the role of orthologous genes thought to be involved in social behavior in other organisms, such as candidate genes for autism in humans 4.

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

The effect of genes and environment on social space of Drosophila melanogaster can be quantified through a powerful but straightforward analytical paradigm. We show here different factors that can affect this social space, and thus need to be taken into consideration when designing experiments in this paradigm.

Sosyal Space Etkileyen Koşullar<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The social space assay described here can be used to quantify social interactions of Drosophila melanogaster &#8212; or other small insects &#8212; in a ...

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This complex behavior is influenced by genetic, hormonal and environmental factors. As in many organisms, previous fighting experience influences the fighting strategy of flies and the outcome of later contests: losing a fight increases the probability of losing later contests, revealing &#34;loser&#34; effects that likely involve learning and memory 2-4. The learning and memory that accompanies expression of complex social behaviors like aggression, is sensitive to pre-test handling of animals 5,6. Many experimental procedures are used in different laboratories to study aggression 7-9, however, no routinely used protocol that excludes handling of flies is currently available. Here, we report a new behavioral apparatus that eliminates handling of flies, using instead their innate negative geotactic responses to move animals into or out of fighting chambers. In this protocol, small circular fight arenas containing a food cup are divided into two equal halves by a removable plastic slider prior to introduction of flies. Flies enter chambers from their home isolation vials via sliding chamber doors and geotaxis. Upon removal of plastic sliders, flies are free to interact. After specified time periods, flies are separated again by sliders for subsequent experimentation. All of this is done easily without handling of individual flies. This apparatus offers a novel approach to study aggression and the associated learning and memory, including the formation of &#34;loser&#34; effects in fly fights. In addition, this new general-purpose behavioral apparatus can be employed to study other social behaviors of flies and should, in general, be of interest for investigating experience-related changes in fundamental behavioral processes.

A New Approach that Eliminates Handling for Studying Aggression and the "Loser" Effect in Drosophila melanogaster

During fruit fly fights, the behavioral patterns observed, fight dynamics, and associated learning and memory are influenced by experimental conditions. The protocol presented here describes a novel procedure that entirely eliminates handling of flies during experiments. This improves fight dynamics and allows formation of strong &#34;loser&#34; effects.

Saldırganlık incelenmesi için Handling ortadan kaldırır Yeni Bir Yaklaşım ve &quot;Loser&quot; Etkisi içinde<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aggressive behavior in Drosophila melanogaster is composed of the sequential expression of stereotypical behavioral patterns (for analysis see 1). This ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

Kullanımı Ödül arayan davranış değişiklikleri Tedbir Basit Yolu<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model organisms such as the fruit fly, Drosophila melanogaster. Drosophila is useful for understanding the basic neurobiology underlying cognitive deficits resulting from mutations in genes associated with human cognitive disorders, such as intellectual disability (ID) and autism. This work describes a methodology for testing learning and memory using a classic paradigm in Drosophila known as courtship conditioning. Male flies court females using a distinct pattern of easily recognizable behaviors. Premated females are not receptive to mating and will reject the male&#39;s copulation attempts. In response to this rejection, male flies reduce their courtship behavior. This learned reduction in courtship behavior is measured over time, serving as an indicator of learning and memory. The basic numerical output of this assay is the courtship index (CI), which is defined as the percentage of time that a male spends courting during a 10 min interval. The learning index (LI) is the relative reduction of CI in flies that have been exposed to a premated female compared to na&#239;ve flies with no previous social encounters. For the statistical comparison of LIs between genotypes, a randomization test with bootstrapping is used. To illustrate how the assay can be used to address the role of a gene relating to learning and memory, the pan-neuronal knockdown of Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase (Dhap-at) was characterized here. The human ortholog of Dhap-at, glyceronephosphate O-acyltransferase (GNPT), is involved in rhizomelic chondrodysplasia punctata type 2, an autosomal-recessive syndrome characterized by severe ID. Using the courtship conditioning assay, it was determined that Dhap-at is required for long-term memory, but not for short-term memory. This result serves as a basis for further investigation of the underlying molecular mechanisms.

Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory

This protocol describes a Drosophila learning and memory assay called courtship conditioning. This classic assay is based on a reduction of male courtship behavior after sexual rejection by a non-receptive premated female. This natural form of behavioral plasticity can be used to test learning, short-term memory, and long-term memory.

Öğrenme ve Bellek Tedrisi Olan Drosophila Kurbanlığı İklimlendirme

Many insights into the molecular mechanisms underlying learning and memory have been elucidated through the use of simple behavioral assays in model ...

Assessing Differences in Sperm Competitive Ability in Drosophila

Competition among conspecific males for fertilizing the ova is one of the mechanisms of sexual selection, i.e. selection that operates on maximizing the number of successful mating events rather than on maximizing survival and viability 1. Sperm competition represents the competition between males after copulating with the same female 2, in which their sperm are coincidental in time and space. This phenomenon has been reported in multiple species of plants and animals 3. For example, wild-caught D. melanogaster females usually contain sperm from 2-3 males 4. The sperm are stored in specialized organs with limited storage capacity, which might lead to the direct competition of the sperm from different males 2,5.
Comparing sperm competitive ability of different males of interest (experimental male types) has been performed through controlled double-mating experiments in the laboratory 6,7. Briefly, a single female is exposed to two different males consecutively, one experimental male and one cross-mating reference male. The same mating scheme is then followed using other experimental male types thus facilitating the indirect comparison of the competitive ability of their sperm through a common reference. The fraction of individuals fathered by the experimental and reference males is identified using markers, which allows one to estimate sperm competitive ability using simple mathematical expressions 7,8. In addition, sperm competitive ability can be estimated in two different scenarios depending on whether the experimental male is second or first to mate (offense and defense assay, respectively) 9, which is assumed to be reflective of different competence attributes.
Here, we describe an approach that helps to interrogate the role of different genetic factors that putatively underlie the phenomenon of sperm competitive ability in D. melanogaster.

Assessing Differences in Sperm Competitive Ability in Drosophila

Differential sperm competitive ability among Drosophila males with distinct genotypes can be ascertained through double-mating experiments. Each of these experiments involves one of the males of interest and a reference male. Readily identifiable markers in the progeny allow inference of the fraction of individuals fathered by each male.

Sperm Rekabet Yeteneği in değerlendirilmesi farklılıklar<em&gt; Drosophila</em

Competition among conspecific males for fertilizing the ova is one of the mechanisms of sexual selection, i.e. selection that operates on maximizing the ...

Ölçme ve Male Değiştirme Çiftleşme Sürücü

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Yetiştirme ve araştırma çalışmaları için Eristalis tenax Hoverflies uzun vadeli bakım

Çevresel İpuçlarının Eklem Davranışı Üzerine Etkisini Test Etmek İçin Bir Yöntem

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Sosyal Kaçınma Niceleme için Basit Testi

Davranış Tahliller için Boyama Böcekler: anestezi ve Çiftleşme Davranışı

Sosyal Space Etkileyen Koşullar

Saldırganlık incelenmesi için Handling ortadan kaldırır Yeni Bir Yaklaşım ve "Loser" Etkisi içinde

Kullanımı Ödül arayan davranış değişiklikleri Tedbir Basit Yolu

Öğrenme ve Bellek Tedrisi Olan Drosophila Kurbanlığı İklimlendirme

Sperm Rekabet Yeteneği in değerlendirilmesi farklılıklar