Name: transurethral instillation procedure in adult male mouse
Uploaded: 2017-11-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 1 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse at JoVE.com

Yazarlar herhangi bir teşekkür var mı.

hayvanlarla yöntemi ve süresi anestezi, ameliyat sonrası bakım, hem de dahil olmak üzere tüm yordamları bir veteriner ile tartışıldı ve kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC), bağlı kurum. Bu makale, 8-15-hafta-yaşlı C57BL/6 erkek fare ile tüm yordamları gerçekleştirilen ve protokol IACUC Colorado Üniversitesi tarafından onaylanmış hayvan bakımı kuralları izler.
 1. boru hazırlık Not: inoculum aşılamak için iğne ekli polietilen (PE) tüp ( şekil 1A) veya küçük bir ölçüm (&#60; 24 G) angiocatheter-ebilmek var olmak kullanılmış () şekil 1G). Bir angiocatheter kullanımı % 70 etanol (alkol) ile sterilizasyon dışında hiçbir hazırlık gerektirir. İnoculum telkin/enjekte/idrar yolu yatırılır bir maddedir. Bu bakteri, virüs veya bir kimyasal içeren bir çözüm olabilir. Bu önceden başı araştırma protokolü hazırlanır. E. coli enfeksiyonu alt idrar yolu üzerindeki etkilerini değerlendirmek için çalışma amacı varsa, örneğin, araştırmacı aşı/telkin alt idrar yolu olabilir bakteri içeren inoculum hazırlamanız gerekir.
<ol><li>PE boru için bağlı iğne hazırlanması basittir ve aşağıdaki görevlerden oluşur: hedef organ ve bir hayvanın yaşına göre PE boru boyutunu seçin. 12 haftadan daha küçük bir hayvan için PE-10 boru kullanın (dış çap 0,024 inç ve çapı 0.011 inç). PE-10 boru inoculum anterior prostat (AP) ve seminal veziküller (SV) (1 birincil tohum veya inoculum bir hayvan 12 hafta-in yaş genç mesane içinde (2 birincil tohum için geçerli olması için önerilmektedir. PE boru PE 50 (dış çapı en fazla 0,038 inç ve iç çapı kadar 0.023 inç)-ebilmek var olmak kullanılmış birincil inoculum büyük hayvanların mesane içinde tohum için boyutu maksimum daha büyük çaplı.</li>
	<li>Yaklaşık 2.5 inç PE boru kesti.</li>
	<li>Kullanılmak üzere seçilen PE çapı uygun olacağı bir iğne seçin. 27 G iğne PE-10 boru Lümen sığabilecek ve PE-50 boru Lümen 22 G iğne uyuyor.
	<ol><li>Hazırla iğne iğne keskin kenar bir piyasada bulunan petrol taş üzerinde sürtünme tarafından PE boru içine ekleme önce ( şekil 1A -B) mat yapmak veya piyasada bulunan künt kullanmak için iğne.</li>
	</ol></li> <li>Sıkıcı iğne ( şekil 1 c) PE boru Lümen tanıtmak. Hasar vermemek için kartı Lümen veya giriş yanlış Lümen içine iğne kalır Lümen ortasına sağlayarak. ( şekil 1 d -E). PE boru sıkıcı iğne ekleme sırasında hasar görmüşse, hasarlı sonunda kesti ve işlemi yeniden başlatmanız.</li>
	<li>% 70'i alkol kullanımı için yordamı kadar sterilizasyon için iğne bağlı PE boru yerleştirin. % 70 alkol Lümen sterilize etmek için ve orada emin olmak için iğne-PE boru aracılığıyla PE boru üzerinden gelen hiçbir sızıntı olduğunu iğne ekleme işlemi sırasında zarar floş. Sızıntı olursa iğne-PE boru göz ardı. 
	Not: PE boru ucu önce kateterizasyon pürüzsüz olması gerekir. PE boru üretra içine tanıtımı ile sorunları önlemek için hemen önce kateterizasyon ( şekil 1F) PE boru ucu kesmek için önerilir. Önerilen minimum PE boru 1,5 inç, hangi iğne çevreleyen bölümü içeren uzunluğudur.</li>
</ol> 2. Kateterizasyon yordam <ol><li>anestezi indüksiyon önce fare mesane boş.
	<ol><li>Hafif basınç uygulayın ve fare alt karın için masaj. Bu manevralar genellikle kendiliğinden geçersiz kılma için yol. Tam bir mesane seyreltme veya hemen sızıntı aşılanan herhangi bir inoculum neden olabilir. 
		Not: bir fare bir boş mesane emin olmak için ek bir seçenek transüretral korumak yordamı başlamadan en az 1 saat su hayvan mahrum etmektir. Su yoksunluğu hayvan protokolün bir parçası olarak kurum tarafından onaylanması.</li>
	</ol></li> <li>Anestezi ikna etmek için isoflurane akışı (% 2) ile bir anestezi makinesi kullanın.
	<ol><li>Sonra hayvan anestezi, ılık ısıtma battaniye var yerleştirin ve onun burnu sürekli anestezi bakımı için bir nosecone içinde olan mavi bir yastık ile örtmek.</li>
		<li>Pedal refleks (ayak tutam) kontrol ederek hayvan anestezi altında olduğundan emin olun.</li>
	</ol></li> <li>Bir kez pedal refleks yoktur, sünnet derisi geri çeker tarafından devam.
	<ol><li>Basın bir elin işaret parmağı ve başparmak ile kasık bölgesi ( şekil 2A ve 2B) ve diğer el (işaret parmağı ve başparmak kullanarak bezleri penis çekin şekil 2C). Bu doğru bir şekilde gerçekleştirilir alırsa, sünnet derisi, glans penis ve penis vücut maruz kalır. ( şekil 2B ve şekil 2F). Forseps bu için doku hasarına yol açar gibi bezleri penisin çekmeye kullanmayın.</li>
	</ol></li> <li>Uç kateter ve glans kateter yerleştirilmesi önce steril cerrahi yağ ile yağlayın. Bu PE boru ekleme kolaylaştıracaktır. 
	Not: Ayrı ayrı paketlenmiş kareler yerine bir büyük tüp, cerrahi kayganlaßtırıcı steril koşullar korumak her kullanım için önerilir.</li>
	<li>Donuk forseps kullanarak penis ucuna kadar yavaşça tutun ve hafifçe sıkmak açmak üretral verin neden glans.</li>
	<li>İğne bağlı PE-tüp veya kendisi boru PE şırınga tutun ve üretral verin aracılığıyla PE boru takın. 
	Not: İğne bağlı PE-tüp veya kendisi başparmak, dizin ve orta parmak kullanarak boru PE şırınga bir tripod kavrama istikrar için önerilir. 
	Not: Kateterizasyon yolunu glans penis ve penis vücut yetişkin erkek fare şekil 3A ve şekil 3B gösterildiği gibi çevrili üretra doğal eğim nedeniyle kavisli. Catheterized PE boru direnci Kateterizasyon sırasında uygun olmayabilir, bu nedenle, bu açı boru yukarı veya aşağı doğru yardım peşin eğerek PE boru hedef organ daha ayarlamak için tavsiye edilir. Gerekirse, PE boru biraz üretra çeşitli keskin turnike manevra yardımcı olması için döndürülebilir. Çok fazla direniş olduğunda tüp geri çekilmiş olmalıdır ve yine en az basınçla ilerlemek. PE boru çekerek tamamen dışarı ve daha fazla yağlama kullanarak yararlı olabilir.</li>
	<li>PE boru (5-200 µL birim önerilen) inoculum istenen hacmi aşılamak için iğne pistonu iterek istediğiniz organ ulaştı sonra inoculum korumak gerçekleştirmek.
	<ol><li>İnoculum korumak idrar kesesi içine ilerlemek için PE boru PE boru yaklaşık 0,75 inç kadar eklenir ( şekil 3A). 
		Not: AP ve SV, genellikle, inci inoculum korumak içinaçılış ön prostat içine noktası ulaştıktan sonra eklenen e boru direnci karşılamaktadır. Yaklaşık 1 inç PE boru geçmeden açı tüp yukarı veya aşağı eğerek ayarlayarak, PE boru daha da ilerler ( şekil 3B) eklenen.</li>
	</ol></li></ol> 3. Vivo Düşsel alt idrar yolu ve böbrek Not: Bu el yazması vivo içinde görüntüleme amacı: inoculum; kayma lokalizasyonu onaylamak (1) ve (2) için inoculum reflü insidansı değerlendirmek için böbrekler. Bu amaçla,-ebilmek var olmak kullanılmış imzalat veya ötenazi bir fare.
<ol><li>Alt idrar yolu yetişkin erkek fare görselleştirmek için mesane, prostat ve seminal veziküller ortaya çıkarmak için alt karın orta hat laparotomi gerçekleştirmek.
	<ol><li>Xiphoid makas kullanarak işlemi sadece kasık kemiğine gelen orta hat deride deşmek.</li>
		<li>Subkutan doku derisini yükseltmesine.</li>
		<li>Avasküler linea alba bulunan orta hat içinde belirlemek ve bu tüm organları nerede Periton boşluğuna girmek için deşmek.</li>
		<li>Kayma yerelleştirme mavi boya veya başka bir uygun izleme Aracısı görselleştirme tarafından onaylayın.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Lee, S., Yang, G., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostatic+inflammation+induces+urinary+frequency+in+adult+mice.">Prostatic inflammation induces urinary frequency in adult mice.</a> PLoS One. 10 (2), e0116827 (2015).</li><li>Wong, L., Hutson, P. R., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostatic+inflammation+induces+fibrosis+in+a+mouse+model+of+chronic+bacterial+infection.">Prostatic inflammation induces fibrosis in a mouse model of chronic bacterial infection.</a> PLoS One. 9 (6), e100770 (2014).</li><li>Elkahwaji, J. E., Zhong, W., Hopkins, W. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+bacterial+infection+and+inflammation+incite+reactive+hyperplasia+in+a+mouse+model+of+chronic+prostatitis.">Chronic bacterial infection and inflammation incite reactive hyperplasia in a mouse model of chronic prostatitis.</a> Prostate. 67 (1), 14-21 (2007).</li><li>Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+bacterial+inflammation+of+the+mouse+prostate.">Acute bacterial inflammation of the mouse prostate.</a> Prostate. 72 (3), 307-317 (2012).</li><li>Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+inflammation+of+the+lower+urinary+tract.">Models of inflammation of the lower urinary tract.</a> Neurourol Urodyn. 30 (5), 673-682 (2011).</li><li>Thai, K. H., Thathireddy, A., Hsieh, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transurethral+induction+of+mouse+urinary+tract+infection.">Transurethral induction of mouse urinary tract infection.</a> J Vis Exp. (42), (2010).</li><li>Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Boldon, K., Bushman, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+cystitis+is+accompanied+by+increased+peripheral+thermal+sensitivity+in+mice.">Bacterial cystitis is accompanied by increased peripheral thermal sensitivity in mice.</a> J Urol. 179 (2), 759-763 (2008).</li><li>Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+and+host+responses+to+Escherichia+coli+urinary+tract+infection+in+genetically+distinct+mouse+strains.">Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains.</a> Infect Immun. 66 (6), 2798-2802 (1998).</li><li>Dinis, P., Charrua, A., Avelino, A., Cruz, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravesical+resiniferatoxin+decreases+spinal+c-fos+expression+and+increases+bladder+volume+to+reflex+micturition+in+rats+with+chronic+inflamed+urinary+bladders.">Intravesical resiniferatoxin decreases spinal c-fos expression and increases bladder volume to reflex micturition in rats with chronic inflamed urinary bladders.</a> BJU Int. 94 (1), 153-157 (2004).</li><li>Cayan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Botulinum+toxin+type+A+may+improve+bladder+function+in+a+rat+chemical+cystitis+model.">Botulinum toxin type A may improve bladder function in a rat chemical cystitis model.</a> Urol Res. 30 (6), 399-404 (2003).</li><li>Jerde, T. J., Bjorling, D. E., Steinberg, H., Warner, T., Saban, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+mouse+bladder+inflammatory+response+to+E.+coli+lipopolysaccharide.">Determination of mouse bladder inflammatory response to E. coli lipopolysaccharide.</a> Urol Res. 28 (4), 269-273 (2000).</li><li>Saban, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS-sensory+peptide+communication+in+experimental+cystitis.">LPS-sensory peptide communication in experimental cystitis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 282 (2), F202-F210 (2002).</li><li>Schilling, J. D., Mulvey, M. A., Vincent, C. D., Lorenz, R. G., Hultgren, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+invasion+augments+epithelial+cytokine+responses+to+Escherichia+coli+through+a+lipopolysaccharide-dependent+mechanism.">Bacterial invasion augments epithelial cytokine responses to Escherichia coli through a lipopolysaccharide-dependent mechanism.</a> J Immunol. 166 (2), 1148-1155 (2001).</li><li>Saban, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discriminators+of+mouse+bladder+response+to+intravesical+Bacillus+Calmette-Guerin+(BCG).">Discriminators of mouse bladder response to intravesical Bacillus Calmette-Guerin (BCG).</a> BMC Immunol. 8, 6 (2007).</li><li>Bjorling, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+acrolein-induced+cystitis+in+mice.">Acute acrolein-induced cystitis in mice.</a> BJU Int. 99 (6), 1523-1529 (2007).</li><li>Sadler, K. E., Stratton, J. M., Kolber, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+bladder+distention+evoked+visceromotor+responses+as+a+model+for+bladder+pain+in+mice.">Urinary bladder distention evoked visceromotor responses as a model for bladder pain in mice.</a> J Vis Exp. (86), (2014).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu el yazması yetişkin erkek fare transüretral korumak bir yöntem ayrıntılı olarak anlatılmaktadır. Fark birincil tohumlama alanı farklı çaplarda PE boru kullanarak ulaşılabilir. PE-50 başarıyla PE-10 AP ve SV (şekil 3A-B) erişmek için kullanılan daha büyük çaplı iken idrar kesesi Lümen ulaşmak için önerilir. PE boru ve hedef organ aşılama için boyutu seçimi ek olarak, aşılanan inoculum, hacmi gibi diğer faktörler de çözüm dağıtımın...

Transüretral korumak yaklaşım önceki çalışmalarda yöntemlerinden biri mesane patolojiler1,2,3,4 kemirgen modeller oluşturmak için kullanılmıştır ve değerlendirmek için kullanılan farelerde yerel olarak teslim edilen tedavilerin etkinliğini. Hayvan modelleri tamamen insan patolojiler özetlemek olamaz, hayvan çalışmalarında temel mekanizmaları tanımlaması interstisyel sistit/mesane ağrı sendromu, Nörojenik gibi insan LUT bozuklukları daha iyi anlaşılmasını sağlar sistit, otoimmün sistit ve Prostatik inflamasyon5.
Bir yetişkin erkek fare üzerinde gerçekleştirilen transüretral korumak yordam daha teknik bir yetişkin dişi fare6İntravezikal korumak daha zordur. Erkek üretra ile birlikte onun küçük çaplı doğal olarak kavisli anatomisi teknik olarak zor bir kateter transüretral ekleme yerine getirmek yapmak. Bu nedenle, ayrıntılı talimatlar transüretral indüksiyon için fare idrar yolu enfeksiyonu6 ve LUT iltihap7,8,9,10,11 , 12 , 13 , 14 , 15 mesane eklenen kateter yolu ile daha önce sadece dişi fareler için özetlenen. Bu el yazması, video klipler, görüntüler ve resimler de dahil olmak üzere erkek farelerde maddelerin transüretral korumak için teknik, adım adım açıklamasını sunmayı amaçlamaktadır. Yetişkin bir erkek fare yordamlarda değişkenle gerçekleştirilebilir transüretral korumak daha önce kadın fare7 ' açıklanan ve electromyogram kayıtları gibi ek teknikleri ile birleştirilmiş benzer inoculates visceromotor yanıt (VMR)16.

<table><tbody><tr><td>BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 10</td><td>BD Medical</td><td>63019-004</td><td></td></tr><tr><td>BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 50</td><td>BD Medical</td><td>63019-048</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte-N Autoguard/ Angiocath</td><td>BD Medical</td><td>311411</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol (EtOH)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>BD Needle Only 22 Gauge (G) 1 inch</td><td>Becton Dickson</td><td>205155</td><td></td></tr><tr><td>BD Needle Only 27 Gauge (G) 1/2 inch</td><td>Becton Dickson</td><td>305129</td><td></td></tr><tr><td>Luer stub, 22 G X 0.5 in / Blunt Needle</td><td>Instech</td><td>LS22</td><td></td></tr><tr><td>Luer stub, 27 G X 0.5 in / Blunt Needle</td><td>Instech</td><td>LS27</td><td></td></tr><tr><td>6&quot; Long x 2&quot; Wide x 1&quot; Thick, Aluminum Oxide Sharpening Stone / Oil Stone</td><td>Norton</td><td>40204034</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Lubricant Sterile Bacteriostatic Folilpac</td><td>Surgilube</td><td>281020543</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Fluriso</td><td>13985-528-60</td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System</td><td>Kent Scientific</td><td>SS-01</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Forceps, Curved</td><td>vwr</td><td>82027-392</td><td></td></tr><tr><td>BD 1 ml Syringe</td><td>BD Medical</td><td>309626</td><td></td></tr><tr><td>India Ink Solution., 0.2% in PBS buffer</td><td>Alfa Aesar</td><td>J61007</td><td></td></tr><tr><td>8~12 weeks old male C57B/6 Mice</td><td>Jackson Lab</td><td>#000664</td><td></td></tr></tbody></table>

transurethral instillation procedure in adult male mouse

Transüretral korumak aktif maddeler (Örneğin, ilaçlar, kimyasallar, bakteri ve virüsler) ile farklı çözümler yerel olarak mesane mesane patolojiler hayvan modelleri teşvik veya değerlendirmek için sunmak için kullanılan İntravezikal tedavi etkinliğinin. En kemirgen modellerin alt idrar yolu (LUT) patolojiler dişi farelerde İntravezikal korumak kadın üretra yoluyla maddelerin kolaylığı için indüklenir. Ancak, anatomik farklılıklar arasında kadın ve erkek LUT nedeniyle erkek fare transüretral korumak çok zor bir prosedür olarak kabul ve daha önce tarif. Bu makale, biz nasıl bir erkek fare üretra içine sonraki ekleme için polietilen (PE) boru hazırlamak ayrıntılı bir açıklama sağlar. Buna ek olarak, biz aşı istediğiniz siteye bağlı olarak kullanılmak üzere PE boru ideal tür tartışıyorlar. Ayrıca, nokta nokta bir hayvan üretra yaralanmayı önlemek ve istenen konuma çözüm teslim sağlamak başarılı bir transüretral korumak için hazırlamak nasıl açıklar. Yordamı sünnet derisi ve üretral verin açılış duyurmak için glans geri çeker tarafından başlatılır. Ardından, glans penis ve PE boru stabilize etmek için kör olmayan kırma forseps tarafından kavradı. PE boru ilk hayvan vücudu paralel üretral verin eklenir, sonra açısı üretra doğal eğimi takip manevra kateter eğerek ayarlanır. Bu teknik mesane patolojiler indüklenen fare modelleri için kullanılabilir/veya erkek farelerde İntravezikal tedavilerin etkinliğini değerlendirmek.

Transüretral korumak PE 50 boru ile mavi boya, boya içine idrar kesesi (şekil 4A) ve renklendirme SV ve AP (şekil 4B), PE 10 boru üzerinden korumak sırasıyla sonuçlandı. Gerçekleştirilen transüretral korumak inoculum böbrekler için anlık bir reflü neden ya da değil olup olmadığını değerlendirmek için böbrek ve üreter mavi boya ve floresan boya (şekil 4A-B) 1...

Watch this Scientific Journal Video about Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse at JoVE.com

Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

Transüretral korumak zor bir işlemdir ve de literatürde açıklanmayan. Bu yazının amacı transüretral mesane ve/veya yetişkin erkek farelerde prostat içine aktif maddeler ile sıvı İntravezikal teslim etmek için bir kateter yerleştirilmesi için bir tekniği tarif etmektir.

Yetişkin erkek fare yordamda transüretral korumak

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into ...

transurethral-instillation-procedure-in-adult-male-mouse

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

15.5K Görüntüleme.  University of Colorado School of Medicine. Transüretral korumak zor bir işlemdir ve de literatürde açıklanmayan. Bu yazının amacı transüretral mesane ve/veya yetişkin erkek farelerde prostat içine aktif maddeler ile sıvı İntravezikal teslim etmek için bir kateter yerleştirilmesi için bir tekniği tarif etmektir.

Video: Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on Luria-Bertani (LB) agar at 37&deg;C in ambient air. UPEC strains grow as yellowish-white translucent colonies on LB agar. Following confirmation of appropriate colony morphology, single colonies are then picked to be cultured in broth. LB broth can be used for most uropathogenic bacterial strains. Two serial, overnight LB broth cultures can be employed to enhance expression of type I pili, a well-defined virulence factor for uropathogenic bacteria. Broth cultures are diluted to the desired concentration in phosphate buffered saline (PBS). Eight to 12 week old female mice are placed under isoflurane anesthesia and transurethrally inoculated with bacteria using polyethylene tubing-covered 30 gauge syringes. Typical inocula, which must be empirically determined for each bacterial/mouse strain combination, are 106 to 108 cfu per mouse in 10 to 50 microliters of PBS. After the desired infection period (one day to several weeks), urine samples and the bladder and both kidneys are harvested. Each organ is minced, placed in PBS, and homogenized in a Blue Bullet homogenizer. Urine and tissue homogenates are serially diluted in PBS and cultured on appropriate agar. The following day, colony forming units are counted.

This video will demonstrate methods to transurethrally induce mouse urinary tract infections and quantify the extent of resulting infections.

Transüretral İndüksiyon Fare İdrar Yolu Enfeksiyonu

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Mouse Bladder Wall Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. Before starting injections, the surgical area must be cleaned with soap and water and antiseptic solution. Surgical equipment must be sterilized before use and between each animal. Each mouse is placed under inhaled isoflurane anesthesia (2-5% for induction, 1-3% for maintenance) and its bladder exposed by making a midline abdominal incision with scissors. If the bladder is full, it is partially decompressed by gentle squeezing between two fingers. The cell suspension of interest is intramurally injected into the wall of the bladder dome using a 29 or 30 gauge needle and 1 cc or smaller syringe. The wound is then closed using wound clips and the mouse allowed to recover on a warming pad. Bladder wall injection is a delicate microsurgical technique that can be mastered with practice.

Mouse bladder wall injection is a useful approach to orthotopically study bladder stem cell and cancer biology. This delicate microsurgical method can be mastered with careful technique and practice.

Fare mesane Duvar Enjeksiyon

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

Tıp

Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, which accurately reflect disease establishment and progression, permit dissection of host-pathogen interactions and generation of immunity to infection. In mice, intravesical instillation of uropathogenic E. coli, the causative agent in more than 85% of community acquired UTI, recapitulates many of the stages of infection observed in humans. Until recently, however, UTI could only be modeled in female animals. This limitation has hindered the study of sex-related differences in UTI, as well as other bladder pathologies, such as cancer. Here, we describe a method to instill male mice that allows direct comparison between female and male animals and provide a detailed protocol to assess bladder tissue by flow cytometry as a means to better understand host responses to infection. Together, these approaches will aid in the identification of host factors that contribute to sex biases observed in UTI and other bladder-associated diseases.

The established model of transurethral catheterization of mice allows the study of bladder pathologies, including urinary tract infection, but can only be performed in females. A new model of male transurethral instillation, presented here, will enable research in an area marked by strong clinical and epidemiological differences between the sexes.

İdrar yolu enfeksiyonu küçük bir hayvan modeli: erkek ve dişi farelerin transüretral Kateterizasyon

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, ...

Longitudinal Follow-Up of Urinary Tract Infections and Their Treatment in Mice using Bioluminescence Imaging

Urinary tract infections (UTI) rank among the most common bacterial infections in humans and are routinely treated with empirical antibiotics. However, due to increasing microbial resistance, the efficacy of the most used antibiotics has declined. To find alternative treatment options, there is a great need for a better understanding of the UTI pathogenesis and the mechanisms that determine UTI susceptibility. In order to investigate this in an animal model, a reproducible, non-invasive assay to study the course of UTI is indispensable.
For years, the gold standard for the enumeration of bacterial load has been the determination of Colony Forming Units (CFU) for a particular sample volume. This technique requires post-mortem organ homogenates and serial dilutions, limiting data output and reproducibility. As an alternative, bioluminescence imaging (BLI) is gaining popularity to determine the bacterial load. Labeling pathogens with a lux operon allow for the sensitive detection and quantification in a non-invasive manner, thereby enabling longitudinal follow-up. So far, the adoption of BLI in UTI research remains limited.
This manuscript describes the practical implementation of BLI in a mouse urinary tract infection model. Here, a step-by-step guide for culturing bacteria, intravesical instillation and imaging is provided. The in vivo correlation with CFU is examined and a proof-of-concept is provided by comparing the bacterial load of untreated infected animals with antibiotic-treated animals. Furthermore, the advantages, limitations, and considerations specific to the implementation of BLI in an in vivo UTI model are discussed. The implementation of BLI in the UTI research field will greatly facilitate research on the pathogenesis of UTI and the discovery of new ways to prevent and treat UTI.

This manuscript describes the intravesical administration of uropathogenic bacteria with a lux operon to induce a urinary tract infection in mice and subsequent longitudinal in vivo analysis of the bacterial load using bioluminescence imaging.

Biyolüminesans Görüntüleme Kullanan Farelerde İdrar Yolu Enfeksiyonlarının Boyuna Takibi ve Tedavileri

Urinary tract infections (UTI) rank among the most common bacterial infections in humans and are routinely treated with empirical antibiotics. However, ...

Ultrasonography of the Adult Male Urinary Tract for Urinary Functional Testing

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting in a significant economic and quality of life burden. Transgenic and other mouse models have been developed to recreate various aspects of this multifactorial disease; however, methods to accurately quantitate urinary dysfunction and the effectiveness of new therapeutic options are lacking. Here, we describe a method that can be used to measure bladder volume and detrusor wall thickness, urinary velocity, void volume and void duration, and urethral diameter. This would allow for the evaluation of disease progression and treatment efficacy over time. Mice were anesthetized with isoflurane, and the bladder was visualized by ultrasound. For non-contrast imaging, a 3D image was taken of the bladder to calculate volume and evaluate shape; the bladder wall thickness was measured from this image. For contrast-enhanced imaging, a catheter was placed through the dome of the bladder using a 27-gauge needle connected to a syringe by PE50 tubing. A bolus of 0.5 mL of contrast was infused into the bladder until a urination event occurred. Urethral diameter was determined at the point of the Doppler velocity sample window during the first voiding event. Velocity was measured for each subsequent event yielding a flow rate. In conclusion, high frequency ultrasound proved to be an effective method for assessing bladder and urethral measurements during urinary function in mice. This technique may be useful in the assessment of novel therapies for BPH/LUTS in an experimental setting.

We describe the use of high frequency ultrasound with contrast imaging as a method to measure bladder volume, bladder wall thickness, urine velocity, void volume, void duration, and urethral diameter. This strategy can be used to assess voiding dysfunction and treatment efficacy in various mouse models of lower urinary tract dysfunction (LUTD).

İdrar Fonksiyonel Testi için Erişkin Erkek İdrar Yolu Ultrasonografisi

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting ...

Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation

Genetically engineered mouse models (GEMMs) are extremely valuable in revealing novel biological insights into the initiation and progression mechanisms of human diseases such as cancer. Transgenic and conditional knockout mice have been frequently used for gene overexpression or ablation in specific tissues or cell types in vivo. However, generating germline mouse models can be time-consuming and costly. Recent advancements in gene editing technologies and the feasibility of delivering DNA plasmids by viral infection have enabled rapid generation of non-germline autochthonous mouse cancer models for several organs. The bladder is an organ that has been difficult for viral vectors to access, due to the presence of a glycosaminoglycan layer covering the urothelium. Here, we describe a novel method developed in lab for efficient delivery of DNA plasmids into the mouse bladder urothelium in vivo. Through intravesical instillation of pCAG-GFP DNA plasmid and electroporation of surgically exposed bladder, we show that the DNA plasmid can be delivered specifically into the bladder urothelial cells for transient expression. Our method provides a fast and convenient way for overexpression and knockdown of genes in the mouse bladder, and can be applied to building GEMMs of bladder cancer and other urological diseases.

We describe a novel method for the delivery of DNA plasmid into the urothelial cells of mouse bladder in vivo through urethra catheterization and electroporation. It offers a fast and convenient way for generating autochthonous mouse models of bladder diseases.

Plazmid DNA teslimat için fare mesane Urothelium elektroporasyon tarafından roman yöntemi

Genetically engineered mouse models (GEMMs) are extremely valuable in revealing novel biological insights into the initiation and progression mechanisms ...

Biyoloji

Modeling Orthotopic Bladder Tumor in Mouse Model: A Procedure for Intravesical Administration of Cancer Cells into Murine Bladder

Source: Tham, S. M. et al. <a href="https://www.jove.com/video/55078" target="_blank">A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System.</a>&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2017)
In this video, we describe the intravesical procedure of delivering cancer cells into the bladder of a mouse model. This procedure helps generate an orthotopic bladder tumor model that can be used to develop therapeutic strategies.

Ortotopik Mesane Tümörünün Fare Modelinde Modellenmesi: Kanser Hücrelerinin Murin Mesanesine İntravezikal Uygulanması İçin Bir Prosedür

Source: Tham, S. M. et al. A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System.&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2017)
In this video, we describe ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Kanser Araştırmaları

İdrar Yolu Kanseri

İn vivo çalışmalar

Urine Depletion and Bladder Rinsing in Mouse Model: A Catheter-based Procedure to Empty and Wash Murine Urinary Bladder

Source: Yu, C. et al. <a href="https://www.jove.com/video/57649" target="_blank">Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe a catheter-based procedure to empty and rinse the urinary bladder of a mouse model. The prepped mouse can then be used for further experimental procedures.

Fare Modelinde İdrar Tükenmesi ve Mesane Durulama: Murin İdrar Kesesini Boşaltmak ve Yıkamak İçin Kateter Tabanlı Bir Prosedür

Source: Yu, C. et al. Novel Method of Plasmid DNA Delivery to Mouse Bladder Urothelium by Electroporation. J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we describe ...

Transurethral Catheterization and Bacterial Inoculation to Generate a Urinary Tract Infection Model in Male Mice

Source: Zychlinsky Scharff, A., et al. <a href="https://app.jove.com/v/54432">Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice.</a> J. Vis. Exp. (2017).
This video demonstrates the establishment of uropathogenic Escherichia coli infection in a female mouse bladder through transurethral catheter instillation. The injected bacteria successfully establish a urinary tract infection within the bladder, providing a valuable platform for studying healthcare-associated diseases related to the urinary tract.

Erkek Farelerde İdrar Yolu Enfeksiyonu Modeli Oluşturmak için Transüretral Kateterizasyon ve Bakteriyel Aşılama

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. ...

İmmünoloji

İmmünopatoloji

Konak-Patojen Etkileşim Modelleri

Establishment of a Urinary Tract Infection Model in Female Mice

Source: Zychlinsky Scharff, A. et al., <a href="https://app.jove.com/v/54432">Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2017)
This video demonstrates the establishment of uropathogenic Escherichia coli infection in a female mouse bladder through transurethral catheter instillation. The injected bacteria successfully establish a urinary tract infection within the bladder, providing a valuable platform for studying healthcare-associated diseases related to the urinary tract.