Dr Matthieu Rousseau bu protokolü ve proje geliştirilmesi sırasında el yazması ve laboratuvar dendritik Immunobiology onların yararlı anlayışlar için eleştirel okuma için teşekkür ediyoruz. Bu eser kısmen Avrupa Birliği yedinci çerçeve programı Marie Curie eylem (PCIG11-GA-2012-3221170 ve IMMUNO-Onkoloji LabEx (MAI). finansman tarafından desteklenen

Fare deneyler protokol numarası 2012-0024 onaylanması uygun olarak tarafından Comite d'éthique tr expérimentation animale Paris Merkezi et Sud (hayvan deney Etik Komitesi), uygulama Avrupa Yönergesi 2010/63 AB.
1. kateter hazırlanması
<ol><li>Bir Pediatrik Intravenous-access kanül bulaşması için fareler her grup için hazırlamak. Dahili bahar mekanizmasını kullanarak, her kanül, iğne, üretici tarafından talimat olarak kurtarmak. Sadece plastik intravenöz kanül koruyarak iğneler, atın.</li>
	<li>Sunar laminar akış başlıklı bir morötesi (ultraviyole) döngüsü için genellikle 25-30 dakika sterilize. Not: yeni bir kateter deneysel grupları, cinsiyet veya bakteri suşları arasında kullanılması gerektiğini ancak Kateterler birden fazla fare için kullanılabilir.</li>
</ol>2. hazırlanması Uropathogenic E. coli enfeksiyonu
<ol><li>En az iki gün önce enfeksiyon, çizgi UPEC Luria suyu (LB) agar plaka üzerine donmuş bir bakteri stoktan bir steril aşılama döngü kullanarak, uygun antibiyotik içeren. 37 ° C'de gecede kuluçkaya. Tabaklar 4 ° C'de bir hafta kadar saklanabilir.</li>
	<li>100 ml steril Erlenmeyer şişeye 10 ml LB, uygunsa, bir koloni LB plaka ile antibiyotik içeren aşılamak ve 37 ° c gece (yaklaşık 16-18 saat) ayakta kuluçkaya. Not: Ayakta kültürler enfeksiyon23için gerekli olan 1 pili, ifade türü izin verir. Sallayarak yetiştirilen kültür-ecek-si olmak daha az verimli pili ifade ve bu nedenle, enfeksiyon tutarsız oranları.</li>
	<li>Gecede kültür optik yoğunluk (OD)600 ölçmek ve önceden belirlenmiş büyüme eğrisi kullanarak ml başına bakteri sayısını hesaplayın. Örneğin, UPEC zorlanma UTI89, OD gibi600 = 0,35 2 x 108 CFU ml, böylece, bir gecede kültür bir OD600 ile başına eşdeğerdir = 2,4 13,7 x 10 için eşdeğer olur8 CFU başına ml. ampirik arasındaki ilişkiyi belirlemek OD600 ve canlı bakteri enfeksiyonu için istihdam her yeni gerginlik ile.</li>
	<li>
Bakteri miktarı hayvan sayısı dikkate alınarak bulaşması için gerekli ve her fare yaklaşık 107 koloni oluşturan birim (CFU) alması gereken 50 μl PBS belirler. Kateter ve şırınga esas ve inoculum belirlemek için gereken 100 µl ~ 130 µl ölü hacmi hesaplamaya dahil.
	<ol>
<li>17.000 x g 1 dk. için de bir masa üstü microcentrifuge bakteriyel süspansiyon spin ve 2 x 108 CFU PBS ml başına elde edilen bakteriyel Pelet resuspend. Seri olarak bir aliquot bu süspansiyon ve antibiyotik uygunsa her enfeksiyon için tam inoculum belirlemek LB agar tabağa oranında seyreltin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bakteriyel inoculum 1 ml şırınga çekmek ve kateter şırınga sonuna eklemek. Herhangi bir hava kaldırmak ve pistonu korumak başlamadan önce kateter içinde ölü hava alanı doldurmak için bunalıma girmek için şırınga dokunun.</li>
</ol>3. fareler hazırlanması
<ol><li>Fare ile mayi enjeksiyon 100 mg/kg ketamin ve 5 mg/kg xylazine anestezi. Ek ısı sağlanabilir.</li>
	<li>Orta basınç ile footpad sıkarak her fare tamamen sakin olun. Ne zaman onlar tepki ve bu durum ulaşmak için 3-5 dk gerektiren fare tamamen yatıştırıcı.</li>
	<li>Fareler sırtüstü yerleştirin ve idrar mesane boşaltmak için alt karın orta basınç uygulayın. Tam mesane ileac crests arasında cilt altındaki bir bezelye gibi hissediyorum. Not: İnhale isoflurane dişi fareler15,22catheterize için kullanılan, erkek farelerin yeterince bu yordam için inhale isoflurane tarafından anestezi olup olmadığını ancak, bunu test edilmemiştir.</li>
</ol>4. dişi farelerin transüretral korumak
<ol><li>Sigara dominant el kullanarak, kuyruk ve bir parmak fare karın üzerinde aynı el başparmak yer ve yön fare sıkıca tutmak için karşıt olarak hafif basınç uygula.</li>
	<li>
Kateter ucu fare dikey üretral orifis yerleştirin. Böylece çalışma yüzeyine paralel aynı anda şırınga düşürürken üretral orifis hub karşılayıncaya kadar hafif basınç ile kateter üretra kaydırın. Kateter yağlamaya gerektirir. İtmek veya kateter üretra zorlamak değil. Kateter sorunsuz ve kolay bir şekilde az direnç ile üretra kaydırın.
	<ol>
<li>İnoculum (Adım 4,3), bir kez daha önce instilling kateter, yavaşça fare ile sigara dominant üzerinden parmak başkanı doğru karın deri el çekme fare (Adım 4.1) karın bölgesinde zaten çok olduğu yerde. Kateter üretra, ise kateter vajina içinde hatalı yerleştirilmişse, doku yukarı ve kateter uzak hareket edecek, ancak üretra orifis birçok parçalardan oluşan doku, hareket etmez. Bu hızlı test her fare üzerinde yapılmalıdır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kateterin hub üretral orifis karşılar, yavaş yavaş bakteriyel inoculum 50 µl dağıtmak. Bir yavaş korumak oranı vesikoüretral reflü böbrek en aza indirir. Yavaş yavaş kaçağı, 5 sayısı önlemek için kateter kaldırın. Fareler onların kafes sırtüstü pozisyonda yerleştirin.</li>
</ol>5. erkek farelerin transüretral korumak
<ol><li>İki başparmak forseps fare dış genital için cranially ve caudally yerleştirin. Tam glans penis ortaya çıkarmak için sünnet derisi geri çek. Bir kez penis harici olarak konumlandırılmış, başparmak forseps serbest bırakın.</li>
	<li>Yavaşça ama tautly org tutan hayvan için dikey çıkıntılı penis dengelemeye forseps yeniden konumlandırın. Üretral verin görselleştirmek ve dikkatli bir şekilde organ ucundaki küçük açılış içine kateter tanıtmak. Yavaşça kateter penis nazik gerginlik Forseps ile sürdürmek fare, vücut doğru yol. Kateter yağlamaya gerektirir. Kateter penis zorla itmeyin; Kateter sorunsuz doğru yerleşim gösteren üretra, slayt.</li>
	<li>Kateterin hub penis ucuna karşılayan bir kez penis konumunu koruyarak çok yavaş inoculum 50 µl dağıtmak. Korumak kalitesini bu Şekil 2' de gösterildiği gibi bir önceden belirlenmiş korumak kalite puanı göre şu anda görülebilir.</li>
	<li>Kateter yavaş yavaş, 5 inoculum kaçağı önlemek için bir sayı üzerinde geri çek. Fareler onların kafes sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Hayvanlar 30-45 dk yönetim anestezi takip kurtarmak başlamalıdır.</li>
</ol>6. CFU virüslü organlarında tespiti
<ol><li>Önceden belirlenen zaman-noktalarda, kurban fare kullanarak standart işletim yordamlar (örneğin, servikal yerinden çıkması veya karbon dioksit aşırı doz) onayladı. Karın kirlenme kürk tarafından en aza indirmek için iyice % 70 etanol ile nemlendirin.</li>
	<li>En az 2 cm makas kullanırken fare karın alt üçüncü bir kesi yapın ve aseptik mesane ve diğer istenen organları da dahil olmak üzere ama bunlarla sınırlı olmamak üzere, böbrekler, testis, seminal veziküller veya Prepusyal bezleri, 5 ml kaldırın Polipropilen ek kap içeren 1 ml steril PBS tüpleri. Tüm örneklerini buz üzerinde tutun.</li>
	<li>Kadar neredeyse hiçbir sağlam doku kalır, yaklaşık 15-60 sn organ bağlı olarak organları ile el homogenizer homojenize. Yağ de homojenize değil ve parlak bej beyaz doku kolayca tanınabilir. Önce yağ veya aşağıdaki homojenizasyon atmak. PBS arasında ardından etanol homogenizer yıkayın her deneysel veya organ grup. Not: Genellikle, el homogenizers veya boncuk değirmen homogenizers kullanın. Tüm bu sistemler, 24 saat sonrası enfeksiyon, bakteriyel CFU doğrudan karşılaştırma tarafından belirlenen benzer sonuçlar vermiştir iken ana bilgisayar doku bakteriyel canlılığı koruyarak homojenize için en uygun koşulları ampirik olarak daha önce tespit edilmelidir Bu iletişim kuralı düzenli olarak gerçekleştiriliyor.</li>
	<li>Seri dilutions homojenize organ süspansiyonlar gerçekleştirin. Plaka dilutions LB Ağar Kaplamalar, uygun olduğunda, antibiyotik içeren tarih ve kuluçkaya geceleme (~ 15 saat) 37 ° C'de UPEC suşları çok hızlı katlama kez ve bu nedenle, bu yeteneği bireysel kolonileri saymak için engel olacak çünkü Ağar kaplamalar çok uzun kuluçkaya değil için özen gösterilmelidir.</li>
</ol>7. akış sitometrik analizinde mesane doku
<ol><li>Collagenase 34 adet/mL ve 100 µg/mL, PBS, Dnaz içeren sindirim arabellek hazırlayın. Buz üstünde tutun. Çözümlenmesi için hayvan başına bir 15 ml konik tüp ve boru başına aliquot 1 ml sindirim arabellek hazır olun.</li>
	<li>Önceden belirlenmiş timepoints kurban fare kullanarak standart işletim yordamlar (Örneğin, servikal yerinden çıkması veya karbon dioksit aşırı doz) onayladı. Karın kirlenme kürk tarafından en aza indirmek için iyice % 70 etanol ile nemlendirin.</li>
	<li>
En az 2 cm makas kullanırken fare karın alt üçüncü bir kesi yapın ve tüm mesane kaldırın. Makas mesane 2-3 mm2 boyutlu parçalar, tipik olarak yaklaşık 8 adet kesilmesi de kıyma.
	<ol>
<li>Bir kıyılmış mesane sindirim arabellek içeren tüp başına ekleyin. Kıyılmış mesane doku sindirim ara belleğe yıkamak için salla. Tüm bladders disseke ve kıyılmış kadar buz üzerinde tutun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>60-75 dk 37 ° C'de dinç el sallayarak için 5 ile kıyılmış sidiktorbası kuluçkaya s her 15dk. Doku ıslak kağıt mendil, benzeyen bir cam gibi saydam görünüme kavuştuğunda sindirim tamamlanır. Uzun süreli sindirim yüzey proteinleri tanımlama için gerekli hücrelerden kaldırır ve kaçınılmalıdır.</li>
	<li>Sindirim enzimleri buz gibi Akış Sitometresi arabellek (%2 fetal sığır serum (FBS) ve 0.2 mM EDTA içeren PBS) 2-3 mL ekleyerek devre dışı bırakın ve karışımı yavaşça. Tüpler Buza koyun.</li>
	<li>Bir tek hücre süspansiyon emin olmak için ve herhangi bir bağ dokusu kaldırmak için tüp içeriğini 15 mL konik tüpü içinde 100 µm filtre geçişi. Yavaşça kalan herhangi bir doku enjektör pompası sonu ile filtre aracılığıyla tuşuna basın. Filtre bir ek 2 mL Akış Sitometresi arabellek ile yıkayın. Örnekleri buz üzerinde tutun.</li>
	<li>Örnekleri tarafından 200 x g, 4 ° c de 7 dk aralıklarla yıkamak Granül 5 µg/mL ve bir 96-kuyu alt plaka yuvarlak aktarmak için seyreltilmiş 100 µL Akış Sitometresi arabellek içeren Fc bloğu, resuspend. 10-15 dakika sonra her örnek için 100 µL istenen antikor kokteyl ekleyin. Örnekleri için 30-45 ışıktan korunan min, buz üzerinde kuluçkaya. Not: Fc Fc reseptör ifade hücreleri antikor Fc bölümünü bağlama önlemek için kullanılan bir reaktif bloktur. Spesifik olmayan antikor bağlama en aza indirmek için hazırlanmıştır. Kullanmak için antikor tayini denemede test edilen hipotez üzerine bağlı olacaktır ve edebiyat adresinden giriş ile seçilmelidir. Şekil 3' te, genel olarak bağışıklık hücre infiltrasyonu ölçmek için bir anti-CD45 antikor, bir pan-bağışıklık hücre proteini olan istihdam edildi.</li>
	<li>Örnekleri tarafından 200 x g, 4 ° c de 7 dk aralıklarla yıkamak Hücre topakları 200 µL Akış Sitometresi arabellekte resuspend ve örnekleri 5 ml polistren tüp üzerinde bir Akış Sitometresi edinme önce 40 µm hücre süzgeç aracılığıyla geçmek.</li>
	<li>Tüm örnek Akış Sitometresi toplamak. İyi bir sindirim 8.000-10.000 CD45 ile 200.000-400.000 hücre verim+ bağışıklık hücreleri enfekte organları daha fazla içerir iken saf fare mesane, hücreleri16 (şekil 3). Not: akış sitometrik çözümlemesi için hazırlanan örnekleri CFU değerlendirmek için kullanılamaz. Bu mesane o UPEC kolonizasyon göstermek için hiçbir kanıt yok veya bağışıklık hücre infiltrasyon doku tek tip olarak iki parçaya bölmek için tavsiye edilmez.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Hooton, T. M., Stamm, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+treatment+of+uncomplicated+urinary+tract+infection.">Diagnosis and treatment of uncomplicated urinary tract infection.</a> Infect Dis Clin North Am. 11 (3), 551-581 (1997).</li><li>Harper, M., Fowlis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+urinary+tract+infections+in+men.">Management of urinary tract infections in men.</a> Trends in Urology, Gynaecology &amp; Sexual Health. 12 (1), 30-35 (2007).</li><li>Foxman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+of+urinary+tract+infection.">The epidemiology of urinary tract infection.</a> Nat Rev Urol. 7 (12), 653-660 (2010).</li><li>Lipsky, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+tract+infections+in+men.+Epidemiology,+pathophysiology,+diagnosis,+and+treatment.">Urinary tract infections in men. Epidemiology, pathophysiology, diagnosis, and treatment.</a> Ann Intern Med. 110 (2), 138-150 (1989).</li><li>Conway, L. J., Carter, E. J., Larson, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+Factors+for+Nosocomial+Bacteremia+Secondary+to+Urinary+Catheter-Associated+Bacteriuria:+A+Systematic+Review.">Risk Factors for Nosocomial Bacteremia Secondary to Urinary Catheter-Associated Bacteriuria: A Systematic Review.</a> Urol Nurs. 35 (4), 191-203 (2015).</li><li>Markle, J. G., Fish, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SeXX+matters+in+immunity.">SeXX matters in immunity.</a> Trends Immunol. 35 (3), 97-104 (2014).</li><li>Yu, C. Y., Whitacre, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex,+MHC+and+complement+C4+in+autoimmune+diseases.">Sex, MHC and complement C4 in autoimmune diseases.</a> Trends Immunol. 25 (12), 694-699 (2004).</li><li>Castelao, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender-+and+smoking-related+bladder+cancer+risk.">Gender- and smoking-related bladder cancer risk.</a> J Natl Cancer Inst. 93 (7), 538-545 (2001).</li><li>Donsky, H., Coyle, S., Scosyrev, E., Messing, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+incidence+and+mortality+of+bladder+and+kidney+cancers:+national+estimates+from+49+countries.">Sex differences in incidence and mortality of bladder and kidney cancers: national estimates from 49 countries.</a> Urol Oncol. 32 (1), 40-e31 (2014).</li><li>Garg, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+Disparities+in+Hematuria+Evaluation+and+Bladder+Cancer+Diagnosis:+A+Population-Based+Analysis.">Gender Disparities in Hematuria Evaluation and Bladder Cancer Diagnosis: A Population-Based Analysis.</a> J Urol. , (2014).</li><li>Dobruch, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+and+Bladder+Cancer:+A+Collaborative+Review+of+Etiology,+Biology,+and+Outcomes.">Gender and Bladder Cancer: A Collaborative Review of Etiology, Biology, and Outcomes.</a> Eur Urol. , (2015).</li><li>Hsu, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+tumorigenesis+and+mortality+from+bladder+cancer+in+mice+lacking+urothelial+androgen+receptor.">Decreased tumorigenesis and mortality from bladder cancer in mice lacking urothelial androgen receptor.</a> Am J Pathol. 182 (5), 1811-1820 (2013).</li><li>El Behi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+essential+role+for+decorin+in+bladder+cancer+invasiveness.">An essential role for decorin in bladder cancer invasiveness.</a> EMBO Mol Med. 5 (12), 1835-1851 (2013).</li><li>Foxman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+urinary+tract+infections:+incidence,+morbidity,+and+economic+costs.">Epidemiology of urinary tract infections: incidence, morbidity, and economic costs.</a> Am J Med. 113, 05S-13S (2002).</li><li>Ingersoll, M. A., Kline, K. A., Nielsen, H. V., Hultgren, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=G-CSF+induction+early+in+uropathogenic+Escherichia+coli+infection+of+the+urinary+tract+modulates+host+immunity.">G-CSF induction early in uropathogenic Escherichia coli infection of the urinary tract modulates host immunity.</a> Cell Microbiol. 10 (12), 2568-2578 (2008).</li><li>Mora-Bau, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+Subvert+Adaptive+Immunity+to+Urinary+Tract+Infection.">Macrophages Subvert Adaptive Immunity to Urinary Tract Infection.</a> PLoS Pathog. 11 (7), e1005044 (2015).</li><li>Oliveira, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+Report:+Technique+of+Bladder+Catheterization+in+Female+Mice+and+Rats+for+Intravesical+Instillation+in+Models+of+Bladder+Cancer.">Technical Report: Technique of Bladder Catheterization in Female Mice and Rats for Intravesical Instillation in Models of Bladder Cancer.</a> (Conference Title)39th Scand-LAS and ICLAS Joint Meeting. 36, 5-9 (2009).</li><li>Seager, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravesical+delivery+of+rapamycin+suppresses+tumorigenesis+in+a+mouse+model+of+progressive+bladder+cancer.">Intravesical delivery of rapamycin suppresses tumorigenesis in a mouse model of progressive bladder cancer.</a> Cancer Prev Res (Phila). 2 (12), 1008-1014 (2009).</li><li>Hagberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ascending,+unobstructed+urinary+tract+infection+in+mice+caused+by+pyelonephritogenic+Escherichia+coli+of+human+origin).">Ascending, unobstructed urinary tract infection in mice caused by pyelonephritogenic Escherichia coli of human origin).</a> Infect Immun. 40 (1), 273-283 (1983).</li><li>Olson, P. D., Hruska, K. A., Hunstad, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgens+Enhance+Male+Urinary+Tract+Infection+Severity+in+a+New+Model.">Androgens Enhance Male Urinary Tract Infection Severity in a New Model.</a> J Am Soc Nephrol. , (2015).</li><li>Knipper, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-4+Receptor+alpha+Signaling+in+Myeloid+Cells+Controls+Collagen+Fibril+Assembly+in+Skin+Repair.">Interleukin-4 Receptor alpha Signaling in Myeloid Cells Controls Collagen Fibril Assembly in Skin Repair.</a> Immunity. 43 (4), 803-816 (2015).</li><li>Hung, C. S., Dodson, K. W., Hultgren, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+urinary+tract+infection.">A murine model of urinary tract infection.</a> Nat Protoc. 4 (8), 1230-1243 (2009).</li><li>Wright, K. J., Seed, P. C., Hultgren, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+intracellular+bacterial+communities+of+uropathogenic+Escherichia+coli+depends+on+type+1+pili.">Development of intracellular bacterial communities of uropathogenic Escherichia coli depends on type 1 pili.</a> Cell Microbiol. 9 (9), 2230-2241 (2007).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Erkek farelerin transüretral korumak seks etkisi mesane Mukozal hastalık içine birçok yeni araştırma fırsat sunuyor, ama aynı zamanda çeşitli sorunlar sunar. En önemlisi, bir kısıtlamadır korumak başlangıçta aşırı iltihap kateter ekleme sırasında ortaya çıkan teknik olarak zor olduğunu kanıtlayabilir. Teknik iyileştirme Evans mavi boya gibi renkli bir çözüm ile ölü fareler korumak elde edilebilir. Korumak başarılı olduğunu doğrulamak için mesane görsel olarak kontrol edilmelidir ve ...

İdrar yolu enfeksiyonu (iye) gelişmiş ülkelerde1en sık görülen enfeksiyonlar biridir. Enfeksiyon oranları kadın ve erkekler arasında ventilasyon ve yaşlı2arasında benzer. Premenopozal yetişkin kadın, ancak, topluluk edinilen iye erkekler2,3' e göre büyük ölçüde artan insidansı olması. Bu hastalık öncelikle kadın etkileri göz önüne alındığında bu, temel ve klinik araştırma ezici bir çoğunlukla dişi içinde iye üzerinde odaklanmıştır. Ancak, iye erkeklerde ve çöküşünde önemli sağlık meydan4' tür. Nitekim, iye erkeklerde daha yüksek morbidite ile ilişkili olduğundan, bu enfeksiyonların rutin olarak karmaşık4,5olarak tanımlanır.
Seks önyargıları fizyolojisi ve patoloji merkezi rol anlayışımızı geliştikçe, yeni yöntemleri hastalığın daha önce ihmal edilen bu yönünü keşfetmek için gereklidir. Cinsiyet farklılıkları dokunulmazlık ve enfeksiyon önemli bir rol oynamak; Erkekler bazı enfeksiyonlar, tüberküloz, sıtma ve HIV6,7gibi daha duyarlı iken kadın otoimmün hastalığı, yüksek insidansı olması. Mesane kanseri, başka bir patoloji dahi, önemli ölçüde daha kadınlarda erkeklerde yaygındır ve çeşitli çalışmalar malignite8,9,10,11 gelişiminde bir rol androjenler için göstermiştir ,12. Özellikle, ancak, soruşturma için mesane kanseri intravezikal tedavilerin sadece art arda erkek fareler13catheterize yetersizlik nedeniyle kadın hayvanlarda gerçekleştirilir.
İYE Patogenez çalışmanın ağır enfeksiyon (örneğin, fare ve sıçanlar) kemirgen modellerde dayanmaktadır. İYE fare modelleri istihdam uropathogens aslında izole--dan uropathogenic E. coli (UPEC) gibi insan hastalık Klebsiella, enterokok, Staphylococcusveya Proteus14. Genellikle, bakteri mesane yolu ile Kateterizasyon, üretra tanıtıldı. Enfeksiyon, mesane ve böbrek enfeksiyonu bakteriyel kolonizasyon, doku hasarı veya konak immün yanıt15,16gibi belirli parametreleri değerlendirmek için kaldırılabilir. Evrensel olarak, ancak, sadece kadın hayvan iye araştırma için kullanılır. Gerçekten de, birçok çalışma anatomik nedenlerden dolayı erkek farelerin Kateterizasyon değil mümkün13,17,18,19olduğunu, gözlemlemekteyiz. Daha yakın zamanlarda, erkek korumak için bir cerrahi yaklaşım tarif edilmiştir, hangi karın açıldığında, mesane dışarıdan karın açılması için hafif basınç uygulayarak yerlerinden olduğunu ve bakteri mesane20enjekte edilir. Bu yaklaşım erkek enfeksiyon, cerrahi müdahale pahasına sağlar. Böylece, bu yaklaşımın önemli bir ihtar iltihap, enfeksiyon gibi bir anti-inflamatuar yara iyileşmesi yanıt kesi21ikna etmek için potansiyel sonucu üzerinde etkisi içerir. Seks önyargı yanıt hastalığı olarak anlamak bizim ilgi alanları arasında bulunmaktadır, biz daha fazla kadın kemirgen22 kullanılan köklü ameliyatsız transüretral yaklaşımı eşlenen bakteriyel İntravezikal korumak erkek farelerde bir yöntem geliştirdi .
Bizim modeli kurulan bir metodoloji oluşturur ve doğrudan iye ana bilgisayar bağışıklık yanıtı kadın ve erkek hayvanlarda karşılaştırmak için yeteneği sağlar. Bu yöntem seks tabanlı farklılıklar enfeksiyon diseksiyon izin ve duyarlılık telaffuz farklılıkları moleküler ve hücresel ipuçları ve yanıt enfeksiyon cinsiyetler arasında potansiyel olarak sunuyoruz. Ayrıca, bu model iye çalışmaları, mesane kanseri, prostatit, altında - veya aşırı - aktif mesane sendromu ve interstisyel sistit gibi mesane ilişkili diğer hastalıkları araştırmak için modeller kurulması izin öteye değer vardır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="808">
	<tbody>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:283px;">BD Insyte Autoguard Shielded IV Catheters 24G, 0.7 mm external diameter, 14 mM long</td>
			<td style="width:131px;">BD Medical</td>
			<td style="width:135px;">381811 or 381411*</td>
			<td style="width:260px;">* catalog number is country-dependent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">inoculating loop</td>
			<td style="width:131px;">Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:135px;">731171</td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">LB Miller broth</td>
			<td style="width:131px;">Difco</td>
			<td style="width:135px;">244620</td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">LB Miller agar</td>
			<td style="width:131px;">Difco</td>
			<td style="width:135px;">244520</td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Cuvettes</td>
			<td style="width:131px;">Bio-rad</td>
			<td style="width:135px;">223-9955</td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">syringes</td>
			<td style="width:131px;">B Braun</td>
			<td style="width:135px;">9166017V</td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Thumb (Adson) forceps</td>
			<td style="width:131px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:135px;">11006-12</td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">5 mL tubes, polypropylene</td>
			<td style="width:131px;">Falcon</td>
			<td style="width:135px;">352063</td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Tissue Ruptor disposable probes</td>
			<td style="width:131px;">Qiagen</td>
			<td style="width:135px;">990890</td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">15 mL flip cap tubes</td>
			<td style="width:131px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:135px;">362694</td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">DNAse</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:135px;">18047019</td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">Liberase TM</td>
			<td style="width:131px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">5401119001</td>
			<td style="width:260px;">should be aliquotted and stored at -20 &#176;C to avoid repeated freeze-thaw</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">100 &#181;M MACS SmartStrainers&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:135px;">130-098-463</td>
			<td style="width:260px;">compatible with 15 mL tubes, preferred</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">100 &#181;m cell strainers&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Falcon</td>
			<td style="width:135px;">352360</td>
			<td style="width:260px;">compatible with 50 mL tubes, if MACS Smart Strainers are not available</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">96 well plate</td>
			<td style="width:131px;">Falcon</td>
			<td style="width:135px;">353077</td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Fc block</td>
			<td style="width:131px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:135px;">553142</td>
			<td style="width:260px;">anti-CD16/CD32</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:283px;">anti-mouse CD45 antibody</td>
			<td style="width:131px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:135px;">561487</td>
			<td style="width:260px;">many different fluorescent conjugation options are available</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">5 mL tubes polystyrene with filter cap</td>
			<td style="width:131px;">Falcon</td>
			<td style="width:135px;">352235</td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">insulin syringe</td>
			<td style="width:131px;">Terumo</td>
			<td style="width:135px;">BS05M2913</td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">hand held homogenizer</td>
			<td style="width:131px;">Qiagen</td>
			<td style="width:135px;">9001272</td>
			<td style="width:260px;">TissueRuptor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">flow cytometer</td>
			<td style="width:131px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:135px;">N/A</td>
			<td style="width:260px;">Fortessa SORP&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:283px;">Flow cytometry software</td>
			<td style="width:131px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:135px;">N/A</td>
			<td style="width:260px;">Diva</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

urinary tract infection in a small animal model: transurethral catheterization of male and female mice

İdrar yolu enfeksiyonu (iye) dünya çapında, son derece önemli morbidite ve sağlık ilişkili giderleri üstlenmeden yaygındır. Doğru bir şekilde hastalık kuruluş ve ilerleme yansıtmak, küçük hayvan modelleri ev sahibi-patojen etkileşimleri diseksiyon ve enfeksiyon bağışıklık nesil izni. Farelerde, uropathogenic E. coli, topluluk % 85'den fazla sorumlu ajan İntravezikal korumak iye satın, insanlarda gözlenen enfeksiyon aşamalarında birçoğu beyannamedir. Yakın zamana kadar ancak, iye sadece dişi hayvanlarda örnek alınarak. Bu sınırlama seks ilgili farklar iye yanı sıra kanser gibi diğer mesane patolojiler çalışmanın engel. Burada, kadın ve erkek hayvanlar arasında doğrudan karşılaştırma sağlar erkek fareler aşılamak ve mesane doku enfeksiyonu için ana bilgisayar yanıt-e doğru daha iyi anlamak için bir araç olarak Akış Sitometresi tarafından değerlendirmek için detaylı bir protokol sağlar için bir yöntem açıklanmaktadır. Birlikte, bu yaklaşımların iye ve mesane ilişkili diğer hastalıklarda gözlenen seks önyargıları katkıda ana etkenleri tanımlama yardımcı olacak.

Bu iletişim kuralı gelişiminde, tabur kadın ve erkek C57Bl/6 farelerin aşılanan ve bakteri yükü 1 saat için 30 gün arasında değişen zaman noktalarda mesane içinde değerlendirilen edildi 6 ila 8 hafta yaşlı. Bu çalışmaların sonuçlarını başka bir yerde ayrıntılı olarak açıklanmıştır (Zychlinsky Scharff vd., bekleyen). Burada, temsilcisi veri--dan 24 saat hastalık mevcut. Özellikle, bakteriyel yük eşdeğer 24 saat sonrası enfeksiyon (şe...

Watch this Scientific Journal Video about Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice at JoVE.com

Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice

Farelerin transüretral Kateterizasyon kurulan modeli mesane patolojiler, idrar yolu enfeksiyonu, dahil olmak üzere çalışma sağlar ancak yalnızca dişi içinde gerçekleştirilebilir. Burada anlatılan erkek transüretral korumak yeni bir model araştırma cinsiyetler arasında güçlü klinik ve epidemiyolojik farklarına iaretlenmi bir alanı sağlayacaktır.

İdrar yolu enfeksiyonu küçük bir hayvan modeli: erkek ve dişi farelerin transüretral Kateterizasyon

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, ...

urinary-tract-infection-small-animal-model-transurethral

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

16.4K Görüntüleme.  Institut Pasteur, INSERM U818. Farelerin transüretral Kateterizasyon kurulan modeli mesane patolojiler, idrar yolu enfeksiyonu, dahil olmak üzere çalışma sağlar ancak yalnızca dişi içinde gerçekleştirilebilir. Burada anlatılan erkek transüretral korumak yeni bir model araştırma cinsiyetler arasında güçlü klinik ve epidemiyolojik farklarına iaretlenmi bir alanı sağlayacaktır.

Video: Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on Luria-Bertani (LB) agar at 37&deg;C in ambient air. UPEC strains grow as yellowish-white translucent colonies on LB agar. Following confirmation of appropriate colony morphology, single colonies are then picked to be cultured in broth. LB broth can be used for most uropathogenic bacterial strains. Two serial, overnight LB broth cultures can be employed to enhance expression of type I pili, a well-defined virulence factor for uropathogenic bacteria. Broth cultures are diluted to the desired concentration in phosphate buffered saline (PBS). Eight to 12 week old female mice are placed under isoflurane anesthesia and transurethrally inoculated with bacteria using polyethylene tubing-covered 30 gauge syringes. Typical inocula, which must be empirically determined for each bacterial/mouse strain combination, are 106 to 108 cfu per mouse in 10 to 50 microliters of PBS. After the desired infection period (one day to several weeks), urine samples and the bladder and both kidneys are harvested. Each organ is minced, placed in PBS, and homogenized in a Blue Bullet homogenizer. Urine and tissue homogenates are serially diluted in PBS and cultured on appropriate agar. The following day, colony forming units are counted.

This video will demonstrate methods to transurethrally induce mouse urinary tract infections and quantify the extent of resulting infections.

Transüretral İndüksiyon Fare İdrar Yolu Enfeksiyonu

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

Internal and external parasites remain a significant concern in laboratory rodent facilities, and many research facilities harbor some parasitized animals. Before embarking on an examination of animals for parasites, two things should be considered. One: what use will be made of the information collected, and two: which test is the most appropriate. Knowing that animals are parasitized may be something that the facility accepts, but there is often a need to treat animals and then to determine the efficacy of treatment. Parasites may be detected in animals through various techniques, including samples taken from live or euthanized animals. Historically, the tests with the greatest diagnostic sensitivity required euthanasia of the animal, although PCR has allowed high-sensitivity testing for several types of parasite. This article demonstrates procedures for the detection of endo- and ectoparasites in mice and rats. The same procedures are applicable to other rodents, although the species of parasites found will differ.

This article describes various procedures for screening rats and mice to detect endo- or ectoparasitism. Several diagnostic assays will be demonstrated, both those suitable for use on live animals and those used after euthanasia of the animal. Photographs to aid in identification of rat and mouse parasites will be included.

Tanı Laboratuvarı Sıçanlar ve Fareler Ecto-Endoparasites

Internal and external parasites remain a significant concern in laboratory rodent facilities, and many research facilities harbor some parasitized ...

Measurement of &#947;HV68 Infection in Mice

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human &gamma;-HVs, such as EBV and KSHV, has severely hindered detailed pathogenic studies. Murine &gamma;-herpesvirus 68 (&gamma;HV68) shares extensive genetic and biological similarities with human &gamma;-HVs and is a natural pathogen of murid rodents2. As such, evaluation of &gamma;HV68 infection of mice inbred strains at different stages of viral infection provides an important model for understanding viral lifecycle and pathogenesis during &gamma;-HVs infection.
Upon intranasal inoculation, &gamma;HV68 infection results in acute viremia in the lung that is later resolved into a latent infection of splenocytes and other cells, which may be reactivated throughout the life of the host3,4. In this protocol, we will describe how to use the plaque assay to assess infectious virus titer in the lung homogenates on Vero cell monolayers at the early stage (5 - 7 days) of post-intranasal infection (dpi). While acute infection is largely cleared 2 - 3 weeks postinfection, a latent infection of &gamma;HV68 is established around 14 dpi and maintained later on in the spleen of the mice. Latent infection usually affects a very small population of cells in the infected tissues, whereby the virus stays dormant and shuts off most of its gene expression. Latently-infected splenocytes spontaneously reactivate virus upon explanting into tissue culture, which can be recapitulated by an infectious center (IC) assay to determine the viral latent load. To further estimate the amount of viral genome copies in the acutely and/or latently infected tissues, quantitative real-time PCR (qPCR) is used for its maximal sensitivity and accuracy. The combined analyses of the results of qPCR and plaque assay, and/or IC assay will reveal the spatiotemporal profiles of viral replication and infectivity in vivo.

&#947;-Herpesviruses (&#947;-HVs) establish life-long persistency in their host. Infection of mice with &#947;-HV68 provides a genetically tractable in vivo model for the characterization of the lifecycle/pathogenesis of &#947;HVs. This protocol describes the detection and quantitation of &#947;HV68 infection at acute and latent stages following infection by plaque-forming, infectious center, and qPCR assays.

Farelerde γHV68 Enfeksiyon ölçümü

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

Isolation of Lymphocytes from Mouse Genital Tract Mucosa

Mucosal surfaces, including in the gastrointestinal, urogenital, and respiratory tracts, provide portals of entry for pathogens, such as viruses and bacteria 1. Mucosae are also inductive sites in the host to generate immunity against pathogens, such as the Peyers patches in the intestinal tract and the nasal-associated lymphoreticular tissue in the respiratory tract. This unique feature brings mucosal immunity as a crucial player of the host defense system. Many studies have been focused on gastrointestinal and respiratory mucosal sites. However, there has been little investigation of reproductive mucosal sites. The genital tract mucosa is the primary infection site for sexually transmitted diseases (STD), including bacterial and viral infections. STDs are one of the most critical health challenges facing the world today. Centers for Disease Control and Prevention estimates that there are 19 million new infectious every year in the United States. STDs cost the U.S. health care system $17 billion every year 2, and cost individuals even more in immediate and life-long health consequences. In order to confront this challenge, a greater understanding of reproductive mucosal immunity is needed and isolating lymphocytes is an essential component of these studies. Here, we present a method to reproducibly isolate lymphocytes from murine female genital tracts for immunological studies that can be modified for adaption to other species. The method described below is based on one mouse.&#x2003;

An efficient way to isolate lymphocytes from mouse genital tract is described. This method takes advantage of enzyme digestion and Percoll gradient separation to allow efficient isolation. This technique is also adaptable to for use in other species

Fare Genital Sistemlerinin Mukozanin gelen Lenfosit İzolasyonu

Mucosal surfaces, including in the gastrointestinal, urogenital, and respiratory tracts, provide portals of entry for pathogens, such as viruses and ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

This protocol outlines the steps required to longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging tomography with integrated &mu;CT (DLIT-&mu;CT) and the subsequent use of this data to generate a four dimensional (4D) movie of the infection cycle. To develop the 4D infection movies and to validate the DLIT-&mu;CT imaging for bacterial infection studies using an IVIS Spectrum CT, we used infection with bioluminescent C. rodentium, which causes self-limiting colitis in mice. In this protocol, we outline the infection of mice with bioluminescent C. rodentium and non-invasive monitoring of colonization by daily DLIT-&mu;CT imaging and bacterial enumeration from feces for 8 days.
The use of the IVIS Spectrum CT facilitates seamless co-registration of optical and &mu;CT scans using a single imaging platform. The low dose &mu;CT modality enables the imaging of mice at multiple time points during infection, providing detailed anatomical localization of bioluminescent bacterial foci in 3D without causing artifacts from the cumulative radiation. Importantly, the 4D movies of infected mice provide a powerful analytical tool to monitor bacterial colonization dynamics in vivo.

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

Multi-modality imaging is a valuable approach for studying bacterial colonization in small animal models. This protocol outlines infection of mice with bioluminescent Citrobacter rodentium and the longitudinal monitoring of bacterial colonization using composite 3D diffuse light imaging tomography with &mu;CT imaging to create a 4D movie of C. rodentium infection.

4D modelli Görüntüleme<em&gt; Citrobacter rodentium</emFarelerde&gt; Enfeksiyonlar

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into the urinary bladder to either induce animal models of bladder pathologies or evaluate the effectiveness of intravesical treatments. Most rodent models of lower urinary tract (LUT) pathologies are induced in female mice due to ease of intravesical instillation of the substances via the female urethra. However, due to anatomical differences between the female and male LUT, transurethral instillation in a male mouse has been deemed a very challenging procedure, and it has not been previously described. In this manuscript, we provide a detailed description of how to prepare polyethylene (PE) tubing for subsequent insertion into the urethra of a male mouse. In addition, we discuss the ideal types of PE tubing to be used depending on the desired site of inoculation. Furthermore, we describe point by point how to prepare an animal for a successful transurethral instillation to avoid injury to the urethra and ensure the delivery of the solution to the desired location. The procedure is started by retracting the prepuce and the glans to expose the opening of the urethral meatus. Next, the glans are grasped by blunt non-crushing forceps to stabilize the penis and the PE tubing. The PE tubing is first inserted into the urethral meatus parallel to the animal body, then its angle is adjusted by tilting the catheter to maneuver it to follow the natural curvature of the urethra. This technique can be used to induced murine models of bladder pathologies and/or evaluate the effectiveness of intravesical treatments in male mice.

Transurethral instillation is a challenging procedure and has not been well described in the literature. The aim of this manuscript is to describe a technique for transurethral insertion of a catheter for intravesical delivery of liquids with active substances into the urinary bladder and/or prostate in adult male mice.

Yetişkin erkek fare yordamda transüretral korumak

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into ...

Isolation of Dendritic Cells from the Human Female Reproductive Tract for Phenotypical and Functional Studies

The characterization of the human dendritic cells (DCs) resident in mucosal tissues is challenging due to the difficulty in obtaining samples, and the low numbers of DCs present per tissue. Yet, as the phenotype and function of DCs is modified by the tissue environment, it is necessary to analyze tissue resident DC populations, since blood derived DCs incompletely reflect the complexities of DCs in tissues. Here we present a protocol to isolate DCs from the human female reproductive tract (FRT) using hysterectomy specimens that allows both phenotypical and functional analyses. The protocol consists of tissue digestion to generate a single cell mixed cell suspension, followed by positive magnetic bead selection. Our tissue digestion protocol does not cleave surface markers, which allows phenotypical and functional analysis of DCs in the steady state, without overnight incubation or cell activation. This protocol can be adapted for the isolation of other immune cell types or isolation of DCs from other tissues.

We describe here a method to isolate and purify dendritic cells from different anatomical compartments in the human female reproductive tract for the evaluation of their phenotypical and functional characteristics. This method can be adapted to isolate other immune cells or dendritic cells from other mucosal tissues.

İnsan dişi üreme yolu dendritik hücreler yalıtım Phenotypical ve fonksiyonel çalışmaları için

The characterization of the human dendritic cells (DCs) resident in mucosal tissues is challenging due to the difficulty in obtaining samples, and the low ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major manifestation of S. suis infections. A suitable infection model is an essential tool to understand the mechanisms of diseases caused by pathogens. Several routes of infection in mice have been developed to study the pathogenesis of S. suis infection. However, the intraperitoneal, intranasal, and intravenous routes of infection are not suitable for studying the roles of S. suis surface components in meningitis directly in the brain, such as the extracellular matrix from biofilms. Although intracisternal inoculation has been used for S. suis infection, the precise injection site has not been described. Here, the intracranial subarachnoidal route of infection was described in a mouse model to investigate the roles of biofilms in S. suis meningitis. S. suis planktonic cells or biofilm state cells were directly injected into the subarachnoid space of mice through the injection site located 3.5 mm rostral from the bregma. Histopathological analysis and increased mRNA expression of TLR2 and cytokines of the brain tissue from mice injected with biofilm state cells clearly indicated that S. suis biofilm plays definitive roles in S. suis meningitis. This route of infection has obvious advantages over other routes of infection, allowing the study of the host-bacterium interaction. Furthermore, it permits the effect of bacterial components on host immune responses directly in the brain to be assessed, and mimics bacterial entrance into the central nervous system. This route of infection can be extended for investigating the mechanisms of meningitis caused by other bacteria. In addition, it can also be used to test the efficacy of drugs against bacterial meningitis.

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Here, we describe the intracranial subarachnoidal route of infection in mice to study roles of biofilms in Streptococcus suis meningitis. This infection model is also suitable for studying the pathogenesis of other bacterial meningitis and the efficacy of new drugs against bacterial meningitis.

Kafa içi Subarachnoidal rota için soruşturma rolleri streptokok suis biyofilmler menenjit bir fare enfeksiyon modeli içinde enfeksiyon

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

Isolation of Single Intracellular Bacterial Communities Generated from a Murine Model of Urinary Tract Infection for Downstream Single-cell Analysis

In this article, we outline a procedure used to isolate individual intracellular bacterial communities from a mouse that has been experimentally infected in the urinary tract. The protocol can be broadly divided into three sections: the infection, bladder epithelial cell harvesting, and mouth micropipetting to isolate individual infected epithelial cells. The isolated epithelial cell contains viable bacterial cells and is nearly free of contaminating extracellular bacteria, making it ideal for downstream single-cell analysis. The time taken from the start of infection to obtaining a single intracellular bacterial community is about 8 h. This protocol is inexpensive to deploy and uses widely available materials, and we anticipate that it can also be utilized in other infection models to isolate single infected cells from cell mixtures even if those infected cells are rare. However, due to a potential risk in mouth micropipetting, this procedure is not recommended for highly infectious agents.

This protocol describes a simple method of isolating single, infected-bladder epithelial cells from a murine model of urinary tract infection.

İdrar yolu enfeksiyonu aşağı akım tek hücreli analiz için bir fare modelinden oluşturulan tek hücre içi bakteriyel toplulukların yalıtım

In this article, we outline a procedure used to isolate individual intracellular bacterial communities from a mouse that has been experimentally infected ...

A Non-Coding Small RNA MicC Contributes to Virulence in Outer Membrane Proteins in Salmonella Enteritidis

A non-coding small RNA (sRNA) is a new factor to regulate gene expression at the post-transcriptional level. A kind of sRNA MicC, known in Escherichia coli and Salmonella Typhimurium, could repress the expression of outer membrane proteins. To further investigate the regulation function of micC in Salmonella Enteritidis, we cloned the micC gene in the Salmonella Enteritidis strain 50336, and then constructed the mutant 50336&#916;micC by the &#955; Red-based recombination system and the complemented mutant 50336&#916;micC/pmicC carrying recombinant plasmid pBR322 expressing micC. qRT-PCR results demonstrated that transcription of ompD in 50336&#916;micC was 1.3-fold higher than that in the wild type strain, while the transcription of ompA and ompC in 50336&#916;micC were 2.2-fold and 3-fold higher than those in the wild type strain. These indicated that micC represses the expression of ompA and ompC. In the following study, the pathogenicity of 50336&#916;micC was detected by both infecting 6-week-old Balb/c mice and 1-day-old chickens. The result showed that the LD50 of the wild type strain 50336, the mutants 50336&#916;micC and 50336&#916;micC/pmicC for 6-week-old Balb/c mice were 12.59 CFU, 5.01 CFU, and 19.95 CFU, respectively. The LD50 of the strains for 1-day-old chickens were 1.13 x 109 CFU, 1.55 x 108 CFU, and 2.54 x 108 CFU, respectively. It indicated that deletion of micC enhanced virulence of S. Enteritidis in mice and chickens by regulating expression of outer membrane proteins.

A Non-Coding Small RNA MicC Contributes to Virulence in Outer Membrane Proteins in Salmonella Enteritidis

An &#955;-Red-mediated recombination system was used to create a deletion mutant of a small non-coding RNA micC.

Kodlamayan küçük RNA MicC, salmonella enteritidisteki dış zar proteinlerinde virülansa katkıda bulunur

A non-coding small RNA (sRNA) is a new factor to regulate gene expression at the post-transcriptional level. A kind of sRNA MicC, known in Escherichia ...