1. Endoparazit muayene (Tablo 1) 1. Perianal bant testi (ayrıca bakınız Bölüm 5; bu genellikle aynı zamanda yapılır) <ol><li> Bir dağıtıcı açık, bir uzunluk değil, buzlu, selofan bant çıkarın. Teyp ortasında dokunmadan (yaklaşık 5 cm) bir ucunu işlemek için yeterince uzun olmalıdır. Temiz bir çalışma yüzeyine kenar onlara atfeden ve gerektiği gibi kullanarak, tek seferde birden fazla uzunlukları dağıtmak için daha kolay olabilir. </li><li> Kuyruğundan tutarak, fareyi bir kafes ve kafes kapağı yerden kaldırın. Laminer akış kabini veya hayvan sağlık durumu gerektiriyorsa biyogüvenlik kabini bu eylemi gerçekleştirir. </li><li> Kafes, arka ayakları kaldırırken, kuyruk fare kısıtlamaktadır. Başparmak ve işaret parmağı arasındaki bandın sonuna tutun, daha sonra perianal bölgede birkaç kez de dahil olmak üzere, sıkıca fare perine orta bant uygulamak. Saç testi için başarılı kabul banda yapışık olarak görülmelidir. </li><li> Kafes içinde fare geri yerleştirin. </li><li> Etiketli temiz bir cam slayt, mineral yağ başka bir damla bir damla mineral yağ koyun, slayt bant uygulamak. Bir cam kapak slip ile kaplayın. </li><li> 10x ve 40x hedeflerine ışık mikroskobu kullanılarak mikroskop lamı okuyun. Diğer parazit yumurtaları bazen olmasına rağmen Syphacia yumurta tespit perianal bant testi, en iyi. </li></ol> 2. Fekal flotasyon <ol><li> Flotasyon çözüm, düz tabanlı bir flakon (örneğin Ovatector olarak ilaç şişesi ya da dışkı yüzdürme cihaz), petri, kapak kayma, mikroskop lamı, ve aplikatör / karıştırma çubukları birleştirin. Fecasol olarak Yüzdürme çözüm, 1,20-1,30 bir özgül ağırlık olmalı ve çeşitli sodyum tuzları, şeker, çinko sülfat, ya da ticari olarak satın yapılmış olabilir. (Tablo 2) </li><li> Flotasyon odasına 2-5 kafes fekal pelet veya hayvan (lar) taze toplayın. Dışkı 500 ul% 0.9 serum fizyolojik ile dışkı nemlendirme, aşırı kuru ya yaş veya dışkı üreten türler nedeniyle faydalı olabilir. </li><li> Çözünmüş dışkı taşması çalışma yüzeyini korumak için petri flakon yerleştirin. Küçük hacimli flotasyon orta ve püresi ekleyin ve iyice karıştırın. Materyal büyük parça yok kalmalıdır. Flakonun kenar üzerinde bir menisküs formları kadar flotasyon orta eklemeye devam edin. </li><li> Menisküs kapak kayma yerleştirin ve 15 dakika oda sıcaklığında inkübe edin. Parazit yumurta ve bazı protozoon ookistleri üst yükselişi ve kapak kayma uyacaktır. </li><li> Inkübasyondan sonra, asansör ve kapak kayma ters. Kapak kayma cam bir mikroskop lamı üzerine yerleştirin. </li><li> Işık mikroskobu altında 10x ve 40x hedefleri kullanarak slayt inceleyin. </li><li> Genel olarak düşük teknoloji ve kolay gerçekleştirmek için olsa da, bu tekniğin, fareler ya da sıçanlar için tavsiye edilmez. Bir kural olarak, büyük hacimli bir dışkı üreten hayvanlar için daha uygundur. </li></ol> 3. Fekal konsantrasyon ve santrifüj <ol><li> Flotasyon çözüm, santrifüj tüp, kapak kayma, mikroskop lamı, ve aplikatör / karıştırma çubukları ve boru kapakları birleştirin. Flotasyon çözüm 1,18-1,30 bir özgül ağırlık olmalı ve çeşitli sodyum tuzları, şeker, çinko sülfat, ya da ticari olarak satın yapılmış olabilir. (Tablo 2) </li><li> Bir toplama tüpünün içine kafes 2-10 fekal pelet veya taze hayvan (lar) toplayın. Dışkı veya flotasyon solüsyonu ile tuzlu% 0.9 500 ul ile dışkı nemlendirme, son derece kuru, ya, yaş ya da dışkı üreten türlerin bağlı iseniz kullandığınız yararlı olabilir. </li><li> Cam bir santrifüj tüpüne içinde uygun bir flotasyon çözümü örnek karıştırın. Bir vortexer Mekanik ajitasyon örnekleri karıştırmak için kullanılıyor olabilir. Vortexer kullanılması durumunda, çıtçıt kapakları dökülme ve çapraz kontaminasyonu önlemek için tüp tepelerine yerleştirilmiş olmalıdır. Rutin, örnekler, ancak diğer çözümlere ek olarak kullanılabilir (ayrı bir hazırlık tüp) veya ikame edilebilir, 1.18 özgül ağırlık çinko sülfat hazırlanır. </li><li> Her tüp üzerinde hafif bir pozitif menisküs oluşturmak için her tüpüne ek flotasyon çözüm ekleyin. Her tüp için plastik bir kapak kayma uygulayın ve tüp dudak ile tam bir temas yapılırsa emin olun. Yeri tüp (ler) santrifüj. </li><li> 10 dakika boyunca yaklaşık 616-760 RCF santrifüjleyin. Kapak fişleri, santrifüj işlemi sırasında kayıp ya da kırık ise, yeni bir kapak kayma örnek tüp yerleştirilir ve tüp hafifçe menisküs yeni kapak kayma değecek şekilde uçlu olabilir. Hiçbir ek santrifüj gereklidir. </li><li> Etiketli, temiz cam mikroskop lamı üzerinde kayma ve santrifüj tüpüne yeri kapağını çıkarın. Birden fazla santrifüj çözümleri tek bir dışkı örneği değerlendirmek için kullanılmış olsaydı, iki kapak fişleri aynı slaytta yer olabilir. </li><li> Iyot ile slayt Leke. Bu e izin verirKistlerin Asier tanımlama. </li><li> 10x ve 40x hedeflerine ışık mikroskobu kullanılarak slayt inceleyin. </li></ol> 4. Doğrudan bağırsak helmint için muayene ve protozoa <ol><li> Temiz bir diseksiyon kurulu veya benzeri bir çalışma yüzeyi sırt yatma ötenazi fare veya sıçan karkas yerleştirin. </li><li> Forseps kullanarak, genital bölge, karın duvarı kaldırın. Makaslar kullanılarak, dikkatle, genital bölgede, hem deri ve kas kaldırma ve bağırsaklarda ortaya göğüs kafesi tabanı ventral karın duvarı insizyon. Duodenum başlayarak (mide çıkışında bağırsak başından segment) ve inen kolon (bağırsak, anüs sona erer ve genellikle oluşan dışkı içeren segment) devam bağırsak çıkarın. </li><li> Bağırsaklarda 100 ml Petri kabı yerleştirin. Çekum ve duodenum diseksiyon kurulu ötenazi hayvan ve yerden bir kısmını toplayın. Mukoza maruz uzunlamasına her intestinal segment İnsizyon. </li><li> Makaslar kullanılarak, küçük bölümler halinde kalan bağırsak kesti. Ancak batığın toplanan doku çanak yeterli musluk suyu ekleyin. </li><li> 35-40 ° C&#39;de 10 dakika en az bir laboratuvar fırın veya inkübatör örnek karışımı inkübe edin. Bu özgürleştirmek ve luminal helmint gösterecektir. Inkübe olsa da, aşağıdaki adımları yürütmek. </li><li> Place iki bağırsak kesimleri (duodenum ve çekum) örneklerin hazırlanması için izin etiketli tek bir slaytta% 0.9 salin yan tarafında iki damla. </li><li> Sterilize Isı ve aşılamak bir döngü veya eşdeğeri serin. </li><li> Duodenum mukozası kazıyın ve slayt (buzlu cam kenarına yakın tarafı) sol tarafta kazıntı yerleştirin. </li><li> Çekum mukoza kazıyın ve slayt sağ tarafta kazıntı. </li><li> Bir kapak kayma kazıntı Top. Bir faz kontrast mikroskop altında 40x objektif kullanılarak hazırlanan slayt) inceleyin; tanımlama için gerekli olarak artış büyütme. Parazitler tespit edilirse, morfolojisine göre tanımlar. </li><li> Çanak içeriği bu noktada inceleme için hazır olacak. Diseksiyon mikroskobu altında çanak içeriğini inceleyin. Detaylı bir muayene tamamlamak için çanak içinde içeriğini taşımak için gerekli ya da aplikatör sopa gibi bir prob kullanın. Kıl kurdu mevcut olmaları durumunda, bu küçük, beyaz, saç gibi solucanlar gibi görünecektir. Tenyalar varsa, bu segmente, yassı solucanlar (ipliksi kıl kurdu daha büyük) olarak görünecektir. </li><li> Helmint tespit ya da şüphesi varsa, küçük bir çift forseps kullanarak numune toplamak. </li><li> Parafin veya mineral yağı bir damla etiketli, temiz bir cam slayt Mount numune ve numune üstüne bir kapak kayma yerleştirin. 10x ve 40x hedeflerine ışık mikroskobu kullanılarak slayt inceleyin. </li></ol> 2. Ectoparasite muayene (Tablo 3) 5. Kürk ektoparazit sınavı (bant testi) sakatat <ol><li> Bir dağıtıcı açık, bir uzunluk değil, buzlu, selofan bant çıkarın. Teyp ortasında dokunmadan (yaklaşık 5 cm) bir ucunu işlemek için yeterince uzun olmalıdır. Temiz bir çalışma yüzeyine kenar onlara atfeden ve gerektiği gibi kullanarak, tek seferde birden fazla uzunlukları dağıtmak için daha kolay olabilir. </li><li> Kuyruğundan tutarak fare veya sıçan, kafes ve kafes kapağı yerden kaldırın. Laminer akış kabini veya hayvan sağlık durumu gerektiriyorsa biyogüvenlik kabini bu eylemi gerçekleştirir. </li><li> Fare veya sıçan dizginleyin. Hemostat ile kürk tutun ve hafifçe farenin skapular alan, ventral servikal bölgede, aksiller bölge, inguinal bölge ve dorsal kıç kürk koparmak. Kürk kaset üzerine yerleştirin. Saç testi için başarılı kabul banda yapışık olarak görülmelidir. , Kafes içinde, fare ya da sıçan geri yerleştirin. </li><li> Mineral yağ etiketli temiz bir cam slayt üzerinde bir damla Yeri; mineral yağ başka bir damla, sonra bant uygulamak. Bir cam kapak slip ile kaplayın. </li><li> Işık mikroskobu altında 10x ve 40x hedefler kullanılarak mikroskop lamı okuyun. </li><li> Bu sınav Radfordia, Myobia ve Myocoptes gibi kürk akarları tespit etmek için en iyisidir. </li></ol> 6. Cilt kazıma <ol><li> Aşağıdaki maddelerden birleştirin: hayvan test edilmesi, mineral yağ, mikroskop lamı, kapak kayma, neşter ve makas. Bu test, canlı hayvanlar üzerinde yapılacak ise, onlar başlamadan önce anestezi olmalıdır. </li><li> Kuyruk ve baş temporal bölgede baz istasyonu yakınında dorsum Örnek. Alternatif olarak, deri lezyonları ve / veya diğer sitelere kazınmış olabilir. </li><li> Derinden epidermisin aşındırmak için neşter bıçağı ile cilt, saç büyüme ters yönde kazıyın. Kazıma için önce saç kat Kırpma görsel tıkanıklığı (aşırı saç) azaltarak tarama hassasiyeti artırabilirkaydırın. </li><li> Slaytta petrol bir damla yerleştirin. Yağ damlası için örnek slayt yüzey üzerinde bıçak (örnek ekli) silerek uygulayınız. Gerekirse slayt ve bir kapak kayma ile ek yağ ekleyin. </li><li> Işık mikroskobu altında 10x ve 40x hedefler kullanılarak mikroskop lamı okuyun. </li><li> Genellikle deri kazıma Demodex (ve dermatophytic mantar) saptamak için kullanılır. </li></ol> 7. Pelage, Direk inceleme <ol><li> Diseksiyon mikroskobu aşamada ötenazi fare veya sıçan yerleştirin. </li><li> Saç parçası bir aplikatör çubuk veya benzeri bir alet kullanarak yaklaşık 10X postu kılları inceleyin ve saç gövdesine temel gözlemlemek. </li><li> Gözleri ve pinnae pinnae arasında, skapula arasında, çene altında, kasık ve koltuk altı alanlar arasında, kraniyal bölge inceleyin. Alternatif olarak, bütün karkas incelenebilir. </li><li> Herhangi bir ektoparazit ya da küçük bir çift forseps kullanarak görülen şüpheli materyal toplayın. Ektoparazitlere genellikle kepek ve saç mil dibinde ya da doğrudan cilt üzerinde sarı bir balmumu birikimi gibi görünebilir. </li><li> , Parafin ya da mineral yağı bir damla temiz bir cam slayt Mount numune ve numune üstüne bir kapak kayma yerleştirin. Işık mikroskobu altında 10x ve 40x hedefleri kullanarak slayt inceleyin. </li></ol> 3. Temsilcisi Sonuçlar: Aşağıdaki parazitler tespit ekli dosyaları bakınız: (Not: Bu prosedürler, dışkı ya da deri ve kürk herhangi bir yumurta, helmint, ya da kist mevcut algılar; bunlardan sadece bir kaçı aşağıda listelenmiştir) Endoparasites: <table border="0"><tbody><tr><td> Syphacia muris (yumurta, solucan) </td><td> Chilomastix bettencourti </td></tr><tr><td> Syphacia obvelata (yumurta, solucan) </td><td> Hexamastix muris </td></tr><tr><td> Aspiculuris tetraptera (yumurta, solucan) </td><td> Retortamonas sp. </td></tr><tr><td> Rodentolepis nana (yumurta, solucan) </td><td> Giardia spp. </td></tr><tr><td> Tritrichomonas muris </td><td> Spironucleus muris </td></tr><tr><td> Entamoeba muris </td><td></td></tr></tbody></table> Ektoparazitlere: <table border="0"><tbody><tr><td> Myocoptes musculinis </td><td> Radfordia affinis </td></tr><tr><td> Myocoptes musculinis </td><td> Radforida ensifera </td></tr><tr><td> Myobia musculi </td><td></td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td>&nbsp;</td><td> Şerit testi </td><td> Fekal flotasyon </td><td> FCC </td><td> Doğrudan sınav 1 </td><td> PCR </td></tr><tr><td> Tek hücreliler </td><td> - </td><td> + </td><td> + + </td><td> + + + </td><td> + + + / NA 2 </td></tr><tr><td> Hayvanların </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Kıl kurdu </td><td> + / - 3 </td><td> + / - 4 </td><td> + 4 </td><td> + + + </td><td> + + + </td></tr><tr><td> Tenyası 5 </td><td> - </td><td> + </td><td> + + </td><td> + + + </td><td> NA </td></tr><tr><td> Diğer yuvarlak solucan 5 </td><td> - </td><td> + </td><td> + + + </td><td> + + + </td><td> NA </td></tr></tbody></table> 1. Bu yöntem hayvanın ötenazi gerektirir. 2. Her protozoa için şu anda mevcut PCR yöntemi yoktur. 3. Bu yöntem Syphacia türleri tespit etmek için en uygun olanıdır. 4. Bu yöntem Aspiculuris tespit etmek için daha büyük olasılıkla, ve Syphacia tespit etmek için daha az muhtemel olacaktır. 5 tenyalar ve diğer yuvarlak solucan kıl kurdu daha modern laboratuar fareler ve sıçanlar çok nadirdir. Endoparazit ve uygun algılama yöntemi Tablo 1. Sınıf. Bazı yöntemler hayvanın ötenazi gerekecektir. NA yöntem şu anda bu parazitler için kullanılabilir olmadığını gösterir + yöntemi söz konusu parazitin tespiti için uygunluğu gösterir ve yöntem bu parazit için tavsiye edilmez olduğunu gösterir. <table border="1"><tbody><tr><td> Çözüm </td><td> Özgül ağırlık </td><td> 1L H 2 O her Malzemeler </td></tr><tr><td> Sodyum klorür </td><td> 1,20 </td><td> 311 g sodyum klorür </td></tr><tr><td> Sodyum nitrat </td><td> 1,20 </td><td> 338 gram sodyum nitrat </td></tr><tr><td> Sodyum nitrat </td><td> 1,30 </td><td> 616 g sodyum nitrat </td></tr><tr><td> Şeker </td><td> 1,20 </td><td> 1170 g sakaroz 1 </td></tr><tr><td> Sheather Kullanıcı şekeri </td><td> 1.27-1.30 </td><td> 1563 g sakaroz 1 </td></tr><tr><td> Çinko sülfat </td><td> 1,18 </td><td> 493 g çinko sülfat </td></tr></tbody></table> 1. Bu çözümler soğutma ya da ek bir koruyucu olarak fenol 9 ml gerektirir. Tablo 2 Fekal flotasyon çözümleri (Smith ve ark.) <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Kürk sakatat (bant testi) </td><td> Cilt kazıma 1 </td><td> Doğrudan sınav 1 </td><td> PCR </td></tr><tr><td> Lice </td><td> - </td><td> - </td><td> + + </td><td> NA </td></tr><tr><td> Akarlar </td><td> + </td><td> + </td><td> + + + </td><td> + + + / NA 3 </td></tr><tr><td> Pire 4 </td><td> - </td><td> - </td><td> + </td><td> NA </td></tr><tr><td> Keneler 4 </td><td> - </td><td> - </td><td> + + </td><td> NA </td></tr></tbody></table> Bir canlı hayvan üzerinde yapılacak ise 1 Bu yöntem, anestezi gerektirir. 2. Bu yöntem hayvanın ötenazi gerektirir. 3. akar her tür için mevcut PCR yöntemi yoktur. 4. pire ve kene modern laboratuar hayvanları tesislerinde son derece nadirdir . Ectoparasite ve uygun algılama yöntemi Tablo 3. Sınıf. Bazı yöntemler hayvanın ötenazi ve diğer yöntemler anestezi canlı hayvan bunları gerçekleştirmek için gerekli olacaktır. NA yöntem şu anda bu parazitler için kullanılabilir değildir gösterir. NA yöntem şu anda bu parazitler için kullanılabilir olmadığını gösterir + yöntemi söz konusu parazitin tespiti için uygunluğu gösterir ve yöntem bu parazit için tavsiye edilmez olduğunu gösterir.

<ol>
	<li>Baker, D. G., Fox, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+23.">Chapter 23.</a> The Mouse in Biomedical Research: Diseases. Diseases Vol. 2, (2007).</li><li>Baker, D. G., Baker, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+11.">Chapter 11.</a> Flynn's Parasites of Laboratory Animals. , 303-398 (2007).</li><li>Owen, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Parasites of Laboratory Animals. 12, (1992).</li><li>Pritchett, K. R., Fox, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+22.">Chapter 22.</a> The Mouse in Biomedical Research: Diseases. Diseases Vol. 2, (2007).</li><li>Smith, P. H., Wiles, S. E., Malone, J. B., Monahan, C. M., Baker, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+1.">Chapter 1.</a> Flynn's Parasites of Laboratory Animals. , 1-13 (2007).</li><li>Wasson, K., Fox, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+21.">Chapter 21.</a> The Mouse in Biomedical Research: Diseases. Vol. 2, 517-550 (2007).</li></ol>

Yazarlar Charles River, yukarıda açıklanan testler de dahil olmak üzere tanısal testler ve reaktifler, bir tedarikçi tüm çalışanları.

Bir laboratuvarda çalışırken, güvenlik her zaman endişe edilmelidir. Hayvanları ile çalışırken uygun koruyucu ekipman ve giyim için, önce ve sonra dezenfektan ile iş istasyonu temiz unutmayın. Bu yöntemler öncelikle yerlerde herhangi bir laboratuvar kemirgenler parazitler bulmak için tasarlanmış incelenmiş, yani, son derece nadir parazitler daha yaygın kıl kurdu ve kürk akarları gibi egzotik tespit veya. Diğer türler için de geçerlidir olmasına rağmen, vahşi kemirgenler, yukarıdaki yöntemlerden tarafından değerlendirilir, karaciğer subkutiste ve beyin gibi yerlerde ek parazitler olabilir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Kesim tahta </td><td> Thermo Electron Corp </td><td> Kedi # 36.114 </td><td></td></tr><tr><td> Küçük makas </td><td> ROBOZ </td><td> RS-5910, G204 </td><td> 23mm bıçakları, 3.5 &quot;uzunluk, düz </td></tr><tr><td> Orta makas </td><td> ROBOZ </td><td> RS-6808, G207 </td><td> 5 &quot; </td></tr><tr><td> Forseps-Eğri </td><td> ROBOZ </td><td> RS-8254 (M1/21004) </td><td> 4.5 &quot;, tırtıklı, hafif eğri </td></tr><tr><td> Forseps-Microdissecting </td><td> ROBOZ </td><td> RS-5238 </td><td> Hudson (Ewald) </td></tr><tr><td> Forseps-Doku Forseps </td><td> ROBOZ </td><td> RS-8160 </td><td> Sıçan diş </td></tr><tr><td> Metal prob </td><td> VWR </td><td> Kedi # 25778-000 </td><td></td></tr><tr><td> Hemostat </td><td> Vantage </td><td> V97-48 </td><td></td></tr><tr><td> Aplikatör sopa </td><td> Bağnaz </td><td> 6in Aplikatörler, Ref # 807 </td><td></td></tr><tr><td> Diseksiyon mikroskobu </td><td> Olympus </td><td> SZ51, Schott, ACE1 </td><td></td></tr><tr><td> Petri kabı </td><td> VWR </td><td> 100mm, Kedi # 3401PDNL </td><td></td></tr><tr><td> Kapak fişleri </td><td> VWR </td><td> Micro cam kapak, Kedi # 48366-067 </td><td></td></tr><tr><td> Slaytlar </td><td> VWR </td><td> VistaVision mikroskop slaytlar Kedi # 16004-368 </td><td></td></tr><tr><td> Döngü aşılamak </td><td> VWR </td><td> Kedi # 50815-040 </td><td></td></tr><tr><td> Işık mikroskobu </td><td> Olympus </td><td> Model # BX41TF </td><td></td></tr><tr><td> Laboratuvar fırın </td><td> Quincy Lab Inc. </td><td> Model 10 Lab Fırın </td><td></td></tr><tr><td> Santrifüj </td><td> Beckman Coulter </td><td> Allegra X-12R </td><td></td></tr><tr><td> Vortexer </td><td> VWR </td><td> Mini-Vortexer </td><td></td></tr><tr><td> Deney tüpü </td><td> Kimble-Chase </td><td> 15 ml tek santrifüj tüp, Kedi # 73.790-15 </td><td></td></tr><tr><td> Kapak fişleri </td><td> VWR </td><td> Plastik mikroskop kapak pusulası, 22mm, Kedi # 48.376-049 </td><td></td></tr><tr><td> Beyaz kapaklar </td><td> VWR </td><td> Kedi # 60869-089 </td><td></td></tr><tr><td> Iyot </td><td> Rowley biyokimyasal enstitüsü </td><td> Kedi # SO-364 </td><td></td></tr><tr><td> Çinko sülfat </td><td> Sigma Aldrich </td><td> Kedi # 1000917519, Z4750-500G </td><td></td></tr><tr><td> Sakaroz </td><td> Mallinckrodt Kimyasallar </td><td> Kedi # 8360-06 </td><td></td></tr><tr><td> Fenol </td><td> EMD </td><td> Kedi # PX0510-1 </td><td></td></tr><tr><td> Selofan bant </td><td> Staples </td><td> Görünmez bant, Kedi # 504.712 </td><td></td></tr><tr><td> Madeni yağ </td><td> Mallickrodt </td><td> Kedi # 6358 </td><td></td></tr></tbody></table>

diagnosis of ecto- and endoparasites in laboratory rats and mice

İç ve dış parazitler laboratuar kemirgen tesislerinde önemli bir endişe kaynağı olmayı sürdürmektedir ve birçok araştırma tesisleri, bazı parazitlenene hayvanlar limanı. Parazitler için bir hayvan muayene başlamadan önce, iki şey dikkate alınmalıdır. Bir: ne kullanmalıyım toplanan bilgilerin ve iki olacak: hangi test en uygun. Hayvanlar parazitlenene olduğumuzu bilerek, tesise kabul ettiği bir şey olabilir, ancak çoğu zaman hayvanları tedavi etmek ve daha sonra tedavinin etkinliğini belirlemek için bir ihtiyaç olabilir. Parazitler, canlı ya da ötenazi hayvanlardan alınan numuneler de dahil olmak üzere çeşitli teknikler yoluyla hayvanlarda tespit edilebilir. Tarihsel olarak, PCR çeşitli parazit için yüksek duyarlılık testi izin olmasına rağmen en büyük tanı duyarlılığı ile testleri, hayvanın ötenazi gerekli. Bu makale, algılama endo-fare ve sıçanlarda ektoparazit prosedürleri göstermektedir. Bulunan parazit türleri farklı olsa da aynı işlemleri diğer kemirgenleri uygulanabilir.

Watch this Scientific Journal Video about Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice at JoVE.com

Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

Bu makale, endo-veya ectoparasitism algılamak için tarama sıçan ve fareler için çeşitli prosedürler açıklanmaktadır. Birkaç tanı testleri gösterilecektir, canlı hayvanlar üzerinde kullanım için uygundur ve bu hayvanın ötenazi sonra kullanılan hem de. Sıçan ve fare parazitlerin belirlenmesinde yardımcı Fotoğrafları dahil edilecektir.

Tanı Laboratuvarı Sıçanlar ve Fareler Ecto-Endoparasites

Internal and external parasites remain a significant concern in laboratory rodent facilities, and many research facilities harbor some parasitized ...

diagnosis-of-ecto-and-endoparasites-in-laboratory-rats-and-mice

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

41.0K Görüntüleme.  Charles River. Bu makale, endo-veya ectoparasitism algılamak için tarama sıçan ve fareler için çeşitli prosedürler açıklanmaktadır. Birkaç tanı testleri gösterilecektir, canlı hayvanlar üzerinde kullanım için uygundur ve bu hayvanın ötenazi sonra kullanılan hem de. Sıçan ve fare parazitlerin belirlenmesinde yardımcı Fotoğrafları dahil edilecektir.

Video: Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel therapeutic entity in reconstructive surgery. However, long term high-dose multi-drug immunosuppressive therapy is required to ensure graft survival, bearing the risk of serious side effects which halters broader application. Further progression in this field may depend on better understanding of basic immunology and ischemia reperfusion injury in composite tissue grafts.
To date, orthotopic hind limb transplantation in rats has been the preferred rodent model for reconstructive transplantation (RT), however, it is an extremely demanding procedure that requires extraordinary microsurgical skills for reattachment of vasculature, bones, muscles and nerves.
We have introduced the vascular cuff anastomosis technique to this model, providing a rapid and reliable approach to rat hind limb transplantation. This technique simplifies and shortens the surgical procedure and enables surgeons with basic microsurgical experience to successfully perform the operation with high survival and low complication rates. The technique seems to be well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury (IRI) studies.

Here we describe the orthotopic rat hind-limb transplantation procedure, which seems to be the gold standard in vivo model for composite tissue allotransplantation research.

Sıçanlarda Ortotopik Hind-Ekstremite Nakli

Composite tissue allotransplantation (CTA) now represents a valid therapeutic option after the loss of a hand, forearm or digits and has become a novel ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her viral population uses the CCR5 coreceptor for cellular entry, and not an alternative coreceptor. One approach to tropism testing is to examine the sequence of the V3 region of the HIV envelope, which interacts with the coreceptor.
Methods: Viral RNA is extracted from blood plasma. The V3 region is amplified in triplicate with nested reverse transcriptase-PCR. The amplifications are then sequenced and analyzed using the software, RE_Call. Sequences are then submitted to a bioinformatic algorithm such as geno2pheno to infer viral tropism from the V3 region. Sequences are inferred to be non-R5 if their geno2pheno false positive rate falls below 5.75%. If any one of the three sequences from a sample is inferred to be non-R5, the patient is unlikely to respond to a CCR5-antagonist.

HIV tropism can be inferred from the V3 region of the viral envelope. V3 is PCR amplified in triplicate using nested RT-PCR, sequenced, and interpreted using bioinformatic software. Samples with with 1 or more sequence(s) with low g2P scores are classified as non-R5 virus.

HIV-1 tropizm genotipik Çıkarım kullanarak Nüfus tabanlı Sıralama V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Basophil Activation Test for Investigation of IgE-Mediated Mechanisms in Drug Hypersensitivity

Hypersensitivity reactions against non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) like propyphenazone (PP) and diclofenac (DF) can manifest as Type I-like allergic reactions 1. In clinical practice, diagnosis of drug hypersensitivity is mainly performed by patient history, as skin testing is not reliable and oral provocation testing bears life-threatening risks for the patient 2. Hence, evidence for an underlying IgE-mediated pathomechanism is hard to obtain. 
Here, we present an in vitro method based on the use of human basophils derived from drug-hypersensitive patients that mimics the allergic effector reaction in vivo. As basophils of drug-allergic patients carry IgE molecules specific for the culprit drug, they become activated upon IgE receptor crosslinking and release allergic effector molecules. The activation of basophils can be monitored by the determination of the upregulation of CD63 surface expression using flow cytometry 3. 
In the case of low molecular weight drugs, conjugates are designed to enable IgE receptor crosslinking on basophils. As depicted in Figure 1, two representatives of NSAIDs, PP and DF, are covalently bound to human serum albumin (HSA) via a carboxyl group reacting with the primary amino group of lysine residues. DF carries an intrinsic carboxyl group and, thus, can be used directly 4, whereas a carboxyl group-containing derivative of PP had to be organochemically synthesized prior to the study 1.
The coupling degree of the low molecular weight compounds on the protein carrier molecule and their spatial distribution is important to guarantee crosslinking of two IgE receptor molecules. The here described protocol applies high performance-size exclusion chromatography (HPSEC) equipped with a sequential refractive index (RI) and ultra violet (UV) detection system for determination of the coupling degree.
As the described methodology may be applied for other drugs, the basophil activation test (BAT) bears the potential to be used for the determination of IgE-mediated mechanisms in drug hypersensitivity. Here, we determine PP hypersensitivity as IgE-mediated and DF hypersensitivity as non-IgE-mediated by BAT.

Basophil activation test is a potent tool for the detection of IgE-dependent allergies in vitro. Here, an optimized protocol for basophil activation test is used to investigate drug hypersensitivity. A method for the efficient production of covalent drug-protein conjugates and their physicochemical characterization is described.

İlaç Aşırı duyarlılık IgE aracılığı ile Mekanizmalarının Araştırılması bazofil Etkinleştirme Test

Hypersensitivity reactions against non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) like propyphenazone (PP) and diclofenac (DF) can manifest as Type I-like ...

Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 1. Biosafety Level 4 Suit Laboratory Suite Entry and Exit Procedures

Biosafety level 4 (BSL-4) suit laboratories are specifically designed to study high-consequence pathogens for which neither infection prophylaxes nor treatment options exist. The hallmarks of these laboratories are: custom-designed airtight doors, dedicated supply and exhaust airflow systems, a negative-pressure environment, and mandatory use of positive-pressure (&#8220;space&#8221;) suits. The risk for laboratory specialists working with highly pathogenic agents is minimized through rigorous training and adherence to stringent safety protocols and standard operating procedures. Researchers perform the majority of their work in BSL-2 laboratories and switch to BSL-4 suit laboratories when work with a high-consequence pathogen is required. Collaborators and scientists considering BSL-4 projects should be aware of the challenges associated with BSL-4 research both in terms of experimental technical limitations in BSL-4 laboratory space and the increased duration of such experiments. Tasks such as entering and exiting the BSL-4 suit laboratories are considerably more complex and time-consuming compared to BSL-2 and BSL-3 laboratories. The focus of this particular article is to address basic biosafety concerns and describe the entrance and exit procedures for the BSL-4 laboratory at the NIH/NIAID Integrated Research Facility at Fort Detrick. Such procedures include checking external systems that support the BSL-4 laboratory, and inspecting and donning positive-pressure suits, entering the laboratory, moving through air pressure-resistant doors, and connecting to air-supply hoses. We will also discuss moving within and exiting the BSL-4 suit laboratories, including using the chemical shower and removing and storing positive-pressure suits.

Safety Precautions and Operating Procedures in an ABSL-4 Laboratory: 1. Biosafety Level 4 Suit Laboratory Suite Entry and Exit Procedures

Although researchers are generally knowledgeable about procedures and safety precautions required for biosafety level 1 or 2 (BSL-1/2) experiments, they may not be familiar with experimental procedures in BSL-4 suit laboratories. This article provides a detailed visual demonstration of BSL-4 suit laboratory systems check, laboratory entry, movement, and exit procedures.

bir (A) Güvenlik Önlemleri ve Çalışma Usul BSL-4 Laboratuvar: 1. Biyogüvenlik Seviye 4 Suit Laboratuvar Suite Giriş ve Çıkış İşlemleri

Biosafety level 4 (BSL-4) suit laboratories are specifically designed to study high-consequence pathogens for which neither infection prophylaxes nor ...

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by fluorescence or bioluminescence. We utilize BlaC, an enzyme expressed constitutively by all M. tuberculosis strains. REF allows rapid quantification of bacteria in lungs of infected mice. The same group of mice can be imaged at many time points, greatly reducing costs, enumerating bacteria more quickly, allowing novel observations in host-pathogen interactions, and increasing statistical power, since more animals per group are readily maintained. REF is extremely sensitive due to the catalytic nature of the BlaC enzymatic reporter and specific due to the custom flourescence resonance energy transfer (FRET) or fluorogenic substrates used. REF does not require recombinant strains, ensuring normal host-pathogen interactions. We describe the imaging of M. tuberculosis infection using a FRET substrate with maximal emission at 800 nm. The wavelength of the substrate allows sensitive deep tissue imaging in mammals. We will outline aerosol infection of mice with M. tuberculosis, anesthesia of mice, administration of the REF substrate, and optical imaging. This method has been successfully applied to evaluating host-pathogen interactions and efficacy of antibiotics targeting M. tuberculosis.

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

We describe the optical imaging of mice infected with Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) using reporter enzyme fluorescence (REF). This protocol facilitates the sensitive and specific detection of M. tuberculosis in pre-clinical animal models for pathogenesis, therapeutics and vaccine research.

Mycobacterium tüberküloz ile muhabir enzim Floresans farelerde görüntüleme

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and damaging the testes. During an infection with the ZIKV, immune cells have been shown to infiltrate into the tissues. However, the cellular mechanisms that define the protection and/or immunopathogenesis of these immune cells during a ZIKV infection are still largely unknown. Herein, we describe methods to evaluate the virus-specific T-cell functionality in these immunoprivileged organs of ZIKV-infected mice. These methods include a) a ZIKV infection and vaccine inoculation in Ifnar1-/- mice; b) histopathology, immunofluorescence, and immunohistochemistry assays to detect the virus infection and inflammation in the brain, testes, and spleen; c) the preparation of a tetramer of ZIKV-derived T-cell epitopes; d) the detection of ZIKV-specific T cells in the monocytes isolated from the brain, testes, and spleen. Using these approaches, it is possible to detect the antigen-specific T cells that have infiltrated into the immunoprivileged organs and to evaluate the functions of these T cells during the infection: potential immune protection via virus clearance and/or immunopathogenesis to exacerbate the inflammation. These findings may also help to clarify the contribution of T cells induced by the immunization against ZIKV.

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

A protocol to evaluate antigen-specific T-cell responses in the immunoprivileged organs of the Ifnar1-/- murine model for the Zika virus (ZIKV) infection is described. This method is pivotal for investigating the cellular mechanisms of the protection and immunopathogenesis of ZIKV vaccines and is also valuable for their efficacy evaluation.

Virüslü Ifnar1- / - farelerin Immunoprivileged organlarında Zika virüs özgü T hücreli yanıt-e doğru değerlendirilmesi

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T (iNKT) cells. Patients with active RA present fewer iNKT cells, defective cell function, and excessive polarization of Th1. In this study, an RA animal model was established using a mixture of hGPI325-339 and hGPI469-483 peptides. The iNKT cells were obtained by in vivo induction and in vitro purification, followed by infusion into RA mice for adoptive immunotherapy. The in vivo imaging system (IVIS) tracking revealed that iNKT cells were mainly distributed in the spleen and liver. On day 12 after cell therapy, the disease progression slowed down significantly, the clinical symptoms were alleviated, the abundance of iNKT cells in the thymus increased, the proportion of iNKT1 in the thymus decreased, and the levels of TNF-&#945;, IFN-&#947;, and IL-6 in the serum decreased. Adoptive immunotherapy of iNKT cells restored the balance of immune cells and corrected the excessive inflammation of the body.

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

This protocol uses G6PI mixed peptides to construct rheumatoid arthritis models that are closer to that of human rheumatoid arthritis in CD4+ T cells and cytokines. High purity invariant natural killer T cells (mainly iNKT2) with specific phenotypes and functions were obtained by in vivo induction and in vitro purification for adoptive immunotherapy.

Glukoz-6-Fosfat İzomazlarında (G6PI)-Indüklenen RA Farelerde iNKT Hücrelerinin Benimseyici İmmünoterapisi

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Evaluation of T Follicular Helper Cells and Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice

T Follicular Helper (Tfh) cells are an independent CD4+&#160;T cell subset specialized in providing help for germinal center (GC) development and generation of high-affinity antibodies. In influenza virus infection, robust Tfh and GC B cell responses are induced to facilitate effective virus eradication, which confers a qualified mouse model for Tfh-associated study. In this paper, we described protocols in detection of basic Tfh-associated immune response during influenza virus infection in mice. These protocols include: intranasal inoculation of influenza virus; flow cytometry staining and analysis of polyclonal and antigen-specific Tfh cells, GC B cells and plasma cells; immunofluorescence detection of GCs; enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) of influenza virus-specific antibody in serum. These assays basically quantify the differentiation and function of Tfh cells in influenza virus infection, thus providing help for studies in elucidating differentiation mechanism and manipulation strategy.

This paper describes protocols of evaluating Tfh and GC B response in mouse model of influenza virus infection.

Farelerde grip A Virüs Enfeksiyonu Sırasında T Foliküler Yardımcı Hücrelerin ve Germinal Merkez Yanıtının Değerlendirilmesi

T Follicular Helper (Tfh) cells are an independent CD4+&#160;T cell subset specialized in providing help for germinal center (GC) development and ...

Conjunctival Commensal Isolation and Identification in Mice

The ocular surface was once considered immune privileged and abiotic, but recently it appears that there is a small, but persistent commensal presence. Identification and monitoring of bacterial species at the ocular mucosa have been challenging due to their low abundance and limited availability of appropriate methodology for commensal growth and identification. There are two standard approaches: culture based or DNA sequencing methods. The first method is problematic due to the limited recoverable bacteria and the second approach identifies both live and dead bacteria leading to an aberrant representation of the ocular space. We developed a robust and sensitive method for bacterial isolation by building upon standard microbiological culturing techniques. This is a swab-based technique, utilizing an &#8220;in-lab&#8221; made thin swab that targets the lower conjunctiva, followed by an amplification step for aerobic and facultative anaerobic genera. This protocol has allowed us to isolate and identify conjunctival species such as Corynebacterium spp., Coagulase Negative Staphylococcus spp., Streptococcus spp., etc. The approach is suitable to define commensal diversity in mice under different disease conditions.

Presented here is a protocol for the isolation and amplification of aerobic and facultative anaerobic mouse conjunctival commensal bacteria using a unique eye swab and culture-based enrichment step with subsequent identification by microbiological based methods and MALDI-TOF mass spectrometry.

Farelerde Konjonktival Kommenal İzolasyon ve Tanımlama

The ocular surface was once considered immune privileged and abiotic, but recently it appears that there is a small, but persistent commensal presence. ...

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of UTI in male and female mice have illustrated the procedures for bacterial inoculation and enumeration in urine and tissues. During an initial bladder infection in C57BL/6 mice, UPEC establish latent reservoirs inside bladder epithelial cells that persist following clearance of UPEC bacteriuria. This model builds on these studies to examine rUTI caused by the emergence of UPEC from within latent bladder reservoirs. The urogenital bacterium Gardnerella vaginalis is used as the trigger of rUTI in this model because it is frequently present in the urogenital tracts of women, especially in the context of vaginal dysbiosis that has been associated with UTI. In addition, a method for in situ bladder fixation followed by scanning electron microscopy (SEM) analysis of bladder tissue is also described, with potential application to other studies involving the bladder.

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

A mouse model of uropathogenic E. coli (UPEC) transurethral inoculation to establish latent intracellular bladder reservoirs and subsequent bladder exposure to G. vaginalis to induce recurrent UPEC UTI is demonstrated. Also demonstrated are the enumeration of bacteria, urine cytology, and in situ bladder fixation and processing for scanning electron microscopy.

Farelerde Gardnerella vaginalis Mesane Maruziyeti Tarafından Tetiklenen Tekrarlayan Escherichia coli İdrar Yolu Enfeksiyonu

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of ...