We are indebted to Xuefei Yang, Sabine Both, Lin Chen and Kaitian Wang for coordinating the fieldwork and establishing the BEF-China experiment. We are also grateful to the whole BEF-China research group for their general support. BEF-China is mainly funded by the German Research Foundation (DFG FOR 891/1 and 2) and funding for this particular project was provided by the German Research Foundation to H.B. (DFG BR 1698/9-2). We are also thankful for the travel grants and summer schools financed by the Sino-German Centre for Research Promotion in Beijing (GZ 524, 592, 698, 699 and 785). In addition we would like to thank David Eichenberg, Michael Staab, Katja Grotius, Silvana Tornack, Lin Chen, and Shouren Zhang for their support in the field and in the lab.

1. Stomatal İletkenlik <ol><li> Stoma iletkenliği Ölçümleri NOT: kararlı hal Porometer® (Ongen SC1) basit bir tip kullanımı yapılmış yazarları. Porometer® tasarımı, küçük boyutu, sezgisel manuel kullanım ve yüksek güvenilirlik avantajı vardır. Alanında stoma iletkenliği ölçerken, en verimli mümkün bir tekrarlanan ölçüm döngüsü için ölçülen bireyler arasındaki mesafeyi en aza indirmek için emin olun. </li><li> Tekrarlanabilir bir desene göre farklı türlerin ve bireylerin yaprakları (; güneş veya gölge yaprakları, vb mümkünse sadece aynı düğümden ve sadece tek bir kategoriden aynı yükseklikte, aynı pozlama, tesis içinde aynı pozisyon) seçin. <ol><li> Sadece tedbir, sağlıklı, sigara hasarlı ve tam gelişmiş durumda bırakır. Tekrarlanan ölçümler aynı yaprak yapılır emin olmak için, (kablo bağları veya renk bantla örneğin) bireyler üzerinde yaprakları işaretleyin. NOT: MEASURağıza ait iletkenlik ve EMENTS yaprak orta damarı ve güçlü yaprak damarları patlatmaktir yalnızca yaprak yüzeyinde yapılmalıdır. </li><li> Ağıza ait iletkenlik değerleri, öğle saatlerinde açık düşüş gösterene kadar beş ila on tekrarlanan ölçümler alarak güneş doğmadan önce sabahın erken saatlerinde ölçümleri başlatın. NOT: Ölçümlerin günlük ders VPD&#39;den ve ağıza iletkenlik arasındaki ilişkileri analiz etmek için iyi veriler sunacak. </li></ol></li><li> VPD ölçümler <ol><li> Tercihen portatif kaydediciler ile her g S ölçümü, kayıt sıcaklık ve bağıl nem ile doğrudan aynı yaprağın pozisyonunda koşullarını ölçmek için. Buhar basıncı açığı Ağustos-Roche Magnus formülü 15 kullanın hesaplanması için. </li></ol></li></ol><img alt="Denklem 1" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/52738/52738eq1.jpg" width="300" /> e&#39;nin s = doyma su buharı basıncı [hPa] <ol start="4"><li> Model g S - VPD tepki <ol><li> Türlerin başına bir analiz içine tek tek yaprakları tüm günlük derslerini birleştirerek VPD&#39;den karşı şimdi komplo türleri bilge tüm g S veri. Maksimum değer arayarak stomatal iletkenlik verilerinden gözlenen maksimum değeri ayıklayın. , Türe bilge karşılaştırılabilirlik modeli ölçek bu türün (g S / g SMAX) için gözlemlenen maksimum değerin aracılığıyla gözlemlenen değerleri bölmek için. </li><li> Her tür için, g S logits gerileme (g S / g Smax) VPD&#39;den ve binom hata dağılımı (a, b ve regresyon parametrelerini temsil c) ile genelleştirilmiş doğrusal model kullanarak VPD&#39;den kuadratik vadede: </li></ol></li></ol><img alt="Denklem 2" src="/files/ftp_upload/52738/52738eq2.jpg" width="300" /><img alt="figür 1" src="/files/ftp_upload/52738/52738fig1highres.jpg" wlikli = &quot;700&quot; /&gt; Şekil çizilen değerleri ve g S donatılmış model 1. Örnek -. VPD ağıza ait iletkenlik türleri Liquidambar formosana için buhar basıncı açık bir fonksiyonu olarak çizilir. Boş noktalar gözlenen değerleri temsil etmektedir. (A) en fazla ağıza ait iletkenlik en fazla ağıza ait iletkenlik de VPD ve ağıza ait iletkenlik ortalama mutlak Böylece olmayan ölçekli stomatal iletimle (g S) veri elde edildi. (B) Ölçekli ağıza ait iletkenlik verileri (g S / g Smax) göreli parametreleri ayıklamak için çizilmiştir (dolu noktalar olarak gösterilen) 20. Yeniden baskı 20 izniyle. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52738/52738fig1highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52738/52738fig2highres.jpg" wiDTH = &quot;400&quot; /&gt; Tüm türler için Şekil 2. Tüm donatılmış modeller. Tüm türler için VPD gerileme stomatal iletkenlik verileri için model grafikleri. Evergreen türleri kırmızı çizgilerle 20 siyah çizgiler, yaprak döken türler tarafından temsil edilmektedir. 20 izniyle yeniden yazdırın. NOT: logits kullanmak yerine VPD&#39;den doğrudan g S gerileme, g SMAX aşmaması maksimum değerleri modellenmiş noktasına götürür ve g S yüksek VPD&#39;den de 0 yaklaşır. <ol start="5"><li> Her tür için stoma düzenleme parametresi Özü <ol><li> Mutlak modellenen g SMAX değerleri (Şekil 1B MaxFit) hesaplayın. Bunu yapmak için, VPD gsMaxFit = b / 2a verir sıfıra 1.4.2 ilk türevi, ayar maksimum stoma iletkenliği de VPD hesaplayın. 1.4.2 formül içine VPD gsMaxFit yerleştirin ve MaxFit elde etmek için e gücüne yükseltmek. M hesaplayıntürlere göre tüm iletkenlik ölçüm EAN (Şekil 1A bakınız). NOT: istatistiksel yazılım R (http://www.r-project.org). </li><li> Modelin maksimum (MaxFit) ve (2) VPD de (1), stomatal iletimi ve VPD: ölçekli modeli göreli değerleri, (g S / g Smax), stomatal iletimi ve VPD değerleri aşağıdaki iki nokta ekstresi hesaplamak için eğrinin dönüm ikinci noktada (Şekil 1B bakınız). Bu noktaların mutlak g S değerleri elde etmek g SMAX bu değerleri çarpın. Analiz 39 türün tek modellerinin tam bir bindirme için Şekil 2&#39;ye bakınız. </li></ol></li></ol> Stomatal Özelliklerinin 2. Ölçümler <ol><li> Ağıza ait iletkenlik ölçümleri için kullanılmıştır aynı yapraklar tercihen numune alın. Eğer bu mümkün değilse, yaprakları tercih uygulanmıştır aynı seçme işlemi yapmakağıza ait iletkenlik ölçümleri için, tercihen aynı bireyler üzerinde. </li><li> Renksiz, çabuk kuruyan oje ince bir tabaka sürün taze örnek (test farklı marka, bazıları diğerlerinden daha uygundur). Örnekler hemen işlenebilir yapamıyorsanız,% 70 alkol saklayın. Oje kuruduktan sonra, hafifçe yapraktan izlenimini soyun ve normal yaprak numunesi gibi, mikroskopik analiz için devam edin. NOT: Yüksek kıl yoğunluğu ile yaprak halinde sodyum hidroksit ya da 1 uygulanması için bir önceki adımda: asetik asit ve oksijen peroksit 1 çözeltisi daha sonuçlara yol açabilir. </li><li> Optik mikroskop analytics <ol><li> 400X ile 40X arasında büyütme yapabilen bir optik mikroskop bir kamera bağlayın. Kamera mikroskop bağlandıktan sonra, bir ölçek yardımıyla, optik büyütme ve resim çözünürlüğü, örneğin fotoğraflar çektiniz maç. </li><li> Açık kaynak i istihdamImageJ 16 gibi mage işleme yazılımı bu resimleri analiz eder. <ol><li> Hiçbir kir, başparmak baskılar, hasarlı alanlar, ya da büyük yaprak damarları olan bir alanda görüntü görüntü analizi aracı şekil aracıyla bir şekil çizin. Bu alanda en az 50.000 mikron 2 başına numunenin toplam stoma sayın. </li><li> Stoma bekçi hücresi uzunluğu ve gözenek uzunluğunu ölçün. Mm 2 başına stoma sayısını hesaplayın. Mm 2 başına hücre sayısını epidermal için stoma yoğunluğu oranı olarak stoma indeksi hesaplayın. </li></ol></li></ol></li></ol> Yaprak Ven Özelliklerinin Değerlendirilmesi 3. NOT: Yaprak damar özelliklerinin değerlendirilmesi için, bir istihdam edildi Sack &amp; Scoffoni 17 bir protokol değiştirilmiş. <ol><li> örnek hazırlama NOT: yaprak damarları görünürlüğünü optimize etmek için, yapraklar ilk olarak ağartılmış ve ardından Safranine ve malakit yeşili ile boyanır. <ol><li> Leav ağartmak içines, (yine biraz daha iyi işe yarayabilecek test farklı markalar) onlara decolorizer en az 72 saat% 50 çözüm bırakın. Seçenek olarak ise,% 5 NaOH çözeltisi ya da% 10 KOH çözeltisi ya da% 25 H2O 2 solüsyonu kullanın. </li><li> 30 ° C çözüm ısıtın veya daha iyi etkileri için adım 3.1.1 farklı çözümler birleştirir. Daha sonra su içinde birkaç kez çalkalayın. Onların yaprak özelliklerine bağlı olarak, belirli türler için ağartma işlemi uyarlayın. NOT: Kalın yaprakları çözüm banyo ve ya daha agresif çözümler uzun süreler gerekebilir. Daha ince ve daha yumuşak yaprak az 72 saat bir biçimde derecede ağartılabilmektedirler. </li><li> Yapraklar,% 100 etanol içinde yer renk için. % 1 safranin çözeltisi içinde 30 dakika - 2 onları renk. Renklendirme artırmak için, sadece birkaç saniye boyunca% 1 malakit yeşili bir solüsyonu ile muamele ekleyin. En iyi sonuçları elde etmek için zamanlama ve yoğunluk bakımından her türün protokolü uyarlayın. Durulayın seDaha sonra su içinde veral süreleri. Yapraklar derinlemesine lekeli ise, etanol veya decolorizer biraz zaman yardımcı olabilir. </li></ol></li><li> Numune analizi <ol><li> Yaklaşık 1.200 dpi çözünürlükte bir arka tarayıcı ile yaprakları tarayın. O piksel uzunluğu taranmış yaprak mutlak uzunluk önlemlerinin geri izlenebilmektedir sağlamak için, bir ölçek yardımıyla, resim, örneğin çözünürlüğe alınan taramaları eşleştirin. </li><li> Yaprakların alanı, çevresi, uzunluğu ve genişliği ölçün. Birkaç endeksleri, örneğin, uzunluk / genişlik ve çevresini 2 / alanını hesaplayınız. Resmin ortasına dışında 1 1 cm dikdörtgen kesin. Birinci ve ikinci dereceden damarlarının çapını ölçün (ana orta damar dahil değildir). Bu quadrat (ven yoğunluğu) birinci düzenin bütün damarların uzunluğunu ölçün. </li></ol></li></ol> Diğer Yaprak Özelliklerinin Değerlendirilmesi 4. NOT: Belirli bir şekilde Asses tipik yaprak özelliklerivb yaprak alanı (SLA), yaprak kuru madde içeriği (LDMC), yaprak alanı, element içerikleri, yaprak alışkanlığı, yaprak pinnation, yaprak bileşik tipi, yaprak marjı tipi protokolleri 18,19 kurulan aşağıdaki. <ol><li> Gözlemsel yaprak özellikleri <ol><li> Yaprak pinnation, yaprak bileşik türü, yaprak marjı türünü ve alanda gözlem yoluyla extrafloral nectaries 18,19 varlığını değerlendirin. </li></ol></li><li> Analitik yaprak özellikleri <ol><li> Tercihen spesifik yaprak alanı (SLA), yaprak alanı ve yaprak kuru madde içeriği (LDMC) 18,19 tayini için, diğer ölçümler için kullanılan aynı kişiler üzerinde, taze yaprak örnekleri toplamak. 80 ° C&#39;de kurutma dolabında 48 saat sonra, tercihen aynı yapraklar üzerinde, element içeriği ve oranları ölçer. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Schulze, E. -. D., Kelliher, F., K&#246;rner, C., Lloyd, J., Leuning, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationships+among+maximum+stomatal+conductance,+ecosystem+surface+conductance,+carbon+assimilation+rate,+and+plant+nitrogen+nutrition:+a+global+ecology+scaling+exercise.">Relationships among maximum stomatal conductance, ecosystem surface conductance, carbon assimilation rate, and plant nitrogen nutrition: a global ecology scaling exercise.</a> Annual Review of Ecology and Systematics. 25 (1), 629-662 (1994).</li><li>Chaturvedi, R. K., Raghubanshi, A. S., Singh, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+tree+seedlings+in+a+tropical+dry+forest+in+relation+to+soil+moisture+and+leaf+traits.">Growth of tree seedlings in a tropical dry forest in relation to soil moisture and leaf traits.</a> Journal of Plant Ecology. 6 (2), 158-170 (2013).</li><li>Santiago, L. S., Kim, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlated+evolution+of+leaf+shape+and+physiology+in+the+woody+Sonchus.+alliance+(Asteraceae:+Sonchinae)+in+Macaronesia.">Correlated evolution of leaf shape and physiology in the woody Sonchus. alliance (Asteraceae: Sonchinae) in Macaronesia.</a> International Journal of Plant Sciences. 170 (1), 83-92 (2009).</li><li>Aasamaa, K., Sober, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydraulic+conductance+and+stomatal+sensitivity+in+six+deciduous+tree+species.">Hydraulic conductance and stomatal sensitivity in six deciduous tree species.</a> Biologia Plantarum. 44 (1), 65-73 (2001).</li><li>Waring, R. H., Chen, J., Gao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant-water+relations+at+multiple+scales:+integration+from+observations,+modeling+and+remote+sensing.">Plant-water relations at multiple scales: integration from observations, modeling and remote sensing.</a> Journal of Plant Ecology-UK. 4, 1-2 (2011).</li><li>Oren, R., Sperry, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survey+and+synthesis+of+intra-+and+interspecific+variation+in+stomatal+sensitivity+to+vapour+pressure+deficit.">Survey and synthesis of intra- and interspecific variation in stomatal sensitivity to vapour pressure deficit.</a> Plant, Cell and Environment. 22 (12), 1515-1526 (1999).</li><li>Leuning, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+appraisal+of+a+combined+stomatal-photosynthesis+model+for+C3+plants.">A critical appraisal of a combined stomatal-photosynthesis model for C3 plants.</a> Plant, Cell and Environment. 18 (4), 339-355 (1995).</li><li>Patan&#232;, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leaf+area+index,+leaf+transpiration+and+stomatal+conductance+as+affected+by+soil+water+deficit+and+vpd+in+processing+tomato+in+semi+arid+mediterranean+climate.">Leaf area index, leaf transpiration and stomatal conductance as affected by soil water deficit and vpd in processing tomato in semi arid mediterranean climate.</a> Journal of Agronomy and Crop Science. 197 (3), 165-176 (2011).</li><li>Jarvis, A. J., Davies, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+coupled+response+of+stomatal+conductance+to+photosynthesis+and+transpiration.">The coupled response of stomatal conductance to photosynthesis and transpiration.</a> Journal of Experimental Botany. 49 (Special Issue), 399-406 (1998).</li><li>Roelfsema, M. R. G., Hedrich, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+the+light+of+stomatal+opening:+new+insights+into+&#8220;the+Watergate.&#8221;.">In the light of stomatal opening: new insights into &#8220;the Watergate.&#8221;.</a> New Phytologist. 167 (3), 665-691 (2005).</li><li>Wong, S. C., Cowan, I. R., Farquhar, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stomatal+conductance+correlates+with+photosynthetic+capacity.">Stomatal conductance correlates with photosynthetic capacity.</a> Nature. 282 (5737), 424-426 (1979).</li><li>Sobrado, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydraulic+conductance+and+water+potential+differences+inside+leaves+of+tropical+evergreen+and+deciduous+species.">Hydraulic conductance and water potential differences inside leaves of tropical evergreen and deciduous species.</a> Biologia Plantarum. 40 (4), 633-637 (1998).</li><li>Zhang, Y. -. J., Meinzer, F. C., Qi, J. -. H., Goldstein, G., Cao, K. -. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midday+stomatal+conductance+is+more+related+to+stem+rather+than+leaf+water+status+in+subtropical+deciduous+and+evergreen+broadleaf+trees.">Midday stomatal conductance is more related to stem rather than leaf water status in subtropical deciduous and evergreen broadleaf trees.</a> Plant, Cell and Environment. 36 (1), 149-158 (2013).</li><li>Aerts, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advantages+of+being+evergreen.">The advantages of being evergreen.</a> Trends in Ecology, &amp; Evolution. 10 (10), 402-407 (1995).</li><li>Murray, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+computation+of+saturation+vapor+pressure.">On the computation of saturation vapor pressure.</a> Journal of Applied Meteorology. 6 (1), 203-204 (1967).</li><li>Scoffoni, C., Sack, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+leaf+vein+traits.">Quantifying leaf vein traits.</a> PrometheusWiki. , (2011).</li><li>Cornelissen, J. H. C., Lavorel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+handbook+of+protocols+for+standardised+and+easy+measurement+of+plant+functional+traits+worldwide.">A handbook of protocols for standardised and easy measurement of plant functional traits worldwide.</a> Australian Journal of Botany. 51 (4), 335-380 (2003).</li><li>Perez-Harguindeguy, N., D&#237;az, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+handbook+for+standardised+measurement+of+plant+functional+traits+worldwide.">New handbook for standardised measurement of plant functional traits worldwide.</a> Australian Journal of Botany. 61 (3), 167-234 (2013).</li><li>Kr&#246;ber, W., Bruelheide, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transpiration+and+stomatal+control:+A+cross-species+study+of+leaf+traits+in+39+evergreen+and+deciduous+broadleaved+subtropical+tree+species.">Transpiration and stomatal control: A cross-species study of leaf traits in 39 evergreen and deciduous broadleaved subtropical tree species.</a> Trees. 28 (3), 901-914 (2014).</li><li>Larcher, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Physiological plant ecology. , 514 (2003).</li><li>Bunce, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+transpiration+control+stomatal+responses+to+water+vapour+pressure+deficit.">Does transpiration control stomatal responses to water vapour pressure deficit.</a> Plant, Cell and Environment. 20 (1), 131-135 (1997).</li><li>Bunce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+do+leaf+hydraulics+limit+stomatal+conductance+at+high+water+vapour+pressure+deficits.">How do leaf hydraulics limit stomatal conductance at high water vapour pressure deficits.</a> Plant, Cell and Environment. 29 (8), 1644-1650 (2006).</li><li>Poorter, L., Bongers, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leaf+traits+are+good+predictors+of+plant+performance+across+53+rain+forest+species.">Leaf traits are good predictors of plant performance across 53 rain forest species.</a> Ecological Sciences of America. 87 (7), 1733-1743 (2006).</li><li>Juhrbandt, J., Leuschner, C., H&#246;lscher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+maximal+stomatal+conductance+and+leaf+traits+in+eight+Southeast+Asian+early+successional+tree+species.">The relationship between maximal stomatal conductance and leaf traits in eight Southeast Asian early successional tree species.</a> Forest Ecology and Management. 202 (1-3), 245-256 (2004).</li><li>Brodribb, T. J., Holbrook, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leaf+physiology+does+not+predict+leaf+habit;+examples+from+tropical+dry+forest.">Leaf physiology does not predict leaf habit; examples from tropical dry forest.</a> Trees. 19 (3), 290-295 (2005).</li><li>Kr&#246;ber, W., Zhang, S., Ehmig, M., Bruelheide, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xylem+hydraulic+structure+and+the+Leaf+Economics+Spectrum+-+A+cross-species+study+of+39+evergreen+and+deciduous+broadleaved+subtropical+tree+species.">Xylem hydraulic structure and the Leaf Economics Spectrum - A cross-species study of 39 evergreen and deciduous broadleaved subtropical tree species.</a> PLOS ONE. 9 (11), e109211 (2014).</li><li>Kr&#246;ber, W., Heklau, H., Bruelheide, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leaf+morphology+of+40+evergreen+and+deciduous+broadleaved+subtropical+tree+species+and+relationships+to+functional+ecophysiological+traits.">Leaf morphology of 40 evergreen and deciduous broadleaved subtropical tree species and relationships to functional ecophysiological traits.</a> Plant Biology. 17 (2), 373-383 (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Bu çalışmada sunulan yöntem ile ekstre stoma yönetmelik parametreleri gibi stoma yoğunluğu ve stoma indeksi gibi stoma özelliklerin öneminin altını çizmektedir. Bu yeni ilişkiler anatomik ve kimyasal yaprak 20 özellikleri, morfolojik fizyolojik modellerden parametreleri bağlayan potansiyelini göstermektedir. Diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında, mevcut yaklaşım stoma iletkenliği modellenen Aram maksimum yarısına kadar regüle edildiği eşsiz ve açık VPD değeri yakalama avantajı taşımaktadır. Protokolde belirtilen tüm adımları en kritik olanları stoma iletkenliği ölçümleri bulunmaktadır. Nedeniyle ağıza ait iletkenlik ortam hava koşulları çok faktörlü düzenlemeye g S üzerinde güçlü bir etkiye sahiptir. Yüksek bağıl nem düşük ışık yoğunluğunda Stoma iletkenlik ölçümleri 21-23 güvenilmez olabilir. Morfolojik saygı ve anat ileomical özellikleri, protokol her çalışmaya dahil hedef türe göre adapte edilmelidir. Damar yoğunluğu analizinde Özellikle, ağartma ve yaprakların boyama süresi yaprak yapısı ve tokluk bağlı olarak değiştirilmelidir. Yöntemin Potansiyel sınırlamalar stoma iletkenliği ölçümleri imkansız veya karmaşık ve olağanüstü yaprak formları nedeniyle hata eğilimli olan türler bulunmaktadır. Bu çok dar yapraklı bıçaklı kozalaklı ve otları içerebilir. Bizim sonuçlarımız kısmen ağıza ait iletkenlik parametreleri ve birkaç diğer çalışmalarda karşılık yaprak ekonomi spektrumunun (LES), yaprak özellikleri arasındaki bağlantının ilk hipotezi doğrulamak. Örneğin, Poorter ve Bongers (2006) 24 gr S artan yaprak ömrü ile azalan g S ve örneğin LES tarafından temsil özellikleri arasında yakın bir bağlantı bildirdi. Bu duruma göre, Schulze et al. (1994) 1 demonstYaprak azot içeriği ve g SMAX arasında puan net bağlantılar. Benzer şekilde, Juhrbandt ve ark. (2004) 25 g SMAX ve yaprak alanı ve yaprak azot içeriği arasında anlamlı ilişkiler bulunmuştur. Yaprak alışkanlığı ile ilgili net farklılıklar İkinci hipotez teyit edilemedi. Dökmeyen ve yaprak döken yaprak alışkanlığı içinde ölçülen parametreler ve özellikler yüksek varyasyon yaprak alışkanlık LES iyi bir tanımlayıcı olmadığını gösterir. Brodribb ve Holbrook (2005) 26 geniş özellik varyasyon yaprak alışkanlığı her türlü ortak olduğu yaprak alışkanlık ve yaprak fizyolojik stratejiler kaçınılmaz bağlı olmayabilir olduğunu tartıştı. Yaklaşım özellikleri ve belirli ksilem hidrolik iletkenlik ve mikroskopi ahşap 27 davranışlar olarak yapraklarda daha örneğin ksilem hidrolik ilgili özelliklerin, diğer bitki organlarının fizyolojik özelliklerine uzatılabilir. Benzer şekilde, diğerBu tür çit parankima yapısı ve Epikutikula tabaka yapısı mikroskop türetilen gibi yaprak özellikleri türleri 28 dahil edilebilir. Özetle, bu çalışma LES ve ağıza yönetmelik arasındaki yakın ilişkiyi doğruladı. Buna ek olarak, burada sunulan yöntem LES ilgili olmayan stoma düzenleme desen yönleriyle ortaya koymuştur. Böyle stoma büyüklüğü, yoğunluğu ve indeks yanı sıra damar uzunluğu Özellikle belirli yaprak özellikleri, fonksiyonel bitki çalışmalarında gelecekte dikkate değerdir.

Bitki yaprakları fonksiyonel anlayışı ilerletmek için birçok yeni çalışmalar bu tür yaprak stoma iletkenliği (g S) 1-4 gibi fizyolojik tepkiler morfolojik, anatomik ve kimyasal yaprak özellikleri ilişkilendirmek çalıştılar. Buna ek olarak, yaprak özellikleri için, stoma iletkenliği kuvvetle böyle fotosentez aktif foton akı yoğunluğu, hava sıcaklığı ve VPD&#39;den 5 gibi çevresel koşullardan, etkilenir. Ağırlıklı olarak VPD&#39;den 6 gs doğrusal regresyon dayalı VPD eğrileri 6-8 - Çeşitli yollar gs modellemek için önerilmiştir. Buna karşılık, bu çalışmada sunulan model göreli stoma iletkenliği (yani maksimum stomatal iletkenlik g SMAX g S oranı) VPD&#39;den ve ikinci dereceden regresör terim olarak VPD ekleyerek doğrusal olmayan hesapları ve logits geriler. Diğer modellere kıyasla, yeni model açıklayan parametreler türetmek için izin verirg S su sıkıntısı altında aşağı regüle edildiği VPD. Benzer şekilde, VPD g S maksimum olduğu elde edilir. Böyle fizyolojik parametreler sıkı karbon asimilasyonu 9,10 bağlantılı olduğu beklendiği gibi LES yansıtıldığı gibi bu model parametreleri ve besin ve kaynak tahsisi için anahtar yaprak özellikleri arasında yakın bir bağ 3,11 beklenmelidir. Sonuç olarak, aynı zamanda LES özellikleri ile stoma düzenleme stratejileri arasında sıkı bir ilişki olmalıdır. Böyle bir ilişki, hem LES ve su kullanım verimliliği 12,13 ile ilişkilidir yaprak alışkanlığı (dökmeyen karşı döken) yaprak alışkanlığı özellikle de bekleniyor. Evergreen türleri yavaş büyürler, fakat besin 14 fakir ortamlarda daha etkilidir. Böylece, yaprak döken türler alışkanlığı daha muhafazakar su kullanım stratejisi ile, stoma düzenleme desenleri farklı çevirmek gerekir. Zorunluortak bir bahçe durumda geniş yapraklı ağaç türlerinin büyük bir set aring aşağıdaki hipotezler test edilmiştir: g S&#39;den 1) Model parametreleri - VPD modeller yaprak ekonomi spektrumunun ilgili yaprak özellikleri bağlanır. 2) Evergreen türleri yapraklı türlere göre daha düşük ortalama g S ve g SMAX değerlere sahiptir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>SC 1 Porometer</td>
			<td>Decagon</td>
			<td>NA</td>
			<td>Any other porometer is suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cable ties to mark leaves</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic sample bags</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper sample bags</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hygrometer</td>
			<td>Trotec</td>
			<td>NA</td>
			<td>Any other is suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nail polish</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axioskop 2 plus</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>NA</td>
			<td>Any other is suitable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bleach</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% NaOH</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% KOH</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25% H2O2</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malachite green</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safranine</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

relating stomatal conductance to leaf functional traits

Onlar böyle terleme ve karbon asimilasyonu gibi fizyolojik işlevleri yansıtır çünkü Yaprak fonksiyonel özellikleri önemlidir. Özellikle, morfolojik özellikleri yaprak su kullanım verimliliği, büyüme paterni ve besin kullanımı açısından bitkilerin stratejilerini özetlemek potansiyeline sahiptir. Yaprak ekonomi spektrumu (LES) fonksiyonel bitki ekolojisi tanınan çerçevedir ve (belirli yaprak alanı (SLA), yaprak azot, fosfor ve katyon içeriği artan ve yaprak kuru madde içeriği (LDMC) ve karbon azot oranını düşürme bir degrade yansıtır CN). LES düşük kütle-tabanlı karbon asimilasyon oranları ile uzun ömürlü yaprakları yaprak kütle başına yüksek fotosentez kapasitesi ile kısa ömürlü yaprakları o kadar farklı stratejiler anlatılmaktadır. Ancak, LES dahil değildir özellikler gibi stoma kontrolü ile ilgili olanlar gibi türün fizyolojisi hakkında ek bilgi, sağlayabilir. Protokoller yaprak functio geniş bir aralığı için sunulmuşturLES özellikleri değil, aynı zamanda LES bağımsız özellikleri de dahil olmak üzere nal özellikleri. Özellikle, yeni bir yöntem buhar basıncı açığı ağıza ait iletkenlik bitkilere özgü düzenleyici davranışı ilgilidir sokulur. Stoma düzenlemenin ortaya çıkan parametreler LES ve diğer bitki fonksiyonel özellikler ile mukayese edilebilir. Sonuçlar LES fonksiyonel yaprak özellikleri stoma düzenleme parametrelerinin geçerli belirleyiciler de olduğunu göstermektedir. Örneğin, yaprak karbon konsantrasyonu bükülme noktasındaki buhar basıncı açığı (VPD) ve iletkenlik-VPD eğrisinin maksimum pozitif ilgiliydi. Bununla birlikte, LES dahil değildir özellikleri stoma kontrol parametrelerini açıklayan bilgi eklendi: iletkenlik-VPD eğrisinin bükülme noktasına VPD yüksek stoma yoğunluğu ve daha yüksek indeks ile stoma türler için daha düşüktü. Genel olarak, stoma ve damar özellikleri açıklayan stoma düzenleme t daha güçlü prediktörlerdirLES kullanılan han özellikleri.

Ağıza ait iletkenlik ve ağıza düzenlemenin Birçok parametreler morfolojik, anatomik ve kimyasal yaprak özellikleri ile ilişkili olduğu bulundu. Aşağıda, odak stoma yoğunluğu (p = 0.04) ve ağıza indeksi (p = 0.03) ile azaldığı ve yaprak karbon içeriğinin (p ​​= 0,02 artmıştır bükülme noktasında, VPD&#39;den bağlantılar olacak, Bkz: Şekil 3). Sonuçlar dönüm noktasında VPD azalan stomatal yoğunluk ve ağıza endeksindeki düşüş olduğunu gösteriyor. Buna karşılık, stoma iletkenliği parametre yaprak alışkanlığı açık bir ilişki olduğunu göstermiştir. Yaprak alışkanlığının iki grup içinde yüksek varyasyon farklı düzenleyici mekanizmalar dökmeyen ve yaprak döken yaprak alışkanlıkları grup içinde hem de bulunduğunu göstermektedir. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52738/52738fig3highres.jpg" width="700" /> Th Şekil 3. Sonuç şekilağıza ait iletkenlik düzenlenmesi ve yaprak özellikleri ait desenler arasında e bağlantılar Buhar basıncı açığı (VPD) g S bükülme noktasında - (A). stoma yoğunluk, (B), stoma indeksi bir fonksiyonu olarak VPD eğri (VpdPoi) ve (C) yaprak karbon içeriği 20. Yeniden baskı 20 izniyle. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52738/52738fig3highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Relating Stomatal Conductance to Leaf Functional Traits at JoVE.com

Relating Stomatal Conductance to Leaf Functional Traits

Fizyolojisi ve morfolojisi bağlantılı nasıl çözülüyor bitkinin mekanik işleyişinin daha derin bir anlayış bırakır verir. Biz geleneksel fonksiyonel yaprak özellikleri ile stomatal iletkenlik ölçümleri ve korelasyon gelen stoma yönetmelik parametreleri türetmek için bir prosedür hem sunuyoruz.

Yaprak Fonksiyonel Özellikleri için ağıza ait iletkenlik İlişkin

Leaf functional traits are important because they reflect physiological functions, such as transpiration and carbon assimilation. In particular, ...

relating-stomatal-conductance-to-leaf-functional-traits

Research

JoVE Journal

Biology

19.0K Görüntüleme.  Martin-Luther-University Halle-Wittenberg.  Fizyolojisi ve morfolojisi bağlantılı nasıl çözülüyor bitkinin mekanik işleyişinin daha derin bir anlayış bırakır verir. Biz geleneksel fonksiyonel yaprak özellikleri ile stomatal iletkenlik ölçümleri ve korelasyon gelen stoma yönetmelik parametreleri türetmek için bir prosedür hem sunuyoruz. 

Video: Relating Stomatal Conductance to Leaf Functional Traits

Light/dark Transition Test for Mice

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, however, can be used to delete or manipulate a specific gene in mice. The influence of a given gene on a specific behavior can then be determined by conducting behavioral analyses of the mutant mice. As a test for behavioral phenotyping of mutant mice, the light/dark transition test is one of the most widely used tests to measure anxiety-like behavior in mice. The test is based on the natural aversion of mice to brightly illuminated areas and on their spontaneous exploratory behavior in novel environments. The test is sensitive to anxiolytic drug treatment. The apparatus consists of a dark chamber and a brightly illuminated chamber. Mice are allowed to move freely between the two chambers. The number of entries into the bright chamber and the duration of time spent there are indices of bright-space anxiety in mice. To obtain phenotyping results of a strain of mutant mice that can be readily reproduced and compared with those of other mutants, the behavioral test methods should be as identical as possible between laboratories. The procedural differences that exist between laboratories, however, make it difficult to replicate or compare the results among laboratories. Here, we present our protocol for the light/dark transition test as a movie so that the details of the protocol can be demonstrated. In our laboratory, we have assessed more than 60 strains of mutant mice using the protocol shown in the movie. Those data will be disclosed as a part of a public database that we are now constructing.

Visualization of the protocol will facilitate understanding of the details of the entire experimental procedure, allowing for standardization of the protocols used across laboratories and comparisons of the behavioral phenotypes of various strains of mutant mice assessed using this test.

The light/dark transition test is one of the most widely used tests to measure anxiety-like behavior in mice. Here, we present a movie that shows detailed procedures on how we conduct the test.

Fareler için açık / koyu Geçiş Testi

Although all of the mouse genome sequences have been determined, we do not yet know the functions of most of these genes. Gene-targeting techniques, ...

Biyoloji

Crystallizing Membrane Proteins for Structure Determination using Lipidic Mesophases

A detailed protocol for crystallizing membrane proteins by using lipidic mesophases is described. This method has variously been referred to as the lipidic cubic phase or in meso method. The method has been shown to be quite versatile in that it has been used to solve X-ray crystallographic structures of prokaryotic and eukaryotic proteins, proteins that are monomeric, homo- and hetero-multimeric, chromophore-containing and chromophore-free, and alpha-helical and beta-barrel proteins. Recent successes using in meso crystallization are the human engineered beta2-adrenergic and adenosine A2a G protein-coupled receptors. Protocols are presented for reconstituting the membrane protein into the monoolein-based mesophase, and for setting up crystallizations in the manual mode. Additional steps in the overall process, such as crystal harvesting, are to be addressed in future video articles. The time required to prepare the protein-loaded mesophase and to set up a crystallization plate manually is about one hour.

Herein is described the procedure implemented in the Caffrey Membrane Structural and Functional Biology Group to set up manually crystallization trials of membrane proteins in lipidic mesophases.

Lipidik Mesophases kullanarak Yapı Tayini için Membran Proteinleri Kristalize

A detailed protocol for crystallizing membrane proteins by using lipidic mesophases is described. This method has variously been referred to as the ...

A Reverse Genetic Approach to Test Functional Redundancy During Embryogenesis

Gene function during embryogenesis is typically defined by loss-of-function experiments, for example by targeted mutagenesis (knockout) in the mouse. In the zebrafish model, effective reverse genetic techniques have been developed using microinjection of gene-specific antisense morpholinos. Morpholinos target an mRNA through specific base-pairing and block gene function transiently by inhibiting translation or splicing for several days during embryogenesis (knockdown). However, in vertebrates such as mouse or zebrafish, some gene functions can be obscured by these approaches due to the presence of another gene that compensates for the loss. This is especially true for gene families containing sister genes that are co-expressed in the same developing tissues. In zebrafish, functional compensation can be tested in a relatively high-throughput manner, by co-injection of morpholinos that target knockdown of both genes simultaneously. Likewise, using morpholinos, a genetic interaction between any two genes can be demonstrated by knockdown of both genes together at sub-threshold levels. For example, morpholinos can be titrated such that neither individual knockdown generates a phenotype. If, under these conditions, co-injection of both morpholinos causes a phenotype, a genetic interaction is shown. Here we demonstrate how to show functional redundancy in the context of two related GATA transcription factors. GATA factors are essential for specification of cardiac progenitors, but this is revealed only by the loss of both Gata5 and Gata6. We show how to carry out microinjection experiments, validate the morpholinos, and evaluate the compensated phenotype for cardiogenesis.

Gene function can be obscured in loss-of-function experiments if there is compensation by another gene. The zebrafish model provides a relatively high-throughput means to reveal such functional redundancy in living embryos.

Embriyo sırasında Fonksiyonel Artıklık Test Ters Genetik Yaklaşım

Gene function during embryogenesis is typically defined by loss-of-function experiments, for example by targeted mutagenesis (knockout) in the mouse. In ...

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

The cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in humans.There is therefore considerable interest in this protein, but efforts to study its structure and activity have been hampered by the difficulty of expressing and purifying sufficient amounts of the protein1-3. Like many 'difficult' eukaryotic membrane proteins, expression in a fast-growing organism is desirable, but challenging, and in the yeast S. cerevisiae, so far low amounts were obtained and rapid degradation of the recombinant protein was observed 4-9. Proteins involved in the processing of recombinant CFTR in yeast have been described6-9 .In this report we describe a methodology for expression of CFTR in yeast and its purification in significant amounts. The protocol describes how the earlier proteolysis problems can be overcome and how expression levels of CFTR can be greatly improved by modifying the cell growth conditions and by controlling the induction conditions, in particular the time period prior to cell harvesting. The reagants associated with this protocol (murine CFTR-expressing yeast cells or yeast plasmids) will be distributed via the US Cystic Fibrosis Foundation, which has sponsored the research. An article describing the design and synthesis of the CFTR construct employed in this report will be published separately (Urbatsch, I.; Thibodeau, P. et al., unpublished). In this article we will explain our method beginning with the transformation of the yeast cells with the CFTR construct - containing yeast plasmid (Fig. 1). The construct has a green fluorescent protein (GFP) sequence fused to CFTR at its C-terminus and follows the system developed by Drew et al. (2008)10. The GFP allows the expression and purification of CFTR to be followed relatively easily. The JoVE visualized protocol finishes after the preparation of microsomes from the yeast cells, although we include some suggestions for purification of the protein from the microsomes. Readers may wish to add their own modifications to the microsome purification procedure, dependent on the final experiments to be carried out with the protein and the local equipment available to them. The yeast-expressed CFTR protein can be partially purified using metal ion affinity chromatography, using an intrinsic polyhistidine purification tag. Subsequent size-exclusion chromatography yields a protein that appears to be &gt;90% pure, as judged by SDS-PAGE and Coomassie-staining of the gel.

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

Attempts to express the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) in Saccharomyces cerevisiae have, until now, yielded relatively low amounts of protein. This protocol and the associated reagents distributed via the Cystic Fibrosis Foundation should allow the preparation of milligram amounts of this 'difficult' eukaryotic membrane protein.

Yılında Kistik Fibrozis Transmembran İletkenlik Regülatörü Protein İfadesi ve Arıtma Saccharomyces cerevisiae

The  cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride  channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in  ...

Measurement of Leaf Hydraulic Conductance and Stomatal Conductance and Their Responses to Irradiance and Dehydration Using the Evaporative Flux Method (EFM)

Water is a key resource, and the plant water transport system sets limits on maximum growth and drought tolerance. When plants open their stomata to achieve a high stomatal conductance (gs) to capture CO2 for photosynthesis, water is lost by transpiration1,2. Water evaporating from the airspaces is replaced from cell walls, in turn drawing water from the xylem of leaf veins, in turn drawing from xylem in the stems and roots. As water is pulled through the system, it experiences hydraulic resistance, creating tension throughout the system and a low leaf water potential (&Psi;leaf). The leaf itself is a critical bottleneck in the whole plant system, accounting for on average 30% of the plant hydraulic resistance3. Leaf hydraulic conductance (Kleaf = 1/ leaf hydraulic resistance) is the ratio of the water flow rate to the water potential gradient across the leaf, and summarizes the behavior of a complex system: water moves through the petiole and through several orders of veins, exits into the bundle sheath and passes through or around mesophyll cells before evaporating into the airspace and being transpired from the stomata. Kleaf is of strong interest as an important physiological trait to compare species, quantifying the effectiveness of the leaf structure and physiology for water transport, and a key variable to investigate for its relationship to variation in structure (e.g., in leaf venation architecture) and its impacts on photosynthetic gas exchange. Further, Kleaf responds strongly to the internal and external leaf environment3. Kleaf can increase dramatically with irradiance apparently due to changes in the expression and activation of aquaporins, the proteins involved in water transport through membranes4, and Kleaf declines strongly during drought, due to cavitation and/or collapse of xylem conduits, and/or loss of permeability in the extra-xylem tissues due to mesophyll and bundle sheath cell shrinkage or aquaporin deactivation5-10. Because Kleaf can constrain gs and photosynthetic rate across species in well watered conditions and during drought, and thus limit whole-plant performance they may possibly determine species distributions especially as droughts increase in frequency and severity11-14.
We present a simple method for simultaneous determination of Kleaf and gs on excised leaves. A transpiring leaf is connected by its petiole to tubing running to a water source on a balance. The loss of water from the balance is recorded to calculate the flow rate through the leaf. When steady state transpiration (E, mmol &bull; m-2 &bull; s-1) is reached, gs is determined by dividing by vapor pressure deficit, and Kleaf by dividing by the water potential driving force determined using a pressure chamber (Kleaf= E /- &Delta;&psi;leaf, MPa)15.
This method can be used to assess Kleaf responses to different irradiances and the vulnerability of Kleaf to dehydration14,16,17.

Measurement of Leaf Hydraulic Conductance and Stomatal Conductance and Their Responses to Irradiance and Dehydration Using the Evaporative Flux Method EFM

We describe a relatively rapid (30 min) and realistic method for simultaneously measurement of leaf hydraulic conductance (Kleaf) and stomatal conductance (gs) for transpiring excised leaves. The method can be modified to measure the light and dehydration responses of Kleaf and gs.

Evaporatif Akı Yöntemi (EFM) kullanarak Işınım ve Dehidrasyon için Yaprak Hidrolik İletkenlik ve Stoma İletkenlik ve Yanıtları Ölçümü

Water is a key resource, and the plant water transport system sets limits on maximum growth and drought tolerance. When plants open their stomata to ...

LeafJ: An ImageJ Plugin for Semi-automated Leaf Shape Measurement

High throughput phenotyping (phenomics) is a powerful tool for linking genes to their functions (see review1 and recent examples2-4). Leaves are the primary photosynthetic organ, and their size and shape vary developmentally and environmentally within a plant. For these reasons studies on leaf morphology require measurement of multiple parameters from numerous leaves, which is best done by semi-automated phenomics tools5,6. Canopy shade is an important environmental cue that affects plant architecture and life history; the suite of responses is collectively called the shade avoidance syndrome (SAS)7. Among SAS responses, shade induced leaf petiole elongation and changes in blade area are particularly useful as indices8. To date, leaf shape programs (e.g. SHAPE9, LAMINA10, LeafAnalyzer11, LEAFPROCESSOR12) can measure leaf outlines and categorize leaf shapes, but can not output petiole length. Lack of large-scale measurement systems of leaf petioles has inhibited phenomics approaches to SAS research. In this paper, we describe a newly developed ImageJ plugin, called LeafJ, which can rapidly measure petiole length and leaf blade parameters of the model plant Arabidopsis thaliana. For the occasional leaf that required manual correction of the petiole/leaf blade boundary we used a touch-screen tablet. Further, leaf cell shape and leaf cell numbers are important determinants of leaf size13. Separate from LeafJ we also present a protocol for using a touch-screen tablet for measuring cell shape, area, and size. Our leaf trait measurement system is not limited to shade-avoidance research and will accelerate leaf phenotyping of many mutants and screening plants by leaf phenotyping.

Demonstration of key methods for high throughput leaf measurements. These methods can be used to accelerate leaf phenotyping when studying many plant mutants or otherwise screening plants by leaf phenotype.

LeafJ: Yarı otomatik Yaprak Shape Ölçüm için bir ImageJ Plugin

High throughput phenotyping (phenomics) is a powerful tool for linking genes to their functions (see review1 and recent examples2-4). Leaves are the ...

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that currently limits the average life expectancy of sufferers to &#60;40 years of age. The development of novel drug molecules to restore the activity of CFTR is an important goal in the treatment CF, and the isolation of functionally active CFTR is a useful step towards achieving this goal.
We describe two methods for the purification of CFTR from a eukaryotic heterologous expression system, S. cerevisiae. Like prokaryotic systems, S. cerevisiae can be rapidly grown in the lab at low cost, but can also traffic and posttranslationally modify large membrane proteins. The selection of detergents for solubilization and purification is a critical step in the purification of any membrane protein. Having screened for the solubility of CFTR in several detergents, we have chosen two contrasting detergents for use in the purification that allow the final CFTR preparation to be tailored to the subsequently planned experiments.
In this method, we provide comparison of the purification of CFTR in dodecyl-&#946;-D-maltoside (DDM) and 1-tetradecanoyl-sn-glycero-3-phospho-(1&#39;-rac-glycerol) (LPG-14). Protein purified in DDM by this method shows ATPase activity in functional assays. Protein purified in LPG-14 shows high purity and yield, can be employed to study post-translational modifications, and can be used for structural methods such as small-angle X-ray scattering and electron microscopy. However it displays significantly lower ATPase activity.

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Heterologous expression and purification of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) are significant challenges and limiting factors in the development of drug therapies for cystic fibrosis. This protocol describes two methods for the isolation of milligram quantities of CFTR suitable for functional and structural studies.&#160;

Olarak ifade edilmiştir kistik fibroz transmembran kondüktans regülatörü Protein Saflaştırılması<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that ...

Probing High-density Functional Protein Microarrays to Detect Protein-protein Interactions

High-density functional protein microarrays containing ~4,200 recombinant yeast proteins are examined for kinase protein-protein interactions using an affinity purified yeast kinase fusion protein containing a V5-epitope tag for read-out. Purified kinase is obtained through culture of a yeast strain optimized for high copy protein production harboring a plasmid containing a Kinase-V5 fusion construct under a GAL inducible promoter. The yeast is grown in restrictive media with a neutral carbon source for 6 hr followed by induction with 2% galactose. Next, the culture is harvested and kinase is purified using standard affinity chromatographic techniques to obtain a highly purified protein kinase for use in the assay. The purified kinase is diluted with kinase buffer to an appropriate range for the assay and the protein microarrays are blocked prior to hybridization with the protein microarray. After the hybridization, the arrays are probed with monoclonal V5 antibody to identify proteins bound by the kinase-V5 protein. Finally, the arrays are scanned using a standard microarray scanner, and data is extracted for downstream informatics analysis1,2 to determine a high confidence set of protein interactions for downstream validation in vivo.

Using protein microarrays containing nearly the entire S. cerevisiae proteome is probed for rapid unbiased interrogation of thousands of protein-protein interactions in parallel. This method can be utilized for protein-small molecule, posttranslational modification, and other assays in high-throughput.

Yüksek yoğunluklu Fonksiyonel Protein mikrodizileri Probing Protein-protein Etkileşimleri Algılama

High-density functional protein microarrays containing ~4,200 recombinant yeast proteins are examined for kinase protein-protein interactions using an ...

Cardiac Pressure-Volume Loop Analysis Using Conductance Catheters in Mice

Cardiac pressure-volume loop analysis is the &#8220;gold-standard&#8221; in the assessment of load-dependent and load-independent measures of ventricular systolic and diastolic function. Measures of ventricular contractility and compliance are obtained through examination of cardiac response to changes in afterload and preload. These techniques were originally developed nearly three decades ago to measure cardiac function in large mammals and humans. The application of these analyses to small mammals, such as mice, has been accomplished through the optimization of microsurgical techniques and creation of conductance catheters. Conductance catheters allow for estimation of the blood pool by exploiting the relationship between electrical conductance and volume. When properly performed, these techniques allow for testing of cardiac function in genetic mutant mouse models or in drug treatment studies. The accuracy and precision of these studies are dependent on careful attention to the calibration of instruments, systematic conduct of hemodynamic measurements and data analyses. We will review the methods of conducting pressure-volume loop experiments using a conductance catheter in mice.

Cardiac pressure-volume loop analysis is the most comprehensive way to measure cardiac function in the intact heart. We describe a technique to perform and analyze cardiac pressure volume loops, using conductance catheters.

Farelerde İletkenlik Balon Kullanımı kalp Basınç Hacim Döngüsü Analizi

Cardiac pressure-volume loop analysis is the &#8220;gold-standard&#8221; in the assessment of load-dependent and load-independent measures of ventricular ...

Fish Sperm Assessment Using Software and Cooling Devices

For gamete quality evaluation, there are innovative, rapid, and quantitative techniques that can provide useful data for aquaculture. Computerized systems for sperm analysis were developed to measure several parameters and one of the most commonly measured is the sperm motility.
Initially, this computer technology was designed for mammalian species, although it can also be used for fish sperm analysis. Fish have specific features that can affect sperm assessment such as a short motility time after activation and, in some cases, adaptation to lower temperatures. Thus, it is necessary to modify both software and hardware components to make motility analysis more efficient for fish sperm analysis. For mammalian sperm, the heating plate is used to maintain optimal temperatures of spermatozoa. However, for some fish species, it is advantageous to use a lower temperature to prolong the duration of motility, since the sperm remain active for less than 2 min. Therefore, cooling devices are necessary to refrigerate samples at constant temperature over the time of analysis, including on the optical microscope. This protocol describes the analysis of fish sperm motility using software for sperm analysis and new cooling devices to optimize the results.

The present protocol describes a procedure of fish sperm assessment using computer-assisted sperm analysis and cooling devices. The software gives a rapid, accurate and quantitative analysis of fish sperm quality based on spermatozoa motility, which can be a useful tool in aquaculture to improve reproduction success.

Yazılımı kullanarak ve soğutma aygıtlarının balık Sperm değerlendirmesi

For gamete quality evaluation, there are innovative, rapid, and quantitative techniques that can provide useful data for aquaculture. Computerized systems ...