Name: the fibular nerve injury method: a reliable assay to identify and test factors that repair neuromuscular junctions
Uploaded: 2016-08-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Fibular Nerve Injury Method: A Reliable Assay to Identify and Test Factors That Repair Neuromuscular Junctions at JoVE.com

The authors thank members of the Valdez laboratory for intellectual input on experiments and comments on the manuscript.

Tüm deneyler Virginia Tech Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmış NIH kurallar ve hayvan protokol çerçevesinde yürütülmüştür. Cerrahi 1. hazırlanması Hayvanlar <ol><li> steril 1 ml insülin şırınga ile ketamin (90 mg / kg) ve deri altı enjeksiyon yoluyla inguinal ksilazin (10 mg / kg) karışımı ile fareler anestezi. Taşıyıcı çözeltisi% 0.9 tuzlu su, 17.4 mg / ml ketamin ve 2.6 mg / ml ksilazin içeren bir karışım içerir. yürürlüğe girmesi için ilaç beklerken kafeslerde geri hayvanları yerleştirin. Not: yükleme dozu prosedür süresince yeterli anestezi sağlamıyorsa, yükleme dozunun% 25 ek enjekte edilebilir. </li><li> Monitör hayvanlar sürekli solunum oranları ve uyarılma seviyelerinin uygun depresyon kontrol etmek için enjeksiyon sonrası. yeterince anestezi zaman hiçbir tepki ortaya çıkarmak gerekir bir arka ayak tutam ile uyarılma seviyesini kontrol edin. NOT: Bu genellikle 3-5 alır25 ila 30 g ortalama bir genç yetişkin fare için min. Hayvan de 10 dakika sonrası enjeksiyonundan sonra yanıt ise, anestezi yükleme dozunun% 25 ek enjekte edilebilir. </li><li> kuruluğunu önlemek için hayvanın gözlerine vazelin ve hafif mineral yağ oftalmik merhem sürün. temiz, düz bir yüzey üzerine kafes ve yerden hayvanları kaldırın. ekstremitenin sadece yanal yönünü açığa bir elektrikli saç düzeltici kullanarak pelvise ayak istenen arka ekstremite tıraş. </li><li> 1 dakika için traş sitesine bir kimyasal saç çıkarıcı uygulanır. El ile laboratuvar mendil kullanarak tüylerden. laboratuvar ile temizleyin depilated alan etanole batırılmış mendil. </li></ol> 2. Cerrahi Prosedür <ol><li> otoklav veya başka uygun yöntem ile cerrahi aletleri sterilize edin. % 80 etanol / H 2 0 ile cerrahi sitesi ve cerrahi kurulu temizleyin. proviodine cerrahi siteyi dezenfekte edin. cerrahi gemide fare yerleştirin ve uzuv sınırlamalar uyum. tutmakDiz eklemi ile anatomik doğal bir pozisyonda hedef arka bacak hafifçe iç veya dış rotasyon olmadan uzatıldı. </li><li> Cerrahi mikroskop altında hayvan ve tahta yerleştirin. yüzeysel noktalarına özellikle kemik diz ekleminde ve tibialis anterior ve gastroknemius kaslar arasındaki sırtın palpasyon yoluyla uygun kesi sitesine yönlendirmek. </li><li> kavrama için genel forseps kullanırken bir neşter veya yaylı makas kullanılarak deri yoluyla yaklaşık 3 cm&#39;lik kesi olun. Ortak fibula sinir yatan tabii dik kesi yapmak. </li><li> Yüzeyel fasya ile kesi Devam biceps femoris açığa ve vastus lateralis kasları. bağlayan derin fasya boyunca keserek bu kasları ayırın. Bir 1-2 cm kesilmiş yeterli olmalıdır. </li><li> pazı geri çekin kaudale ortak fibula siniri açığa mekanik retraktörler kullanarak kas femoris. </li><li> onun Inter kadar proksimal sinir Tracegastroknemius kasının lateral başının tendonu ile bölüm bulunur. Not: Poz geri kas ve deri ek manipülasyonunu gerekebilir. Bu kesişme sinir hasarı için kararlı bir dönüm noktası olarak kullanılır. </li><li> gastroknemyus tendonun lateral sınırına paralel bir şekilde ipuçları hizalama ince bir forseps ile sinir kavrayın. 5 saniye boyunca sabit, sabit basınç uygulayarak ortak fibula sinir Crush. </li><li> Cerrahi kapsamı ile görsel muayene ile sinirin tam ezmek desteklemektedir. Bu yaralanma yerinde saydam görünür. Periferik aksonların floresan proteinleri ifade fareler kullanıyorsanız, floresan yaralanma yerinde kaybolur. </li><li> retraktörler çıkarın ve anatomik pozisyonlarında kasları realign. 6-0 ipek sütür ile kesi kapatın. 1-3 basit kesintiye dikişler yeterlidir. Temiz bir kafes içinde bir ısıtma pedi üzerinde fare recuperating yerleştirin. </li><li> 2 saat sonrası opera için tüm hayvanları izlemekyon nefes ve anestezi herhangi bir olumsuz reaksiyonlara kontrol etmek için. Ameliyattan hemen kurtarma aşağıdaki subkutan inguinal enjeksiyon yoluyla buprenorfin 0.05-0.10 mg / kg bir başlangıç ​​dozunu. 3 ek doz sonraki 48 saat boyunca her 12 saatte verin. tam iyileşme sonrasında, hayvan bakım tesisine fareler dönün. </li></ol> 3. İzolasyon ve boyanması ekstansör digitorum longus (EDL) Kaslar <ol><li> izofluran kullanarak hayvanların Kurban. Emici labwipes ile dolu bir 50 ml&#39;lik bir tüp içine 0.5 ml sıvı izofluran koyun. Mühürlü 2500 cm3 odasında hayvan kapaksız tüp yerleştirin. maruz en az 4 dakika yeterlidir. İkili üst kapağında, ayak-tutam, ve kuyruk-tutam reflekslerinin kaybı için test her hayvan perfüzyon başlamadan önce bilinçsiz olduğundan emin olmak için. </li><li> Transkardiyal ilk 10 mi 0.1 M PBS ile 16 hayvan serpmek, daha sonra 0.1 M PBS (pH 7.4) içinde% 4 paraformaldehit 25 mi. Heparin (30 ünite / 20g Hayvan ağırlık) / ml) 10 birim perfüzyon sonuçları geliştirmek küçük kapiler yatak kan pıhtılaşmasını önlemek için (PBS ile ilave edilebilir. </li><li> karın çevresi etrafında deri yoluyla enine kesmek için makas kullanarak arka bacaklarda kapsayan cilt kaldırmak. Arka bacaklarda ve ayaklarda forseps kullanarak geçmiş cildi aşağı soyun. </li><li> kavrayarak ve forseps ile soyulması ile arka bacaklarda yüzeysel kaplamasını çıkarın. Periferik aksonların floresan proteinleri ifade fareler kullanıyorsanız, 50 ml&#39;lik tüplerde% 4 PFA gecede bütün fareler sonrası düzeltmek. PBS ile üç kez yıkayın. Not: Sabit farenin 4 ° C&#39;de PBS içinde saklanabilir. Değilse, bu adımı atlayın ve post-sabitleme hayvanlar olmadan 3,6 adıma geçin. </li><li> Mümkün olduğunca sağlam proksimal ve distal tendon tutmak için emin olmak, fare arka bacaklarda EDL kasları 18 parçalara ayır. </li><li> en az 1 saat süre ile (1 x PBS,% 0.5 Triton X-100,% 3 BSA ve% 5 keçi serumu ihtiva eden) blokaj tamponunda EDS kasları inkübe edin. </li><live synaptotagmin-2 (1: 250), 3 gün boyunca blokaj tamponu içinde seyreltilmiş antikorlar:&gt; olarak sinir lifi (1.000 1) ihtiva eden tüpler içinde, motor aksonları ve sinir terminalleri, bir yer kasları görselleştirmek için. kasları 1x PBS ile üç kez 10 dakika her biri bir zaman yıkayın. Not: Periferik aksonların floresan proteinleri (XFP) ifade fareler kullanılarak bu adımı atlayın. </li><li> tam NMJ innervasyonundan bir pozitif kontrol olarak EDL yaralanmamış karşı taraf Leke. Negatif kontroller, 4 gün sonrası yaralanma, NMJ tamamen Denerve bir zaman noktasında elde edilen bir EDS, hem de yalnızca sekonder antikor ile boyanmış bir EDL içermelidir. </li><li> 1 gün sinir lifi ve synaptotagmin-2 algılamak için uygun floresan etiketli sekonder antikor ile kasları kuluçkaya yatmaktadır. kasları 1x PBS ile üç kez 10 dakika her biri bir zaman yıkayın. Not: Bu adım adım 3.10 ile birlikte yapılabilir. Periferik aksonların floresan proteinleri ifade fareler kullanılarak bu adımı atlayın. </li><li> postsy görselleştirmek içinNMJ naptic bölgesi, 5 ug / ml, en az 2 saat boyunca blokaj tamponu içinde seyreltilmiş Alexa-555 konjuge alfa bungarotoxin kasların inkübe edin. kasları 1x PBS ile üç kez 10 dakika her biri bir zaman yıkayın. </li><li> pozitif yüklü cam slaytlar üzerinde tüm kasları monte etmek için, slayt üzerinde orta montaj dayalı gliserol birkaç damla ekleyin ve lamel ile kaplayın, slayt doğrudan kas yerleştirin. kas düzleştirmek için slayt karşı lamel basın. slayt ve lamel kullanarak laboratuvar mendil çevresinden montaj medya kapalı ıslatın. lamel ve slayt arasındaki kenarları mühür oje sürün. </li></ol> 4. Görüntüleme ve Veri Analizi <ol><li> NMJs, görüntü 488, 555 ve 633 nm ışık heyecanlandırmak ve 20X ve 40X hedefleri ile yayılan ışığı yakalamak için donatılmış bir konfokal lazer tarama mikroskobu kullanılarak EDL kas yapısını analiz etmek. </li><li> Bütün NMJs görselleştirmek için, optik sn maksimum intensite projeksiyon görüntüler oluşturmakleri ayrı NMJ en yüksek görünen bölgeler düşük uzanan 1 mikron 2 aralıklı. piyasada mevcut görüntüleme yazılımı kullanarak maksimum yoğunluk projeksiyonlar oluşturun. </li><li> 1) Tamamen Denerve = postsinaptik sitesi akson ve AChRs arasında akson ile temas,% 5&#39;ten az ko tamamen yoksun: olarak reinnervation oranlarını belirlemek için, NMJs sınıflandırır. 2) Kısmen innerve = akson kısmen akson ve AChRs arasındaki postsynapse,% 5-95 ko çakışıyor. 3) Tüm innervasyonu = öncesi ve sonrası sinaps arasında neredeyse mükemmel appozisyon, akson ve AChRs arasında% 95&#39;ten fazla ko. görüntüleme düzlemine dik yalan veya tamamen görüntüde görselleştirilemediği NMJs hariç. Not: Tüm bu deneyler, en az 3 hayvan ve hayvan başına 50 NMJs incelenmiştir. Sonuçlar 0,05&#39;ten P değerine sahip bir öğrenci t-testi kullanılarak anlamlı kabul edildi. </li><li> operatörü kör, ayrı bireyler yapabilirCerrahi ve resim analizi. tedavi gruplarının bilgisi olmadan, analizörü NMJ puanlama ile objektif olabilir. Seçenek olarak ise, resim, randomize ve kaynak hayvan bilgisi olmadan analiz için operatöre sunulabilir. </li></ol> 5. Nicel PCR <ol><li> izofluran ve servikal dislokasyon kullanarak hayvanların Kurban. Cildi ve 3.3 adıma göre bacak kaslarını örten yüzeyel fasya çıkarın. tibialis anterior ve 3.4 adıma göre EDL kasları parçalara ayır. </li><li> Flaş sıvı nitrojen üzerinde 1.5 ml tüp bütün tibialis anterior ve EDS kasları donma. kısmen sıvı azot içine daldırıldığında, bir ön-soğutulmuş havan içinde tüp ve yerden doku çıkarın. bir havan ve havan tokmağı kullanılarak ince bir toz haline dondurulmuş kas öğütün. </li><li> Bir ticari olarak temin edilebilen RNA ekstraksiyon reaktifi içine donmuş kas tozu çözmek ve ticari olarak temin edilebilen bir kit üreticisinin I&#39;e göre olan RNA ekstraksiyonu ve genomik DNA giderme gerçekleştirmeknstructions. </li><li> üreticinin talimatlarına göre bir ticari olarak temin edilebilir ters transkriptaz karışımı ile ters transkripsiyon gerçekleştirin. </li><li> qPCR uygun temizlik genler kullanılarak ticari olarak mevcut bir kit kullanılarak gerçekleştirin (malzeme tabloya bakınız). (Malzeme tabloya bakınız) PCR yürütmek için piyasada mevcut olan kantitatif PCR termal döngü kullanın. </li><li> 58 ° C olarak ayarlandı tavlama sıcaklığı. Taq polimeraz / SYBR yeşil karışımı imalatçısının şartnamesine ek bisiklet parametrelerini ayarlamak. Primer özgüllük için test dimer oluşumunu astar 95 ° C ila 65 ° C ila 0.5 ° C artan artar oluşan termal döngü programına bir son erime eğrisi aşamasını içerir. </li><li> Kontrol geni olarak 18S RNA kullanılarak ΔΔCT yöntem 21-2 göreceli mRNA ekspresyon seviyelerini belirlemek. </li></ol>

<ol>
	<li>Sanes, J. R., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction,+assembly,+maturation+and+maintenance+of+a+postsynaptic+apparatus.">Induction, assembly, maturation and maintenance of a postsynaptic apparatus.</a> Nat. Rev. Neurosci. 2 (11), 791-805 (2001).</li><li>Moloney, E. B., de Winter, F., Verhaagen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ALS+as+a+distal+axonopathy:+molecular+mechanisms+affecting+neuromuscular+junction+stability+in+the+presymptomatic+stages+of+the+disease.">ALS as a distal axonopathy: molecular mechanisms affecting neuromuscular junction stability in the presymptomatic stages of the disease.</a> Front. Neurosci. 8, 252 (2014).</li><li>Apel, P. J., Alton, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+age+impairs+the+response+of+the+neuromuscular+junction+to+nerve+transection+and+repair:+An+experimental+study+in+rats.">How age impairs the response of the neuromuscular junction to nerve transection and repair: An experimental study in rats.</a> J Orthop Res. 27 (3), 385-393 (2009).</li><li>Balice-Gordon, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+in+neuromuscular+innervation.">Age-related changes in neuromuscular innervation.</a> Muscle Nerve Suppl. 5, S83-S87 (1997).</li><li>Valdez, G., Tapia, J. C., Lichtman, J. W., Fox, M. A., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shared+resistance+to+aging+and+ALS+in+neuromuscular+junctions+of+specific+muscles.">Shared resistance to aging and ALS in neuromuscular junctions of specific muscles.</a> PloS one. 7 (4), e34640 (2012).</li><li>Nguyen, Q. T., Sanes, J. R., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+pathways+promote+precise+projection+patterns.">Pre-existing pathways promote precise projection patterns.</a> Nat. Neurosci. 5 (9), 861-867 (2002).</li><li>K&#252;ry, P., Stoll, G., M&#252;ller, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+cellular+interactions+in+peripheral+nerve+regeneration.">Molecular mechanisms of cellular interactions in peripheral nerve regeneration.</a> Curr Opin Neurol. 14 (5), 635-639 (2001).</li><li>Gaudet, A. D., Popovich, P. G., Ramer, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wallerian+degeneration:+gaining+perspective+on+inflammatory+events+after+peripheral+nerve+injury.">Wallerian degeneration: gaining perspective on inflammatory events after peripheral nerve injury.</a> J Neuroinflammation. 8, 110 (2011).</li><li>Chen, P., Piao, X., Bonaldo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+macrophages+in+Wallerian+degeneration+and+axonal+regeneration+after+peripheral+nerve+injury.">Role of macrophages in Wallerian degeneration and axonal regeneration after peripheral nerve injury.</a> Acta Neuropathol. 130 (5), 605-618 (2015).</li><li>Chen, Z. -. L., Yu, W. -. M., Strickland, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+regeneration.">Peripheral regeneration.</a> Annu Rev Neurosci. 30, 209-233 (2007).</li><li>Darabid, H., Perez-Gonzalez, A. P., Robitaille, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromuscular+synaptogenesis:+coordinating+partners+with+multiple+functions.">Neuromuscular synaptogenesis: coordinating partners with multiple functions.</a> Nat. Rev. Neurosci. 15 (11), 703-718 (2014).</li><li>Geuna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sciatic+nerve+injury+model+in+pre-clinical+research.">The sciatic nerve injury model in pre-clinical research.</a> J. Neurosci. Methods. 243, 39-46 (2015).</li><li>Batt, J. A. E., Bain, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tibial+nerve+transection+-+a+standardized+model+for+denervation-induced+skeletal+muscle+atrophy+in+mice.">Tibial nerve transection - a standardized model for denervation-induced skeletal muscle atrophy in mice.</a> J. Vis. Exp. (81), e50657 (2013).</li><li>Savastano, L. E., Laurito, S. R., Fitt, M. R., Rasmussen, J. A., Gonzalez Polo, V., Patterson, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sciatic+nerve+injury:+a+simple+and+subtle+model+for+investigating+many+aspects+of+nervous+system+damage+and+recovery.">Sciatic nerve injury: a simple and subtle model for investigating many aspects of nervous system damage and recovery.</a> J. Neurosci. Methods. 227, 166-180 (2014).</li><li>Kang, H., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+axon+regeneration+and+muscle+reinnervation+in+young+adult+and+aged+animals.">Motor axon regeneration and muscle reinnervation in young adult and aged animals.</a> J Neurosci. 33 (50), 19480-19491 (2013).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J. Vis. Exp. (65), e3564 (2012).</li><li>Feng, G., Mellor, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+Neuronal+Subsets+in+Transgenic+Mice+Expressing+Multiple+Spectral+Variants+of+GFP.">Imaging Neuronal Subsets in Transgenic Mice Expressing Multiple Spectral Variants of GFP.</a> Neuron. 28 (1), 41-51 (2000).</li><li>Sanes, J. R., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+vertebrate+neuromuscular+junction.">Development of the vertebrate neuromuscular junction.</a> Annu Rev Neurosci. 22, 389-442 (1999).</li><li>Bowen, D. C., Park, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+and+regulation+of+MuSK+at+the+neuromuscular+junction.">Localization and regulation of MuSK at the neuromuscular junction.</a> Dev Biol. 199 (2), 309-319 (1998).</li><li>Gay, S., Jublanc, E., Bonnieu, A., Bacou, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myostatin+deficiency+is+associated+with+an+increase+in+number+of+total+axons+and+motor+axons+innervating+mouse+tibialis+anterior+muscle.">Myostatin deficiency is associated with an increase in number of total axons and motor axons innervating mouse tibialis anterior muscle.</a> Muscle Nerve. 45 (5), 698-704 (2012).</li><li>Livak, K. J., Schmittgen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2(-Delta+Delta+C(T))+Method.">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method.</a> Methods. 25 (4), 402-408 (2001).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Bu yazıda sunulan yöntem nöromüsküler kavşaklar (NMJ) tamir katılan mekanizmaları tanımlamak için benzersiz fırsatlar sunar. o diz yakın gastroknemius tendonu üzerinden geçerken Bu yöntem yaygın fibula siniri ezme içerir. Bir forseps ile sinir sıkışmasının sadece 5 saniye sonra, tam bir dejenerasyonu yaralanması 4 gün sonra belirtilen olduğunu göstermektedir. genç yetişkin farelerde, alfa-motor aksonlar 12 gün yaralanmamış farelere olanlardan ayırt edilemez presinaptik sitelerin Reformasyon sonuçlanan, post-yaralanma 7 gün ekstansör digitorum longus kas (EDL) önceki sinaptik siteleri reinnervate başlar. Buna ek olarak, seçme NMJ ilişkili moleküllerin düzeyleri yakından NMJ innervasyon durumu ile ilişkili olduğunu göstermektedir. Önemlisi, bu hücresel ve moleküler değişiklikler tespit etmek fırsat ve tes sağlayarak, aynı cinsiyet ve yaş (Şekil 5a-b) hayvanlar arasındaki yüksek tekrarlanabilirNMJ onarmak için harekete t faktörleri. çevredeki kasları ve damar az zararla sonuçlanır sadece küçük bir kesi gerektiren, gastroknemius tendonu üzerinden geçerken cerrahi girişimler açısından, ortak fibula sinir dalı son derece erişilebilir. yenileyici NMJs ile ilişkili hücresel ve moleküler değişiklikleri incelemek için ortak fibula siniri kullanmanın avantajları vardır. gastroknemius tendonu sürekli hedef kaslar aynı yer ve mesafeye ortak fibula sinir yaralama istikrarlı bir anatomik dönüm noktası olarak hizmet vermektedir. Bu güvenilir, aynı yaş ve cinsiyetteki hayvanlar arasındaki kasların akson yenilenme oranı ve reinnervation karşılaştırmak mümkün kılar. Böyle başarısı için kritik adımlar yaralanma sitesi ameliyatları arasında tutarlı olmasını sağlamak dahil, tam sinir ezilme her hayvan elde edilir ve en az hasar çevre yapılara sürdürülür. c innerve kaslar arasındafibula sinir ommon, tibialis anterior (TA) ve ekstansör digitorum longus (EDL) kas NMJ onarım değerlendirmek için mükemmel hedeflerdir. Bu iki kas öncelikle ciddi yaralanma, yaşlanma ve hastalıklar 5 etkilenen hızlı tip kas lifleri oluşmaktadır. o bütün monte bozulmaları olmadan tüm NMJs görüntüye olabilir çünkü NMJ analiz için, EDL kas özellikle çekici. Aynı zamanda, mümkün olan başka kas lifleri motor akson ve çevreleyen hücreler değişikliklerle NMJs değişiklikler ilişkili kolaylaştırır. TA ve EDS kaslar yoğun nedeniyle anatomik konumu 20 kas ve NMJ onarım farklı moleküler ve yaşam tarzı müdahalelerin etkisini değerlendirmek için kullanılır olmuştur. Bununla birlikte, uzun dönem denervasyon daha zor hücresel ve moleküler CH değerlendirmek için yapım kas liflerini aktive bağışıklık hücrelerini ve uydu hücreleri 12-14 atrofiye kritik fonksiyonu ile genin ekspresyonunu değiştirirözellikle NMJs rejenerasyonunu teşvik etmek için gerekli anges. Burada anlatılan yöntemde fibula sinir sinir genç erişkin farelerde 7 gün içinde sonrası ezmek onları ulaşmasını sağlayan, TA ve EDS kaslara yakın ezilir. Böylece, bu yöntem, kas kütlesinin, TA ve EDS kas kas lifleri atrofiye ilişkili moleküler değişikliklerin kaybını en aza indirmek gerekir. fibular sinir ezilme protokolü birden çok farklı moda değiştirilebilir. Siniri kesilmiş yaralanması kolaylıkla periferik sinir rejenerasyonu in vivo görüntüleme daha gerçek zamanlı izin ezmek için ikame edilebilir. Bir kesim büyütme için bir engel olarak ölü akson malzemeyi kaldırır ve endonöral tüp içindeki her akson homojen hasarını önler. Doğru yapıldığında fibula sinir ezilme birkaç ilişkili komplikasyonlar vardır. karşılaştı olabilir Bir problem orijinal NMJ hedefleri reinnervate için sinirin başarısızlığıdır. Bu ACC kaynaklanabiliridental cerrahi sırasında sinir yaralanması kesti. Herhangi bir keskin kenarlar için ince uçlu kırma forseps kontrol ettiğinizden emin olun. Ameliyat sırasında herhangi bir noktada sinir ezmek kalitesi sorgulanabilir, orijinal insizyon daha iyi sinir görselleştirmek için genişletilebilir. Bu yaranın boyutunu artırır ve ek yapılar zarar verebilir iken, doğru fibula siniri belirlenmesi ve tam bir ezilme elde edildi olup olmadığını değerlendirirken yardımcı olabilir. Burada açıklanan teknik birkaç sınırlaması sahip yapar. Bu hayvanlarda yapılar işlemek için yeterince büyük olan Birincisi, yetişkin farelerde faydalıdır. Yenidoğan ve ergen fareler önemli ölçüde cerrahi artan zorluk, çok daha küçüktür. İkincisi, fibula sinir NMJ rejenerasyon oranları etkileyebilir hedef dokuların denervasyon sonucu, duyusal ve motor aksonlar içerir. NMJ Amyotrofik lat patolojinin bir odak alanı olarak kabul edilmektedireral skleroz (ALS) ve yaşlanma. Aynı zamanda motor becerileri ödün ve kas kütlesini kaybetmemek için periferik sinirlerin yaralanma aşağıdaki tamir edilmelidir. fibular sinir ezilme yöntemi tespiti ve NMJ tamir önemli rolleri olan moleküllerin test yardımcı olmalıdır. Bir yaklaşımda, bu yöntem, bir RNA sekansı analizi kullanılarak NMJ rejenerasyon farklı aşamalarında önemli rolleri ile mRNA ve mikroRNA profil kullanılabilir. Ayrıca, seçici olarak kişiye ve kas silinir aday genlerin işlevini belirlemek için uygulanabilir. Buna ek olarak, bu yöntem, statik ve canlı görüntüleme kullanılarak ve sinir NMJ rejenerasyonunu hızlandırmak için dış kaynaklı moleküllerin yeteneğini test etmek için de çok uygundur.

In young adult and healthy animals, the neuromuscular junction (NMJ) is a highly stable connection between the presynapse, the nerve ending of an &#945;-motor axon, and the postsynapse, the specialized region of an extrafusal muscle fiber where nicotinic acetylcholine receptors (AChRs) selectively aggregate1. The nearly perfect apposition of the pre- and post-synaptic apparatuses is necessary for proper neurotransmission, survival of &#945;-motor neurons and muscle fibers and motor function. Unfortunately, the function of the NMJ is adversely affected by aging, diseases such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS), autoimmune diseases and injury to muscles and peripheral nerves2-5. These insults often result in degeneration of presynaptic nerve endings, leaving muscles denervated and significantly altering motor skills. For this reason, the identification of molecules that function to maintain and repair the NMJ has become a priority. Because peripheral nerves regenerate and reinnervate targets, peripheral nerve injury models have been used to identify molecular changes associated with regenerating NMJs. 
Peripheral nerve injury models often involve either completely cutting or crushing specific nerve branches6. Following a cut, the endoneurial tube has to be reformed, delaying axonal regeneration and reinnervation of target cells and tissues. The severity of this type of injury also causes axons to meander away from their original path, resulting in their failure to reach original targets. This is in contrast to nerves injured via crush where the endoneurium remains contiguous, providing a path for efficient and proper regrowth of regenerating axons. It also allows axons to find and reinnervate their original muscle fiber partners. Irrespective of injury model, there are a number of cellular and molecular changes that must occur for axons to regenerate and reinnervate targets. After an injury, the nerve segment proximal to the target is broken down and removed via a process termed Wallerian Degeneration7. This process involves reprogramming and de-differentiation of Schwann cells into non-myelinating cells that secrete regenerative factors, clear myelin, and recruit macrophages to the site of injury8. Macrophages in turn complete the clearance of myelin and axonal debris, which would otherwise impede growth of the regenerating axon9. In parallel, motor and sensory neurons activate mechanisms needed to promote regeneration of their severed axons. Once the regenerating axon reaches the target, it must transform from a growth cone to a nerve ending capable of properly transmitting (for motor axons) or receiving (for sensory axons) information10. In this regard, alpha-motor axons undergo a series of well-orchestrated changes that culminate in their growth cone differentiating into a fully functional presynaptic nerve ending that nearly perfectly opposes the post-synaptic site on the target muscle fiber11. 
The sciatic, tibial and accessory nerves have been the primary choices for studying axonal and NMJ regeneration12-14. However, there are a number of drawbacks when using these models to examine cellular and molecular changes associated with regenerating NMJs between animals and under different conditions. Firstly, the sciatic nerve supplies the majority of the muscles of the hind limb, with injury significantly limiting both movement and sensation. It is therefore not possible to use this method to study the impact of exercise alone or in combination with other factors. Additionally, the sciatic nerve is a rather thick structure and thus requires a large amount of compressive force to fully injure all axons. This in turn may result in complete transection of the more superficial axons while leaving the endoneurial tube of deeper lying axons intact, introducing significant variability in the rate and fidelity of regeneration among these axons. Complete transection of this nerve is even less desirable given that many axons will fail to reconnect with the same muscle fibers. Complicating matters, the sciatic nerve possesses intrinsic anatomic variability, both in the number and site of origin of its terminal nerve branches. It is therefore very difficult to lesion the same site. While the tibial nerve is smaller and more amenable to crush injuries, there is also no readily available landmark to serve as a lesion site for this nerve branch. 
The accessory nerve branch (part of cranial nerve XI) that supplies the sternocleidomastoid muscle has also been used to study regeneration of NMJs15. This nerve is particularly attractive because NMJs in the sternocleidomastoid muscle can be more readily imaged in live animals compared to NMJs in other muscles. But similar to the sciatic and tibial nerves, there is no specific landmark that can be used to injure this nerve in the same location, limiting it as a model for comparing regeneration of NMJs among individual animals of an experimental cohort. An inconsistent lesion site introduces variability in the rates of NMJ reinnervation. Due to these shortcomings, the procedure presented here utilizes the injury of a different peripheral nerve branch to examine regenerating NMJs. 
The common fibular nerve, also called the common peroneal nerve, contains many features that make it a reliable nerve to examine regeneration of NMJs between animals and across different treatments. The common fibular nerve has a predictable anatomic course as it runs over the tendon of the lateral head of the gastrocnemius muscle in the knee, the intersection serving as a stable landmark for lesions. The nerve is accessed through a small and minimally invasive incision near but anatomically segregated from the muscles of interest. The findings presented here demonstrate that regenerating motor axons begin to reform NMJs in the extensor digitorum longus (EDL) muscle 8 days after crushing the fibular nerve in 70 days old young adult female mice. Importantly, the pattern and rate of reinnervation is consistent among animals of the same age and sex and therefore provide a reliable injury model that will significantly hasten our understanding of the cellular and molecular changes required to maintain and repair NMJs.

<table><tbody><tr><td>Ketamine</td><td>VetOne</td><td>501072</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd Inc.&amp;nbsp;</td><td>003437&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>&amp;nbsp;Zoopharm</td><td>1Z-73000-150910&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Nair</td><td>Nair</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kim-wipes</td><td>Kimtech</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>Electric Razor</td><td>Braintree Scientific</td><td>CLP-64800</td><td></td></tr><tr><td>80% EtOH/H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;0</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% Proviodine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 ml Insulin Syringe</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spring Scissors</td><td>Vannas</td><td>91500-09</td><td></td></tr><tr><td>No. 15 scalpel</td><td>Braintree Scientific</td><td>SSS 15</td><td></td></tr><tr><td>#5 Forceps</td><td>Dumont</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>6-0 silk suture on reverse cutting needle</td><td>&amp;nbsp;Suture Express</td><td>752B&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Rodent Heating Pad</td><td>Braintree Scientific</td><td>AP-R-18.5</td><td></td></tr><tr><td>Alexa 555 conjugated alpha-BTX</td><td>Molecular Probes</td><td>B35451</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield</td><td>Vector Labs</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>Olympus Stereo Zoom Microscope</td><td>Olympus</td><td>562037192</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss 700 Confocal Microscope</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Variable-flow peristaltic perfusion pump</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-876-3</td><td></td></tr><tr><td>Aurum Total RNA Mini Kit</td><td>Bio-Rad</td><td>7326820</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad iScript RT Supermix</td><td>Bio-Rad</td><td>1708840</td><td></td></tr><tr><td>SsoFast Evagreen Supermix</td><td>Bio-Rad</td><td>1725200</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad CFX96</td><td>Bio-Rad</td><td>1855196</td><td></td></tr><tr><td>Puralube Vet ointment</td><td>Puralube</td><td>1621</td><td></td></tr><tr><td>Synaptotagmin-2 antibody</td><td>Antibodies-Online</td><td>ABIN401605</td><td></td></tr><tr><td>Neurofilament antibody</td><td>Antibodies-Online</td><td>ABIN2475842</td><td></td></tr></tbody></table>

the fibular nerve injury method: a reliable assay to identify and test factors that repair neuromuscular junctions

nöromüsküler bileşke (NMJ) yaşlanma, yaralanma ve hastalık sonucu zararlı yapısal ve fonksiyonel değişikliklere uğrar. Nedenle, bakım ve onarım NMJs katılan hücresel ve moleküler değişiklikleri anlamak için şarttır. Bu amaçla, güvenilir ve sürekli olarak farelerde NMJs rejenere incelemek için bir yöntem geliştirdik. o diz yakın gastroknemius kası tendonun lateral başının üzerinden geçerken Bu sinir yaralanması yöntemi yaygın fibula siniri ezme içerir. 70 günlük dişi fareler kullanarak, motor aksonlar 7 gün sonrası ezmek içinde önceki postsinaptik hedefleri reinnervate başlar göstermektedir. Bunlar tamamen 12 gün önceki sinaptik alanları yeniden işgal. Bu yaralanma yöntemin güvenilirliğini belirlemek için, bireysel 70 günlük dişi fareler arasında reinnervation oranları karşılaştırıldı. Biz tekrar innerve olmuş postsinaptik sitelerin sayısı 7, 9 fareler arasında benzer olduğunu buldu ve 12 gün sonrası crush. olmadığını belirlemek içinBu yaralanma deneyi, kas moleküler değişiklikleri karşılaştırmak için kullanılabilir biz kas nikotinik reseptör (y-AChR) ve kas özel kinaz (MuSK) gama alt-biriminin seviyeleri araştırılmıştır. gama-AChR alt birim ve MuSK yüksek aşağıdaki denervasyon regüle ve NMJs reinnervation aşağıdaki normal seviyelere geri oluştururlar. Biz bu genlerin ve kasların innervasyonu durumu transkript seviyeleri arasında yakın bir ilişki bulundu. Biz bu yöntem NMJ ve diğer sinaps tamir katılan hücresel ve moleküler değişiklikler anlayışımız hızlandırmak inanıyoruz.

Ortak fibula sinir, aynı zamanda, peroneal sinir olarak adlandırılan bacak (Şekil 1A) ön yönüne fibula başının etrafında sallanır popliteal fossada yukarıdaki siyatik sinirin, doğar. yüzeysel ve derin fibula sinir içine dalları birbirine ayak ve ayak dorsifleksör tedarik (anterior tibialis, extensor digitorum longus ve brevis ve ekstansör halluces longus kasları) ve ayağın everters (peroneus kaslar) Orada olmuyor. Bu sinir de ayak ve bacağın alt yarısının lateral sırtına proje duyusal lifleri taşır. Bu motor ve duyu aksonları oluşan, nispeten ince bir yapıdır. Bu sinir dalı öngörülebilir anatomik bir seyir izlemektedir. O gastroknemius kasının (Şekil 1 ve Şekil 2) yanal başının tendonu üzerinde çalışır gibi diz yan, sinir çoğunlukla yüzeyseldir. thKonumu kolayca deri ve fasya (Şekil 1A) zarar sınırlandırılması, küçük bir kesi ile ulaşılabilir istikrarlı bir dönüm noktası olarak hizmet vermektedir olduğunu. siyatik ve tibial sinirlerin karşılaştırıldığında, bu sinirin daha küçük çaplı, mümkün tamamen daha yüzeysel aksonlar koparılması olasılığını azaltarak daha az güç kullanarak tüm aksonlar ezmek için yapar. Sadece nöronlar 17 sarı floresan protein (YFP) ifade Fareler ortak fibula sinir üzerinde ezilme işlemini optimize etmek ve net bir şekilde rejenere aksonlar görselleştirmek için kullanıldı. Sinir bu site kesi yerden daha erişilebilir olduğundan hedef kaslara en yakın gastroknemius tendon kenarında ezilmiş. Bu site de mümkün, aynı yaş ve cinsiyetteki hayvanlar arasında NMJs yenilenmesini karşılaştırmak için yapım, güvenilir bir anatomik dönüm noktası olarak hizmet vermektedir. ince bir forseps res kullanılarak 5 saniye sinir Sıkıştırmayaralanma yerinde (Şekil 2B), YFP kaybolmasıyla ka bul etmez. Ancak, bağ dokusu ve epinöriumun ikamet eden hücreler kendi orijinal hedefler (Şekil 2B) akson hızlı ve hassas rejenerasyon için bir kanal olarak hizmet veren, bitişik kalır. 70 günlük, dişi farelerde bu yaralanma nöronal soma (Şekil 4B) distal Tüm aksonal segmentlerinin dejenerasyonu neden olmak için yeterlidir. Bu yaralanma yönteminin güvenilirliği ve tekrarlanabilirliği belirlemek için, ekstansör digitorum longus (EDL) kas reinnervation incelenmiştir. Bu kas, çeşitli nedenlerden dolayı seçildi: 1) proksimal henüz fiziksel olarak kesi ve sinir hasarı siteleri (Şekil 3A) ayrıştırılır. Bu nedenle, kas, sadece kopmuş canlandıran aksonlardan dejenerasyonu ile değiştirilir. ezilme sitesine olan yakınlığı tekrar innerve olmuş ve kas atroph edilmesi için gerekli zamanı en aza indirirY. 2) Öncelikle yaşlanmaya ve hastalıklara karşı daha duyarlı hızlı tip iskelet kas liflerinden oluşur. 3) Onun NMJs egzersiz ve kalori kısıtlaması ile zayıflatılmış edilebilir hastalıklar ve yaşlanma ilerlemesi sırasında önemli yapısal değişikliklere uğrarlar. 4) Bu canlı görüntüleme ve moleküler manipülasyon (Şekil 3D) için kolayca erişilebilir. 5) kolayca tüm monte mümkün kılan olabilir dört falanks bileşenlerine ayrılabilir ışık mikroskobu (Şekil 3B) kullanarak innerve akson ve onların bağlantıları tamamen görüntü tüm. Sağ bacağında fibula sinir ezdikten sonra önceden boşalan post-sinaptik siteleri reinnervation motorlu aksonlarında YFP ifade eden üç 70 gün eski dişi farelerde değerlendirildi. Post-sinaptik siteler NAC kas, yüksek bir afinite ile seçici olarak bağlanan alfa-bungarotoxin (BTX), floresan kullanılarak etiketlendi görselleştirilmiştirHRS. 1) Denerve kas lifleri, motor aksonlar tamamen post-sinaptik sitelerden eksik ve akson ve AChRs gözlendi arasında% 5&#39;ten az ko: Kaslar kısmen ya da tamamen bu kriterlere aşağıdaki tekrar innerve olmuş, sinirsiz olarak kabul edildi. 2) Kısmen innerve kas lifleri akson ve AChRs gözlendi arasında post-sinaptik siteler ve% 5-95 ko motor akson eksik appozisyon ancak bazı göre kategorize edildi. 3) tam innerve kas lifleri ise, akson ve AChRs gözlendi arasındaki motor sinir uçlarında ve post-sinaptik siteleri ve% 95&#39;ten fazla ko arasında neredeyse mükemmel appozisyon oldu. onların omurun görüntülenmiştir değildi görüntüleme düzlemi veya tüm NMJ dik yatıyordu Bireysel NMJs sayıları alınmadı. Bu kriterler kullanılarak, hızı ve reinervasyon derece yüksek uyum incelenen tüm fare arasında gözlenmiştir. 4 gün sonrası ezmek at, kaslar tüm hayvanların EXA tamamen Denerve bulunduçıkartılmaktadır (Şekil 4B). Bu bulgu, yukarıda tarif edildiği gibi, 5 saniye için ortak fibula siniri kırma, tüm aksonlar koparmaya yeterli olduğunu göstermektedir. Post-crush 7 gün ile, sinir uçları daha önce boşalan post-sinaptik siteleri (Şekil 4C, 4E-F) tekrar işgal sürecinde idi. Ancak, çoğu kas lifleri hala sadece kısmen innerve bulundu bulundu. Ek gün sonrası ezmek ile, sinir uçları tamamen 12 gün (Şekil 4D, 4E-F) tarafından tekrar innerve olmuş halde bulunmuştur presinaptik siteleri ve NMJs içine ayırt etmek için devam etti. Önemlisi, zaman aynı uzunlukta (Şekil 4E-F) sinirsiz fareler arasında küçük değişkenlik vardı, fibula sinir ezilmesi aynı yaş ve cinsiyetteki hayvanlar arasındaki kasların reinnervation karşılaştırmak için bir tahlil olarak kullanılabileceğini gösteren. sadakatle hayvanlar arasındaki rejenere NMJs karşılaştırmak yeteneği fırsatlar sunartam olarak bu sinaps onarmak için gerekli her adımda ile ilişkili hücresel özelliklerini anlamak için. reinnervation oranlarını karşılaştırmak için yukarıda kullanılan 70 gün eski farelerden Denerve ve yenileyici NMJs mimarisini incelemek için, NMJs yüksek çözünürlüklü konfokal mikroskopi görüntüleri elde edildi. Beklendiği gibi, bu analiz onlar kas liflerini (Şekil 4G-I) reinnervate olarak α-motorlu akson sinir uçlarında meydana gelen bir dizi değişiklik gösterdi. Aksonal büyüme konileri genişletmek ve postsinaptik siteleri (Şekil 4G) ile irtibata olarak şube başlamak görünür. Bu aksonal dalları daha sonra postsinaptik ekibi (Şekil 4H-l) ile biten akson sinirin yakın komple yan yana sonuçlanan postsynapse spesifik bölgeleri üzerinde büyür. Çok gelişimi sırasında bulunanlar s için yarışan birden aksonlar olmak üzere, gözlendi benzer motor sinir uçlarını yenileyici Ek yapısal özellikleriSadece bir akson sonuçlanan ame hedef (Şekil 4H), post-crush 12 gün tek kas lifi innerve. Tüm post-yaralanma (Şekil 4I) gözlenmiştir aşamaları de Ek olarak, post-sinaptik siteler ötesinde akson dalları, filizi olarak anılacaktır. Bu lahanası bile aksonal onarım son aşaması extrajunctional aksonal şube geri çekilmesini içeren düşündüren tam innerve NMJs olarak, oldukça yaygın idi. sinir uçlarında bu bariz değişikliklere rağmen, post-sinaptik siteler kas lifleri tamamen Denerve bulunduğunda sonrası ezmek 4 gün olmak üzere yaralanmamış kaslarda olanlar karşılaştırıldığında tüm aşamalarında sonrası yaralanma çoğunlukla ayırt kalmıştır. AChRs ekstra-sinaptik bölgelere parçalanma ya da önemli bir kayıp ve yeniden dağıtım belirgin belirtisi yoktu. Bu bulgular, güçlü fibula siniri paralizi yöntemi molekül, farmakolojik ve yaşam tarzı müdahaleler t belirlemek ve test etmek için bir tahlil olarak kullanılabileceğini göstermektedirşapka NMJ dahil, sinaps sinir uçlarının tamir teşvik. son ilerlemelere rağmen, çok az bir gelişme, kas kaynaklı faktörler korumak ve NMJ onarmak için gerekli ve yeterli tanımlama yapılmamıştır. Ortak fibula sinir yaralanması yöntemi reinnervation işleminin belirli aşamalarında ve NMJ tamir potansiyel rolleri ile değiştirilmiş molekülleri tanımlamak için kullanılabilir eğer Bu nedenle istedi. Anapara, iki NMJ ilişkili genlerin ifade analizi bir kanıtı olarak, AChR gama alt birim ve kas-spesifik kinaz, MuSK 18 gerçekleştirildi. Kantitatif PCR ile gösterildiği gibi, bu genler denervasyon takip artar ve NMJs (Şekil 5a-b) tekrar innerve olmuş gibi düştü. Daha önce tamamen Denerve kaslar 19 kullanılarak bildirilen Bu genler, 4 gün sonrası ezmek artış gösterirler. sinirler reinnervate kas lifleri gibi, bu genlerin seviyelerini azaltmak ve RAPIDLY başlangıca geri dönün. incelenen hayvanların arasında, her iki genler için ifadenin desen yenileyici NMJs moleküler ve hücresel değişiklikler arasında sıkı bir korelasyon gösteren, hemen hemen aynıdır. Bu yöntem, bu nedenle NMJ rejenerasyon farklı aşamalarında ile ilişkili moleküler değişiklikleri belirlemek için eşsiz fırsatlar sunmaktadır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54186/54186fig1.jpg" /> Şekil 1:. Ortak Fibula Sinir Anatomisi (A) şematik siyatik sinirin seyrini ve yüzeysel ve kemik noktalara ilişkin terminal dalları detaylandırma. SCN = Siyatik Sinir, TN = Tibial Sinir, SRN = Süral Sinir, NKP = Ortak Fibula Sinir, SPN = Yüzeysel Fibula Sinir, DPN = Derin Fibula Sinir. İstenilen kesi sitesi gösterilir. Çıkarılmış cilt ile çevresindeki kaslar ile ilgili olarak ortak fibula sinir konumu (B) Diyagram.Bağıl kesi sitesi yatırım fasya örten gösterilmiştir. TA = tibialis anterior kas EDL = extensor digitorum longus kas. (C) Maruz siyatik ve ortak fibula sinir. NKP diz seviyesinde gastroknemius kası (Gn) tendonu üzerinde haçlar. Gösterilen tendonun göre Crush sitesi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54186/54186fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54186/54186fig2.jpg" /> Şekil 2:. Ortak Fibula Sinir Crush Cerrahisi (A) ilk kesi sadece uzunluğu birkaç cm gerek. Deri ve yüzeyel fasya nüfuz sonra, kesi biseps femoris ve TA kaslar arasındaki yatan yatırım / derin fasya boyunca devam edilmelidir. (A1) ortak fibula sinir kolayca mikroskopi t olmadan görüntülenmiştirinsizyon (Gn = Gastrocnemius kas) hrough. Kesi (sadece fotoğraf amaçlı gerekli) genişletilmiş ise (A2) ortak fibula sinir ve gastroknemius tendonu kavşak kolaylıkla görülebilir. ezmek dik Gn tendon ve sinir paralel kırmızı çizgi ile işaretlenen yere konulmalıdır. (B) NKP daha kolay bir floresan diseksiyon kapsamında YFP transgenik fareler görüntülenmiştir. (B1) sinir tam bir ezilme yaralanması teyidi için izin ezilme yerinde floresan kaybeder. (B2) tam NKP ezmek hala çıplak göz ve oda aydınlatması ile görüntülendi olabilir. Sinir saydam hale gelecektir. Bu resim aynı zamanda yakındaki doku ve kan damarlarına zarar sınırlandırarak NKP ve epinöriyuma ve üstyapı bozulmadan kalması gerçeğini vurgulamaktadır.Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54186/54186fig3.jpg" /> Şekil 3:. Extensor digitorum longus (EDL) kas anatomisi (A) fare arka bacak kemiklerinin ilişkin EDL 3 boyutlu görüntü. Her bölümü tarafından kontrol edilen basamak dört falanks bölüme ayrılır JAtlasView (B) Parçalı disseke EDL kas kullanarak ve işaretleme oluşturulur. Ikinci rakamı kontrol EDL bölünme sonu plakalı bant innervates (C) YFP derin fibula sinir dalı etiketli. (D) Aksonal dalları ve iletişim siteleri kolayca seçilmiş NMJs tutarlı inceleme için izin tespit edilebilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54186/54186fig3large.jpg" target="_blank">Daha büyük bir versiyon o görmek için lütfen buraya tıklayınız</a>Bu rakam f. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54186/54186fig4.jpg" /> Şekil 4:. Fibula siniri ezme sonra EDL kasının Aynı Çağ ve NMJs Seks Analizi Hayvanların Arasında reinnervation Benzer Oranları. (A) Post-sinaptik siteler tamamen yaralanmamış farelerde akson tarafından işgal edilmiştir. 4 gün sonrası ezmek At (B), kaslar tamamen Denerve bulunmuştur. (C) Aksonlar 7 gün sonrası ezmek ve (D) kasları reinnervate tamamen 12 gün postsinaptik siteleri yeniden işgal etmeye başlar. (E - F) NMJ yeniden doluluk oranı hayvanlar aynı zaman süresi için sinirsiz arasında neredeyse ayırt edilemez. (G - I) olgunlaşmış presinaptik sitelere yeniden ayırt aksonal sinir uçlarının Temsilcisi görüntüler. sinaps sonrası alanları yeniden işgal izleyenöngörülebilir desen, sonunda tam olarak gelişmesine NMJ region.Similar ötesine geçilmediği sürece postsinaptik siteleri işgal dalları gelişen büyüme konisinin ile başlayan, postsinaptik siteleri başlangıçta birden yeniden büyüyen aksonlar tarafından innerve ancak NMJ tamamen yeniden bir kez tek bir akson kalır. Belirtilen birden fazla akson tarafından ön ve postsinaptik aparatları ve innervasyon arasında tam örtüşme olmadan coşkulu aksonal filizlenme, kısmi innervasyon (H) Örnekler. 70 günlük dişi fareler incelendi; Ölçek Bar = 50 mikron (AD), 20 um (Gl). Hata bar = SEM. N = 3 fareler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54186/54186fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/54186/54186fig5.jpg" /> Şekil 5: fibula sinir bir yönteme uygun bir yöntem ezmekn Tahlili NMJ Tamir ilgilendim aday genleri belirlemek için (A - B). İki NMJ ilişkili genlerin, AChR gama alt birim ve misk mRNA düzeyi, benzer farelerin TA kaslarda değişmiş zaman aynı uzunlukta için sinirsiz . artan zaman sonrası sinir hasarı, her iki transkript seviyeleri NMJs ilerici reinnervation gösteren histolojik analiz doğrulayan, başlangıca dönen azalır. Her çizgi bir tek farenin temsil eder. Hata bar = teknik çoğaltır ortalamanın standart hatası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54186/54186fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about The Fibular Nerve Injury Method: A Reliable Assay to Identify and Test Factors That Repair Neuromuscular Junctions at JoVE.com

The Fibular Nerve Injury Method: A Reliable Assay to Identify and Test Factors That Repair Neuromuscular Junctions

We have developed a nerve injury method to reliably examine muscle reinnervation, and thus regeneration of neuromuscular junctions in mice. This technique involves injuring the common fibular nerve via a simple and highly reproducible surgery. Muscle reinnervation in then assessed by whole-mounting the extensor digitorum longus muscle.

Fibula Sinir Yaralanması Yöntem: Güvenilir Testi tanımak ve Test O Tamir Nöromüsküler Junctions Faktörleri

The neuromuscular junction (NMJ) undergoes deleterious structural and functional changes as a result of aging, injury and disease. Thus, it is imperative ...

the-fibular-nerve-injury-method-reliable-assay-to-identify-test

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

15.6K Görüntüleme.  Virginia Tech. We have developed a nerve injury method to reliably examine muscle reinnervation, and thus regeneration of neuromuscular junctions in mice. This technique involves injuring the common fibular nerve via a simple and highly reproducible surgery. Muscle reinnervation in then assessed by whole-mounting the extensor digitorum longus muscle. 

Video: The Fibular Nerve Injury Method: A Reliable Assay to Identify and Test Factors That Repair Neuromuscular Junctions

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative response mounted by PNS neurons thereby possibly illuminating the failures of CNS regeneration1. Sciatic nerve crush (axonotmesis) is one of the most common models of peripheral nerve injury in rodents2. Crushing interrupts all axons but Schwann cell basal laminae are preserved so that regeneration is optimal3,4. This allows the investigator to study precisely the ability of a growing axon to interact with both the Schwann cell and basal laminae4. Rats have generally been the preferred animal models for experimental nerve crush. They are widely available and their lesioned sciatic nerve provides a reasonable approximation of human nerve lesions5,4. Though smaller in size than rat nerve, the mouse nerve has many similar qualities. Most importantly though, mouse models are increasingly valuable because of the wide availability of transgenic lines now allows for a detailed dissection of the individual molecules critical for nerve regeneration6, 7. Prior investigators have used multiple methods to produce a nerve crush or injury including simple angled forceps, chilled forceps, hemostatic forceps, vascular clamps, and investigator-designed clamps8,9,10,11,12. Investigators have also used various methods of marking the injury site including suture, carbon particles and fluorescent beads13,14,1. We describe our method to obtain a reproducibly complete sciatic nerve crush with accurate and persistent marking of the crush-site using a fine hemostatic forceps and subsequent carbon crush-site marking. As part of our description of the sciatic nerve crush procedure we have also included a relatively simple method of muscle whole mount we use to subsequently quantify regeneration.

In this report we describe a method to crush mouse sciatic nerve. This method uses readily available hemostatic forceps and easily and reproducibly produces complete sciatic nerve crush. In addition, we describe a method to prepare muscle whole mounts suitable for analysis of nerve regeneration after sciatic nerve crush.

Tüm Dağı Muscle Analizi ile tekrarlanabilir Fare Siyatik Sinir Ezilme ve Rejenerasyon daha sonraki Değerlendirme

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Nörobilim

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from traumatic injury, disease and various congenital, genetic and acquired conditions are quite common. Tissue engineering and regenerative medicine technologies have enormous potential to provide a therapeutic solution. However, utilization of biologically relevant animal models in combination with longitudinal assessments of pertinent functional measures are critical to the development of improved regenerative therapeutics for treatment of VML-like injuries. In that regard, a commercial muscle lever system can be used to measure length, tension, force and velocity parameters in skeletal muscle. We used this system, in conjunction with a high power, bi-phase stimulator, to measure in vivo force production in response to activation of the anterior crural compartment of the rat hindlimb. We have previously used this equipment to assess the functional impact of VML injury on the tibialis anterior (TA) muscle, as well as the extent of functional recovery following treatment of the injured TA muscle with our tissue engineered muscle repair (TEMR) technology. For such studies, the left foot of an anaesthetized rat is securely anchored to a footplate linked to a servomotor, and the common peroneal nerve is stimulated by two percutaneous needle electrodes to elicit muscle contraction and dorsiflexion of the foot. The peroneal nerve stimulation-induced muscle contraction is measured over a range of stimulation frequencies (1-200 Hz), to ensure an eventual plateau in force production that allows for an accurate determination of peak tetanic force. In addition to evaluation of the extent of VML injury as well as the degree of functional recovery following treatment, this methodology can be easily applied to study diverse aspects of muscle physiology and pathophysiology. Such an approach should assist with the more rational development of improved therapeutics for muscle repair and regeneration.

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

We describe an in vivo protocol to measure dorsiflexion of the foot following stimulation of the peroneal nerve and contraction of the anterior crural compartment of the rat hindlimb. Such measurements are an indispensable translational tool for evaluating skeletal muscle pathology and tissue engineering approaches to muscle repair and regeneration.

Uygulamaları<em&gt; İn Vivo</em&gt; Doku değerlendirilmesi için Rat Tibialis Anterior Fonksiyonel Test İskelet Kası Onarım Engineered

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from ...

Biyomühendislik

Assessment of Neuromuscular Function Using Percutaneous Electrical Nerve Stimulation

Percutaneous electrical nerve stimulation is a non-invasive method commonly used to evaluate neuromuscular function from brain to muscle (supra-spinal, spinal and peripheral levels). The present protocol describes how this method can be used to stimulate the posterior tibial nerve that activates plantar flexor muscles. Percutaneous electrical nerve stimulation consists of inducing an electrical stimulus to a motor nerve to evoke a muscular response. Direct (M-wave) and/or indirect (H-reflex) electrophysiological responses can be recorded at rest using surface electromyography. Mechanical (twitch torque) responses can be quantified with a force/torque ergometer. M-wave and twitch torque reflect neuromuscular transmission and excitation-contraction coupling, whereas H-reflex provides an index of spinal excitability. EMG activity and mechanical (superimposed twitch) responses can also be recorded during maximal voluntary contractions to evaluate voluntary activation level. Percutaneous nerve stimulation provides an assessment of neuromuscular function in humans, and is highly beneficial especially for studies evaluating neuromuscular plasticity following acute (fatigue) or chronic (training/detraining) exercise.

We present a protocol to assess changes in neuromuscular function. Percutaneous electrical nerve stimulation is a non-invasive method that evokes muscular responses. Electrophysiological and mechanical properties of these responses permit the evaluation of neuromuscular function from brain to muscle (supra-spinal, spinal and peripheral levels).

Perkütan Elektriksel Sinir Stimülasyonu kullanma Nöromüsküler Fonksiyonu Değerlendirilmesi

Percutaneous electrical nerve stimulation is a non-invasive method commonly used to evaluate neuromuscular function from brain to muscle (supra-spinal, ...

Measuring Neuromuscular Junction Functionality

Neuromuscular junction (NMJ) functionality plays a pivotal role when studying diseases in which the communication between motor neuron and muscle is impaired, such as aging and amyotrophic lateral sclerosis (ALS). Here we describe an experimental protocol that can be used to measure NMJ functionality by combining two types of electrical stimulation: direct muscle membrane stimulation and the stimulation through the nerve. The comparison of the muscle response to these two different stimulations can help to define, at the functional level, potential alterations in the NMJ that lead to functional decline in muscle.
Ex vivo preparations are suited to well-controlled studies. Here we describe an intensive protocol to measure several parameters of muscle and NMJ functionality for the soleus-sciatic nerve preparation and for the diaphragm-phrenic nerve preparation. The protocol lasts approximately 60 min and is conducted uninterruptedly by means of a custom-made software that measures the twitch kinetics properties, the force-frequency relationship for both muscle and nerve stimulations, and two parameters specific to NMJ functionality, i.e. neurotransmission failure and intratetanic fatigue. This methodology was used to detect damages in soleus and diaphragm muscle-nerve preparations by using SOD1G93A transgenic mouse, an experimental model of ALS that ubiquitously overexpresses the mutant antioxidant enzyme superoxide dismutase 1 (SOD1).

A functional assessment of the neuromuscular junction (NMJ) can provide essential information on the communication between muscle and nerve. Here we describe a protocol to comprehensively evaluate both the NMJ and muscle functionality using two different muscle-nerve preparations, i.e. soleus-sciatic and diaphragm-phrenic.

Nöromüsküler kavşak işlevleri ölçme

Neuromuscular junction (NMJ) functionality plays a pivotal role when studying diseases in which the communication between motor neuron and muscle is ...

Murine Flexor Tendon Injury and Repair Surgery

Tendon connects skeletal muscle and bone, facilitating movement of nearly the entire body. In the hand, flexor tendons (FTs) enable flexion of the fingers and general hand function. Injuries to the FTs are common, and satisfactory healing is often impaired due to excess scar tissue and adhesions between the tendon and surrounding tissue. However, little is known about the molecular and cellular components of FT repair. To that end, a murine model of FT repair that recapitulates many aspects of healing in humans, including impaired range of motion and decreased mechanical properties, has been developed and previously described. Here an in-depth demonstration of this surgical procedure is provided, involving transection and subsequent repair of the flexor digitorum longus (FDL) tendon in the murine hind paw.&#160;This technique can be used to conduct lineage analysis of different cell types, assess the effects of gene gain or loss-of-function, and to test the efficacy of pharmacological interventions in the healing process. However, there are two primary limitations to this model: i) the FDL tendon in the mid-portion of the murine hind paw, where the transection and repair occur, is not surrounded by a synovial sheath. Therefore this model does not account for the potential contribution of the sheath to the scar formation process. ii) To protect the integrity of the repair site, the FT is released at the myotendinous junction, decreasing the mechanical forces of the tendon, likely contributing to increased scar formation. Isolation of sufficient cells from the granulation tissue of the FT during the healing process for flow cytometric analysis has proved challenging; cytology centrifugation to concentrate these cells is an alternate method used, and allows for generation of cell preparations on which immunofluorescent labeling can be performed. With this method, quantification of cells or proteins of interest during FT healing becomes possible.

Flexor tendons in the hand are commonly injured, leading to impaired hand function. However, the scar-tissue healing response is not well characterized. A murine model of flexor tendon healing is demonstrated here. This model can enhance overall understanding of the healing process and assess therapeutic approaches to improve healing.

Murin Flexor Tendon yaralanmaları ve onarım Cerrahisi

Tendon connects skeletal muscle and bone, facilitating movement of nearly the entire body. In the hand, flexor tendons (FTs) enable flexion of the fingers ...

Tıp

Functional and Physiological Methods of Evaluating Median Nerve Regeneration in the Rat

The main goal of this investigation is to show how to create and repair different types of median nerve (MN) lesions in the rat. Moreover, different methods of simulating postoperative physiotherapy are presented. Multiple standardized strategies are used to assess motor and sensory recovery using an MN model of peripheral nerve lesion and repair, thus permitting easy comparison of the results. Several options are included for providing a postoperative physiotherapy-like environment to rats that have undergone MN injuries. Finally, the paper provides a method to evaluate the recovery of the MN using several noninvasive tests (i.e., grasping test, pin prick test, ladder rung walking test, rope climbing test, and walking track analysis), and physiological measurements (infrared thermography, electroneuromyography, flexion strength evaluation, and flexor carpi radialis muscle weight determination). Hence, this model seems particularly appropriate to replicate a clinical scenario, facilitating extrapolation of results to the human species.
Although the sciatic nerve is the most studied nerve in peripheral nerve research, analysis of the rat MN presents various advantages. For example, there is a reduced incidence of joint contractures and automutilation of the affected limb in MN lesion studies. Furthermore, the MN is not covered by muscle masses, making its dissection easier than that of the sciatic nerve. In addition, MN recovery is observed sooner, because the MN is shorter than the sciatic nerve. Also, the MN has a parallel path to the ulnar nerve in the arm. Hence, the ulnar nerve can be easily used as the nerve graft for repairing MN injuries. Finally, the MN in rats is located in the forelimb, akin to the human upper limb; in humans, the upper limb is the site of most peripheral nerve lesions.

Presented is a protocol to produce different types of median nerve (MN) lesions and repair in the rat. Additionally, the protocol shows how to evaluate the functional recovery of the nerve using several noninvasive behavioral tests and physiological measurements.

Sıçanda Median Sinir Rejenerasyonunun Değerlendirilmesinde Fonksiyonel ve Fizyolojik Yöntemler

The main goal of this investigation is to show how to create and repair different types of median nerve (MN) lesions in the rat. Moreover, different ...

Maximum Isometric Tetanic Force Measurement of the Tibialis Anterior Muscle in the Rat

Traumatic nerve injuries result in substantial functional loss and segmental nerve defects often necessitate the use of autologous interposition nerve grafts. Due to their limited availability and associated donor side morbidity, many studies in the field of nerve regeneration focus on alternative techniques to bridge a segmental nerve gap. In order to investigate the outcomes of surgical or pharmacological experimental treatment options, the rat sciatic nerve model is often used as a bioassay. There are a variety of outcome measurements used in rat models to determine the extent of nerve regeneration. The maximum output force of the target muscle remains the most relevant outcome for clinical translation of experimental therapies. Isometric force measurement of tetanic muscle contraction has previously been described as a reproducible and valid technique for evaluating motor recovery after nerve injury or repair in both rat and rabbit models. In this video, we will provide a step-by-step instruction of this invaluable procedure for assessment of functional recovery of the tibialis anterior muscle in a rat sciatic nerve defect model using optimized parameters. We will describe the necessary pre-surgical preparations in addition to the surgical approach and dissection of the common peroneal nerve and tibialis anterior muscle tendon. The isometric tetanic force measurement technique will be detailed. Determining the optimal muscle length and stimulus pulse frequency is explained and measuring the maximum tetanic muscle contraction is demonstrated.

Evaluation of motor recovery remains the benchmark outcome measure in experimental peripheral nerve studies. The isometric tetanic force measurement of the tibialis anterior muscle in the rat is an invaluable tool to assess functional outcomes after reconstruction of sciatic nerve defects. The methods and nuances are detailed in this article.

Sıçandaki Tibialis Ön Kasının Maksimum İzometrik Tetanik Kuvvet Ölçümü

Traumatic nerve injuries result in substantial functional loss and segmental nerve defects often necessitate the use of autologous interposition nerve ...

Implantation and Control of Wireless, Battery-free Systems for Peripheral Nerve Interfacing

Peripheral nerve interfaces are frequently used in experimental neuroscience and regenerative medicine for a wide variety of applications. Such interfaces can be sensors, actuators, or both. Traditional methods of peripheral nerve interfacing must either tether to an external system or rely on battery power that limits the time frame for operation. With recent developments of wireless, battery-free, and fully implantable peripheral nerve interfaces, a new class of devices can offer capabilities that match or exceed those of their wired or battery-powered precursors. This paper describes methods to (i) surgically implant and (ii) wirelessly power and control this system in adult rats. The sciatic and phrenic nerve models were selected as examples to highlight the versatility of this approach. The paper shows how the peripheral nerve interface can evoke compound muscle action potentials (CMAPs), deliver a therapeutic electrical stimulation protocol, and incorporate a conduit for the repair of peripheral nerve injury. Such devices offer expanded treatment options for single-dose or repeated dose therapeutic stimulation and can be adapted to a variety of nerve locations.

This is a protocol for the surgical implantation and operation of a wirelessly powered interface for peripheral nerves. We demonstrate the utility of this approach with examples from nerve stimulators placed on either the rat sciatic or phrenic nerve.

Periferik Sinir Arayüzü için Kablosuz, Pilsiz Sistemlerin İmplantasyonu ve Kontrolü

Peripheral nerve interfaces are frequently used in experimental neuroscience and regenerative medicine for a wide variety of applications. Such interfaces ...

Modified Spared Nerve Injury Surgery Model of Neuropathic Pain in Mice

Spared nerve injury (SNI) is an animal model that mimics the cardinal symptoms of peripheral nerve injury for studying the molecular and cellular mechanism of neuropathic pain in mice and rats. Currently, there are two types of SNI model, one to cut and ligate the common peroneal and the tibial nerves with intact sural nerve, which is defined as SNIs in this study, and another to cut and ligate the common peroneal and the sural nerves with intact tibial nerve, which is defined as SNIt in this study. Because the sural nerve is purely sensory whereas the tibial nerve contains both motor and sensory fibers, the SNIt model has much less motor deficit than the SNIs model. In the traditional SNIt mouse model, the common peroneal and the sural nerves are cut and ligated separately. Here a modified SNIt surgery method is described to damage both common peroneal and sural nerves with only one ligation and one cut with a shorter procedure time, which is easier to perform and reduces the potential risk of stretching the sciatic or tibial nerves, and produces similar mechanical hypersensitivity as the traditional SNIt model.

<meta charset="utf8"></head><body>Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

The modified surgery is a simplified method for mouse or rat spared nerve injury model that requires only one ligation and one cut to injure both common peroneal and sural nerves.

Fibula Sinir Yaralanması Yöntem: Güvenilir Testi tanımak ve Test O Tamir Nöromüsküler Junctions Faktörleri

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler