JCM Unilever Plc (BB / L023040 / 1) ile BBSRC-IPA ödülü tarafından finanse edilmektedir. YY Yükseköğretim Doktora öğrencilik bir Suudi Arabistan Bakanlığı tarafından finanse edilmektedir.

Aşağıdaki yöntem önleyicisi üreten suşlar ile rakip suşları test etmek için 7,8 uyarlanmıştır. NOT: Bu protokol, bakteri kültürleri ile aerosol nesil içerir. Bu, sadece lokal onaylı güvenlik konuları uygulanması ile kapalı bir alanda gerçekleştirilebilir. Bir seviye 2 güvenlik kabini içinde agar plakaları üzerine kültür Püskürtme agar plakaları kirlenmesini ve çevresini en aza indirecektir. Bu aynı zamanda püskürtülen bakterilerin aerosol inhalasyon gelen araştırmacı koruyacak, bu araştırmacı çevreleme seviyesi 2 organizmaların kullanıldığı takdirde önemli bir husustur. Uygun kişisel koruyucu ekipman giyilmelidir. petri çevresi en atılabilir emici dokusu ile kaplıdır. UV ışığı kullanarak post-sprey dekontaminasyon tavsiye edilir. 1. Agar Plakaları hazırlanması <ol><li> manu uygun olarak beyin kalp infüzyon (BHI) agar hazırlayınfacturer talimatları. </li><li> sterilize etmek için, 121 ° C, otoklav, üreticinin tavsiyelerine uygun olarak 15 ila 20 dakika boyunca psi, ya da BHI agar otoklava. </li><li> Steril petri kutularının içine sterilize BHI agar 15 ml hacimde dökün ve ayarlamanızı sağlar. Not: Deney agar aynı stok kaynaklı olan her agar kullanılmak üzere olun ve her plaktaki agar aynı miktarda olduğu. Bu mevcut besin ve karşılaştırılabilirlik sağlayan plakalar arasındaki inhibitör difüzyon değişkenliği sınırlar. </li></ol> 2. Steril Broth hazırlanması <ol><li> Üreticinin talimatlarına uygun olarak, BHI suyu hazırlayın. </li><li> 28 ml&#39;lik bir cam şişe genel BHI 10 ml alikotları ekleyin. </li><li> sterilize etmek için, 15 psi, 20 dakika, ya da otoklav üreticinin tavsiyelerine göre 121 ° C&#39;de BHI suyu otoklav. NOT: suyu aut aynı partiden kaynaklanan deneyde kullanılan tüm suyu sağlayınsonuçlar varyasyonu neden olabilir besin varyasyonu sınırlamak için, aynı zamanda oclaved. </li></ol> 3. Hazırlanması Steril Vaporizer Şişe (ler) <ol><li> vapourizer şişe sökün. </li><li> Iç yabancı maddelerin temizlenmesi gece boyunca% 5 bir yüzey aktif temizleme ajanı vapourizer şişe kapağı ve vapourizer emmek için vapourizer ile% 5 yüzey aktif temizlik maddesi püskürtün. NOT: Yüzey aktif temizlik maddesi tutarken eldiven ve uygun kişisel koruyucu donanımlar kullanılmalıdır. </li><li> steril hava akış kaputun altında buharlaştırıcı, kapak ve şişe kurutun. </li><li> % 70 etanol ile şişeye doldurun, vapourizer yeniden takın ve vapourizer yoluyla etanol bazı sprey. </li><li> buharlaştırıcı kapağı koymak ve kullanıma kadar iç etanol ile saklayın. </li><li> aseptik olarak Steril BHI et suyu ile durulayın ve şişe vapourizer yoluyla suyu püskürtmek için hemen önce. NOT: Bu etanol aff önlerbölüm 6.3 şişeye ilave inokulum ecting. </li></ol> Bakteriyel Gece Kültür hazırlanması 4. (ler) <ol><li> Şerit yarışmacı ve suşlar önleyicisi steril BHI agar plakası üzerine yerleştirin ve yaklaşık 18 saat (bir gece) aerobik olarak 37 ° C&#39;de inkübe edin. NOT: Bu plaka, 4 ° C&#39;de depolandığında aynı hafta içinde birden çok kopya için kullanılabilen bakteri stok üretir. </li><li> 28 mi, evrensel şişe içinde gerekli rakip bakteri suşunun tek bir koloni ile steril BHI et suyu 10 ml inoküle. </li><li> orbital çalkalayıcı 250 rpm&#39;de çalkalanarak aerobik olarak gece boyunca 37 ° C de genel şişe inkübe edin. </li></ol> Önleyici üreten İzolatı 5. Nokta Kültürü <ol><li> 4. bölümde tarif edildiği gibi, gece boyunca kültürün (ler) hazırlayın. </li><li> Agar plakaları kapağındaki yoğunlaşma olmadan, tamamen kuru olduğundan emin olun, aşılamadan önce (pla kuluçka örneğin37 ° C&#39;de 60 dakika) için TE; Bu aşılama sitesinden plaka üzerinde yayılmasını inokulum engeller. </li><li> Pipet agar plakaları merkezi üzerine gece boyunca bir kültürü 25 ul. tamamen agar boyunca kültür sprey hava kabarcıklarını önlemek için pipet Medyumu kaçının. </li><li> kültür yayılmasını sınırlamak için kültür oda sıcaklığında kurumaya bırakın. aerobik bir gece boyunca 37 ° C &#39;de agar inkübe edin. </li></ol> 6. Hazırlama Testi Rakip Strain Sprey Aşı (lar) <ol><li> Yaklaşık 4 x 10 6 CFU ml -1 vermek üzere BHI suyu bölüm 4. SEYRELTİK gecede kültür 10 kat açıklandığı gibi gecede kültür hazırlayın ve OD 600 0.3 ± 0.05 süspansiyonu. NOT: 10 kat seyreltme, 4 x 10 6 CFU ml -1 tüm bakteri türlerinin vermek 1 x 10 arasında seri dilüsyonları kaplama yayılması gerekli seyreltme faktörünü hesaplamak olmaz <s&gt; -1 -1 x 10 -6 kadar. </li><li> steril plastik parfüm buharlaştırıcı şişeye seyreltilmiş kültür dökün. NOT: toplam hacim agar plakaları sayısı püskürtülen için gerekli olandan daha fazla olmalıdır. Yaklaşık plaka başına 250 ul 9 cm çaplı bir petri çanağı için uygundur. </li></ol> 7. Ertelenmiş büyüme inhibisyonu analizi <ol><li> Kültür önceden agar üzerine püskürtme için püskürtme mekanizması yerleştirildiğinden emin olmak için buharlaştırma şişelerin her birinden kültür püskürtülür. </li><li> agar üzerinde yaklaşık 15 cm&#39;lik bir mesafeden, tüm agar yüzeyi üzerine seyreltilmiş kültür yaklaşık 250 ul (tipik 50 mi buharlaştırıcı 3 spreyler) püskürtülür. aerobik bir gece boyunca 37 ° C &#39;de agar inkübe edin. spreyler aynı sayıda diğer plakaları için tekrarlayın. </li></ol> 8. Ertelenmiş Büyüme İnhibisyon Tahlili Sonuçları Yorumlama <ol><li> püskürtülen alanda ülkemizde büyüme inhibisyon zonu ölçüntor suşu (Şekil 1A - C, &quot;X&quot;, &quot;X&quot; için) (- C, &quot;Y&quot; ile &quot;Y&quot; Şekil 1A) inhibitörü yapımcısı merkez nokta çapı çıkarılarak milimetre. NOT: Şekil 1E bu veriler sunulabilir nasıl gösterir </li><li> inhibisyon bölgeleri için netlik puan kaydedin. Not: Bu görülen inhibisyon derecesi gösterir. Örnekler Şekil 1A gösterilmiştir - D, standardizasyon için kullanılabilir suşları temsilcisi sonuçları bölümünde önerilmektedir. Aşağıdaki ölçek, berraklığı puanlama için kullanılabilir: 0 bir berraklığı mı rakip suşun büyüme önlemesine bir bölge tanımlamak için. 1 puan temizleme bölümü içinde mevcut olan, sadece tek tek koloniler ile büyüme hemen hemen tam inhibisyon bölgesini tanımlamak için. 2 puan azaltılmış bir büyüme görülebilir bölge tanımlamak için, bu bölge içinde büyüme conakıcı veya yapışık yakın ama&gt;% 50 oranında yoğunluk azalır. 3 puan çok az büyüme azaltma açıklamak için, büyüme birleşen ve daha az% 50 oranında azaltılır, bir bölge hala görünür ve ölçülebilir. 4 puan, büyüme görünür bir inhibisyon ortaya koymaktır. 5 puan ise rakip suşunun büyüme testi önleyicisi üreten soyun yakın artış olduğunu ortaya koymaktır. Örnekler için Şekil 1&#39;e bakınız. Bu puanlar deneyci için subjektiftir. </li></ol> 9. çoğaltır <ol><li> Biyolojik en az üç kez tekrar deneyler elde edilen sonuçların tekrarlanabilirliğini belirlenmesi. NOT: çoğaltır farklı günlerde yapılması durumunda, ölçüm yapmak ve 4 ° C&#39;de, daha sonra inkübasyon çıkarıldıktan hemen sonra ya mağaza plakaları plakaları puan veya onları atmadan önce plakaların yüksek kaliteli fotoğraflar çekmek. Depolama veya plakaların fotoğrafları farklı günlerde arasındaki sonuçların kolay karşılaştırma sağlar, tonun gün / deneyler arasında tekrarlanabilir puanlama teyit için özellikle önemlidir. plakaların depolama sonuçlarını değiştirme potansiyeline sahip olduğunu unutmayın. NOT: net fotoğraflar yer plakaları için dik dağınık ışık bir alanda mat siyah arka plan üzerine kapaksız, yakın objektif (makro modu) nesneler üzerinde odaklama yeteneğine sahip yüksek çözünürlüklü bir kamera (≥8 MP) kullanın. Alternatif olarak, beyaz ışığa ayarlanır trans-ışığı ile bazı jel görüntüleme cihazları, yüksek kalite, yüksek tekrarlanabilir görüntüler üretebilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Bolnick, D. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+intraspecific+trait+variation+matters+in+community+ecology.">Why intraspecific trait variation matters in community ecology.</a> Trends Ecol Evol. 26 (4), 183-192 (2011).</li><li>Christensen, G. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonism+between+Staphylococcus+epidermidis+and+Propionibacterium+acnes+and+its+genomic+basis.">Antagonism between Staphylococcus epidermidis and Propionibacterium acnes and its genomic basis.</a> BMC Genomics. 17 (152), (2016).</li><li>Faust, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+co-occurrence+relationships+in+the+human+microbiome.">Microbial co-occurrence relationships in the human microbiome.</a> PloS Comput Biol. 8 (7), (2012).</li><li>Frank, D. N., Feazel, L. M., Bessesen, M. T., Price, C. S., Janoff, E. N., Pace, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Human+nasal+microbiota+and+Staphylococcus+aureus+carriage.">The Human nasal microbiota and Staphylococcus aureus carriage.</a> PLoS One. 5 (5), e10598 (2010).</li><li>Fredheim, E. G., Flaegstad, T., Askarian, F., Klingenberg, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonisation+and+interaction+between+S.+epidermidis+and+S.+aureus+in+the+nose+and+throat+of+healthy+adolescents.">Colonisation and interaction between S. epidermidis and S. aureus in the nose and throat of healthy adolescents.</a> Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 34, 123-129 (2015).</li><li>Hibbing, M. E., Fuqua, C., Parsek, M. R., Peterson, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+competition:+surviving+and+thriving+in+the+microbial+jungle.">Bacterial competition: surviving and thriving in the microbial jungle.</a> Nat Rev Microbiol. 8, 15-25 (2010).</li><li>Libberton, B., Coates, R. E., Brockhurst, M. A., Horsburgh, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+intraspecific+trait+variation+among+nasal+bacteria+shapes+the+distribution+of+Staphylococcus+aureus.">Evidence that intraspecific trait variation among nasal bacteria shapes the distribution of Staphylococcus aureus.</a> Infect Immun. 82 (9), 3811-3815 (2014).</li><li>Libberton, B., Horsburgh, M. J., Brockhurst, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+spatial+structure,+frequency+dependence+and+resistance+evolution+on+the+dynamics+of+toxin-mediated+microbial+invasions.">The effects of spatial structure, frequency dependence and resistance evolution on the dynamics of toxin-mediated microbial invasions.</a> Evol appl. 8, 738-750 (2015).</li><li>Liu, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcus+aureus+and+the+ecology+of+the+nasal+microbiome.">Staphylococcus aureus and the ecology of the nasal microbiome.</a> Sci Adv. 1, e1400216 (2015).</li><li>Nascimento, J. S., Ceotto, H., Nascimento, S. B., Giambiagi-deMarval, M., Santos, K. R., Bastos, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacteriocins+are+alternative+agents+for+control+of+multiresistant+staphylococcal+strains.">Bacteriocins are alternative agents for control of multiresistant staphylococcal strains.</a> Lett Appl Microbiol. 42, 215-221 (2006).</li><li>Park, B., Iwase, T., Liu, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+application+of+S.+epidermidis+prevents+colonization+by+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+in+mice.">Intranasal application of S. epidermidis prevents colonization by methicillin-resistant Staphylococcus aureus in mice.</a> PLoS One. 6 (10), e25880 (2011).</li><li>Uehara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+interference+among+nasal+inhabitants:+eradication+of+Staphylococcus+aureus+from+nasal+cavities+by+artificial+implantation+of+Corynebacterium+sp.">Bacterial interference among nasal inhabitants: eradication of Staphylococcus aureus from nasal cavities by artificial implantation of Corynebacterium sp.</a> J Hosp Infect. 44, 127-133 (2000).</li><li>Wos-Oxley, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+poke+into+the+diversity+and+associations+within+human+anterior+nare+microbial+communities.">A poke into the diversity and associations within human anterior nare microbial communities.</a> ISME J. 4, 839-851 (2010).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Diğerlerinden ayıran, bu bakteri türleri rekabet protokolünün kritik bir safha, inhibitörün bir gece boyunca inkübasyon rakip izolatı eklenmesinden önce izole olduğu. Önleyicisi soyu önleyici bileşikleri üretmek için bu büyüme dönemi gerektirir. rakip suşu aynı ortamda üstüne bindirilmiş gibi, bu yöntem tam potansiyelini gözlemlemek için araştırmacı izin verir önleyicisi soyunun rakip suşunun büyüme müdahale etmek. Bunun bir sonucu olarak, bu deney, doğa ile ne yansıtmaktadır; bir izole tamamen niş yılında kurulmuş, ve diğer başarılı niş işgal edebilmek için herhangi bir inhibitör değişkenleri karşı gerekir. Yanlış yapıldığı takdirde hatalı sonuçlara neden büyük olasılıkla bu protokol iki bölümü vardır. Birincisi, buharlaştırıcı şişe eksik sterilizasyon tahlil içine bakteri kirlenmesine neden tanıtabilirsiniz. incusteril bir kap içinde aşama 3.6 buharlaştırıcı şişe yıkamak için kullanılan broth Bation tamamen sterilize edildi şişe teyit etmek için kullanılabilir. Ek sterilizasyon gerekli ise, örneğin, Virkon® dezenfekte edici çözeltiler Ek yıkama, aşama 3.2&#39;de tanımlanan yüzey etkili temizleme maddesinin yıkama, önce kullanılabilir. hatalı sonuçlara neden olabilir ikinci aşama rakip suşu (adım 6.1) seyreltme olduğunu. Seyreltme uygun değilse, inhibisyon net ölçümler kolayca tespit edilemez. Bu deney, önleyici üreten S. karşı Gram-pozitif ve Gram-negatif türler geniş bir yelpazesinde suşları gibi çeşitli nazal izolatları kullanılarak optimize edildi rakip suşu 7,8 olarak aureus SH1000. Bu daha sonra rakip ve inhibitörü üreten suşlar gibi çeşitli-koagülaz negatif ve koagulaz pozitif stafilokok kullanılarak test edilmiştir. rakip olarak yukarıda tarif edilenler dışındaki cins test ederkensuşu, inokulum için seyreltme bazı optimizasyon gerekli olabilir. berraklık puanları tekrarlar arasında anlamlı farklılık varsa, belirli bir optik yoğunluk olarak ayarlayarak rakip gerilme inokulum standardize etmek gerekli olabilir. Bununla birlikte, bu deney ayarlamak için gereken ve deney için işlem mümkündür suşları sayısının azaltılması olası zaman artar. Görme hızlı bir alternatif sağlayabilir bir McFarland standardı kullanılarak uygun bir OD kültürünü ayarlayarak. Bu tekniğin bir sınırlama sadece kültürlenebilir bakterilerin uygulanabilir bunun olmasıdır. Birçok çalışmada rekabet dışlama etkileşimleri 3,4,13 tahmin 16S rRNA sıralamasını kullanmak nedeni budur. Ancak, genetik ve metagenomic teknikler sadece tür düzeyinde topluluk üyelerini ayırt edebilir ve / veya belirli bir tür içi özellik varyasyonu için hesaba katmıyor. Bir özelde, dernek taranması mümkünBir bakteri türlerinin 5 varlığında ya da yokluğunda bir özelliği kodlamaktadır ar geni, ancak bu tür hariç ile bağlantılı olması muhtemel bir genin ön bilgi gerektirir. Bu tekniğin bir güvenlik dikkate bakterilerin aerosol üretimi nedeniyle, sadece bir seviye 2 güvenlik kabini ile laboratuarlarda kullanılan ya da benzer güvenlik önlemleri ile olabilir olmasıdır. intraspecific özellik değişimi için hesap ve bakteri aerosollerin üretemeyen izolatlar arasındaki rekabet test etmek için alternatif teknikler vardır. Böyle bir yöntem, aynı anda antagonizma deney 2 &#39;dir. Bu yöntemde, bir izolatın, bir aşı, bir agar plakası üzerine yayılır, ve birinci kuruduktan sonra, ikinci bir izole aşı En lekeli veya yaralanmıştır. Bu, hem inhibitör bileşikler üretirler ve ilk besin temizlemek için yarışan, suşlar doğrudan rekabet (eşzamanlı antagonizma) olarak bir ortam üretecektir. advantageşzamanlı antagonizma tahlil üzerinden ertelenmiş büyüme inhibisyonu testinin e inhibitörü izolatı her zaman tam rakip izolatı işgalinden önce kurulmakta olan rekabet avantajına sahip olmasıdır. Başka bir suş yerine iki izolat aynı anda 8 ilave olmaktan çok, ilave edilmeden önce, bir izolatın kurulacak çoğu niş olarak bu, çevrede ne olacağını daha yansıtıcı olduğunu. Başka bir alternatif döktü ziyade önleyici izolatı üzerinde püskürtülür olabilir üst agar izole rakibi eklemek olacaktır bakterilerin aerosol oluşumunu engellemek için. Bununla birlikte, üst agar eklenmiş hacmi plaka da kapsama sağlamak için yaklaşık olarak 3 ml olması gerekir. Bu hacim içinde, rakip izolat inhibitörü izolatı aynı ortam üzerinde büyüyen olmaz, bu yüzden azalmış besin muzdarip olmaz. Yarışmacı, aynı zamanda UNT bir önleyici bileşikler ile doğrudan temas halinde olmazil onlar üst agar içine yayılmış. Böyle bir deney, ertelenmiş inhibisyonu veya aynı anda antagonizmi olarak tarif edilememiştir. Benzer bir yöntem, daha önce klinik S. arasında basitrasin direnci düzeylerini değerlendirmek için kullanılmıştır aureus 10 ayırır. 10 tarif burada tarif edilen protokol ve arasındaki temel fark, duyarlı (0 puan inhibisyon netlik tamamlamak) ya da dirençli ikinci sadece gizli rakip suşları (hiçbir inhibisyon netlik kısmi skor 1-5). Ertelenmiş bir büyüme önleme deneyi Bu yüzden, aynı zamanda, çok ilaca dirençli patojenlere karşı aktif yeni antimikrobiyal aramak için daha özel bir antimikrobiyal, veya üretici direnç seviyeleri taranması için kullanılabilir. Ev sahibi mikroflora bakteriyel eden 9 istenmeyen temsilcilerinin ortadan kaldırmak için manipüle edilebilir olduğu ileri sürülmüştür. Corynebacterium türü ya Staph Uygulamaylococcus epidermidis önce S. ortadan kaldırmak için gösterilmiştir Nüfusun 11,12 önemli bir oranda burun içinde aureus kolonizasyonu. rekabetçi, burada anlatılan gibi teknikler vasıtasıyla ev sahibi bitki istenmeyen temsilcilerinin, dahil belirli suşlarından içine çalışmalar bu nedenle gelecekteki terapötik yol olabilir.

Bacteria living in communities compete at the interspecific and intraspecific level for space and nutrients 6. Competition between microbes can often lead to exclusion of particular species or strains within a community. Exclusion can be due to competition for a particular receptor or nutrient, or the production of an antimicrobial compound by a member of the community 6.
Studies investigating competitive exclusion frequently examine the presence and absence of species using 16S rRNA sequencing 3,4,13. However, intraspecific trait variation, for example the presence or absence of antimicrobial peptide production, can hugely impact the ability of one species to inhibit another 1. Since 16S rRNA sequencing cannot distinguish between strains of the same species, intraspecific trait variation cannot be assessed. The technique described here can be used to assess the potential of individual strains to exclude other bacteria. This method has previously been used to show a positive correlation between the presence of Staphylococcus aureus inhibitory bacteria and the absence of S. aureus in a nasal community 7.
The deferred growth inhibition (competition) assay can identify production of antimicrobial compounds or nutrient competition by the inhibitor strain. It can also detect positive interactions, whereby the presence of the inhibitor strain actually improves the growth of the competitor strain. This assay can be used to create quantitative data (zone of clearing size) and qualitative data (degree of inhibition), both of which can be overlaid onto data of the presence or absence of a species within a community to find correlations between phenotype (trait) and competitive exclusion 7.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Brain heart infusion broth</td>
			<td style="width:71px;">Lab M</td>
			<td style="width:119px;">lab049</td>
			<td style="width:167px;">rich general purpose media</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">agar-agar</td>
			<td style="width:71px;">Merck Milipore</td>
			<td align="right" style="width:119px;">101614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">petri dishes</td>
			<td style="width:71px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:119px;">82.1473.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">plastic perfume vaporizer</td>
			<td style="width:71px;">not known</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td>10 cm high with 3.5 cm diameter clear plastic spray bottle with lid, purchased from the travel section of a supermarket</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Universal bottles</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">no longer in production, alternative SLS BOT5006</td>
			<td>28 ml glass cylindrical bottle (approx 280 mm diameter, 850 mm height), flat bottomed with plastic screw cap</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Decon 90</td>
			<td style="width:71px;">Decon&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>surface active cleaning agent&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

deferred growth inhibition assay to quantify the effect of bacteria-derived antimicrobials on competition

Competitive exclusion can occur in microbial communities when, for example, an inhibitor-producing strain outcompetes its competitor for an essential nutrient or produces antimicrobial compounds that its competitor is not resistant to. Here we describe a deferred growth inhibition assay, a method for assessing the ability of one bacterium to inhibit the growth of another through the production of antimicrobial compounds or through competition for nutrients. This technique has been used to investigate the correlation of nasal isolates with the exclusion of particular species from a community. This technique can also be used to screen for lantibiotic producers or potentially novel antimicrobials. The assay is performed by first culturing the test inhibitor-producing strain overnight on an agar plate, then spraying over the test competitor strain and incubating again. After incubation, the extent of inhibition can be measured quantitatively, through the size of the zone of clearing around the inhibitor-producing strain, and qualitatively, by assessing the clarity of the inhibition zone. Here we present the protocol for the deferred inhibition assay, describe ways to minimize variation between experiments, and define a clarity scale that can be used to qualitatively assess the degree of inhibition.

Deney sonuçları, merkezi benekli önleyicisi üreten bir suş (Şekil 1) yakınındaki Kaplanmış rakip suşu bir fark olarak gözlemlenebilir olmalıdır. Bu farklılıklar, tam inhibisyon (Şekil 1A), kısmi inhibisyonu (Şekil 1B ve 1C), herhangi bir inhibisyonu (Şekil 1D) veya pozitif bir birlik olarak yorumlanabilir. Yaygın olarak kullanılan laboratuvar S. suşları epidermidis Tü3298 ve S. epidermidis Rp62A, ve S. epidermidis Rp62A ve S. aureus Newman sırasıyla Şekil 1b ve 1d kullanılmıştır. Biz bu suşlar bu protokolü test etmek için kullanılır olabileceğini düşündürmektedir. Test edilen türler bağlı olarak, tam inhibisyon ve kısmi inhibisyon muhtemelen antimikrobiyal peptitler, antibiyotiklere veya diğer yayılabilir bir büyüme inhibitör sonucudurinhibitör üreten bir suş tarafından üretilen rs. Kısmi inhibisyon da inhibitör suşu 6 ile rakip alımı nedeniyle gerginlik ya da besin ayrımı için azaltılmış besin durumu ile bağlantılı olmuştur. Aynı rakip suşuna karşı test edilen farklı inhibitör üreten suşlar arasında inhibisyon zonunun boyutu karşılaştırılması aşağıdakilerden herhangi farklılıkları gösterir: inhibitörü üreten bir suş tarafından üretilen antimikrobiyal miktarı; ortam içinden difüze inhibitörün özelliği; inhibitör tip üretilen ve inhibitörleri ile rakip suşu direnç seviyesi üretilmektedir. Aynı önleyicisi üreten suşuna karşı test edilen farklı rakip suşları arasında inhibisyon bölgesinin boyutu karşılaştırması önleyicisi üretilen için rakip karşı direnç seviyelerinin göstergesidir. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page = &quot;1&quot;&gt; Sonuçlar kullanılan inhibitör zorlanma ve kullanılan rakip gerginlik bağlı olarak değişecektir. Aynı inhibitör ve rakip suşu kullanılarak tekrarlar ideal aynı netlik puanı (bölüm 8.2&#39;de açıklanan) olması gerekir, bu iyi bir teknik boyunca kullanılan olmuştur gösterir. Bakterilerin eksik uygulanması oluştu plakları kullanılmamalıdır. Örneğin test rakip kültürden ise inhibisyon bölgesinin daha büyük görünür ve tipik olarak (Şekil 2A) görülmektedir daha az belirgin bir kenar olacak seyreltilmiş; Bu herhangi bir karşılaştırmalı bölge ölçümlerinin güvenilirliğini etkileyecektir. Inhibitör üreten suş nokta tam bir gecede inkübasyon önce kuru değil ise, inhibitör zorlanma yaymak ve tipik bölge ölçümleri etkiler ama aynı zamanda netlik puanlama etkileyebilir açıkça tanımlanmış nokta (Şekil 2B), oluşturmayacak muhtemeldir. rakip suşu iseeşit biçimde, bu bakterilerin düzgün olmayan bir yayılma (Şekil 2C) yol açabilir püskürtülür. Rakip suşu çok konsantre olursa bu rakip suşu inhibitörü suşu (Şekil 2C) üstünde büyümeye olasıdır, aşırı durumlarda bu yarışmacı / inhibitör gerilme rolleri bazı ters yol açabilir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54437/54437fig1.jpg" /> Şekil 1:. Büyüme inhibisyonuna ertelenmiş büyüme inhibisyonu analizi elde edilebilir niteliksel ve niceliksel sonuçların aralığı Sonuçlar (A) &#39;tam inhibisyon aralığında olabilir (0 puan), (B), kısmi inhibisyonu (1 puan) (D) hiçbir inhibisyon (4 puan) ile (C) kısmi engelleme (2 puan). Etiketler (Y) inhibitörü soylarının büyüme kenarları ve inhibisyon en dış kenarı gösterirbölgeleri (X). A fotoğraflandı levhalar için ölçümlerini göstermektedir, (E) &#39;de gösterildiği gibi 0 mm ilâ 10 mm&#39;den fazla inhibisyon aralığında alanın boyutu, A, B, C ve D Sonuçlar Son stafilokok izolatı (A ile gösterilmiştir C) ya da ortak laboratuar stafilokok S. izolatlarının epidermidis Tü3298 (önleyici) ve S. epidermidis Rp62A (rakip) (B), ve S. epidermidis Rp62A (önleyici) ve S. aureus Newman (rakip) (D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54437/54437fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54437/54437fig2.jpg" /> Şekil 2: zayıf tekniğine tutarsız sonuçlar örnekleri Sonuçları eğer beklenenden farklı görünebilir (A. </strorakip zorlanma eşit püskürtülür değildi ve çok konsantre eğer ng&gt;) rakip suşu çok seyreltik olduğu, (B) inhibitörü suşu inkübasyon / plakaları önce tamamen kuru değildi kuru veya (C) değildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54437/54437fig2large.jpg" target="_blank">büyük halini görmek için tıklayınız bu rakamın.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Deferred Growth Inhibition Assay to Quantify the Effect of Bacteria-derived Antimicrobials on Competition at JoVE.com

Deferred Growth Inhibition Assay to Quantify the Effect of Bacteria-derived Antimicrobials on Competition

The deferred growth inhibition assay can be used to assess the competition effect by one bacterial isolate on another. Inhibition is quantified by measuring the zone of clearing around the inhibitor-producing isolate, or qualitatively assessed by determining the visible extent of inhibition.

Ertelenmiş Büyüme İnhibisyon Tahlili Rekabet Bakteri kaynaklı Antimikrobiyal Etkisi belirlememize

Competitive exclusion can occur in microbial communities when, for example, an inhibitor-producing strain outcompetes its competitor for an essential ...

deferred-growth-inhibition-assay-to-quantify-effect-bacteria-derived

Research

JoVE Journal

Biology

14.5K Görüntüleme.  University of Liverpool. The deferred growth inhibition assay can be used to assess the competition effect by one bacterial isolate on another. Inhibition is quantified by measuring the zone of clearing around the inhibitor-producing isolate, or qualitatively assessed by determining the visible extent of inhibition.

Video: Deferred Growth Inhibition Assay to Quantify the Effect of Bacteria-derived Antimicrobials on Competition

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

This video demonstrates two methods for preparing and placing beads, which have been coated with growth factor, on explants of the developing cerebral cortex. These beads can be used to induce spatially restricted gene expression on developing neural tissue such as forebrain explants. Methods are given for using both Affi-Gel beads and heparin acryllic beads.

Dorsal önbeyin eksplantlar Büyüme Faktörü-Kaplı Boncuk Yerleştirme

Biyoloji

Identification of Growth Inhibition Phenotypes Induced by Expression of Bacterial Type III Effectors in Yeast

Many Gram-negative pathogenic bacteria use a type III secretion system to translocate a suite of effector proteins into the cytosol of host cells. Within the cell, type III effectors subvert host cellular processes to suppress immune responses and promote pathogen growth. Numerous type III effectors of plant and animal bacterial pathogens have been identified to date, yet only a few of them are well characterized. Understanding the functions of these effectors has been undermined by a combination of functional redundancy in the effector repertoire of a given bacterial strain, the subtle effects that they may exert to increase virulence, roles that are possibly specific to certain infection stages, and difficulties in genetically manipulating certain pathogens. Expression of type III effectors in the budding yeast Saccharomyces cerevisiae may allow circumventing these limitations and aid to the functional characterization of effector proteins. Because type III effectors often target cellular processes that are conserved between yeast and other eukaryotes, their expression in yeast may result in growth inhibition phenotypes that can be exploited to elucidate effector functions and targets. Additional advantages to using yeast for functional studies of bacterial effectors include their genetic tractability, information on predicted functions of the vast majority of their ORFs, and availability of numerous tools and resources for both genome-wide and small-scale experiments. Here we discuss critical factors for designing a yeast system for the expression of bacterial type III effector proteins. These include an appropriate promoter for driving expression of the effector gene(s) of interest, the copy number of the effector gene, the epitope tag used to verify protein expression, and the yeast strain. We present procedures to induce expression of effectors in yeast and to verify their expression by immunoblotting. In addition, we describe a spotting assay on agar plates for the identification of effector-induced growth inhibition phenotypes. The use of this protocol may be extended to the study of pathogenicity factors delivered into the host cell by any pathogen and translocation mechanism.

In this video, we describe a procedure for the expression of bacterial type III effectors in yeast and the identification of effector-induced growth inhibition phenotypes. Such phenotypes can be subsequently exploited to elucidate effector functions and targets.

Büyüme inhibisyonu fenotipleri tanımlanması Mayalarda bakteriyel Tip III Efektör İfade İndüklenmiş

Many Gram-negative pathogenic bacteria use a type III secretion system to translocate a suite of effector proteins into the cytosol of host cells. Within ...

Effect of Male Accessory Gland Products on Egg Laying in Gastropod Molluscs

In internally fertilizing animals, seminal fluid is usually added to the spermatozoa, together forming the semen or ejaculate. Besides nourishing and activating sperm, the components in the seminal fluid can also influence female physiology to augment fertilization success of the sperm donor. While many studies have reported such effects in species with separate sexes, few studies have addressed this in simultaneously hermaphroditic animals. This video protocol presents a method to study effects of seminal fluid in gastropods, using a simultaneously hermaphroditic freshwater snail, the great pond snail Lymnaea stagnalis, as model organism. While the procedure is shown using complete prostate gland extracts, individual components (i.e., proteins, peptides, and other compounds) of the seminal fluid can be tested in the same way. Effects of the receipt of ejaculate components on egg laying can be quantified in terms of frequency of egg laying and more subtle estimates of female reproductive performance such as egg numbers within each egg masses. Results show that seminal fluid proteins affect female reproductive output in this simultaneous hermaphrodite, highlighting their importance for sexual selection.

This video protocol demonstrates a method to study effects of seminal fluid in gastropods, using the hermaphroditic freshwater snail Lymnaea stagnalis.

Gastropod Molluskların Yumurta döflenmesi erkek Aksesuar Bezi Ürünlerinin Etkisi

In internally fertilizing animals, seminal fluid is usually added to the spermatozoa, together forming the semen or ejaculate. Besides nourishing and ...

Reporter-based Growth Assay for Systematic Analysis of Protein Degradation

Protein degradation by the ubiquitin-proteasome system (UPS) is a major regulatory mechanism for protein homeostasis in all eukaryotes. The standard approach to determining intracellular protein degradation relies on biochemical assays for following the kinetics of protein decline. Such methods are often laborious and time consuming and therefore not amenable to experiments aimed at assessing multiple substrates and degradation conditions. As an alternative, cell growth-based assays have been developed, that are, in their conventional format, end-point assays that cannot quantitatively determine relative changes in protein levels.
Here we describe a method that faithfully determines changes in protein degradation rates by coupling them to yeast cell-growth kinetics. The method is based on an established selection system where uracil auxotrophy of URA3-deleted yeast cells is rescued by an exogenously expressed reporter protein, comprised of a fusion between the essential URA3 gene and a degradation determinant (degron). The reporter protein is designed so that its synthesis rate is constant whilst its degradation rate is determined by the degron. As cell growth in uracil-deficient medium is proportional to the relative levels of Ura3, growth kinetics are entirely dependent on the reporter protein degradation.
This method accurately measures changes in intracellular protein degradation kinetics. It was applied to: (a) Assessing the relative contribution of known ubiquitin-conjugating factors to proteolysis (b) E2 conjugating enzyme structure-function analyses (c) Identification and characterization of novel degrons. Application of the degron-URA3-based system transcends the protein degradation field, as it can also be adapted to monitoring changes of protein levels associated with functions of other cellular pathways.

Here we describe a robust biological assay for quantifying the relative rate of proteolysis by the ubiquitin-proteasome system. The assay readout is yeast growth rate in liquid culture, which is dependent on the cellular levels of a reporter protein comprising a degradation signal fused to an essential metabolic marker.

Protein Parçalanabilirliklerinin Sistematik Analizi muhabiri tabanlı Büyüme Deneyi

Protein degradation by the ubiquitin-proteasome system (UPS) is a major regulatory mechanism for protein homeostasis in all eukaryotes. The standard ...

Comparing the Affinity of GTPase-binding Proteins using Competition Assays

In this protocol we demonstrate a method for comparing the competition between GTPase-binding proteins. Such an approach is important for determining the binding capabilities of GTPases for two reasons: The fact that all interactions involve the same face of the GTPases means that binding events must be considered in the context of competitors, and the fact that the bound nucleotide must also be controlled means that conventional approaches such as immunoprecipitation are unsuitable for GTPase biochemistry. The assay relies on the use of purified proteins. Purified Rac1 immobilized on beads is used as the bait protein, and can be loaded with GDP, a non-hydrolyzable version of GTP or left nucleotide free, so that the signaling stage to be investigated can be controlled. The binding proteins to be investigated are purified from mammalian cells, to allow correct folding, by means of a GFP tag. Use of the same tag on both proteins is important because not only does it allow rapid purification and elution, but also allows detection of both competitors with the same antibody during elution. This means that the relative amounts of the two bound proteins can be determined accurately.

This protocol compares the relative affinities of binding partners for Rho-family GTPases, including Rac1. In vivo, Rac1-binding proteins compete for a single binding interface, the conformation of which is dictated by a bound nucleotide. The nucleotide is both important and difficult to control experimentally, due to the high hydrolysis rate.

Rekabet tahlilleri kullanılarak GTPaz bağlayıcı proteinlerin afinitesini

In this protocol we demonstrate a method for comparing the competition between GTPase-binding proteins. Such an approach is important for determining the ...

Techniques to Induce and Quantify Cellular Senescence

In response to cellular stress or damage, proliferating cells can induce a specific program that initiates a state of long-term cell-cycle arrest, termed cellular senescence. Accumulation of senescent cells occurs with organismal aging and through continual culturing in vitro. Senescent cells influence many biological processes, including embryonic development, tissue repair and regeneration, tumor suppression, and aging. Hallmarks of senescent cells include, but are not limited to, increased senescence-associated &#946;-galactosidase activity (SA-&#946;-gal); p16INK4A, p53, and p21 levels; higher levels of DNA damage, including &#947;-H2AX; the formation of Senescence-associated Heterochromatin Foci (SAHF); and the acquisition of a Senescence-associated Secretory Phenotype (SASP), a phenomenon characterized by the secretion of a number of pro-inflammatory cytokines and signaling molecules. Here, we describe protocols for both replicative and DNA damage-induced senescence in cultured cells. In addition, we highlight techniques to monitor the senescent phenotype using several senescence-associated markers, including SA-&#946;-gal, &#947;-H2AX and SAHF staining, and to quantify protein and mRNA levels of cell cycle regulators and SASP factors. These methods can be applied to the assessment of senescence in various models and tissues.

Cellular senescence, the irreversible state of cell-cycle arrest, can be induced by various cellular stresses. Here, we describe protocols to induce cellular senescence and methods to assess markers of senescence.

Teknikler İndüklemek ve Ölçmek Hücresel Yaşlılık etmek

In response to cellular stress or damage, proliferating cells can induce a specific program that initiates a state of long-term cell-cycle arrest, termed ...

An In Vitro Model to Study the Effect of 5-Aminolevulinic Acid-mediated Photodynamic Therapy on Staphylococcus aureus Biofilm

Staphylococcus aureus (S. aureus) is a common human pathogen, which causes pyogenic and systemic infections. S. aureus infections are difficult to eradicate not only due to the emergence of antibiotic-resistant strains but also its ability to form biofilms. Recently, photodynamic therapy (PDT) has been indicated as one of the potential treatments for controlling biofilm infections. However, further studies are required to improve our knowledge of its effect on bacterial biofilms, as well as the underlying mechanisms. This manuscript describes an in vitro model of PDT with 5-aminolevulinic acid (5-ALA), a precursor of the actual photosensitizer, protoporphyrin IX (PpIX). Briefly, mature S. aureus biofilms were incubated with ALA and then exposed to light. Subsequently, the antibacterial effect of ALA-PDT on S. aureus biofilm was quantified by calculating the colony forming units (CFUs) and visualized by viability fluorescent staining via confocal laser scanning microscopy (CLSM). Representative results demonstrated a strong antibacterial effect of ALA-PDT on S. aureus biofilms. This protocol is simple and can be used to develop an in vitro model to study the treatment of S. aureus biofilms with ALA-PDT. In the future, it could also be referenced in PDT studies utilizing other photosensitizers for different bacterial strains with minimal adjustments.

An In Vitro Model to Study the Effect of 5-Aminolevulinic Acid-mediated Photodynamic Therapy on Staphylococcus aureus Biofilm

This manuscript describes a protocol to study the antimicrobial effect of 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy (ALA-PDT) on a Staphylococcus aureus biofilm. This protocol can be used to develop an in vitro model to study the treatment of bacterial biofilms with PDT in the future.

5-Aminolevulinik asit-aracılı Fotodinamik Tedavi etkisi Staphylococcus aureus biyofilm çalışmaya bir In Vitro modeli

Staphylococcus aureus (S. aureus) is a common human pathogen, which causes pyogenic and systemic infections. S. aureus infections are difficult to ...

SA-&#946;-Galactosidase-Based Screening Assay for the Identification of Senotherapeutic Drugs

Cell senescence is one of the hallmarks of aging known to negatively influence a healthy lifespan. Drugs able to kill senescent cells specifically in cell culture, termed senolytics, can reduce the senescent cell burden in vivo and extend healthspan. Multiple classes of senolytics have been identified to date including HSP90 inhibitors, Bcl-2 family inhibitors, piperlongumine, a FOXO4 inhibitory peptide and the combination of Dasatinib/Quercetin. Detection of SA-&#946;-Gal at an increased lysosomal pH is one of the best characterized markers for the detection of senescent cells. Live cell measurements of senescence-associated &#946;-galactosidase (SA-&#946;-Gal) activity using the fluorescent substrate C12FDG in combination with the determination of the total cell number using a DNA intercalating Hoechst dye opens the possibility to screen for senotherapeutic drugs that either reduce overall SA-&#946;-Gal activity by killing of senescent cells (senolytics) or by suppressing SA-&#946;-Gal and other phenotypes of senescent cells (senomorphics). Use of a high content fluorescent image acquisition and analysis platform allows for the rapid, high throughput screening of drug libraries for effects on SA-&#946;-Gal, cell morphology and cell number.

Cellular senescence is the key factor in the development of chronic age-related pathologies. Identification of therapeutics that target senescent cells show promise for extending healthy aging. Here, we present a novel assay to screen for the identification of senotherapeutics based on measurement of senescence associated &#946;-Galactosidase activity in single cells.

Senoterapötik Ilaçların tanımlanması için SA-β-Galactosidaz tabanlı tarama tahlili

Cell senescence is one of the hallmarks of aging known to negatively influence a healthy lifespan. Drugs able to kill senescent cells specifically in cell ...

A Plate Competition Assay As a Quick Preliminary Assessment of Disease Suppression

The goal was to develop and optimize a simple, affordable, and effective bioassay to detect disease suppressive ability of a specific compost against soilborne fungus Rhizoctonia solani. R. solani is a pathogen of a wide range of plant hosts worldwide. The fungus survives in soils as a saprophyte and grows rapidly on simple water agar media. The plate assay is a rapid method to compare composts for their ability to slow the growth of R. solani. The assay also correlates well with suppression of other soilborne fungal pathogens that survive as saprophytes in soils such as Alternaria early blights, Fusarium wilt, Phytophthora root rot, and Pythium root rot.

Presented is a protocol for a plate competition assay to identify whether a specific compost is likely to contain bacteria and fungi that suppress growth of Rhizoctonia solani.

Bir plaka rekabet tahlil olarak hastalık bastırma hızlı bir ön değerlendirme

The goal was to develop and optimize a simple, affordable, and effective bioassay to detect disease suppressive ability of a specific compost against ...

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm cell to penetrate the zona pellucida and fertilize the egg. It is therefore of great interest to test compounds (e.g., environmental chemicals or drug candidates) for their effect on Ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm either to examine the potential adverse effects on human sperm cell function or to investigate a possible role as a contraceptive. Here, two medium-throughput assays are described: 1) a fluorescence-based assay for assessment of effects on Ca2+-signaling in human sperm, and 2) an image cytometric assay for assessment of acrosome reaction in human sperm. These assays can be used to screen a large number of compounds for effects on Ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm. Furthermore, the assays can be used to generate highly specific dose-response curves of individual compounds, determine potential additivity/synergism for two or more compounds, and to study the pharmacological mode of action through competitive inhibition experiments with CatSper inhibitors.

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Here, two medium-throughput assays for assessment of effects on Ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm are described. These assays can be used to quickly and easily screen large amounts of compounds for effects on Ca2+-signaling and acrosome reaction in human sperm.

Orta-den geçerek deneyleri Ca2 +etkileri değerlendirilmesi için eleme-sinyal ve insan Sperm Acrosome reaksiyon

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...