This study was supported by NIH grants R21HL118661, R56HL124444, and R01HL124444 to CDK, and by NIH grants R00HL103797 and R01HL125695 to JMM.

Bütün hayvan deneyleri Duke Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmış bir protokole göre gerçekleştirilmiştir. her iki cinsten kullanılabilmesine rağmen çalışma bilimsel bir amaç için belirtildiği gibi erkek fareler, bu çalışmada kullanılmıştır. 1. Epilasyon <ol><li> 37 ° C&#39;de ayarlanmış bir kapalı ısıtma yastığı ve izofluran sürekli akışına bağlı bir roket ucu konisi bağlantı oluşan bir ameliyat öncesi hazırlama alanı kurmak anestezinin indüksiyonu öncesinde. </li><li> Anestezi indüksiyon odasında fare yerleştirin. % 3 - 1 ile 1 L / dk ve izofluran O 2 debimetre ayarlayın. Not: Anestezi, tipik olarak% 2 izofluran ile 25 g fare indüklenir. </li><li> yavaşça odasına sallanan ve bir düzeltilmesi refleksi eksikliği gözlemleyerek farenin teşvik yanıtını kontrol edin. </li><li> Açılış öncesinde izofluran temizlemek için O 2 ile odasına yıkayın. Hızla ısıtma p için fareyi hareket ettirinreklam ve roket ucu konisi yoluyla izofluran bağlayın. </li><li> % 1.5 izofluran ayarlayın. Pedal refleks (ayak tutam) tarafından uyaran yanıtını kontrol edin. </li><li> Ameliyat sırasında kurumasını önlemek için her iki göze liberal oftalmik yağ sürün. </li><li> küçük bir elektrik düzeltici kullanarak her iki arka bacaklarda saç tıraş. Cildi laserasyon yaralanmasıdır önlemek için tıraş sırasında gergin cildi tutun. </li><li> Önceden ısıtılmış epilasyon kremi uygulayın ve 1 dakika boyunca bekletin. Yavaşça nemlendirilmiş gazlı bez kullanılarak silin. </li><li> daha sonra cerrahi işlem için, izofluran kapatın ve kafes yatak aspire olmayan fare sağlamak için boş bir kağıt havlu kaplı kurtarma kafesine fareyi hareket ettirin. sternal yatma koruyabilmiştir kadar hayvan izleyin. Aksi takdirde, cerrahi masaya fareyi hareket ettirin. NOT: Epilasyon işlemi cildi tahriş ve perfüzyon ölçümleri etkileyebilir. p önce hayvanın saçlarını çıkardıktan sonra 2 gün, 1 - beklenmesi tavsiye edilirBir ameliyat öncesi perfüzyon taraması erforming veya ameliyat gerçekleştirmek. </li></ol> 2. Ön-Cerrahi Hazırlık <ol><li> Bu işlem sırasında aşağıdaki araçları kullanın; küçük düz cerrahi makas, 2 ince uçlu açılı forseps, küçük Graefe forseps, iğne sürücü forseps, 3 retraktörleri, küçük yaylı makas ve ince uçlu pamuklu çubuk. </li><li> Ameliyat başlamadan önce bir otoklav kullanarak tüm araçları sterilize edin. En fazla 5 hayvanlar için, her cerrahi işlem öncesi ve arasında sıcak boncuk sterilizatör kullanın. 5 daha büyük gruplar ameliyatlar için ek cerrahi alet paketleri sterilize edin. </li><li> kapalı ısıtma yastığı ve izofluran port oluşan steril cerrahi alanında hazırlayın. 10 Stereo diseksiyon mikroskobu altında tüm çalışmaları gerçekleştirmek. </li><li> Anestezisi ve adımları 1.5 1.1 de tarif edildiği gibi fare hazırlamak. </li><li> Fare tamamen uyuşturulmuş olup olmadığını kontrol edin ve cerrahi masaya bir yatar pozisyonda içine yerleştirin. Cerrahi bant kullanarak iki bacak sabitleyin. &lt;/ Li&gt; <li> sıcaklık kontrollü ısıtma yastığı kullanılarak, sıcaklık probu takmak ve yanlışlıkla işlem sırasında çıkardı olmayacak emin olmak için cerrahi bant kullanarak cerrahi platformunun tabanına sabitleyin. </li><li> 3 alternatif povidon-iyot ve alkol mendil kullanarak kesi sitesine temizleyin. Steril cerrahi örtü ile hayvan örtün ve kesi sitesine ortaya çıkarmak için bir delik. </li></ol> Bacak İskemi 3. İndüksiyon <ol><li> Karın doğru diz çalışan, medial uyluk merkezi boyunca bir başlangıç ​​kesi yapmak ve ince makas (Şekil 1A) ile yaklaşık 1 cm kesi uzatmak için bir neşter kullanın. </li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54166/54166fig1.jpg" /> Şekil 1. Cerrahi Alan ve Fare Arka ayağın İskemi Cerrahisi Damar Anatomik Merkezi. (A) Dış görünümyatar pozisyonda bir fare hindlimb. Yumurtadan çizgi düzgün hindlimb iskemi işlemleri gerçekleştirmek için kesi sitesini gösterir. Proksimal fare hindlimb damarsal (B) Görünüm. Femoral arter (FA) yakın ucu, inguinal ligamanın (IL) altından çıkar. FA uzak ucu popliteal arter (PA) ve safen arter (SA) ayrılmasından yer almaktadır. FA kapalı ana teminat arterler lateral sirkumfleks femoral arter (LCFA), proksimal kaudal femoral arter (PCFA) ve yüzeysel kaudal epigastrik arter (SCEA) bulunmaktadır. femoral ven (FV) FA bitişik çalışır ve venöz şube büyük arter dalları paralel görülebilir. Yıldız (*)., AMEROID konstriktör- veya bitişik harfler yerleştirme için yakın ve uzak siteleri göstermek subakut veya akut iskemi kaynaklı olacak bağlı olarak <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54166/54166fig1large.jpg" target="_blank">, lütfen cli</a>Bu rakamın büyük halini görmek için buraya ck. <ol start="2"><li> forseps kullanarak, kesi açın ve kasık yağ dokusu (IFT) kapsayan membran maruz kalmaktadır. </li><li> delmek IFT ve karın arasındaki ayrılık içine zarından, kapalı forseps kullanma. Yavaşça altında nörovasküler demet açığa karın kaslarının gelen IFT ayırmak için forseps üzerindeki baskıyı bırakın. Önemli anatomik (Şekil 1B) olarak proksimal ve yüzeysel kaudal şube gözlemleyin. </li><li> Retractor takın ve proksimal AMEROID yılanı veya ligasyon sitesi, lateral sirkumfleks femoral arter (Şekil 1B) sadece proksimal maruz proksimal karın dokusu çekin. Lateral sirkumfleks arter proksimal ve yüzeysel kaudal arterlere yaklaşık 5 mm proksimal yatıyor. <ol><li> , Kesi distal parçası haline iki retraktörler, bir medial ve lateral birini eklemek distale uzak IFT çekmeyecerrahi alan cerrahi alanında genişletmek için. </li></ol></li><li> nörovasküler demet kaplayan en dıştaki zar kaldırmak için iki ince forseps kullanın. Yavaşça onları birbirine bağlayan zarının altında forseps ucu kayma, ven ve arter arasındaki ince forseps ucu yarısını yerleştirin. forseps kapatın ve hafifçe membran yırtın. </li><li> ven ve arter arasında kapalı forseps ucunu yerleştirin ve forseps üzerindeki baskıyı bırakarak aralarında bir boşluk oluşturun. arter ve sinir arasında bir boşluk oluşturmak için bu tekniği tekrarlayın. </li><li> Subakut ekstremite iskemi, proksimal femoral arter (Şekil 2) bir AMEROID yılanı yerleştirin. <ol><li> Proksimal AMEROID yılanı yüklemek için, nörovasküler demet onu izole etmek femoral arter altında bir forseps ucunu kaydırın. kavrama yılanının kenarına angled- forseps ikinci bir set kullanın ve femoral arter altında rehberlik. </li><li> s içine femoral arter Layyılanının lot. Popliteal arter ve safen arter (Şekil 2) içine femoral arter çatallanma hemen proksimal konumlandırma, uzak yılanının için tekrarlayın. </li></ol></li></ol><img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54166/54166fig2.jpg" /> AMEROID konstriktör- ve ligatürler Şekil 2. Yerleştirme. Subakut hindlimb iskemi ikna etmek için femoral arter üzerine yerleştirilen iki AMEROID konstriktör- (A) örneği. Proksimal yılanı lateral sirkumfleks femoral arter (LCFA) sadece yakın yerleştirilir. Distal constrictor popliteal (PA) ve safen arterler (SA) çatallanma sadece yakın yerleştirilir. Konstriktör- arter sağlamak için yukarı bakacak yuva düzgün yılanının içinde ayarlanır ile yüklenir. Akut hindlimb iskemi ikna etmek için femoral arter bitişik harfler (B) örneği. Ligatures (sarı oklar) onlar paneli (B) konstriktör- konumunu kanadını şekilde yerleştirilir ve femoral arter iki bitişik harfler (yıldız) her set arasında transeksiyon edilir. Bar, 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54166/54166fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <ol start="8"><li> Akut ekstremite iskemi, bağlanır ve proksimal femoral arter transect. <ol><li> femoral arter transect için, iplik 7 - yakın yılanının pozisyonuna sadece proksimal arter Ç dikiş ve düğüm (Adım 3.7). İlk 1 mm distalinde bir ikinci bitişik harfleri kravat. </li><li> İki bitişik harfler arasındaki arter transect için yaylı makas kullanın. distal arteryel transeksiyonu için, popliteal arter ve safen arter içine femoral arter çatallanma ayrı, sadece yaklaşık 1 mm yaklaşık iki bitişik harfler yerleştirerek ancak yüzeysel Caud distal olmasını sağlamak, bu adımları yineleyinal epigastrik arter (Şekil 1) </li></ol></li><li> O Vicryl sütürler - kesi kapatın kullanarak 5 kesildi. </li></ol> 4. Perfüzyon Görüntüleme <ol><li> Lazer Doppler perfüzyon kamera (LDPI) altında ayarlanmış 37 ° C ısıtma pedi için fareyi hareket ettirin ve izofluran kaynağına bir roket ucu konisi yoluyla bağlayın. herhangi bir sıcaklık izleme mevcuttur, fare, 37 ° C &#39;ye kadar ısınmaya için, 5 dakika izin verir. </li><li> kamera açın ve görüntü yakalama yazılımı başlatmak. </li><li> &#39;Tarayıcı Ayarları&#39; penceresini açmak için &#39;Yeni Tek Resim&#39; simgesini tıklayın. &#39;4 ms / piksel&#39; ile &#39;Büyük&#39; ​​ve &#39;Tarama Hızı&#39; ile &#39;Tarama Boyutu&#39; olarak ayarlayın. &#39;Tarama Alanı (adet)&#39; bölmesinde x ve y değerlerini değiştirerek tarama alanını ayarlayın. </li><li> video beslemesini görüntülemek için &#39;Video ve Distance&#39; sekmesini tıklayın ve kırmızı çizgileriyle de gösterildiği tarama alanına sığdırmak için fareyi düzenlemek. kalibre etmek &#39;Otomatik Mesafe tıklayınkonuya lazer mesafe. &#39;Konu Detayları&#39; penceresini açmak için &#39;Next&#39; tıklayın. </li><li> konu bilgi ve ilgili yorumlarınızı girin. tarama penceresine geçmek için &#39;İleri&#39; düğmesine tıklayın. </li><li> &#39;Onayla veya Scan Distance geçersiz kıl&#39; açmak iletişim için &#39;Başlat Ölçülmesine&#39; düğmesine tıklayın. Tarama mesafe onaylamak için &#39;OK&#39; tıklayın. Tarama alanının büyüklüğüne bağlı olarak 8 dakika - tarama işlemi başlayacak ve 4 aday gözlemleyin. </li><li> Tarama işlemi tamamlandıktan sonra, &#39;Farklı Kaydet&#39; penceresini gözlemleyin. Dosyayı adlandırın ve kaydedin. </li><li> izofluran kapatın ve boş bir kurtarma kafesine fareyi ve hayvan sternum yatma koruyabilmiştir kadar izler. diğer farelerin bir kafesin içine anestezi kurtarma fare koymayın. </li><li> Görüntü analiz yazılımı açın. &#39;Aç&#39; simgesine tıklayın ve gidin ve analiz için görüntü dosyasını açın. Dosya penceresinde, akı gözlemlemek,fare fotoğraf ve renkli görüntüler. </li><li> akı resmin üzerine ilgi alanları (ROI) bölgesini işaretlemek için, &#39;Show ROI&#39; simgesini tıklayın. Sonraki &#39;Ekle Poligon&#39; düğmesini tıklayın ve ROI çizmek için cerrahi olmayan uzuv imleci sürükleyin. şekli kapatmak için sağ tıklatın. Seç tekrar &#39;Poligon Ekle&#39; ve cerrahi uzuv etrafında eşleşen ROI çizin. </li><li> &#39;Görüntü ROI İstatistik Sonuçları (PU)&#39; penceresi açmak için &#39;İstatistikler&#39; simgesini tıklayın. &#39;Akı%&#39; sütununda akı yüzde farkını dikkate alınmalıdır. NOT: referans olarak görev yapacak çekilen ilk ROI. NOT: Her bir sonraki perfüzyon sintigrafisi öncesinde fare uyutmak için Bölüm 1&#39;de özetlenen adımları izleyin ve adım görüntüye 4.11 4.1 hayvan olarak. </li></ol>

<ol>
	<li>Criqui, M. H., Aboyans, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+peripheral+artery+disease.">Epidemiology of peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1509-1526 (2015).</li><li>Thukkani, A. K., Kinlay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endovascular+intervention+for+peripheral+artery+disease.">Endovascular intervention for peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1599-1613 (2015).</li><li>Vartanian, S. M., Conte, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+intervention+for+peripheral+arterial+disease.">Surgical intervention for peripheral arterial disease.</a> Circ. Res. 116, 1614-1628 (2015).</li><li>Bonaca, M. P., Creager, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+treatment+and+current+management+of+peripheral+artery+disease.">Pharmacological treatment and current management of peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1579-1598 (2015).</li><li>Conte, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+rationale+of+the+PREVENT+III+clinical+trial:+edifoligide+for+the+prevention+of+infrainguinal+vein+graft+failure.">Design and rationale of the PREVENT III clinical trial: edifoligide for the prevention of infrainguinal vein graft failure.</a> Vasc Endovascular Surg. 39, 15-23 (2005).</li><li>Pomposelli, F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+decade+of+experience+with+dorsalis+pedis+artery+bypass:+analysis+of+outcome+in+more+than+1000+cases.">A decade of experience with dorsalis pedis artery bypass: analysis of outcome in more than 1000 cases.</a> J. Vasc. Surg. 37, 307-315 (2003).</li><li>Willigendael, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smoking+and+the+patency+of+lower+extremity+bypass+grafts:+a+meta-analysis.">Smoking and the patency of lower extremity bypass grafts: a meta-analysis.</a> J. Vasc. Surg. 42, 67-74 (2005).</li><li>Schillinger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Balloon+angioplasty+versus+implantation+of+nitinol+stents+in+the+superficial+femoral+artery.">Balloon angioplasty versus implantation of nitinol stents in the superficial femoral artery.</a> N. Engl. J. Med. 354, 1879-1888 (2006).</li><li>Marmagkiolis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=12-month+primary+patency+rates+of+contemporary+endovascular+device+therapy+for+femoro-popliteal+occlusive+disease+in+6,024+patients:+beyond+balloon+angioplasty.">12-month primary patency rates of contemporary endovascular device therapy for femoro-popliteal occlusive disease in 6,024 patients: beyond balloon angioplasty.</a> Catheter. Cardiovasc. Interv. 84, 555-564 (2014).</li><li>Rosenfield, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trial+of+a+Paclitaxel-Coated+Balloon+for+Femoropopliteal+Artery+Disease.">Trial of a Paclitaxel-Coated Balloon for Femoropopliteal Artery Disease.</a> N. Engl. J. Med. 373, 145-153 (2015).</li><li>Tepe, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug-coated+balloon+versus+standard+percutaneous+transluminal+angioplasty+for+the+treatment+of+superficial+femoral+and+popliteal+peripheral+artery+disease:+12-month+results+from+the+IN.PACT+SFA+randomized+trial.">Drug-coated balloon versus standard percutaneous transluminal angioplasty for the treatment of superficial femoral and popliteal peripheral artery disease: 12-month results from the IN.PACT SFA randomized trial.</a> Circulation. 131, 495-502 (2015).</li><li>Couffinhal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+angiogenesis.">Mouse model of angiogenesis.</a> Am. J. Pathol. 152, 1667-1679 (1998).</li><li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M. D., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+hindlimb+ischemia.">Murine model of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>McClung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle-specific+genetic+determinants+contribute+to+the+differential+strain-dependent+effects+of+hindlimb+ischemia+in+mice.">Skeletal muscle-specific genetic determinants contribute to the differential strain-dependent effects of hindlimb ischemia in mice.</a> Am. J. Pathol. 180, 2156-2169 (2012).</li><li>Dokun, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+trait+locus+(LSq-1)+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia.">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li><li>Rivard, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-dependent+impairment+of+angiogenesis.">Age-dependent impairment of angiogenesis.</a> Circulation. 99, 111-120 (1999).</li><li>Hazarika, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+angiogenesis+after+hindlimb+ischemia+in+type+2+diabetes+mellitus:+differential+regulation+of+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+1+and+soluble+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+1.">Impaired angiogenesis after hindlimb ischemia in type 2 diabetes mellitus: differential regulation of vascular endothelial growth factor receptor 1 and soluble vascular endothelial growth factor receptor 1.</a> Circ. Res. 101, 948-956 (2007).</li><li>Couffinhal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+collateral+vessel+development+associated+with+reduced+expression+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+ApoE-/-+mice.">Impaired collateral vessel development associated with reduced expression of vascular endothelial growth factor in ApoE-/- mice.</a> Circulation. 99, 3188-3198 (1999).</li><li>Tang, G. L., Chang, D. S., Sarkar, R., Wang, R., Messina, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+gradual+or+acute+arterial+occlusion+on+skeletal+muscle+blood+flow,+arteriogenesis,+and+inflammation+in+rat+hindlimb+ischemia.">The effect of gradual or acute arterial occlusion on skeletal muscle blood flow, arteriogenesis, and inflammation in rat hindlimb ischemia.</a> J. Vasc. Surg. 41, 312-320 (2005).</li><li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+mechanism+regulating+blood+flow+recovery+in+acute+versus+gradual+femoral+artery+occlusion+are+distinct+in+the+mouse.">Cellular and molecular mechanism regulating blood flow recovery in acute versus gradual femoral artery occlusion are distinct in the mouse.</a> J. Vasc. Surg. 48, 1546-1558 (2008).</li><li>Litvak, J., Siderides, L. E., Vineberg, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+experimental+production+of+coronary+artery+insufficiency+and+occlusion.">The experimental production of coronary artery insufficiency and occlusion.</a> Am. Heart J. 53, 505-518 (1957).</li><li>Bredee, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+ameroid+constrictor.+Preliminary+communication.">An improved ameroid constrictor. Preliminary communication.</a> J. Surg. Res. 9, 107-112 (1969).</li><li>McClung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subacute+limb+ischemia+induces+skeletal+muscle+injury+in+genetically+susceptible+mice+independent+of+vascular+density.">Subacute limb ischemia induces skeletal muscle injury in genetically susceptible mice independent of vascular density.</a> J. Vasc. Surg. , (2015).</li><li>Hellingman, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+surgical+procedures+for+hind+limb+ischaemia+mouse+models+result+in+differences+in+collateral+formation.">Variations in surgical procedures for hind limb ischaemia mouse models result in differences in collateral formation.</a> Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. 40, 796-803 (2010).</li><li>Kochi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+arterial+anatomy+of+the+murine+hindlimb:+functional+role+in+the+design+and+understanding+of+ischemia+models.">Characterization of the arterial anatomy of the murine hindlimb: functional role in the design and understanding of ischemia models.</a> PloS one. 8, e84047 (2013).</li></ol>

The authors have no conflicts of interest to disclose.

Belki de bu prosedürde en zorlu aşama femoral venden femoral arter ayrılmasıdır. büyük çaplı ve arterin kıyasla femoral ven daha ince duvarları delmek karşı duyarlılığının artırılması ve cerrahi manipülasyon sırasında yırtılma. ven kesintiye olasılığı PBS ile nemlendirilmiş steril bez kullanarak nemli yara tutarak azaltılabilir. Tüm forseps, keskinleştirilmiş hizalanır ve damar ve çevre dokular hassas işleme izin vermek için aralarında serbest olmasını sağlamak için de önemli...

Periferik arter hastalığı (PAH), gelişmiş ülkelerde 1 kardiyovasküler morbidite ve mortalitenin önde gelen nedenidir. Elde edilen egzersiz veya dinlenme ağrısı ve bazen bacak amputasyon gerektiren ülser ve kangren iyileşmeyen ile ekstremite iskemi neden periferik arterlerin aterosklerotik tıkanması PAD sonuçları. Esasen etkili medikal tedaviler 4 mevcut olarak PAD hedefleyen terapiler, öncelikle endovasküler 2 veya cerrahi revaskülarizasyon 3 yöneliktir. Baypas greft bazı toplumlarda (örneğin, sigara içen kadınlar, sigara safen ven greft) 6,7 kötüdür 5 (5 yıl içinde% 50 kadar) yüksek başarısızlık fiyat bilgisi Ne yazık ki, revaskülarizasyon, genellikle sınırlı fayda sağlar. Böyle anjiyoplasti ve stent olarak Endovasküler yaklaşımlar, aynı zamanda (1 yıl içinde% 50 fazla) yüksek restenoz oranları tehlikeye edilir, i özellikleilaç salınımlı balonlar ve stentler kullanımı biraz 9-11 sonuçlar alınmasını sağlamıştır rağmen n, hastalık 8 Femoropopliteal. PAD için yeni tedaviler geliştirmek için güvenilir insan hastalığı yeniden hayvan modelleri geliştirmek için gereklidir. Bugüne kadar, PAD en yaygın model en çok farelerde 12,13 gerçekleştirilir arka bacak iskemisi modeli (HLI) &#39;dir. en yaygın belirtisi, model proksimal ve distal femoral arter cerrahi ligasyonu gerektirir ve müdahil yan dalları kan akımı ve akut ekstremite iskemi indüksiyon tıkanması ile sonuçlanan geminin eksizyonu ile izledi. HLI periferik ekstremite kas dokusunda anjiyojenik ve arteriyojenik tepkiler ve bu tepkilerin çeşitli terapiler (örneğin, ilaçlar, gen aktarım, kök hücreler) etkilerini incelemek amacıyla öncelikle kullanılır olmuştur. Daha yakın zamanlarda, bizim grup iskelet kas hücrelerinin rolünü incelemek için bu modeli kullandı in tepki iskemi ve sonuçları 14 genetik farkların etkilerini ekstremite için. HLI modeli mevcut iskemi damar ve kas yanıtları genetik (yani, doğal suş) 15 bağlıdır anlayış, yaş 16 ve diyabet 17 de dahil olmak üzere, diğer hastalıklar veya ateroskleroz ile ilgili koşullar, varlığını veya yokluğunu kolaylaştırmıştır hiperkolesterolemi 18. Ancak, geleneksel HLI modelinin önemli bir zayıflık insan PAD periferal arterlerde tıkayıcı aterosklerotik lezyonların kademeli gelişmenin bir sonucu olarak kronik iskemi neden halbuki, akut ekstremite iskemisi 12,13 modeli olmasıdır. Bu zayıflığı aşmak için bir girişim, Tang ve arkadaşları başlangıçta AMEROID konstriktör- 19 kullanılarak kademeli femoral arter tıkanıklığı bir fare modeli, ve daha sonra d aynı grup geliştirdiBenzer bir fare modeli 20 eveloped. AMEROID konstriktör- kronik miyokardiyal iskemi 21,22 bir köpek modelinde 1950&#39;lerde ilk açıklanmıştır. Bu cihazlar, genellikle kazein, higroskopik bir malzemeden bir iç tabaka saran bir dış metal manşon, ve bir arter etrafına yerleştirilen zaman çevre dokulardan nemi emer onlar yavaş yavaş damar tıkanıklığı neden olur. Modelin bunların modifikasyonda, Yang ve ark., Proksimal ve cerrahi ligasyon sitelerinin benzer yerlerde distal femoral arter hem konstriktör- yerleştirilir ve geleneksel modelde olduğu gibi, femoral arter yan dalları bağlanmıştır. Ameliyat sonrası 5 hafta ve daha az kas nekrozu 20 - Akut HLI karşılaştırıldığında, AMEROID konstriktör kaynaklı iskeminin enflamatuar ve kesilme baskısı bağımlı gen alt ekspresyonu, düşük kan akışı geri 4 sonuçlandı. Bu gözlemlere dayanarak, bu kademeli arter tıkanıklığı P bir model olabilir hissedildiinsan hastalığı için daha uygun AD. Özellikle, ilk çalışmada, AMEROID konstriktör kaynaklı iskeminin etkileri yalnızca işemi kaynaklı kas nekroz 15 göreceli olarak dirençli olan, C57BL / 6 fareleri 19 incelendi. Son zamanlarda daha yavaş iskemi modelinde değişik ve daha iskemi, hassas BALB / C fare türünde 23 etkilerini inceledi. Modelin ilk tezahürü olarak, proksimal ve distal femoral arter hem konstriktör- yerleştirilen ancak bozulmamış tüm yan dalları bıraktı. İkinci, daha hafif değişiklik, biz sadece proksimal femoral arter tek bir yılanı yerleştirilir ve yine bozulmamış arterin tüm yan braches bıraktı. Bu modele göre, her iki modifikasyon, biz, bu BALB / c fareleri, ancak C57BL / 6 fareleri bulunan benzer kan akışını ve vasküler yoğunluğa sahip olmasına rağmen önemli bir kas nekrozunu gösterilir. Önceki çalışmamızda 14 benzer şekilde, bu bulgular o bacak kası gösterdiYaralanma sadece kan akımı etkisinde, ancak kısmen genetik yapılarına bağlı olduğu değildir. Ayrıca, biz ekstremite kan akımı böylece modeli birden fazla &#39;subakut&#39; yerine kademeli ekstremite iskemi gibi görünüyor, 3 gün içinde nadir düştü bulundu. Bu önceki çalışmalara göre, arka bacak iskemisi uyarılması için tek bir yöntem, her durumda uygun olmayabilir açıkça görülmektedir. Koşullarında (örneğin, genetik farklılıkları ve varlığı ya da ko-morbid koşullar yokluğunda) etkisi damar ve iskelet kas özel cevapları, çeşitli araştırmacılar bulabilir için gerekli kronik olup ve / veya en iyi şekilde arka bacak iskemisi şiddetini değiştirmek için kendi amaçlarına uygun. Ayrıca, model önceki tariflerde tipik haliyle tekniğin güvenilir arası Araştırmacı tekrarlanabilirliği kolaylaştırmak için uygun bir anatomik yerler yoktu. Bu yazıda, fare akut veya subakut ya hindlimb iskemi uyarılması için yöntemleraçıklanmaktadır ve hassas anatomik oluşumlar bulunur.

<table><tbody><tr><td>Dumont #5/45 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td>Dumoxel</td></tr><tr><td>Dumont Style 5 Mini Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11200-14</td><td>Inox</td></tr><tr><td>Extra Fine Bonn Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>7 - 0 Silk Suture</td><td>Sharpoint</td><td>DA-2527N</td><td></td></tr><tr><td>5 - 0 Coated Vicryl Suture</td><td>Ethicon</td><td>J463G</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11053-10</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-03</td><td></td></tr><tr><td>Artifical Tears Ointment</td><td>Rugby Laboratories</td><td>0536-6550-91</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Tape</td><td>3M</td><td>1530-0</td><td></td></tr><tr><td>Fine Cotton Swabs</td><td>Contec</td><td>SC-4</td><td></td></tr><tr><td>Temperature Controller</td><td>Physitemp</td><td>TCAT-2DF</td><td></td></tr><tr><td>Ameroid Constrictors</td><td>Research Instruments SW</td><td>MMC-0.25 x 1.00-SS</td><td></td></tr><tr><td>Hot Bead Sterilizer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Deltaphase Isothermal Pad</td><td>Braintree Scientific</td><td>39DP</td><td></td></tr><tr><td>Needle Driver</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline&amp;nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Moor LDPI</td><td>Moor Instruments</td><td>moorLDI2</td><td></td></tr><tr><td>moorLDI Measurement software</td><td>Moor Instruments</td><td>v. 6.0</td><td></td></tr><tr><td>Hair Removal Cream</td><td>Nair</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

methods for acute and subacute murine hindlimb ischemia

Periferik arter hastalığı (PAH) güvenilir bu hastalık için yeni tedavilerin geliştirilmesi için gerekli olan insan hastalığı yeniden kardiyovasküler morbidite ve gelişmiş ülkelerde ölüm ve hayvan modellerinde önde gelen nedenidir. Fare hindlimb iskemi modeli yaygın olarak bu amaçla kullanılmaktadır, ancak femoral arter ligasyonu ile akut ekstremite iskemisi uyaran standart bir uygulama iskemi vasküler ve iskelet kas dokusu yanıtları incelemek için araştırmacıların yeteneğini tehlikeye, önemli doku nekrozuna neden olabilir . Femoral arter ligasyonu için alternatif bir yaklaşım AMEROID konstriktör- kullanımı yoluyla yavaş yavaş femoral arter oklüzyonu meydana gelmesidir. daha yavaş, sub-akut iskemi ile sonuçlanır - 3 gün, femoral arter ligasyonu siteleri ile aynı ya da farklı yerlerde femoral arter etrafına yerleştirildiğinde, bu cihazlar üzerinde 1 arter tıkanması. Bu w, daha az önemli iskelet kası doku nekrozuna nedenhich daha yakından insan PAD görülen yanıtları taklit edebilir. genetik altyapı etkiler hem akut ve subakut iskemi modellerinde çıktıları, çünkü fare suşu dikkate en iyi modeli seçiminde önemlidir çalışılmaktadır. Bu yazıda fare subakut veya akut hindlimb iskemi ikna etmek için uygun prosedür ve fare femoral arter üzerinde bitişik harfler veya AMEROID konstriktör- anatomik yerleşimi anlatılır.

Fare arka bacak damar sistemini uygun şekilde tanımlanması, burada açıklandığı gibi, subakut ve akut arka bacak iskemisi uyarılması için teknikler tekrarlanabilirliği sağlamak için çok önemlidir. Hayvan çalışmalarında kalıcı sapması, ilave olarak, diğer faktörler anestezi Çeşidi, hayvan pozisyonu (sırtüstü vs eğilimli) ve vücut sıcaklığına (bakınız Şekil 3) de dahil olmak üzere, lazer Doppler perfüzyon görüntüleme (LDP...

Watch this Scientific Journal Video about Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Surgical induction of hindlimb ischemia in the mouse is useful to examine angiogenesis, however this is compromised in certain inbred mouse strains that display marked ischemia-induced tissue necrosis. Methods are described to induce subacute limb ischemia using ameroid constrictors to circumvent this problem through the induction of gradual arterial occlusion.

Akut ve Subakut Fare Arka ayağın İskemi Yöntemleri

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

methods-for-acute-and-subacute-murine-hindlimb-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

16.2K Görüntüleme.  Duke University Medical Center. Surgical induction of hindlimb ischemia in the mouse is useful to examine angiogenesis, however this is compromised in certain inbred mouse strains that display marked ischemia-induced tissue necrosis. Methods are described to induce subacute limb ischemia using ameroid constrictors to circumvent this problem through the induction of gradual arterial occlusion. 

Video: Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo. With the advent of genetic modifications to the whole organism or the myocardium and an array of biological and/or synthetic materials, there is great potential for any combination of these to assuage the extent of acute ischemic injury and impede the onset of heart failure pursuant to myocardial remodeling. 
Here we present the methods and materials used to reliably perform this microsurgery and the modifications involved for temporary (with reperfusion) or permanent coronary artery occlusion studies as well as intramyocardial injections. The effects on the heart that can be seen during the procedure and at the termination of the experiment in addition to histological evaluation will verify efficacy. 
Briefly, surgical preparation involves anesthetizing the mice, removing the fur on the chest, and then disinfecting the surgical area. Intratracheal intubation is achieved by transesophageal illumination using a fiber optic light. The tubing is then connected to a ventilator. An incision made on the chest exposes the pectoral muscles which will be cut to view the ribs. For ischemia/reperfusion studies, a 1 cm piece of PE tubing placed over the heart is used to tie the ligature to so that occlusion/reperfusion can be customized. For intramyocardial injections, a Hamilton syringe with sterile 30gauge beveled needle is used. When the myocardial manipulations are complete, the rib cage, the pectoral muscles, and the skin are closed sequentially. Line block analgesia is effected by 0.25% marcaine in sterile saline which is applied to muscle layer prior to closure of the skin. The mice are given a subcutaneous injection of saline and placed in a warming chamber until they are sternally recumbent. They are then returned to the vivarium and housed under standard conditions until the time of tissue collection. At the time of sacrifice, the mice are anesthetized, the heart is arrested in diastole with KCl or BDM, rinsed with saline, and immersed in fixative. Subsequently, routine procedures for processing, embedding, sectioning, and histological staining are performed. 
Nonsurgical intubation of a mouse and the microsurgical manipulations described make this a technically challenging model to learn and achieve reproducibility. These procedures, combined with the difficulty in performing consistent manipulations of the ligature for timed occlusion(s) and reperfusion or intramyocardial injections, can also affect the survival rate so optimization and consistency are critical.

Numerous genetic manipulations and/or intramyocardial injections of genes, proteins, cells, and/or biomaterials are superimposed upon the dimension of time in studies of acute ischemia/ reperfusion injury and chronic remodeling in mice. This video illustrates the microsurgical procedures for ischemia/reperfusion, permanent coronary artery ligation, and intramyocardial injection studies.

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Tıp

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

Murin Model Hindlimb İskemi

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Biyoloji

Osmotic Drug Delivery to Ischemic Hindlimbs and Perfusion of Vasculature with Microfil for Micro-Computed Tomography Imaging

Preclinical research in animal models of peripheral arterial disease plays a vital role in testing the efficacy of therapeutic agents designed to stimulate microcirculation. The choice of delivery method for these agents is important because the route of administration profoundly affects the bioactivity and efficacy of these agents1,2. In this article, we demonstrate how to locally administer a substance in ischemic hindlimbs by using a catheterized osmotic pump. This pump can deliver a fixed volume of aqueous solution continuously for an allotted period of time. We also present our mouse model of unilateral hindlimb ischemia induced by ligation of the common femoral artery proximal to the origin of profunda femoris and epigastrica arteries in the left hindlimb. Lastly, we describe the in vivo cannulation and ligation of the infrarenal abdominal aorta and perfusion of the hindlimb vasculature with Microfil, a silicone radiopaque casting agent. Microfil can perfuse and fill the entire vascular bed (arterial and venous), and because we have ligated the major vascular conduit for exit, the agent can be retained in the vasculature for future ex vivo imaging with the use of small specimen micro-CT3.

We show here the in vivo insertion of an osmotic pump for constant local drug delivery and the creation of hindlimb ischemia in a mouse model. Moreover, the hindlimb vasculature is perfused with Microfil, a silicone radiopaque agent, to prepare for micro-computed tomography (micro-CT) imaging.

Mikro-Bilgisayarlı Tomografi Görüntüleme için Microfil ile İskemik arka ayaklarında ve damarları bir Perfüzyon için osmotik İlaç Taşıyıcı

Preclinical research in animal models of peripheral arterial disease plays a vital role in testing the efficacy of therapeutic agents designed to ...

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Background 
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered advancements to decrease the occurrence this injury.&#160;The current model demonstrates reproducible lower&#160;extremity paralysis following thoracic aortic occlusion.
Methods 
Adult male C57BL6 mice were anesthetized with isoflurane. Through a cervicosternal incision the aorta was exposed. The descending thoracic aorta and left subclavian arteries were identified without entrance into pleural space. Skeletonization of these arteries was followed by immediate closure (Sham) or occlusion for 4 min (moderate ischemia) or 8 min (prolonged ischemia). The sternotomy and skin were closed and the mouse was transferred to warming bed for recovery.&#160; Following recovery, functional analysis was obtained at 12 hr intervals until 48 hr.
Results 
Mice that underwent sham surgery showed no observable hind&#160;limb deficit. Mice subjected to moderate ischemia for 4 min had minimal functional deficit at 12 hr followed by progression to complete paralysis at 48 hr. Mice subjected to prolonged ischemia had an immediate paralysis with no observable hind-limb movement at any point in the postoperative period. There was no observed intraoperative or post&#160;operative mortality.
Conclusion 
Reproducible lower extremity paralysis whether immediate or delayed can be achieved in a murine model. Additionally, by using a median sternotomy and careful dissection, high survival rates, and reproducibility can be achieved.

The lack of mechanistic understanding of spinal cord ischemia-reperfusion injury has hindered further adjuncts to prevent paraplegia following high risk aortic operations. Thus, the development of animal models is imperative. This manuscript demonstrates reproducible lower extremity paralysis following thoracic aortic occlusion in a murine model.

Spinal Kord İskemi-reperfüzyon bir Mürin Modelinde Torasik Aort Tıkanıklığı tarafından tekrarlanabilir Parapleji

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of stroke on tissue injury and to evaluate the effectiveness of therapeutic interventions, several experimental models in a variety of species were developed. They include complete global cerebral ischemia, incomplete global ischemia, focal cerebral ischemia, and multifocal cerebral ischemia. The model described in this protocol is based on the middle cerebral artery occlusion (MCAO) and is related to the focal ischemia category. This technique produces consistent focal ischemia in a strictly defined region of the hemisphere and is less invasive than other methods. The procedure described is performed on mice, given the availability of several genetic variants and the high number of tests standardized for mice to aid in the behavioral and neurodeficit evaluation.

We describe a mouse model of stroke induced by the occlusion of the middle cerebral artery using a silicone coated suture. The protocol can be applied to induce permanent occlusion or a temporary ischemia, followed by reperfusion.

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard therapy, a considerable number of CLI patients are not suited for either surgical or endovascular revascularization. Angiogenic therapies are emerging as an option for these patients but are currently still under investigation. Before application in humans, those therapies must be tested in animal models and its mechanisms must be clearly understood. An animal model of hindlimb ischemia (HLI) has been developed by the ligation and excision of the distal external iliac and femoral arteries and veins in mice. A comprehensive panel of tests was assembled to assess the effects of ischemia and putative angiogenic therapies at functional, histologic and molecular levels. Laser Doppler was used for the flow measurement and functional assessment of perfusion. Tissue response was evaluated by the analysis of capillary density after staining with the anti-CD31 antibody on histological sections of gastrocnemius muscle and by measurement of collateral vessel density after diaphonization. Expression of angiogenic genes was quantified by RT-PCR targeting selected angiogenic factors exclusively in endothelial cells (ECs) after laser capture microdissection from mice gastrocnemius muscles. These methods were sensitive in identifying differences between ischemic and non-ischemic limbs and between treated and non-treated limbs. This protocol provides a reproducible model of CLI and a framework for testing angiogenic therapies.

Here, a critical hindlimb ischemia experimental model is presented followed by a battery of functional, histologic and molecular tests&#160;to assess the effectiveness of angiogenic therapies.&#8203;

Hindekstremite Iskemi bir Murine modelinde terapötik anjiyogenezi değerlendirilmesi

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Laser Doppler Perfusion Imaging in the Mouse Hindlimb

Blood flow recovery is a critical outcome measure after experimental hindlimb ischemia or ischemia-reperfusion. Laser Doppler perfusion imaging (LDPI) is a common, noninvasive, repeatable method for assessing blood flow recovery. The technique calculates overall blood flow in the sampled tissue from the Doppler shift in frequency caused when a laser hits moving red blood cells. Measurements are expressed in arbitrary perfusion units, so the contralateral non-intervened upon leg is usually used to help control measurements. Measurement depth is in the range of 0.3-1 mm; for hindlimb ischemia, this means that dermal perfusion is assessed. Dermal perfusion is dependent on several factors&#8212;most importantly skin temperature and anesthetic agent, which must be carefully controlled to result in reliable readings. Furthermore, hair and skin pigmentation can alter the ability of the laser to either reach or penetrate to the dermis. This article demonstrates the technique of LDPI in the mouse hindlimb.

Here, we present a protocol that demonstrates the technique and necessary controls for Laser Doppler perfusion imaging to measure blood flow in the mouse hindlimb.

Fare Hindlimb Lazer Doppler Perfüzyon Görüntüleme

Blood flow recovery is a critical outcome measure after experimental hindlimb ischemia or ischemia-reperfusion. Laser Doppler perfusion imaging (LDPI) is ...

High-Resolution Three-Dimensional Imaging of the Footpad Vasculature in a Murine Hindlimb Gangrene Model

Peripheral arterial disease (PAD) is a significant cause of morbidity resulting from chronic exposure to atherosclerotic risk factors. Patients suffering from its most severe form, chronic limb-threatening ischemia (CLTI), face substantial impairments to daily living, including chronic pain, limited walking distance without pain, and nonhealing wounds. Preclinical models have been developed in various animals to study PAD, but mouse hindlimb ischemia remains the most widely used. There can be significant variation in response to ischemic insult in these models depending on the mouse strain used and the site, number, and means of arterial disruption. This protocol describes a unique method combining femoral artery and vein electrocoagulation with the administration of a nitric oxide synthase (NOS) inhibitor to reliably induce footpad gangrene in Friend Virus B (FVB) mice that resembles the tissue loss of CLTI. While traditional means of assessing reperfusion such as laser Doppler perfusion imaging (LDPI) are still recommended, intracardiac perfusion of the lipophilic dye 1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate (DiI) is used to label the vasculature. Subsequent whole-mount confocal laser scanning microscopy allows for high-resolution, three-dimensional (3D) reconstruction of footpad vascular networks that complements traditional means of assessing reperfusion in hindlimb ischemia models.

The present protocol describes a unique, clinically relevant model of peripheral arterial disease that combines femoral artery and vein electrocoagulation with the administration of a nitric oxide synthase inhibitor to induce hindlimb gangrene in FVB mice. Intracardiac DiI perfusion is then used for high-resolution, three-dimensional imaging of the footpad vasculature.

Murin Arka Ekstremite Kangren Modelinde Footpad Vaskülatürünün Yüksek Çözünürlüklü Üç Boyutlu Görüntülenmesi

Peripheral arterial disease (PAD) is a significant cause of morbidity resulting from chronic exposure to atherosclerotic risk factors. Patients suffering ...

İskemik İnme Fare Modeli Geliştirmek için Distal Orta Arter Oklüzyonu

Induction of Acute Ischemic Stroke in Mice Using the Distal Middle Artery Occlusion Technique

Ischemic stroke remains the predominant cause of mortality and functional impairment among the adult populations globally. Only a minority of ischemic stroke patients are eligible to receive intravascular thrombolysis or mechanical thrombectomy therapy within the optimal time window. Among those stroke survivors, around two-thirds suffer neurological dysfunctions over an extended period. Establishing a stable and repeatable experimental ischemic stroke model is extremely significant for further investigating the pathophysiological mechanisms and developing effective therapeutic strategies for ischemic stroke. The middle cerebral artery (MCA) represents the predominant location of ischemic stroke in humans, with the MCA occlusion serving as the frequently employed model of focal cerebral ischemia. In this protocol, we describe the methodology of establishing the distal MCA occlusion (dMCAO) model through transcranial electrocoagulation in C57BL/6 mice. Since the occlusion site is located at the cortical branch of MCA, this model generates a moderate infarcted lesion restricted to the cortex. Neurological behavioral and histopathological characterization have demonstrated visible motor dysfunction, neuron degeneration, and pronounced activation of microglia and astrocytes in this model. Thus, this dMCAO mouse model provides a valuable tool for investigating the ischemiastroke and worth of popularization.

Yazar Spotlight: İnme Araştırmaları için Farelerde Güvenilir Bir Distal MCA Oklüzyon Modeli Oluşturma

Here, we present a protocol to establish a distal middle cerebral artery occlusion (dMCAO) model through transcranial electrocoagulation in C57BL/6J mice and evaluate the subsequent neurological behavior and histopathological features.

Distal Orta Arter Oklüzyonu Tekniği Kullanılarak Farelerde Akut İskemik İnme İndüksiyonu

Ischemic stroke remains the predominant cause of mortality and functional impairment among the adult populations globally. Only a minority of ischemic ...